CN111929388A - 食品中香精香料的提取方法、检测方法及提取装置 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种食品中香精香料的提取方法、检测方法及提取装置，利用溶剂诱导相变现象进行液液分层并实现对溶质的萃取，当二元溶剂体系中加入相变溶剂，二元溶剂体系的相平衡被相变溶剂的加入而破坏，达到新的平衡，从而导致溶液分层，通过第二液体降温至水相层凝固而有机相层不凝固的温度，能促使重新相平衡时，分层更彻底，减少有机相中水相的比例，并且目标检测物更完全地从水相中转移至有机相中，从而使后续的仪器检测方法中能获取更好的信号响应和更高的回收率，无需进行过柱净化、氮吹、复溶等步骤，操作较为简单快速，后续检测也无需加入净化剂，避免因检测人员的操作影响净化效果。

Description

食品中香精香料的提取方法、检测方法及提取装置

技术领域

本发明涉及化学检测领域，特别是涉及一种食品中香精香料的提取方法、检测方法及提取装置。

背景技术

我国对于食品用香料香精的管控非常严格，根据GB 2760-2014《食品添加剂使用标准》中规定，茶叶、巴士杀菌乳、灭菌乳、婴幼儿配方食品等食品中不得添加食品用香料香精。因此需要有效的方法对食品中的香料香精进行提取，以便准确监控。

食品的内源成分复杂，目前相关报道的对食品中香精香料提取方法需要进行过柱净化、氮吹、复溶等步骤，操作复杂繁琐、时间长，后续检测需要加入净化剂，而净化剂的净化效果受检测人员的操作影响。

发明内容

基于此，有必要提供一种食品中香精香料的提取方法、检测方法及提取装置，以解决目前相关报道的提取步骤复杂繁琐、时间长，后续检测需要加入净化剂，而检测人员的操作会影响净化效果的问题。

本发明的一个目的是提供一种食品中香精香料的提取方法，方案如下：

取待检测样品，加入有机相提取溶剂和水相提取溶剂，溶解得到第一液体，所述有机相提取溶剂和所述水相提取溶剂能够互溶；

在所述第一液体中加入相变溶剂，得到分层形成有机相层和水相层的第二液体，然后将所述第二液体降温至所述水相层凝固而所述有机相层不凝固的温度，取所述有机相层；其中，所述相变溶剂为不同于所述有机相提取溶剂的有机溶剂，所述相变溶剂能够与所述有机相提取溶剂互溶，而与所述水相提取溶剂不互溶。

在其中一个实施例中，所述第二液体降温至-20℃~0℃。

在其中一个实施例中，所述水相提取溶剂为水；所述有机相提取溶剂为乙腈、乙醇、甲醇和丙酮中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述有机相提取溶剂为乙腈，所述相变溶剂为甲苯、环己烷、正己烷和氯仿中的至少一种；或者

所述有机相提取溶剂为乙醇，所述相变溶剂为甲苯、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的至少一种；或者

所述有机相提取溶剂为甲醇，所述相变溶剂为甲苯、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的至少一种；或者

所述有机相提取溶剂为丙酮，所述相变溶剂为甲苯、氯仿、环己烷和正己烷中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述有机相提取溶剂为乙腈，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.6~1)；或者

