具体实施方式
本发明的权利要求书特别陈述了本发明的新特征。在下文的发明详述中陈述了利用本发明原理的示例性实施方式,通过参考该发明详述可更好地理解本发明的特征和优点。
本文已经显示和描述了本发明的一些实施方式,但是这些实施方式仅作为示例提供。应理解本文所述的本发明实施方式的变体也可用于实施本发明。本领域普通技术人员应理解,可出现多种变体、变化和替换而不脱离本发明的范围。应理解本发明各个方面的保护范围由权利要求书决定,并且这些权利要求范围内的方法和结构以及其等价的方法和结构均在本发明权利要求书涵盖的范围之内。
本发明化合物的通用合成
本发明的化合物通常能通过如方案-1所示的化学方案进行合成。所有相关的化合物能按照方案-1所示的通用方法类似地进行制备,而特定化合物的合成将在下文描述的化合物实施例部分中予以提供。
浓硫酸催化的4-乙酰基苯甲酸与乙醇的标准酯化反应能以较高的收率得到所需乙基酯2。4-乙酰基苯甲酸乙酯2与碳酸二乙酯缩合得到β-酮酯3。用氯化铵作为催化剂,使用N-溴代琥珀酰亚胺将β-酮酯3在乙醚中溴代得到溴代化合物4,其紧接着和酸5缩合得到化合物6。化合物6与过量的氯化铵在二甲苯中回流2-3小时,得到所需的咪唑二酯7。室温下,化合物7在四氢呋喃/水混合溶液中选择性水解得到苯甲酸类似物8。化合物8与2-氨基吡啶衍生物缩合得到吡啶基苯甲酰胺9。接下来,使用O-二苯基氧膦基羟胺(Aldrich)对咪唑上的N进行选择性N胺化以较高的收率得到1-氨基-1H-咪唑10。值得注意的是,没有观察到其他的位置异构体。然后使用氢氧化锂将化合物10水解为酸11。室温下,酸11和氯化铵、HATU、DIPEA在DMF中搅拌过夜被转化为酰胺12。最终化合物14通过以下步骤得到:在二氯甲烷中,酰胺12用30%TFA处理后生成中间体13,其在二氯甲烷中与巴豆酰氯(或相应的酸与其他试剂)和DIPEA反应得到最终产物14。
方案-1
方案-1续
在方案-1中,n选自0、1、2和3。
实施例
实施例1:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基-氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备4-乙酰基苯甲酸乙酯
在0°C下,向4-乙酰基苯甲酸(1000g,6.1mol)在乙醇(2L)中的溶液缓慢加入H2SO4(10mL),并将混合物在80℃下回流3h。真空下除去溶剂,并将残余物用乙酸乙酯萃取,用饱和盐水洗涤,经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=10:1)后得到白色固体4-乙酰基苯甲酸乙酯(1077g,92%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.11(d,J=7.6Hz,2H),7.99(d,J=7.7Hz,2H),4.39(q,J=7.0Hz,2H),2.63(s,3H),1.40(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):193.1[M+H]+。
步骤B:制备4-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)苯甲酸乙酯
向在N2气氛下的碳酸二乙酯(423g,3.49mol)在无水四氢呋喃(1L)中的溶液,加入60%NaH(195g,4.88mol)和335g(1.74mol)步骤A的产物,将混合物回流3h。反应完成后,将混合物冷却至室温,逐滴加入1mol/L冷却的冰醋酸直至pH 6-7。蒸去溶剂四氢呋喃,将残余物用饱和盐水稀释,并用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。有机相合并后用饱和盐水洗涤,经无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=12:1)后得到黄色油状4-(3-乙氧基-3-氧代丙酰基)苯甲酸乙酯(399g,87%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:12.54(s,0.7H),8.13(d,J=8.6Hz,0.5H),8.07(d,J=8.6Hz,1.4H),7.98(d,J=8.6Hz,0.5H),7.82(d,J=8.6Hz,1.4H),5.72(s,0.7H),4.43–4.36(m,2H),4.27(q,J=7.1Hz,1.4H),4.20(q,J=7.1Hz,0.5H),4.00(s,0.5H),1.42–1.38(m,3H),1.33(t,J=7.1Hz,2.1H),1.24(t,J=7.1Hz,0.8H)。MS(ESI,m/z):265.1[M+H]+。
步骤C:制备4-(2-溴-3-乙氧基-3-氧代丙酰基)苯甲酸乙酯
将步骤B的产物(180g,680mmol)、NBS(129g,727mmol)和NH4OAc(5.3g,68mmol)在乙醚(1000mL)中的溶液在室温下搅拌。通过TLC监测反应。反应完成后,蒸去乙醚,将粗混合物用水(1500mL)稀释。产物用乙酸乙酯(2×1500mL)萃取,有机萃取物合并后,经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物使用快速柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=10:1),得到黄色油状物4-(2-溴-3-乙氧基-3-氧代丙酰基)苯甲酸乙酯(200g,86%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.13(d,J=8.6Hz,2H),8.02(d,J=8.6Hz,2H),5.66(s,1H),4.39(q,J=7.1Hz,2H),4.26(q,J=7.1Hz,2H),1.39(t,J=7.1Hz,3H),1.22(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):343.1[M+H]+。
步骤D:制备1-(叔丁基)2-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙
烷-2-基)(2S)-吡咯烷-1,2-二羧酸酯
将步骤C的产物(256g,746mmol)溶于乙腈(2L),加入(叔丁氧基羰基)-L-脯氨酸(168g,781mmol)和二异丙基乙胺(141mL,746mmol)。将混合物在室温下搅拌反应3h,反应完成后蒸去所有的挥发物。将残余物用水(1000mL)稀释,并用乙酸乙酯(3000mL)萃取。分离有机相,经无水硫酸钠干燥,并浓缩。残余物通过快速柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=7:1),得到浅黄色油状物1-(叔丁基)2-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)(2S)-吡咯烷-1,2-二羧酸酯(330g,93%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.12–8.09(m,2H),8.03–7.98(m,2H),6.33–6.27(m,1H),4.48–4.34(m,3H),4.23–4.18(m,2H),3.56–3.28(m,2H),2.29–2.07(m,2H),1.98–1.83(m,2H),1.42–1.29(m,12H),1.20–1.14(m,3H)。MS(ESI,m/z):478.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-
1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在1L压力瓶中,将步骤D的产物(202g,423mmol)溶于二甲苯(1250mL),加入NH4OAc(390g,5059mmol)。在140℃下加热反应2.5h。冷却后,将溶液在乙酸乙酯(3000mL)和水(1000mL)之间分配。浓缩有机层。残余物使用色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=5:1),得到浅黄色油状物(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(77g,40%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:11.17(s,1H),8.13–7.89(m,4H),5.03–4.85(m,1H),4.33(q,J=6.6Hz,2H),4.26–4.21(m,2H),3.49–3.38(m,2H),2.85–2.11(m,3H),1.92–1.82(m,1H),1.45–1.39(m,9H),1.35(t,J=6.8Hz,3H),1.23–1.21(m,3H)。MS(ESI,m/z):458.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪
唑-4-基)苯甲酸
将步骤E的产物(4.57g,10mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL),加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,50mL),室温搅拌反应2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用盐酸水溶液酸化至pH3。通过过滤分离白色沉淀物,干燥得到(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-4-基)苯甲酸(3.86g,90%)。
步骤G:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在氮气气氛下,将步骤F的产物(29.0g,67mmol)溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺(250mL),加入HATU(30.8g,81mmol)、二异丙基乙胺(58mL,337mmol)和吡啶-2-胺(9.5g,101mmol)。反应混合物在80℃下搅拌。在反应完成后(通过TLC监测),将混合物用盐水淬灭,乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,在减压下浓缩,并通过快速柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(29.5g,87%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.12(s,1H),8.80(s,1H),8.40(d,J=8.4Hz,1H),8.27–8.26(m,1H),8.15(d,J=7.7Hz,2H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.77–7.72(m,1H),7.06–7.03(m,1H),4.98–4.97(m,1H),4.35–4.28(m,2H),3.52–3.42(m,2H),2.21–1.94(m,4H),1.50(s,9H),1.33–1.29(m,3H)。MS(ESI,m/z):506.1[M+H]+。
步骤H:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,在氮气气氛下,将步骤G的产物(2.6g,5.1mmol)溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺(25mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(6.1mL,1M四氢呋喃溶液)。在混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.1mmol),将得到的悬浮液在室温下搅拌2h(当反应混合物变得太粘稠时,另外加入适量N,N-二甲基甲酰胺)。反应完全后,用盐水淬灭反应,并在真空下浓缩至干。将残余物用乙酸乙酯(3×100mL)洗涤三次。有机部分合并后经无水硫酸钠干燥,在减压下除去溶剂得到粗残余物。该粗残余物通过柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(1.9g,71%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.93(s,1H),8.39(d,J=8.3Hz,1H),8.22(d,J=4.2Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,2H),7.78(d,J=7.6Hz,2H),7.73(t,J=7.7Hz,1H),7.02(t,J=5.6Hz,1H),6.64(s,2H),5.22–5.13(m,1H),4.25–4.22(m,2H),3.56–3.55(m,1H),3.46–3.43(m,1H),2.39–2.36(m,2H),2.23–2.18(m,1H),1.92–1.91(m,1H),1.39(s,7H),1.24(s,2H),1.20(t,J=6.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):521.1[M+H]+。
步骤I:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤H的产物(1.36g,2.6mmol)溶于甲醇(15mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,14mL),然后在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,并用盐酸水溶液酸化至pH 3。将混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,在减压下浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.15g,90%)。
步骤J:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
在氮气气氛下,将步骤I的产物(0.97g,2.0mmol)溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺(15mL),搅拌并加入HATU(1.1g,2.9mmol)、二异丙基乙胺(1mL,5.9mmol)和氯化铵(1.1g,20mmol)。在室温下搅拌反应混合物2h。反应完全后,用盐水淬灭反应混合物,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后在减压下浓缩得,并通过快速柱层析色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.8g,83%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.72(s,1H),8.40–8.38(m,1H),8.21(d,J=8.4Hz,1H),8.12(s,1H),8.02(d,J=8.2Hz,2H),7.86–7.81(m,3H),7.69(s,1H),7.18–7.15(m,1H),6.22(s,1H),5.97(s,1H),5.11–5.06(m,1H),3.57–3.47(m,1H),3.44–3.38(m,1H),2.28–1.82(m,4H),1.39(s,5H),1.15(s,4H)。MS(ESI,m/z):492.2[M+H]+。
步骤K:制备(S)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气保护下,将步骤J的产物(190mg,0.39mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.5mL)。将混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):392.1[M+H]+。
步骤L:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气气氛下,将步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(32.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入水和乙酸乙酯。分层,然后将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基-吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(99mg,62%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.91(s,1H),8.37(d,J=8.4Hz,1H),8.29(dd,J1=4.8Hz,J2=1.0Hz,1H),7.93(d,J=8.4Hz,2H),7.78–7.72(m,3H),7.06(ddd,J1=7.3Hz,J2=5.0Hz,J3=0.8Hz,1H),6.77(s,2H),6.69(s,1H),6.46(dd,J1=16.8Hz,J2=10.2Hz,1H),6.32(dd,J1=16.8Hz,J2=2.0Hz,1H),5.94(s,1H),5.71(dd,J1=10.2Hz,J2=2.0Hz,1H),5.33(dd,J1=8.1Hz,J2=5.0Hz,1H),3.88–3.82(m,1H),3.73–3.67(m,1H),2.65–2.55(m,1H),2.51–2.43(m,1H),2.31–2.22(m,1H),2.11–2.02(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.7,165.1,162.8,151.8,148.4,148.0,141.6,138.6,138.5,133.8,129.8,128.6,127.5,120.1,119.1,114.5,51.4,47.7,30.8,25.6。MS(ESI,m/z):446.1[M+H]+。
实施例2:(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气气氛下,将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。将残余物通过柱层析色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1)后得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(110mg,59%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.26(s,1H),8.31(d,J=8.3Hz,1H),8.23(d,J=4.4Hz,1H),7.85(d,J=8.0Hz,2H),7.70(t,J=7.8Hz,1H),7.66(d,J=8.0Hz,2H),7.02–7.00(m,1H),6.87(s,1H),6.66(s,2H),6.45(s,1H),5.27(s,1H),5.26–5.23(m,1H),5.20(s,1H),3.75–3.68(m,2H),2.53–2.48(m,2H),2.32–2.27(m,2H),1.90(s,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:171.2,165.9,162.9,151.8,148.6,147.8,141.5,140.7,138.5,138.3,133.7,129.6,127.5,119.9,119.5,118.0,114.6,51.2,50.0,30.9,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):460.2[M+H]+。
实施例3:(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-
基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气气氛下,将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(42.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(131mg,67%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.93(s,1H),8.38–8.30(m,2H),7.98–7.87(m,2H),7.78–7.75(m,3H),7.10–7.04(m,1H),6.89–6.81(m,3H),5.89(s,1H),5.79(s,1H),5.30–5.23(m,1H),3.75–3.72(m,1H),3.62–3.58(m,1H),2.55–2.46(m,2H),2.27–2.23(m,1H),2.03–1.99(m,4H),1.85(s,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.0,165.7,162.7,151.7,151.0,148.9,147.9,141.8,138.7,138.6,133.7,129.9,127.5,120.1,119.1,117.7,114.6,50.8,48.0,30.9,27.2,25.6,20.4。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例4:(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气气氛下,将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。将残余物通过柱层析色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(102mg,54%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.35(s,1H),8.30(d,J=8.3Hz,1H),8.22(d,J=4.3Hz,1H),7.82(d,J=7.9Hz,2H),7.69–7.66(m,3H),7.15(s,1H),7.01–6.99(m,1H),6.85–6.79(m,1H),6.70(s,2H),6.56(s,1H),6.08(d,J=15.1Hz,1H),5.23–5.21(m,1H),3.78–3.74(m,1H),3.64–3.60(m,1H),2.56–2.49(m,1H),2.39–2.35(m,1H),2.20–2.14(m,1H),2.02–1.95(m,1H),1.81(d,J=6.8Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.0,165.4,162.9,151.9,148.7,147.8,142.4,141.5,138.4,138.3,133.5,129.6,127.4,122.8,119.9,119.5,114.6,51.2,47.5,30.7,25.4,18.2。MS(ESI,m/z):460.2[M+H]+。
实施例5:(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-
(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气保护下,将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入2-氰基乙酸(30.6mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。将反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过柱层析色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(95mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.80(s,1H),8.39(d,J=8.3Hz,1H),8.31(d,J=4.7Hz,1H),7.97(d,J=7.8Hz,2H),7.78–7.76(m,3H),7.10–7.08(m,1H),6.48(s,2H),6.25(s,1H),5.74(s,1H),5.36–5.33(m,1H),3.79–3.75(m,1H),3.62–3.58(m,1H),3.48(dd,J1=26.3Hz,J2=18.2Hz,2H),2.63–2.56(m,1H),2.48–2.43(m,1H),2.34–2.28(m,1H),2.14–2.08(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.4,162.6,160.9,151.7,148.0,147.9,141.4,138.7,138.2,134.2,129.9,127.7,120.2,119.2,114.5,113.7,52.2,48.2,31.0,26.3,25.5。MS(ESI,m/z):459.1[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-
(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在氮气保护下,在0℃下将环丙烷甲醛(7.7mg,0.11mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入吡咯烷(45μL,0.55mmol)、三甲基氯硅烷(70μL,0.55mmol)。移除冰浴,并将反应混合物搅拌10min,然后加入步骤A的产物(50mg,0.11mmol)。将反应溶液搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=27:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(38mg,67%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.16(s,1H),8.36(d,J=8.3Hz,1H),8.27(d,J=3.8Hz,1H),7.91(d,J=8.1Hz,2H),7.76–7.62(m,3H),7.07–7.05(m,1H),6.79(d,J=11.3Hz,1H),6.56–6.41(m,3H),6.28(s,1H),5.31–5.29(m,1H),4.05–4.01(m,1H),3.93–3.89(m,1H),2.49–2.45(m,2H),2.31–2.27(m,1H),2.10–1.99(m,2H),1.24–1.23(m,2H),0.89–0.85(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.8,165.7,162.9,161.4,151.7,148.0,147.8,141.5,138.7,138.2,133.9,129.7,127.7,120.1,119.1,115.5,114.6,107.4,53.0,49.5,30.7,26.1,15.8,11.2,11.1。MS(ESI,m/z):511.2[M+H]+。
实施例6:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(SE)-1-氨基-2-(1-(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入(E)-戊-2-烯酸(36mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出灰白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(124mg,64%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.21(s,1H),8.32(d,J=8.3Hz,1H),8.25(d,J=4.1Hz,1H),7.86(d,J=7.8Hz,2H),7.72–7.70(m,3H),7.09(s,1H),7.03–7.01(m,1H),6.91–6.87(m,1H),6.75(s,2H),6.35(s,1H),6.07(d,J=15.1Hz,1H),5.25(d,J1=7.6Hz,J2=5.0Hz,1H),3.81–3.78(m,1H),3.67–3.63(m,1H),2.60–2.53(m,1H),2.44–2.39(m,1H),2.24–2.17(m,3H),2.05–1.99(m,1H),1.02(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,165.7,162.8,151.8,148.8,148.7,147.8,141.7,138.5,138.4,133.6,129.7,127.4,120.4,119.9,119.3,114.6,51.2,47.5,30.8,25.6,25.5,12.6。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例7:(S)-1-氨基-2-(1-丙炔酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-丙炔酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入丙炔酸(25.2mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),给出黄色固体(S)-1-氨基-2-(1-丙炔酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(102mg,56%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.82(s,1H),8.40(d,J=8.3Hz,1H),8.31(d,J=3.8Hz,1H),7.99–7.96(m,2H),7.79–7.75(m,3H),7.10–7.08(m,1H),6.65–6.63(m,2H),6.30(s,1H),5.62(s,1H),5.30(dd,J1=8.0Hz,J2=5.4Hz,1H),3.92–3.90(m,2H),3.10(s,1H),2.59–2.47(m,2H),2.38–2.32(m,1H),2.07–2.02(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.4,162.6,152.2,151.6,147.9,147.5,141.5,138.8,138.4,134.1,129.9,127.7,120.2,119.0,114.5,78.6,76.4,50.9,49.3,31.2,25.0。MS(ESI,m/z):444.1[M+H]+。
实施例8:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入2-丁炔酸(30.2mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(88mg,47%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.66(s,1H),8.40(d,J=8.8Hz,1H),8.32(d,J=3.9Hz,1H),7.97(d,J=8.4Hz,2H),7.86–7.75(m,3H),7.10–7.08(m,1H),6.70(s,2H),6.43(s,1H),5.51(s,1H),5.28–5.25(m,1H),3.88–3.85(m,2H),2.59–2.47(m,2H),2.37–2.30(m,1H),2.05–2.00(m,4H);13C NMR(DMSO,100MHz)δ:165.7,162.2,152.3,151.9,148.3,147.9,138.1,138.0,136.3,132.0,127.7,127.1,124.7,119.8,114.7,88.6,74.3,50.9,48.5,31.0,23.8,3.3。MS(ESI,m/z):458.1[M+H]+。
实施例9:(S)-1-氨基-2-(1-氰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-氰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例1中步骤K的产物(160mg,0.41mmol)溶于干燥乙腈(5mL),加入K2CO3(170mg,1.23mmol)。5min后,加入BrCN(43.4mg,0.41mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌6h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到黄色固体(S)-1-氨基-2-(1-氰基吡咯烷-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(74mg,43%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.05(s,1H),8.35(d,J=8.4Hz,1H),8.28(d,J=4.2Hz,1H),7.96(d,J=8.2Hz,2H),7.78–7.72(m,3H),7.07(dd,J1=7.2Hz,J2=5.0Hz,1H),6.19(s,1H),5.93(s,1H),5.71(s,2H),5.20(t,J=6.7Hz,1H),3.69–3.64(m,1H),3.56–3.51(m,1H),2.54–2.46(m,1H),2.32–2.22(m,2H),2.07–1.99(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.4,162.6,151.7,148.3,148.0,140.8,138.7,137.6,134.4,129.6,128.0,121.5,120.2,117.1,114.5,56.0,51.3,30.6,25.5。MS(ESI,m/z):417.1[M+H]+。
实施例10:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(29.0g,67mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL),搅拌并加入HATU(30.8g,81mmol)、二异丙基乙胺(58mL,337mmol)和4-甲基吡啶-2-胺(10.9g,101mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(25.0g,71%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.06(s,1H),8.56(s,1H),8.26(s,1H),8.17–8.14(m,3H),7.96(d,J=8.3Hz,2H),6.91(d,J=4.9Hz,1H),4.99–4.97(m,1H),4.37–4.31(m,2H),3.52–3.42(m,2H),3.01–2.92(m,1H),2.41(s,3H),2.24–1.96(m,3H),1.51(s,9H),1.33(t,J=7.0Hz,3H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,将步骤A的产物(2.6g,5.1mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(25mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(6.1mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.1mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并在真空中浓缩至干。残余物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机部分合并后,用无水硫酸钠干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),给出期望的产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(1.5g,55%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.69(s,1H),8.27(s,1H),8.16(d,J=5.1Hz,1H),7.93(d,J=8.3Hz,2H),7.81(d,J=8.4Hz,2H),6.91(d,J=4.8Hz,1H),6.66(s,2H),5.21–5.18(m,1H),4.32–4.25(m,2H),3.61–3.55(m,1H),3.50–3.44(m,1H),2.45–2.37(m,4H),2.27–2.20(m,1H),1.97–1.91(m,1H),1.73–1.68(m,1H),1.42(s,7H),1.27–1.21(m,5H)。MS(ESI,m/z):535.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(1.38g,2.6mmol)溶于甲醇(15mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,14mL),然后在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.02g,78%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(1.01g,2.0mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(15mL),搅拌并加入HATU(1.1g,2.9mmol)、二异丙基乙胺(1mL,5.9mmol)和氯化铵(1.1g,20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.91g,90%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.76(s,1H),8.24(s,1H),8.15(d,J=5.0Hz,1H),7.95(d,J=8.2Hz,2H),7.82(d,J=8.1Hz,2H),6.91(d,J=4.8Hz,1H),6.78(s,1H),6.63(s,2H),5.70(s,1H),5.12–5.09(m,1H),3.59–3.44(m,2H),2.50–2.40(m,5H),2.28–2.19(m,1H),1.99–1.92(m,1H),1.43(s,7H),1.28(s,2H)。MS(ESI,m/z):506.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯
烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(197mg,0.39mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.5mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):406.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(344mg,2.67mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(36.2mg,0.40mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出灰白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(104mg,51%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.39(s,1H),8.28(s,1H),8.12(d,J=4.8Hz,1H),7.95(d,J=8.3Hz,2H),7.76(d,J=8.3Hz,2H),6.92(d,J=4.8Hz,1H),6.70(s,2H),6.45(dd,J1=16.8Hz,J2=10.2Hz,1H),6.31(dd,J1=16.8Hz,J2=1.9Hz,1H),6.02(s,1H),5.70(dd,J1=10.2Hz,J2=1.9Hz,1H),5.32(dd,J1=8.0Hz,J2=5.0Hz,1H),3.87–3.82(m,1H),3.72–3.66(m,1H),2.64–2.54(m,1H),2.50–2.44(m,1H),2.41(s,3H),2.30–2.22(m,1H),2.10–2.01(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.8,165.1,162.8,151.5,151.2,148.4,146.3,141.6,138.5,133.7,129.8,128.6,128.6,127.7,121.2,119.1,115.4,51.3,47.7,30.8,25.6,21.7。MS(ESI,m/z):460.2[M+H]+。
实施例11:(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(344mg,2.67mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(41.8mg,0.40mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(110mg,52%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.09(s,1H),8.21(s,1H),8.11(d,J=4.9Hz,1H),7.91(d,J=8.3Hz,2H),7.71(d,J=8.3Hz,2H),6.88(d,J=4.8Hz,1H),6.72(s,2H),6.67(s,1H),6.24(s,1H),5.29(s,1H),5.26(t,J=7.2Hz,1H),5.21(s,1H),3.77–3.69(m,2H),2.57–2.51(m,1H),2.38(s,3H),2.34–2.27(m,2H),1.95–1.87(m,4H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:171.2,165.7,162.8,151.8,150.1,148.4,147.4,141.6,140.7,138.4,133.9,129.8,127.6,121.2,119.2,118.0,115.1,51.2,50.0,30.9,25.9,21.6,19.8。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例12:(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲
基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(344mg,2.67mmol)。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(47.4mg,0.40mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(130mg,61%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.15(s,1H),8.22(s,1H),8.11(d,J=5.1Hz,1H),7.90(d,J=8.3Hz,2H),7.74(d,J=8.3Hz,2H),6.93(s,1H),6.88(d,J=4.9Hz,1H),6.79(s,2H),6.21(s,1H),5.77(s,1H),5.25(dd,J1=8.0Hz,J2=5.2Hz,1H),3.74–3.70(m,1H),3.61–3.57(m,1H),2.54–2.42(m,2H),2.38(s,3H),2.26–2.20(m,1H),2.03–1.98(m,4H),1.83(s,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.9,165.8,162.8,151.8,150.9,150.3,148.8,147.2,141.7,138.5,133.7,129.8,127.5,121.2,119.1,117.6,115.1,50.8,48.0,30.8,27.2,25.6,21.6,20.3。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例13:(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基-吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基-吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(344mg,2.67mmol)。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(41.8mg,0.40mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(120mg,57%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.26(s,1H),8.20(s,1H),8.09(d,J=5.0Hz,1H),7.88(d,J=8.3Hz,2H),7.71(d,J=8.3Hz,2H),6.97(s,1H),6.88–6.82(m,2H),6.76(s,2H),6.43(s,1H),6.10(dd,J1=15.0Hz,J2=1.6Hz,1H),5.25(dd,J1=8.0Hz,J2=4.7Hz,1H),3.80–3.76(m,1H),3.66–3.62(m,1H),2.60–2.53(m,1H),2.44–2.39(m,1H),2.36(s,3H),2.23–2.17(m,1H),2.05–1.97(m,1H),1.84(dd,J1=6.9Hz,J2=1.4Hz,3H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,165.4,162.9,151.8,150.2,148.6,147.2,142.4,141.6,138.4,133.7,129.7,127.5,122.8,121.1,119.2,115.1,51.1,47.5,30.7,25.5,21.5,18.3。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例14:(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-
(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基-吡 啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(267mg,2.64mmol)。5min后,加入2-氰基乙酸(33.6mg,0.40mmol)和HATU(250mg,0.66mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(80mg,38%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.38(s,1H),8.14(s,1H),8.06(d,J=4.9Hz,1H),7.81(d,J=7.5Hz,2H),7.62(d,J=7.6Hz,2H),6.99(s,1H),6.84(d,J=5.0Hz,1H),6.74(s,1H),6.29(s,2H),5.24–5.19(m,1H),3.67–3.65(m,1H),3.49–3.41(m,3H),2.44–2.42(m,1H),2.33(s,3H),2.30–2.27(m,1H),2.19–2.17(m,1H),1.99–1.97(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.0,162.9,161.3,151.8,150.14,148.5,147.3,141.1,137.9,133.7,129.4,127.5,121.2,120.3,115.2,114.2,52.3,48.0,30.9,26.3,25.2,21.5。MS(ESI,m/z):473.1[M+H]+。
步骤B:制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4- (4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下将环丙烷甲醛(7.7mg,0.11mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入吡咯烷(45μL,0.55mmol),然后加入TMS-Cl(70μL,0.55mmol)。除去冰浴,并将反应混合物搅拌10min,然后加入步骤A的产物(50mg,0.11mmol)。将反应溶液搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=27:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(31mg,54%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.01(s,1H),8.22(s,1H),8.12(d,J=5.0Hz,1H),7.93(d,J=8.3Hz,2H),7.73(d,J=8.2Hz,2H),6.89(d,J=4.9Hz,1H),6.79(d,J=11.3Hz,1H),6.58(s,2H),6.38(s,1H),6.13(s,1H),5.32–5.30(m,1H),4.06–4.02(m,1H),3.94–3.90(m,1H),2.50–2.44(m,2H),2.39(s,3H),2.32–2.28(m,1H),2.11–2.05(m,1H),2.04–1.99(m,1H)1.26–1.22(m,2H),0.89–0.87(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.8,165.6,162.9,161.4,151.7,150.2,147.9,147.5,141.5,138.2,134.1,129.8,127.7,121.3,118.9,115.5,115.0,107.4,53.0,49.5,30.7,26.1,21.6,15.8,11.1,11.1。MS(ESI,m/z):525.2[M+H]+。
实施例15:(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4-甲基戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-
(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4-甲基戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-
((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下将异丁醛(7.9mg,0.11mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入吡咯烷(45μL,0.55mmol),然后加入TMS-Cl(70μL,0.55mmol)。移除冰浴,并将反应混合物搅拌10min,然后加入实施例14中步骤A的产物(50mg,0.11mmol)。将反应溶液搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=27:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4-甲基戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(28mg,48%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.04(s,1H),8.25(s,1H),8.13(d,J=4.8Hz,1H),7.96(d,J=7.9Hz,2H),7.75(d,J=7.9Hz,2H),7.12(d,J=10.4Hz,1H),6.91(d,J=4.6Hz,1H),6.60(s,2H),6.32(s,1H),5.96(s,1H),5.34–5.31(m,1H),4.02–3.98(m,1H),3.87–3.83(m,1H),3.00–2.94(m,1H),2.54–2.43(m,2H),2.41(s,3H),2.35–2.31(m,1H),2.05–1.99(m,1H),1.12(t,J=7.0Hz,6H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,165.5,162.8,161.4,151.6,150.6,147.7,147.2,141.5,138.2,134.1,129.9,127.8,121.4,118.9,115.1,114.2,109.5,52.9,49.6,31.6,30.8,26.1,21.7,21.6,21.5。MS(ESI,m/z):527.2[M+H]+。
实施例16:(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-
(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-
烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(267mg,2.64mmol)。5min后,加入(E)-2-戊烯酸(40.1mg,0.40mmol)和HATU(250mg,0.66mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(95mg,44%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.24(s,1H),8.17(s,1H),8.08(d,J=5.0Hz,1H),7.85(d,J=8.2Hz,2H),7.71(d,J=8.2Hz,2H),7.07(s,1H),6.91–6.85(m,2H),6.76(s,2H),6.47(s,1H),6.06(d,J=15.2Hz,1H),5.24(dd,J1=7.9Hz,J2=4.8Hz,1H),3.81–3.77(m,1H),3.67–3.63(m,1H),2.60–2.53(m,1H),2.44–2.39(m,1H),2.35(s,3H),2.23–2.16(m,3H),2.05–1.99(m,1H)1.02(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,165.6,162.9,151.8,150.1,148.7,148.6,147.3,141.7,138.4,133.7,129.7,127.4,121.1,120.4,119.2,115.1,51.2,47.5,30.7,25.6,25.5,21.5,12.6。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例17:(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔
酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基
吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(267mg,2.64mmol)。5min后,加入丙炔酸(28.2mg,0.40mmol)和HATU(250mg,0.66mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到黄色固体(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(112mg,55%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.30(s,1H),8.18(s,1H),8.09(d,J=5.0Hz,1H),7.88(d,J=8.2Hz,2H),7.68(d,J=8.1Hz,2H),6.86(d,J=5.0Hz,1H),6.64(s,1H),6.46(s,2H),6.33(s,1H),5.24–5.22(m,1H),3.89–3.83(m,2H),3.07(s,1H),2.47–2.39(m,2H),2.37(s,3H),2.33–2.28(m,1H),2.01–1.96(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.8,163.0,152.0,151.8,150.1,147.9,147.4,141.3,138.1,133.9,129.6,127.7,121.2,119.7,115.1,78.8,76.4,51.2,49.3,31.3,24.9,21.6。MS(ESI,m/z):458.1[M+H]+。
实施例18:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例10中步骤E的产物(180mg,0.44mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(267mg,2.64mmol)。5min后,加入2-丁炔酸(33.6mg,0.40mmol)和HATU(250mg,0.66mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(102mg,49%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.79(s,1H),8.24(s,1H),8.15(d,J=3.7Hz,1H),7.95(d,J=7.6Hz,2H),7.77(d,J=7.5Hz,2H),6.91(d,J=4.1Hz,1H),6.66(s,2H),6.48(s,1H),5.70(s,1H),5.27–5.25(m,1H),3.86(t,J=6.4Hz,2H),2.56–2.46(m,2H),2.40(s,3H),2.34–2.29(m,1H),2.04–1.99(m,4H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.5,162.7,153.5,151.7,150.3,147.8,147.6,141.5,138.4,134.1,129.9,127.6,121.3,119.1,114.9,89.2,74.1,50.7,49.1,31.2,25.0,21.6,4.1。MS(ESI,m/z):472.2[M+H]+。
