CN111879837A - 一种活化凝血时间的电化学检测方法 - Google Patents

一种活化凝血时间的电化学检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种活化凝血时间的电化学检测方法，具体步骤为：S1将检测试剂固定在电极基片上，贴膜片后切条为测试卡成品封装；S2检测时将测试卡插入凝血分析仪，加入待测血液样本；S3凝血分析仪检测到待测血液样本进入测试卡的反应腔后，则施加交流电压，并启动检测模块的加热片进行加热，使温度控制在37℃±0.5；S4检测过程中，随着血液样本凝固，测试卡的反应腔内电流信号发生变化，凝血分析仪的检测模块接收电流信号，电流信号再经运算放大芯片转换为电压信号，经过数据采集处理，最后运用数学算法得到凝血反应曲线的拐点，拐点经校准即为检测结果。该活化凝血时间的电化学检测方法操作简单可控且能提高检测的准确性和稳定性。

Description

一种活化凝血时间的电化学检测方法
技术领域
本发明属于医疗检测技术领域，尤其是涉及一种活化凝血时间的电化学检测方法。
背景技术
目前，血液或血浆的活化凝血时间（Activated Clotting Time 简称ACT）测试是国内外应用在血液体外循环时检查凝血时间的一项标定指标。监测“ACT”可确定患者的血液所需肝素抗凝和鱼精蛋白拮抗的剂量，是防止术后渗血及栓堵的重要措施。ACT测试可用于搭桥手术、PTCA、ICU/CCU、ECMO、血滤、血管造型术，对患者进行抗凝监护。ACT测试特别是对于接受肝素和抑肽酶治疗的患者具有重要意义。
随着心肺旁路(Cardiopulmonary Bypass,下称CPB)广泛应用，心脏手术时和手术后的出血并发症日益引起人们的重视。手术患者的凝血异常不仅可导致手术的失败，严重者可引起患者死亡。统计资料表明，心肺旁路手术时并发出血的发生率约5～25％。肝素是在外科手术期间使用体外循环如心肺旁路（CPB）的抗凝药物，肝素可防止血液在回路中流动时形成血块。为了确保足够的抗凝作用，医生必须能够测量肝素对血液的抗凝作用。肝素的抗凝血作用通常通过体外诊断测试确定的活化凝血时间（ACT）来控制。肝素给药后ACT延长，例如，在没有肝素的情况下，ACT通常为约120秒，而在给予肝素后的ACT通常超过480秒。许多临床医生认为480秒的ACT是CPB手术所需的最小量肝素抗凝作用时间。 ACT试验的目的是指出是否已向患者施用足够的肝素以进行外科手术而没有形成血凝块的风险，肝素在手术过程中被代谢，因此，肝素必须在CPB手术之前和期间服用，以维持足够的抗凝水平，而且，肝素的抗凝作用因患者而异，因此，在CPB手术之前和期间，不同的患者需要不同量的肝素。全世界在CPB手术期间使用多种不同的测试来进行肝素的管理。肝素管理最广泛使用的测试是ACT测试、活化的部分凝血活酶时间（APTT）测试和鱼精蛋白滴定，在这些测试中，ACT测试是CPB外科手术过程中管理肝素给药的最常见，最便宜和最方便的方法。肝素管理方案因医疗机构而异，但通常，当ACT降至典型的400到480秒的阈值时间以下时，将使用额外的肝素。ACT测试包含接触激活剂，以触发血块形成，目前通常用于CPB手术的两种活化剂是硅藻土和高岭土（一种粘土），尽管玻璃珠（二氧化硅）通常不用于CPB手术中，因为与可比的硅藻土或高岭土相比，玻璃珠提供的接触活化更少，但它们也用作ACT测试的接触活化剂。
几种现有的ACT测试仪器，包括美国ITC公司制造的Hemochron 801和HemochronJr.，Metronic HemoTec Inc.制造的Hepcon止血管理系统， HemoTec Inc.制造的HemotecACT Actalyke和Sienco Inc生产的Sonoclot凝血及血小板功能分析仪。所有这些仪器都测量形成血凝块所需的时间。测量时间通常从全血样品与活化剂混合时开始并在检测到血块时结束。抑肽酶是拜耳公司（Bayer Corporation）以Trasylol的名称生产的，已被证明可减少心肺转流（CPB）引起的血液流失。抑肽酶是中和主要的纤溶酶和激肽释放酶的蛋白酶抑制剂，它还可以减少血小板中糖蛋白的损失，从而保持CPB后血小板聚集的能力，抑肽酶给药减少了术后输血和满足手术止血的需要，抑肽酶还可能通过其他机制对止血有其他作用。抑肽酶的不良和潜在危险是，在肝素存在下，它会延长硅藻土活化的ACT结果。在存在抑肽酶的情况下，硅藻土活化的ACT结果对于肝素抗凝作用不是有用的测量方法，因为抑肽酶会延长ACT结果。用硅藻土ACT试验管理肝素是无效的，因为在存在抑肽酶的情况下，ACT会大大延迟，从而存在肝素化不足和随后在手术中凝结的风险，ACT结果延长所花费的时间是较大的手术室成本，应尽可能避免。
