CN111909244A - 一种高纯度米卡芬净前体fr901379的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法。该高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法包括将米卡芬净前体发酵浸提液通过陶瓷膜过滤，大孔吸附树脂吸附、解吸。解吸液浓缩用极性溶剂萃取洗晶，得到米卡芬净前体粗提物，将粗提物用聚合物纳米硅胶进行分离，将分离米卡芬净前体FR901379主成分去除极性溶剂后冻干得到高纯度米卡芬净前体FR901379产品。本发明具有能够得到高纯度米卡芬净前体产品，操作工艺简单，质量高，溶剂易回收的效果。
Description
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，特别涉及一种高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法。
背景技术
米卡芬净是通过对Coleophomaempetri的天然产物进行改造，分子式：C56H71N9O23S，分子量：1270.274
结构式如下：
米卡芬净(Micafungin)是通过对Coleophoma empetri的天然产物进行改造，化学合成得到的新型棘白菌素类抗真菌药物；它对念珠菌如白念珠菌、光滑念珠菌、热代念珠菌、克柔念珠菌和近平滑念珠菌有较好的抑制活性，对于曲霉也有良好的体外抑制活性，但对于新生隐球菌、镰刀菌、接合菌和白吉利毛孢子菌等无抑制活性。米卡芬净(Micafungin)由日本藤泽公司开发，于2002年12月在日本上市，商品名为Fungusrd，2005年3月通过美国FDA认证，目前仅被批准用于治疗食道念珠菌感染、骨髓移植及ADS患者中性粒细胞减少症的预防治疗。
FR901379是合成米卡芬净类药物的重要前体物质，由C.empetri经突变后获得的高产菌株发酵所得。FR901379通过脱酰酶脱除侧链后得到米卡芬净母核FR179642，FR179642经过化学修饰得到米卡芬净钠。
发明内容
根据本发明的一个方面，提供了一种高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，步骤如下：
S1，米卡芬净发酵完成进行放罐后提取，板框过滤得到发酵液菌渣；
S2，用体积百分浓度为80～95％的极性溶液对米卡芬净前体发酵液分离所得的菌渣进行浸泡，然后再对浸泡液进行过滤得到米卡芬净前体浸提液；
S3，使用陶瓷膜对米卡芬净前体浸提液进行初步分离；
S4，降低米卡芬净前体浸提液极性溶剂浓度，用大孔吸附树脂进行吸附；
S5，用极性溶剂梯度浓度解吸，浓缩脱去米卡芬净前体解吸液中的极性溶剂；
S6，加入极性溶剂进行萃取，浓缩；
S7，将米卡芬净前体萃取浓缩液用溶剂结晶，过滤干燥得到米卡芬净前体粗提物；
S8，将米卡芬净前体粗提物极性溶剂溶解后用聚合物纳米硅胶进行分离，用40％-70％乙腈冲洗，收集主成份；
S9，将米卡芬净前体主成份收集液浓缩后，冻干，得到高纯度米卡芬净前体。
在一些实施方式中，其步骤S2，S5中所述的极性溶剂应该为甲醇或者乙醇。
在一些实施方式中，其步骤S2中所述溶剂体积加入量与发酵液体积比应为1：3-1：5。
在一些实施方式中，其步骤S3中所述陶瓷膜孔径应在50-100纳米。
在一些实施方式中，其步骤S4中所述极性溶剂浓度在20-30％。
在一些实施方式中，其步骤S4中所述大孔吸附树脂为D1300,PAD900。
在一些实施方式中，其步骤S6中所述溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、正己烷。
在一些实施方式中，其步骤S7中所述溶剂为乙醚或者丙酮，体积与浓缩液体积比为6：4～7：3。
在一些实施方式中，其步骤S8所述聚合物纳米硅胶为C18填料或者PSDVB填料。
本发明的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其有益效果是，该方法具有能够得到高纯度米卡芬净前体产品，操作工艺简单，质量高，溶剂易回收的效果。
附图说明
图1为一种实施方式中的FR901379米卡芬净前体浸提液HPLC图谱；
图2为一种实施方式中的高纯度FR901379米卡芬净前体固体HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的说明。
实施例1
S1取米卡芬净前体FR901379发酵液20L，发酵单位0.835mg/mL，加助滤剂板框压滤，得到5.3kg米卡前体发酵液菌渣；
S2加入95％乙醇10L，搅拌2h，用板框再次压滤收集滤液，得到米卡芬净前体浸提液；
S3用50纳米陶瓷膜对进行浸提液进行过滤，收集透析液；
S4将透析液加水将乙醇浓度调整为30％，用5.0LPAD900树脂吸附，10.0L50％乙醇溶液冲洗，用95％乙醇洗脱，洗脱完毕后在40℃条件下减压浓缩至冷凝器无液体流出；
S5向浓缩液中加入1000mL乙酸乙酯萃取，浓缩；
S6向萃取浓缩液中加入700mL70％丙酮溶液，搅拌30min后静置2h，抽滤干燥后得到FR901379米卡芬净前体粗体物17.3g；
S7将米卡芬净前体FR901379粗提物用70％乙腈溶解后用300gC18填料色谱柱进行分离，流动相为70％乙腈，单次进样2g收集主成分；
S8收集液减压浓缩。浓缩液冻干结晶得到16.2g高纯度的米卡芬净前体FR901379固体；
S9经HPLC检测，米卡芬净前体FR901379固体含量为94.3％。
附图1为该实施例的FR901379米卡芬净前体浸提液HPLC图谱；
图2为该实施例的高纯度FR901379米卡芬净前体固体HPLC图谱。
实施例2