实施例19:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(30g,70mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL),加入HATU(32g,84mmol)、二异丙基乙胺(60mL,350mmol)和5-甲基吡啶-2-胺(11.3g,105mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(28g,77%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.98(m,1H),8.80(s,1H),8.28(d,J=8.5Hz,1H),8.15(s,1H),7.97(d,J=8.3Hz,2H),7.83(d,J=8.4Hz,2H),7.59–7.56(m,1H),5.34–5.31(m,1H),4.25(q,J=7.0Hz,2H),3.54–3.35(m,2H),2.76–2.63(m,2H),2.35(s,3H),2.22–2.18(m,1H),1.99–1.84(m,1H),1.48(s,7H),1.25–1.20(m,5H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,将步骤A的产物(2.6g,5.1mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(25mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(6.1mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.1mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并在真空中浓缩至干。残余物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机部分合并后,经无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到所需产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(1.7g,62%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.74(s,1H),8.29(d,J=8.5Hz,1H),8.08(s,1H),7.91(d,J=8.3Hz,2H),7.79(d,J=8.4Hz,2H),7.57(dd,J1=8.5Hz,J2=2.0Hz,1H),6.66(s,2H),5.20–5.17(m,1H),4.26(q,J=7.0Hz,2H),3.60–3.43(m,2H),2.46–2.34(m,2H),2.30(s,3H),2.25–2.17(m,1H),1.95–1.90(m,1H),1.41(s,7H),1.26–1.20(m,5H)。MS(ESI,m/z):535.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(1.38g,2.6mmol)溶于甲醇(15mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,14mL),然后在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.18g,90%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(1.01g,2.0mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(15mL),搅拌并加入HATU(1.1g,2.9mmol)、二异丙基乙胺(1mL,5.9mmol)和NH4Cl(1.1g,20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.76g,75%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.71(s,1H),8.26–8.25(m,1H),8.13(s,1H),7.97–7.92(m,2H),7.82–7.72(m,2H),7.62–7.60(m,1H),6.85(s,1H),6.65(s,2H),5.52(s,1H),5.17–5.09(m,1H),3.57–3.46(m,2H),2.47–2.41(m,2H),2.33(s,3H),2.26–2.20(m,1H),1.98–1.94(m,1H),1.43(s,8H),1.29(s,1H)。MS(ESI,m/z):506.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯
烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(197mg,0.39mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.5mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):406.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(275mg,2.13mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(28.9mg,0.32mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基-吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(70mg,44%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:9.22(s,1H),8.19(d,J=8.4Hz,1H),8.04(d,J=1.6Hz,1H),7.82(d,J=8.3Hz,2H),7.66(d,J=8.3Hz,2H),7.51(dd,J1=8.5Hz,J2=2.0Hz,1H),6.95(s,1H),6.70(s,2H),6.52(s,1H),6.42(dd,J1=16.7Hz,J2=10.3Hz,1H),6.29(dd,J1=16.7Hz,J2=1.7Hz,1H),5.67(dd,J1=10.3Hz,J2=1.7Hz,1H),5.29–5.27(m,1H),3.83–3.79(m,1H),3.68–3.64(m,1H),2.56–2.50(m,1H),2.42–2.37(m,1H),2.25–2.19(m,4H),2.05–1.98(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.7,165.0,162.9,149.6,148.5,147.7,141.5,139.0,138.1,133.7,129.6,129.3,128.6,128.5,127.4,119.4,114.1,51.4,47.6,30.8,25.5,17.9。MS(ESI,m/z):460.2[M+H]+。
实施例20:(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(275mg,2.13mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(33.4mg,0.32mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(102mg,61%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.28(s,1H),8.19(d,J=8.4Hz,1H),8.03(s,1H),7.83(d,J=8.2Hz,2H),7.64(d,J=8.2Hz,2H),7.51(dd,J1=8.4Hz,J2=1.9Hz,1H),6.87(s,1H),6.67(s,2H),6.53(s,1H),5.27(s,1H),5.25–5.23(m,1H),5.20(s,1H),3.75–3.67(m,2H),2.52–2.45(m,1H),2.31–2.25(m,5H),1.92–1.85(m,4H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:171.1,165.7,162.9,149.6,148.6,147.6,141.5,140.6,139.1,138.1,133.7,129.5,129.3,127.5,119.5,118.0,114.1,51.2,50.0,30.9,25.8,19.7,17.9。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例21:(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲
基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(275mg,2.13mmol)。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(37.9mg,0.32mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(98mg,57%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.24(s,1H),8.19(d,J=8.5Hz,1H),8.03(s,1H),7.80(d,J=8.3Hz,2H),7.65(d,J=8.3Hz,2H),7.50(dd,J1=8.6Hz,J2=2.1Hz,1H),7.11(s,1H),6.73(s,2H),6.51(s,1H),5.75(s,1H),5.22(dd,J1=8.0Hz,J2=5.2Hz,1H),3.72–3.68(m,1H),3.58–3.54(m,1H),2.48–2.42(m,1H),2.41–2.35(m,1H),2.24–2.17(m,4H),1.99–1.94(m,4H),1.80(s,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.9,165.8,162.9,150.9,149.6,149.0,147.7,141.6,139.0,138.2,133.6,129.6,129.2,127.3,119.4,117.6,114.1,50.8,47.9,30.8,27.1,25.5,20.3,17.9。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例22:(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基-吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(275mg,2.13mmol)。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(33.4mg,0.32mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(78mg,47%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.35(s,1H),8.18(d,J=8.5Hz,1H),8.01(d,J=1.9Hz,1H),7.78(d,J=8.4Hz,2H),7.63(d,J=8.3Hz,2H),7.48(dd,J1=8.5Hz,J2=2.0Hz,1H),7.20(s,1H),6.83–6.77(m,1H),6.74–6.59(m,3H),6.07(dd,J1=15.1Hz,J2=1.7Hz,1H),5.20(dd,J1=8.0Hz,J2=4.9Hz,1H),3.77–3.73(m,1H),3.62–3.58(m,1H),2.53–2.46(m,1H),2.37–2.32(m,1H),2.22(s,3H),2.19–2.13(m,1H),2.00–1.94(m,1H),1.80(dd,J1=6.9Hz,J2=1.5Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.8,165.4,162.9,149.6,148.8,147.6,142.4,141.5,138.9,138.1,133.5,129.5,129.2,127.3,122.7,119.5,114.1,51.1,47.4,30.7,25.4,18.2,17.8。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例23:(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-
(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡 啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(212mg,2.10mmol)。5min后,加入2-氰基乙酸(27.2mg,0.32mmol)和HATU(200mg,0.52mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(95mg,57%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.34(s,1H),8.16(d,J=8.2Hz,1H),8.02(s,1H),7.78(d,J=7.7Hz,2H),7.59(d,J=7.7Hz,2H),7.49(d,J=8.2Hz,1H),7.02(s,1H),6.74(s,1H),6.27(s,2H),5.24–5.15(m,1H),3.73–3.63(m,1H),3.54–3.45(m,3H),2.69–2.56(m,1H),2.40–2.39(m,1H),2.23(s,3H),2.18–2.16(m,1H),1.97–1.95(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,162.9,161.4,149.6,148.6,147.7,141.0,139.1,137.8,133.7,129.4,129.3,127.5,120.4,114.3,114.2,52.4,48.1,30.9,26.3,25.2,17.9。MS(ESI,m/z):473.1[M+H]+。
步骤B:制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4- (4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下将环丙烷甲醛(7.7mg,0.11mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入吡咯烷(45μL,0.55mmol),然后加入TMS-Cl(70μL,0.55mmol)。除去冰浴,并将反应混合物搅拌10min,接着加入步骤A的产物(50mg,0.11mmol)。将反应溶液搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=27:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(40mg,69%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.09(s,1H),8.25(d,J=8.4Hz,1H),8.07(s,1H),7.90(d,J=8.2Hz,2H),7.70(d,J=8.1Hz,2H),7.55(d,J=8.5Hz,1H),6.78(d,J=11.3Hz,1H),6.56(s,2H),6.46(s,1H),6.28(s,1H),5.31–5.29(m,1H),4.05–4.01(m,1H),3.93–3.90(m,1H),2.49–2.43(m,2H),2.31–2.25(m,4H),2.09–2.00(m,2H),1.24–1.23(m,2H),0.88–0.86(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.8,165.6,162.9,161.4,149.6,148.0,147.7,141.5,139.2,138.0,134.1,129.7,129.5,127.7,119.0,115.5,114.1,107.4,53.0,49.5,30.7,26.1,18.0,15.8,11.1,11.1。MS(ESI,m/z):525.2[M+H]+。
实施例24:(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4,4-二甲基戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-
基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4,4-二甲基戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-
(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下将新戊醛(9.5mg,0.11mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入吡咯烷(45μL,0.55mmol),然后加入TMS-Cl(70μL,0.55mmol)。除去冰浴,并将反应混合物搅拌10min,接着加入实施例23中步骤A的产物(50mg,0.11mmol)。将反应溶液搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=27:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4,4-二甲基戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(19mg,31%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.75(s,1H),8.29(d,J=8.5Hz,1H),8.13–8.12(m,1H),7.98(d,J=8.4Hz,2H),7.77(d,J=8.4Hz,2H),7.60–7.58(m,1H),7.12(s,1H),6.62(s,2H),6.14(s,1H),5.59(s,1H),5.33(t,J=7.4Hz,1H),4.00–3.93(m,1H),3.83–3.78(m,1H),2.58–2.36(m,3H),2.33(s,3H),2.06–1.99(m,1H),1.29(s,9H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:168.6,165.2,162.7,149.4,147.8,147.7,141.6,139.3,138.2,134.3,129.9,129.7,127.9,127.8,118.8,114.6,114.0,108.5,52.8,49.9,35.4,30.8,29.1,26.1,18.0。MS(ESI,m/z):541.2[M+H]+。
实施例25:(S,E)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-
(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-
烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(212mg,2.10mmol)。5min后,加入(E)-戊-2-烯酸(32.0mg,0.32mmol)和HATU(200mg,0.52mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(88mg,51%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.23(s,1H),8.21(d,J=8.5Hz,1H),8.04(s,1H),7.84(d,J=8.3Hz,2H),7.68(d,J=8.3Hz,2H),7.52(dd,J1=8.5Hz,J2=1.9Hz,1H),7.04(s,1H),6.88(dt,J1=15.1Hz,J2=6.5Hz,1H),6.75(s,2H),6.46(s,1H),6.06(dt,J1=15.1Hz,J2=1.6Hz,1H),5.24(dd,J1=8.0Hz,J2=4.9Hz,1H),3.81–3.77(m,1H),3.66–3.62(m,1H),2.58–2.51(m,1H),2.43–2.37(m,1H),2.25(s,3H),2.23–2.16(m,3H),2.05–1.98(m,1H),1.01(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.8,165.6,162.9,149.6,148.7,148.6,147.6,141.6,139.1,138.2,133.7,129.6,129.3,127.4,120.4,119.2,114.1,51.2,47.5,30.8,25.6,25.5,17.9,12.6。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例26:(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔
酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基
吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(212mg,2.10mmol)。5min后,加入丙炔酸(22.4mg,0.32mmol)和HATU(200mg,0.52mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到黄色固体(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(79mg,49%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.55(s,1H),8.28(d,J=8.5Hz,1H),8.14(d,J=1.9Hz,1H),7.97(d,J=8.3Hz,2H),7.78(d,J=8.3Hz,2H),7.59(dd,J1=8.4Hz,J2=2.0Hz,1H),6.65(s,2H),6.21(s,1H),5.46(s,1H),5.32–5.30(m,1H),3.91(t,J=6.8Hz,2H),3.09(s,1H),2.60–2.54(m,1H),2.53–2.47(m,1H),2.38–2.33(m,4H),2.07–2.02(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.1,162.6,162.1,149.4,148.0,147.4,141.5,139.2,138.3,134.3,130.0,129.7,127.6,118.9,113.8,78.6,76.5,50.9,49.3,31.2,25.0,18.0。MS(ESI,m/z):458.1[M+H]+。
实施例27:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例19中步骤E的产物(145mg,0.35mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(212mg,2.10mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(26.8mg,0.32mmol)和HATU(200mg,0.52mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(75mg,45%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.54(s,1H),8.29(d,J=8.5Hz,1H),8.14(s,1H),7.96(d,J=8.5Hz,2H),7.79(d,J=8.5Hz,2H),7.59(dd,J1=8.6Hz,J2=1.9Hz,1H),6.72(s,2H),6.37(s,1H),5.42(s,1H),5.27(dd,J1=8.0Hz,J2=5.4Hz,1H),3.88–3.86(m,2H),2.59–2.48(m,2H),2.35–2.31(m,4H),2.04–2.00(m,4H);13C NMR(DMSO,150MHz)δ:165.5,162.2,151.9,150.1,148.3,147.7,138.5,138.0,136.3,132.2,128.8,127.7,127.2,124.7,114.4,88.7,74.3,50.9,48.5,31.1,23.8,17.4,3.3。MS(ESI,m/z):472.2[M+H]+。
实施例28:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(21.0g,49mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL),搅拌并加入HATU(22.5g,59mmol)、二异丙基乙胺(43mL,246mmol)和4-甲氧基吡啶-2-胺(9.1g,73.5mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(17g,65%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:11.14(s,1H),8.97(s,1H),8.14–8.13(m,2H),8.05(d,J=1.6Hz,1H),8.01–8.00(m,1H),7.93(d,J=7.8Hz,2H),6.58(dd,J1=5.6Hz,J2=2.0Hz,1H),4.97–4.93(m,1H),4.33–4.26(m,2H),3.89(s,3H),3.53–3.42(m,2H),2.95–2.89(m,1H),2.34–2.07(m,2H),1.99–1.91(m,1H),1.49(s,9H),1.29(t,J=6.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):536.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,将步骤A的产物(14g,26mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(50mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(31mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(6g,26mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,用乙酸乙酯洗涤三次(3×500mL)。有机部分合并后,经无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),给出所需产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基-吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(9g,63%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.75(s,1H),8.07–8.06(m,2H),7.91(d,J=7.8Hz,2H),7.80(d,J=7.8Hz,2H),6.66(s,2H),6.62(d,J=5.5Hz,1H),5.19–5.17(m,1H),4.28–4.25(m,2H),3.91(s,3H),3.59–3.55(m,1H),3.49–3.45(m,1H),2.42–2.37(m,1H),2.27–2.22(m,1H),1.95–1.93(m,2H),1.41(s,7H),1.26–1.21(m,5H)。MS(ESI,m/z):551.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(3.7g,6.7mmol)溶于甲醇(15mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,34mL),然后在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(3.2g,90%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(3.1g,6.0mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL),搅拌并加入HATU(3.5g,9.1mmol)、二异丙基乙胺(3.2mL,18.1mmol)和NH4Cl(3.3g,60mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.5g,80%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.86(s,1H),8.08(s,1H),7.93–7.90(m,3H),7.81–7.73(m,2H),7.07(s,1H),6.65–6.61(m,3H),5.67(s,1H),5.16–5.07(m,1H),3.92(s,3H),3.56–3.53(m,1H),3.47–3.45(m,1H),2.46–2.39(m,2H),2.26–2.20(m,1H),1.97–1.93(m,1H),1.43(s,7H),1.29(s,2H)。MS(ESI,m/z):522.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡
咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(180mg,0.34mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.1mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):422.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(267mg,2.07mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(27.6mg,0.30mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出灰白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基-吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(90mg,56%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:9.09(s,1H),8.06(d,J=5.7Hz,1H),8.04(d,J=1.9Hz,1H),7.94(d,J=8.3Hz,2H),7.78(d,J=8.3Hz,2H),6.78(s,2H),6.69(s,1H),6.62(dd,J1=5.8Hz,J2=2.3Hz,1H),6.46(dd,J1=16.8Hz,J2=10.3Hz,1H),6.32(dd,J1=16.8Hz,J2=1.7Hz,1H),5.97(s,1H),5.71(dd,J1=10.3Hz,J2=1.7Hz,1H),5.32(dd,J1=8.0Hz,J2=5.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.87–3.83(m,1H),3.72–3.68(m,1H),2.64–2.57(m,1H),2.50–2.45(m,1H),2.30–2.24(m,1H),2.09–2.05(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.8,165.8,165.1,162.7,153.4,148.3,148.3,141.6,138.6,133.8,129.9,128.7,128.6,127.6,119.0,108.2,99.1,55.6,51.3,47.7,30.8,25.6。MS(ESI,m/z):476.2[M+H]+。
实施例29:(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基-吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例28中步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(267mg,2.07mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(31.3mg,0.30mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(88mg,53%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.48(s,1H),8.02–8.01(m,2H),7.90(d,J=8.2Hz,2H),7.70(d,J=8.2Hz,2H),6.79(s,1H),6.70(s,2H),6.59(dd,J1=5.9Hz,J2=2.2Hz,1H),6.40(s,1H),5.28(s,1H),5.26–5.23(m,1H),5.20(s,1H),3.88(s,3H),3.75–3.69(m,2H),2.55–2.49(m,1H),2.33–2.26(m,2H),1.91–1.86(m,4H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:171.2,167.9,166.0,162.9,153.4,148.5,147.9,141.6,140.7,138.5,133.6,129.7,127.6,119.3,118.0,108.0,99.2,55.6,51.2,50.0,30.9,25.8,19.8。MS(ESI,m/z):490.2[M+H]+。
实施例30:(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-
(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基
丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例28中步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(267mg,2.07mmol)。5min后,在0℃下3-甲基丁-2-烯酰氯(35.5mg,0.30mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出灰白色固体(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(78mg,46%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.34(s,1H),8.05–8.03(m,2H),7.91(d,J=8.2Hz,2H),7.75(d,J=8.2Hz,2H),6.96(s,1H),6.79(s,2H),6.61(dd,J1=5.8Hz,J2=2.2Hz,1H),6.12(s,1H),5.77(s,1H),5.25(dd,J1=7.9Hz,J2=5.2Hz,1H),3.90(s,3H),3.74–3.70(m,1H),3.61–3.57(m,1H),2.53–2.48(m,1H),2.47–2.42(m,1H),2.26–2.21(m,1H),2.03–1.98(m,4H),1.84(s,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.9,167.0,166.0,162.8,153.3,151.0,148.9,147.9,141.7,138.6,133.5,129.8,127.5,119.2,117.6,108.1,99.1,55.6,50.8,48.0,30.8,27.2,25.6,20.4。MS(ESI,m/z):504.2[M+H]+。
实施例31:(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基-
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例28中步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(267mg,2.07mmol)。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(31.3mg,0.30mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(102mg,61%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.33(s,1H),8.01(d,J=5.8Hz,1H),7.99(d,J=2.2Hz,1H),7.87(d,J=8.3Hz,2H),7.71(d,J=8.3Hz,2H),6.99(s,1H),6.88–6.82(m,1H),6.74(s,2H),6.58(dd,J1=5.8Hz,J2=2.3Hz,1H),6.44(s,1H),6.10(dd,J1=15.1Hz,J2=1.7Hz,1H),5.25–5.23(m,1H),3.87(s,3H),3.81–3.77(m,1H),3.66–3.62(m,1H),2.58–2.53(m,1H),2.43–2.38(m,1H),2.23–2.17(m,1H),2.05–2.00(m,1H),1.84(dd,J1=6.9Hz,J2=1.5Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.6,166.0,165.5,162.9,153.6,148.6,148.4,142.5,141.6,138.4,133.6,129.7,127.5,122.8,119.3,107.9,99.2,55.5,51.2,47.5,30.7,25.5,18.3。MS(ESI,m/z):490.2[M+H]+。
实施例32:(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-
(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-
2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例28中步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(210mg,2.07mmol)。5min后,加入(E)-戊-2-烯酸(31.0mg,0.30mmol)和HATU(194mg,0.51mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(110mg,64%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.37(s,1H),8.02(d,J=5.8Hz,1H),7.98(s,1H),7.88(d,J=7.9Hz,2H),7.73(d,J=7.9Hz,2H),7.07(s,1H),6.92–6.88(m,1H),6.76(s,2H),6.60(dd,J1=5.8Hz,J2=2.3Hz,1H),6.29(s,1H),6.08(d,J=15.1Hz,1H),5.26–5.24(m,1H),3.88(s,3H),3.82–3.79(m,1H),3.69–3.65(m,1H),2.61–2.54(m,1H),2.46–2.41(m,1H),2.26–2.18(m,3H),2.07–2.01(m,1H),1.03(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.8,166.1,165.7,162.9,153.4,148.8,148.7,148.0,141.8,138.6,133.5,129.8,127.5,120.4,119.2,108.0,99.2,55.6,51.2,47.6,30.8,25.7,25.5,12.6。MS(ESI,m/z):504.2[M+H]+。
实施例33:(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙
炔酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰
基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例28中步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(210mg,2.07mmol)。5min后,加入丙炔酸(21.0mg,0.30mmol)和HATU(194mg,0.51mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到黄色固体(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(80mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.84(s,1H),8.10(d,J=5.5Hz,1H),8.06–8.03(m,1H),7.98(d,J=8.3Hz,2H),7.79(d,J=8.3Hz,2H),6.65–6.63(m,3H),6.29(s,1H),5.59(s,1H),5.31–5.29(m,1H),3.92–3.90(m,5H),3.10(s,1H),2.59–2.48(m,2H),2.38–2.32(m,1H),2.07–2.02(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.9,165.5,162.6,153.3,152.2,148.4,147.5,141.5,138.4,134.0,130.0,127.7,119.0,108.2,99.0,78.6,76.4,55.6,50.9,49.3,31.2,25.0。MS(ESI,m/z):474.1[M+H]+。
实施例34:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基-吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例28中步骤E的产物(145mg,0.34mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(210mg,2.07mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(26.0mg,0.30mmol)和HATU(194mg,0.51mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(100mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.70(s,1H),8.10(d,J=5.8Hz,1H),8.04(d,J=2.1Hz,1H),7.96(d,J=8.3Hz,2H),7.80(d,J=8.3Hz,2H),6.70(s,2H),6.64(dd,J1=5.8Hz,J2=2.3Hz,1H),6.47(s,1H),5.53(s,1H),5.27–5.25(m,1H),3.92(s,3H),3.88–3.85(m,2H),2.59–2.54(m,1H),2.52–2.47(m,1H),2.35–2.30(m,1H),2.04–1.99(m,4H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:167.8,165.5,162.5,153.5,153.3,148.6,147.7,141.6,138.6,133.9,130.0,127.6,119.0,108.2,98.9,89.2,74.1,55.6,50.6,49.1,31.2,25.0,4.1。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例35:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(28g,65mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL),搅拌并加入HATU(30g,78mmol)、二异丙基乙胺(60mL,327mmol)和4-乙基吡啶-2-胺(12g,100mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(29g,84%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.22–11.10(m,1H),8.71(s,1H),8.29(s,1H),8.17–8.14(m,3H),7.96–7.94(m,2H),6.92(d,J=5.0Hz,1H),5.02–4.91(m,1H),4.37–4.29(m,2H),3.53–3.42(m,2H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.27–2.09(m,2H),2.00–1.93(m,2H),1.51–1.48(m,9H),1.34–1.26(m,6H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,将步骤A的产物(12g,22mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(50mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(26mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(5.2g,22mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),给出所需产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(8.4g,70%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.60(s,1H),8.29(s,1H),8.19(d,J=5.1Hz,1H),7.92(d,J=8.3Hz,2H),7.81(d,J=8.5Hz,2H),6.93(dd,J1=5.1Hz,J2=1.3Hz,1H),6.67(s,2H),5.20–5.18(m,1H),4.28(q,J=7.2Hz,2H),3.61–3.44(m,2H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.45–2.35(m,2H),2.29–2.20(m,1H),1.98–1.91(m,1H),1.42(s,7H),1.31–1.27(m,5H),1.25–1.21(m,3H)。MS(ESI,m/z):549.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(2.0g,3.6mmol)溶于甲醇(15mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,18mL),然后在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.8g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(3.1g,6.0mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL),加入HATU(3.5g,9.1mmol)、二异丙基乙胺(3.2mL,18.1mmol)和NH4Cl(3.3g,60mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2.4g,78%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.96(s,1H),8.23(s,1H),8.15(d,J=5.1Hz,1H),7.90(d,J=8.0Hz,2H),7.78–7.66(m,2H),6.98(s,1H),6.91–6.90(m,1H),6.61(s,2H),6.08(s,1H),5.09–5.07(m,1H),3.57–3.43(m,2H),2.68(q,J=7.6Hz,2H),2.46–2.38(m,2H),2.26–2.17(m,1H),1.96–1.93(m,1H),1.42(s,7H),1.29–1.25(m,5H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯
烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(200mg,0.38mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.3mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):420.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(160mg,0.38mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(295mg,2.28mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(30.9mg,0.34mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(108mg,60%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:8.81(s,1H),8.26(s,1H),8.17(d,J=5.0Hz,1H),7.94(d,J=8.4Hz,2H),7.78(d,J=8.4Hz,2H),6.92(d,J=5.0Hz,1H),6.80(s,2H),6.62(s,1H),6.46(dd,J1=16.8Hz,J2=10.2Hz,1H),6.32(dd,J1=16.8Hz,J2=2.0Hz,1H),5.84(s,1H),5.71(dd,J1=10.2Hz,J2=2.0Hz,1H),5.33(dd,J1=8.0Hz,J2=5.0Hz,1H),3.88–3.82(m,1H),3.73–3.67(m,1H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.64–2.56(m,1H),2.53–2.45(m,1H),2.32–2.23(m,1H),2.12–2.02(m,1H),1.28(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.5,165.1,162.7,156.2,151.8,148.3,147.7,141.7,138.5,134.0,129.9,128.6,128.6,127.5,120.1,118.9,113.8,51.3,47.7,30.8,28.8,25.6,14.6。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例36:(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-甲基
丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-甲基丙烯
酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例35中步骤E的产物(160mg,0.38mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(295mg,2.28mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(35.5mg,0.34mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-甲基丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(120mg,65%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.96(s,1H),8.26(s,1H),8.16(d,J=4.9Hz,1H),7.95(d,J=8.3Hz,2H),7.75(d,J=8.2Hz,2H),6.92(d,J=4.7Hz,1H),6.74(s,2H),6.56(s,1H),5.95(s,1H),5.30(s,1H),5.29–5.27(m,1H),5.22(s,1H),3.78–3.69(m,2H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.60–2.53(m,1H),2.36–2.29(m,2H),1.95–1.90(m,4H),1.28(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:171.2,165.6,162.8,156.3,151.8,148.4,147.6,141.7,140.8,138.5,134.0,129.9,127.6,120.1,119.1,118.0,113.9,51.2,50.0,30.9,28.8,25.9,19.8,14.5。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例37:(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-
甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基
丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例35中步骤E的产物(160mg,0.38mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(295mg,2.28mmol)。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(40.3mg,0.34mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(110mg,58%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.06(s,1H),8.30(s,1H),8.21–8.13(m,1H),7.96(d,J=8.0Hz,2H),7.79(d,J=8.0Hz,2H),6.94–6.82(m,4H),5.87(s,1H),5.79(s,1H),5.28–5.26(m,1H),3.75–3.71(m,1H),3.62–3.58(m,1H),2.70(q,J=7.5Hz,2H),2.56–2.45(m,2H),2.28–2.23(m,1H),2.05–1.99(m,4H),1.85(s,3H),1.28(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.0,165.6,162.7,156.7,151.7,150.9,148.8,147.0,141.7,138.7,133.7,130.0,127.6,120.0,119.1,117.7,114.0,50.8,48.0,30.9,28.9,27.2,25.6,20.4,14.5。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例38:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例35中步骤E的产物(160mg,0.38mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(230mg,2.28mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(29.0mg,0.34mmol)和HATU(217mg,0.57mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(120mg,65%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.09(s,1H),8.30(s,1H),8.16(d,J=5.2Hz,1H),7.99(d,J=8.4Hz,2H),7.79(d,J=8.4Hz,2H),6.95(d,J=5.2Hz,1H),6.71(s,2H),6.38(s,1H),5.68(s,1H),5.29–5.25(m,1H),3.88–3.85(m,2H),2.72(q,J=7.6Hz,2H),2.58–2.46(m,2H),2.37–2.30(m,1H),2.04–1.98(m,4H),1.29(t,J=7.6Hz,3H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:165.5,162.7,156.2,153.5,151.8,147.8,147.7,141.6,138.4,134.1,129.9,127.6,120.1,119.0,113.8,89.2,74.1,50.7,49.1,31.2,28.8,25.0,14.6,4.1。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
实施例39:(S)-1-氨基-2-(1-氰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-氰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例35中步骤E的产物(160mg,0.38mmol)溶于干燥乙腈(5mL),加入K2CO3(158mg,1.14mmol)。5min后,加入BrCN(40.2mg,0.38mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌6h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出黄色固体(S)-1-氨基-2-(1-氰基吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-乙基-吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(85mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.73(s,1H),8.27(s,1H),8.19(d,J=5.1Hz,1H),8.01(d,J=8.4Hz,2H),7.77(d,J=8.4Hz,2H),6.95(dd,J1=5.1Hz,J2=1.3Hz,1H),5.72(s,2H),5.67(s,2H),5.24–5.21(m,1H),3.71–3.66(m,1H),3.58–3.53(m,1H),2.72(q,J=7.6Hz,2H),2.58–2.51(m,1H),2.33–2.26(m,2H),2.08–2.01(m,1H),1.30(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.2,162.3,156.3,151.7,148.4,147.8,141.0,137.6,134.7,129.7,128.0,121.2,120.3,117.1,113.8,56.0,51.3,30.5,28.8,25.5,14.6。MS(ESI,m/z):445.2[M+H]+。
实施例40:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(15g,37mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(150mL),搅拌并加入HATU(17g,45mmol)、二异丙基乙胺(33mL,186mmol)和4-氟吡啶-2-胺(6.3g,56mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(10g,52%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.12(s,1H),8.92(s,1H),8.24–8.15(m,4H),7.94(d,J=8.3Hz,2H),6.82–6.78(m,1H),5.02–4.91(m,1H),4.37–4.29(m,2H),3.53–3.43(m,2H),2.22–2.08(m,2H),2.00–1.95(m,2H),1.51(s,9H),1.34–1.29(m,3H)。MS(ESI,m/z):524.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,将步骤A的产物(5g,9.5mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(30mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(11mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(2.2g,9.5mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),给出所需产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(3.1g,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.80(s,1H),8.26–8.20(m,2H),7.92(d,J=8.3Hz,2H),7.82(d,J=8.4Hz,2H),6.84–6.80(m,1H),6.66(s,2H),5.20–5.17(m,1H),4.28(q,J=7.0Hz,2H),3.69–3.44(m,2H),2.44–2.20(m,3H),1.97–1.91(m,1H),1.41(s,7H),1.27–1.21(m,5H)。MS(ESI,m/z):539.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(2.0g,3.7mmol)溶于甲醇(15mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,18mL),然后在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.7g,90%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(1.7g,3.4mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL),搅拌并加入HATU(2.0g,5.1mmol)、二异丙基乙胺(1.8mL,10.3mmol)和NH4Cl(1.9g,34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.4g,80%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.98(s,1H),8.25(dd,J1=8.5Hz,J2=5.7Hz,1H),8.20(dd,J1=11.2Hz,J2=2.2Hz,1H),7.93(d,J=8.2Hz,2H),7.83(d,J=8.1Hz,2H),6.97(s,1H),6.84–6.80(m,1H),6.60(s,2H),5.75(s,1H),5.11–5.08(m,1H),3.59–3.45(m,2H),2.48–2.39(m,2H),2.26–2.19(m,1H),2.00–1.92(m,1H),1.43(s,7H),1.28(s,2H)。MS(ESI,m/z):510.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-