所述有机相提取溶剂为乙醇，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.3~0.7)；或者

所述有机相提取溶剂为甲醇，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.3~0.7)；或者

所述有机相提取溶剂为丙酮，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.1~0.3)。

在其中一个实施例中，所述待检测样品为粉末化状态。

在其中一个实施例中，所述香精香料为茴香脑、甲基丁香酚、蒲勒酮、指甲花醌、反式肉桂醛、胡椒酚甲醚以及香豆素中的至少一种。

本发明的另一个目的是提供一种食品中香精香料的检测方法，方案如下：

一种食品中香精香料的检测方法，包括以下步骤：

按照上述任一实施例所述的提取方法获得所述有机相层；

取所述有机相层进行高效液相色谱-串联质谱分析。

在其中一个实施例中，所述高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件包括：

高效液相色谱柱：Kinetex C18；

流动相A：体积分数为0.09%~0.11%的甲酸水溶液，体积分数为流动相B：0.09%~0.11%甲酸乙腈溶液；

进样量为9μL~11μL，流速为0.25mL/min ~0.35mL/min，柱温为18℃~22℃。

在其中一个实施例中，高相液相色谱柱使用Kinetex C18色谱柱或者同等分离效果的C18色谱柱。

在其中一个实施例中，在进行所述高效液相色谱-串联质谱分析之前，所述有机相层采用滤膜进行过滤。

在其中一个实施例中，所述滤膜的滤孔的孔径为0.2μm~0.25μm。

本发明的又一个目的是提供一种提取设备，方案如下：

一种提取设备包括：

加溶剂装置，包括输送机构以及加液机构，所述输送机构用于输送所述加液机构或者装有待检测样品的容器；所述加液机构包括提取溶剂加液部件以及相变溶剂加液部件，所述提取溶剂加液部件用于向所述容器中加入有机相提取溶剂和水相提取溶剂得到第一液体，所述有机相提取溶剂和所述水相提取溶剂能够互溶，所述相变溶剂加液部件用于在所述第一液体中加入相变溶剂，混合得到分层为有机相层和水相层的第二液体，所述相变溶剂为不同于所述有机相提取溶剂的有机溶剂，所述相变溶剂能够与所述有机相提取溶剂互溶，而与所述水相提取溶剂不互溶；

降温装置，用于对所述第二液体进行降温处理。

在其中一个实施例中，所述降温装置包括降温腔体、制冷片、导冷风扇、风冷风扇以及冰袋储室；所述降温腔体内具有供所述容器放置的放样台，所述制冷片设置在所述降温腔体的侧壁上，所述导冷风扇靠近所述制冷片设置以用于将所述制冷片产生的冷气吹向所述降温腔体的内部，所述风冷风扇设置在所述降温腔体的侧壁上以用于所述降温腔体的内部吹风，所述冰袋储室设置在所述放样台的下方。

与现有方案相比，上述食品中香精香料的提取方法、检测方法及提取装置具有以下有益效果：

上述食品中香精香料的提取方法利用溶剂诱导相变现象进行液液分层并实现对溶质的萃取，当二元溶剂体系中（如乙腈-水）加入相变溶剂（如甲苯），而该相变溶剂为不同于有机相提取溶剂的有机溶剂，相变溶剂能够与有机相提取溶剂互溶，而与水相提取溶剂中不互溶，此时二元溶剂体系的相平衡被相变溶剂的加入而破坏，达到新的平衡，从而导致溶液分层，通过第二液体降温至水相层凝固而有机相层不凝固的温度（如-20℃~0℃），能促使重新相平衡时，分层更彻底，减少有机相中水相的比例，并且目标检测物更完全地从水相中转移至有机相中，从而使后续的仪器检测方法中能获取更好的信号响应和更高的回收率，无需进行过柱净化、氮吹、复溶等步骤，操作较为简单快速，后续检测也无需加入净化剂，避免因检测人员的操作影响净化效果。

附图说明

图1为一实施例的提取设备的结构示意图；

图2为通过一实施例的食品中香精香料的检测方法获得的7种香精香料的色谱峰的保留时间结果；

图3为实施例1中10个绿茶样品分别添加7种香精香料后采用传统方法和本发明的提取方法实验得到的回收率，其中，柱形从左到右分别代表各个绿茶样品采用传统方法和本发明的提取方法的2组实验的回收率；

图4为实施例1中10个绿茶样品分别采用传统方法和本发明的提取方法的平均耗时；

图5为实施例2中10个灭菌乳样品分别添加7种香精香料后采用传统方法和本发明的提取方法实验得到的回收率，其中，柱形从左到右分别代表各个灭菌乳样品采用传统方法和本发明的提取方法的2组实验的回收率；

