CN111887101A - 富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供富硒榆黄蘑菌丝体及其制备方法,富硒榆黄蘑菌丝体是将榆黄蘑在固体富硒PDA培养基培养后得到的菌丝接种于富硒液体种子液培养基,经振荡培养接种于装有液体培养基的摇瓶中,振荡培养,或经振荡培养接种于装有液体培养基的发酵罐中,培养,离心或过滤,烘干后得到的菌丝体有机硒含量在100 mg/kg菌丝以上的富硒榆黄蘑菌丝体。采用本发明的技术方案菌丝体产量在1.2 g/100 mL以上,菌丝体有机硒含量在100 mg/kg菌丝以上,本发明将得到的富硒榆黄蘑菌丝体应用于饼干的制备。
Description
技术领域
本发明涉及一种富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,用于饼干的制备。属于生物领域。
背景技术
榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus)属担子菌亚门,层菌纲,伞菌目,侧耳科,侧耳属,为非常珍贵的经济菌之一,药食同源。它除了味道鲜美、营养丰富外,还具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗炎、降血脂、降血糖等生物活性。
硒是人体的必须微量元素,在体内主要参与形成谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase , GSH-Px)、硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase ,TrxR)、硒蛋白P(selenoprotein P,Selp),调节氧化应激、氧化还原状态及关键细胞活动。缺乏硒可能导致许多疾病如克山病、过度氧化应激造成的疾病等,并加重疾病的进程。我国大部分地区都属于缺硒区,因此要靠从日常饮食中摄入来补充硒。
硒在自然界中主要以无机硒和有机硒存在,其中无机硒的安全范围很小,食用菌具有较强的富硒能力,能将无机硒转化为人体吸收和利用的有机硒。榆黄蘑作为味道、营养、功效倶佳的食用菌,自然是选择用来富硒培养的重要材料;食用菌深层发酵具有周期短、占地少、成本低、适合工业化生产、质量人为可控等优点,因此在食用菌生产中具有广阔的应用前景。但与其它食用菌如香菇、金针菇等相比,对榆黄蘑菌丝体进行富硒培养存在着产量低、耐硒能力差、富硒效率低等困难,因此目前对榆黄蘑的富硒培养大多仅限于子实体的培养。本发明通过解决富硒榆黄蘑深层发酵的技术性难题,获得富硒菌丝体。
发明内容
本发明的目的之一是通过摇瓶液体培养和深层发酵罐培养获得富硒榆黄蘑菌丝体。富硒榆黄蘑菌丝体是将榆黄蘑在固体富硒PDA培养基培养后得到的菌丝接种于富硒液体种子液培养基,经振荡培养接种于装有液体培养基的摇瓶中,振荡培养,离心或过滤,烘干后得到的菌丝体有机硒含量在100 mg/ kg菌丝以上的富硒榆黄蘑菌丝体。
所述的获得方法,将榆黄蘑菌种放入培养箱里活化,从平板上切取菌丝浓密,生长良好的菌种分别接入含有Na2SeO3的PDA平板培养基中,倒置培养至菌丝长满平板;从平板上切取菌块,接入液体种子液培养基中,震荡培养。将液体种子接种至装有含Na2SeO3的发酵培养基的摇瓶中,震荡培养。离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得摇瓶培养富硒榆黄蘑菌丝体。
所述的获得发酵罐培养富硒榆黄蘑菌丝体所述方法获得榆黄蘑种子液后接入发酵罐培养。离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得发酵罐培养富硒榆黄蘑菌丝体。具体方案如下:
步骤一:将活化后的榆黄蘑菌种接入含有Na2SeO3的PDA平板培养基中,在温度为24-30℃倒置培养至菌丝长满平板,从平板上切取菌块,接入含有Na2SeO3的液体种子液培养基中,在转速50-300 rpm、温度为24-30℃下震荡培养5-14 d,得到富硒榆黄蘑菌丝体种子液;
步骤二:将步骤一中的富硒榆黄蘑菌丝体种子液接种于Na2SeO3的发酵培养基的摇瓶或发酵罐中,在温度为24-30℃,转速为50-300 rpm下震荡培养培养时间5-14 d,将得到的发酵液离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得发酵培养的富硒榆黄蘑菌丝体。
所述步骤一中,榆黄蘑菌种在温度为24-30℃下活化15-60 min。
所述步骤一中,含有Na2SeO3的液体种子液培养基中Na2SeO3 的浓度为2 -20 μg/mL。
所述步骤一中,种子液培养基的成分包括马铃薯18-22wt%,葡萄糖0.8-1.5wt%,麦芽糖0.8-1.5wt%,MgSO4 0.1-0.2wt%,K2HPO4 0.05-0.2wt%,pH自然。
