CN111902053A - 溶血磷脂酰胆碱组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用于药物、营养食品和功能食品的海洋溶血磷脂酰胆碱组合物，以及用于制备海洋溶血磷脂酰胆碱组合物的方法。

Description

溶血磷脂酰胆碱组合物

技术领域

本发明提供了用于药物、营养食品和功能食品的海洋溶血磷脂酰胆碱组合物，以及用于制备海洋溶血磷脂酰胆碱组合物的方法。

背景技术

溶血磷脂酰胆碱(LPC)是由磷脂酰胆碱(PC)分子部分水解，使得连接到PC分子的脂肪酸基团中的一个被去除而得到的化合物。

在大多数动物组织中发现了痕量的溶血磷脂酰胆碱(浓度较高时，其破坏膜)，其中在sn-1位置，每摩尔脂质具有一摩尔脂肪酸。溶血磷脂酰胆碱由膳食和胆汁磷脂酰胆碱的水解产生，并且就这样在肠中被吸收，但是在进入淋巴之前被重新酯化。此外，在大多数组织中，它是通过磷脂酶A2酶超家族来水解磷脂酰胆碱而形成，作为控制后者的总分子种类组成的去酰化/再酰化循环的一部分，如上所述。在动物种类的血浆中，通过酶卵磷脂:胆固醇酰基转移酶(LCAT)(由肝脏分泌)的作用形成了相当数量的溶血磷脂酰胆碱。这催化脂肪酸从磷脂酰胆碱的sn-2位置转移到血浆中的游离胆固醇，其中形成了胆固醇酯并且当然还形成了溶血磷脂酰胆碱，其由具有主要饱和脂肪酸以及单烯和二烯脂肪酸成分的分子种类的混合物组成。在血浆中，溶血磷脂酰胆碱与白蛋白和脂蛋白结合，使得其有效浓度降低到安全水平。对产生sn-2-花生四烯酰基溶血磷脂酰胆碱独特的过氧化物酶体中高度特异性的磷脂酶A2γ的鉴定表明，这可能与类花生酸的产生和信号传导有关。据报道，血液中26:0-溶血磷脂酰胆碱的水平升高是Zellweger谱系障碍(过氧化物酶体生物发生缺陷的结果)的特征。

溶血磷脂酰胆碱具有促炎特性，并且已知其是血浆中氧化的脂蛋白(LDL)和动脉粥样硬化病变的病理成分；例如，据报道，来自2型糖尿病患者的颈动脉粥样硬化斑块中存在2-花生四烯酰基-溶血磷脂酰胆碱的特异性富集。最近，已发现其在细胞信号传导中具有一些功能，并且已鉴定出特异性受体(与G蛋白偶联)。溶血磷脂酰胆碱激活释放甘油二酯和三磷酸肌醇的特定磷脂酶C，从而增加细胞内Ca2+并且激活蛋白激酶C。它还激活某些细胞类型中的丝裂原活化蛋白激酶，并且它促进神经系统的脱髓鞘。在血管内皮细胞中，溶血磷脂酰胆碱诱导重要的促炎介质环氧合酶2(COX-2)，COX-2是前列腺素合成中的关键酶。已鉴定出宫颈癌中溶血磷脂酰胆碱水平升高，并且可为对该疾病的诊断。溶血磷脂酰胆碱的一些生物学效应可能仅仅是由于其易于扩散到膜中，从而改变其曲率并间接影响膜蛋白特性的能力。

WO2015048554公开了用于鉴定调节经由Mfsd2a蛋白转运的化合物的方法和LPC组合物的其他潜在用途。

发明内容

本发明提供了用于药物、营养食品和功能食品的海洋溶血磷脂酰胆碱组合物，以及用于制备海洋溶血磷脂酰胆碱组合物的方法。

因此，在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约10％至约100％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC的比率为1:8至18:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA的比率为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的60％至100％的LPC w/w。在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的70％至90％的LPC w/w。在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的20％至50％的LPC w/w。在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的20％至30％的LPC w/w。在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的10％至20％的LPC w/w。

在一些优选的实施方案中，组合物具有组合物的30％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量。在一些优选的实施方案中，组合物具有组合物的35％至45％w/w的omega-3脂肪酸含量。在一些优选的实施方案中，组合物具有组合物的5％至20％w/w的omega-3脂肪酸含量。

在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(b)。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(c)。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(d)。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(e)。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(f)。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)和(c)中的两种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的两种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的三种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的四种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的五种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)。

在一些优选的实施方案中，组合物选自由以下组成的组：磷虾LPC组合物、鲱鱼LPC组合物、鲱鱼子LPC组合物、藻类LPC组合物和哲水蚤LPC组合物。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种药物或营养组合物，所述药物或营养组合物包含如上所述的组合物和生理上可接受的载剂。在一些优选的实施方案中，生理上可接受的载剂为脂质载剂。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种口服递送载体，所述口服递送载体含有如上所述的海洋LPC组合物、药物组合物或营养组合物。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种脂质组合物，所述脂质组合物包含第一脂质级分和第二脂质级分，其中第一脂质级分为如上所述的海洋LPC组合物，并且第二脂质级分从与第一脂质级分不同的来源获得且/或含有低于20％的LPC。在一些优选的实施方案中，第二脂质级分选自由以下组成的组：甘油三酯级分、甘油二酯级分、脂肪酸乙酯级分、游离脂肪酸级分及其组合。在一些优选的实施方案中，第二脂质级分是包含EPA和/或DHA的海洋脂质级分。在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种药物或营养组合物，所述药物或营养组合物包含如前所述的脂质组合物和生理上可接受的载剂。在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种口服递送载体，所述口服递送载体含有如前所述的脂质组合物。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了用于从含有磷脂的海洋原料中制备具有高EPA和DHA含量的溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物的方法，所述方法包括用非海洋原料固有的磷脂酶处理海洋原料，以提供经磷脂酶处理的原料，并对经磷脂酶处理的原料进行分馏，以提供比起始原料具有更高的溶血磷脂酰胆碱含量的脂质组合物。在一些优选的实施方案中，原料选自由以下组成的组：磷虾脂质制剂、鲱鱼脂质制剂、鲱鱼子脂质制剂、藻类脂质制剂和哲水蚤脂质制剂。在一些优选的实施方案中，磷虾脂质制剂为南极磷虾(EuphausiaSuperba)脂质制剂。

在一些优选的实施方案中，原料在溶剂中与磷脂酶接触。在一些优选的实施方案中，溶剂为水和醇的混合物。在一些优选的实施方案中，醇为乙醇。在一些优选的实施方案中，原料在约85％水和15％乙醇的混合物中与磷脂酶接触。

在一些优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)。在一些优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中酶浓度在0.1至20vol/wt％的范围内，优选0.1至15vol/wt％、更优选0.1至10vol/wt％、还优选0.1至5vol/wt％、最优选0.1至3vol/wt％。在一些优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中在3至12，优选4至10、更优选4至9、最优选5至9的pH下执行方法。在一些优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中在4至95℃之间，优选4至85℃、更优选10至80℃、还优选15至70℃、甚至更优选15至65℃、最优选15至60℃下执行方法。

在一些优选的实施方案中，原料具有的EPA和DHA的含量在以下范围内；EPA：1至70wt％和DHA：1至70wt％、更优选EPA：5至70wt％和DHA：5至70wt％、最优选EPA：10至60wt％和DHA：10至60wt％。在一些优选的实施方案中，LPC组合物具有的EPA和DHA的含量在以下范围内；EPA：1至100wt％和/或DHA：1至100wt％、更优选EPA：5至100wt％和/或DHA：5至100wt％、最优选EPA：10至90wt％和/或DHA：10至90wt％。

在一些优选的实施方案中，LPC组合物具有的LPC含量在10至100wt％的范围内，优选20至100wt％、更优选30至100wt％、还优选40至100wt％、最优选50至100wt％。在一些优选的实施方案中，通过该方法获得的LPC组合物，其特征在于包含组合物的约20％至约95％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，方法还包括配制LPC组合物以供人食用。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了如上所述的LPC或脂质组合物，或通过如上所述的方法制备的LPC或脂质组合物，用于补充优选小于10岁、更优选小于1岁、甚至更优选小于1个月、并且最优选为新生儿的人受试者的饮食。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约60％至约100％的LPC w/w和组合物的30％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1或更优选1:1至10:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的0.5％至5％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的0.5％w/w；d)中性脂质含量小于组合物的5％至40％w/w；以及e)2-LPC:2-LPC醚的比率为2.5:1至4:1。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约10％至约20％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1或更优选1:1至10:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约20％至约40％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1或更优选1:1至10:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约40％至约60％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1或更优选1:1至10:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约60％至约80％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1或更优选1:1至10:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物或浓缩物，其特征在于包含组合物的约60％至约100％的LPC w/w和组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1或更优选1:1至10:1；b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于组合物的10％w/w；c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％w/w；d)中性脂质含量为组合物的5％至65％w/w；e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

在一些实施方案中，提供了上述溶血磷脂组合物用于通过口服施用溶血磷脂组合物来增加靶组织或器官中的EPA和/或DHA的量。根据本发明的优选靶组织和器官是肾上腺、血液、骨、骨髓、脑、脂肪(白色)、肾脏(整个)、大肠粘膜、肝、肺、肌肉、心肌、胰腺、垂体、前列腺、皮肤、小肠粘膜、脾、胃粘膜、睾丸、胸腺和/或甲状腺。在一些优选的实施方案中，EPA和/或DHA中量的增加是与作为磷脂(即，在磷脂的SN-1和SN-2位置包含脂肪酰基的磷脂分子)提供的EPA和/或DHA的等效剂量比较。

附图说明

图1：样品AKB69444-1的¹H–NMR谱。

图2：LPC产品样品AKB69444-1的HPLC色谱图。

图3：样品AKB70005-2的¹H–NMR谱。

图4：LPC产品样品AKB70005-2的HPLC色谱图。

图5：样品AKB70005-3的¹H–NMR谱。

图6：LPC产品样品AKB70005-3的HPLC色谱图。

图7：样品AKB70005-4的¹H–NMR谱。

图8：LPC产品样品AKB70005-4的HPLC色谱图。

图9：样品AKB70005-5的¹H–NMR谱。

图10：LPC产品样品AKB70005-5的HPLC色谱图。

图11：本发明的工艺流程图。

图12：本发明的工艺流程图。

定义

如本文所用，“磷脂”是指具有连接在甘油的sn-1和sn-2位置的两个脂肪酸部分以及由在甘油的sn-3位置处的磷酸酯残基连接的头部基团的有机化合物。示例性头部基团部分包括胆碱、乙醇胺、丝氨酸和肌醇。磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酸。脂肪酸部分是例如通过酯或醚键结合在sn-1或sn-2位置的脂肪酸分子的部分。当脂肪酸部分为脂肪酰基时，脂肪酰基的脂族链通过酯键连接，并且当脂肪酸部分为脂肪酸的脂族链时，脂族链通过醚键连接。因此，当与本发明的磷脂相关地提及特定脂肪酸(例如，EPA或DHA)时，应将其视为对相关脂肪酰基或其脂族链的参考。