图6为实施例1中10个灭菌乳样品分别采用传统方法和本发明的提取方法的平均耗时；

图7为实施例1中5个婴幼儿乳粉样品分别添加7种香精香料后采用传统方法和本发明的提取方法实验得到的回收率，其中，柱形从左到右分别代表各个绿茶样品采用传统方法和本发明的提取方法的2组实验的回收率；

图8为实施例1中5个婴幼儿乳粉样品分别采用传统方法和本发明的提取方法的平均耗时；

图9为实施例1中5个红茶样品分别添加7种香精香料后采用传统方法和本发明的提取方法实验得到的回收率，其中，柱形从左到右分别代表各个绿茶样品采用传统方法和本发明的提取方法的2组实验的回收率；

图10为实施例1中5个红茶样品分别采用传统方法和本发明的提取方法的平均耗时。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

需要说明的是，当元件被称为“设置于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上或者也可以存在居中的元件。当一个元件被认为是“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件或者可能同时存在居中元件。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和／或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明一实施例的食品中香精香料的提取方法，包括以下步骤：

取待检测样品，加入有机相提取溶剂和水相提取溶剂，混合得到第一液体。其中，有机相提取溶剂和水相提取溶剂能够互溶。

在第一液体中加入相变溶剂，得到分层形成有机相层和水相层的第二液体，然后将所述第二液体降温至所述水相层凝固而所述有机相层不凝固的温度，取所述有机相层。其中，相变溶剂为不同于有机相提取溶剂的有机溶剂，相变溶剂能够与有机相提取溶剂互溶，而与水相提取溶剂不互溶。

上述食品中香精香料的提取方法利用溶剂诱导相变现象进行液液分层并实现对溶质的萃取，当二元溶剂体系中（如乙腈-水）加入相变溶剂（如甲苯），而该相变溶剂为不同于有机相提取溶剂的有机溶剂，相变溶剂能够与有机相提取溶剂互溶，而与水相提取溶剂中不互溶，此时二元溶剂体系的相平衡被相变溶剂的加入而破坏，达到新的平衡，从而导致溶液分层，通过第二液体降温至水相层凝固而有机相层不凝固的温度（如-20℃~0℃），能促使重新相平衡时，分层更彻底，减少有机相中水相的比例，并且目标检测物更完全地从水相中转移至有机相中，从而使后续的仪器检测方法中能获取更好的信号响应和更高的回收率，无需进行过柱净化、氮吹、复溶等步骤，操作较为简单快速，后续检测也无需加入净化剂，避免因检测人员的操作影响净化效果。

上述食品中香精香料的提取方法中，如不进行降温，后续仪器检测方法中分析的目标物的回收率均低于70%，并且有机相中含有水相成分高，由于溶剂效应的影响，这会导致后续液相色谱分析中色谱峰峰形拖尾，不能达到分析方法所要求的分离度。

在其中一个示例中，第二液体降温至-20℃~0℃，取有机相层。进一步地，在其中一个示例中，第二液体降温至-20℃~-10℃。例如，降温温度可以是-20℃、-18℃、-15℃、-12℃等。

在其中一个示例中，混合方式采用旋涡混合，如可采用旋涡混合器进行。

待检测样品可以是但不限于茶叶、巴士杀菌乳、灭菌乳、婴幼儿配方食品等食品。

在其中一个示例中，待检测样品为粉末化状态，待检测样品本身为粉末状如奶粉可直接加入溶剂进行提取，待检测样品为非粉末状如茶叶则将其打碎至粉末状再加入溶剂进行提取。

在其中一个示例中，提取的食品中的香精香料为茴香脑、甲基丁香酚、蒲勒酮、指甲花醌、反式肉桂醛、胡椒酚甲醚以及香豆素中的至少一种。

在其中一个示例中，水相提取溶剂为水。有机相提取溶剂为乙腈、乙醇、甲醇和丙酮中的至少一种，即二元溶剂体系可以是乙腈-水体系、乙醇-水体系、甲醇-水体系和丙酮-水体系。