进一步优选方案为,种子液培养基成分包括马铃薯20wt%,葡萄糖1wt%,麦芽糖1wt%,MgSO4 0.15wt%,K2HPO4 0.1wt%,pH自然。
所述步骤二中,摇瓶发酵培养液中Na2SeO3 的浓度为2 -20 μg/mL。
所述步骤二中,富硒榆黄蘑菌丝体种子液的接种量为5-15%。
所述步骤二中,发酵罐溶解氧(DO)为20-80%。
所述步骤二中,发酵培养基成分包括2-4wt%可溶性淀粉、2-4wt%黄豆粉、0.05-0.15wt% MgSO4、10-30mg/100mL VB1。
进一步优选方案为发酵罐培养基成分为3wt%可溶性淀粉,3wt%黄豆粉,0.1wt%MgSO4,0.02% VB1。
所述方法中,步骤二中菌丝体产量在1.2 g/100mL以上。
所述方法中,步骤二中菌丝体有机硒含量在100 mg/ kg菌丝以上。
食用菌将无机硒转化成有机硒,主要是通过以下两种方式:(1)将无机硒同化成硒氨基酸,如硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸和硒代半胱氨酸,并进一步合成硒蛋白;(2)将无机硒同化合成硒多糖。本发明的技术方案,特点在于在固体培养基和液体培养基中均添加高浓度的硒使菌丝体的耐硒能力和无机硒转化能力不断增强,同时对种子培养基和发酵培养基配方进行优化,得到高产量的菌丝体和含量高的有机硒。
具体实施方式
下面结合实施例,进一步说明本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。说明书及实施例中采用的化学试剂、发酵罐等,如无特殊说明均按常规实验条件下进行操作,或按供应商提供的说明进行操作。
实施例1
摇瓶培养富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法。
将榆黄蘑菌种放入培养箱里,在温度为25℃下活化30 min后,从平板上切取1 cm2菌丝浓密,生长良好的菌种分别接入含有12 μg/mL Na2SeO3的PDA平板培养基中,28℃倒置培养至菌丝长满平板;从平板上切取1 cm2菌块,接入含有12 μg/mL Na2SeO3的液体种子液培养基(液体种子液培养基成分包括马铃薯20wt%,葡萄糖1wt%,麦芽糖1wt%,MgSO4 0.15wt%,K2HPO4 0.1wt%,pH自然)中,25.8℃震荡培养7 d,转速为150 r/m。将液体种子接种至装有含12 μg/mL Na2SeO3的发酵培养基(发酵罐培养基成分包括3wt%可溶性淀粉,3wt%黄豆粉,0.1wt% MgSO4,26mg/100mL VB1)的摇瓶中,26℃震荡培养7 d,转速为150 rpm。离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得摇瓶培养富硒榆黄蘑菌丝体,产量达1.2 g/100mL,菌丝体有机硒含量185.2 mg/ kg。
实施例2
发酵罐培养富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法
将榆黄蘑菌种放入培养箱里,在温度为25℃下活化30 min后,从平板上切取1 cm2菌丝浓密,生长良好的菌种分别接入含有10 μg/mL Na2SeO3的PDA平板培养基中,28℃倒置培养至菌丝长满平板;从平板上切取1cm2菌块,接入含有10 μg/mL Na2SeO3的液体种子液培养基中(种子液培养基的成分包括马铃薯22wt%,葡萄糖1.2wt%,麦芽糖0.8wt%,MgSO4 0.13wt%,K2HPO4 0.2wt%,pH自然),25.6℃震荡培养7 d,转速为150 r/m。将液体种子接种至装有含10μg/mL Na2SeO3的发酵培养基(发酵培养基成分包括2wt%可溶性淀粉、4wt%黄豆粉、0.08wt%MgSO4、25mg/100mL VB1)的发酵罐中,26℃培养7 d,转速为150 r/m,溶解氧(DO)为40-60%,pH 4.5-7.5。离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得发酵罐培养富硒榆黄蘑菌丝体,产量达1.5 g/100mL,菌丝体有机硒含量在127.3 mg/ kg。
实施例3
摇瓶培养富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法。