如本文所用，术语“醚磷脂”是指其中sn-1或sn-2位置中的一个处的脂肪酸部分是通过醚键连接的脂肪酸的脂族链的磷脂。醚磷脂包括，例如，烷基酰基磷脂酰胆碱、烷基酰基磷脂酰乙醇胺和烷基酰基磷脂酰丝氨酸。

如本文所用，术语“溶血磷脂”是指在分子的sn-1和sn-2位置中的一个处具有脂肪酸部分并且在另一位置具有-OH基团，使得每摩尔磷脂分子存在一摩尔脂肪酸部分的磷脂分子。术语溶血磷脂酰胆碱(LPC)是指在分子的sn-1和sn-2位置中的一个处具有脂肪酸部分并且在另一位置具有-OH基团，使得每摩尔脂质存在一摩尔脂肪酸部分的磷脂酰胆碱分子。可指定溶血磷脂为1-或2-溶血磷脂，以表示-OH基团在分子中的位置。因此，1-LPC是指在分子的sn-1位置具有-OH基团并且在sn-2位置具有脂肪酸部分的溶血磷脂酰胆碱。2-LPC是指在分子的sn-2位置具有-OH基团并且在sn-1位置具有脂肪酸部分的溶血磷脂酰胆碱。当溶血磷脂为醚磷脂时，脂肪酸部分是通过sn-1或sn-2位置处的醚键连接的脂肪醇。当溶血磷脂为酯磷脂时，脂肪酸部分是通过sn-1或sn-2位置处的酯键连接的脂肪酸酯。

如本文所用，术语“长链多不饱和脂肪酸”是指具有20个或更多个碳并且在两个或更多个键处不饱和的脂肪酸。

如本文所用，术语omega-3脂肪酸是指在分子的甲基端的第三和第四碳原子之间的烃链中具有最终双键的多不饱和脂肪酸。omega-3脂肪酸的非限制性实例包括5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(EPA)、4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(DHA)和7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸(DPA)。

如本文所用，术语“生理上可接受的载剂”是指通常与油性药物一起使用的任何载剂或赋形剂。此类载剂或赋形剂包括但不限于油、淀粉、蔗糖和乳糖。

如本文所用，术语“口服递送载体”是指口服递送药物的任何方式，包括但不限于胶囊、丸剂、片剂和糖浆。

如本文所用，术语“食品产品”是指适合人、非反刍动物或反刍动物食用的任何食品或饲料。“食品产品”可为预制和包装的食品(例如，蛋黄酱、色拉调料、面包或奶酪食品)或动物饲料(例如，挤压和制粒的动物饲料或粗混合饲料)。“预制食品产品”意指经批准供人食用的任何预包装食品。

如本文所用，术语“食物”是指适合人或动物食用的任何物质。

如本文所用，术语“功能性食品”是指添加了生物活性补充剂的食品产品。

如本文所用，术语“婴儿食品”是指为婴儿配制的食品产品，诸如配方食品产品。

如本文所用，术语“老年人食品”是指为老年人配制的食品产品。

如本文所用，术语“妊娠食品”是指为孕妇配制的食品产品。

如本文所用，术语“营养补充剂”是指配制为要用作饮食的一部分的饮食或营养补充剂的食品产品。

如本文所用，除非另有说明，否则术语w/w(重量/重量)是指以重量为基础的组合物中给定物质的量，并且表示为总组合物重量的百分比。例如，包含50％w/w磷脂的组合物意指磷脂的质量为组合物总质量的50％(即，100克组合物，诸如油中50克磷脂)。当在整个说明书中指定溶剂浓度时，浓度是指指定溶剂溶液中溶剂的重量百分比。作为非限制性实例，96％乙醇包含96％的乙醇和4％的水。作为另一个非限制性实例，当说明书将脂质溶液描述为包含20％w/w干物质并且溶剂为95％乙醇时，这意指100g的溶液包含总共20克干物质和80g的95％乙醇。

如本文所用，术语“磷虾粉”是指由磷虾制备的干粉并且具有约3％至约15％的水分含量。

具体实施方式

本发明提供了用于药物、营养食品和功能食品的海洋溶血磷脂酰胆碱组合物，以及用于制备海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物的方法。在特别优选的实施方案中，LPC组合物由磷虾磷脂(例如南极磷虾或太平洋磷虾(Euphausia pacifica)磷脂)制备。在其他优选的实施方案中，LPC组合物由哲水蚤、鲱鱼、鲱鱼子或藻类磷脂制备。合适的磷虾粗磷脂提取物、脱盐磷虾磷脂提取物以及用于加工磷虾的方法公开于PCT/IB2016/000208和PCT/IB2016/000326中，所述申请各自以引用方式整体并入本文。

完整的磷脂(诸如磷脂酰胆碱)通常通过磷脂酶的作用在小肠中转化为溶血磷脂。然后，溶血磷脂被吸附到体内。本文提供的数据表明，当在动物模型中口服施用LPC组合物时，与口服施用不含大量溶血磷脂的PC(磷脂酰胆碱)组合物相比，组合物中的靶omega-3脂肪酸以更快的速率和更高的总量被掺入大量组织中。考虑到人们期望不存在差异的事实，此结果是令人惊讶的，因为已知经口服施用的PC在肠中以有效率的方式转化为溶血磷脂。

1.起始材料

本发明不限于使用任何特定的生物起始材料。在优选的实施方案中，由生物起始材料制备磷脂提取物，并且通过对磷脂提取物进行酶处理来制备LPC组合物。生物起始材料可优选地为藻类生物质、植物生物质或海洋动物生物质或由其产生。在优选的实施方案中，将海洋动物生物质用作起始材料。合适的海洋动物生物质包括但不限于磷虾、螃蟹、哲水蚤、浮游生物、卵、小龙虾、虾、鱼(尤其是鲱鱼)和软体动物。生物起始材料可为新鲜或冷冻的，或可为由藻类、植物或海洋动物生物质产生的材料，诸如粉、粉末、水解物或凝结物(糊剂)。糊剂可为湿糊剂或干糊剂。在一些优选的实施方案中，生物起始材料为磷虾材料，例如磷虾粉、磷虾水解物、磷虾凝结物，或新鲜或冷冻的磷虾。可使用任何种类的磷虾。在优选的实施方案中，磷虾为南极磷虾或太平洋磷虾。

在一些特别优选的实施方案中，生物起始材料为磷虾粉。磷虾粉可优选地通过任何标准海洋粉工艺来制备。一般来讲，磷虾粉是通过在低温(约80至85℃)下烹饪新鲜捕获的磷虾并干燥以将水分含量降低至约5至8％，然后研磨而制得的。在产品旨在供人食用的实施方案中，优选在不添加抗氧化剂的情况下在氮气下包装和储存粉。

因此，本发明的工艺可用于许多起始材料。工艺的其余讨论通常是指使用磷虾粉作为起始材料。然而，应当理解，本文所考虑的任何起始材料均可在所述工艺中代替磷虾粉。

2.从磷虾粉中的溶剂提取

在提取工艺的第一步中，将磷虾粉与合适的溶剂混合，以从粉中提取脂质。与现有技术方法相反，本发明利用优选以初始溶剂提取物中污染物的量增大为代价从磷虾粉中提取最大量的脂质的条件。在优选的实施方案中，溶剂为有机质子溶剂，然而也可使用已知用于食品级脂质提取的其他溶剂，诸如丙酮、己烷等。合适的有机质子溶剂包括但不限于正丁醇、正丙醇、异丙醇、硝基甲烷、乙醇和甲醇。在特别优选的实施方案中，质子溶剂为乙醇。

在优选的实施方案中，在初始溶剂提取步骤中使用的质子溶剂的浓度为至少90％、或优选约94％至98％、更优选约95％至97％、并且最优选约96％(例如，96％乙醇或甲醇)。

在一些实施方案中，质子溶剂与生物起始材料以约1:1至10:1、优选约3:1至6:1、更优选约4:1至5:1、并且最优选约4.4:1的质子溶剂:生物起始材料的比率与生物起始材料混合。

在优选的实施方案中，用质子溶剂在约5℃至65℃、约20℃至约60℃、优选约30℃至50℃、更优选约30℃至50℃、并且最优选在约40℃的温度下提取生物起始材料。在一些实施方案中，提取时间(即，生物起始材料与溶剂接触的时间量)为约10分钟至约2小时、优选约15分钟至60分钟、更优选约20分钟至约45分钟、并且最优选约30分钟。

提取步骤之后，例如通过倾析和或过滤，将含有来自磷虾粉的脂质的粗磷虾脂质溶液从溶剂/磷虾粉混合物分离出来。然后，将包含蛋白质和其他有用材料的不溶材料干燥以回收乙醇。剩余的富含蛋白质的粉产品随后可用于食品产品、蛋白质补充剂、动物饲料等中。在一些实施方案中，含有可溶性脂质的倾析溶液具有的干物质含量为约4％至9％w/w、优选约5.5％至7.5％w/w、并且最优选约6％至7％w/w，其中w/w是指干物质的重量占总溶液重量的百分比。在优选的实施方案中，干物质基本上由粗磷虾脂质组成，并且优选具有大于90％、95％、96％、97％、98％或99％w/w的脂质含量，其中w/w是指脂质的重量占总干物质重量的百分比。

3.脱盐和浓缩

在一些实施方案中，将粗磷虾脂质溶液脱盐以除去己烷不溶性材料，诸如不溶性无机盐(例如，有少量或痕量KCl和/或AlCl₃的NaCl)以及不需要的化合物(诸如三甲胺氧化物)和金属，诸如铜和砷。在一些优选的实施方案中，由脱盐磷虾脂质组合物制备本发明的LPC组合物。尽管参考上述脱盐磷虾脂质描述了方法，但是方法通常适用于含有磷脂的任何脂质级分。

在一些实施方案中，通过从粗磷虾脂质溶液中蒸发溶剂来使粗磷虾脂质溶液脱盐以提供粗磷虾脂质组合物，然后使粗磷虾脂质组合物经受水溶剂的反复洗涤。合适的水溶剂包括但不限于将乙醇与水或去离子水混合，使得乙醇浓度为约40％至70％、优选约50％至60％。在这些实施方案中，将粗磷虾脂质组合物与溶剂混合，回收脂质相，并且倾析水相。洗涤步骤可根据需要重复，例如1、2、3、4、5或更多次。水溶剂:粗磷虾脂质组合物的比率优选对于每个洗涤步骤为约1:1至1:5、更优选约1:1至2.5:1、并且最优选约1:1.7。

在一些实施方案中，粗脂质溶液通过色谱法脱盐。合适的色谱介质包括硅胶介质，包括但不限于球形硅胶和衍生硅胶，诸如C8(辛基官能化的二氧化硅)和C18(十八烷基官能化的二氧化硅)以及离子交换树脂，诸如Dowex^TM树脂。在利用色谱法的实施方案中，优选将粗磷虾脂质施加到质子溶剂中的色谱介质上，所述质子溶剂优选为与初始提取中使用的相同溶剂(例如，乙醇)。可使用标准柱色谱法，然而，可优选地使用移动床色谱法或模拟移动床色谱装置。本发明不限于任何特定类型的色谱纯化装置。实际上，在优选的实施方案中，色谱纯化装置可为柱、固定床装置、模拟移动床装置或移动床装置。在一些特别优选的实施方案中，装置为模拟移动床(SMB)装置。合适的SMB系统公开于例如美国专利号9,556,116；9,650,590和9,560,333中；所述专利各自以引用方式整体并入本文。