相变溶剂应为与有机相提取溶剂能互溶，同时与水相提取溶剂不互溶的第三种溶剂，相变溶剂需要根据提取溶剂的种类进行调整。

若二元溶剂体系是乙腈-水体系，则相变溶剂可以是甲苯、环己烷、正己烷和氯仿中的至少一种，如有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂为乙腈-水-甲苯溶剂组合、乙腈-水-环己烷溶剂组合、乙腈-水-正己烷溶剂组合或者乙腈-水-氯仿溶剂组合。在其中一个示例中，有机相提取溶剂为乙腈，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.6~1)。在一个具体的示例中，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:1:0.8。

若二元溶剂体系是乙醇-水体系，则相变溶剂可以是甲苯、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的至少一种，如有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂为乙醇-水-甲苯溶剂组合、乙醇-水-乙酸乙酯溶剂组合、乙醇-水-氯仿溶剂组合或者乙醇-水-石油醚溶剂组合。在其中一个示例中，有机相提取溶剂为乙醇，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.3~0.7)。在一个具体的示例中，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:1:0.5。

若二元溶剂体系是甲醇-水体系，则相变溶剂可以是甲苯、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的至少一种，如有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂为甲醇-水-甲苯溶剂组合、甲醇-水-乙酸乙酯溶剂组合、甲醇-水-氯仿溶剂组合或者甲醇-水-石油醚溶剂组合。在其中一个示例中，有机相提取溶剂为甲醇，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.3~0.7)。在一个具体的示例中，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:1:0.5。

若二元溶剂体系是丙酮-水体系，则相变溶剂可以是甲苯、氯仿、环己烷和正己烷中的至少一种，如有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂为丙酮-水-甲苯溶剂组合、丙酮-水-氯仿溶剂组合、丙酮-水-环己烷溶剂组合或者丙酮-水-正己烷溶剂组合。在其中一个示例中，有机相提取溶剂为丙酮，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.1~0.3)。在一个具体的示例中，有机相提取溶剂、水相提取溶剂和相变溶剂的体积比为2:1:0.2。

进一步地，如图1所示，本发明还提供一种提取设备100包括加溶剂装置110和降温装置120。

其中，加溶剂装置110包括输送机构111以及加液机构112。

输送机构111用于输送加液机构112或者装有待检测样品的容器200。

加液机构112包括提取溶剂加液部件以及相变溶剂加液部件，提取溶剂加液部件用于向装有样品的容器200中加入有机相提取溶剂和水相提取溶剂得到第一液体，有机相提取溶剂和水相提取溶剂能够互溶，相变溶剂加液部件用于在第一液体中加入相变溶剂，混合得到分层为有机相层和水相层的第二液体，相变溶剂为不同于有机相提取溶剂的有机溶剂，相变溶剂能够与有机相提取溶剂互溶，而与水相提取溶剂不互溶。

降温装置120，用于对第二液体进行降温处理。例如，降温装置120用于将第二液体降温至-20℃~0℃。

加液机构112中的加液量可进行设置，实现自动或半自动加液，提高自动化程度。

在其中一个实施例中，输送机构111包括输送轨道，提取溶剂加液部件以及相变溶剂加液部件设置在输送机构111上，通过输送机构111的输送依次向装有待检测样品的容器200中加入有机相提取溶剂、水相提取溶剂以及相变溶剂。

在其中一个实施例中，加液机构112包括储液罐1121、滴液头1122以及调节器1123，滴液头1122与储液罐1121连通，调节器1123与储液罐1121连通，通过调节器1123调节储液罐1121内气压，使得由于储液罐1121内外气压差而实现加液。