因此，有必要研发出一种操作简单可控且能提高检测稳定性与准确性的活化凝血时间的电化学检测方法。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单可控且能提高检测稳定性与准确性的活化凝血时间的电化学检测方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，该活化凝血时间的电化学检测方法，具体包括以下步骤：
S1：将检测试剂固定在电极基片上，贴膜片后切条为凝血测试卡成品，封装；
S2：检测时将测试卡插入凝血分析仪，加入待测血液样本；
S3：所述凝血分析仪检测到所述待测血液样本进入所述测试卡的反应腔后，则施加交流电压，并启动检测模块的加热片进行加热，使温度控制在37℃±0.5范围内；
S4：检测过程中，随着血液样本凝固，所述测试卡的反应腔内电流信号发生变化，所述凝血分析仪的检测模块接收电流信号，电流信号再经运算放大芯片转换为电压信号，经过数据采集处理，最后运用数学算法得到凝血反应曲线的拐点，所述拐点经校准即为检测结果，所述检测结果在检测结束后显示在所述凝血分析仪的显示屏界面。
采用上述技术方案，凝血测试卡插入凝血分析仪，测试卡电极与仪器检测模块的测试卡连接器接触，仪器检测到测试卡插入后，触摸显示屏提示请加入样本，将血液样本滴入测试卡加样孔，全血样本随即快速均匀地分配进入测试卡反应腔中。仪器侦测到样本进入反应腔内信号，施加交流电压，加热片进行加热，使温度控制在37℃±0.5范围内，随着血液样本凝血过程，电流信号发生变化，仪器检测模块接收电流信号，电流信号再经运算放大芯片转换为电压信号，再经过数据采集处理，拟合出完整反应曲线，运用数学算法算出信号拐点，该点即为凝血指标检测结果，PT（INR）、APTT、TT、FIB、ACT在检测结束后一并出现在仪器显示屏界面，还可通过仪器的内置打印机打印结果，整个检测过程结束。
ACT采用高精度的阻抗转换器检测方式，内部产生信号激励外部阻抗，外部阻抗的响应信号由内部ADC进行采样，最后由内部DSP进行离散傅里叶变换处理，即运用数学算法算出信号拐点；ACT对应的运算放大芯片区别于其他凝血指标的运算放大芯片单独设置在电路板上，能够防干扰，提高性能，同时优化了电路板。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1具体包括以下步骤：
S11：凝血指标检测试剂固定；
S111：凝血指标测试的点胶液的制备；
S112：将所述点胶液依次喷入所述电极基片的反应区域，进行连续喷点处理；
S113：将喷点后的电极基片置于烘干传送带上进行干燥处理；
S12：将所述电极基片与已黏合为一体的包含上层芯片和中层芯片的膜片在一起压实；
S13：将整张黏贴好的测试卡片放入模切机切成成品的测试卡大小，对所述测试卡的表面采用有机溶剂进行擦拭处理后封袋，塑封机封口。
步骤S12将电极基片与上层芯片、中层芯片膜片黏合成为测试卡片，测试卡片由很多未切条的测试卡组成，之后切条成为成品的凝血测试卡。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S111中制备了五种凝血指标测试的点胶液，五种所述凝血指标测试的点胶液的具体制备方法为：
S1111 A液的配制：按比例称取磷酸盐或醋酸盐，用纯水溶解，获得A液，冷藏保存备用；
S1111-1 凝血酶原点胶液的制备：按比例称取凝血激酶加入所述A液中混合至充分溶解，获得凝血酶原点胶液，冷藏保存备用；
S1111-2 活化部分凝血活酶点胶液的制备：按比例取磷脂和液态硅土加入所述A液，混合均匀，获得活化部分凝血活酶点胶液，置常温保存备用；
S1111-3纤维蛋白原点胶液配制：按比例称取凝血酶加入所述A液溶解，混合均匀，获得纤维蛋白原点胶液，冷藏保存备用；
S1111-4活化凝血点胶液配制：按比例取高岭土和硅藻土，加入所述A溶液，混合均匀，获得活化凝血点胶液，置常温保存备用；
S1111-5凝血酶点胶液配制：按比例秤取凝血酶，加入所述A溶液，混合均匀，获得凝血酶点胶液，置常温保存备用。