S1取米卡芬净前体FR901379发酵液30L，发酵单位0.925mg/mL，加助滤剂板框压滤，得到8.6kg米卡前体发酵液菌渣，加入90％甲醇15L，搅拌1h，用板框再次压滤收集滤液；用100纳米陶瓷膜对进行浸提液进行过滤，收集透析液。
S2将透析液加水将甲醇浓度调整为30％，用8.0LD1300树脂吸附，15.0L50％甲醇溶液冲洗，用90％甲醇洗脱，洗脱完毕后在40℃条件下减压浓缩至冷凝器无液体流出。
S3向浓缩液中加入1500mL乙酸丁酯萃取，浓缩。
S4向萃取浓缩浓缩液中加入1000mL60％乙醚溶液，搅拌30min后静置2h，抽滤干燥后得到FR901379米卡芬净前体粗体物28.4g。
S5将米卡芬净前体FR901379粗提物用40％乙腈溶解后用300gPSDVB填料色谱柱进行分离，流动相为40％乙腈，单次进样2g收集主成分。
S6收集液减压浓缩，浓缩液冻干结晶得到24.68g高纯度的米卡芬净前体FR901379固体。
S7经HPLC检测，米卡芬净前体FR901379固体含量为93.8％。
实施例3
S1取米卡芬净前体FR901379发酵液40L，发酵单位0.846mg/mL，加助滤剂板框压滤，得到11.2kg米卡前体发酵液菌渣，加入80％乙醇20L，搅拌2h，用板框再次压滤收集滤液；用50纳米陶瓷膜对进行浸提液进行过滤，收集透析液。
S2将透析液加水将乙醇浓度调整为30％，用12.0LPAD900树脂吸附，15.0L50％乙醇溶液冲洗，用80％乙醇洗脱，洗脱完毕后在40℃条件下减压浓缩至冷凝器无液体流出。
S3向浓缩液中加入2000mL正己烷萃取，浓缩。
S4向萃取浓缩浓缩液中加入900mL60％丙酮溶液，搅拌30min后静置2h，抽滤干燥后得到FR901379米卡芬净前体粗体物34.3g。
S5将米卡芬净前体FR901379粗提物用60％乙腈溶解后用300gC18填料色谱柱进行分离，流动相为60％乙腈，单次进样2g收集主成分。
S6收集液减压浓缩。浓缩液冻干结晶得到31.9g高纯度的米卡芬净前体FR901379固体。
S7经HPLC检测，米卡芬净前体FR901379固体含量为95.3％。
实施例4
S1取米卡芬净前体FR901379发酵液20L，发酵单位0.874mg/mL，加助滤剂板框压滤，得到5.6kg米卡前体发酵液菌渣，加入80％甲醇10L，搅拌2h，用板框再次压滤收集滤液；用100纳米陶瓷膜对进行浸提液进行过滤，收集透析液。
S2将透析液加水将甲醇醇浓度调整为20％，用5.0LD1300树脂吸附，15.0L40％甲醇溶液冲洗，用70％甲醇洗脱，洗脱完毕后在40℃条件下减压浓缩至冷凝器无液体流出。
S3向浓缩液中加入1000mL乙酸乙酯萃取，浓缩。
S4向萃取浓缩浓缩液中加入700mL60％丙酮溶液，搅拌30min后静置2h，抽滤干燥后得到FR901379米卡芬净前体粗体物18.32g。
S5将米卡芬净前体FR901379粗提物用60％乙腈溶解后用300gC18填料色谱柱进行分离，流动相为60％乙腈，单次进样2g收集主成分。
S6收集液减压浓缩。浓缩液冻干结晶得到17.24g高纯度的米卡芬净前体FR901379固体。
S7经HPLC检测，米卡芬净前体FR901379固体含量为94.6％。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，步骤如下：
S1，米卡芬净发酵完成进行放罐后提取，板框过滤得到发酵液菌渣；
S2，用体积百分浓度为80～95％的极性溶液对米卡芬净前体发酵液分离所得的菌渣进行浸泡，然后再对浸泡液进行过滤得到米卡芬净前体浸提液；
S3，使用陶瓷膜对米卡芬净前体浸提液进行初步分离；
S4，降低米卡芬净前体浸提液极性溶剂浓度，用大孔吸附树脂进行吸附；
S5，用极性溶剂梯度浓度解吸，浓缩脱去米卡芬净前体解吸液中的极性溶剂；
S6，加入极性溶剂进行萃取，浓缩；
S7，将米卡芬净前体萃取浓缩液用溶剂结晶，过滤干燥得到米卡芬净前体粗提物；
S8，将米卡芬净前体粗提物极性溶剂溶解后用聚合物纳米硅胶进行分离，用40％-70％乙腈冲洗，收集主成份；
S9，将米卡芬净前体主成份收集液浓缩后，冻干，得到高纯度米卡芬净前体。
2.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S2，S5中所述的极性溶剂应该为甲醇或者乙醇。
3.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S2中所述溶剂体积加入量与发酵液体积比应为1：3-1：5。
4.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S3中所述陶瓷膜孔径应在50-100纳米。
5.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S4中所述极性溶剂浓度在20-30％。
6.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S4中所述大孔吸附树脂为D1300,PAD900。
7.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S6中所述溶剂为乙酸乙酯、乙酸丁酯、正己烷。
8.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S7中所述溶剂为乙醚或者丙酮，体积与浓缩液体积比为6：4～7：3。
9.根据权利要求1所述的高纯度米卡芬净前体FR901379的制备方法，其特征在于，其步骤S8所述聚合物纳米硅胶为C18填料或者PSDVB填料。
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