将榆黄蘑菌种放入培养箱里,在温度为25℃下活化30 min后,从平板上切取1 cm2菌丝浓密,生长良好的菌种分别接入含有13 μg/mL Na2SeO3的PDA平板培养基中,28℃倒置培养至菌丝长满平板;从平板上切取1 cm2菌块,接入含有13μg/mL Na2SeO3的液体种子液培养基(液体种子液培养基成分包括马铃薯19wt%,葡萄糖1.3wt%,麦芽糖1.3wt%,MgSO4 0.1wt%,K2HPO4 0.2wt%,pH自然)中,25.8℃震荡培养7 d,转速为200 r/m。将液体种子接种至装有含13 μg/mL Na2SeO3的发酵培养基(发酵罐培养基成分包括2.5wt%可溶性淀粉,2.8wt%黄豆粉,0.15wt% MgSO4,18mg/100mL VB1)的摇瓶中,26℃震荡培养7 d,转速为150rpm。离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得摇瓶培养富硒榆黄蘑菌丝体,产量达1.62 g/100mL,菌丝体有机硒含量196.7 mg/ kg。
实施例4
发酵罐培养富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法
将榆黄蘑菌种放入培养箱里,在温度为25℃下活化30 min后,从平板上切取1 cm2菌丝浓密,生长良好的菌种分别接入含有18 μg/mL Na2SeO3的PDA平板培养基中,28℃倒置培养至菌丝长满平板;从平板上切取1cm2菌块,接入含有18μg/mL Na2SeO3的液体种子液培养基中(种子液培养基的成分包括马铃薯15wt%,葡萄糖0.5wt%,麦芽糖0.5wt%,MgSO4 0.18wt%,K2HPO4 0.12wt%,pH自然),25.6℃震荡培养7 d,转速为150 r/m。将液体种子接种至装有含10 μg/mL Na2SeO3的发酵培养基(发酵培养基成分包括6wt%可溶性淀粉、5.5wt%黄豆粉、0.2wt% MgSO4、8mg/100mL VB1)的发酵罐中,26℃培养7 d,转速为150 r/m,溶解氧(DO)为40-60%,pH 4.5-7.5。离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得发酵罐培养富硒榆黄蘑菌丝体,产量达1.5 g/100mL,菌丝体有机硒含量在113.4 mg/ kg。
实施例5
富硒榆黄蘑菌丝体饼干的制备方法
在去离子水中加入25 wt%的富硒榆黄蘑菌丝体,匀浆机中匀浆,按每100 mL匀浆液加入1个鸡蛋、2 g白糖、2 g软化的黄油,混匀,加入面粉,边加边搅拌,至面粉将匀浆液完全吸收,揉成面团。将面团擀成厚约0.5 cm的面饼,用模具压在饼胚,置于预热的烤箱中180℃烤15 min。采用该法制得的饼干松脆、香甜。
Claims (8)
1.富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一:将活化后的榆黄蘑菌种接入含有Na2SeO3的PDA平板培养基中,24℃-30℃下倒置培养至菌丝长满平板,从平板上切取菌块,接入含有Na2SeO3的种子液培养基中,在转速50-300 rpm下震荡培养5-14 d,得到富硒榆黄蘑菌丝体种子液;
步骤二:将步骤一中的富硒榆黄蘑菌丝体种子液接种于Na2SeO3的发酵培养基的摇瓶中或发酵罐中,在温度为24-30℃,转速为50-300 rpm下震荡培养,培养时间5-14 d,将得到的发酵液离心或过滤取菌丝体,用蒸馏水冲洗,烘干,得发酵培养的富硒榆黄蘑菌丝体。
2.根据权利要求1所述的富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,步骤一中,含有Na2SeO3的PDA平板培养基中,Na2SeO3的浓度为2-20 μg/mL。
3.根据权利要求1所述的富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,步骤一中,Na2SeO3的种子液培养基中,Na2SeO3的浓度为2-20 μg/mL。
4.根据权利要求1所述的富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,步骤一中,种子液培养基的成分包括马铃薯18-22%,葡萄糖0.8-1.5wt%,麦芽糖0.8-1.5wt%,MgSO4 0.1-0.2wt%,K2HPO4 0.05-0.2wt%,pH自然。
5.根据权利要求1所述的富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,步骤二中,富硒榆黄蘑菌丝体种子液的接种量为5-15%。
6.根据权利要求1所述的富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,步骤二中,Na2SeO3的发酵培养基中,Na2SeO3的浓度为2-20 μg/mL。
7.根据权利要求1所述的富硒榆黄蘑菌丝体的制备方法,其特征在于,步骤二中,发酵培养基成分包括2-4wt%可溶性淀粉、2-4wt%黄豆粉、0.05-0.15wt% MgSO4、10-30 mg/100mLVB1。
8.根据权利要求1-7任一项所述制备得到的富硒榆黄蘑菌丝体种子液或发酵培养的富硒榆黄蘑菌丝体用于饼干的制备。
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