以干物质为基础的脱盐磷虾脂质的组成可优选表征如下。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含约30％w/w至50％w/w磷脂、更优选约35％w/w至约45％w/w磷脂、并且最优选约40％w/w磷脂，其中w/w是指磷脂的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含约32％w/w至52％w/w甘油三酯、更优选约36％w/w至约48％w/w甘油三酯、并且最优选约42％w/w甘油三酯，其中w/w是指甘油三酯的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含约3％w/w至13％w/w游离脂肪酸、更优选约5％w/w至约11％w/w游离脂肪酸、并且最优选约8％w/w游离脂肪酸，其中w/w是指游离脂肪酸的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含约0.5％w/w至5％w/w溶血磷脂、更优选约0.8％w/w至约3.2％w/w溶血磷脂、并且最优选约1.2％至约2.8％w/w溶血磷脂，其中w/w是指溶血磷脂的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含小于约1％w/w无机盐、更优选小于约0.5％w/w无机盐、甚至更优选小于约0.2％w/w w/w无机盐、并且最优选小于约0.1％w/w无机盐，其中w/w是指无机盐的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含小于约5mg N/100g、更优选小于约3mg N/100g、甚至更优选小于约2mg N/100g、并且最优选小于约1mg N/100g，其中N含量充当三甲胺氧化物(TMAO)含量的方便代理。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质包含小于约10ppm铜(Cu⁺⁺)、更优选小于约5ppm Cu⁺⁺、甚至更优选小于约2ppm Cu⁺⁺、并且最优选小于约1ppm Cu⁺⁺。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质包含小于约10ppm总砷(As³⁺，有机和无机)、更优选小于约5ppm总砷、甚至更优选小于约3ppm总砷、并且最优选小于约1ppm总砷。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质优选包含约0.01％至2％w/w乙酯、更优选约0.01％至约1.5％w/w乙酯、并且最优选约0.01％至约1％w/w乙酯，其中w/w是指乙酯的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含小于约5％、4％、3％或2％w/w乙酯至0.01％乙酯的下限(即，5％与0.01％w/w乙酯之间、4％与0.01％w/w乙酯之间、3％与0.01％w/w乙酯之间、或2％与0.01％w/w乙酯之间)，更优选小于约1.5％w/w乙酯、并且最优选小于约1％w/w乙酯，其中w/w是指乙酯的重量占总脱盐磷虾脂质重量的百分比。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质具有当用95％乙醇中5％干物质测量时的小于约50μS/cm的电导率、更优选当用95％乙醇中5％干物质测量时的小于约30μS/cm的电导率、并且最优选当用95％乙醇中5％干物质测量时的小于约20μS/cm的电导率。在一些实施方案中，脱盐磷虾脂质具有的粘度为在25℃下的约50至800mPas、更优选在25℃下的约100至400mPas、并且最优选在25℃下的180至340mPas。在一些实施方案中，当在95％乙醇中测量时，脱盐磷虾脂质组合物具有约6.7至8.3的pH。

在一些优选的实施方案中，由脱盐磷虾脂质组合物制成的磷脂组合物制备本发明的LPC组合物。尽管参考上述脱盐磷虾脂质描述了方法，但是方法通常适用于含有磷脂的任何脂质级分。

因此，在一些实施方案中，通过添加或除去溶剂将含有磷脂的脂质组合物(诸如上述脱盐磷虾脂质组合物)的干物质含量调节至预定水平，并且允许所得混合物进行分馏，使得磷脂主要分配到一个相中，而中性脂质分配到不同的相中。在一些实施方案中，将含有磷脂(诸如脱盐磷虾脂质)的脂质组合物与合适的质子溶剂，优选乙醇混合，使得所得溶液的干物质(即，脂质)含量为约10％至40％w/w、优选约15％至35％w/w、更优选约18％至30％w/w、并且最优选约20％至25％w/w。在脱盐步骤已在合适的质子醇溶液中提供脂质的实施方案中，诸如使用乙醇作为色谱法的溶剂的情况下，脱盐磷虾脂质溶液可优选蒸发以提供所需的干物质含量，即，约10％至40％w/w、优选约15％至35％w/w、更优选约18％至28％w/w、并且最优选约20％至22％w/w。合适的蒸发方法包括但不限于减压蒸发(例如，真空蒸馏)、降膜蒸发和通过膜除去溶剂。

通过添加或除去溶剂将干物质含量调节至所需水平后，接着允许将溶液分馏成具有富集磷脂含量的上层轻相溶液以及含有主要中性脂质和高水平虾青素的下层重相溶液。优选地，控制分馏步骤期间溶液的温度。在一些实施方案中，分馏步骤的温度为约0℃至约20℃、优选约5℃至约15℃、更优选约8℃至约12℃、并且最优选约10℃。

在一些实施方案中，可改变质子溶剂的浓度以控制上层相的脂质组合物中的磷脂浓度。在一些实施方案中，质子溶剂具有的的浓度为约55％至100％，更优选约65％至98％。在一些优选的实施方案中，质子溶剂具有的的浓度为约90％至100％、更优选约92％至98％、并且最优选约95％。在这些实施方案中，分馏后上层相中脂质的以干物质为基础的磷脂含量为约50％至70％w/w、优选约55％至65％w/w并且最优选约60％w/w。在其他优选的实施方案中，质子溶剂具有的的浓度为约80％至90％w/w、更优选约82％至88％w/w、并且最优选约85％w/w。在这些实施方案中，分馏后上层相中脂质的以干物质为基础的磷脂含量为约70％至90％w/w、优选约75％至85％w/w并且最优选约80％w/w。

在一些实施方案中，通过离心，优选用两相或三相分离器进行低温离心(cryocentrifugation)来分离上层相和下层相。在一些实施方案中，在约0℃至约30℃、更优选约0℃至约10℃并且最优选约3℃至约7℃下进行离心。一般来讲，所利用的重力将取决于相之间的ΔT。较低的温度提供较大的ΔT。在一些优选的实施方案中，分离中采用的G力为约8000X G至约15000X G。

在一些实施方案中，如上所述的通过离心步骤调节干物质含量的工艺步骤重复一次或多次。

在一些实施方案中，收集上层轻相并对其进行进一步处理。优选地通过一个或多个蒸发步骤从上层相中除去溶剂，以产生磷虾磷脂组合物。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含约50％至85％w/w磷脂，并且更优选约55％至80％w/w磷脂，其中w/w是指磷脂的重量占组合物的总重量的百分比。

在一些实施方案中，收集下层重相并对其进行进一步处理。在一些实施方案中，从下层相中除去溶剂，以提供磷虾中性脂质组合物。在一些实施方案中，下层相可用质子溶剂进行分馏，并经受第二离心步骤以回收在第一分馏步骤中未回收的另外的磷脂。再次，从所得的下层相中除去溶剂，以提供磷虾中性脂质组合物。在两种情况下，磷虾中性脂质组合物的特征在于都含有高水平的虾青素。在一些实施方案中，可将磷虾中性脂质组合物与磷虾磷脂组合物组合或混合，以提供具有所需水平的磷脂、中性脂质和虾青素的脂质组合物。在一些实施方案中，可对磷虾中性脂质组合物进行进一步处理(例如，通过色谱法)，以提供虾青素组合物。然后，可将虾青素组合物与磷虾磷脂组合物组合或混合，以提供具有所需水平的磷脂和虾青素的脂质组合物。

在一些实施方案中，工艺还包括在工艺期间的任何阶段添加甘油三酯油(诸如中链甘油三酯油或长链甘油三酯油)的步骤。例如，可将甘油三酯油添加到所收集的轻相、重相、磷脂组合物或中性脂质组合物中。在一些实施方案中，如上所述的通过离心步骤和/或蒸发步骤调节干物质含量的工艺步骤重复一次或多次。

在一些实施方案中，通过进一步的色谱步骤产生磷虾磷脂和中性脂质组合物。在这些实施方案中，将上述脱盐富含脂质的物流的至少一部分引入极性液体提取区，所述极性液体提取区包括固定床吸附器，该固定床吸附器含有能有效吸附中性脂质的大孔苯乙烯聚合物微球型树脂。在优选的实施方案中，固定床色谱步骤提供极性脂质提取物流，所述极性脂质提取物流包含溶剂和以干基计至少50wt-％的极性脂质。在一些优选的实施方案中，固定床吸附器间歇地用热乙醇流在约40℃与约60℃之间的热再生温度下再生，以提供包含溶剂、中性脂质和虾青素的中性脂质残液流。在一些实施方案中，从极性脂质提取物流中回收溶剂以提供磷虾磷脂组合物，并且从中性脂质残液流中回收溶剂以提供中性脂质组合物。这些工艺更详细地描述于共同未决的美国申请号14/619,102中，所述申请以引用方式整体并入本文。

在一些实施方案中，以干物质为基础，磷虾磷脂组合物优选包含约5％w/w至35％w/w甘油三酯、更优选约10％w/w至约30％w/w甘油三酯、并且最优选约15％至25％w/w甘油三酯，其中w/w是指甘油三酯的重量占总磷虾磷脂组合物重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含约2％w/w至13％w/w游离脂肪酸、更优选约4％w/w至约11％w/w游离脂肪酸、并且最优选约4％至10％w/w游离脂肪酸，其中w/w是指游离脂肪酸的重量占总磷虾磷脂组合物重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含约0.5％w/w至10％w/w溶血磷脂、更优选约0.8％w/w至约7.0％w/w溶血磷脂、并且最优选小于约5.0％w/w或3.0％w/w溶血磷脂，其中w/w是指溶血磷脂的重量占总磷虾磷脂组合物重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含小于约1％w/w无机盐、更优选小于约0.5％w/w无机盐、甚至更优选小于约0.2％w/w无机盐、并且最优选小于约0.1％或0.05％w/w无机盐，其中w/w是指无机盐的重量占总磷虾磷脂组合物重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含小于约5mg N/100g、更优选小于约3mg N/100g、甚至更优选小于约2mg N/100g、并且最优选小于约1mg N/100g，其中N含量充当三甲胺氧化物(TMAO)含量的方便代理。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物包含小于约10ppm铜(Cu⁺⁺)、更优选小于约5ppm Cu⁺⁺、甚至更优选小于约2ppm Cu⁺⁺、并且最优选小于约1ppm Cu⁺⁺。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物包含小于约10ppm总砷(As³⁺)、更优选小于约5ppm总砷、甚至更优选小于约3ppm总砷、并且最优选小于约1ppm总砷。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含约0.01％至2％w/w乙酯、更优选约0.01％至约1.5％w/w乙酯、并且最优选约0.01％至约1％w/w乙酯，其中w/w是指乙酯的重量占总磷虾磷脂组合物重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物优选包含小于约5％、4％、3％或2％w/w乙酯至0.01％乙酯的下限(即，5％与0.01％w/w乙酯之间、4％与0.01％w/w乙酯之间、3％与0.01％w/w乙酯之间、或2％与0.01％w/w乙酯之间)，更优选小于约1.5％w/w乙酯、并且最优选小于约1％w/w乙酯，其中w/w是指乙酯的重量占总磷虾磷脂组合物重量的百分比。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物具有当用95％乙醇中5％干物质测量时的小于约50μS/cm的电导率、更优选当用95％乙醇中5％干物质测量时的小于约30μS/cm的电导率、并且最优选当用95％乙醇中5％干物质测量时的小于约20μS/cm、10μS/cm、5μS/cm或1μS/cm的电导率。在一些实施方案中，磷虾磷脂组合物具有的粘度为在35℃下的约400至2000mPas、更优选在35℃下的约500至1800mPas、并且最优选在35℃下的600至1600mPas。在一些实施方案中，当在95％乙醇中测量时，磷虾磷脂组合物具有约6.7至8.3的pH。