在其中一个实施例中，降温装置120包括降温腔体121、制冷片122、导冷风扇123、风冷风扇124以及冰袋储室125。降温腔体121内具有供所述容器200放置的放样台。制冷片122设置在降温腔体121的侧壁上，进行电制冷。导冷风扇123靠近制冷片122设置以用于将制冷片122产生的冷气吹向降温腔体121的内部。风冷风扇124设置在降温腔体121的侧壁上以用于降温腔体121的内部吹风。冰袋储室125设置在放样台的下方，用于存放生物冰袋300。

冰袋储室125的上部1251可采用导热率好的材料制作，如夹层板，利于向上方导热，其他部位可采用隔热材料制作，减少向其他方向导热。

通过上述降温装置120，可以将第二液体快速降温，仅需5~10分钟，即可将第二液体从室温降温至-20℃~0℃，并且上述降温装置120无需进行高压供电，可实现低压供电，如电源126的规格为12V、10A，即可降温至-20℃~0℃。

其中，制冷片122可选用半导体制冷片122。

在其中一个实施例中，降温装置设置有至少两把风冷风扇，两把风冷风扇的风向呈直角设置，以加速冷却。

在其中一个实施例中，降温装置还包括散热风扇127，散热风扇127设置在制冷片远离降温腔体的一侧，用于对工作中的制冷片进行风冷散热。

在其中一个实施例中，降温装置还包括温度检测器128和温控器129，温度检测器128用于检测降温腔体的内部温度，温控器129用于进行温度设置和控制。

上述提取设备100有利于提高试验自动化程度和效率，适应流水线式的大规工业化检测。

进一步地，本发明还提供一种食品中香精香料的检测方法，包括以下步骤：

按照上述任一示例的食品中香精香料的提取方法获得有机相层。

取有机相层进行高效液相色谱-串联质谱分析。

在其中一个示例中，在进行高效液相色谱-串联质谱分析之前，有机相层采用滤膜进行过滤。通过过滤去除样品中可能含有的少量不溶物质，提高定量检测的准确性。滤膜可以采用尼龙材质。

在其中一个示例中，滤膜的滤孔的孔径为0.2μm~0.25μm，例如可以是0.2μm、0.21μm、0.22μm、0.24μm等。上述孔径范围可以滤除茶叶、巴士杀菌乳、灭菌乳、婴幼儿配方食品等食品中的不溶物质，并且过滤效率高。

传统的食品中香精香料的检测一般选择气相色谱、气相色谱-质谱联用等方法。由于气相色谱法要求待测物不含水，因此前处理均使用纯有机溶剂对待测物进行提取。然而，茶叶、婴幼儿配方食品等通常是使用水进行浸泡后饮用，纯溶剂提取物的检测结果不能有效反映水浸出物的含量，导致检测结果与消费者实际使用方式不相对应。

本发明针对茶叶、巴士杀菌乳、灭菌乳、婴幼儿配方食品等食品中可能的非法添加香精香料特别是茴香脑、甲基丁香酚、蒲勒酮、指甲花醌、反式肉桂醛、胡椒酚甲醚以及香豆素提供的高效高效液相色谱-串联质谱检测方案如下：

选择串联质谱的特定离子对，比较试样和标准的色谱峰的保留时间进行定性，以峰面积外标法进行定量。

高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件包括：

高效液相色谱柱：Kinetex C18色谱柱或者同等分离效果的C18色谱柱；

流动相A：体积分数为0.09%~0.11%的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.09%~0.11%甲酸乙腈溶液；

进样量为9μL~11μL，流速为0.25mL/min ~0.35mL/min，柱温为18℃~22℃。

在一个具体的示例中，色谱条件包括：

高效液相色谱柱：Kinetex C18（100mm×2.1mm，2.6μm，Phenomenex公司）；

流动相A：体积分数为0.1%甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.1%甲酸乙腈溶液；

洗脱程序：0.0min-1.50min，10%B-90%B；1.50min-4.00min，90%B；4.00min-4.10min，90%B-10%B；4.10min-6.00min，10%B；