2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(193mg,0.38mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.3mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):410.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(155mg,0.38mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(295mg,2.28mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(30.9mg,0.34mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水,分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基-吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(123mg,70%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.02(s,1H),8.24(dd,J1=8.4Hz,J2=5.8Hz,1H),8.19(dd,J1=11.2Hz,J2=2.2Hz,1H),7.92(d,J=8.4Hz,2H),7.79(d,J=8.3Hz,2H),6.84–6.76(m,4H),6.46(dd,J1=16.8Hz,J2=10.2Hz,1H),6.33(dd,J1=16.8Hz,J2=1.9Hz,1H),5.88(s,1H),5.71(dd,J1=10.2Hz,J2=1.9Hz,1H),5.31(dd,J1=8.0Hz,J2=4.9Hz,1H),3.88–3.82(m,1H),3.73–3.68(m,1H),2.67–2.56(m,1H),2.52–2.45(m,1H),2.32–2.23(m,1H),2.12–2.03(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:170.1(d,J=258.2Hz),165.7,165.2,162.6,154.0(d,J=12.0Hz),150.0(d,J=9.0Hz),148.5,141.7,138.8,133.4,130.0,128.7,128.6,127.5,119.2,108.3(d,J=18.1Hz),102.3(d,J=24.0Hz),51.3,47.7,30.8,25.6。MS(ESI,m/z):464.1[M+H]+。
实施例41:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例40中步骤E的产物(155mg,0.38mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(230mg,2.28mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(29.0mg,0.34mmol)和HATU(217mg,0.57mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),给出白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(108mg,60%)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:11.06(s,1H),8.43(dd,J1=9.3Hz,J2=5.7Hz,1H),8.13(s,1H),8.09–8.01(m,3H),7.83(d,J=8.5Hz,2H),7.71(s,1H),7.14–7.09(m,1H),6.21(s,1.4H),6.05(s,0.6H),5.50–5.47(m,0.3H),5.25–5.22(m,0.7H),3.80–3.77(m,2H),2.31–2.24(m,2H),2.19–2.13(m,1H),2.02(s,2H),2.00–1.95(m,1H),1.88(s,1H),;13C NMR(DMSO-d6,150MHz)δ:168.9(d,J=254.5Hz),166.1,162.2,154.6,151.9,150.6,148.3,138.3,136.2,131.6,127.8,127.2,124.7,107.8,101.8,88.6,74.3,50.9,48.5,31.0,23.8,3.3。MS(ESI,m/z):476.1[M+H]+。
实施例42:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡 啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(15g,35mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(150mL),搅拌并加入HATU(16g,42mmol)、二异丙基乙胺(30mL,175mmol)和4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(8.5g,52mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟-甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(10g,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.10(s,1H),8.83(s,1H),8.73(s,1H),8.46(d,J=5.1Hz,1H),8.19(d,J=7.8Hz,2H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.29(d,J=5.0Hz,1H),4.99–4.98(m,1H),4.39–4.31(m,2H),3.53–3.43(m,2H),2.32–1.96(m,4H),1.51(s,9H),1.35–1.32(m,3H)。MS(ESI,m/z):574.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在-10℃下,将步骤A的产物(7.5g,13mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(50mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(16mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(3.1g,13mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),给出所需产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟-甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(4.9g,65%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.76(s,1H),8.73(s,1H),8.48(d,J=5.2Hz,1H),7.93(d,J=8.4Hz,2H),7.86–7.83(m,2H),7.30(dd,J1=5.2Hz,J2=0.9Hz,1H),6.67(s,2H),5.21–5.18(m,1H),4.31–4.26(m,2H),3.61–3.45(m,2H),2.45–2.35(m,2H),2.30–2.20(m,1H),1.98–1.92(m,1H),1.42(s,9H),1.26–1.22(m,3H)。MS(ESI,m/z):589.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(3.8g,6.4mmol)溶于甲醇(20mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,32mL),然后在室温下搅拌2h。蒸除部分反应混合物,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(3.4g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(1.9g,3.4mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL),加入HATU(2.0g,5.1mmol)、二异丙基乙胺(1.8mL,10.3mmol)和NH4Cl(1.9g,34mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.6g,83%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.03(s,1H),8.68(s,1H),8.47(d,J=5.1Hz,1H),7.91(d,J=8.2Hz,2H),7.82(d,J=8.2Hz,2H),7.28(d,J=5.1Hz,1H),7.13(s,1H),6.60(s,2H),5.78(s,1H),5.09–5.06(m,1H),3.58–3.45(m,2H),2.49–2.39(m,2H),2.28–2.19(m,1H),2.01–1.93(m,1H),1.43(s,8H),1.28(s,1H)。MS(ESI,m/z):560.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-2-(吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(200mg,0.36mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.1mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-2-(吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):460.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(165mg,0.36mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(280mg,2.2mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(30.9mg,0.34mmol)。然后将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基-吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(124mg,67%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.37(s,1H),8.65(s,1H),8.43(d,J=5.1Hz,1H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),7.72(d,J=8.4Hz,2H),7.25(d,J=5.1Hz,1H),7.12(s,1H),6.70(s,2H),6.44(dd,J1=16.8Hz,J2=10.2Hz,1H),6.32–6.25(m,2H),5.69(dd,J1=10.2Hz,J2=1.9Hz,1H),5.28(dd,J1=8.0Hz,J2=4.8Hz,1H),3.86–3.80(m,1H),3.72–3.66(m,1H),2.64–2.53(m,1H),2.49–2.41(m,1H),2.30–2.21(m,1H),2.11–2.03(m,1H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:166.0,165.2,162.7,152.8,149.0,148.7,141.7,140.6(q,J=33.7Hz),138.7,133.1,129.8,128.8,128.5,127.5,122.8(q,J=271.7Hz),119.6,115.5,110.6,51.4,47.7,30.8,25.6。MS(ESI,m/z):514.1[M+H]+。
实施例43:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟-甲
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例42中步骤E的产物(165mg,0.36mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(218mg,2.16mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(27.2mg,0.32mmol)和HATU(205mg,0.54mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(氨基甲酰基二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(123mg,65%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.79(s,1H),8.71(s,1H),8.51–8.47(m,1H),7.97(d,J=7.9Hz,2H),7.84(d,J=7.5Hz,2H),7.31–7.30(m,1H),6.66–6.61(m,3H),5.49(s,1H),5.26–5.24(m,1H),3.88–3.86(m,2H),2.59–2.49(m,2H),2.36–2.31(m,1H),2.06–2.00(m,4H);13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:166.4,162.1,153.4,151.9,149.9,148.3,138.4,138.1,136.1,131.5,127.9,127.1,124.8,124.3,115.1,109.8,88.6,74.3,50.9,48.4,31.0,23.7,3.3。MS(ESI,m/z):526.1[M+H]+。
实施例44:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例1中步骤F的产物(27g,63mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(200mL),搅拌并加入HATU(30g,78mmol)、二异丙基乙胺(55mL,315mmol)和4-异丙基吡啶-2-胺(13g,94mmol)。在80℃下搅拌反应混合物。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(24g,70%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:11.10(s,1H),8.76(s,1H),8.32(s,1H),8.17–8.14(m,3H),7.97–7.96(m,2H),6.95–6.94(m,1H),4.98–4.97(m,1H),4.36–4.29(m,2H),3.53–3.43(m,2H),2.98–2.92(m,1H),2.29–2.09(m,2H),1.99–1.92(m,2H),1.51(s,9H),1.33–1.29(m,9H)。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-异丙基
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在10℃下,将步骤A的产物(5.0g,9.1mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(30mL),搅拌并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(11mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(2.1g,9.1mmol),并将得到的混悬液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到所需产物(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-异丙基-吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(3.7g,72%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.89(s,1H),8.32(s,1H),8.13(d,J=5.2Hz,1H),7.93(d,J=8.3Hz,2H),7.79(d,J=8.5Hz,2H),6.92(dd,J1=5.2Hz,J2=1.4Hz,1H),6.64(s,2H),5.20–5.17(m,1H),4.28–4.22(m,2H),3.59–3.43(m,2H),2.97–2.91(m,1H),2.43–2.33(m,2H),2.24–2.20(m,1H),1.97–1.89(m,1H),1.40(s,7H),1.29–1.25(m,8H),1.20(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):563.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-异丙基
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤B的产物(1.3g,2.3mmol)溶于甲醇(10mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,12mL),然后在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.14g,93%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(0.6g,1.1mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),搅拌并加入HATU(0.66g,1.7mmol)、二异丙基乙胺(0.6mL,3.4mmol)和NH4Cl(0.6g,11mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.5g,85%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.00(s,1H),8.29(s,1H),8.16(d,J=5.2Hz,1H),7.93(d,J=8.2Hz,2H),7.79(d,J=8.1Hz,2H),6.94–6.88(m,2H),6.60(s,2H),6.04(s,1H),5.11–5.08(m,1H),3.58–3.43(m,2H),2.98–2.91(m,1H),2.47–2.38(m,2H),2.24–2.19(m,1H),1.96–1.93(m,1H),1.42(s,7H),1.29–1.25(m,8H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡
咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤D的产物(145mg,0.27mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(1.6mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):434.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基-吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤E的产物(117mg,0.27mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(210mg,1.63mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(22mg,0.24mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基-吡咯烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(83mg,63%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:9.13(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J=4.9Hz,1H),7.92(d,J=7.6Hz,2H),7.74(d,J=7.6Hz,2H),6.92(d,J=5.0Hz,1H),6.79–6.68(m,3H),6.44(dd,J1=16.7Hz,J2=10.4Hz,1H),6.31–6.26(m,2H),5.69(d,J=10.3Hz,1H),5.31–5.29(m,1H),3.85–3.81(m,1H),3.70–3.66(m,1H),2.95–2.91(m,1H),2.61–2.54(m,1H),2.47–2.42(m,1H),2.27–2.22(m,1H),2.07–2.01(m,1H),1.27(d,J=6.8Hz,6H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.7,165.1,162.9,160.8,152.0,148.4,147.6,141.6,138.4,133.9,129.8,128.6,128.6,127.6,119.1,118.5,112.7,51.3,47.6,34.1,30.8,25.5,23.2。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例45:(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基-吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1-(2,2,2-三氟乙酰氨基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将实施例10中步骤B的产物(500mg,0.94mmol)溶于二氯甲烷(5mL),在0-10℃下加入三乙胺(400μL,2.82mmol),并搅拌30min。然后向该反应混合物中逐滴加入三氟乙酸酐溶液(330μL,2.35mmol),并在室温下搅拌10h。反应完成后,将混合物用水(50mL)稀释,并将其用饱和NaHCO3(15mL)洗涤。水层用二氯甲烷(2×100mL)洗涤,并合并有机层,用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到黄色油状物(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(2,2,2-三氟乙酰氨基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(300mg,51%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.80(s,1H),8.22–8.10(m,2H),7.86–7.65(m,4H),6.88(d,J=4.4Hz,1H),4.75–4.68(m,1H),4.13–3.99(m,2H),3.70–3.61(m,1H),3.45–3.42(m,1H),2.38(s,3H),2.23–2.16(m,3H),1.88–1.84(m,1H),1.40(s,9H),1.13–1.11(m,3H)。MS(ESI,m/z):631.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰氨基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
将步骤A的产物(400mg,0.63mmol)溶于乙腈(10mL),在0-10℃下加入碳酸钾(265mg,1.91mmol),并搅拌30min。然后向反应混合物逐滴加入碘甲烷溶液(120μL,1.91mmol),升温度至80℃后,搅拌6h。反应完成后,将混合物用水(20mL)稀释,并在水和乙酸乙酯(3×50mL)之间萃取。有机层合并后,经无水Na2SO4干燥,减压蒸除溶剂。残余物通过色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=5:1),得到黄色油状物(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰氨基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(215mg,53%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.88(s,1H),8.29(s,1H),8.14–8.12(m,1H),8.00–7.94(m,3H),7.91–7.89(m,1H),6.92–6.91(m,1H),5.62–5.56(m,1H),4.31–4.22(m,2H),3.92–3.78(m,2H),3.68–3.67(m,2H),3.50(s,1H),2.38(s,3H),2.29–2.15(m,1H),1.91–1.82(m,1H),1.77–1.71(m,1H),1.66–1.60(m,1H),1.41(s,9H),1.15–1.13(m,3H)。MS(ESI,m/z):645.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-
甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯
在10-20℃下,向步骤B的产物(215mg,0.34mmol)的乙醇(5mL)溶液中加入乙醇钠(35mg,0.51mmol),并搅拌6h。反应完成后,将混合物用水(100mL)稀释,并在真空下浓缩。然后将其在水和乙酸乙酯(3×50mL)之间萃取。有机层合并后,经无水硫酸钠干燥,蒸除溶剂。残余物通过色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=2:1),得到白色固体(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸乙酯(180mg,97%)。MS(ESI,m/z):549.2[M+H]+。
步骤D:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-
甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤C的产物(180mg,0.33mmol)溶于甲醇(4mL),搅拌并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,1.7mL),然后在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,用水(10mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯萃取三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,得到(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(168mg,98%)。
步骤E:制备(S)-2-(5-氨基甲酰基-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯
将步骤D的产物(175mg,0.35mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),搅拌并加入HATU(200mg,0.52mmol)、二异丙基乙胺(190μL,1.05mmol)和NH4Cl(190mg,3.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(5-氨基甲酰基-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(128mg,71%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.79(s,1H),8.25(s,1H),8.14(d,J=5.1Hz,1H),7.99–7.91(m,3H),7.75–7.69(m,1H),7.40–7.33(m,1H),6.90–6.89(m,1H),5.80–5.72(m,1H),5.10–4.99(m,1H),3.60–3.44(m,2H),2.89(d,J=5.7Hz,2H),2.75(d,J=5.4Hz,1H),2.57–2.44(m,1H),2.40–2.36(m,4H),2.33–2.21(m,1H),2.02–1.93(m,1H),1.45(s,6H),1.28(s,3H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-
(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向步骤E的产物(128mg,0.25mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液加入三氟乙酸(1.5mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):420.2[M+H]+。
步骤G:制备(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-(甲基-氨基)-4-(4-((4-甲基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向步骤F的产物(105mg,0.25mmol)在干燥二氯甲烷(5mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(192mg,1.48mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(20.4mg,0.23mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基吡咯烷-2-基)-1-(甲基氨基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(71mg,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.15(s,1H),8.23(s,1H),8.11(d,J=5.1Hz,1H),7.94(d,J=8.6Hz,2H),7.88(d,J=8.6Hz,2H),7.80(s,1H),7.47–7.43(m,1H),6.87(d,J=5.1Hz,1H),6.46(dd,J1=16.8Hz,J2=10.1Hz,1H),6.36–6.32(m,2H),5.71(dd,J1=10.1Hz,J2=2.0Hz,1H),5.23(dd,J1=8.1Hz,J2=3.7Hz,1H),3.89–3.83(m,1H),3.71–3.65(m,1H),2.91(d,J=5.7Hz,3H),2.73–2.64(m,1H),2.45–2.38(m,4H),2.31–2.24(m,1H),2.13–2.05(m,1H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:165.9,165.2,162.0,151.9,150.1,149.0,147.3,142.6,138.4,133.5,129.9,128.9,128.3,127.2,121.1,119.5,115.1,51.7,47.4,41.0,30.9,25.4,21.5。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例46:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备1-(叔丁基)-2-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙
烷-2-基)(2S)-哌啶-1,2-二羧酸酯
向实施例1中步骤C的产物(256g,746mmol)在乙腈(2L)中的溶液加入二异丙基乙胺(141mL,821mmol)和(S)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-羧酸(179g,781mmol),并在室温下搅拌3h,然后蒸发除去所有挥发物。残余物用水(1000mL)稀释,并用乙酸乙酯(3000mL)萃取。分离有机相,经无水Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=8:1),得到浅黄色油状物1-(叔丁基)-2-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)(2S)-哌啶-1,2-二羧酸酯(260g,71%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.13(d,J=7.3Hz,2H),8.01(d,J=7.5Hz,2H),6.29(d,J=19.2Hz,1H),5.05–4.86(m,1H),4.39(q,J=7.1Hz,2H),4.23(q,J=6.9Hz,2H),4.04–3.88(m,1H),3.10–2.88(m,1H),2.34–2.19(m,1H),1.70–1.67(m,3H),1.44–1.32(m,14H),1.20(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):492.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)
哌啶-1-羧酸叔丁酯
向1L压力瓶中步骤A的产物(260g,530mmol)的二甲苯(1250mL)溶液加入NH4OAc(490g,6357mmol)。将反应在140℃下加热2.5h。冷却后,残余物用水(1000mL)稀释,并用乙酸乙酯(3000mL)萃取。分离有机相,经无水Na2SO4干燥,并浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=5:1),得到浅黄色油状物(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(75g,30%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:10.08(s,1H),8.10–8.06(m,4H),5.44–5.36(m,1H),4.38(q,J=7.1Hz,2H),4.30(q,J=7.1Hz,2H),4.07–3.93(m,1H),2.77(t,J=12.8Hz,1H),2.53(d,J=12.6Hz,1H),1.91–1.61(m,4H),1.51–1.47(m,10H),1.40(t,J=7.1Hz,3H),1.30(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):472.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪
唑-4-基)苯甲酸
将步骤B的产物(4.57g,10mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL),加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,50mL),并在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。通过过滤分离出白色沉淀物,并干燥,得到白色固体(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-4-基)苯甲酸(3.99g,90%)。
步骤D:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪
唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将步骤C的产物(30.0g,67mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL),加入HATU(30.6g,80mmol)、二异丙基乙胺(57.7mL,335mmol)和吡啶-2-胺(9.5g,101mmol),并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到白色固体(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(29.5g,85%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.49(s,1H),9.18(s,1H),8.37(d,J=8.4Hz,1H),8.17–8.16(m,1H),8.11(d,J=8.4Hz,2H),7.93(d,J=8.2Hz,2H),7.71–7.67(m,1H),6.98(dd,J1=7.3Hz,J2=5.8Hz,1H),5.44–5.39(m,1H),4.23(q,J=7.1Hz,2H),3.97(d,J=11.9Hz,1H),2.44(d,J=12.0Hz,1H),1.81–1.61(m,4H),1.50–1.39(m,11H),1.23(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下向步骤D的产物(2.6g,5.0mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中的溶液缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(6.0mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.0mmol),并将得到的悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯萃取三次(3×100mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到产物白色固体(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.9g,71%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.80(s,1H),8.40(d,J=8.4Hz,1H),8.28–8.26(m,1H),7.93(d,J=8.6Hz,2H),7.84(d,J=8.6Hz,2H),7.77–7.73(m,1H),7.06(dd,J1=7.3Hz,J2=5.9Hz,1H),5.92(s,2H),5.67(d,J=4.6Hz,1H),4.32–4.24(m,2H),3.95(d,J=12.8Hz,1H),3.42(td,J1=13.0Hz,J2=3.1Hz,1H),2.12–2.04(m,2H),1.92–1.86(m,1H),1.76–1.72(m,1H),1.65–1.61(m,1H),1.53–1.48(m,1H),1.43(s,9H),1.24(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):535.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将步骤E的产物(1.49g,2.8mmol)溶于甲醇(15mL),加入2mol/L氢氧化锂水溶液(14mL),并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离出白色沉淀物,并干燥,得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.28g,90%)。
步骤G:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将步骤F的产物(1.0g,2.0mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(15mL),加入HATU(1.1g,2.9mmol)、二异丙基乙胺(1mL,5.9mmol)和NH4Cl(1.1g,20mmol),并在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.84g,83%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.15(s,1H),8.37(d,J=8.1Hz,1H),8.30–8.24(m,1H),7.90(d,J=6.8Hz,2H),7.77–7.72(m,3H),7.05–7.03(m,1H),6.77(s,1H),6.34(s,1H),6.04(s,2H),5.61–5.58(m,1H),3.93(d,J=12.5Hz,1H),3.32(t,J=12.9Hz,1H),2.20–2.12(m,2H),1.90–1.86(m,1H),1.75–1.64(m,2H),1.54–1.50(m,1H),1.45(s,9H)。MS(ESI,m/z):506.2[M+H]+。
步骤H:制备(S)-1-氨基-2-(哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤G的产物(190mg,0.39mmol)溶于二氯甲烷(5mL),加入三氟乙酸(2.5mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-2-(哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):406.1[M+H]+。
步骤I:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(32.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(117mg,62%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:9.31(s,1H),8.33(d,J=8.4Hz,1H),8.24(d,J=4.0Hz,1H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),7.75–7.69(m,3H),7.32(s,1H),7.03(dd,J1=6.8Hz,J2=5.3Hz,1H),6.69(s,1H),6.57(dd,J1=16.5Hz,J2=10.7Hz,1H),6.29–6.24(m,3H),6.02–5.97(m,1H),5.69(d,J=10.5Hz,1H),3.81(d,J=11.8Hz,1H),3.68(t,J=11.8Hz,1H),2.39–2.37(m,1H),2.19–2.15(m,1H),1.89–1.83(m,2H),1.70–1.66(m,1H),1.59–1.57(m,1H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:167.2,166.0,162.8,151.9,148.3,147.9,141.2,138.6,138.3,133.5,129.5,128.6,127.8,127.3,120.2,120.0,114.6,44.4,43.0,28.0.25.8,19.7。MS(ESI,m/z):460.2[M+H]+。
实施例47:
(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例46中步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(116mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.23(s,1H),8.38(d,J=8.3Hz,1H),8.31–8.25(m,1H),7.92(d,J=8.2Hz,2H),7.80–7.75(m,3H),7.08(dd,J1=6.7Hz,J2=5.3Hz,1H),7.03(s,1H),6.77–5.99(m,3H),5.90(s,1H),5.20(s,1H),5.12–5.05(m,1H),3.92–3.78(m,1H),3.64–3.60(m,1H),2.34–2.31(m,1H),2.22–2.20(m,1H),1.95(s,3H),1.93–1.88(m,1H),1.82–1.80(m,1H),1.73–1.70(m,1H),1.58–1.51(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:173.1,165.9,162.8,151.8,148.2,147.6,141.2,140.5,138.8,138.3,133.6,129.9,129.6,127.5,120.1,115.9,114.7,44.3,28.0,26.0,20.6,19.9,14.3。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例48:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例46中步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(116mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.18(s,1H),8.37–8.35(m,1H),8.27–8.24(m,1H),7.89–7.87(m,2H),7.78–7.71(m,3H),7.30(s,1H),7.06–7.04(m,1H),6.90–6.84(m,1H),6.65–6.34(m,3H),6.29–6.26(m,1H),5.95–5.91(m,1H),3.82(d,J=11.6Hz,1H),3.65–3.60(m,1H),2.42–2.41(m,1H),2.18–2.15(m,1H),2.03–2.01(m,1H),1.94–1.79(m,4H),1.70–1.68(m,1H),1.60–1.58(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.4,166.0,165.9,162.7,151.9,148.3,147.9,142.8,141.3,138.6,138.4,133.5,129.7,127.3,121.7,120.0,114.6,44.3,42.8,28.0,25.8,19.8,18.5。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例49:
(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰 基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例46中步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(42.7mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(130mg,65%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.25–9.18(m,1H),8.36–8.35(m,1H),8.30–8.27(m,1H),7.90–7.87(m,2H),7.79–7.73(m,3H),7.24(s,1H),7.05–7.04(m,1H),6.53(s,1H),6.30(s,2H),5.96(d,J=4.3Hz,1H),5.79(s,1H),3.80(d,J=12.5Hz,1H),3.58(t,J=12.4Hz,1H),2.37–2.35(m,1H),2.20–2.17(m,1H),1.92–1.80(m,8H),1.70–1.68(m,1H),1.56–1.54(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:169.0,165.9,162.7,151.9,148.5,147.9,147.0,141.3,138.6,138.4,133.5,129.7,127.3,120.1,120.0,118.0,114.6,43.7,43.5,27.9,26.3,25.8,20.5,19.8。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例50:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例46中步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(30.3mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(97mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.42(s,1H),8.33–8.20(m,2H),7.81(d,J=8.2Hz,2H),7.69–7.58(m,3H),7.23(s,1H),7.03–6.98(m,1H),6.85(s,1H),6.11(s,2H),5.93–5.89(m,1H),4.24(d,J=12.4Hz,1H),3.69–3.63(m,1H),2.31–2.22(m,1H),2.14–2.11(m,1H),1.96(s,3H),1.84–1.81(m,2H),1.68–1.65(m,1H),1.57–1.54(m,1H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:166.1,162.8,154.8,151.9,148.1,147.8,140.9,138.5,138.1,133.4,129.4,127.3,120.4,119.9,114.6,90.9,72.9,44.5,43.8,27.8,25.7,19.7,4.2。MS(ESI,m/z):472.2[M+H]+。
实施例51:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例46中步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入(E)-戊-2-烯酸(36.0mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(104mg,52%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.39(s,1H),8.37–8.31(m,1H),8.28–8.21(m,1H),7.84–7.82(m,2H),7.73–7.71(m,3H),7.45(s,1H),7.07–7.00(m,1H),6.92–6.87(m,1H),6.72(s,1H),6.42–6.33(s,1H),6.28–6.17(m,2H),5.99–5.89(m,1H),3.82(d,J=11.6Hz,1H),3.62(t,J=12.1Hz,1H),2.42–2.41(m,1H),2.21–2.14(m,3H),1.88–1.83(m,2H),1.69–1.67(m,1H),1.61–1.58(m,1H),1.05–1.02(m,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.5,166.1,162.8,151.8,149.1,148.4,147.7,141.3,138.7,138.4,133.3,129.6,127.3,120.1,120.0,119.2,114.7,44.3,42.8,27.9,25.8,19.7,12.6,8.6。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例52:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨 基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将实施例46中步骤H的产物(166mg,0.41mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL),加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入2-氰基乙酸(30.6mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到灰白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(97mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.32–9.23(m,1H),8.34(d,J=4.5Hz,1H),8.26–8.25(m,1H),7.89–7.85(m,2H),7.75–7.69(m,3H),7.08–7.05(m,1H),6.87(s,1H),6.51(s,1H),5.97(s,2H),5.93(d,J=5.1Hz,1H),3.96–3.82(m,1H),3.58(s,2H),3.50(d,J=12.8Hz,1H),2.24–2.13(m,2H),1.89–1.87(m,2H),1.75–1.59(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,162.8,162.5,151.8,148.3,147.9,140.8,138.7,138.0,133.7,129.5,127.5,120.5,120.2,114.6,114.2,45.3,44.1,27.8,25.7,25.4,19.2。MS(ESI,m/z):473.2[M+H]+。
步骤B:制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基-丙烯酰基)哌啶-2-基)-4- (4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下将环丙烷甲醛(8.4mg,0.12mmol)溶于干燥二氯甲烷(5mL),然后加入吡咯烷(42.7mg,0.60mmol)和TMS-Cl(65.2mg,0.60mmol)。移除冰浴,并将反应混合物搅拌10min,接着加入步骤A的产物(56.6mg,0.12mmol)。将反应溶液搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=23:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(31.4mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.25(s,1H),8.36(d,J=8.3Hz,1H),8.28–8.27(m,1H),7.88(d,J=8.0Hz,2H),7.76–7.73(m,2.5H),7.66–7.65(m,0.5H),7.08–7.06(m,1H),6.94(s,1H),6.58(d,J=11.2Hz,1H),6.50–6.47(m,1H),6.22(s,1H),6.04–6.00(m,1H),5.77(d,J=4.0Hz,1H),3.98–3.94(m,1H),3.87–3.81(m,1H),2.33–2.28(m,1H),2.21–2.16(m,1H),2.09–2.03(m,1H),2.00–1.94(m,1H),1.88–1.86(m,1H),1.77–1.70(m,2H),1.24–1.20(m,2H),0.88–0.85(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.3,165.9,163.1,162.8,151.8,147.8,138.8,138.7,138.1,133.7,129.5,129.2,127.6,127.5,120.1,115.4,114.6,107.6,45.7,45.0,28.3,25.2,19.8,15.8,10.9,10.8。MS(ESI,m/z):525.2[M+H]+。
实施例53:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将实施例46中步骤C的产物(25.2g,57mmol)溶于干燥N,N-二甲基甲酰胺(230mL),加入HATU(26.0g,68mmol)、二异丙基乙胺(49.1mL,285mmol)和4-甲基吡啶-2-胺(9.2g,86mmol),并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到白色固体(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(25.8g,85%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:10.21(s,1H),8.90(s,1H),8.25(s,1H),8.13(d,J=8.3Hz,2H),8.09(d,J=5.0Hz,1H),7.95(d,J=8.3Hz,2H),6.87(d,J=5.0Hz,1H),5.42–5.40(m,1H),4.31–4.27(m,2H),4.06–3.94(s,1H),2.80–2.76(m,1H),2.51(d,J=12.8Hz,1H),2.38(s,3H),1.91–1.90(m,1H),1.83–1.79(m,1H),1.73–1.71(m,1H),1.66–1.64(m,1H),1.52–1.48(m,10H),1.29(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下向步骤A的产物(2.9g,5.5mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(26mL)中的溶液缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(6.6mL,1M四氢呋喃溶液)。混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.3g,5.5mmol),并将得到的悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.2g,72%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.73(s,1H),8.26(s,1H),8.14–8.12(m,1H),7.93(d,J=8.6Hz,2H),7.84(d,J=8.5Hz,2H),6.90(d,J=5.1Hz,1H),5.92(s,2H),5.68(d,J=4.8Hz,1H),4.33–4.24(m,2H),3.95(d,J=12.6Hz,1H),3.45–3.38(m,1H),2.40(s,3H),2.12–2.05(m,2H),1.92–1.87(m,1H),1.76–1.73(m,3H),1.66–1.62(m,1H),1.54–1.49(m,1H),1.44(s,9H),1.24(t,J=7.2Hz,3H)。MS(ESI,m/z):549.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
向步骤B的产物(1.53g,2.8mmol)在甲醇(15mL)中的溶液加入2mol/L氢氧化锂水溶液(14mL),并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,并用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离出白色沉淀物,干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.38g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