配置后的点胶液状态：凝血酶原点胶液、活化部分凝血活酶点胶液、纤维蛋白原点胶液、凝血酶点胶液：溶液上层无漂浮物，下层无沉淀，溶液浊度均一；活化凝血点胶液：乳白色浑浊液，下层无沉淀，溶液浊度均一。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1111中所述A液中的磷酸盐为十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠；所述醋酸盐为醋酸钠或醋酸铵；其中所述十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠浓度为5~15%，使用的纯水的体积为100mL；所述A液冷藏的温度为4℃，保质期为2d。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1111-1中配制凝血酶原点胶液中凝血激酶含量为0.05~0.3%；所述凝血酶原点胶液的冷藏温度为4℃。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1111-2中配制活化部分凝血活酶点胶液所使用的磷脂含量为1~5%，液态硅土的含量为1~10%，所述活化部分凝血活酶点胶液的保存温度为25℃。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1111-3中配制纤维蛋白原点胶液的凝血酶含量0.05~0.2%，所述纤维蛋白原点胶液冷藏的温度为4℃，保质期为1d。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1111-4中配制活化凝血点胶液所使用的高岭土含量1~10%，硅藻土含量3~10%，所述活化凝血点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S1111-5中配制凝血酶点胶液所使用的凝血酶含量0.002~0.02%，所述凝血酶点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S112根据点胶液浓度，每点喷量为0.5~5mg，喷点处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；所述步骤S113中干燥处理的温度为35~65℃，干燥时间为30min~120min；干燥处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；所述步骤S12中表面处理所采用的有机溶剂为异丙醇或二甲基亚砜DMSO或乙醇；所述步骤S13中封袋的环境温度为15～28℃；湿度≤35%。
作为本发明的优选技术方案，所述测试卡包括芯片本体，所述芯片本体从下往上依次包括下层芯片、中层芯片和上层芯片，所述下层芯片、中层芯片与上层芯片相配合界定出封闭的微流道和多个相互独立的反应腔，所述上层芯片上设有加样孔，所述加样孔通过所述微流道与所述反应腔相连通；其特征在于，所述芯片本体还包括电极，所述电极包括上层电极和下层电极，所述上层电极设置在所述上层芯片的背面，所述下层电极设置在所述下层芯片的正面，所述上层电极与所述下层电极之间有间隙。在本技术方案中，反应腔长度相比之前的检测试剂卡或测试卡有增加，由4.5mm改为7.5（6~9）mm。
作为本发明的优选技术方案，所述上层电极在所述上层芯片的背面和所述下层电极在所述下层芯片的正面均与所述中层芯片的所述反应腔所在的位置相对应地设置，所述上层电极和所述下层电极通过所述反应腔相连通。
作为本发明的优选技术方案，所述中层芯片在与所述上层电极相对应的位置设有中层连通孔，所述下层芯片在与所述上层电极相对应的位置设有下层连通孔，所述上层电极通过所述中层连通孔及所述下层连通孔与凝血分析仪接触连接。
作为本发明的优选技术方案，所述微流道和反应腔均贯穿设置在所述中层芯片上；所述微流道包括一条主流通道和多个分微流体通道，所述主流通道的末端分流出多个所述分微流体通道，多个所述分微流体通道与多个相互独立的反应腔一一对应连通；所述主流通道的前端与所述加样孔连通。
作为本发明的优选技术方案，所述上层电极包含多个电极一，多个所述电极一均与多个相互独立的所述反应腔一一对应设置；所述下层电极包含多个电极二，多个所述电极二均与多个相互独立的所述反应腔一一对应设置，所述电极一和所述电极二分别为工作电极或参比电极。
作为本发明的优选技术方案，多个所述电极一的一端均与多个相互独立的反应腔一一对应设置且均位于所述反应腔内，多个所述电极一的另一端在所述上层芯片的背面均延伸至所述上层芯片的一端的端头形成与所述凝血分析仪相接触连接的反面电极检测端。