进样量为10μL，流速为0.3mL/min，柱温为20℃。

质谱条件包括：

离子源：电喷雾离子源；

离子模式：正离子模式；

检测方式：多反应离子监测（MRM）；

定量与定性离子对：茴香脑：149.2/121.2*，149.2/65.2；甲基丁香酚：179.2/138.2*，179.2/77.2；蒲勒酮：153.2/81.2*，153.2/55.2；指甲花醌：177.1/89.1*，177.1/61.1；反式肉桂醛：133.2/55.2*，133.2/115.2；胡椒酚甲醚：149.2/65.0*，149.2/121.2；香豆素：148.1/104.0*，147.1/92.0；

雾化气：氮气；

气帘气参数：20 psi；

电喷雾电压5000V；

离子源温度：400℃；

离子源气体1：50 psi；

离子源气体2：70 psi。

图2给出了通过上述方法获得的7种香精香料（茴香脑、甲基丁香酚、蒲勒酮、指甲花醌、反式肉桂醛、胡椒酚甲醚、香豆素）的色谱峰的保留时间结果。

上述检测方案普遍适用于多种食品基质中非法添加香精香料的检测，加标回收率、重复性、定量限、检出限等指标满足方法学的要求。

以下提供具体的实施例对本发明作进一步说明。

实施例1，对10个绿茶样品进行加标回收实验

将10个绿茶样品分别取1g置于比色管中，分别向各比色管中添加7种香精香料进行加标回收实验，加标浓度为20mg/kg，加标体积为50μL。

10个样品分别用手动进行萃取净化方法和本发明中的提取设备100进行提取，进行回收率对比实验，共计140组实验。

采用传统方法：在样品中加入乙腈-水溶液（体积比为4:1），定容至10mL，取500μL置于离心管，用乙腈定容至5mL，加入净化剂（20mg无水硫酸镁、5mgPSA和5mgGBC），涡旋混合1min，在8000rpm速度下离心1min，取有机相层1mL，经过0.22μm尼龙滤膜过滤后上机测试。

使用本发明的提取设备：接通电源开启系统，使用提取溶剂和相变溶剂为：乙腈-水-甲苯，体积比为4:1:0.8，待降温至-20℃，无需加入净化剂（无水硫酸镁、PSA、GBC等），取有机相层1mL，过0.22μm尼龙滤膜上机测试，比较两种提取方法下目标物的回收率和提取时间。

10个绿茶样品中7种香精香料的加标回收实验的结果如图3和图4所示。

由实验结果可知，对于上述分析的全部7种物质，通过检测了10个不同的绿茶样品，结果表明采用本发明的提取方法的回收率均比传统方法高10%-20%，本发明的提取方法的回收率均在80%-120%的范围内，符合方法学的要求，能够应用于实际绿茶样品的检测中。另外，本发明的提取方法的提取时间仅为20分钟，比传统方法节省55分钟，说明本发明的提取方法快速有效。

实施例2，对10个灭菌乳样品进行加标回收实验

将10个绿茶样品分别取1g置于比色管中，分别向各比色管中添加7种香精香料进行加标回收实验，加标浓度为20mg/kg，加标体积为50μL。

10个样品分别用手动进行萃取净化方法和本发明中的提取设备100进行提取，进行回收率对比实验，共计140组实验。

采用传统方法：乙腈-水溶液（体积比为4:1）定容至10mL，取500μL置于离心管，用乙腈定容至5mL，加入净化剂（20mg无水硫酸镁、5mgPSA和5mgGBC），涡旋混合1min，在8000rpm速度下离心3min，取有机相层1mL，过0.22μm尼龙滤膜上机测试。

使用本发明的提取设备：接通电源开启系统，使用提取溶剂和相变溶剂为：乙腈-水-甲苯，体积比为4:1:0.8，待降温至-20℃，无需加入净化剂（无水硫酸镁、PSA、GBC等），取有机相层1mL过0.22μm尼龙滤膜上机测试，比较两种提取方法下目标物的回收率和提取时间。