向步骤C的产物(1.2g,2.3mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(16mL)中的溶液加入HATU(1.3g,3.5mmol)、二异丙基乙胺(1.2mL,6.9mmol)和NH4Cl(1.2g,23mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=32:1),得到白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.03g,86%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.34(s,1H),8.20(s,1H),8.08(d,J=4.9Hz,1H),7.85(d,J=8.0Hz,2H),7.70(d,J=7.9Hz,2H),6.99(s,1H),6.85(d,J=4.8Hz,1H),6.68(s,1H),6.04(s,2H),5.61(d,J=5.4Hz,1H),3.93(d,J=12.3Hz,1H),3.33(t,J=11.9Hz,1H),2.36(s,3H),2.18–2.11(m,2H),1.89–1.84(m,1H),1.73–1.71(m,1H),1.64–1.62(m,1H),1.53–1.49(m,1H),1.44(s,9H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-
2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向步骤D的产物(202mg,0.39mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液加入三氟乙酸(2.5mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):420.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥二氯甲烷(5mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(32.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(120mg,62%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:9.11(s,1H),8.22(s,1H),8.11(d,J=5.1Hz,1H),7.89(d,J=8.4Hz,2H),7.79(d,J=7.6Hz,2H),7.12(s,1H),6.88(d,J=4.8Hz,1H),6.61–6.55(m,1H),6.47(s,1H),6.31–6.25(m,3H),5.98–5.97(m,1H),5.70(d,J=10.5Hz,1H),3.82(d,J=12.1Hz,1H),3.69(t,J=12.4Hz,1H),2.38(s,3H),2.20–2.16(m,1H),1.94–1.58(m,5H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,165.9,162.8,151.9,150.1,148.2,147.5,141.2,138.3,133.7,129.6,128.7,127.8,127.4,121.2,120.0,115.1,44.4,43.0,28.0,25.8,21.6,19.7。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例54:
(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥二氯甲烷(5mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=30:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(120mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.27(s,1H),8.21(s,1H),8.10(d,J=5.0Hz,1H),7.87(d,J=8.3Hz,2H),7.74–7.73(m,2H),7.08(s,1H),6.87(d,J=4.9Hz,1H),6.66(s,1H),6.24(s,2H),5.96–5.85(m,1H),5.18–5.14(m,1H),5.08–5.03(m,1H),3.90–3.79(m,1H),3.65–3.61(m,1H),2.37(s,3H),2.35–2.32(m,1H),2.22–2.19(m,1H),1.94(s,3H),1.92–1.87(m,1H),1.81–1.79(m,1H),1.71–1.68(m,1H),1.57–1.49(m,1H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:173.0,165.9,162.9,151.9,150.2,148.2,147.4,141.1,140.5,138.2,133.7,129.5,127.4,121.2,120.2,115.8,115.1,44.2,44.1,28.0,26.0,21.6,20.5,19.9。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例55:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥二氯甲烷(5mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)-苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(120mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.43(s,1H),8.18(s,1H),8.06–8.05(m,1H),7.82(d,J=7.7Hz,2H),7.77–7.65(m,2H),7.39(s,1H),6.87–6.80(m,3H),6.31–6.24(m,3H),5.98–5.87(m,1H),3.80–3.79(m,1H),3.67–3.55(m,1H),2.43–2.34(m,4H),2.15–2.13(m,1H),1.87–1.83(m,5H),1.66–1.64(m,1H),1.56–1.54(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,166.1,162.8,151.9,150.1,148.3,147.2,142.6,141.1,138.3,133.4,129.4,127.2,121.7,121.0,120.2,115.1,44.2,42.7,27.9,25.8,21.5,19.7,18.4。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例56:
(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥二氯甲烷(5mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(42.7mg,0.36mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体产物(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(134mg,65%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.28(s,1H),8.25(s,1H),8.12(d,J=4.7Hz,1H),7.93(d,J=8.2Hz,2H),7.82–7.81(m,2H),7.16(s,1H),6.90(d,J=4.6Hz,1H),6.38–6.30(m,3H),5.97–5.96(m,1H),5.78(s,1H),3.79(d,J=12.4Hz,1H),3.58(t,J=12.4Hz,1H),2.40(s,3H),2.36–2.32(m,1H),2.20–2.18(m,1H),1.87–1.80(m,8H),1.70–1.67(m,1H),1.58–1.52(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:169.0,165.9,162.7,151.7,150.7,148.5,147.0,146.9,141.2,138.5,133.5,129.7,127.4,121.2,120.0,118.0,115.2,43.7,43.5,28.0,26.3,25.8,21.7,20.5,19.8。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例57:
(S,E)-1-氨基-2-(1-肉桂酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-肉桂酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥二氯甲烷(5mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)。5min后,在0℃下加入肉桂酰氯(60.0mg,0.36mmol)。然后将反应混合物升至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-2-(1-肉桂酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(113mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.03(s,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J=5.0Hz,1H),7.92(d,J=8.3Hz,2H),7.87–7.77(m,2H),7.66(d,J=15.4Hz,1H),7.52–7.51(m,2H),7.36–7.35(m,3H),7.12(s,1H),6.90–6.88(m,2H),6.38(s,2H),6.31–6.21(m,1H),6.08–5.99(m,1H),4.01–3.88(m,1H),3.81–3.67(m,1H),2.49–2.44(m,1H),2.39(s,3H),2.22–2.20(m,1H),1.97–1.89(m,2H),1.73–1.65(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.4,165.8,162.7,151.8,150.2,148.3,147.5,143.7,141.3,138.4,135.2,133.8,130.0,129.7,129.0,128.0,127.4,121.3,119.9,117.3,115.1,44.6,43.0,28.1,25.9,21.6,19.8。MS(ESI,m/z):550.2[M+H]+。
实施例58:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入丁-2-炔酸(30.3mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(99.5mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.87(s,1H),8.24(s,1H),8.15(d,J=5.1Hz,1H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.83(d,J=8.4Hz,1.7H),7.75(d,J=8.3Hz,0.3H),6.91(d,J=4.4Hz,1H),6.80(s,1H),6.15(s,2H),6.02(s,0.5H),5.97–5.96(m,1H),5.92(s,0.3H),5.67(s,0.2H),4.28(d,J=12.5Hz,1H),3.67(td,J1=13.2Hz,J2=3.1Hz,1H),2.41(s,3H),2.37–2.33(m,1H),2.20–2.16(m,1H),2.02(s,3H),1.92–1.83(m,2H),1.74–1.58(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.6,162.6,155.0,151.8,150.2,147.9,147.6,141.2,138.3,133.9,129.8,127.5,121.3,119.9,115.0,90.9,73.0,44.5,43.8,27.8,25.8,21.6,19.9,4.3。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
实施例59:
(S)-1-氨基-2-(1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入2-氟丙烯酸(32.4mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S)-1-氨基-2-(1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(101mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.42(s,1H),8.17(s,1H),8.06(d,J=5.1Hz,1H),7.81(d,J=8.3Hz,2H),7.66(d,J=8.1Hz,2H),7.13(s,1H),6.95(s,1H),6.84(d,J=4.9Hz,1H),6.19(s,2H),5.88–5.76(m,1H),5.26(d,J=3.3Hz,0.5H),5.15–5.12(m,1H),5.09(d,J=3.4Hz,0.5H),3.83–3.74(m,2H),2.35(s,3H),2.31–2.16(m,2H),1.95–1.80(m,2H),1.70–1.59(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.0,163.0,158.2,156.4,151.9,150.1,147.9,147.4,140.9,137.9,133.6,129.3,127.3,121.1,120.5,115.1,99.8,45.3,44.0,28.1,25.8,21.5,19.7。MS(ESI,m/z):492.2[M+H]+。
实施例60:
(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(4,4,4-三氟
丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(4,4,4-
三氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向实施例53中步骤E的产物(172mg,0.41mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液加入三乙胺(248mg,2.46mmol)。5min后,加入(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸(50.4mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物继续在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=25:1),得到白色固体(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(4,4,4-三氟丁-2-烯酰基)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(122mg,55%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.23(s,1H),8.19(s,1H),8.09(d,J=5.0Hz,1H),7.83(d,J=8.3Hz,2H),7.69(d,J=8.1Hz,2H),7.04(s,1H),7.01–6.96(m,1H),6.87(d,J=4.8Hz,1H),6.78(s,1H),6.74–6.65(m,1H),6.15(s,1.6H),6.01–6.00(m,1H),5.89(s,0.3H),5.60(s,0.1H),3.87–3.73(m,2H),2.37(s,3H),2.34–2.19(m,2H),1.95–1.88(m,2H),1.73–1.56(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,164.1,162.8,151.8,150.2,148.2,147.4,141.2,138.1,133.7,129.5,128.4,127.3,123.5,121.7,121.3,120.2,115.1,44.9,43.5,28.0,25.8,21.5,19.4。MS(ESI,m/z):542.2[M+H]+。
实施例61:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基) 苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
向实施例46中步骤C的产物(30.0g,67mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL)中的溶液加入HATU(30.6g,80mmol)、二异丙基乙胺(57.7mL,335mmol)和5-甲基吡啶-2-胺(10.9g,101mmol)。在80℃下搅拌反应混合物3h。反应完成后(通过TLC监控),将混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。有机层合并后,减压浓缩,并通过快速色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到白色固体产物(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(30.4g,85%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:10.08(s,1H),8.76(s,1H),8.31(d,J=8.5Hz,1H),8.15(d,J=8.2Hz,2H),8.10(s,1H),7.96(d,J=8.3Hz,2H),7.58(dd,J1=8.5Hz,J2=1.9Hz,1H),5.40(d,J=4.1Hz,1H),4.34–4.30(m,2H),4.06–3.96(m,1H),2.76(t,J=12.9Hz,1H),2.54(d,J=12.6Hz,1H),2.31(s,3H),1.95–1.89(m,1H),1.84–1.79(m,1H),1.75–1.73(m,1H),1.67–1.65(m,1H),1.52–1.44(m,10H),1.32(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下向步骤A的产物(2.7g,5.0mmol)在无水N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中的溶液缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(6.0mL,1M四氢呋喃溶液),并搅拌20min。在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.0mmol)。然后将得到的悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,另外加入N,N-二甲基甲酰胺)。将反应用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。有机部分合并后,用无水Na2SO4干燥,并减压除去溶剂,得到粗残余物,对其进行柱层析色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯=3:1),得到白色固体产物(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.9g,70%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.60(s,1H),8.30(d,J=8.4Hz,1H),8.13(s,1H),7.93(d,J=8.3Hz,2H),7.84(d,J=8.3Hz,2H),7.58(dd,J1=8.4Hz,J2=1.6Hz,1H),5.93(s,2H),5.68(d,J=5.2Hz,1H),4.32–4.26(m,2H),3.95(d,J=13.1Hz,1H),3.42(td,J1=13.0Hz,J2=2.9Hz,1H),2.32(s,3H),2.12–2.05(m,2H),1.92–1.86(m,1H),1.76–1.74(m,1H),1.60–1.49(m,2H),1.44(s,9H),1.25(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):549.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
向步骤B的产物(1.53g,2.8mmol)在甲醇(15mL)中的溶液加入2mol/L氢氧化锂水溶液(14mL),并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化至pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离出白色沉淀物,并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.38g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
向步骤C的产物(1.04g,2.0mmol)在干燥N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的溶液加入HATU(1.1g,2.9mmol)、二异丙基乙胺(1.0mL,5.9mmol)和NH4Cl(1.1g,20mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×100mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=32:1),给出白色固体(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.88g,85%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:9.15(s,1H),8.22(d,J=8.3Hz,1H),8.05(s,1H),7.85(t,J=6.8Hz,2H),7.72(t,J=6.8Hz,2H),7.53(d,J=8.5Hz,1H),6.84(s,1H),6.46(s,1H),6.03(s,2H),5.60(d,J=4.6Hz,1H),3.92(d,J=12.5Hz,1H),3.31(td,J1=13.0Hz,J2=2.7Hz,1H),2.28(s,3H),2.20–2.17(m,1H),2.14–2.10(m,1H),1.90–1.82(m,1H),1.74–1.71(m,1H),1.65–1.60(m,1H),1.55–1.48(m,1H),1.44(s,9H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-
2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向步骤D的产物(202mg,0.39mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液加入三氟乙酸(2.5mL)。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到浅黄色油状物(S)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺。MS(ESI,m/z):420.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向步骤E的产物(189mg,0.45mmol)在干燥二氯甲烷(6mL)中的溶液加入二异丙基乙胺(349mg,2.70mmol)。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(28.5mg,0.32mmol)。然后将反应混合物加温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并将水相用乙酸乙酯萃取。有机相合并后,用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤并浓缩。残余物通过色谱法纯化(二氯甲烷:甲醇=28:1),给出灰白色固体(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(132mg,62%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.34(s,1H),8.25(d,J=8.5Hz,1H),8.05(s,1H),7.86(d,J=8.2Hz,2H),7.75–7.74(m,2H),7.55(dd,J1=8.5Hz,J2=1.6Hz,1H),7.21(s,1H),6.64–6.54(m,2H),6.39–6.24(m,3H),6.02–5.93(m,1H),5.69(d,J=10.5Hz,1H),3.81(d,J=11.8Hz,1H),3.68(t,J=12.1Hz,1H),2.44–2.32(m,1H),2.28(s,3H),2.17(d,J=13.2Hz,1H),1.93–1.83(m,2H),1.70–1.57(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,165.9,162.8,149.6,148.3,147.3,141.2,139.4,138.3,133.5,129.5,129.4,128.6,127.8,127.4,120.1,114.2,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7,17.9。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例62:
(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)加入到实施例61的步骤E的产物(172mg,0.41mmol)的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(37.6mg,0.36mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(120mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.85(s,1H),8.29(d,J=8.4Hz,1H),8.12(s,1H),7.95(d,J=8.2Hz,2H),7.83(d,J=7.9Hz,2H),7.58(dd,J1=8.4Hz,J2=1.9Hz,1H),6.84(s,1H),6.27(s,2H),5.95(s,1H),5.90(s,1H),5.20(s,1H),5.12–5.06(m,1H),3.92–3.79(m,1H),3.61(t,J=12.1Hz,1H),2.42–2.34(m,1H),2.32(s,3H),2.22(d,J=13.8Hz,1H),1.95(s,3H),1.93–1.89(m,1H),1.82(d,J=13.1Hz,1H),1.74–1.71(m,1H),1.59–1.51(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:173.1,165.7,162.8,149.6,148.2,147.6,141.1,140.5,139.3,138.2,133.8,129.6,129.5,127.5,120.0,115.9,114.2,44.2,29.8,28.0,26.0,20.5,19.9,18.0。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例63:
(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基) 氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)加入到172mg(0.41mmol)实施例61的步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液中。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(42.7mg,0.36mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到产物(S)-1-氨基-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(134mg,65%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.10(s,1H),8.25(d,J=8.4Hz,1H),8.07(s,1H),7.88(d,J=8.2Hz,2H),7.79(d,J=7.4Hz,2H),7.55(d,J=8.3Hz,1H),7.15(s,1H),6.44(s,1H),6.31(s,2H),6.00–5.93(m,1H),5.78(s,1H),3.79(d,J=11.9Hz,1H),3.59(t,J=12.5Hz,1H),2.41–2.33(m,1H),2.29(s,3H),2.19(d,J=13.0Hz,1H),1.97–1.93(m,1H),1.87(s,3H),1.83(s,3H),1.80–1.77(m,1H),1.70–1.67(m,1H),1.56–1.54(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:169.0,165.8,162.7,149.7,148.5,147.8,146.9,141.3,139.1,138.3,133.7,129.6,129.4,127.3,120.0,118.0,114.1,43.7,43.5,28.0,26.3,25.8,20.5,19.9,18.0。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例64:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(248mg,2.46mmol)加入到172mg(0.41mmol)实施例61的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中。5min后,加入丁-2-炔酸(30.3mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(99.5mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.15–9.12(m,1H),8.25(d,J=8.3Hz,1H),8.08–8.06(m,1H),7.89(d,J=7.7Hz,2H),7.77(d,J=7.6Hz,1.4H),7.67–7.62(m,0.4H),7.54(d,J=8.1Hz,1H),7.33(d,J=7.6Hz,0.2H),6.98(s,1H),6.42(s,1H),6.20(s,0.3H),6.13(s,1.7H),5.98–5.94(m,1H),4.26(d,J=12.8Hz,1H),3.66(td,J1=13.4Hz,J2=3.1Hz,1H),2.41–2.33(m,1H),2.29(s,3H),2.17–2.14(m,1H),2.00(s,3H),1.86–1.85(m,2H),1.70–1.68(m,1H),1.61–1.55(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.7,162.7,154.9,149.6,148.0,147.7,141.2,139.2,138.2,133.7,129.6,129.5,127.4,120.0,114.2,90.9,73.0,44.5,43.8,27.8,25.8,19.8,18.0,4.3。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
实施例65:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(31.9g,84mmol)、二异丙基乙胺(60.3mL,350mmol)和4-苯基吡啶-2-胺(17.9g,105mmol)加入到31.0g(70mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL)溶液中。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(35.4g,85%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.34(s,1H),9.24(s,1H),8.72–8.66(m,1H),8.22–8.15(m,3H),8.00–7.90(m,2H),7.69–7.64(m,2H),7.44–7.43(m,3H),5.42–5.30(m,1H),4.28–4.27(m,2H),4.10–4.08(m,1H),4.01–3.99(m,1H),2.85–2.79(m,1H),2.51–2.48(m,1H),1.96–1.81(m,2H),1.71–1.63(m,2H),1.49(s,9H),1.28–1.21(m,4H)。MS(ESI,m/z):596.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(7.2mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到3.6g(6.0mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.7g,7.2mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯萃取三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)的柱色谱,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.6g,70%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.93(s,1H),8.73–8.72(m,1H),8.30(d,J=5.2Hz,1H),7.97(d,J=8.5Hz,2H),7.86(d,J=8.5Hz,2H),7.74–7.72(m,2H),7.50–7.42(m,3H),7.30(dd,J1=5.2Hz,J2=1.6Hz,1H),5.93(s,2H),5.68(d,J=4.8Hz,1H),4.33–4.25(m,2H),3.95(d,J=12.6Hz,1H),3.43(td,J1=13.0Hz,J2=3.0Hz,1H),2.12–2.05(m,2H),1.93–1.87(m,1H),1.74(d,J=13.0Hz,1H),1.66–1.63(m,1H),1.57–1.49(m,1H),1.44(s,9H),1.25(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):611.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-苯基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(15mL)加入到1.83g(3.0mmol)步骤B的产物的甲醇(17mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×90mL)。通过过滤分离白色沉淀,并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.68g,96%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.1g,2.9mmol)、二异丙基乙胺(1.0mL,5.9mmol)和NH4Cl(1.1g,20mmol)加入到1.16g(2.0mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×90mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(32:1)纯化,以得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.93g,80%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.21(s,1H),8.67(s,1H),8.30(d,J=5.0Hz,1H),7.93(d,J=7.7Hz,2H),7.79(d,J=7.6Hz,2H),7.71(d,J=7.3Hz,2H),7.49–7.42(m,3H),7.28–7.27(m,1H),6.87(s,1H),6.32(s,1H),6.03(s,2H),5.61(d,J=5.6Hz,1H),3.94(d,J=12.5Hz,1H),3.31(t,J=13.0Hz,1H),2.21–2.12(m,2H),1.90–1.86(m,1H),1.73(d,J=12.6Hz,1H),1.65(d,J=12.5Hz,1H),1.56–1.48(m,1H),1.45(s,9H)。MS(ESI,m/z):582.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-
2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(2.6mL)加入到232mg(0.40mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(6mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI。m/z):482.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(349mg,2.70mmol)加入到216mg(0.45mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(6mL)溶液中。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(32.6mg,0.36mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(144mg,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.15(s,1H),8.68(s,1H),8.31(d,J=5.2Hz,1H),7.95(d,J=8.3Hz,2H),7.84(d,J=7.5Hz,2H),7.72(d,J=6.8Hz,2H),7.50–7.41(m,3H),7.29(dd,J1=5.2Hz,J2=1.5Hz,1H),7.12(s,1H),6.62–6.56(m,1H),6.41–6.27(m,4H),5.99–5.98(m,1H),5.72(d,J=10.5Hz,1H),3.83(d,J=11.9Hz,1H),3.69(t,J=11.4Hz,1H),2.44–2.42(m,1H),2.19(d,J=13.3Hz,1H),1.92–1.86(m,2H),1.72–1.69(m,1H),1.62–1.59(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,166.0,165.9,162.7,152.5,151.1,148.2,141.2,138.4,138.2,133.6,129.7,129.3,129.1,128.7,127.8,127.4,127.4,118.2,112.3,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):536.2[M+H]+。
实施例66:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(248mg,2.46mmol)加入到197mg(0.41mmol)实施例65的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(30.3mg,0.36mmol)和HATU(234mg,0.61mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到产物(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-苯基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(114.4mg,51%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.25(s,1H),8.66(s,1H),8.29(d,J=5.2Hz,1H),7.93(d,J=8.3Hz,2H),7.80(d,J=8.4Hz,2H),7.70(d,J=6.8Hz,2H),7.49–7.40(m,3H),7.28(dd,J1=5.2Hz,J2=1.5Hz,1H),7.02(s,1H),6.46(s,1H),6.13(s,2H),5.95(d,J=4.7Hz,1H),4.27(d,J=12.8Hz,1H),3.67(td,J1=13.2Hz,J2=2.8Hz,1H),2.38–2.33(m,1H),2.16(d,J=13.5Hz,1H),2.00(s,3H),1.87–1.84(m,2H),1.77–1.68(m,1H),1.63–1.56(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,162.7,154.9,152.5,151.1,148.2,148.0,141.1,138.3,138.2,133.7,129.6,129.3,129.1,127.5,127.3,120.2,118.2,112.3,90.9,73.0,44.5,43.8,27.8,25.8,19.8,4.2。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
实施例67:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(27.4g,72mmol)、二异丙基乙胺(51.7mL,300mmol)和4-甲氧基吡啶-2-胺(11.2g,90mmol)加入到26.6g(60mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(240mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×180mL)。合并的有机层用无水Na2SO4干燥,在减压下浓缩,并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(3.5:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(28.3g,86%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.08(s,1H),8.89(s,1H),8.16(d,J=8.5Hz,2H),8.07–8.05(m,2H),7.96(d,J=8.6Hz,2H),6.62(dd,J1=5.8Hz,J2=2.4Hz,1H),5.41(d,J=3.9Hz,1H),4.35–4.29(m,2H),4.03–4.00(s,1H),3.91(s,3H),2.76(td,J1=13.0Hz,J2=2.8Hz,1H),2.54(d,J=12.8Hz,1H),1.95–1.92(m,1H),1.86–1.81(m,1H),1.78–1.73(m,1H),1.68–1.65(m,1H),1.55–1.50(m,10H),1.32(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):550.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(7.4mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到3.4g(6.2mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(32mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下,加入O-(二苯基氧膦基)羟基胺(1.4g,6.2mmol),并且所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯萃取三次(3×150mL)。合并的有机部分用无水Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法用石油醚和乙酸乙酯(4:1)纯化,以得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.6g,75%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.87(s,1H),8.06(d,J=2.3Hz,1H),8.04(d,J=5.8Hz,1H),7.93(d,J=8.6Hz,2H),7.84(d,J=8.6Hz,2H),6.61(dd,J1=5.8Hz,J2=2.4Hz,1H),5.92(s,2H),5.67(d,J=4.8Hz,1H),4.34–4.22(m,2H),3.94(d,J=13.1Hz,1H),3.91(s,3H),3.41(td,J1=13.0Hz,J2=3.0Hz,1H),2.11–2.03(m,2H),1.92–1.49(m,4H),1.43(s,9H),1.24(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):565.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(25mL)加入到2.82g(5.0mmol)步骤B的产物的甲醇(20mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化,直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(2.63,98%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.3g,3.3mmol)、二异丙基乙胺(1.2mL,6.6mmol)和NH4Cl(1.2g,22mmol)加入到1.18g(2.2mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(16mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×90mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(32:1)纯化,以得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.93g,79%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.80(s,1H),8.09(d,J=5.8Hz,1H),8.04(d,J=2.3Hz,1H),7.96(d,J=8.5Hz,2H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),6.84(s,1H),6.63(dd,J1=5.8Hz,J2=2.4Hz,1H),6.01(s,2H),5.74(s,1H),5.60(d,J=4.5Hz,1H),3.98–3.95(m,1H),3.92(s,3H),3.29(td,J1=13.0Hz,J2=3.0Hz,1H),2.23–2.12(m,2H),1.93–1.84(m,1H),1.75(d,J=12.8Hz,1H),1.65–1.49(m,2H),1.46(s,9H)。MS(ESI,m/z):536.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌
啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(2.5mL)加入到214mg(0.40mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(6mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):436.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(395.5mg,3.06mmol)加入到222mg(0.51mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(7mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(41.5mg,0.50mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(28:1)纯化,以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(155mg,62%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.15(s,1H),8.05(d,J=5.8Hz,1H),8.02(d,J=2.3Hz,1H),7.92(d,J=8.5Hz,2H),7.82(d,J=7.7Hz,2H),7.10(s,1H),6.61(dd,J1=5.8Hz,J2=2.4Hz,1H),6.58–6.55(m,1H),6.36(s,1H),6.30–6.26(m,3H),5.98–5.97(m,1H),5.71(d,J=10.7Hz,1H),3.90(s,3H),3.84–3.81(m,1H),3.72–3.65(m,1H),2.43–2.40(m,1H),2.18(d,J=13.0Hz,1H),1.94–1.88(m,2H),1.73–1.58(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.7,167.2,166.0,162.7,153.5,148.5,148.2,141.2,138.4,133.7,129.7,128.7,127.8,127.4,120.0,108.1,99.1,55.6,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):490.2[M+H]+。
实施例68:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基-吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到222mg(0.51mmol)实施例67的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(37.6mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(127.9mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.47–9.44(m,1H),8.00–7.97(m,2H),7.86–7.83(m,2H),7.74–7.71(m,1.7H),7.64–7.61(m,0.3H),7.13(s,1H),6.79(s,1H),6.58–6.55(m,1H),6.10(s,2H),5.92(d,J=5.6Hz,1H),4.25(d,J=12.6Hz,1H),3.86(s,3H),3.65(td,J1=13.0Hz,J2=2.4Hz,1H),2.35–2.26(m,1H),2.12(d,J=13.4Hz,1H),1.98(s,3H),1.85–1.82(m,2H),1.68–1.65(m,1H),1.57–1.54(m,1H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:167.6,166.1,162.8,154.8,153.6,148.4,148.0,140.9,138.2,133.5,129.4,127.4,120.4,107.8,99.2,90.9,72.9,55.5,44.5,43.8,27.8,25.7,19.8,4.2。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例69:
(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(4,4,4-三
氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(4,4,
4-三氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到222mg(0.51mmol)实施例67的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸(63.0mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(32:1)纯化,以得到(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(4,4,4-三氟丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(142.2mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.24(s,1H),8.04–8.01(m,2H),7.89(d,J=8.0Hz,2H),7.74(d,J=8.0Hz,2H),6.99(d,J=15.3Hz,1H),6.83(s,1H),6.73–6.68(m,1H),6.61–6.60(m,1H),6.55(m,1H),6.15(s,1.6H),6.02(d,J=4.3Hz,1H),5.75(s,0.3H),5.56(s,0.1H),3.90(s,3H),3.87–3.83(m,1H),3.77–3.75(m,1H),2.35–2.29(m,1H),2.20(d,J=13.0Hz,1H),1.95–1.90(m,2H),1.73–1.70(m,1H),1.65–1.59(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.7,165.9,164.1,162.8,153.5,148.5,148.1,141.1,138.2,133.8,129.9,129.6,128.3,127.5,123.5,120.0,108.0,99.2,55.6,44.9,43.6,28.0,25.8,19.5。MS(ESI,m/z):558.1[M+H]+。
实施例70:
(S)-1-氨基-2-(1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基-吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到222mg(0.51mmol)实施例67的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入2-氟丙烯酸(40.5mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×60mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(32:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(2-氟丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(129.4mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.46(s,1H),8.00–7.98(m,2H),7.84(d,J=8.3Hz,2H),7.70(d,J=8.1Hz,2H),7.01(s,1H),6.86(s,1H),6.57(dd,J1=5.8Hz,J2=2.4Hz,1H),6.19(s,2H),5.88–5.81(m,1H),5.26(d,J=3.3Hz,0.5H),5.14–5.13(m,1H),5.09(d,J=3.5Hz,0.5H),3.87(s,3H),3.83–3.73(m,2H),2.34–2.16(m,2H),1.95–1.81(m,2H),1.71–1.60(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.6,166.1,163.0,158.2,156.4,153.6,148.4,147.8,140.9,138.0,133.7,129.3,127.4,120.4,107.8,99.9,99.3,55.5,45.3,44.0,28.1,25.8,19.8。MS(ESI,m/z):508.2[M+H]+。
实施例71:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(24.2g,63.6mmol、二异丙基乙胺(45.7mL,365mmol)和4-异丙基吡啶-2-胺(10.8g,80mmol)加入到23.5g(53mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(230mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×180mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(25.3g,85%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.17(s,1H),8.82(s,1H),8.33–8.32(m,1H),8.17–8.13(m,3H),7.97(d,J=8.6Hz,2H),6.94(dd,J1=5.2Hz,J2=1.5Hz,1H),5.41(d,J=3.9Hz,1H),4.31(q,J=7.1Hz,2H),4.02–4.00(m,1H),2.98–2.91(m,1H),2.77(td,J1=13.1Hz,J2=2.8Hz,1H),2.53(d,J=12.6Hz,1H),1.94–1.92(m,1H),1.85–1.81(m,1H),1.75–1.72(m,1H),1.68–1.64(m,1H),1.51–1.49(m,10H),1.31–1.28(m,9H)。MS(ESI,m/z):562.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(7.2mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到3.4g(6.0mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.4g,6.0mmol),并且所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭,并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×140mL)。合并的有机部分用无水Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.6g,76%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.67(s,1H),8.34–8.30(m,1H),8.15–8.11(m,3H),7.96(d,J=8.6Hz,2H),6.93(dd,J1=5.2Hz,J2=1.5Hz,1H),5.92(s,2H),5.56(d,J=3.9Hz,1H),4.29(q,J=7.1Hz,2H),4.00–3.98(m,1H),3.20(td,J1=13.0Hz,J2=2.7Hz,1H),2.98–2.91(m,1H),2.47(d,J=12.8Hz,1H),1.99–1.94(m,1H),1.86–1.79(m,1H),1.75–1.71(m,1H),1.67–1.62(m,1H),1.50–1.48(m,10H),1.31–1.28(m,9H)。MS(ESI,m/z):577.3[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-异丙基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(25mL)加入到2.88g(5.0mmol)步骤B的产物的甲醇(20mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×130mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-异丙基-吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(2.69g,98%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.3g,3.3mmol)、二异丙基乙胺(1.2mL,6.6mmol)和NH4Cl(1.2g,22mmol)加入到1.21g(2.2mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(16mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×110mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(32:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.96g,80%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.05(s,1H),8.35(s,1H),8.16(d,J=5.1Hz,1H),7.98(d,J=8.4Hz,2H),7.94(d,J=8.6Hz,2H),7.05(s,1H),6.93(dd,J1=5.0Hz,J2=1.5Hz,1H),6.28(s,1H),5.93(s,2H),5.56(d,J=4.0Hz,1H),3.38(d,J=13.1Hz,1H),3.20(td,J1=13.0Hz,J2=2.7Hz,1H),2.98–2.90(m,1H),2.45(d,J=12.8Hz,1H),1.96–1.81(m,2H),1.69–1.66(m,1H),1.64–1.60(m,1H),1.53–1.46(m,10H),1.31(s,3H),1.28(s,3H)。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌
啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(3.0mL)加入到274mg(0.50mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(6mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):448.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(395.5mg,3.06mmol)加入到228mg(0.51mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(7mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(41.5mg,0.50mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(28:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-异丙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(166.3mg,65%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.13(s,1H),8.30(s,1H),8.16(d,J=5.1Hz,1H),7.94(d,J=8.4Hz,2H),7.82(d,J=7.7Hz,2H),7.04(s,1H),6.95–6.94(m,1H),6.62–6.55(m,1H),6.31–6.25(m,4H),5.98–5.97(m,1H),5.71(d,J=10.7Hz,1H),3.84–3.63(m,2H),2.98–2.91(m,1H),2.42–2.39(m,1H),2.22–2.17(m,1H),1.94–1.85(m,2H),1.72–1.67(m,1H),1.61–1.58(m,1H),1.30(s,3H),1.28(s,3H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:167.2,165.8,162.7,160.9,152.0,148.2,147.5,141.2,138.4,133.8,129.7,128.7,127.8,127.4,119.9,118.6,112.8,44.4,43.0,34.2,28.0,27.3,25.8,23.2,19.7。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例72:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(23.7g,62.4mmol)、二异丙基乙胺(44.8mL,260mmol)和4-氯吡啶-2-胺(10.0g,78mmol)加入到23.0g(52mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(230mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×180mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(2.5:1)纯化,得到(S)-2-(4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(20.1g,70%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.70(s,1H),9.60(s,1H),8.58(d,J=1.7Hz,1H),8.16(d,J=5.5Hz,1H),8.02(d,J=8.4Hz,2H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.10(dd,J1=5.5Hz,J2=1.9Hz,1H),5.46–5.42(m,1H),4.32–4.26(m,2H),4.01–4.00(m,1H),2.84–2.81(m,1H),1.83–1.79(m,2H),1.72–1.71(m,2H),1.68–1.61(m,2H),1.50(s,9H),1.30–1.27(m,3H)。MS(ESI,m/z):554.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧
基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(8.4mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到3.9g(7.0mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.6g,7.0mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭,并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×120mL)。合并的有机部分用无水Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基-羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.8g,71%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.78(s,1H),8.47(s,1H),8.15–8.12(m,1H),7.99(d,J=8.4Hz,2H),7.86(d,J=8.4Hz,2H),7.11(dd,J1=5.5Hz,J2=1.9Hz,1H),5.95(s,2H),5.43–5.39(m,1H),4.27–4.23(m,2H),3.65(d,J=12.7Hz,1H),3.34(t,J=13.0Hz,1H),2.96(d,J=13.1Hz,1H),1.92–1.81(m,1H),1.75–1.71(m,2H),1.65–1.58(m,2H),1.38(s,9H),1.25–1.23(m,3H)。MS(ESI,m/z):569.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氯吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(25mL)加入到2.84g(5.0mmol)步骤B的产物的甲醇(20mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×110mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(2.57g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.3g,3.5mmol)、二异丙基乙胺(1.2mL,6.9mmol)和NH4Cl(1.2g,23mmol)加入到1.24g(2.3mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(12mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.76g,70%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.85(s,1H),8.56(s,1H),8.15–8.12(m,1H),7.89(d,J=8.0Hz,2H),7.76(d,J=8.1Hz,2H),7.20(s,1H),7.06(dd,J1=5.5Hz,J2=1.9Hz,1H),6.41(s,1H),5.96(s,2H),5.44–5.38(m,1H),3.68(d,J=12.2Hz,1H),3.59(t,J=12.9Hz,1H),2.97(d,J=13.0Hz,1H),2.00–1.87(m,1H),1.84–1.79(m,2H),1.65–1.56(m,2H),1.36(s,9H)。MS(ESI,m/z):540.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(3.6mL)加入到323mg(0.60mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(6mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):440.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(348.9mg,2.7mmol)加入到198mg(0.45mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(6mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(29.0mg,0.32mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(133.4mg,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.22(s,1H),8.48(s,1H),8.18–8.17(m,1H),7.89(d,J=8.0Hz,2H),7.81–7.79(m,2H),7.24(s,1H),7.08–7.07(m,1H),6.62–6.55(m,1H),6.41(s,1H),6.31–6.22(m,3H),5.97–5.96(m,1H),5.72(d,J=10.6Hz,1H),3.83(d,J=12.6Hz,1H),3.68(t,J=11.9Hz,1H),2.43–2.40(m,1H),2.19(d,J=13.3Hz,1H),1.93–1.88(m,2H),1.73–1.69(m,1H),1.63–1.60(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,165.9,162.7,152.8,148.5,148.3,146.2,141.3,138.6,133.1,129.7,128.8,127.8,127.4,120.4,120.1,114.7,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):494.1[M+H]+。
实施例73:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(31.9g,84.0mmol)、二异丙基乙胺(60.3mL,350mmol)和4-乙基吡啶-2-胺(12.8g,105mmol)加入到31.0g(70mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(250mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×180mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(32.5g,85%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:10.13(s,1H),8.88(s,1H),8.29(s,1H),8.15(d,J=8.5Hz,2H),8.12(d,J=5.1Hz,1H),7.96(d,J=8.5Hz,2H),6.90(dd,J1=5.1Hz,J2=1.4Hz,1H),5.41–5.40(m,1H),4.32–4.28(m,2H),4.01–4.00(m,1H),2.75–2.73(m,1H),2.69(q,J=7.6Hz,2H),2.52(d,J=13.0Hz,1H),1.91–1.89(m,1H),1.84–1.78(m,1H),1.74–1.72(m,1H),1.65(d,J=13.0Hz,1H),1.50(s,9H),1.48–1.47(m,1H),1.31–1.27(m,6H)。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(9.6mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到4.4g(8.0mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.9g,8.0mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭,并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×130mL)。合并的有机部分用无水Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(3.4g,75%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.67(s,1H),8.29(s,1H),8.17(d,J=5.1Hz,1H),7.93(d,J=8.5Hz,2H),7.85(d,J=8.5Hz,2H),6.93(dd,J1=5.1Hz,J2=1.4Hz,1H),5.93(s,2H),5.68(d,J=5.0Hz,1H),4.32–4.26(m,2H),3.95(d,J=12.5Hz,1H),3.42(td,J1=13.1Hz,J2=3.1Hz,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.11(d,J=13.3Hz,1H),1.92–1.87(m,1H),1.75(d,J=13.1Hz,1H),1.66–1.64(m,1H),1.55–1.49(m,1H),1.44–1.42(m,10H),1.29(t,J=7.6Hz,3H),1.25(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):563.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(35mL)加入到3.90g(7.0mmol)步骤B的产物的甲醇(25mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×130mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(3.60g,97%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.7g,4.5mmol)、二异丙基乙胺(1.6mL,9.0mmol)和NH4Cl(1.6g,30mmol)加入到1.60g(3.0mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(17mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×90mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,以得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.20g,75%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.74(s,1H),8.27(s,1H),8.18(d,J=5.1Hz,1H),7.96(d,J=8.5Hz,2H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),6.94(dd,J1=5.2Hz,J2=1.4Hz,1H),6.67(s,1H),6.01(s,2H),5.73(s,1H),5.61–5.60(m,1H),3.93(d,J=13.0Hz,1H),3.29(td,J1=13.0Hz,J2=2.9Hz,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.23–2.13(m,2H),1.94–1.84(m,1H),1.68–1.61(m,2H),1.57–1.50(m,1H),1.46(s,9H),1.29(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-
2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(4.8mL)加入到426mg(0.80mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(6mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):434.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(672.0mg,3.90mmol)加入到281mg(0.65mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(8mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(41.2mg,0.46mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(237.7mg,75%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.96(s,1H),8.26(s,1H),8.16(d,J=5.0Hz,1H),7.93(d,J=7.9Hz,2H),7.83(d,J=6.8Hz,2H),7.03(s,1H),6.92(d,J=4.9Hz,1H),6.61–6.56(m,1H),6.32–6.27(m,3H),6.14(s,1H),6.01–5.98(m,1H),5.71(d,J=10.3Hz,1H),3.83(d,J=11.5Hz,1H),3.69(t,J=12.3Hz,1H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.43–2.40(m,1H),2.19(d,J=13.0Hz,1H),1.92–1.88(m,2H),1.72–1.69(m,1H),1.62–1.60(m,1H),1.28(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,165.7,162.6,156.2,151.9,148.2,147.6,141.3,138.4,133.8,129.8,128.7,127.8,127.4,120.1,119.8,113.9,44.4,43.0,28.8,28.0,25.8,19.7,14.6。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例74:
(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-甲基丙烯酰基 哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-甲基丙烯
酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(672.0mg,3.90mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥二氯甲烷(8mL)溶液。5min后,在0℃下加入甲基丙烯酰氯(48.1mg,0.46mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-甲基丙烯酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(245mg,75%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.22(s,1H),8.25(s,1H),8.14(d,J=4.9Hz,1H),7.91(d,J=7.7Hz,2H),7.77(d,J=6.7Hz,2H),7.02(s,1H),6.91(d,J=4.8Hz,1H),6.51(s,1H),6.24(s,2H),5.95–5.90(m,1H),5.18(s,1H),5.08(s,1H),3.85–3.83(m,1H),3.64–3.61(m,1H),2.69(q,J=7.6Hz,2H),2.34–2.32(m,1H),2.20(d,J=13.2Hz,1H),1.94(s,3H),1.92–1.87(m,1H),1.80(d,J=12.9Hz,1H),1.70(d,J=13.2Hz,1H),1.57–1.50(m,1H),1.27(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:173.0,165.9,162.8,156.2,151.9,148.2,147.5,141.1,140.5,138.3,133.8,129.6,127.5,120.1,120.0,115.9,114.0,44.2,29.8,28.8,28.1,26.0,20.5,19.9,14.5。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例75:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(672.0mg,3.90mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥二氯甲烷(8mL)溶液。5min后,在0℃下加入(E)-丁-2-烯酰氯(48.1mg,0.46mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,得到(S,E)-1-氨基-2-(1-(丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(245mg,75%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.32(s,1H),8.24(s,1H),8.12–8.11(m,1H),7.87(d,J=7.3Hz,2H),7.83–7.72(m,2H),7.29(s,1H),6.89(d,J=4.3Hz,1H),6.87–6.83(m,1H),6.69(s,1H),6.32(s,2H),6.28–6.25(m,1H),6.01–5.87(m,1H),3.81–3.80(m,1H),3.68–3.57(m,1H),2.67(q,J=7.3Hz,2H),2.40–2.39(m,1H),2.15(d,J=12.4Hz,1H),1.93–1.76(m,5H),1.68–1.66(m,1H),1.58–1.56(m,1H),1.26(t,J=7.5Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,166.0,162.8,156.1,152.0,148.3,147.5,142.7,141.2,138.3,133.6,129.5,127.3,121.7,120.1,119.9,114.0,44.3,42.8,28.7,28.0,25.8,19.7,18.4,14.5。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例76:
(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基丁-2-
烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基
丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(672.0mg,3.90mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥二氯甲烷(8mL)溶液。5min后,在0℃下加入3-甲基丁-2-烯酰氯(54.5mg,0.46mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,然后加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4,干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(3-甲基丁-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(251mg,75%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.46(s,1H),8.29(s,1H),8.13(d,J=4.9Hz,1H),7.94(d,J=8.1Hz,2H),7.80(d,J=7.3Hz,2H),7.20(s,1H),6.92(d,J=4.8Hz,1H),6.48(s,1H),6.30(s,2H),6.01–5.91(m,1H),5.77(s,1H),3.79(d,J=12.4Hz,1H),3.61–3.55(m,1H),2.69(q,J=7.6Hz,2H),2.37–2.31(m,1H),2.18(d,J=12.9Hz,1H),1.94–1.79(m,8H),1.69–1.52(m,2H),1.27(t,J=7.6Hz,3H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:169.0,166.0,162.7,156.9,151.7,148.5,146.9,146.6,141.2,138.5,133.4,129.6,127.5,120.1,119.9,118.0,114.2,43.7,43.5,28.8,27.9,26.2,25.8,20.5,19.8,14.5。MS(ESI,m/z):516.2[M+H]+。
实施例77:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(394.6mg,3.9mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(51.9mg,0.62mmol)和HATU(370.7mg,0.98mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,然后加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(194.8mg,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.04(s,1H),8.25(s,1H),8.15(d,J=5.1Hz,1H),7.92(d,J=8.4Hz,2H),7.80(d,J=8.4Hz,1.7H),7.71(d,J=8.4Hz,0.3H),6.96(s,1H),6.92–6.90(m,1H),6.30(s,1H),6.13(s,2H),5.95–5.94(m,1H),4.27(d,J=12.6Hz,1H),3.66(td,J1=13.2Hz,J2=3.0Hz,1H),2.69(q,J=7.6Hz,2H),2.40–2.30(m,1H),2.17–2.14(m,1H),2.00(s,3H),1.90–1.84(m,2H),1.72–1.68(m,1H),1.61–1.56(m,1H),1.27(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.6,162.5,156.3,155.0,151.8,147.9,147.6,141.2,138.3,133.9,129.8,127.5,120.1,119.8,113.9,90.9,73.0,44.5,43.8,28.8,27.8,25.8,19.9,14.6,4.3。MS(ESI,m/z):500.2[M+H]+。
实施例78:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶- 2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(394.6mg,3.9mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入2-氰基乙酸(52.7mg,0.62mmol)和HATU(370.7mg,0.98mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。然后,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(2-氰基乙酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(195.2mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.38(s,1H),8.19(s,1H),8.14–8.10(m,1H),7.89–7.83(m,2H),7.70–7.69(m,2H),7.08(s,1H),6.92–6.89(m,1H),6.79(s,1H),6.09–5.82(m,3H),3.87–3.81(m,1H),3.61–3.55(m,2H),3.47–3.45(m,1H),2.72–2.66(m,2H),2.23–2.14(m,2H),1.90–1.83(m,2H),1.65–1.59(m,2H),1.24–1.19(m,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.0,163.0,162.6,156.3,151.9,148.2,147.4,140.7,137.9,133.7,129.3,128.7,127.8,127.4,120.0,114.1,45.3,44.0,28.7,27.7,25.6,25.34,19.2,14.5。MS(ESI,m/z):501.2[M+H]+。
步骤B:制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基-丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-
(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下,将吡咯烷(42.7mg,0.60mmol)和TMS-Cl(65.2mg,0.60mmol)加入到环丙烷甲醛(8.4mg,0.12mmol)的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。除去冰浴,并将反应混合物搅拌10min,随后添加60.1mg(0.12mmol)步骤A的产物。将反应溶液搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-3-环丙基丙烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(33.2mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.17(s,1H),8.31(s,1H),8.18(d,J=5.0Hz,1H),7.99(d,J=8.0Hz,2H),7.83(d,J=7.9Hz,2H),6.97(d,J=4.8Hz,1H),6.56(d,J=11.2Hz,1H),6.45(s,1H),6.20(s,2H),5.88(s,1H),5.77(d,J=4.1Hz,1H),4.03–3.98(m,1H),3.84–3.78(m,1H),2.73(q,J=7.6Hz,2H),2.36–2.32(m,1H),2.21–2.17(m,1H),2.11–2.04(m,1H),2.01–1.96(m,1H),1.90–1.87(m,1H),1.78–1.70(m,2H),1.30(t,J=7.6Hz,3H),1.25–1.23(m,2H),0.93–0.83(m,2H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:166.2,165.9,165.7,164.1,162.9,156.2,151.9,147.5,138.0,133.8,129.5,129.2,127.6,127.5,120.0,115.4,114.0,107.6,45.7,45.0,28.7,28.3,25.2,19.7,15.8,14.6,10.9,10.8。MS(ESI,m/z):553.2[M+H]+。
实施例79:
(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4-甲基戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4-甲基戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-
乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
在0℃下,将吡咯烷(42.7mg,0.60mmol)和TMS-Cl(65.2mg,0.60mmol)加入到异丁醛(8.6mg,0.12mmol)的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。除去冰浴,并将反应混合物搅拌10min,随后添加60.1mg(0.12mmol)实施例78的步骤A的产物。将反应溶液搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S,E)-1-氨基-2-(1-(2-氰基-4-甲基戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(33.3mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.87(s,1H),8.27(s,1H),8.18(d,J=5.1Hz,1H),7.97(d,J=8.4Hz,2H),7.82(d,J=8.4Hz,1.5H),7.77(d,J=8.4Hz,0.5H)6.94(dd,J1=5.2Hz,J2=1.4Hz,1H),6.90(d,J=10.4Hz,1H),6.56(s,1H),6.22(s,2H),5.98–5.81(m,2H),3.88–3.74(m,1H),3.03–2.90(m,1H),2.71(q,J=7.5Hz,2H),2.36–2.18(m,2H),2.04–1.94(m,1H),1.89–1.86(m,1H),1.76–1.73(m,3H),1.29(t,J=7.6Hz,3H),1.17–1.00(m,6H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.5,162.6,160.6,156.3,151.8,147.6,140.6,138.0,134.1,129.7,129.5,127.7,127.6,120.2,120.1,114.3,113.9,109.5,45.6,45.1,31.8,30.2,28.8,25.2,21.7,21.6,20.0,14.6。MS(ESI,m/z):555.2[M+H]+。
实施例80:
(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-烯酰
基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-
烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(394.6mg,3.9mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入(E)-戊-2-烯酸(62.1mg,0.62mmol)和HATU(370.7mg,0.98mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。然后加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S,E)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(戊-2-烯酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(201.1mg,60%)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ:9.32(s,1H),8.24(s,1H),8.12(d,J=4.6Hz,1H),7.88(d,J=7.9Hz,2H),7.83–7.73(m,2H),7.30(s,1H),6.92–6.87(m,2H),6.69(s,1H),6.35(s,2H),6.23(d,J=14.6Hz,1H),6.00–5.95(m,1H),3.82–3.81(m,1H),3.65–3.63(m,1H),2.67(q,J=7.6Hz,2H),2.43–2.41(m,1H),2.23–2.14(m,3H),1.90–1.83(m,2H),1.69–1.67(m,1H),1.59–1.57(m,1H),1.26(t,J=7.6Hz,3H),1.04(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(150MHz,CDCl3)δ:167.5,166.0,162.8,156.1,152.0,149.0,148.3,147.4,141.2,138.3,133.5,129.6,127.3,120.0,119.9,119.3,114.0,44.2,42.8,28.7,28.0,25.8,25.8,19.7,14.5,12.6。MS(ESI,m/z):516.2[M+H]+。
实施例81:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-
1-(甲基氨基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1-(2,2,2-三氟乙酰氨)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃-10℃下,将三乙胺(400μL,2.82mmol)加入到528mg(0.94mmol)实施例73的步骤B的产物的二氯甲烷(5mL)溶液中,并搅拌30min。然后,将三氟乙酸酐溶液(330μL,2.35mmol)滴加到反应混合物中,并在室温下搅拌10h。反应完成后,混合物用水(50mL)稀释,并将其用饱和NaHCO3(15mL)洗涤。水层用二氯甲烷(2×15mL)洗涤,并合并有机层,用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用石油醚和乙酸乙酯(2.5:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(2,2,2-三氟乙酰氨)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为黄色油状物(305g,49%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.03(s,1H),8.30(s,1H),8.17(d,J=4.6Hz,1H),7.85–7.82(m,4H),6.95(d,J=4.6Hz,1H),5.39–5.38(m,1H),4.13–4.12(m,2H),3.93–3.91(m,1H),3.36–3.21(m,1H),2.71(q,J=7.5Hz,2H),2.22–2.17(m,1H),2.09–2.07(m,1H),1.84–1.80(m,1H),1.73–1.65(m,2H),1.50–1.48(m,1H),1.43(s,9H),1.29(t,J=7.2Hz,3H),1.14(t,J=7.0Hz,3H)。MS(ESI,m/z):659.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰氨)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在0℃-10℃下将碳酸钾(200mg,1.39mmol)加入305mg(0.46mmol)步骤A的产物的乙腈(10mL)溶液,并搅拌30min。然后,将碘甲烷溶液(90μL,1.39mmol)滴加到反应混合物,此时温度被增加至80℃,并将混合物搅拌额外的6h。反应完成后,混合物用(20mL)水稀释,并在水和乙酸乙酯(3×30mL)之间分配。合并的有机层用无水硫酸钠干燥,并在真空下蒸发。残留物通过色谱法用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,以得到产物(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(2,2,2-三氟-N-甲基乙酰氨)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为黄色油状物(130mg,42%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.88(s,1H),8.29(s,1H),8.14–8.12(m,1H),8.00–7.94(m,3H),7.91–7.89(m,1H),6.92–6.91(m,1H),5.62–5.56(m,1H),4.31–4.22(m,2H),3.92–3.80(m,1H),3.68–3.67(m,1.8H),3.50(s,1.2H),2.99–2.81(m,1H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.49–2.40(m,1H),
2.29–2.15(m,1H),1.91–1.82(m,1H),1.77–1.71(m,1H),1.66–1.60(m,1H),1.44–1.41(m,10H),1.30–1.22(m,6H)。MS(ESI,m/z):673.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在10℃-20℃下,将乙醇钠(20mg,0.29mmol)加入到130mg(0.19mmol)步骤B的产物的乙醇(5mL)溶液,并搅拌6h。反应完成后,混合物用水(100mL)稀释,并在真空下浓缩。然后,将其在水和乙酸乙酯(3×50mL)之间分配。合并的有机层用无水硫酸钠干燥,并在真空下蒸发。残留物通过色谱法用石油醚和乙酸乙酯(4:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(104mg,95%)。MS(ESI,m/z):577.3[M+H]+。
步骤D:制备(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(0.9mL)加入到104mg(0.18mmol)步骤C的产物的甲醇(3mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用乙酸乙酯(30mL)稀释,用HCl水溶液酸化,直到pH 3。混合物用水洗涤三次(3×90mL)。合并的有机层在减压下浓缩,得到(S)-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-5-羧酸(96mg,97%)。
步骤E:制备(S)-2-(5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(120mg,0.30mmol)、二异丙基乙胺(110μL,0.6mmol)和NH4Cl(110mg,2.0mmol)加入到110mg(0.20mmol)步骤D的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×70mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(60mg,55%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.06(s,1H),8.27(s,1H),8.15(d,J=5.1Hz,1H),7.98–7.91(m,4H),6.91(dd,J1=5.2Hz,J2=1.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.21(s,1H),5.52–5.51(m,1H),3.98–3.89(m,1H),3.39–3.29(m,1H),2.80(d,J=5.3Hz,3H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.14–2.12(m,1H),2.00–1.86(m,2H),1.75–1.73(m,1H),1.66–1.63(m,1H),1.53–1.48(m,1H),1.45(s,9H),1.28(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-2-
(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(0.7mL)加入到60mg(0.11mmol)步骤E的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩得到(S)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):448.2[M+H]+。
步骤G:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(85mg,0.66mmol)加入到49mg(0.11mmol)步骤F的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(8.9mg,0.10mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(28:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-4-(4-((4- 乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1-(甲基氨基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(30mg,55%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:9.14(s,1H),8.28(s,1H),8.15(d,J=5.1Hz,1H),7.98–7.94(m,4H),7.67(s,1H),7.08(s,1H),6.91(d,J=4.7Hz,1H),6.60(dd,J1=16.6Hz,J2=10.6Hz,1H),6.32–6.29(m,2H),5.89(d,J=4.6Hz,1H),5.73(d,J=10.6Hz,1H),3.85–3.83(m,1H),3.76–3.72(m,1H),2.86(d,J=5.4Hz,2.6H),2.71–2.66(m,2.4H),2.45–2.41(m,1H),2.19–2.17(m,1H),2.00–1.93(m,1H),1.89–1.87(m,1H),1.72–1.70(m,1H),1.64–1.57(m,1H),1.28(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,165.9,162.0,156.2,152.0,148.3,147.5,142.2,138.4,133.6,129.8,128.8,127.7,127.2,119.9,119.5,114.0,44.4,43.1,41.1,28.8,28.3,25.8,19.6,14.5。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例82:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氰基吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.3g,3.5mmol)、二异丙基乙胺(2.5mL,14mmol)和2-氨基异烟腈(0.5g,4.2mmol)加入到1.3g(2.8mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(2.5:1)纯化,得到(S)-2-(4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.92g,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.06(s,1H),8.75(dd,J1=4.5Hz,J2=1.3Hz,1H),8.47(dd,J1=8.4Hz,J2=1.4Hz,1H),8.34–8.29(m,4H),8.11(s,1H),7.47(dd,J1=8.4Hz,J2=4.5Hz,1H),5.43–5.42(m,1H),4.39–4.30(m,3H),4.04–4.01(m,1H),2.79–2.74(m,1H),2.58–2.55(m,1H),1.88–1.82(m,2H),1.79–1.76(m,1H),1.71–1.67(m,1H),1.54(s,9H),1.36(t,J=7.2Hz,3H)。MS(ESI,m/z):545.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙
氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(2.1mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入0.92g(1.7mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(0.4g,1.7mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭,并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.5g,53%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.79(s,1H),8.73(s,1H),8.45(d,J=5.0Hz,1H),7.92(d,J=7.8Hz,2H),7.87(d,J=8.4Hz,2H),7.29–7.27(m,1H),5.91(s,2H),5.68–5.67(m,1H),4.33–4.26(m,2H),3.97–3.93(m,1H),3.45–3.38(m,1H),2.12–2.06(m,2H),1.92–1.87(m,1H),1.76–1.73(m,1H),1.66–1.63(m,1H),1.53–1.50(m,1H),1.44(s,9H),1.28–1.25(m,3H)。MS(ESI,m/z):560.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氰基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(4.5mL)加入到0.5g(0.9mmol)步骤B的产物的甲醇(5mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用(50mL)水稀释,用HCl水溶液酸化,直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(0.4g,80%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(0.4g,1.1mmol)、二异丙基乙胺(0.4mL,2.2mmol)和NH4Cl(0.4g,7.3mmol)加入到0.4g(0.7mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.2g,54%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.82(s,1H),8.72(t,J=1.1Hz,1H),8.48(dd,J1=5.0Hz,J2=0.8Hz,1H),7.95(d,J=8.6Hz,2H),7.90(d,J=8.5Hz,2H),7.29(dd,J1=5.0Hz,J2=1.4Hz,1H),6.88(s,1H),6.00(s,2H),5.62–5.58(m,2H),3.95–3.92(m,1H),3.30–3.23(m,1H),2.31–2.21(m,1H),2.17–2.13(m,1H),1.95–1.86(m,1H),1.77–1.74(m,1H),1.70–1.65(m,1H),1.56–1.51(m,1H),1.46(s,9H)。MS(ESI,m/z):531.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-
2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(0.66mL)加入到60mg(0.11mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):431.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氰基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(67mg,0.66mmol)加入到48mg(0.11mmol)步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(8.4mg,0.10mmol)和HATU(63mg,0.16mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(44mg,80%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.45(s,1H),8.66(s,1H),8.43(d,J=5.0Hz,1H),7.84(d,J=8.5Hz,2H),7.75(d,J=8.4Hz,2H),7.33(s,1H),7.26–7.24(m,1H),6.46(s,1H),6.13(s,2H),5.91–5.90(m,1H),4.28–4.25(m,1H),3.66–3.59(m,1H),2.41–2.31(m,1H),2.17–2.14(m,1H),2.00(s,3H),1.88–1.85(m,2H),1.73–1.69(m,1H),1.62–1.57(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.2,162.7,155.0,152.7,149.2,148.2,141.2,138.7,132.7,129.6,127.4,122.5,121.2,120.5,116.7,116.5,91.2,72.9,44.5,43.8,27.8,25.7,19.8,4.3。MS(ESI,m/z):497.1[M+H]+。
实施例83:(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(114μL,0.66mmol)加入到48mg(0.11mmol)实施例82的步骤E的产物的干燥二氯甲烷(3mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(6.2μL,0.10mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×30mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氰基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(43mg,80%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.52(s,1H),8.66(s,1H),8.42(d,J=4.6Hz,1H),7.85(d,J=8.2Hz,2H),7.82(d,J=8.2Hz,2H),7.48(s,1H),7.24(d,J=5.0Hz,1H),6.60–6.56(m,2H),6.33–6.27(m,4H),5.72–5.70(m,1H),3.83–3.81(m,1H),3.70–3.67(m,1H),2.43–2.41(m,1H),2.19–2.17(m,1H),1.92–1.85(m,2H),1.71–1.60(m,2H)。MS(ESI,m/z):485.1[M+H]+。
实施例84:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(7.2g,19mmol)、二异丙基乙胺(13.6mL,79mmol)和4-(三氟甲基)吡啶-2-胺(3.8g,24mmol)加入到7.0g(16mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(50mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(5.4g,57%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.21(s,1H),9.13(s,1H),8.72(s,1H),8.45(d,J=5.2Hz,1H),8.17(d,J=8.4Hz,2H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.28–7.27(m,1H),5.41–5.40(m,1H),4.31(q,J=7.1Hz,2H),2.83–2.76(m,1H),2.53–2.50(m,1H),1.95–1.90(m,1H),1.86–1.79(m,2H),1.75–1.71(m,1H),1.68–1.64(m,1H),1.50(s,9H),1.48–1.46(m,1H),1.30(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):588.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(11mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到5.4g(9.1mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(2.5g,10.9mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×150mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.7g,49%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.45(s,1H),8.71(s,1H),8.37(d,J=5.2Hz,1H),7.91(d,J=8.6Hz,2H),7.82(d,J=8.5Hz,2H),7.23(dd,J1=5.1Hz,J2=0.9Hz,1H),5.89(s,2H),5.69–5.68(m,1H),4.28–4.20(m,2H),3.96–3.93(m,1H),3.48–3.41(m,1H),2.09–2.06(m,1H),1.96–1.81(m,2H),1.73–1.69(m,1H),1.62–1.59(m,1H),1.51–1.46(m,1H),1.41(s,9H),1.19(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):603.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(23mL)加入到2.7g(4.5mmol步骤B的产物的甲醇(20mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化,直到pH3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(2.5g,96%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.5g,6.5mmol)、二异丙基乙胺(2.2mL,12.9mmol)和NH4Cl(2.3g,43mmol)加入到2.5g(4.3mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(16mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.5g,61%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.80(s,1H),8.71(s,1H),8.49(d,J=5.1Hz,1H),7.96(d,J=8.5Hz,2H),7.90(d,J=8.4Hz,2H),7.30(dd,J1=5.2Hz,J2=0.9Hz,1H),6.89(s,1H),6.08(s,1H),6.00(s,2H),5.60–5.59(m,1H),3.95–3.91(m,1H),3.30–3.23(m,1H),2.31–2.22(m,1H),2.17–2.13(m,1H),1.95–1.86(m,1H),1.77–1.74(m,1H),1.70–1.65(m,1H),1.58–1.51(m,1H),1.46(s,9H)。MS(ESI,m/z):574.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-