4.LPC组合物的生产

在一些优选的实施方案中，由上述磷脂来源制备本发明的LPC组合物。在一些优选的实施方案中，本发明提供了用于从含有磷脂的海洋或其他原料中制备具有高EPA和DHA含量的溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物的方法，所述方法包括用非海洋原料固有的磷脂酶处理海洋原料，以提供经磷脂酶处理的原料，并对经磷脂酶处理的原料进行分馏，以提供比起始原料具有更高的溶血磷脂酰胆碱含量的脂质组合物。在一些优选的实施方案中，原料选自由以下组成的组：磷虾脂质制剂、鲱鱼脂质制剂、鲱鱼子脂质制剂、藻类脂质制剂和哲水蚤脂质制剂，从而提供磷虾LPC组合物、鲱鱼LPC组合物、鲱鱼子LPC组合物、藻类LPC组合物或哲水蚤LPC组合物。在一些特别优选的实施方案中，磷虾脂质制剂为南极磷虾脂质制剂。在一些优选的实施方案中，原料具有的EPA和DHA的含量在以下范围内；EPA：1至70wt％和DHA：1至70wt％、更优选EPA：5至70wt％和DHA：5至70wt％、最优选EPA：10至60wt％和DHA：10至60wt％。

在一些实施方案中，原料在溶剂中与磷脂酶接触。本发明不限于使用任何特定的磷脂酶。在一些实施方案中，磷脂酶为磷脂酶A1(PLA1)。在一些特别优选的实施方案中，酶为LECITASE^TM Ultra、QUARA^TM LowP。在一些实施方案中，溶剂为水和醇的混合物。在一些优选的实施方案中，醇为乙醇。在其他优选的实施方案中，原料在约85％水和15％乙醇的混合物中与磷脂酶接触。在一些特别优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)，并且酶浓度在0.1至20vol/wt％的范围内，优选0.1至15vol/wt％、更优选0.1至10vol/wt％、还优选0.1至5vol/wt％、最优选0.1至3vol/wt％。在一些优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中在3至12，优选4至10、更优选4至9、最优选5至9的pH下执行方法。在一些优选的实施方案中，酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中在4至95℃之间，优选4至85℃、更优选10至80℃、还优选15至70℃、甚至更优选15至65℃、最优选15至60℃下执行方法。

在一些优选的实施方案中，通过另外的溶剂浓缩和/或色谱分离程序来制备本发明的LPC组合物。在一些优选的实施方案中，在极性/非极性溶剂体系中通过相分离来浓缩经酶处理的LPC组合物。在一些优选的实施方案中，将经酶处理的LPC组合物与包含等量的极性溶剂(例如，甲醇)和非极性溶剂(例如，庚烷)的溶剂体系混合。搅拌所得的混合物，并允许相分离。极性脂质(例如，LPC和PC)分配到极性相中。在一些实施方案中，除去极性相，用庚烷洗涤，并且回收极性相。在一些优选的实施方案中，接着将极性相蒸发至干以提供浓缩的LPC组合物。在一些实施方案中，可通过色谱程序，例如通过使用硅胶60凝胶的快速色谱法之后蒸发至干来使LPC组合物进一步浓缩。

上述方法产生具有优选特征和/或特性的LPC组合物。在一些优选的实施方案中，LPC组合物具有的EPA和DHA的含量在以下范围内；EPA：1至100wt％和/或DHA：1至100wt％、更优选EPA：5至100wt％和/或DHA：5至100wt％、最优选EPA：10至90wt％和/或DHA：10至90wt％。在其他优选的实施方案中，LPC组合物具有的LPC含量在10至100wt％的范围内，优选20至100wt％、更优选30至100wt％、还优选40至100wt％、最优选50至100wt％。

在其他优选的实施方案中，通过所述工艺获得的LPC组合物的特征在于包含：

组合物的约10％至约100％LPC w/w、或60％至100％LPC、70％至90％LPC、20％至50％LPC、20％至40％LPC、20％至30％LPC、10％至30％LPC，并且具有的omega-3脂肪酸含量为组合物的5％至60％w/w、组合物的5％至50％w/w、组合物的5％至40％或组合物的5％至30％、或组合物的20％至60％w/w、组合物的20％至50％w/w、或组合物的20％至40％w/w、或组合物的30％至50％w/w。本领域技术人员将认识到，omega-3脂肪酸含量包括通过酯或醚键连接到组合物中的磷脂和甘油分子的omega-3脂肪酸酰基链的含量。可优选地通过¹H-NMR或其他合适的NMR技术，包括¹³C-NMR来确定组合物中的omega-s脂肪酸酰基的wt％。或者，omega-3脂肪酸含量可表示为本领域已知的通过气相色谱法分析脂肪酸的g/100g。在这些实施方案中，溶血磷脂组合物优选包含10至50g/100g omega-3脂肪酸，并且最优选20至40g/100g omega-3脂肪酸，其中g/100克是通过气相色谱法测得的每100克总脂肪酸中omega-3脂肪酸的重量。

在优选的实施方案中，溶血磷脂组合物还具有一种或多种以下特征或特性：

a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1、并且更优选1.2:1至8:1、1.2:1至4:1、1.2:1至2:1、4:1至10:1；或5:1至12:1；

b)磷脂酰胆碱(PC)含量为组合物的0.5％至10％w/w，并且更优选小于组合物的10％、9％、8％、7％、6％或5％w/w；

c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于组合物的1.2％、1.1％、1.0％、0.7％或0.5％w/w；

d)中性脂质含量为组合物的约5％至65％w/w、或更优选约45％至65％w/w或15％至35％w/w；

e)2-LPC:2-LPC醚的比率为15:1至50:1，并且更优选50:1至25:1，并且其中组合物可优选包含小于5％、4％、3％、2％、1.0％、0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％或0.1％2-LPC醚；和/或

f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA为1:1至5:1。

在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的20％至40％或23％至35％的LPCw/w。在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的40％至60％、40％至70％或50％至70％的LPC w/w。在一些优选的实施方案中，组合物包含组合物的70％至90％的LPC w/w。关于特性(f)，在LPC组合物由磷虾磷脂制备的情况下，LPC组合物将优选地包含EPA:DHA的比率为1:1至3:1，并且更优选1.5:1至2.5:1。关于特性(f)，在LPC组合物由磷虾以外的海洋来源(例如，鲱鱼、鲱鱼子或海藻)制备的情况下，LPC组合物将优选地包含DHA:EPA的比率为1:1至5:1、更优选2:1至4:1、并且最优选2.5:1至3.5:1。

在一些优选的实施方案中，组合物具有组合物的35％至45％w/w的omega-3脂肪酸含量。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)或(f)或特性的组合，例如：特性(a)和(b)；(a)和(c)；(a)和(d)；(a)和(e)；(a)和(f)(b)和(c)；(b)和(d)；(b)和(e)；(b)和(f)；(c)和(d)；(c)和(e)；((c)和(f)；(d)和(e)；(d)和(f)；(e)和(f)；(a)、(b)和(c)；(a)、(b)和(d)；(a)、(b)和(e)；(a)、(b)和(f)；(a)、(c)和(d)；(a)、(c)和(e)；(a)、(c)和(f)；(a)、(d)和(e)；(a)、(d)和(f)；(b)、(c)和(d)；(b)、(c)和(e)；(b)(c)和(f)；(b)、(d)和(e)；(b)、(d)和(f)；(c)、(d)和(e)；(c)、(d)和(f)；(a)、(b)、(c)和(d)；(a)、(b)、(c)和(e)；(a)、(b)、(c)和(f)；(b)、(c)、(d)和(e)；(b)、(c)、(d)和(f)；(a)、(c)、(d)和(e)；(a)、(c)、(d)和(f)；(a)、(b)、(d)和(e)；(a)、(b)、(d)和(f)；(a)、(b)、(c)、(d)和(e)；(a)、(b)、(c)、(d)和(f)；(b)、(c)、(d)、(e)和(f)；(a)、(b)、(d)、(e)和(f)；(a)、(b)、(c)、(e)和(f)；以及(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)以及任何其他可能的组合。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)和(c)中的两种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)和(e)中的两种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的三种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)和(e)中的四种或更多种。在一些优选的实施方案中，组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的五种或更多种。

5.LPC组合物的配制

在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种药物或营养组合物，所述药物或营养组合物包含如上所述的LPC组合物和生理上可接受的载剂。在一些优选的实施方案中，生理上可接受的载剂为脂质载剂。在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种口服递送载体，所述口服递送载体含有如本文所述的海洋LPC组合物、药物组合物或营养组合物。

在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种脂质组合物，所述脂质组合物包含脂质级分和第二脂质级分，其中第一脂质级分为如本文所述的海洋LPC组合物，并且第二脂质级分从与第一脂质级分不同的来源获得且/或含有低于20％的LPC。在一些优选的实施方案中，第二脂质级分选自由以下组成的组：甘油三酯级分、甘油二酯级分、脂肪酸乙酯级分、游离脂肪酸级分及其组合。在一些优选的实施方案中，第二脂质级分是包含EPA和/或DHA的海洋脂质级分。在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种药物或营养组合物，所述药物或营养组合物包含如前所述的组合物和生理上可接受的载剂。在一些优选的实施方案中，本发明提供了一种口服递送载体，所述口服递送载体含有如前所述的脂质组合物。

本发明的LPC组合物优选口服施用。因此，在一些实施方案中，本发明的组合物(诸如前面部分中描述的那些)包含在可接受的赋形剂和/或载剂中以用于口服施用。载剂的实际形式以及因此组合物本身并不重要。载剂可为液体、凝胶、胶帽、胶囊、粉末、固体片剂(包衣或非包衣的)、茶等。组合物优选为片剂或胶囊的形式，并且最优选为软凝胶胶囊的形式。合适的赋形剂和/或载剂包括植物油、鱼油、磷虾油、麦芽糊精、碳酸钙、磷酸二钙、磷酸三钙、微晶纤维素、葡萄糖、米粉、硬脂酸镁、硬脂酸、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联维酮、蔗糖、植物胶、乳糖、甲基纤维素、聚维酮、羧甲基纤维素、玉米淀粉等(包括其混合物)。优选的载剂包括碳酸钙、硬脂酸镁、麦芽糊精及其混合物。使用常规技术将各种成分以及赋形剂和/或载剂混合并形成所需的形式。本发明的片剂或胶囊可用在约6.0至7.0的pH下溶解的肠溶衣包衣。溶解于小肠但不溶于胃的合适的肠溶衣是乙酸邻苯二甲酸纤维素。用于配制和施用的技术的更多细节可发现于Remington's Pharmaceutical Sciences(Maack Publishing Co.，Easton，PA)的最新版中。