10个灭菌乳样品中7种香精香料的加标回收实验的结果如图5和图6所示。

由实验结果可知，对于上述分析的全部7种物质，通过检测了10个不同的灭菌乳样品，结果表明本发明的提取方法的回收率均比传统方法高5%-10%，本发明的提取方法的回收率均在80%-120%的范围内，符合方法学的要求，能够应用于实际灭菌乳样品的检测中。另外，本发明的提取方法的提取时间仅为30分钟，比传统方法节省60分钟，说明本发明的提取方法快速有效。

实施例3 对5个婴幼儿乳粉样品进行加标回收实验

对5个婴幼儿乳粉样样品，分别取2 g置于比色管，分别向各比色管中添加7种香精香料（加标浓度为20 mg/kg，加标体积为50μL）的标准溶液进行加标回收实验。

5个样品分别用手动进行萃取净化方法和本发明中的提取设备100进行提取，进行回收率对比实验，共计70组实验。

采用传统方法：使用甲醇-水溶液（体积比为4:1）定容至10 mL，取500 μL置于离心管，用甲醇定容至5 mL，加入40 mg无水硫酸镁，5 mg PSA和5mg GBC，涡旋1min，10000 rpm离心3 min，取上清液1 mL，过0.22 μm尼龙膜上机测试。

使用本发明的提取设备：接通电源开启系统，使用提取溶剂和相变溶剂为：甲醇-水-氯仿，体积比为：4:1:0.5，加入总体积为10mL，待降温至-20℃，无需加入净化剂（无水硫酸镁、PSA、GBC等），取上清液1 mL，过0.22 μm尼龙膜上机测试，比较两种前处理方法下目标物的回收率和前处理时间。

5个婴幼儿乳粉样品中7种香精香料的加标回收实验的结果如图7和图8所示。

由实验结果可知，对于上述分析的全部7种物质，通过检测了5个不同的婴幼儿乳粉样品，结果表明本发明的提取方法的回收率均比传统方法高40%以上，本发明的提取方法的回收率均在80%-110%的范围内，符合方法学的要求，能应用于实际婴幼儿乳粉样品的检测中。与此同时，本发明的提取方法的前处理时间仅为30分钟，比传统方法节省65分钟，说明本发明的提取方法快速有效。

实施例4 对5个红茶样品进行加标回收实验

对5个红茶样品，分别取1 g置于比色管，分别向各比色管中添加7种香精香料的标准溶液进行加标回收实验，加标浓度均为20 mg/kg，加标体积为50μL。

5个样品分别用手动进行萃取净化方法和本发明中的提取设备100进行提取，进行回收率对比实验，共计70组实验。

采用传统方法：使用乙醇-水溶液（体积比为4:1）定容至10 mL，取500 μL置于离心管，用乙醇定容至5 mL，加入20 mg无水硫酸镁，5 mg PSA和5 mg GBC，涡旋1min，8000 rpm离心3min，取上清液1 mL，过0.22μm尼龙膜上机测试。

使用本发明的提取设备：接通电源开启系统，使用提取溶剂和相变溶剂为：使用提取溶剂和相变溶剂为：乙醇-水-（甲苯），体积比为：4:1:0.5，加入总体积为10mL，待降温至-20 ℃，无需加入净化剂（无水硫酸镁、PSA、GBC等），取上清液1 mL过0.22 μm尼龙膜上机测试，比较两种前处理方法下目标物的回收率和前处理时间。

5个红茶样品中7种香精香料的加标回收实验的结果如图9和图10所示。

由实验结果可知，对于上述分析的全部7种物质，通过检测了5个不同的红茶样品，结果表明本发明的提取方法的回收率均比传统方法高10%-20%，本发明的提取方法的回收率均在80%-120%的范围内，符合方法学的要求，能应用于实际红茶样品的检测中。与此同时，本发明的提取方法的前处理时间仅为20分钟，比传统方法节省60分钟，说明本发明的提取方法快速有效。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (11)