(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.2mL)加入到120mg(0.21mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):474.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(155mg,1.2mmol)加入到100mg(0.21mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(16.2mg,0.18mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(28:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(65mg,58%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.44(s,1H),8.67(s,1H),8.43(d,J=4.8Hz,1H),7.85(d,J=8.2Hz,2H),7.78–7.76(m,2H),7.40(s,1H),7.26–7.25(m,1H),6.62–6.52(m,2H),6.31–6.26(m,3H),6.00–5.96(m,1H),5.72(d,J=10.5Hz,1H),3.85–3.82(m,1H),3.70–3.64(m,1H),2.45–2.42(m,1H),2.21–2.18(m,1H),1.97–1.85(m,2H),1.73–1.70(m,1H),1.63–1.60(m,1H)。13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,166.1,162.7,152.9,149.0,148.4,141.4,140.6(q,J=33.0Hz),138.7,132.9,129.7,128.8,127.7,127.3,122.8(q,J=271.5Hz),120.2,115.5,110.6,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):528.1[M+H]+。
实施例85:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(127mg,1.26mmol)加入到100mg(0.21mmol)实施例84的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(15.8mg,0.19mmol)和HATU(120mg,0.31mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(45mg,40%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.26(s,1H),8.68(s,1H),8.46–8.45(m,1H),7.92–7.89(m,2H),7.84–7.80(m,2H),7.27(d,J=4.8Hz,1H),7.13(s,1H),6.24(s,1H),6.14(s,2H),5.94–5.92(m,1H),4.29–4.26(m,1H),3.67–3.60(m,1H),2.43–2.34(m,1H),2.19–2.15(m,1H),2.01(s,3H),1.93–1.86(m,2H),1.74–1.70(m,1H),1.63–1.58(m,1H)。13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:160.0,162.6,155.0,152.8,149.1,148.1,141.3,140.7(q,J=33.0Hz),138.7,133.1,129.8,127.4,122.8(q,J=271.5Hz),120.2,115.6,110.5,91.1,72.9,44.5,43.8,27.8,25.7,19.8,4.3。MS(ESI,m/z):540.1[M+H]+。
实施例86:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.0g,5.4mmol)、二异丙基乙胺(3.9mL,22.5mmol)和5-氯吡啶-2-胺(0.9g,6.7mmol)加入到2.0g(4.5mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,以得到产物(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.3g,92%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.94(s,1H),8.58(s,1H),8.41(d,J=8.9Hz,1H),8.28(d,J=2.4Hz,1H),8.19(d,J=8.3Hz,2H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),7.73(dd,J1=8.9Hz,J2=2.5Hz,1H),5.41–5.40(m,1H),4.36–4.32(m,2H),2.77–2.72(m,1H),2.57–2.55(m,1H),2.03–1.99(m,1H),1.85–1.81(m,1H),1.77–1.75(m,1H),1.68–1.66(m,2H),1.53(s,9H),1.50–1.48(m,1H),1.34(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):554.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下将六甲基二硅氮烷锂(5.0mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到2.3g(4.1mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液,并搅拌20min,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟基胺(1.1g,4.9mmol)。将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭,并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.7g,30%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.57(s,1H),8.41(d,J=8.9Hz,1H),8.28(d,J=2.4Hz,1H),7.92(d,J=8.5Hz,2H),7.87(d,J=8.5Hz,2H),7.74(dd,J1=8.9Hz,J2=2.5Hz,1H),5.94(s,2H),5.68–5.67(m,1H),4.33–4.27(m,2H),3.97–3.95(m,1H),3.44–3.39(m,1H),2.12–2.10(m,1H),1.83–1.87(m,1H),1.76–1.74(m,1H),1.66–1.64(m,1H),1.55–1.51(m,1H),1.45(s,9H),1.34–1.29(m,1H),1.26(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):569.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氯吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(6mL)加入到0.7g(1.2mmol)步骤B的产物的甲醇(7mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化,直到pH3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(0.6g,93%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(7.2g,1.9mmol)、二异丙基乙胺(0.6mL,3.6mmol)和NH4Cl(6.7g,12mmol)加入到0.68g(1.2mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×100mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.45g,69%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.61(s,1H),8.39(d,J=8.9Hz,1H),8.28(d,J=2.4Hz,1H),7.95(d,J=8.3Hz,2H),7.87(d,J=8.2Hz,2H),7.73(dd,J1=8.9Hz,J2=2.5Hz,1H),6.72(s,1H),6.01(s,2H),5.61–5.60(m,1H),5.50(s,1H),3.95–3.93(m,1H),3.31–3.26(m,1H),2.23–2.20(m,1H),2.16–2.14(m,1H),1.93–1.87(m,1H),1.77–1.74(m,1H),1.68–1.66(m,1H),1.57(s,9H),1.55–1.52(m,1H)。MS(ESI,m/z):540.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.1mL)加入到100mg(0.18mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):440.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(142mg,1.1mmol)加入到79mg(0.18mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(11.7mg,0.13mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(28:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(50mg,56%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:9.14(s,1H),8.35(d,J=8.9Hz,1H),8.23(d,J=2.1Hz,1H),7.84(d,J=8.3Hz,2H),7.77–7.75(m,2H),7.70(dd,J1=8.9Hz,J2=2.4Hz,1H),7.26(s,1H),6.58(dd,J1=16.4Hz,J2=10.7Hz,1H),6.33–6.27(m,4H),5.97–5.96(m,1H),5.72(d,J=10.7Hz,1H),3.84–3.81(m,1H),3.70–3.64(m,1H),2.45–2.42(m,1H),2.22–2.18(m,1H),1.97–1.92(m,1H),1.89–1.85(m,1H),1.73–1.70(m,1H),1.63–1.60(m,1H)。13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,165.8,162.6,150.2,148.3,146.6,141.3,138.5,138.2,133.2,129.7,128.8,127.7,127.3,127.0,120.1,115.2,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):494.2[M+H]+。
实施例87:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.0g,5.4mmol)、二异丙基乙胺(3.8mL,22mmol)和4-溴吡啶-2-胺(1.2g,6.7mmol)加入到2.0g(4.5mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.4g,52%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.97(s,1H),8.69(s,1H),8.68(s,1H),8.19(d,J=8.1Hz,2H),8.12(d,J=5.3Hz,1H),7.95(d,J=8.2Hz,2H),7.24(d,J=5.3Hz,1H),5.40(d,J=3.8Hz,1H),4.36–4.32(m,2H),2.77–2.73(m,1H),2.56(d,J=13.0Hz,1H),1.97–1.91(m,1H),1.85–1.80(m,1H),1.77–1.75(m,1H),1.68–1.63(m,2H),1.53(s,9H),1.51–1.49(m,1H),1.34(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):598.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(2.7mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入1.4g(2.3mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(0.6g,2.7mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机部分用无水Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.7g,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.71(s,1H),8.69(d,J=1.5Hz,1H),8.12(d,J=5.3Hz,1H),7.93(d,J=8.5Hz,2H),7.87(d,J=8.5Hz,2H),7.25(dd,J1=5.3Hz,J2=1.7Hz,1H),5.93(s,2H),5.68(d,J=4.9Hz,1H),4.34–4.26(m,2H),3.95(d,J=12.8Hz,1H),3.42(td,J1=13.1Hz,J2=3.1Hz,1H),2.12–2.10(m,1H),1.92–1.86(m,1H),1.75(d,J=13.1Hz,1H),1.66–1.64(m,2H),1.56–1.49(m,1H),1.44(s,9H),1.26(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):613.1[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(6mL)加入到0.72g(1.2mmol)步骤B的产物的甲醇(10mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(0.70g,99%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(0.7g,1.8mmol)、二异丙基乙胺(0.6mL,3.6mmol)和NH4Cl(0.6g,12mmol)加入到0.7g(1.2mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.5g,71%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.08(s,1H),8.65(d,J=1.5Hz,1H),8.10(d,J=5.3Hz,1H),7.88(d,J=8.3Hz,2H),7.78(d,J=8.3Hz,2H),7.23(dd,J1=5.3Hz,J2=1.7Hz,1H),6.91(s,1H),6.19(s,1H),6.03(s,2H),5.61–5.60(m,1H),3.94(d,J=12.9Hz,1H),3.30(td,J1=13.1Hz,J2=2.9Hz,1H),2.23–2.21(m,1H),2.14(d,J=13.6Hz,1H),1.92–1.86(m,1H),1.74(d,J=13.2Hz,1H),1.67–1.65(m,1H),1.57–1.51(m,1H),1.46(s,9H)。MS(ESI,m/z):584.1[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(0.3mL)加入到30mg(0.05mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):484.1[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(40mg,0.31mmol)加入到24.2mg(0.05mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(4.1mg,0.045mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(20mg,74%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:8.95(s,1H),8.67(d,J=1.3Hz,1H),8.12(d,J=5.3Hz,1H),7.93(d,J=8.2Hz,2H),7.87(d,J=7.3Hz,2H),7.24(dd,J1=5.2Hz,J2=1.3Hz,1H),7.16(s,1H),6.62–6.57(m,1H),6.32–6.29(m,3H),5.97(s,2H),5.74(d,J=10.5Hz,1H),3.84(d,J=13.0Hz,1H),3.68(t,J=12.4Hz,1H),2.46–2.45(m,1H),2.21–2.19(m,1H),1.94–1.88(m,2H),1.74–1.71(m,1H),1.64–1.62(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,165.7,162.5,152.5,148.5,148.3,141.4,138.8,134.8,133.2,129.9,128.8,127.8,127.4,123.5,120.0,117.6,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):538.1[M+H]+。
实施例88:
(S)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌
啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(丁-2-炔酰
基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(31mg,0.31mmol)加入到24.2mg(0.05mmol)实施例87的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(3.8mg,0.045mmol)和HATU(28.5mg,0.075mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-溴吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(17mg,62%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.18(s,1H),8.63(d,J=1.4Hz,1H),8.08(d,J=5.3Hz,1H),7.87(d,J=8.3Hz,2H),7.77(d,J=8.3Hz,2H),7.22(dd,J1=5.3Hz,J2=1.6Hz,1H),7.11(s,1H),6.37(s,1H),6.13(s,2H),5.94–5.93(m,1H),4.27(d,J=12.7Hz,1H),3.64(td,J1=13.2Hz,J2=2.9Hz,1H),2.38–2.34(m,1H),2.17–2.15(m,1H),2.00(s,3H),1.90–1.84(m,2H),1.72–1.70(m,1H),1.63–1.58(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.9,162.6,155.0,152.6,148.5,148.1,141.2,138.5,134.7,133.2,129.7,127.4,123.4,120.2,117.6,91.0,73.0,44.5,43.8,27.8,25.7,19.8,4.3。MS(ESI,m/z):550.1[M+H]+。
实施例89:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯 基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(4.6g,12.2mmol)、二异丙基乙胺(8.7mL,50.5mmol)和4-碘吡啶-2-胺(3.3g,15.1mmol)加入到4.5g(10.1mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(4.1g,63%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.94(s,1H),8.90(s,1H),8.63(s,1H),8.19(d,J=8.4Hz,2H),7.98–7.95(m,3H),7.46(dd,J1=5.2Hz,J2=1.4Hz,1H),5.41(d,J=4.6Hz,1H),4.37–4.32(m,2H),2.77–2.72(m,1H),2.56(d,J=11.8Hz,1H),1.86–1.84(m,1H),1.78–1.75(m,2H),1.69–1.66(m,2H),1.53(s,9H),1.52–1.50(m,1H),1.34(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):646.1[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(7.7mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入4.1g(6.4mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.8g,7.7mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×150mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.6g,38%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.89(d,J=1.2Hz,1H),8.74(s,1H),7.94–7.91(m,3H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),7.44(d,J=5.2Hz,1H),5.92(s,2H),5.68(d,J=4.9Hz,1H),4.32–4.26(m,2H),3.95(d,J=12.8Hz,1H),3.41(td,J1=13.0Hz,J2=3.0Hz,1H),2.12–2.08(m,1H),1.93–1.87(m,1H),1.76–1.73(m,2H),1.66–1.63(m,1H),1.54–1.50(m,1H),1.44(s,9H),1.25(t,J=7.2Hz,3H)。MS(ESI,m/z):661.1[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(12mL)加入到1.6g(2.5mmol)步骤B的产物的甲醇(15mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.5g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.3g,3.5mmol)、二异丙基乙胺(1.2mL,7.1mmol)和NH4Cl(1.3g,23mmol)加入到1.5g(2.3mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.9g,62%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.87(d,J=1.0Hz,1H),8.67(s,1H),7.98–7.93(m,3H),7.87(d,J=8.4Hz,2H),7.46(dd,J1=5.2Hz,J2=1.4Hz,1H),6.80(s,1H),6.01(s,2H),5.68(s,1H),5.60(d,J=4.5Hz,1H),3.93(d,J=12.4Hz,1H),3.28(td,J1=13.0Hz,J2=3.0Hz,1H),2.26–2.13(m,2H),1.94–1.87(m,1H),1.77–1.65(m,2H),1.57–1.52(m,1H),1.46(s,9H)。MS(ESI,m/z):632.1[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.7mL)加入到185mg(0.29mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):532.0[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(224mg,1.74mmol)加入到154mg(0.29mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(23.6mg,0.26mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(112mg,66%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:9.29(s,1H),8.82(d,J=1.1Hz,1H),7.91(d,J=5.1Hz,1H),7.82(d,J=8.4Hz,2H),7.73(d,J=7.8Hz,2H),7.41(dd,J1=5.2Hz,J2=1.0Hz,1H),7.36(s,1H),6.58(dd,J1=16.3Hz,J2=10.7Hz,2H),6.30–6.26(m,3H),5.97–5.96(m,1H),5.71(d,J=10.6Hz,1H),3.82(d,J=12.9Hz,1H),3.67(t,J=12.4Hz,1H),2.42–2.39(m,1H),2.18(d,J=12.6Hz,1H),1.95–1.84(m,2H),1.72–1.59(m,2H)。MS(ESI,m/z):586.0[M+H]+。
实施例90:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(172mg,1.7mmol)加入到154mg(0.29mmol)实施例89的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(22mg,0.26mmol)和HATU(167mg,0.44mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-碘吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(90mg,52%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.26(s,1H),8.81(s,1H),7.90(d,J=5.2Hz,1H),7.83(d,J=8.3Hz,2H),7.73(d,J=8.3Hz,2H),7.40(dd,J1=5.2Hz,J2=1.3Hz,1H),7.20(s,1H),6.57(s,1H),6.13(s,2H),5.92(d,J=4.7Hz,1H),4.26(d,J=12.7Hz,1H),3.65(td,J1=13.1Hz,J2=2.7Hz,1H),2.36–2.33(m,1H),2.17–2.13(m,1H),2.00(s,3H),1.87–1.84(m,2H),1.72–1.69(m,1H),1.61–1.56(m,1H)。MS(ESI,m/z):598.1[M+H]+。
实施例91:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(5.1g,13.5mmol)、二异丙基乙胺(9.7mL,56.4mmol)和4-(4-氟苯基)吡啶-2-胺(3.1g,16.8mmol)加入到5.0g(11.2mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(4.6g,67%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:9.99(s,1H),8.93(s,1H),8.69(s,1H),8.31(d,J=5.2Hz,1H),8.19(d,J=8.3Hz,2H),7.99(d,J=8.4Hz,2H),7.72–7.69(m,2H),7.27–7.25(m,1H),7.19–7.15(m,2H),5.41–5.40(m,1H),4.35–4.30(m,2H),2.79–2.72(m,1H),2.56–2.53(m,1H),1.87–1.73(m,3H),1.68–1.65(m,1H),1.52(s,9H),1.49–1.48(m,2H),1.33(t,J=7.2Hz,3H)。MS(ESI,m/z):614.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(9.0mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到4.6g(7.6mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(2.1g,9.1mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次(3×150mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(2:1)的柱色谱,以得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(3.0g,63%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.70(s,1H),8.68(s,1H),8.35(d,J=4.7Hz,1H),7.96(d,J=8.6Hz,2H),7.87(d,J=8.5Hz,2H),7.74–7.72(m,2H),7.28(dd,J1=5.3Hz,J2=1.6Hz,1H),7.20–7.16(m,2H),5.90(s,2H),5.68–5.67(m,1H),4.29–4.25(m,2H),3.97–3.93(m,1H),3.43–3.39(m,1H),2.13–2.09(m,1H),1.90–1.87(m,1H),1.75–1.72(m,1H),1.64–1.65(m,2H),1.51–1.48(m,1H),1.44(s,9H),1.26(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):629.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氟苯
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(24mL)加入到3.0g(4.7mmol)步骤B的产物的甲醇(17mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(2.8g,99%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.7g,7.0mmol)、二异丙基乙胺(2.4mL,14.1mmol)和NH4Cl(2.5g,47mmol)加入到2.8g(4.7mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,以得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.5g,53%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.23(s,1H),8.62(s,1H),8.29(d,J=5.2Hz,1H),7.92(d,J=8.4Hz,2H),7.79(d,J=8.3Hz,2H),7.70–7.65(m,2H),7.23(dd,J1=5.2Hz,J2=1.6Hz,1H),7.18–7.12(m,2H),7.00(s,1H),6.37(s,1H),6.05(s,2H),5.61–5.60(m,1H),3.95–3.92(m,1H),3.33–3.26(m,1H),2.27–2.21(m,1H),2.15–2.12(m,1H),1.93–1.83(m,1H),1.75–1.72(m,1H),1.67–1.64(m,1H),1.54–1.48(m,1H),1.45(s,9H)。MS(ESI,m/z):600.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-
(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.8mL)加入到180mg(0.30mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(6mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):500.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(232mg,1.80mmol)加入到150mg(0.30mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(24.4mg,0.27mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇纯化(30:1),以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(120mg,72%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.24(s,1H),8.62(s,1H),8.29(d,J=5.2Hz,1H),7.92(d,J=8.4Hz,2H),7.82(d,J=7.8Hz,2H),7.70–7.66(m,2H),7.24–7.22(m,2H),7.18–7.13(m,2H),6.59(dd,J1=16.5Hz,J2=10.7Hz,1H),6.43(s,1H),6.33–6.26(m,3H),5.98–5.97(m,1H),5.72(d,J=10.6Hz,1H),3.84–3.81(m,1H),3.70–3.65(m,1H),2.44–2.41(m,1H),2.20–2.17(m,1H),1.92–1.85(m,2H),1.73–1.68(m,1H),1.62–1.59(m,1H)。MS(ESI,m/z):554.2[M+H]+。
实施例92:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(172mg,1.7mmol)加入到145mg(0.29mmol)实施例91的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(22mg,0.26mmol)和HATU(167mg,0.44mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(85mg,52%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.57(s,1H),8.53(s,1H),8.21–8.19(m,1H),7.84–7.82(m,2H),7.72–7.70(m,2H),7.63–7.60(m,2H),7.40(s,1H),7.16–7.15(m,1H),7.12–7.08(m,2H),6.94(s,1H),6.12(s,2H),5.91(d,J=5.4Hz,1H),4.25(d,J=12.2Hz,1H),3.68–3.62(m,1H),2.32–2.26(m,1H),2.14–2.10(m,1H),1.96(s,3H),1.84–1.81(m,2H),1.67–1.54(m,2H)。MS(ESI,m/z):566.2[M+H]+。
实施例93:(R)-2-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(3R)-1-3-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基-羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-
2-基)哌啶-1,3-二羧酸叔丁酯
将(R)-1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-羧酸(7.1g,31mmol)和二异丙基乙胺(5.6mL,32mmol)加入到10g(29mmol)实施例1的步骤C的产物的乙腈(50mL)溶液。混合物在室温下搅拌3h,然后蒸发掉所有挥发物。残留物用水(100mL)稀释,并用乙酸乙酯(300mL)萃取。分离有机相,用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过快速柱色谱用石油醚和乙酸乙酯(7:1)纯化,以得到(3R)-1-3-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)哌啶-1,3-二羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(12.8g,90%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.13(d,J=7.9Hz,2H),8.02–8.00(m,2H),6.27(s,1H),4.39(q,J=7.1Hz,2H),4.23(q,J=7.1Hz,2H),4.16–4.07(m,1H),3.99–3.80(m,1H),3.03–2.98(m,1H),2.80–2.74(m,1H),2.63–2.58(m,1H),2.14–2.06(m,1H),1.74–1.60(m,2H),1.42–1.38(m,13H),1.19(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):492.2[M+H]+。
步骤B:制备(R)-3-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)
哌啶-1-羧酸叔丁酯
在150mL耐压瓶中,将NH4OAc(21g,264mmol)加入到11g(22mmol)步骤A的产物的二甲苯(20mL)溶液。反应在140℃下加热3.5h。冷却后,溶液在乙酸乙酯(500mL)和水(200mL)之间分配。浓缩有机层,并且残留物通过色谱法用石油醚和乙酸乙酯(5:1)纯化,以得到(R)-3-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(2.8g,27%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.24(s,1H),8.06–8.00(m,4H),4.40–4.28(m,4H),4.13–3.96(m,1H),3.73–3.49(m,2H),3.36–3.06(m,2H),2.54–2.28(m,1H),2.09–2.01(m,2H),1.51–1.47(m,10H),1.39(t,J=7.1Hz,3H),1.34–1.31(m,3H)。MS(ESI,m/z):472.2[M+H]+。
步骤C:制备(R)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪
唑-4-基)苯甲酸
将氢氧化锂水溶液(2mol/L,30mL)加入到2.8g(5.9mmol)步骤B的产物的1,4-二烷(30mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(R)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)-5-(乙氧基-羰基)-1H-咪唑-4-基)苯甲酸(2.3g,88%)。
步骤D:制备(R)-3-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
搅拌2.3g(5.2mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液,并加入HATU(2.4g,6.2mmol)、二异丙基乙胺(4.5mL,26mmol)和4-乙基吡啶-2-胺(1.0g,7.8mmol)。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,以得到(R)-3-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.3g,81%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.85(s,1H),8.28(s,1H),8.15(d,J=5.0Hz,1H),8.08–8.03(m,2H),7.94(d,J=7.9Hz,2H),6.91(d,J=5.0Hz,1H),4.34–4.28(m,2H),4.16–3.98(m,1H),3.71–3.46(m,2H),3.26–3.12(m,2H),2.69(q,J=7.6Hz,2H),2.50–2.33(m,1H),2.05–1.95(m,1H),1.55–1.51(m,2H),1.45(s,9H),1.32(t,J=7.0Hz,3H),1.27(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
步骤E:制备(R)-3-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下搅拌2.3g(4.2mmol)步骤D的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液,并缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(5.1mL,1M四氢呋喃溶液)。在混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.0g,4.2mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯(3×200mL)洗涤三次。合并的有机部分用Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(2:1)的柱色谱,以得到期望产物(R)-3-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g,55%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.65(s,1H),8.29(s,1H),8.18(d,J=5.1Hz,1H),7.94(d,J=8.4Hz,2H),7.80(d,J=8.4Hz,2H),6.93(dd,J1=5.1Hz,J2=1.1Hz,1H),5.36(s,2H),4.30–4.24(m,3H),4.14–4.04(m,1H),3.30–3.06(m,2H),2.89–2.78(m,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.09–2.06(m,1H),1.96–1.88(m,1H),1.85–1.81(m,1H),1.63–1.55(m,1H),1.45(s,9H),1.29(t,J=7.6Hz,3H),1.22(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):563.2[M+H]+。
步骤F:制备(R)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
搅拌1.3g(2.3mmol)步骤E的产物的甲醇(10mL)溶液,并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,12mL),然后在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩以得到(R)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-3-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.14g,93%)。
步骤G:制备(R)-3-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
搅拌280mg(0.5mmol)步骤F的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液,并加入HATU(300mg,0.75mmol)、二异丙基乙胺(270μL,1.5mmol)和NH4Cl(280mg,5mmol)。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,以得到(R)-3-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(220mg,82%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.87(s,1H),8.25(s,1H),8.16(d,J=4.9Hz,1H),7.97(d,J=7.7Hz,2H),7.72(d,J=7.6Hz,2H),6.93(d,J=4.9Hz,1H),5.92–5.82(m,2H),5.58(s,2H),4.24–4.05(m,2H),3.25–3.21(m,1H),3.15–3.04(m,1H),2.87–2.78(m,1H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.09–2.07(m,1H),1.96–1.90(m,1H),1.83–1.80(m,1H),1.59–1.56(m,1H),1.45(s,9H),1.28(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤H:制备(R)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-
3-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(2.5mL)加入到220mg(0.41mmol)步骤G的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅1h,然后浓缩,以得到(R)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-3-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):434.2[M+H]+。
步骤I:制备(R)-2-(1-丙烯酰基哌啶-3-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(318mg,2.46mmol)加入到178mg(0.41mmol)步骤H的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(32.6mg,0.36mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,以得到(R)-2-(1-丙烯酰基-哌啶-3-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(112mg,56%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.15–9.11(m,1H),8.22(s,1H),8.14–8.12(m,1H),7.95–7.89(m,2H),7.67(d,J=8.0Hz,2H),6.91–6.90(m,1H),6.66–6.55(m,1H),6.46(s,0.6H),6.26–6.22(m,2H),5.96(s,0.4H),5.70–5.61(m,3H),4.70–4.61(m,1H),4.23–4.20(m,0.4H),3.99–3.96(m,0.6H),3.43–3.37(m,0.4H),3.27–3.13(m,1.6H),3.03–2.97(m,0.6H),2.75–2.65(m,2.4H),2.10–1.84(m,3H),1.66–1.52(m,1H),1.26(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(DMSO,150MHz)δ:165.6,164.3,162.5,154.6,152.4,149.8,147.7,138.0,135.8,132.0,128.6,127.7,127.1,126.9,125.1,119.6,113.9,49.1,45.6,45.3,42.0,33.7,32.8,29.4,28.9,27.9,25.6,24.3,14.4。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例94:
(S)-2-(1-丙烯酰基氮杂环庚烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(2S)-1-叔丁基-2-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基-羰基)苯基)-1,3-二氧
代丙烷-2-基)氮杂环庚烷-1,2-二羧酸酯
将(S)-1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-2-羧酸(1.7g,7mmol)和二异丙基乙胺(1.4mL,7.7mmol)加入2.4g(7mmol)实施例1的步骤C的产物的乙腈(20mL)溶液。混合物在室温下搅拌3h,然后蒸发掉所有挥发物。残留物用水(100mL)稀释,并用乙酸乙酯(200mL)萃取。分离有机相,用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过快速柱色谱用石油醚和乙酸乙酯(8:1)纯化,以得到(2S)-1-2-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基-羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)氮杂环庚烷-1,2-二羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(3.4g,96%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.15–8.12(m,2H),8.05–8.00(m,2H),6.29–6.25(m,1H),4.83–4.54(m,1H),4.44–4.38(m,2H),4.27–4.21(m,2H),3.98–3.77(m,1H),3.03–2.92(m,1H),2.50–2.30(m,1H),1.93–1.87(m,1H),1.81–1.67(m,3H),1.45–1.30(m,15H),1.23–1.19(m,3H)。MS(ESI,m/z):506.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)
氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯
在15mL耐压瓶中,将NH4OAc(3g,38mmol)加入到1.6g(3.1mmol)步骤A的产物的二甲苯(5mL)溶液。反应在140℃下加热3.5h。冷却后,将溶液在乙酸乙酯(200mL)和水(100mL)之间分配。浓缩有机层,并且残留物通过色谱法用石油醚和乙酸乙酯(6:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(360mg,24%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:11.49(s,1H),8.09–8.02(m,4H),5.12–4.98(m,1H),4.42–4.25(m,4H),3.64–3.53(m,1H),3.07–2.94(m,1H),2.45–2.32(m,2H),2.01–1.96(m,1H),1.86–1.74(m,2H),1.54–1.47(m,10H),1.41–1.38(m,5H),1.30(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-2-基)-5-(乙氧基羰基)-
1H-咪唑-4-基)苯甲酸
将氢氧化锂水溶液(2mol/L,2mL)加入到360mg(0.7mmol)步骤B的产物的1,4-二烷(2mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-4-(2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-2-基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-4-基)苯甲酸(300mg,93%)。
步骤D:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯
搅拌430mg(0.94mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液,并加入HATU(430mg,1.13mmol)、二异丙基乙胺(810μL,4.7mmol)和4-乙基吡啶-2-胺(175mg,1.41mmol)。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(320mg,61%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:10.50(s,1H),8.59(s,1H),8.29(s,1H),8.18(d,J=5.1Hz,1H),8.13(d,J=8.3Hz,2H),7.95(d,J=8.4Hz,2H),6.93(d,J=5.2Hz,1H),5.12–5.09(m,1H),4.36–4.28(m,2H),3.65–3.62(m,1H),2.99–2.95(m,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.46–2.32(m,2H),2.02–1.99(m,1H),1.87–1.85(m,1H),1.78–1.75(m,1H),1.55–1.53(m,1H),1.51–1.49(m,9H),1.42–1.39(m,2H),1.33–1.28(m,6H)。MS(ESI,m/z):562.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯
搅拌320mg(0.57mmol)步骤D的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液,并在-10℃下缓慢加入六甲基二硅氮烷锂(700μL,1M四氢呋喃溶液)。在混合物搅拌10min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(133mg,0.57mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)的柱色谱,以得到期望产物(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(240mg,73%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.60(s,1H),8.29(s,1H),8.19(d,J=5.1Hz,1H),7.92(d,J=8.3Hz,2H),7.80(d,J=8.3Hz,2H),6.93(d,J=5.0Hz,1H),6.64(s,2H),5.43(dd,J1=11.8Hz,J2=6.7Hz,1H),4.31–4.23(m,2H),3.71–3.68(m,1H),3.37–3.33(m,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.29–2.17(m,2H),1.96–1.93(m,1H),1.89–1.82(m,1H),1.77–1.75(m,1H),1.56–1.50(m,1H),1.46–1.43(m,9H),1.41–1.37(m,2H),1.29(t,J=7.6Hz,3H),1.22(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):577.3[M+H]+。
步骤F:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-2-基)-4-(4-((4-乙
基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
搅拌240mg(0.41mmol)步骤E的产物的甲醇(4mL)溶液,并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,2mL),然后在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(10mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。合并的有机层在减压下浓缩,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)氮杂环庚烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(220mg,98%)。
步骤G:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯
搅拌260mg(0.47mmol)步骤F的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液,并加入HATU(270mg,0.71mmol)、二异丙基乙胺(250μL,1.42mmol)和NH4Cl(255mg,4.70mmol)。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,以得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(170mg,66%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.67(s,1H),8.28(s,1H),8.19(d,J=5.1Hz,1H),7.95(d,J=8.3Hz,2H),7.85(d,J=8.3Hz,2H),7.08(s,1H),6.93(d,J=5.1Hz,1H),6.53(s,2H),5.65(s,1H),5.34(dd,J1=12.1Hz,J2=6.4Hz,1H),3.66–3.63(m,1H),3.33–3.29(m,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.39–2.33(m,1H),2.20–2.15(m,1H),1.98–1.94(m,1H),1.88–1.86(m,1H),1.77–1.75(m,1H),1.57–1.50(m,1H),1.47–1.45(m,9H),1.42–1.35(m,2H),1.29(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):548.2[M+H]+。