作为本发明的优选技术方案，多个所述电极二的一端均与多个相互独立的反应腔一一对应设置且均位于所述反应腔内，多个所述电极二的另一端在所述下层芯片的正面均延伸至所述下层芯片的一端的端头形成与所述凝血分析仪相连接的正面电极检测端且所述正面电极检测端裸露在所述下层芯片、中层芯片与上层芯片粘合成一体后相对于所述上层芯片和中层芯片的一端的外部。
作为本发明的优选技术方案，所述上层芯片上还设有多个排气孔，多个所述排气孔均设置在与所述反应腔远离分微流体通道的端部且与所述反应腔的边缘相齐平的对应的位置处。在本技术方案中，相比之前的检测芯片或测试卡的排气口面积减小，由3*0.9mm2改为1~2mm2。
作为本发明的优选技术方案，该配套的凝血分析仪中的检测模块包括PCB底板、PCB顶板和测试卡连接器，所述测试卡连接器包括正面电极连接器和反面电极连接器，所述正面电极连接器安装在所述PCB顶板上，所述反面电极连接器安装在所述PCB底板上。
作为本发明的优选技术方案，该检测模块还包括测试卡后端支持块、加热片和温度传感器，所述测试卡后端支持块与所述反面电极连接器的一端相连接且安装在所述PCB底板上，所述加热片和温度传感器均安装在所述测试卡后端支持块上。采用上述技术方案，测试卡连接器与主板相连接，通过主板控制加热片加热，再通过将加热片安装在测试卡后端支持块上，加热片加热后依靠测试卡后端支持块传递热量给测试卡，采用安装在测试卡后端支持块上的温度传感器，用于探测测试卡后端支持块的温度变化，相比直接将加热片安装在测试卡的上面，可以使测试卡的反应腔的温度恒定，改善了加热性能。以前的加热片直接设在凝血测试卡的下面，温度传感器粘贴在加热片中心的底面，容易出现加热片升温快而测试卡温度未达到设置温度的现象，影响检测结果准确性和稳定性。正面电极连接器和反面电极连接可以为分开的两个部分，也可以为一体化设计，若一体化设计可以降低成本，提高结构稳定性，安装更便捷，操作更方便。
作为本发明的优选技术方案，所述测试卡后端支持块在远离所述加热片的一面设有凹槽，所述凹槽用于放置测试卡。
作为本发明的优选技术方案，该检测模块还包括测试卡前端支持块，所述测试卡前端支持块连接在所述反面电极连接器的另一端，且所述测试卡前端支持块的上表面与在所述PCB顶板相连接，所述测试卡前端支持块的下表面与所述PCB底板相连接，所述测试卡前端支持块用于支撑测试卡裸露在所述反面电极连接器以外的部分和所述PCB顶板。由测试卡后端支持块上的凹槽、反面电极连接器、卡盖、测试卡前端支持块以及正面电极连接器组合连接形成用于测试卡插入的卡槽，测试卡的加样孔裸露在该加热模块的外面。测试卡前端支持块可以采用金属材料质也可以不采用金属材质，若不采用金属材质，可以避免热量散失过快，使检测结果准确稳定。
作为本发明的优选技术方案，所述正面电极连接器包括金属连接片一和支撑块一，所述金属连接片一设在所述支撑块一的表面，所述支撑块一的另一表面与所述PCB顶板相连接；所述反面电极连接器包括金属连接片二和支撑块二，所述金属连接片二设在所述支撑块二的表面，所述支撑块二的另一表面与所述PCB底板相连接。正面电极连接器和反面电极连接器分别通过金属连接片一和金属连接片二与测试卡的正面电极和反面电极相压触形成导电连接。
作为本发明的优选技术方案，该检测模块还包括卡盖，所述卡盖与所述测试卡后端支持块远离所述加热片的一面相连接。
作为本发明的优选技术方案，所述卡盖上设有至少一条凝血测试卡压条，用于测试卡插入所述凹槽后压紧测试卡。
作为本发明的优选技术方案，所述测试卡后端支持块为导热支持板，用于传导安装在所述测试卡后端支持块上的所述加热片的热量，使测试卡的反应腔的温度恒定。优选地，测试卡后端支持块为金属材料，金属导热快，测试卡后端支持块的下面设置加热片，且温度传感器安装在测试卡后端支持块中，探测的是金属板温度变化，依靠金属材质的测试卡后端支持块与测试卡的温度传输，使测试卡反应腔的温度恒定，改善了加热性能。
作为本发明的优选技术方案，所述卡盖上设有两条所述凝血测试卡压条，所述凝血测试卡压条为弹压片。设计两个弹性的凝血测试卡压条分别压住测试卡两个侧边，可以压紧凝血测试卡，利于检测时的稳定反应。
作为本发明的优选技术方案，所述加热片卡嵌在所述测试卡后端支持块上的加热片卡槽中且通过与所述加热片相连接的连接头一穿过所述测试卡后端支持块上的圆孔一与凝血分析仪的主板相连接；相应地，所述温度传感器卡嵌在所述测试卡后端支持块上的温度传感器槽内且通过与温度传感器相接的连接头二穿过所述测试卡后端支持块上的圆孔二与凝血分析仪的主板相连接。