在一些实施方案中，将LPC组合物用调味剂或甜味剂配制用于口服施用。有用的调味剂的实例包括但不限于纯茴香提取物、仿香蕉提取物、仿樱桃提取物、巧克力提取物、纯柠檬提取物、纯橘子提取物、纯薄荷提取物、仿菠萝提取物、仿朗姆酒提取物、仿草莓提取物或纯香草提取物；或挥发油，诸如香脂油、月桂油、佛手柑油、雪松油、核桃油、樱桃油、肉桂油、丁香油或薄荷油；花生酱、巧克力调味料、香草曲奇饼屑、奶油糖果或太妃糖。在一个实施方案中，膳食补充剂含有可可或巧克力。为了最终产品的稳定性，可添加乳化剂。合适的乳化剂的实例包括但不限于卵磷脂(例如，来自鸡蛋或大豆)、和/或单甘油酯和二甘油酯。其他乳化剂对本领域技术人员是显而易见的，并且合适的乳化剂的选择将部分取决于配方和最终产品。除了上述碳水化合物外，营养补充剂还可含有天然或人工(优选低卡路里)甜味剂，例如，糖类、甜蜜素、天冬氨酸、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸钾(acesulfame K)和/或山梨醇。

本发明的LPC组合物也可作为膳食补充剂、营养补充剂或功能性食品来递送。

膳食补充剂可包含一种或多种惰性成分，特别是在需要限制通过膳食补充剂添加到饮食中的卡路里数量的情况下。例如，本发明的膳食补充剂还可含有任选成分，包括例如，草药、维生素、矿物质、增强剂、着色剂、甜味剂、调味品、惰性成分等。例如，本发明的膳食补充剂可含有以下中的一种或多种：抗坏血酸盐类(抗坏血酸、矿物抗坏血酸盐、玫瑰果(rose hip)、针叶树(acerola)等)、脱氢表雄酮(DHEA)、绿茶(多酚)、肌醇、海带、红皮藻(dulse)、生物类黄酮、麦芽糊精、荨麻、烟酸、烟酰胺、迷迭香、硒、二氧化硅(silica)(二氧化硅(silicon dioxide)、硅胶、马尾草、剃须草等)、螺旋藻、锌等。此类任选成分可为天然存在或浓缩的形式。

在一些实施方案中，膳食补充剂还包含维生素和矿物质，包括但不限于磷酸三钙或乙酸三钙；磷酸氢二钾；硫酸镁或氧化镁；盐(氯化钠)；氯化钾或乙酸钾；抗坏血酸；正磷酸铁；烟酰胺；硫酸锌或氧化锌；泛酸钙；葡萄糖酸铜；核黄素；β-胡萝卜素；盐酸吡哆醇；硝酸硫胺；叶酸；生物素；氯化铬或吡啶甲酸铬；碘化钾；硒酸钠；钼酸钠；叶绿醌；维生素D₃；氰钴胺素；亚硒酸钠；硫酸铜；维生素A；维生素C；肌醇；碘化钾。维生素和矿物质的合适剂量可例如通过查阅美国RDA指南获得。

在其他实施方案中，本发明提供了包含本发明的LPC组合物的营养补充剂(例如，能量棒或替餐棒或替餐饮料)。在优选的实施方案中，营养补充剂包含有效量的如上所述的组分。营养补充剂可充当正餐或零食的替代品，并且通常提供营养卡路里。优选地，营养补充剂以平衡的量提供碳水化合物、蛋白质和脂肪。营养补充剂还可包含简单、中等链长的碳水化合物、或多糖、或其组合。可选择简单的糖来获得理想的感官特性。生玉米淀粉是复杂碳水化合物的一个实例。如果希望保持其高分子量结构，则应仅将其包括在未烹饪或加热处理的食品配方或其部分中，因为热量会将复杂碳水化合物分解成简单碳水化合物，其中简单碳水化合物为单糖或二糖。在一个实施方案中，营养补充剂含有三个链长水平的碳水化合物来源(简单、中等和复杂；例如，蔗糖、麦芽糊精和生玉米淀粉)的组合。

在其他实施方案中，本发明提供了包含本发明的LPC组合物的食品产品、预制食品产品或食物(即，功能性食品)。在优选的实施方案中，食品包含有效量的如上所述的组分。例如，在一些实施方案中，提供了包含脂肪酸或其衍生物的饮料和固体或半固体食品。这些形式可包括但不限于饮料(例如，软饮料、牛奶和其他乳饮料以及无糖饮料)、烘焙食品、布丁、乳制品、甜点、休闲食品或冷冻甜点或新鲜食品(例如，冰淇淋、奶昔)、速冻食品、糖果、休闲产品(例如，薯片)、汤、果酱、酱料、色拉调料、预制肉制品、奶酪、酸奶和任何其他含脂肪或油的食品、以及食品配料(例如，小麦粉)。

在一些优选的实施方案中，将LPC组合物掺入可咀嚼基质中。优选的可咀嚼基质为果冻糖果和明胶基软糖。示例性软糖包括小熊软糖、蠕虫软糖、青蛙软糖、汉堡包软糖、樱桃软糖、苏打瓶软糖、鲨鱼软糖、军人软糖、河马软糖、龙虾软糖、西瓜软糖、章鱼软糖、苹果软糖、桃子软糖和橘子软糖。术语“软糖(gummi)”和“软糖(gummy)”在本文可互换使用。

在一些实施方案中，本发明提供了包含上述LPC组合物和一种或多种另外的omega-3脂肪酸衍生物或游离脂肪酸的组合物。omega-3脂肪酸衍生物或游离脂肪酸可衍生自中性脂质提取物或其他来源，诸如鱼油或omega-3酯组合物。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的omega-3脂肪酸衍生物选自omega-3酯和甘油酯。例如，在一些实施方案中，组合物可包含约1％至约60％w/w的磷虾油组合物(即，磷脂化合物的重量/组合物的总重量)，其中组合物的剩余的99％至40％w/w为omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合(即，omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合的重量/组合物的总重量)。在一些实施方案中，组合物可包含约5％至约60％w/w磷脂，其中组合物的剩余的95％至40％w/w为omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，组合物可包含约20％至约60％w/w磷脂，其中组合物的剩余的80％至40％w/w为omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，组合物可包含约30％至约60％w/w磷脂，其中组合物的剩余的70％至40％w/w为omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，组合物可包含约40％至约60％w/w磷脂，其中组合物的剩余的60％至40％w/w为omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合。在一些实施方案中，组合物可包含约50％至约60％w/w磷脂，其中组合物的剩余的50％至40％w/w为omega-3甘油酯、酯或游离脂肪酸或其组合。

本发明的LPC组合物还可掺入动物和鱼类的饲料和日粮中。可由许多不同的饲料成分为动物和鱼类配制许多不同的饲料日粮。通常按照美国国家研究委员会(NationalResearch Council)的标准来配制日粮以提供营养。日粮中使用的饲料原料是根据市场价格和可得性来选择的。因此，日粮的一些组分可随时间改变。在本发明的饲料中，日粮将总是含有本发明的LPC组合物，优选的量为日粮中总脂肪的0.1％至50％、0.5％至50％、1.0％至40％、1.0％至30％、1.0％至20％、1.0％至10％、0.1％至10％、或0.5％至5％。对于饲料日粮配方、实际日粮和NRC准则的讨论，参见Church，Livestock Feeds and Feeding，O&BBooks，Inc.，Corvallis，Oreg.(1984)以及Feeds and Nutrition Digest，Ensminger、Oldfield和Heineman编，Ensminger Publishing Corporation，Clovis，Calif.(1990)，其以引用方式并入本文。

可根据NRC要求表征本发明的动物饲料日粮。NRC要求可发现于Church，LivestockFeeds and Feeding，O&B Books，Inc.，Corvallis，Oreg.(1984)或其他营养标准中。传统上使用蛋白质和能量需求来平衡动物和鱼类的日粮，然后根据需要进行调整以满足其他需求。本发明的动物和鱼类饲料将含有约0.05％至5％脂质以及平衡饲料所必需的其他饲料物料，以满足不同生长和维持阶段的NRC要求(或其他公认的要求)。

调整蛋白质和能量的相对量，以反映标准要求。饲料组分的量将随动物喂养的阶段而变化。幼畜和鱼类的生长用的日粮将具有较高的蛋白质水平，而用于育成动物以供上市的育成用的日粮将具有较高的能量值，所述能量值由碳水化合物提供。例如，各种动物的断奶前仔畜、断奶仔畜和生长-育成的日粮将通常分别含有约20至24％蛋白质、18至20％蛋白质和13至17％蛋白质。在一些喂养情况下，必须注意提供适当的氨基酸以及总蛋白质含量。也可通过在日粮中添加脂肪来满足能量需求。在本发明中，溶血磷脂组合物提供部分能量需求。

本发明的典型鲑鱼日粮包含约5％至65％鱼粉和/或磷虾粉、5％至30％植物油和5％至15％鱼油，表示为组分的重量/日粮的重量％(％w/w)并且为本发明的LPC组合物的0.5％至5％，以提供日粮的10％至45％w/w的总脂肪含量。在一些实施方案中，日粮具有的粗蛋白含量为约32％至46％、优选约36％至42％、粗脂质含量为约26％至42％、优选约28％至38％、碳水化合物(NFE)含量为约11％至18％、优选约13％至15％、纤维含量为约1％至5％、优选约1.5％至2.5％、灰分含量为约4％至7％、优选约4.5％至6.5％、总磷含量(P)为约0.5％至1.1％、优选约0.6％至1.0％、总能量含量为约20至30MJ/kg、优选约23至28MJ/kg、以及可消化能量含量为约20至24MJ/kg。

可将其他成分添加到饲料日粮中。这些成分包括但不限于矿物质补充剂，诸如钙、磷、盐、硒和锌；维生素补充剂，诸如维生素A、B、D、E和K；氨基酸补充剂，诸如赖氨酸；抗球虫药(除猪饲料外)或生长促进剂，诸如杆菌肽或维吉尼亚霉素(virginamycin)；以及其他活性药物，诸如金霉素、磺胺噻唑和青霉素。对于维生素、矿物质和抗生素补充剂的配方参见Church，Livestock Feeds and Feeding，O&B Books，Inc.，Corvallis，Oreg.(1984)。

在一个优选的实施方案中，将溶血磷脂组合物掺入颗粒饲料中以用于向家畜施用。通过首先混合饲料组分，然后在加热和加压下将饲料组分压实并通过模头挤出，从而制成颗粒饲料。通过本领域已知的方法对饲料进行制粒，所述方法描述于MacBain，PelletingAnimal Feed，American Feed Manufacturers Association，Arlington，Va.(1974)中，其以引用方式并入本文。在将添加的脂肪掺入颗粒饲料中时，需要谨慎以避免制成粉状颗粒。通常，在制粒期间仅添加约2％的脂肪，其余的在颗粒冷却后添加。