步骤H:制备(S)-1-氨基-2-(氮杂环庚烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.8mL)加入到170mg(0.31mmol)步骤G的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩,以得到(S)-1-氨基-2-(氮杂环庚烷-2-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):448.2[M+H]+。
步骤I:制备(S)-2-(1-丙烯酰基氮杂环庚烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(240mg,1.86mmol)加入到138mg(0.31mmol)步骤H的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(25.3mg,0.28mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,以得到(S)-2-(1-丙烯酰基-氮杂环庚烷-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(93mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.19(s,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J=5.2Hz,1H),7.88(d,J=8.3Hz,2H),7.74(d,J=8.3Hz,2H),7.25(s,1H),6.89(d,J=5.0Hz,1H),6.68(s,2H),6.57(dd,J1=16.6Hz,J2=10.4Hz,1H),6.48(s,1H),6.37(dd,J1=16.6Hz,J2=1.9Hz,1H),5.73(dd,J1=10.4Hz,J2=1.9Hz,1H),5.60(dd,J1=12.2Hz,J2=6.4Hz,1H),3.77–3.67(m,2H),2.67(q,J=7.6Hz,2H),2.39–2.33(m,1H),2.22–2.17(m,1H),1.97–1.89(m,3H),1.54–1.41(m,2H),1.37–1.31(m,1H),1.25(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.6,165.9,162.6,156.0,152.0,148.8,147.6,141.9,138.4,133.7,129.7,129.5,127.4,127.3,119.9,119.6,113.9,49.1,43.6,31.7,30.4,29.0,28.7,25.4,14.5。MS(ESI,m/z):502.2[M+H]+。
实施例95:
2-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备2-(叔丁基)6-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙
烷-2-基)2-氮杂螺[3.3]庚烷-2,6-二羧酸酯
将2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-羧酸(5g,20.7mmol)和二异丙基乙胺(3.9mL,22.8mmol)加入到7.1g(20.7mmol)实施例1的步骤C的产物的乙腈(20mL)溶液。混合物在室温下搅拌3h,然后蒸发掉所有挥发物。残留物用水(200mL)稀释,用乙酸乙酯(200mL)萃取。分离有机相,用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过快速柱色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,以得到2-(叔丁基)-6-(1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)2-氮杂螺-[3.3]庚烷-2,6-二羧酸酯,为淡黄色油状物(6.8g,65%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.15(d,J=8.1Hz,2H),7.98(d,J=8.0Hz,2H),5.05–4.86(m,1H),4.43(q,J=7.1Hz,2H),4.26(q,J=7.1Hz,2H),3.95(s,2H),3.78(s,2H),3.46–3.35(m,1H),2.60–2.43(m,4H),1.42(s,9H),1.38–1.33(m,3H),1.29(t,J=7.0Hz,3H)。MS(ESI,m/z):504.2[M+H]+。
步骤B:制备叔丁基6-(3-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)环戊-1,3-二
烯-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸酯
在25mL耐压瓶中,将NH4OAc(367.8mg,4.77mmol)加入到200mg(0.40mmol)步骤A的产物的二甲苯(7mL)溶液,并将反应在140℃下加热2.5h。冷却后,残留物用水(100mL)稀释,用乙酸乙酯(100mL)萃取。分离有机相,用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过快速柱色谱用石油醚和乙酸乙酯(1:1.5)纯化,以得到产物6-(3-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)环戊-1,3-二烯-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(39mg,20%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:10.21–10.09(m,1H),8.05(d,J=8.1Hz,2H),7.97(d,J=8.0Hz,2H),4.38(q,J=7.1Hz,2H),4.29(q,J=7.1Hz,2H),3.98(s,2H),3.87(s,2H),3.48–3.39(m,1H),2.64–2.45(m,4H),1.42–1.38(m,12H),1.29(t,J=7.0Hz,3H)。MS(ESI,m/z):484.2[M+H]+。
步骤C:制备4-(4-(2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-2-(乙氧基羰
基)环戊n-1-基)苯甲酸
将氢氧化锂水溶液(2mol/L,195μL)加入到39mg(0.08mmol)步骤B的产物的1,4-二烷(195μL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用乙酸乙酯(30mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到4-(4-(2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-2-(乙氧基羰基)环戊n-1-基)苯甲酸,为白色固体(32.8mg,90%)。
步骤D:制备6-(3-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)环
戊-1,3-二烯-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将HATU(411mg,1.08mmol)、二异丙基乙胺(776μL,4.5mmol)和4-乙基吡啶-2-胺(165mg,1.35mmol)加入到410mg(0.9mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×70mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱纯用乙酸乙酯化,以得到6-(3-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)环戊-1,3-二烯-1-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯,为白色固体(252mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.61(s,1H),8.29(s,1H),5.12(d,J=5.1Hz,1H),8.05(d,J=8.4Hz,2H),7.95–7.93(m,2H),6.94(dd,J1=5.1Hz,J2=1.1Hz,1H),6.35(s,1H),4.33(q,J=7.1Hz,2H),4.02(s,2H),3.89(s,2H),3.46(t,J=8.5Hz,1H),2.71(q,J=7.6Hz,2H),2.53(q,J=7.6Hz,4H),1.44(s,9H),1.31–1.29(m,3H),1.20(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):560.2[M+H]+。
步骤E:制备6-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(288μL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入134mg(0.24mmol)步骤D的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟基胺(67.1mg,0.29mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。反应用盐水淬灭并在真空下浓缩至干。残留物用乙酸乙酯洗涤三次(3×60mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥,并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经受采用乙酸乙酯的柱色谱,以得到产物6-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯,为白色固体(69mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.81(s,1H),8.29(s,1H),8.15(d,J=5.1Hz,1H),7.94(d,J=8.4Hz,2H),7.80(d,J=8.4Hz,2H),6.92(dd,J1=5.1Hz,J2=1.3Hz,1H),6.29(s,2H),4.25(d,J=7.1Hz,2H),4.05(s,2H),3.88(s,2H),3.77(t,J=8.6Hz,1H),2.73–2.66(m,4H),2.57–2.52(m,2H),1.42(s,9H),1.28(t,J=7.6Hz,3H),1.21(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):575.2[M+H]+。
步骤F:制备1-氨基-2-(2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-4-(4-
((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(697μL)加入到80mg(0.14mmol)步骤E的产物的甲醇(3mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用乙酸乙酯(80mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用水洗涤三次(3×50mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到1-氨基-2-(2-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(69mg,90%)。
步骤G:制备6-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯
将HATU(63mg,0.17mmol)、二异丙基乙胺(56.8μL,0.33mmol)和NH4Cl(58.8mg,1.1mmol)加入到60mg(0.11mmol)步骤F的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×40mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(10:1)纯化,以得到产物6-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂螺[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯,为白色固体(24mg,40%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.02(s,1H),8.24(s,1H),8.14(d,J=5.2Hz,1H),7.93(d,J=8.3Hz,2H),7.69(d,J=8.3Hz,2H),6.92(dd,J1=5.0Hz,J2=1.0Hz,1H),6.05–5.99(m,2H),5.53(s,2H),4.03(s,2H),3.86(s,2H),3.72(t,J=8.6Hz,1H),2.70(q,J=7.6Hz,2H),2.65–2.62(m,2H),2.56–2.52(m,2H),1.42(s,9H),1.28(t,J=7.6Hz,3H)。MS(ESI,m/z):546.2[M+H]+。
步骤H:制备1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(2-氮杂螺
[3.3]庚烷-6-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(661μL)加入到60mg(0.11mmol)步骤G的产物的二氯甲烷(1.5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):446.2[M+H]+。
步骤I:制备2-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基
吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(113.7μL,0.66mmol)加入到49.0mg(0.11mmol)步骤H的产物的干燥二氯甲烷(2mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(6.2μL,0.08mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL).。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(10:1)纯化,以得到2-(2-丙烯酰基-2-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(27mg,50%)。1H NMR(DMSO,400MHz)δ:11.19(s,1H),8.32(d,J=5.4Hz,1H),8.19(s,1H),8.13(d,J=8.4Hz,2H),8.07(s,1H),7.94(s,1H),7.88(d,J=8.6Hz,2H),7.19(d,J=5.3Hz,1H),6.35–6.26(m,1H),6.09(dt,J1=17.0Hz,J2=2.6Hz,1H),5.69–5.64(m,1H),4.81(s,2H),4.37(s,1H),4.21(s,1H),4.08(s,1H),3.92(s,1H),3.84(dd,J1=16.4Hz,J2=8.4Hz,1H),2.75–2.62(m,6H),1.23(t,J=7.6Hz,3H);13C NMR(DMSO,150MHz)δ:165.8,164.4,158.5,158.3,158.1,151.1,150.6,128.1,127.8,127.1,126.3,126.3,125.6,120.0,116.8,114.9,114.3,62.1,60.8,60.0,58.7,37.4,34.3,28.0,14.1。MS(ESI,m/z):500.2[M+H]+。
实施例:96(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔
酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基
哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到214mg(0.51mmol)实施例53的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丙炔酸(31.5mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(120.2mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.84(s,1H),8.25(s,1H),8.15(d,J=4.8Hz,1H),7.97(d,J=7.9Hz,2H),7.83(d,J=8.0Hz,1.6H),7.77(d,J=7.8Hz,0.4H),6.92(d,J=4.6Hz,1H),6.50(s,1H),6.09(s,2H),6.00(d,J=5.1Hz,1H),5.81(s,1H),4.31(d,J=13.6Hz,1H),3.80–3.72(m,1H),3.18(s,1H),2.41(s,3H),2.36–2.32(m,1H),2.21–2.17(m,1H),1.91–1.88(m,2H),1.74–1.61(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.5,162.5,153.6,151.7,150.3,147.8,147.5,141.1,138.2,134.1,129.8,127.6,121.4,119.8,115.0,80.3,75.5,44.7,44.1,27.9,25.7,21.6,19.8。MS(ESI,m/z):472.2[M+H]+。
实施例97:(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙
炔酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰
基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到222mg(0.51mmol)实施例67的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丙炔酸(31.5mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(124.2mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.87(s,1H),8.09(d,J=5.8Hz,1H),8.04(s,1H),7.96(d,J=8.1Hz,2H),7.83(d,J=8.0Hz,1.6H)7.78(d,J=8.0Hz,0.4H),6.65–6.63(m,1H),6.53(s,1H),6.08(s,2H),5.99(d,J=5.3Hz,1H),5.82(s,1H),4.31(d,J=13.1Hz,1H),3.92(s,3H),3.77(dt,J1=12.9Hz,J2=2.3Hz,1H),3.18(s,1H),2.36–2.30(m,1H),2.21–2.17(m,1H),1.91–1.88(m,2H),1.75–1.71(m,1H),1.65–1.61(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.9,165.6,162.5,153.6,153.3,148.5,147.8,141.0,138.3,134.0,130.0,127.6,119.8,108.2,99.1,80.3,75.5,55.6,44.7,44.1,27.9,25.7,19.8。MS(ESI,m/z):488.2[M+H]+。
实施例98:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氯吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到224mg(0.51mmol)实施例72的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(37.6mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(129.0mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.41(s,1H),8.43(s,1H),8.12(d,J=5.3Hz,1H),7.80(d,J=8.0Hz,2H),7.70(d,J=8.0Hz,2H),7.26(s,1H),7.03(d,J=5.4Hz,1H),6.72(s,1H),6.13(s,2H),5.92(d,J=5.1Hz,1H),4.26(d,J=12.7Hz,1H),3.67–3.61(m,1H),2.39–2.30(m,1H),2.17–2.13(m,1H),1.99(s,3H),1.87–1.84(m,2H),1.71–1.68(m,1H),1.63–1.54(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.1,162.7,154.9,152.8,148.6,148.1,146.0,141.1,138.4,133.0,129.5,127.3,120.4,120.3,114.6,91.0,72.9,44.5,43.8,27.8,25.7,19.8,4.2。MS(ESI,m/z):506.1[M+H]+。
实施例99:(S)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰
基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基哌
啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到224mg(0.51mmol)实施例72的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丙炔酸(31.5mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(125.4mg,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.02(s,1H),8.48(s,1H),8.18(d,J=5.2Hz,1H),7.92(d,J=7.9Hz,2H),7.81(d,J=8.1Hz,2H),7.08(d,J=5.3Hz,1H),6.78(s,1H),6.10–6.07(m,3H),5.97(d,J=5.1Hz,1H),4.32–4.28(m,1H),3.78–3.72(m,1H),3.18(s,1H),2.39–2.29(m,1H),2.20–2.17(m,1H),1.91–1.88(m,2H),1.74–1.71(m,1H),1.64–1.61(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.7,162.6,153.7,152.7,148.6,147.9,146.2,141.0,138.5,133.4,129.7,127.5,120.5,120.1,114.6,80.4,75.5,44.7,44.1,27.9,25.7,19.7。MS(ESI,m/z):492.1[M+H]+。
实施例100:(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙
炔酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基
哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(394.6mg,3.9mmol)加入到281mg(0.65mmol)实施例73的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。5min后,加入丙炔酸(43.4mg,0.62mmol)和HATU(370.7mg,0.98mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。然后加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-乙基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(1-丙炔酰基哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺(189.3mg,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.13(s,1H),8.32(s,1H),8.19(d,J=5.1Hz,1H),8.00(d,J=8.3Hz,2H),7.83(d,J=8.2Hz,2H),6.97–6.96(m,1H),6.51(s,1H),6.09(s,2H),5.99(d,J=4.8Hz,1H),5.78(s,1H),4.30(d,J=13.4Hz,1H),3.77(td,J1=13.3Hz,J2=3.0Hz,1H),3.18(s,1H),2.73(q,J=7.6Hz,2H),2.35–2.32(m,1H),2.21–2.18(m,1H),1.94–1.85(m,2H),1.74–1.71(m,1H),1.65–1.60(m,1H),1.30(t,J=7.6Hz,3H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:165.6,162.5,153.6,151.6,147.8,146.8,141.1,138.3,133.9,129.8,129.6,127.7,120.1,119.8,114.1,80.3,75.5,44.7,44.1,28.9,27.9,25.7,19.8,14.5。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
实施例101:(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪
唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(4.2g,11mmol)、二异丙基乙胺(7.8mL,39.5mmol)和哒嗪-3-胺(1.8g,17.4mmol)加入到4.0g(9mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×120mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(3.3g,71%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.97(s,1H),9.07(s,1H),8.98(dd,J1=4.7Hz,J2=1.4Hz,1H),8.67(dd,J1=9.0Hz,J2=1.3Hz,1H),8.22(d,J=8.4Hz,2H),8.00(d,J=8.4Hz,2H),7.54(q,J=4.7Hz,1H),5.42(d,J=4.1Hz,1H),4.37–4.32(m,2H),4.04–4.01(m,1H),2.76–2.72(m,1H),2.56(d,J=12.9Hz,1H),2.00–1.91(m,1H),1.87–1.69(m,3H),1.56–1.53(m,10H),1.35(t,J=7.1Hz,3H)。MS(ESI,m/z):521.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(7.6mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到3.3g(6.3mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.5g,6.3mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(2:1)的柱色谱以得到产物(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(2.0g,59%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.97(s,1H),8.93–8.86(m,1H),8.57–8.56(m,1H),8.04–7.97(m,2H),7.80–7.79(m,2H),7.48–7.46(m,1H),5.88(s,2H),5.68–5.63(m,1H),4.29–4.20(m,2H),3.90(d,J=11.4Hz,1H),3.40(t,J=12.0Hz,1H),2.10–2.02(m,1H),1.96–1.95(m,2H),1.80–1.65(m,2H),1.57–1.55(m,1H),1.36(s,9H),1.26–1.16(m,3H)。MS(ESI,m/z):536.2[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(19mL)加入到1.9g(3.6mmol)步骤B的产物的甲醇(19mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸,为白色固体(1.7g,93%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.5g,6.7mmol)、二异丙基乙胺(2.3mL,13.4mmol)和NH4Cl(2.4g,45mmol)加入到2.2g(4.4mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(15mL)溶液,并在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(35:1)纯化,以得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.4g,77%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.28(s,1H),8.72(d,J=3.6Hz,1H),8.62(d,J=8.8Hz,1H),8.03(s,1H),7.86(d,J=8.2Hz,2H),7.75(d,J=8.0Hz,2H),7.44(dd,J1=9.0Hz,J2=4.7Hz,1H),7.07(s,1H),6.05(s,2H),5.66(d,J=5.1Hz,1H),3.95(d,J=12.2Hz,1H),3.37–3.31(m,1H),2.19–2.09(m,2H),1.93–1.86(m,2H),1.76–1.62(m,2H),1.50(s,9H)。MS(ESI,m/z):507.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-2-(哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.4mL)加入到180mg(0.35mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-2-(哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):407.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向含有二异丙基乙胺(271mg,2.10mmol)的142mg(0.35mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液,在5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(29.1mg,0.32mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(18:1)纯化,以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(98mg,61%)。1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:10.49(s,1H),8.69(s,1H),8.60(d,J=8.3Hz,1H),8.40(s,1H),7.83(d,J=7.1Hz,2H),7.73–7.72(m,2H),7.56(s,1H),7.43(dd,J1=8.5Hz,J2=4.5Hz,1H),6.66-6.62(m,1H),6.41(d,J=16.3Hz,1H),6.35(s,2H),6.16–6.12(m,1H),5.77(d,J=10.0Hz,1H),3.86(d,J=11.3Hz,1H),3.71–3.69(m,1H),2.38–2.36(m,1H),2.14(d,J=13.1Hz,1H),1.91–1.85(m,2H),1.69–1.59(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:166.9,166.8,164.0,156.2,148.5,147.7,140.2,138.7,132.4,129.0,128.9,128.5,127.9,127.7,121.2,119.5,50.9,43.1,28.1,26.0,19.8。MS(ESI,m/z):461.1[M+H]+。
实施例102:(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向含有三乙胺(212mg,2.1mmol)的142mg(0.35mmol)实施例101的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液,在5min后,加入丁-2-炔酸(26.5mg,0.32mmol)和HATU(203mg,0.53mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(20:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-(哒嗪-3-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(87mg,53%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.67(s,1H),8.63-8.58(m,3H),7.78(d,J=8.2Hz,2H),7.68–7.58(m,3H)7.43(dd,J1=9.0Hz,J2=4.7Hz,1H),6.19–6.09(m,3H),4.31(d,J=13.0Hz,1H),3.78(t,J=11.1Hz,1H),4.31(d,J=13.0Hz,1H),2.23–2.20(m,1H),2.12–2.08(m,1H),2.03(s,3H),1.85–1.83(m,2H),1.66–1.56(m,2H);13C NMR(CDCl3,100MHz)δ:166.9,164.3,156.2,154.6,148.7,147.6,139.9,138.5,132.4,128.6,128.1,127.9,121.7,119.5,90.6,73.2,44.7,44.0,28.0,26.0,19.8,4.3。MS(ESI,m/z):473.1[M+H]+。
实施例103:2-((1-丙烯酰基哌啶-4-基)甲基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备4-(2-((1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)
氧)-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将二异丙基乙胺(6.4mL,37mmol)和2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)乙酸(8.7g,36mmol)加入到11.5g(34mmol)实施例1的步骤C的产物的乙腈(35mL)溶液,并在室温下搅拌3h,然后蒸发掉所有挥发物。残留物用水(150mL)稀释,用乙酸乙酯(500mL)萃取。分离有机相,用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过快速柱色谱用石油醚和乙酸乙酯(8:1)纯化,以得到4-(2-((1-乙氧基-3-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1,3-二氧代丙烷-2-基)氧)-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(12.9g,76%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.14(d,J=8.5Hz,2H),8.02(d,J=8.6Hz,2H),6.29(s,1H),4.40(q,J=7.1Hz,2H),4.23(q,J=7.1Hz,2H),4.07–4.05(m,2H),2.78–2.60(m,2H),2.40(d,J=7.0Hz,2H),1.99–1.93(m,1H),1.71(d,J=12.6Hz,2H),1.43(s,9H),1.40(t,J=7.2Hz,3H),1.21–1.11(m,5H)。MS(ESI,m/z):506.2[M+H]+。
步骤B:制备4-((5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)甲
基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯
在150mL耐压瓶中,将NH4OAc(25.8g,336mmol)加入到14.1g(28mmol)步骤A的产物的二甲苯(40mL)溶液。反应在140℃下加热2.5h。冷却后,残留物用水(100mL)稀释和用乙酸乙酯(300mL)萃取。分离有机相,用Na2SO4干燥并浓缩。残留物通过快速柱色谱用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,以得到4-((5-(乙氧基羰基)-4-(4-(乙氧基羰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为淡黄色油状物(4.5g,33%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.25(s,1H),8.06(d,J=8.6Hz,2H),7.93(d,J=8.6Hz,2H),4.39(q,J=7.1Hz,2H),4.31(q,J=7.1Hz,2H),4.10–4.07(m,2H),2.71–2.69(m,4H),2.04–1.97(m,1H),1.67(d,J=11.8Hz,2H),1.44(s,9H),1.40(t,J=7.1Hz,3H),1.31(t,J=7.1Hz,3H),1.21–1.17(m,2H)。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
步骤C:制备4-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪
唑-4-基)苯甲酸
将氢氧化锂水溶液(2mol/L,22mL)加入到4.46g(9.2mmol)步骤B的产物的1,4-二烷(22mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到4-(2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-4-基)-苯甲酸,为白色固体(3.78g,90%)。
步骤D:制备4-((5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-
2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(3.6g,9.6mmol)、二异丙基乙胺(6.9mL,39.9mmol)和吡啶-2-胺(1.66g,17.7mmol)加入到3.66g(8.0mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(50mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭,并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(1:2)纯化,以得到4-((5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(3.48g,81%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.25(s,1H),9.69(s,1H),8.33(d,J=8.5Hz,1H),8.20(d,J=4.1Hz,1H),8.04(d,J=8.6Hz,2H),7.85–7.80(m,3H),7.13–7.09(m,1H),4.25(q,J=7.1Hz,2H),4.09–4.05(m,2H),2.80(d,J=7.1Hz,2H),2.69–2.66(m,2H),2.07–2.05(m,1H),1.68(d,J=12.0Hz,2H),1.40(s,9H),1.33–1.24(m,2H),1.23–1.21(m,3H)。MS(ESI,m/z):534.2[M+H]+。
步骤E:制备4-((1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,六甲基二硅氮烷锂(7.8mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到3.48g(6.5mmol)步骤D的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟基胺(1.5g,6.5mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(1:1)的柱色谱以得到产物4-((1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.8g,51%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.71(s,1H),8.46(d,J=8.4Hz,1H),8.22(d,J=4.0Hz,1H),8.01(d,J=8.6Hz,2H),7.82–7.78(m,3H),7.11–7.08(m,1H),5.33(s,2H),4.26(q,J=7.1Hz,2H),4.11–4.07(m,2H),2.84(d,J=7.1Hz,2H),2.71–2.66(m,2H),2.03–2.01(m,1H),1.67(d,J=11.9Hz,2H),1.44(s,9H),1.31–1.27(m,2H),1.24–1.21(m,3H)。MS(ESI,m/z):549.2[M+H]+。
步骤F:制备1-氨基-2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)-4-(4-(吡啶-2-基
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(18mL)加入到1.8g(3.3mmol)步骤E的产物的甲醇(20mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸发反应混合物,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×60mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,以得到1-氨基-2-((1-(叔丁氧基羰基)哌啶-4-基)甲基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸,为白色固体(1.62g,95%)。
步骤G:制备4-((1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-
咪唑-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.8g,4.7mmol)、二异丙基乙胺(1.7mL,9.3mmol)和NH4Cl(1.6g,31mmol)加入到1.62g(3.1mmol)步骤F的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液,并在室温下搅拌2h。反应混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×60mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,以得到产物4-((1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.37g,85%)。1H NMR(DMSO,400MHz)δ:10.74(s,1H),8.39(dd,J1=4.8Hz,J2=1.1Hz,1H),8.21(d,J=8.4Hz,1H),8.03–8.01(m,3H),7.86–7.82(m,3H),7.70(s,1H),7.18–7.15(m,1H),6.01(s,2H),3.92(d,J=11.0Hz,2H),2.69–2.67(m,4H),2.01–1.97(m,1H),1.68(d,J=11.1Hz,2H),1.39(s,9H),1.18–1.05(m,2H)。MS(ESI,m/z):520.2[M+H]+。
步骤H:制备1-氨基-2-(哌啶-4-基甲基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(2.5mL)加入到330mg(0.63mmol)步骤G的产物的二氯甲烷(8mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到1-氨基-2-(哌啶-4-基甲基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):420.2[M+H]+。
步骤I:制备2-((1-丙烯酰基哌啶-4-基)甲基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
向含有二异丙基乙胺(442mg,3.42mmol)的240mg(0.57mmol)步骤H的产物的干燥二氯甲烷(8mL)溶液,在5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(41.3mg,0.46mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(18:1)纯化,以得到2-((1-丙烯酰基哌啶-4-基)甲基)-1-氨基-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(175mg,65%)。1HNMR(DMSO,400MHz)δ:10.71(s,1H),8.39(d,J=3.8Hz,1H),8.20(d,J=8.4Hz,1H),8.05–8.01(m,3H),7.87–7.82(m,3H),7.68(s,1H),7.17(dd,J1=6.9Hz,J2=5.1Hz,1H),6.83–6.76(m,1H),6.07(dd,J1=16.3Hz,J2=2.3Hz,1H),6.03(s,2H),5.64(dd,J1=10.4Hz,J2=2.3Hz,1H),4.41(d,J=12.8Hz,1H),4.03(d,J=12.8Hz,1H),3.07–3.04(m,1H),2.70–2.61(m,3H),2.16–2.09(m,1H),1.78–1.76(m,2H),1.18–1.11(m,2H);13C NMR(DMSO,100MHz,)δ:165.7,164.1,162.5,152.3,147.9,147.8,138.2,138.1,136.0,131.9,128.6,127.7,127.0,126.9,124.7,119.7,114.7,45.2,41.6,34.4,32.5,31.7,31.5。MS(ESI,m/z):474.2[M+H]+。
实施例104:1-氨基-2-((1-(丁-2-炔酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-(4-(吡啶-2-基氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备1-氨基-2-((1-(丁-2-炔酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(346mg,3.42mmol)加入到240mg(0.57mmol)实施例103的步骤H的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(8mL)溶液。在5min后,加入丁-2-炔酸(42.9mg,0.51mmol)和HATU(325mg,0.85mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(16:1)纯化,以得到1-氨基-2-((1-(丁-2-炔酰基)哌啶-4-基)甲基)-4-(4-(吡啶-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(160mg,58%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.86(s,1H),8.37(d,J=8.3Hz,1H),8.29(d,J=4.2Hz,1H),7.98(d,J=8.2Hz,2H),7.79–7.76(m,1H),7.74(d,J=8.2Hz,2H),7.10–7.08(m,1H),5.81(s,2H),5.52(s,2H),4.51(d,J=13.4Hz,1H),4.36(d,J=13.5Hz,1H),3.08–3.03(m,1H),2.86–2.79(m,2H),2.66–2.61(m,1H),2.22–2.12(m,1H),1.99(s,3H),1.81(d,J=12.7Hz,1H),1.76(d,J=13.1Hz,1H),1.36–1.30(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.3,162.7,153.2,151.6,150.4,148.0,141.0,138.7,138.0,134.4,129.6,127.9,120.3,119.9,114.5,89.4,73.2,47.2,41.4,35.6,32.6,32.3,31.6,4.2。MS(ESI,m/z):486.2[M+H]+。
实施例105:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-4-(1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-5-氨基甲酰基-
1H-咪唑-4-基)苯甲酸
搅拌300mg(0.58mmol)实施例58的步骤D的产物的乙醇(15mL)溶液,并加入氢氧化锂水溶液(2mol/L,3mL),然后在80℃下搅拌3h。蒸发反应混合物,用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×50mL)。合并的有机层在减压下浓缩以得到(S)-4-(1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-5-氨基甲酰基-1H-咪唑-4-基)苯甲酸,为白色固体(224mg,90%)。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(212.7mg,0.56mmol)、二异丙基乙胺(402μL,2.33mmol)和噻唑-2-胺(70mg,0.70mmol)加入到200mg(0.47mmol)步骤A的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(40:1)纯化,以得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(120mg,50%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:11.03(s,1H),8.03(d,J=8.1Hz,2H),7.88(d,J=8.2Hz,2H),7.44(d,J=3.5Hz,1H),7.28(s,1H),7.01(d,J=3.4Hz,1H),6.40(s,1H),5.97(s,2H),5.57(d,J=5.2Hz,1H),3.93(d,J=11.7Hz,1H),3.24(dt,J1=13.3Hz,J2=2.7Hz,1H),2.33–2.28(m,1H),2.12(d,J=13.9Hz,1H),1.90–1.88(m,1H),1.75(d,J=13.0Hz,1H),1.68–1.65(m,1H),1.54–1.51(m,1H),1.47(s,9H)。MS(ESI,m/z):512.2[M+H]+
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(哌啶-2-基)-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基)-
1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(587μL)加入到50mg(0.09mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(2mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-2-(哌啶-2-基)-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):412.1[M+H]+。
步骤D:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(587μL,0.59mmol)加入到50mg(0.09mmol)步骤C的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。在5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(5.5μL,0.07mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×30mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-(噻唑-2-基氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(14mg,60%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:11.87(s,1H),8.01(d,J=8.1Hz,2H),7.78(d,J=7.9Hz,2H),7.62(s,1H),7.42(d,J=3.3Hz,1H),7.29(s,1H),6.98(d,J=3.5Hz,1H),6.66–6.48(m,1H),6.37–6.33(m,1H),6.08(s,2H),5.94–5.93(m,1H),5.76(d,J=10.6Hz,1H),3.85(d,J=13.0Hz,1H),3.66(t,J=12.0Hz,1H),2.40–2.36(m,1H),2.22–2.19(m,1H),1.92–1.86(m,2H),1.71–1.60(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.5,165.2,163.2,160.1,148.4,141.6,138.8,137.4,131.2,129.7,129.0,128.0,120.8,115.4,113.7,44.8,43.1,27.9,25.8,19.7。MS(ESI,m/z):466.1[M+H]+。
实施例106:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(4.15g,10.9mmol)、二异丙基乙胺(7.8mL,45mmol)和4-氟吡啶-2-胺(2.2g,20mmol)加入到4.0g(9.1mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(3.6g,73%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.23(s,1H),9.12(s,1H),8.22–8.13(m,4H),7.95–7.91(m,2H),6.78(t,J=7.2Hz,1H),5.39(s,1H),4.31–4.24(m,2H),3.99(d,J=11.6Hz,1H),2.49(d,J=11.6Hz,1H),1.88–1.63(m,6H),1.48(s,9H),1.28(t,J=7.2Hz,3H).MS(ESI,m/z):538.2[M+H]+
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(8.0mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入3.6g(6.7mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(40mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.9g,8.0mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×150mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.4g,39%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.73(s,1H),8.29–8.2(m,2H),7.93(d,J=8.0Hz,2H),7.87(d,J=8.0Hz,2H),6.84(t,J=6.8Hz,1H),5.92(s,2H),5.68(d,J=4.8Hz,1H),4.33–4.26(m,2H),3.95(d,J=13.2Hz,1H),3.42(td,J1=2.8Hz,J2=12.8Hz,1H),2.13–2.04(m,2H),1.92–1.88(m,1H),1.77–1.63(m,3H),1.45(s,9H),1.26(t,J=7.6Hz,3H).MS(ESI,m/z):553.2[M+H]+
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(6mL)加入到1.44g(2.61mmol)步骤B的产物的甲醇(10mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸干部分溶剂,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.5g,95%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)
苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(1.2g,3.1mmol)、二异丙基乙胺(1.1mL,6.3mmol)和NH4Cl(1.1g,21mmol)加入到1.1g(2.1mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.5g,50%).1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.85(s,1H),7.96(d,J=8.0Hz,2H),7.88(d,J=8.0Hz,2H),7.67(d,J=8.0Hz,1H),7.36(d,J=8.0Hz,1H),6.84(t,J=5.6Hz,1H),6.07(s,2H),6.01(s,1H),5.64(d,J=4.8Hz,1H),5.46(s,1H),3.94(d,J=13.2Hz,1H),3.35–3.25(m,1H),2.15(d,J=13.2Hz,2H),1.93–1.87(m,2H),1.54–1.51(m,2H),1.46(s,9H).MS(ESI,m/z):524.2[M+H]+.