作为本发明的优选技术方案，该检测模块还包括信号运放芯片，设置在PCB底板上，用于检测过程中的信号运算放大。
将测试卡通过凝血分析仪的检测入口插入检测模块中并与检测模块形成导电连接，从而感知凝血过程的电流信号变化，血液样本滴入测试卡的加样孔，血液样本随即快速均匀的分配进入测试卡的各个反应腔中，该凝血分析仪侦测到样本进入反应腔内信号，施加交流电压，加热片进行加热，依靠测试卡后端支持块传递热量给测试卡，采用安装在测试卡后端支持块上的温度传感器，用于探测测试卡后端支持块的温度变化，使反应腔的温度一直控制在37℃±0.5范围内，随着血液样本凝血过程，电流信号发生变化，凝血分析仪的检测模块接收电流信号，电流信号再经运算放大芯片转换为电压信号，再经过数据采集处理，拟合出完整反应曲线，运用数学算法算出信号拐点，该点即为检测结果，用于多指标凝血指标检测的检测模块可以即时检测，无需专业人员即可操作，灵敏度高，操作方便，功能可靠且适用范围广。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：采用该发明的技术方案，活化凝血时间ACT 的测试时间为7~8min，时间较其他凝血指标较长，所以导致挥发量较多，血细胞浓度升高，电流强度降低，导致检测结果不准确，所以通过对芯片结构的改进克服反应腔中血液样本的挥发导致检测不稳定、不准确的缺点；通过增加反应腔长度使血液承载量增加，通过减小气孔大小，降低挥发速度，在加样量不变的前提下使挥发量变小，极大地提高了检测稳定性与准确性。
附图说明
图1为实施例1采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系图；
图2为实施例1采用本发明的检测方法和改进前的测试卡及凝血分析仪对同一样本的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系图；
图3为实施例2采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系图；
图4为实施例2采用本发明的检测方法和改进前的测试卡及凝血分析仪对同一样本的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系图；
图5为实施例3采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系图；
图6为实施例3采用本发明的检测方法和改进前的测试卡及凝血分析仪对同一样本的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系图；
图7为实施例1采用本发明的检测方法和改进后的测试卡及凝血分析仪对不同样本的ACT检测结果与目标靶值对比的准确性关系图；
图8为本发明改进后的测试卡的立体结构示意图；
图9为本发明改进后的测试卡的透视结构示意图；
图10为本发明改进后的测试卡的整体背面图；
图11为本发明改进后的测试卡的三层爆炸结构示意图；
图12为本发明改进后的测试卡的上层芯片的背面的结构示意图；
图13为本发明改进后的测试卡的下层芯片的正面的结构示意图；
图14为本发明改进后的测试卡的中层芯片的结构示意图；
图15为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的立体结构图；
图16为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的立体剖视图一；
图17为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的立体剖视图二；
图18为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的仰视立体图；
图19为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的结构分解图；
图20为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的测试卡连接器与测试卡连接图；
图21为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的正面电极连接器的结构图；
图22为本发明的用于多指标凝血检测的仪器的检测模块的反面电极连接器的结构图；