可通过添加抗氧化剂来稳定油和含有油的饲料。因此，可根据1997年官方出版物Association of Feed Control Officials Incorporated(1997)(在此以引用方式并入)中列出的F.D.A.规定来添加抗氧化剂作为化学防腐剂。合适的抗氧化剂包括但不限于：卵磷脂、生育酚、抗坏血酸盐、抗坏血酸棕榈酸酯和香料提取物，诸如迷迭香提取物。

如上所述配制饲料，并且根据NRC指南，针对要饲养的动物的要求进行调整。例如，可为狗、猫、家禽、牛、虾和鱼(诸如鲑鱼、鳟鱼、鲶鱼和罗非鱼)配制饲料。对于这些动物的各种饲料配方、平衡方法和要求讨论于Church，Livestock Feeds and Feeding，O&B Books，Inc.，Corvallis，Oreg.(1984)以及Feeds and Nutrition Digest，Ensminger、Oldfield和Heineman编，Ensminger Publishing Corporation，Clovis，Calif.(1990)中，其以引用方式并入本文。

6.磷虾磷脂组合物的用途

在一些实施方案中，提供了本发明的溶血磷脂组合物用于通过口服施用溶血磷脂组合物来增加靶组织或器官中的EPA和/或DHA的量。根据本发明的优选靶组织和器官是肾上腺、血液、骨、骨髓、脑、脂肪(白色)、肾脏(整个)、大肠粘膜、肝、肺、肌肉、心肌、胰腺、垂体、前列腺、皮肤、小肠粘膜、脾、胃粘膜、睾丸、胸腺和/或甲状腺。

在一些实施方案中，将有效量的上述化合物或组合物向对其有需要的受试者施用，以治疗、预防或改善认知和/或认知疾病、病症或损害(记忆力、集中力、学习力(缺陷))，或治疗或预防神经退行性病症。在一些实施方案中，认知疾病、病症或损害选自注意力缺陷障碍(ADD)、注意力缺陷多动障碍(ADHD)、自闭症/自闭症谱系障碍(ASD)、(诵读困难、年龄相关的记忆障碍和学习障碍、健忘症、轻度认知障碍、非痴呆性认知障碍、阿尔茨海默氏病前期、阿尔茨海默氏病、癫痫、皮克氏病、亨廷顿氏病、帕金森氏病、路格瑞氏症(LouGehrig's disease)、痴呆前综合征、路易体痴呆、齿状核红核苍白球路易体萎缩、弗雷德赖希共济失调(Freidreich's ataxia)、多系统萎缩、1型、2型、3型、6型、7型脊髓小脑共济失调、肌萎缩性侧索硬化、家族性痉挛性轻瘫、脊髓性肌萎缩、脊髓延髓肌肉萎缩症、年龄相关的认知能力下降、认知能力退化、中度精神障碍、由于衰老而导致的心智衰退、影响脑电波强度和/或脑葡萄糖利用的状况、压力、焦虑、集中力和注意力受损、情绪恶化、一般认知和心智健康、神经发育、神经退行性病症、荷尔蒙失调、神经失衡或其任何组合。在一个具体的实施方案中，认知病症为记忆障碍。

在一些实施方案中，将有效量的上述化合物或组合物向对其有需要的受试者施用，以治疗或预防心血管病症或代谢综合症。在一些实施方案中，心血管病症选自动脉粥样硬化、动脉硬化、冠心(颈动脉)病(CHD或CAD)、急性冠脉综合征(或ACS)、瓣膜性心脏病、主动脉瓣和二尖瓣病症、心律失常/心房颤动、心肌病和心力衰竭、心绞痛、急性心肌梗塞(或AMI)、高血压、体位性低血压、休克、栓塞(肺和静脉)、心内膜炎、动脉、主动脉及其分支疾病、外周血管系统病症(外周动脉疾病或PAD)、川崎病、先天性心脏病(心血管缺陷)和中风(脑血管疾病)、血脂异常、高甘油三酯血症、高血压、心力衰竭、心律失常、低HDL水平、高LDL水平、稳定型心绞痛、冠心病、急性心肌梗死、心肌梗死二级预防、心肌病、心内膜炎、2型糖尿病、胰岛素抵抗、糖耐量降低、高胆固醇血症、中风、高脂血症、高脂蛋白血症、慢性肾脏疾病、间歇性跛行、高磷酸盐血症、omega-3缺乏症、磷脂缺乏症、颈动脉粥样硬化、外周动脉疾病、糖尿病肾病、HIV感染的高胆固醇血症、急性冠状动脉综合征(ACS)、非酒精性脂肪肝病/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)、动脉闭塞性疾病、脑动脉粥样硬化、动脉硬化、脑血管病症、心肌缺血、导致血管血栓形成的凝血病和糖尿病性自主神经病变。

在一些实施方案中，将有效量的上述化合物或组合物向对其有需要的受试者施用，以抑制、预防或治疗炎症或炎性疾病。在一些实施方案中，炎症或炎性疾病选自器官移植排斥；由器官移植引起的再氧合损伤(参见Grupp等人，J.Mol.Cell.Cardiol.31：297-303(1999))，包括但不限于以下器官的移植：心脏、肺、肝和肾；关节慢性炎性疾病，包括关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎和骨吸收增加相关的骨疾病；炎症性肠病(IBD)，诸如回肠炎、溃疡性结肠炎(UC)、巴雷特综合症和克罗恩氏病(CD)；炎症性肺病，诸如哮喘、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和慢性阻塞性肺病(COPD)；眼部炎性疾病，包括角膜营养不良、沙眼、盘尾丝虫病、葡萄膜炎、交感性眼炎和眼内炎；牙龈慢性炎性疾病，包括牙龈炎和牙周炎；肾的炎性疾病，包括尿毒症并发症、肾小球肾炎和肾病；皮肤炎性疾病，包括硬化性皮炎、牛皮癣和湿疹；中枢神经系统炎性疾病，包括神经系统慢性脱髓鞘疾病、多发性硬化症、艾滋病相关的神经退行性变和阿尔茨海默氏病、传染性脑膜炎、脑脊髓炎、帕金森氏病、亨廷顿式病、癫痫、肌萎缩性侧索硬化症和病毒性或自身免疫性脑炎、子痫前期；慢性肝功能衰竭、脑脊髓损伤和癌症。炎性疾病也可为身体的全身性炎症，例如革兰氏阳性或革兰氏阴性休克、出血性或过敏性休克、或由癌症化学疗法对促炎性细胞因子的响应引起的休克，例如，与促炎性细胞因子相关的休克。可例如通过作为癌症治疗施用的化学治疗剂而诱发此种休克。其他病症包括抑郁症、肥胖症、过敏性疾病、急性心血管事件、肌肉萎缩性疾病和癌症恶病质。此外，可用磷脂组合物治疗由手术和创伤引起的炎症。

在一些实施方案中，将上述LPC组合物向对其有需要的受试者施用，以治疗与红细胞和细胞膜有关的疾病或疾患，并且尤其是与细胞膜的红细胞异常有关的疾病或疾患。在一些实施方案中，疾患或疾病为镰状细胞疾病、镰状细胞贫血或镰状细胞性状。在一些实施方案中，疾患或疾病为地中海贫血(α-、β-或δ-)、地中海贫血合并血红蛋白病(血红蛋白E、血红蛋白S或血红蛋白C)、脾肿大或膜异常，诸如棘红细胞(acanthocyte)或刺/棘细胞(spur/spike cell)、靶形红细胞(codocyte)(靶形细胞(target cell))、锯齿状红细胞(echinocyte)(毛刺细胞(burr cell))、椭圆形红细胞(elliptocyte)和卵形红细胞(ovalocyte)、球形红细胞(spherocyte)、口形红细胞(stomatocyte)(口细胞(mouthcell))和咬痕红细胞(degmacyte)(“咬细胞(bite cell)”)。

在一些实施方案中，有效量包含约0.1至约5克的磷虾磷脂组合物、优选约0.2至约3克的磷虾磷脂组合物、并且最优选约0.5至约1.5克的磷虾磷脂组合物。

本发明的磷虾溶血磷脂组合物可用于治疗各种受试者。合适的受试者包括人以及家畜(牛、马、羊、猪、山羊、鱼和虾)、非人灵长类动物和伴侣动物(诸如狗、猫和鸟)。在一些优选的实施方案中，受试者为小于10岁、更优选小于1岁、甚至更优选小于1个月、并且最优选新生儿的人受试者。在一些优选的实施方案中，人受试者为约10至20岁。在一些优选的实施方案中，人受试者为约20至50岁。在一些优选的实施方案中，人受试者为约50至100岁。在一些优选的实施方案中，人受试者为约60至100岁。在一些优选的实施方案中，人受试者为约70至100岁。

实验

实施例1-SUPERBA^TM BOOST^TM

本实施例描述使用SUPERBA^TM BOOST^TM(Aker Biomarine AS，Lysaker，NO)作为起始磷脂源生产LPC组合物。优选地通过本文别处所述的SMB工艺生产SUPERBA^TM BOOST^TM。SUPERBA^TM BOOST^TM为磷虾磷脂组合物，其中1000mg含有560mg磷脂、150mg EPA和70mg DHA。简而言之，将9克SUPERBA^TM BOOST^TM混合到90ml EtOH中，然后将450ml水加入到用氮气吹扫的一升圆底反应烧瓶中。接着，加入0.40ml LECITASE^TM Ultra，并且允许反应在搅拌下进行30分钟。然后加入500ml EtOH使酶失活，并使用旋转蒸发仪将混合物蒸发至干。接着，进行基于溶剂的分离。将经酶处理的磷虾脂质样品与庚烷和甲醇的溶剂浴混合。LPC和PC物质迁移到极性溶剂(甲醇)中，并且非极性脂质分配到庚烷中。倾析庚烷相留下具有大量极性脂质(包括LPC和PC)的极性相。在烧瓶中向干燥的脂质组合物中添加庚烷和MeOH各250ml。剧烈摇动烧瓶，并允许相分离。将上层非极性庚烷相倾析，并且将另一250ml庚烷加入到极性MeOH相，并重复分离。然后将10克硅胶添加到MeOH提取物中，并在旋转蒸发仪中将溶液蒸发至干。然后通过快速色谱法(5cm直径柱中的100g硅胶)从干燥的脂质组合物中纯化LPC。用一系列流动相洗脱LPC：MPA(庚烷)；MPB(甲苯:甲醇:三乙胺，60:40:1)；和甲醇:三乙胺，95:5)。收集各级分，并蒸发至干。

视情况通过¹H-、³¹P-、2D-NMR、TLC、GC和HPLC对通过本发明的方法产生的LPC组合物进行分析。¹H-NMR和HPLC的结果分别在图1和图2中示出，表示为AKB6444-1。