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-
基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(2.1mL)加入到180mg(0.34mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(5mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):424.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(356μL,2.1mmol)加入到143.8mg(0.34mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(25μL,0.31mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(95mg,64%).1HNMR(CDCl3,600MHz)δ:9.36(s,1H),8.23–8.21(m,1H),8.19(dd,J1=2.4Hz,J2=11.4Hz,1H),7.88(d,J=7.8Hz,2H),7.79(d,J=7.2Hz,2H),7.21(s,1H),6.81–6.80(m,1H),6.61–6.56(m,1H),6.40–6.37(m,1H),6.31–6.27(m,3H),6.00–5.94(m,1H),5.71(d,J=10.2Hz,1H),3.84–3.82(m,1H),3.71–3.66(m,1H),2.42–2.40(m,1H),2.19–2.17(m,1H),1.92–1.85(m,2H),1.72–1.69(m,1H),1.62–1.60(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:170.1(d,J=258.0Hz),167.3,166.1,162.7,154.2(d,J=2.0Hz),149.9(d,J=9.0Hz),148.3,141.3,138.6,133.2,129.7,128.8,127.8,127.4,120.2,108.2(d,J=18.0Hz),102.4(d,J=22.5Hz),44.4,42.98,28.0,25.8,19.7.MS(ESI,m/z):478.2[M+H]+。
实施例107:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲
酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰 基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.0g,5.4mmol)、二异丙基乙胺(3.8mL,22mmol)和5-氟-4-甲基吡啶-2-胺(1.3g,9.9mmol)加入到2.0g(4.5mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液,并在80℃下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×200mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,以得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.6g,63%).1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.09(s,1H),8.65(s,1H),8.31(d,J=5.6Hz,1H),8.16(d,J=8.4Hz,2H),8.04(s,1H),7.93(d,J=8.4Hz,2H),5.40(d,J=4.0Hz,1H),4.34–4.31(m,2H),4.01(d,J=11.6Hz,1H),2.53(d,J=12.8Hz,1H),2.36(s,3H),2.04(t,J=14.4Hz,2H),1.93(t,J=13.2Hz,1H),1.85–1.81(m,1H),1.75(t,J=8.8Hz,1H),1.66(d,J=10.8Hz,1H),1.51(s,9H),1.32(t,J=7.2Hz,3H).MS(ESI,m/z):552.3[M+H]+.
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨 基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(3.4mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入1.6g(2.9mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(0.8g,3.4mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×150mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压下除去溶剂,以得到粗残留物,其经过柱色谱法采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.5g,30%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.59(s,1H),8.32(d,J=6.0Hz,1H),8.04(s,1H),7.91(d,J=8.0Hz,2H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),5.92(s,2H),5.68(d,J=5.6Hz,1H),4.33–4.25(m,2H),3.95(d,J=12.8Hz,1H),3.45–3.38(m,1H),2.12–2.02(m,2H),1.93–1.84(m,1H),1.75(d,J=16.8Hz,1H),1.66–1.50(m,2H),1.44(s,9H),1.25(t,J=7.2Hz,3H).MS(ESI,m/z):567.3[M+H]+
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(4mL)加入到0.49g(0.87mmol)步骤B的产物的甲醇(10mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸干部分溶剂,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(0.48g,99%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基 甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(0.5g,1.3mmol)、二异丙基乙胺(0.5mL,2.6mmol)和NH4Cl(0.5g,8.9mmol)加入到0.48g(0.9mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩,并通过快速色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.3g,71%)。MS(ESI,m/z):538.3[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-
(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.3mL)加入到123mg(0.22mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(2mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):438.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶- 2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(236.7μL,1.37mmol)加入到96.1mg(0.22mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(16.7μL,0.21mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(86mg,80%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.26(s,1H),8.25(d,J=5.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.81(d,J=7.6Hz,2H),7.70(d,J=7.6Hz,2H),7.31(s,1H),6.67(s,1H),6.60–6.54(m,1H),6.31–6.25(m,3H),6.02–5.92(m,1H),5.69(d,J=10.4Hz,1H),3.81(d,J=12.0Hz,1H),3.71–3.65(m,1H),2.40–2.38(m,1H),2.33(s,3H),2.18(d,J=13.2Hz,1H),1.94–1.83(m,2H),1.71–1.58(m,2H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.2,165.7,162.8,155.9(d,J=247.5Hz),148.3,147.8,141.3,138.3,136.7(d,J=15.0Hz),134.5(d,J=27.0Hz),133.3,129.5,128.7,127.8,127.2,120.1,116.7,44.4,43.0,28.0,25.8,19.6,14.9(d,J=3.0Hz).MS(ESI,m/z):492.2[M+H]+。
实施例108:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2- 基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到223mg(0.51mmol)实施例109的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(37.6mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(25:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((5-氟-4-甲基吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为灰白色固体(154mg,60%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.85(s,1H),8.29(d,J=5.6Hz,1H),8.03(s,1H),7.91(d,J=8.0Hz,2H),7.82(d,J=8.0Hz,2H),6.90(s,1H),6.14(s,2H),6.01(s,1H),5.94(d,J=5.2Hz,1H),4.28(d,J=12.8Hz,1H),3.65(td,J1=2.8Hz,J2=13.2Hz,1H),2.36(s,3H),2.17(d,J=14.8Hz,1H),2.01(s,3H),1.89–1.86(m,2H),1.73–1.70(m,2H),1.63–1.59(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:165.5,162.6,156.0(d,J=247.5Hz),155.0,148.0,147.7,141.2,138.4,136.7(d,J=16.5Hz),134.6(d,J=27.0Hz),133.6,129.7,127.4,120.0,116.6,91.0,73.0,44.5,43.8,27.8,25.7,19.8,14.9(d,J=3.0Hz),4.3.MS(ESI,m/z):504.2[M+H]+。
实施例109:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基
甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(2.0g,5.4mmol)、二异丙基乙胺(3.8mL,22mmol)和4-(4-氯苯基)吡啶-2-胺(1.4g,6.7mmol)加入到2.0g(4.5mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,得到(S)-2-(5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.5g,52%)。MS(ESI,m/z):630.2[M+H]+。
步骤B:制备(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(5.3mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到2.7g(4.4mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.2mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压除去溶剂,以得到粗残留物,其经过采用石油醚和乙酸乙酯(3:1)的柱色谱,得到(S)-2-(1-氨基-5-(乙氧基羰基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(1.4g,50%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.79(s,1H),8.69(s,1H),8.34(d,J=5.2Hz,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.87(d,J=8.4Hz,2H),7.66(d,J=8.4Hz,2H),7.46(d,J=8.4Hz,2H),7.28(d,J=1.6Hz,1H),2.93(s,2H),5.68(d,J=4.8Hz,1H),4.32–4.27(m,3H),3.96(d,J=12.4Hz,1H),3.46–3.39(m,1H),2.11(d,J=12.4Hz,1H),1.93–1.88(m,1H),1.83–1.73(m,2H),1.66–1.63(m,1H),1.60–1.55(m,1H),1.44(s,9H),1.26(t,J=7.2Hz,3H).MS(ESI,m/z):645.3[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氯苯
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(6mL)加入到0.2g(0.3mmol)步骤B的产物的甲醇(3mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,并用水(10mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×10mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(0.18g,99%)。
步骤D:制备(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将HATU(0.9g,2.4mmol)、二异丙基乙胺(0.8mL,4.8mmol)和NH4Cl(0.9g,16mmol)加入到1.0g(1.6mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(50:1)纯化,得到产物(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯,为白色固体(0.7g,71%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.94(s,1H),8.66(s,1H),8.34(d,J=5.2Hz,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.86(d,J=8.4Hz,2H),7.66(d,J=8.4Hz,2H),7.45(d,J=8.4Hz,2H),7.27(t,J=1.2Hz,1H),6.83(s,1H),6.02(s,2H),5.91(s,1H),5.60(d,J=4.8Hz,1H),3.93(d,J=12.8Hz,1H),3.28(td,J1=2.4Hz,J2=12.8Hz,1H),2.28–2.13(m,2H),1.94–1.88(m,1H),1.68–1.64(m,1H),1.55–1.50(m,2H),1.46(s,9H).MS(ESI,m/z):616.2[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-
(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.3mL)加入到120mg(0.20mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(3mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):516.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(202μL,1.17mmol)加入到103mg(0.2mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(11μL,0.14mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇纯化(30:1),以得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氟苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(73mg,64%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.14(s,1H),8.67(s,1H),8.33(d,J=5.2Hz,1H),7.97(d,J=8.0Hz,2H),7.87(d,J=7.2Hz,2H),7.65(d,J=8.8Hz,2H),7.45(d,J=8.4Hz,2H),7.27(s,1H),7.14(s,1H),6.63–6.56(m,1H),6.34–6.27(m,3H),6.08–6.04(m,1H),5.98–5.97(m,1H),5.73(d,J=10.4Hz,1H),3.85–3.82(m,1H),3.72–3.65(m,1H),2.46–2.43(m,1H),2.22–2.18(m,1H),1.97–1.86(m,2H),1.73–1.70(m,1H),1.63–1.60(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,165.8,162.5,152.5,150.1,148.2,148.1,138.6,136.6,135.7,133.5,129.8,129.4,128.8,128.7,127.8,127.4,119.9,118.0,112.1,110.9,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7.MS(ESI,m/z):570.2[M+H]+。
实施例110:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)
氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到263mg(0.51mmol)实施例109的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(37.6mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(26:1)纯化,以得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氯苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(178mg,60%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.00(s,1H),8.67(s,1H),8.34(d,J=1.8Hz,1H),7.97(d,J=7.8Hz,2H),7.86(d,J=7.8Hz,2H),7.66(d,J=7.2Hz,2H),7.45(d,J=7.8Hz,2H),7.28(d,J=4.8Hz,1H),6.88(s,1H),6.15(s,2H),5.95(d,J=5.4Hz,1H),5.91(s,1H),4.28(d,J=12.6Hz,1H),3.66(t,J=13.2Hz,1H),2.43–2.36(m,1H),2.18(d,J=13.8Hz,1H),2.02(s,3H),1.89–1.87(m,2H),1.73–1.71(m,1H),1.64–1.60(m,1H);13C NMR(DMSO-d6,150MHz)δ:165.8,162.4,153.1,148.7,147.8,147.4,137.8,136.4,135.0,134.2,132.0,129.3,128.7,128.0,127.9,126.7,125.6,117.4,111.9,91.9,73.2,43.8,40.1,27.9,25.4,19.3,3.4.MS(ESI,m/z):582.1[M+H]+。
实施例111:
(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨
基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
步骤A:制备叔丁基(S)-2-(4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯
基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯
将HATU(2.0g,5.4mmol)、二异丙基乙胺(3.8mL,22mmol)和4-(2-氨基吡啶-4-基)苯甲腈(1.3g,6.7mmol)加入到2.0g(4.5mmol)实施例46的步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液。反应混合物在80℃下搅拌。反应完成后(通过TLC监控),混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用石油醚和乙酸乙酯(2:1)纯化,得到叔丁基(S)-2-(4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基 甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯,为白色固体(1.5g,52%)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ:10.01(s,1H),8.81(s,1H),8.73(s,1H),8.40(d,J=5.2Hz,1H),8.20(d,J=8.4Hz,2H),7.98(d,J=8.4Hz,2H),7.82(d,J=8.4Hz,2H),7.78(d,J=8.0Hz,2H),7.30–7.28(m,1H),5.41(d,J=4.0Hz,1H),4.36–4.31(m,2H),4.02(d,J=10.0Hz,1H),2.79–2.73(m,1H),2.55(d,J=12.4Hz,1H),1.93–1.74,(m,4H),1.76(d,J=11.6Hz,1H),1.53(s,9H),1.50(s,1H),1.34(t,J=7.2Hz,3H).MS(ESI,m/z):621.3[M+H]+。
步骤B:制备叔丁基(S)-2-(1-氨基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰
基)苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯
在-10℃下,将六甲基二硅氮烷锂(5.2mL,1M四氢呋喃溶液)缓慢加入到2.7g(4.4mmol)步骤A的产物的无水N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液。在混合物搅拌20min后,在0℃下加入O-(二苯基氧膦基)羟胺(1.2g,5.2mmol),并将所得悬浮液在室温下搅拌2h(在反应混合物变得太粘稠的情况下,加入额外的N,N-二甲基甲酰胺)。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯萃取三次(3×100mL)。合并的有机部分用Na2SO4干燥并在减压除去溶剂,得到粗残留物,其经过通过柱色谱使用石油醚和乙酸乙酯(3:1)纯化,得到叔丁基(S)-2-(1-氨基-4- (4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-5-(乙氧基羰基)-1H-咪唑-2-基)哌 啶-1-羧酸酯,为白色固体(1.3g,48%)。1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:8.80(s,1H),8.72(s,1H),8.40(d,J=5.4Hz,1H),7.96–7.95(m,2H),7.89–7.87(m,2H),7.83–7.81(m,2H),7.79–7.78(m,2H),7.30–7.28(m,1H),5.94(s,2H),5.68(d,J=4.8Hz,1H),4.33–4.27(m,2H),3.95(d,J=12.6Hz,1H),3.42(td,J1=3.0Hz,J2=13.2Hz,1H),2.12–2.01(m,2H),1.91–1.88(m,1H),1.75(d,J=12.0Hz,1H),1.66–1.64(m,1H),1.55–1.51(m,1H),1.44(s,9H),1.26(t,J=7.2Hz,3H).MS(ESI,m/z):636.3[M+H]+。
步骤C:制备(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氰基苯
基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸
将2mol/L氢氧化锂水溶液(12mL)加入到1.47g(2.3mmol)步骤B的产物的甲醇(15mL)溶液,并在室温下搅拌2h。蒸除部分溶剂,并用水(100mL)稀释,用HCl水溶液酸化直到pH 3。混合物用乙酸乙酯洗涤三次(3×100mL)。通过过滤分离白色沉淀并干燥,得到(S)-1-氨基-2-(1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-羧酸(1.3g,90%)。
步骤D:制备叔丁基(S)-2-(1-氨基-5-氨基甲酰基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-
2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-羧酸酯
将HATU(0.2g,0.6mmol)、二异丙基乙胺(0.2mL,1.3mmol)和NH4Cl(0.2g,4.1mmol)加入到0.3g(0.4mmol)步骤C的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌2h。混合物用盐水淬灭并用乙酸乙酯洗涤三次(3×30mL)。合并的有机层在减压下浓缩并通过快速色谱用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到产物叔丁基(S)-2-(1-氨基-5-氨 基甲酰基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1- 羧酸酯,为白色固体(0.13g,53%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:8.95(s,1H),8.69(s,1H),8.40(d,J=5.2Hz,1H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.88(d,J=8.4Hz,2H),7.83–7.76(m,4H),7.30–7.28(m,1H),6.13–6.02(m,3H),5.88(s,1H),5.59(d,J=4.8Hz,1H),3.93(d,J=12.4Hz,1H),3.26(td,J1=2.8Hz,J2=13.2Hz,1H),2.26(d,J=12.0Hz,1H),2.14(d,J=12.8Hz,1H),1.93–1.88(m,1H),1.69–1,65(m,1H),1.55–1.47(m,2H),1.46(s,9H).MS(ESI,m/z):607.3[M+H]+。
步骤E:制备(S)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-
2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三氟乙酸(1.3mL)加入到134mg(0.22mmol)步骤D的产物的二氯甲烷(3mL)溶液。混合物在室温下搅拌1h,然后浓缩以得到(S)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-2-(哌啶-2-基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为淡黄色油状物。MS(ESI,m/z):507.2[M+H]+。
步骤F:制备(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将二异丙基乙胺(227.5μL,1.32mmol)加入到111.3mg(0.22mmol)步骤E的产物的干燥二氯甲烷(5mL)溶液。5min后,在0℃下加入丙烯酰氯(12.5μL,0.15mmol)。然后,将反应混合物升温至室温,并继续搅拌1h,加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇纯化(30:1),得到(S)-2-(1-丙烯酰基哌啶-2-基)-1-氨基-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(81mg,66%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ:9.25(s,1H),8.67(s,1H),8.38(d,J=5.2Hz,1H),7.93(d,J=8.0Hz,2H),7.84(d,J=7.6Hz,2H),7.80(d,J=8.4Hz,2H),7.76(d,J=8.4Hz,2H),7.34(s,1H),7.27(s,1H),6.59(dd,J1=10.8Hz,J2=16.4Hz,1H),6.33–6.27(m,4H),6.00–5.96(m,1H),5.73(d,J=10.8Hz,1H),3.83(d,J=12.4Hz,1H),3.67(t,J=12.8Hz,1H),2.46–2.43(m,1H),2.20–2.17(m,1H),1.93–1.86(m,2H),1.73–1.70(m,1H),1.63–1.60(m,1H);13C NMR(CDCl3,150MHz)δ:167.3,166.0,162.6,152.8,149.0,148.6,148.3,142.7,141.4,138.6,133.3,132.9,129.8,128.8,128.1,127.8,127.4,120.1,118.6,118.0,113.0,112.4,44.4,43.0,28.0,25.8,19.7.MS(ESI,m/z):561.2[M+H]+。
实施例112:
(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-
基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
制备(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡
啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺
将三乙胺(308mg,3.06mmol)加入到258mg(0.51mmol)实施例111的步骤E的产物的干燥N,N-二甲基甲酰胺(7mL)溶液。5min后,加入丁-2-炔酸(37.6mg,0.45mmol)和HATU(289mg,0.76mmol)。反应混合物在室温下继续搅拌2h。加入乙酸乙酯和水。分层,并且水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水溶液洗涤三次(3×50mL)。有机相用无水Na2SO4干燥,过滤并浓缩。残留物通过色谱法用二氯甲烷和甲醇(30:1)纯化,得到(S)-1-氨基-2-(1-(丁-2-炔酰基)哌啶-2-基)-4-(4-((4-(4-氰基苯基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)苯基)-1H-咪唑-5-甲酰胺,为白色固体(175mg,60%).1H NMR(CDCl3,600MHz)δ:9.00(s,1H),8.70(s,1H),8.41(d,J=4.2Hz,1H),7.97(d,J=7.8Hz,2H),7.88(d,J=7.8Hz,2H),7.82(d,J=7.8Hz,2H),7.78(d,J=7.8Hz,2H),7.29(d,J=5.4Hz,1H),6.99(s,1H),6.14(s,2H),5.94(d,J=6.0Hz,1H),5.87(s,1H),4.28(d,J=13.2Hz,1H),3.64(t,J=13.2Hz,1H),2.44–2.38(s,1H),2.18(d,J=13.8Hz,1H),2.02(s,3H),1.89–1.88(m,2H),1.74–1.72(m,2H);13CNMR(CDCl3,150MHz)δ:165.8,162.4,155.1,152.7,149.1,148.7,148.0,142.8,141.3,138.7,133.4,133.0,129.9,128.1,127.4,120.1,118.6,118.1,113.1,112.4,91.1,73.0,44.5,43.8,27.8,25.7,19.9,4.3.MS(ESI,m/z):573.2[M+H]+。
实施例113 BTK抑制试验和选择性试验
激酶实验在第三方(Reaction Biology Corporation,PA,USA)或本实验室进行测试。
a)Reaction Biology Corporation所用试剂和操作步骤
基本反应缓冲液:20mM Hepes(pH 7.5)、10mM MgCl2、1mM EGTA、0.02%聚氧乙烯月桂醚Brij35、0.02mg/ml BSA、0.1mM Na3VO4、2mM DTT、1%DMSO。
将需要的协同因子加入到各自的激酶反应中。
化合物处理:待测化合物溶于100%DMSO中,被配成特定的浓度。通过使用IntegraViaflo Assist在DMSO中进行稀释。
反应步骤:
使用上述的新鲜制备的缓冲液配置底物,并在该底物溶液中加入所需要的协同因子。将激酶加入到底物溶液中并将混合物温和地混合。使用声学技术(Echo550;纳米级)将待测化合物的100%DMSO溶液加入到激酶反应混合物中,并将新混合物在室温下孵育20min。然后,将33P-ATP(比活10μCi/μl)加入到反应混合物中开始反应,并将混合物在室温下孵育2小时。使用滤过器-结合方法测量放射活性,并将激酶活性数据表达成与溶媒(二甲基亚砜)相比测试化合物剩余激酶活性的百分数。使用Prism(GraphPad Software)获得IC50值和拟合曲线。结果如表I所示
b)本实验室BTK,BMX,EGFR和ITK抑制试验操作:
采用酶联免疫吸附测定(ELISA)评价化合物的激酶抑制活性。BTK,BMX,EGFR和ITK等激酶购自Carna Bioscience(Kobe,Japan)。总计10ng/mL抗磷酸酪氨酸抗体(PY713)(abcam,Cambridge Science Park,UK)预先包被在96孔ELISA板中。分别将BTK(101.25ng/mL),BMX(90ng/m L),EGFR(90ng/m L)或ITK(120ng/m L)和测试化合物在包含20μmol/L(ITK测试的底物最终浓度为30μmol/L)底物(NH2-ETVYSEVRK-生物素)的1×反应缓冲液(50mmol/L HEPES pH 7.4、20mmol/L MgCl2、0.1mmol/L MnCl2、1mmol/L DTT)中在25℃下孵育1小时。然后,加入总计3μmol/L ATP,并使反应继续2h。将反应产物转移至含有抗体的96孔ELISA板中,在25℃孵育30分钟。孵育后,用PBS洗涤各孔,然后用辣根过氧化物酶(HRP)标记的链酶亲和素孵育。使用3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)对每个孔进行成像,加入2mol/LH2SO4终止发色反应,采用多功能读板器(PerkinElmer,USA)在450nm下读出吸光度。结果示于表I-IV中。
表I
注:a)来自Reaction Biology Corporation;b)来自本实验室。表II,代表性化合物对BTK和BMX的选择性
表III,代表性化合物对BTK和ITK的选择性
表IV,代表性化合物对BTK和EGFR的选择性
实施例114体外抗肿瘤活性试验
方法:合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司所用试剂和操作步骤抗细胞增殖活性使用CellTiter-Glo(Promega,USA)方法评价。在DMSO中制成1000×化合物溶液,向49μl生长培养基中加入1μl 1000×化合物,制成20×化合物。将生长培养基中的细胞悬浮液稀释至所需密度,然后将95μl的细胞悬液置于96孔板中。根据板图将5μl 20×化合物添加到96孔板中。每个孔中的最终DMSO浓度为0.1%。然后将细胞在37℃,5%CO
2下孵育72小时。测量前将测定板平衡至室温。在每个孔中加入20μl
试剂。在轨道振荡器上混合2分钟,以诱导细胞裂解。在室温下孵育10分钟以稳定发光信号。使用EnVision MultilabelReader(PerkinElmer)记录发光。使用以下公式计算细胞活力(CV%),其相对于用媒介物(DMSO)处理的对照孔:细胞活力(%)=(RLU化合物-RLU空白)/(RLU对照-RLU空白)*100%。使用GraphPad Prism 6.0软件计算IC
50值,拟合四参数方程式以生成浓度响应曲线。所有测定均使用三个平行样品和三个重复进行。
表V,代表性化合物的体外抗肿瘤活性
实施例115大鼠药代动力学试验
方法:合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司所用试剂和操作步骤
6-8周龄雄性SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司。大鼠被随机分为两组,每组三只。在iv组,单剂量的化合物84或85通过尾静脉注射给药;po给药组,化合物84或85通过口服给药。给药后2min(只有iv),5min,15min,1h,2h,4h,6h,8h,12h and 24h(只有po)自眼眶后静脉丛采集血样约0.25mL。血样在4℃,4000r/min,离心10min,分离血浆,保存在-20℃冰箱中,直到LC-MS/MS法检测。
如表VI所示,84表现出有利的PK特性。静脉注射5mg/kg,84的半衰期(t1/2)和平均清除率分别为1.32h和13.4mL/min/kg。同时,相同剂量口服时,化合物表现出相当高暴露量Cmax(501ng/mL),AUC(1996h·ng/mL)和令人满意的生物利用度(32.4%)。
表VI.化合物84在大鼠的PK特性
a使用剂量5mg/kg溶液(20%水,80%PEG400).b使用剂量5mg/kg溶液(20%水,80%PEG400),n=3.
化合物85的PK特性使用大鼠评价,分为静脉注射(1mg/kg)和口服(10mg/kg)。口服后,它也展示了令人满意的半衰期t1/2(2.74h),AUC(3247h·ng/mL)和生物利用度(90.6%)。
表VII.化合物85在大鼠的PK特性
a剂量1mg/kg溶液(20%水,80%PEG400).b剂量使用10mg/kg溶液(20%水,80%PEG400),n=3。