其中：1-下层芯片；101-下层连通孔；2-中层芯片；201-中层连通孔；202-接液口；3-上层芯片；4-上层电极；401-电极一；4011-反面电极检测端；5-下层电极；501-电极二；5011-正面电极检测端；6-微流道；601-主流通道；602-分微流体通道；6021-分微流体通道一；6022-分微流体通道二；6023-分微流体通道三；7-排气孔；8-加样孔；9-检测室；901-检测室一；902-检测室二；903-检测室三；904-检测室四；905-检测室五；10-PCB底板；11-PCB顶板；12-正面电极连接器；1201-金属连接片一；1202-支撑块一；13-反面电极连接器；1301-金属连接片二；1302-支撑块二；14-测试卡后端支持块；15-加热片；1501-连接头一；16-温度传感器；1601-连接头二；17-测试卡前端支持块；18-卡盖；1801-凝血测试卡压条；19-信号运放芯片；20-测试卡。
具体实施方式
实施例1：该活化凝血时间的电化学检测方法，具体包括以下步骤：
S1：将检测试剂固定在电极基片上，贴膜片后切条为凝血测试卡成品，封装；
S11：凝血指标检测试剂固定；
S111：凝血指标测试的点胶液的制备；
所述步骤S111中制备了五种凝血指标测试的点胶液，五种所述凝血指标测试的点胶液的具体制备方法为：
S1111 A液的配制：称取十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠，用纯水溶解，使溶解后的浓度为8.4%，获得A液，所述A液的十二水磷酸氢二钠的质量为8.3212g，二水磷酸二氢钠为0.8491g；使用的纯水的体积为100mL；所述A液冷藏的温度为4℃，保质期为2d；
S1111-1 凝血酶原点胶液的制备：称取凝血激酶加入所述A液中混合至充分溶解，获得凝血酶原点胶液，即称取凝血激酶8mg加入10mL A液中，获得的凝血酶原点胶液的浓度为0.08%，所述凝血酶原点胶液的冷藏温度为4℃；
S1111-2 活化部分凝血活酶点胶液的制备：取磷脂和液态硅土加入所述A液，混合均匀，获得活化部分凝血活酶点胶液，所使用的磷脂的含量为2%，液态硅土的含量为8%；即取0.125g磷脂、0.5mL液态硅土，加入5.75mLA液，所述活化部分凝血活酶点胶液的保存温度为25℃；
S1111-3纤维蛋白原点胶液配制：称取凝血酶用所述A液溶解并混合均匀，获得纤维蛋白原点胶液，即称取8mg凝血酶，加入8mL A液，溶解混合均匀，获得的纤维蛋白原点胶液的浓度为0.1%，所述纤维蛋白原点胶液冷藏的温度为4℃，保质期为1d；
S1111-4活化凝血点胶液配制：取高岭土和硅藻土，加入所述A溶液，混合均匀，获得活化凝血点胶液，所使用的高岭土的含量为2%，硅藻土的含量为5%；即取0.8g硅藻土、0.32g高岭土，加入16mLA液，所述活化凝血点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d；
S1111-5凝血酶点胶液配制：秤取凝血酶，加入所述A溶液，混合均匀，获得凝血酶点胶液，即秤取0.5mg凝血酶，加入1mL A溶液，获得的凝血酶点胶液浓度为0.005%，所述凝血酶点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d；
S112：将所述点胶液依次喷入所述电极基片的反应区域，进行连续喷点处理；根据点溶胶浓度，每点喷量为4mg，喷点处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；
S113：将喷点后的电极基片置于烘干传送带上进行干燥处理；干燥处理的温度为42℃，干燥时间为40min；干燥处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；
S12 ：将所述电极基片与已黏合为一体的包含上层芯片3和中层芯片2的膜片在一起压实；
S13：将整张黏贴好的测试卡片放入模切机切成测试卡20成品大小，表面处理采用有机溶剂异丙醇进行擦拭处理后封袋，封袋的环境温度为18～28℃；湿度≤30%；塑封机封口；
S2：将测试卡20（如图8~14所示）插入凝血分析仪，并加入待测样本；该测试卡20中的反应腔长度相比之前的测试卡20有增加，由4.5mm改为7.5mm；相比之前的测试卡20的排气口面积减小，由3*0.9mm2改为1~2mm2；
S3：所述凝血分析仪检测到所述待测血液样本进入所述测试卡的反应腔后，则施加交流电压，并启动检测模块的加热片进行加热，使温度控制在37℃±0.5范围内；