³¹P-和2D-NMR用于测定磷脂组分，结果列于表1、表2和表3中，表示为AKB6444-1。

实施例2–SUPERBA^TM BOOST^TM预洗和FLASH

本实施例描述使用SUPERBA^TM BOOST^TM(Aker Biomarine AS，Lysaker，NO)作为起始磷脂源生产LPC组合物。优选地通过本文别处所述的SMB工艺生产SUPERBA^TM BOOST^TM。SUPERBA^TM BOOST^TM为磷虾磷脂组合物，其中1000mg含有560mg磷脂、150mg EPA和70mg DHA。简而言之，将10克SUPERBA^TM BOOST^TM混合到100ml EtOH中，然后将450ml水加入到用氮气吹扫的一升圆底反应烧瓶中。接着，加入0.40ml LECITASE^TM Ultra，并且允许反应在搅拌下进行40分钟。然后加入500ml EtOH使酶失活，并使用旋转蒸发仪将混合物蒸发至干。接着，进行基于溶剂的分离。将经酶处理的磷虾脂质样品与庚烷和甲醇的溶剂浴混合。LPC和PC物质迁移到极性溶剂(甲醇)中，并且非极性脂质分配到庚烷中。具体地，向干燥的样品中加入甲醇(250ml)和庚烷(250ml)。剧烈摇动后，分离各相，并且用另一份庚烷(250ml)提取甲醇相。通过TLC分析庚烷级分并分别蒸发。向甲醇残余物中加入硅胶60(20g)，并且将溶液浓缩至干。然后通过快速色谱法从干燥的脂质组合物中纯化LPC。用硅胶(130g)将硅胶加载到柱(直径5cm)上，并洗脱柱。级分体积为25ml。洗脱液：500ml EtOAc、250ml EtOAc:MeOH 80:20、250ml EtOAc:MeOH 50:50、250ml MeOH、500ml MeOH:Et3N 95:5、500ml MeOH:Et3N 90:10。通过TLC分析级分并且根据发现蒸发。色谱分离后，含有LPC的级分的最终质量为3.28克。

视情况通过¹H-、³¹P-、2D-NMR、TLC、GC和HPLC对通过本发明的方法产生的LPC组合物进行分析。¹H-NMR和HPLC的结果分别在图7和图8中示出，表示为AKB70005-4。

³¹P-和2D-NMR用于测定磷脂组分，结果列于表5、表9和表10中，表示为AKB70005-4。

实施例3-SUPERBA^TM BOOST^TM FLASH

本实施例描述使用SUPERBA^TM BOOST^TM(Aker Biomarine AS，Lysaker，NO)作为起始磷脂源生产LPC组合物。优选地通过本文别处所述的SMB工艺生产SUPERBA^TM BOOST^TM。SUPERBA^TM BOOST^TM为磷虾磷脂组合物，其中1000mg含有560mg磷脂、150mg EPA和70mg DHA。简而言之，将10克SUPERBA^TM BOOST^TM混合到100ml EtOH中，然后将450ml水加入到用氮气吹扫的一升圆底反应烧瓶中。接着，加入0.40ml LECITASE^TM Ultra，并且允许反应在搅拌下进行40分钟。然后加入500ml EtOH使酶失活，并使用旋转蒸发仪将混合物蒸发至干。接着，如下通过快速色谱法从干燥的脂质组合物中纯化LPC：将残余物重新溶解于甲醇(200ml)中，并加入硅胶60(20g)，并且将悬浮液在旋转蒸发仪上浓缩至干。用硅胶(130g)将硅胶加载到柱(直径5cm)上，并洗脱柱。级分体积为25ml。洗脱液：500ml EtOAc、250ml EtOAc:MeOH 80:20、250ml EtOAc:MeOH50:50、250ml MeOH、500ml MeOH:Et3N 90:10。通过TLC分析级分并且根据发现蒸发。色谱分离后，含有LPC的级分的最终质量为3.73克。

视情况通过¹H-、³¹P-、2D-NMR、TLC、GC和HPLC对通过本发明的方法产生的LPC组合物进行分析。¹H-NMR和HPLC的结果分别在图9和图10中示出，表示为AKB70005-5。

³¹P-和2D-NMR用于测定磷脂组分，结果列于表6、表9和表10中，表示为AKB70005-5。

实施例4-ROMEGA^TM预洗和FLASH

本实施例描述使用ROMEGA^TM(Arctic Nutrition AS，

NO)作为起始磷脂源生产LPC组合物。优选地通过别处所述的工艺生产ROMEGA^TM。ROMEGA^TM为鲱鱼子油和鱼油组合物，其中1000mg/3000mg含有340mg/1020mg磷脂、100mg/300mg EPA和320mg/960mg DHA。简而言之，将9克ROMEGA^TM混合到90ml EtOH中，然后将450ml水加入到用氮气吹扫的一升圆底反应烧瓶中。接着，加入0.40ml LECITASE^TM Ultra，并且允许反应在搅拌下进行40分钟。然后加入500ml EtOH使酶失活，并使用旋转蒸发仪将混合物蒸发至干。接着，进行基于溶剂的分离。将经酶处理的鲱鱼子/鱼脂质样品与庚烷和甲醇的溶剂浴混合。LPC和PC物质迁移到极性溶剂(甲醇)中，并且非极性脂质分配到庚烷中。具体地，向干燥的样品中加入甲醇(250ml)和庚烷(250ml)。剧烈摇动后，分离各相，并且用另一份庚烷(250ml)提取甲醇相。通过TLC分析庚烷级分并分别蒸发。向甲醇残余物中加入硅胶60(20g)，并且将溶液浓缩至干。然后通过快速色谱法从干燥的脂质组合物中纯化LPC。用硅胶(130g)将硅胶加载到柱(直径5cm)上，并洗脱柱。级分体积为25ml。洗脱液：500ml EtOAc、250ml EtOAc:MeOH 80:20、250ml EtOAc:MeOH 50:50、250ml MeOH、500ml MeOH:Et3N 95:5、500ml MeOH:Et3N 90:10。通过TLC分析级分并且根据发现蒸发。色谱分离后，含有LPC的级分的最终质量为0.84克。

视情况通过¹H-、³¹P-、2D-NMR、TLC、GC和HPLC对通过本发明的方法产生的LPC组合物进行分析。¹H-NMR和HPLC的结果分别在图5和图6中示出，表示为AKB70005-3。

³¹P-和2D-NMR用于测定磷脂组分，结果列于表5、表7和表8中，表示为AKB70005-3。

实施例5-ROMEGA^TM FLASH

本实施例描述使用ROMEGA^TM(Arctic Nutrition AS，

NO)作为起始磷脂源生产LPC组合物。优选地通过别处所述的工艺生产ROMEGA^TM。ROMEGA^TM为鲱鱼子油和鱼油组合物，其中1000mg/3000mg含有340mg/1020mg磷脂、100mg/300mg EPA和320mg/960mg DHA。简而言之，将9克ROMEGA^TM混合到90ml EtOH中，然后将450ml水加入到用氮气吹扫的一升圆底反应烧瓶中。接着，加入0.40ml LECITASE^TM Ultra，并且允许反应在搅拌下进行40分钟。然后加入500ml EtOH使酶失活，并使用旋转蒸发仪将混合物蒸发至干。接着，如下通过快速色谱法从干燥的脂质组合物中纯化LPC：将残余物重新溶解于甲醇(200ml)中，并加入硅胶60(20g)，并且将悬浮液在旋转蒸发仪上浓缩至干。用硅胶(130g)将硅胶加载到柱(直径5cm)上，并洗脱柱。级分体积为25ml。洗脱液：500ml EtOAc、250ml EtOAc:MeOH 80:20、250mlEtOAc:MeOH 50:50、250ml MeOH、500ml MeOH:Et3N 90:10。通过TLC分析级分并且根据发现蒸发。色谱分离后，含有LPC的级分的最终质量为0.76克。

视情况通过¹H-、³¹P-、2D-NMR、TLC、GC和HPLC对通过本发明的方法产生的LPC组合物进行分析。¹H-NMR和HPLC的结果分别在图5和图6中示出，表示为AKB70005-2。

³¹P-和2D-NMR用于测定磷脂组分，结果列于表4、表7和表8中，表示为AKB70005-2。

表1：样品AKB69444-1的结果(总结)、2D-和31P-NMR(PL)

表2：样品AKB69444-1的结果(总结)、2D-和31P-NMR(醚PL)

表3：LPC组合物含有根据样品AKB69444-1的¹H-NMR测定的组合物的38.74％omega-3脂肪酸w/w。

*)以DHA计，含有任何w-3FA(omega3脂肪酸)的混合物

表4：根据样品AKB70005-1和AKB70005-2的¹H-NMR测定的LPC组合物的omega-3脂肪酸w/w。

*)以DHA计，含有任何w-3FA(omega3脂肪酸)的混合物

表5：根据样品AKB70005-3和AKB70005-4的¹H-NMR测定的LPC组合物的omega-3脂肪酸w/w。

*)以DHA计，含有任何w-3FA(omega3脂肪酸)的混合物

表6：根据样品AKB70005-5的¹H-NMR测定的LPC组合物的omega-3脂肪酸w/w。

*)以DHA计，含有任何w-3FA(omega3脂肪酸)的混合物

表7：AKB70005-1、AKB70005-2和AKB70005-3的结果(总结)、2D-和31P-NMR(PL)。

表8：AKB70005-1、AKB70005-2和AKB70005-3的结果(总结)、2D-和31P-NMR(PL)。

表9：AKB70005-4和AKB70005-5的结果(总结)、2D-和31P-NMR(PL)。

表10：AKB70005-4和AKB70005-5的结果(总结)、2D-和31P-NMR(PL)。

表11：图例(缩写)。

缩写	全名
		1-LPC	1-溶血磷脂酰胆碱
2-LPC	2-溶血磷脂酰胆碱
		APE	N-酰基磷脂酰乙醇胺
CDCl<sub>3</sub>	氯仿-d<sub>1</sub>
		Cs<sub>2</sub>CO<sub>3</sub>	碳酸铯
DHA	二十二碳六烯酸
		D<sub>2</sub>O	重水
DPG	双磷脂酰甘油
		EDTA	乙二胺四乙酸
FA	脂肪酸
		IS	内标
LPA	溶血磷脂酸
		LPI	溶血磷脂酰肌醇
LPS	溶血磷脂酰丝氨酸
		MeOD	甲醇-d<sub>4</sub>
NMR	核磁共振
		PA	磷脂酸
PC	磷脂酰胆碱
		PE	磷脂酰乙醇胺
PG	磷脂酰甘油
		PI	磷脂酰肌醇
PL	磷脂
		PS	磷脂酰丝氨酸
SPH	鞘磷脂
		TMS	四甲基硅烷
TPP	磷酸三苯酯
		w-3FA	脂肪酸

实施例6

使用SUPERBA^TM磷虾油作为起点生产LPC组合物。通过³¹P-NMR分析磷脂含量。结果示于表12中。

表12.