1.一种食品中香精香料的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

取待检测样品，加入有机相提取溶剂和水相提取溶剂，溶解得到第一液体，所述有机相提取溶剂和所述水相提取溶剂能够互溶；

在所述第一液体中加入相变溶剂，得到分层形成有机相层和水相层的第二液体，然后将所述第二液体降温至所述水相层凝固而所述有机相层不凝固的温度，取所述有机相层；其中，所述相变溶剂为不同于所述有机相提取溶剂的有机溶剂，所述相变溶剂能够与所述有机相提取溶剂互溶，而与所述水相提取溶剂不互溶。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第二液体降温至-20℃~0℃。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述水相提取溶剂为水；所述有机相提取溶剂为乙腈、乙醇、甲醇和丙酮中的至少一种。

4.如权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述有机相提取溶剂为乙腈，所述相变溶剂为甲苯、环己烷、正己烷和氯仿中的至少一种；或者

所述有机相提取溶剂为乙醇，所述相变溶剂为甲苯、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的至少一种；或者

所述有机相提取溶剂为甲醇，所述相变溶剂为甲苯、乙酸乙酯、氯仿和石油醚中的至少一种；或者

所述有机相提取溶剂为丙酮，所述相变溶剂为甲苯、氯仿、环己烷和正己烷中的至少一种。

5.如权利要求4所述的提取方法，其特征在于，所述有机相提取溶剂为乙腈，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.6~1)；或者

所述有机相提取溶剂为乙醇，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.3~0.7)；或者

所述有机相提取溶剂为甲醇，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.3~0.7)；或者

所述有机相提取溶剂为丙酮，所述有机相提取溶剂、所述水相提取溶剂和所述相变溶剂的体积比为4:(0.8~1.2):(0.1~0.3)。

6.如权利要求1~5任一项所述的提取方法，其特征在于，所述香精香料为茴香脑、甲基丁香酚、蒲勒酮、指甲花醌、反式肉桂醛、胡椒酚甲醚以及香豆素中的至少一种。

7.一种食品中香精香料的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

按照权利要求1~6任一项所述的提取方法获得所述有机相层；

取所述有机相层进行高效液相色谱-串联质谱分析。

8.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱-串联质谱分析的色谱条件包括：

流动相A：体积分数为0.09%~0.11%的甲酸水溶液，流动相B：体积分数为0.09%~0.11%甲酸乙腈溶液；

进样量为9μL~11μL，流速为0.25mL/min ~0.35mL/min，柱温为18℃~22℃。

9.如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，在进行所述高效液相色谱-串联质谱分析之前，所述有机相层采用滤膜进行过滤。

10.一种提取设备，其特征在于，包括：

加溶剂装置，包括输送机构以及加液机构，所述输送机构用于输送所述加液机构或者装有待检测样品的容器；所述加液机构包括提取溶剂加液部件以及相变溶剂加液部件，所述提取溶剂加液部件用于向所述容器中加入有机相提取溶剂和水相提取溶剂得到第一液体，所述有机相提取溶剂和所述水相提取溶剂能够互溶，所述相变溶剂加液部件用于在所述第一液体中加入相变溶剂，混合得到分层为有机相层和水相层的第二液体，所述相变溶剂为不同于所述有机相提取溶剂的有机溶剂，所述相变溶剂能够与所述有机相提取溶剂互溶，而与所述水相提取溶剂不互溶；

降温装置，用于对所述第二液体进行降温处理。

11.如权利要求10所述的提取设备，其特征在于，所述降温装置包括降温腔体、制冷片、导冷风扇、风冷风扇以及冰袋储室；所述降温腔体内具有供所述容器放置的放样台，所述制冷片设置在所述降温腔体的侧壁上，所述导冷风扇靠近所述制冷片设置以用于将所述制冷片产生的冷气吹向所述降温腔体的内部，所述风冷风扇设置在所述降温腔体的侧壁上以用于所述降温腔体的内部吹风，所述冰袋储室设置在所述放样台的下方。

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