S4：检测过程中，随着血液样本凝固，所述测试卡的反应腔内电流信号发生变化，所述凝血分析仪的检测模块（如图15~22所示）接收电流信号，电流信号再经运算放大芯片转换为电压信号，经过数据采集处理，最后运用数学算法得到凝血反应曲线的拐点，所述拐点经校准即为检测结果，所述检测结果在检测结束后显示在所述凝血分析仪的显示屏界面。
实施例2：与实施例1不同之处在于，所述步骤S11中点溶胶配方的成分配比和烘干温度时间不一样，具体地步骤S1包括以下步骤：
S1：将检测试剂固定在电极基片上，贴膜片后切条为凝血测试卡成品，封装；
S11：凝血指标检测试剂固定；
S111：凝血指标测试的点胶液的制备；
所述步骤S111中制备了五种凝血指标测试的点胶液，五种所述凝血指标测试的点胶液的具体制备方法为：
S1111 A液的配制：称取十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠，用纯水溶解，使溶解后的浓度为5%，获得A液，所述A液的十二水磷酸氢二钠的质量为4.7758g，二水磷酸二氢钠为0.4873g；使用的纯水的体积为100mL；所述A液冷藏的温度为4℃，保质期为2d；
S1111-1 凝血酶原点胶液的制备：称取凝血激酶加入所述A液中混合至充分溶解，获得凝血酶原点胶液，即称取凝血激酶5mg加入10mL A液中，获得的凝血酶原点胶液的浓度为0.05%，所述凝血酶原点胶液的冷藏温度为4℃；
S1111-2 活化部分凝血活酶点胶液的制备：取磷脂和液态硅土加入所述A液，混合均匀，获得活化部分凝血活酶点胶液，所使用的磷脂的含量为1%，液态硅土的含量为1%；即取0.1g磷脂、0.1mL液态硅土，加入9.9mLA液，所述活化部分凝血活酶点胶液的保存温度为25℃；
S1111-3纤维蛋白原点胶液配制：称取凝血酶用所述A液溶解并混合均匀，获得纤维蛋白原点胶液，即称取4mg凝血酶，加入8mL A液，溶解混合均匀，获得的纤维蛋白原点胶液的浓度为0.05%，所述纤维蛋白原点胶液冷藏的温度为4℃，保质期为1d；
S1111-4活化凝血点胶液配制：取高岭土和硅藻土，加入所述A溶液，混合均匀，获得活化凝血点胶液，所使用的高岭土的含量为1%，硅藻土的含量为3%；即取0.3g硅藻土、0.1g高岭土，加入10mLA液，所述活化凝血点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d；
S1111-5凝血酶点胶液配制：秤取凝血酶，加入所述A溶液，混合均匀，获得凝血酶点胶液，即秤取0.02mg凝血酶，加入1mL A溶液，获得的凝血酶点胶液浓度为0.002%，所述凝血酶点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d；
S112：将所述点胶液依次喷入所述电极基片的反应区域，进行连续喷点处理；根据点胶液浓度，每点喷量为5mg，喷点处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；
S113：将喷点后的电极基片置于烘干传送带上进行干燥处理；干燥处理的温度为35℃，干燥时间为30min；干燥处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%。
实施例3：与实施例1不同之处在于，所述步骤S111中点溶胶配方中的成分配比不一样，具体地步骤S1包括以下步骤：
S1：将检测试剂固定在电极基片上，贴膜片后切条为凝血测试卡成品，封装；
S11：凝血指标检测试剂固定；
S111：凝血指标测试的点胶液的制备；
所述步骤S111中制备了五种凝血指标测试的点胶液，五种所述凝血指标测试的点胶液的具体制备方法为：
S1111 A液的配制：称取十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠，用纯水溶解，使溶解后的浓度为15%，获得A液，所述A液的十二水磷酸氢二钠的质量为16.0131g，二水磷酸二氢钠为1.634g；使用的纯水的体积为100mL；所述A液冷藏的温度为4℃，保质期为2d；
S1111-1 凝血酶原点胶液的制备：称取凝血激酶加入所述A液中混合至充分溶解，获得凝血酶原点胶液，即称取凝血激酶30mg加入10mL A液中，获得的凝血酶原点胶液的浓度为0.3%，所述凝血酶原点胶液的冷藏温度为4℃；
S1111-2 活化部分凝血活酶点胶液的制备：取磷脂和液态硅土加入所述A液，混合均匀，获得活化部分凝血活酶点胶液，所使用的磷脂的含量为5%，液态硅土的含量为10%；即取0.25g磷脂、0.5mL液态硅土，加入4.5mLA液，所述活化部分凝血活酶点胶液的保存温度为25℃；