备注：不可评估或属于未列出磷脂的磷脂信号的*)＝未观察到，无信号分配积分，记录为“其他”。

实施例7

本实施例提供了本发明的其他溶血磷脂组合物的生产的概述。

由磷虾油合成LPC物质的方法

用于由磷虾油合成LPC的方法可根据最终混合物/样品的目标组成而分为四个步骤：

1.CRUDE：使最终组合物中浓度达到14至27，3重量％LPC的工艺(表13.1-1和表14.1-1)。

2.POLAR-1/POLAR-2：CRUDE后使最终组合物中浓度达到35，2至65，7重量％LPC的工艺(表13.1-2和表14.1-2)。

3.FLASH：CRUDE后使最终组合物中浓度达到56，6至81，1重量％LPC的工艺(表13.1-3)。

4.FORMULATION：POLAR-2后使最终组合物中浓度达到39，3至41，1重量％LPC和5至14重量％PEG400的工艺(14.1-3)。

FLASH和POLAR是实现CRUDE-1和CRUDE-2LPC混合物/样品的LPC富集的替代工艺，而FORMULATION是允许用PEG配制POLAR-2LPC混合物/样品的工艺。图11(工艺1)和图12(工艺2)提供了各种工艺的流程图。

1.CRUDE样品：

CRUDE-1和CRUDE-2LPC混合物/样品遵循相同的工艺。

将Superba Boost(10g)溶于EtOH(2至10g)中，用pH稳定的水(2至45g，pH 6至12)稀释，以获得pH值为5.2至6.2的混合物，添加Lecitase ultra 40μL、加盖并在室温下搅拌120至1440分钟。为了防止氧化，可用N2冲洗样品。加入EtOH(25至50g)对反应混合物进行淬火，并且在50℃减压下浓缩，以得到CRUDE-1和CRUDE-2LPC混合物/样品(分别为表13和表16)。

2.POLAR-1/POLAR-2样品：

POLAR-2：在CRUDE工艺中淬火后，直接启动POLAR工艺。因此，未在50℃减压下浓缩CRUDE样品，以提供CRUDE-1和CRUDE-2LPC混合物/批次，而是将25至100g庚烷添加到CRUDE-1或CRUDE-2混合物中，以实现相分离，从而在富含EtOH和水的相(称为极性相)中富集极性脂质。将庚烷相倾析，仅留下极性相。在减压下浓缩极性相，以得到POLAR-1和POLAR-2LPC混合物/样品(分别为表14和表17)。

3.FLASH样品：

将CRUDE样品再溶于加入25至50g硅胶60的乙醇(10至100g)中，并且蒸发至干。进行快速色谱法(125g硅胶60，柱直径5cm)。用500ml 80:20MPA:MPB、500ml 50:50MPA:MPB、500ml MP B、500ml MP C进行洗脱。随后用EtOH:Et3N(80:20，300mL)挤压柱。根据结果，将不同级分合并，并蒸发，以得到FLASH LPC混合物/样品(表15)。

4.FORMULATION样品：

由POLAR混合物/样品制成含有PEG400的配方。为此，将EtOH和PEG400添加到POLAR混合物中，从而将混合物(EtOH、PEG400和POLAR LPC混合物)在50℃减压下浓缩，以得到FORMULATION LPC混合物/样品(表18)，其最终浓度为5至14重量％PEG400和4至7重量％EtOH(表18)。

表13来自工艺1的六个CRUDE-1磷虾LPC组合物批次的分析结果

表14来自工艺1的六个POLAR-1磷虾LPC组合物批次的分析结果

表15来自工艺1的六个FLASH磷虾LPC组合物批次的分析结果

表16来自工艺2的两个CRUDE-2磷虾LPC组合物批次的分析结果

表18来自工艺2的两个Formulation磷虾LPC组合物批次的分析结果

表19提供了各个批次的其他分析数据。

表19

实施例9

此实施例提供了在生物组织中摄取本发明的溶血磷脂组合物的数据。简而言之，将上述LS:ABM-9C0溶血磷脂组合物用¹⁴C标记的lysoPC-EPA或lysoPC-DHA加标，并且与用¹⁴C标记的PC-EPA或DHA加标的纯化磷虾PC组合物(用PEG配制的98％PC)进行比较。向大鼠口服施用加标的组合物，并且通过整体自显影定量技术(Quantitative Whole BodyAutoradiography)测量各种组织中的摄取。收集在各种器官和组织中摄取的时间以及组织中的掺入量的数据。结果在表20至表23中提供。令人惊讶的是，这些数据表明，与使用完整磷脂制备的样品(即，不含任何明显数量的溶血磷脂的样品)相比，lysoPC-EPA加标的溶血磷脂组合物和lysoPC-DHA加标的溶血磷脂组合物的摄取在时间上都更快，并且EPA和DHA的掺入总量都更大。在所有被研究的除眼睛外的器官/组织中均观察到此结果。

Claims (46)

1.一种海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其特征在于包含所述组合物的约10％至约100％的LPC w/w和所述组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：

a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1；

b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于所述组合物的10％w/w；

c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于所述组合物的1.2％w/w；

d)中性脂质含量为所述组合物的5％至65％w/w；

e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及

f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA的比率为1:1至5:1。

2.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物包含所述组合物的60％至100％的LPC w/w。

3.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有所述组合物的30％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量。

4.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物包含所述组合物的70％至90％的LPC w/w。

5.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有所述组合物的35％至45％w/w的omega-3脂肪酸含量。

6.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物包含所述组合物的20％至50％的LPC w/w。

7.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物包含所述组合物的20％至30％的LPC w/w。

8.如权利要求1所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有所述组合物的5％至20％w/w的omega-3脂肪酸含量。

9.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)。

10.如权利要求1至9中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(b)。

11.如权利要求1至10中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(c)。

12.如权利要求1至11中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(d)。

13.如权利要求1至12中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(e)。

14.如权利要求1至13中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(f)。

15.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)、(b)和(c)中的两种或更多种。

16.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的两种或更多种。

17.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的三种或更多种。

18.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的四种或更多种。

19.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)中的五种或更多种。

20.如权利要求1至8中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物具有特性(a)、(b)、(c)、(d)、(e)和(f)。

21.如权利要求1至20中任一项所述的海洋溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物，其中所述组合物选自由以下组成的组：磷虾LPC组合物、鲱鱼LPC组合物、鲱鱼子LPC组合物、藻类LPC组合物和哲水蚤LPC组合物。

22.一种药物或营养组合物，所述药物或营养组合物包含权利要求1至21中任一项所述的组合物和生理上可接受的载剂。

23.如权利要求22所述的药物或营养组合物，其中所述生理上可接受的载剂为脂质载剂。

24.一种口服递送载体，所述口服递送载体含有权利要求1至23中任一项所述的海洋LPC组合物、药物组合物或营养组合物。

25.一种脂质组合物，所述脂质组合物包含第一脂质级分和第二脂质级分，其中所述第一脂质级分为权利要求1至21中任一项所述的海洋LPC组合物，并且所述第二脂质级分从与所述第一脂质级分不同的来源获得且/或含有低于20％的LPC。

26.如权利要求25所述的脂质组合物，其中所述第二脂质级分选自由以下组成的组：甘油三酯级分、甘油二酯级分、脂肪酸乙酯级分、游离脂肪酸级分及其组合。

27.如权利要求19或20所述的脂质组合物，其中所述第二脂质级分是包含EPA和/或DHA的海洋脂质级分。

28.一种药物或营养组合物，所述药物或营养组合物包含权利要求25至27中任一项所述的脂质组合物和生理上可接受的载剂。

29.一种口服递送载体，所述口服递送载体含有权利要求25至27中任一项所述的脂质组合物。

30.一种用于从含有磷脂的海洋原料中制备具有高EPA和DHA含量的溶血磷脂酰胆碱(LPC)组合物的方法，所述方法包括用非所述海洋原料固有的磷脂酶处理所述海洋原料，以提供经磷脂酶处理的原料，并对所述经磷脂酶处理的原料进行分馏，以提供比所述起始原料具有更高的溶血磷脂酰胆碱含量的脂质组合物。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述原料选自由以下组成的组：磷虾脂质制剂、鲱鱼脂质制剂、鲱鱼子脂质制剂、藻类脂质制剂和哲水蚤脂质制剂。

32.如权利要求30至31中任一项所述的方法，其中所述磷虾脂质制剂为南极磷虾脂质制剂。

33.如权利要求30至32中任一项所述的方法，其中所述原料在溶剂中与磷脂酶接触。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述溶剂为水和醇的混合物。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述醇为乙醇。

36.根据权利要求35所述的方法，其中所述原料在约85％水和15％乙醇的混合物中与磷脂酶接触。

37.根据权利要求30至36中任一项所述的方法，其中所述酶为磷脂酶A1(PLA1)。

38.根据权利要求30至37中任一项所述的方法，其中所述酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中所述酶浓度在0.1至20vol/wt％的范围内，优选0.1至15vol/wt％、更优选0.1至10vol/wt％、还优选0.1至5vol/wt％、最优选0.1至3vol/wt％。

39.根据权利要求30至38中任一项所述的方法，其中所述酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中在3至12，优选4至10、更优选4至9、最优选5至9的pH下执行所述方法。

40.根据权利要求30至39中任一项所述的方法，其中所述酶为磷脂酶A1(PLA1)，其中在4至95℃之间，优选4至85℃、更优选10至80℃、还优选15至70℃、甚至更优选15至65℃、最优选15至60℃下执行所述方法。

41.根据权利要求30至40中任一项所述的方法，其中所述原料具有的EPA和DHA的含量在以下范围内；EPA：1至70wt％和DHA：1至70wt％、更优选EPA：5至70wt％和DHA：5至70wt％、最优选EPA：10至60wt％和DHA：10至60wt％。

42.根据权利要求30至41中任一项所述的方法，其中所述LPC组合物具有的EPA和DHA的含量在以下范围内；EPA：1至100wt％和/或DHA：1至100wt％、更优选EPA：5至100wt％和/或DHA：5至100wt％、最优选EPA：10至90wt％和/或DHA：10至90wt％。

43.根据权利要求30至42中任一项所述的方法，其中所述LPC组合物具有的LPC含量在10至100wt％的范围内，优选20至100wt％、更优选30至100wt％、还优选40至100wt％、最优选50至100wt％。

44.根据权利要求30至43中任一项所述的方法，其中通过所述工艺获得的所述LPC组合物的特征在于包含所述组合物的约20％至约95％的LPC w/w和所述组合物的5％至50％w/w的omega-3脂肪酸含量，并且任选地具有一个或多个以下特征或特性：

a)2-LPC:1-LPC比率为1:8至18:1；

b)磷脂酰胆碱(PC)含量小于所述组合物的10％w/w；

c)磷脂酰乙醇胺(PE)含量小于所述组合物的1.2％w/w；

d)中性脂质含量为所述组合物的5％至65％w/w；

e)2-LPC醚含量小于1.0％w/w；以及

f)EPA:DHA的比率为1:1至3:1或DHA:EPA比率为1:1至5:1。

45.根据权利要求30至44中任一项所述的方法，所述方法还包括配制所述LPC组合物以供人食用。

46.根据权利要求1至29中任一项所述的组合物、或通过权利要求24至39中任一项所述的方法制备的组合物，用于补充优选小于10岁、更优选小于1岁、甚至更优选小于1个月、并且最优选为新生儿的人受试者的饮食。

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