S1111-3纤维蛋白原点胶液配制：称取凝血酶用所述A液溶解并混合均匀，获得纤维蛋白原点胶液，即称取16mg凝血酶，加入8mL A液，溶解混合均匀，获得的纤维蛋白原点胶液的浓度为0.2%，所述纤维蛋白原点胶液冷藏的温度为4℃，保质期为1d；
S1111-4活化凝血点胶液配制：取高岭土和硅藻土，加入所述A溶液，混合均匀，获得活化凝血点胶液，所使用的高岭土的含量为10%，硅藻土的含量为10%；即取1g硅藻土、1g高岭土，加入10mLA液，所述活化凝血点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d；
S1111-5凝血酶点胶液配制：秤取凝血酶，加入所述A溶液，混合均匀，获得凝血酶点胶液，即秤取0.2mg凝血酶，加入1mL A溶液，获得的凝血酶点胶液浓度为0.02%，所述凝血酶点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d；
S112：将所述点胶液依次喷入所述电极基片的反应区域，进行连续喷点处理；根据点胶液浓度，每点喷量为0.5mg，喷点处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；
S113：将喷点后的电极基片置于烘干传送带上进行干燥处理；干燥处理的温度为65℃，干燥时间为120min；干燥处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%。
上述实施例1~3中的采用的测试卡20，如图8~14所示，包括芯片本体，所述芯片本体从下往上依次包括下层芯片1、中层芯片2和上层芯片3，所述下层芯片1、中层芯片2与上层芯片3相配合界定出封闭的微流道和5个相互独立的检测室9，所述上层芯片3上设有加样孔8，所述加样孔8通过所述微流道6与所述检测室9相连通；所述芯片本体还包括电极，所述电极包括上层电极4和下层电极5，所述上层电极4设置在所述上层芯片3的背面，所述下层电极5设置在所述下层芯片1的正面，所述上层电极4与所述下层电极5之间有间隙；所述上层电极4在所述上层芯片3的背面和所述下层电极5在所述下层芯片1的正面均与所述中层芯片2的所述检测室9所在的位置相对应地设置，所述上层电极4和所述下层电极5通过所述检测室9相连通；检测室9内预先包埋有检测试剂，当待测血液样本流入检测室9后，上层电极4和下层电极5均与检测室9中血液相接触，从而通过血液导电连通；所述中层芯片2在与所述上层电极4相对应的位置设有中层连通孔201，所述下层芯片1在与所述上层电极4相对应的位置设有下层连通孔101，所述上层电极4通过所述中层连通孔201及所述下层连通孔101与凝血分析仪接触连接；这样的设置使得上层芯片3背面的上层电极4可以直接与凝血分析仪接触连接；所述微流道6和检测室9均贯穿设置在所述中层芯片2上；所述微流道6包括一条主流通道601和5个分微流体通道602，所述主流通道601的末端分流出5个所述分微流体通道602，5个所述分微流体通道602与5个相互独立的检测室9一一对应连通；所述主流通道601的前端与所述加样孔8连通；所述上层电极4包含5个电极一401，5个所述电极一401均与5个相互独立的所述检测室9一一对应设置；所述下层电极5包含5个电极二501，5个所述电极二501均与5个相互独立的所述检测室9一一对应设置，所述电极一401和所述电极二501分别为工作电极或参比电极；对每个检测室9均分别对应设置电极一401和电极二501，从而使每个检测室9的电极分开，降低电极之间的干扰，提高检测的准确性；5个所述电极一401的一端均与5个相互独立的检测室9一一对应设置且均位于所述检测室9内，5个所述电极一401的另一端在所述上层芯片3的背面均延伸至所述上层芯片3的一端的端头形成与所述凝血分析仪相接触连接的反面电极检测端4011；这样的设置使得每个检测室对应的电极一401直接通过反面电极检测端4011与凝血分析仪相接触连接，从而降低与电极二501之间的干扰；5个所述电极二501的一端均与5个相互独立的检测室9一一对应设置且均位于所述检测室9内，5个所述电极二501的另一端在所述下层芯片1的正面均延伸至所述下层芯片1的一端的端头形成与所述凝血分析仪相连接的正面电极检测端5011且所述正面电极检测端5011裸露在所述下层芯片1、中层芯片2与上层芯片3粘合成一体后相对于所述上层芯片3和中层芯片2的一端的外部。这样的设置可以使下层芯片1的正面电极检测端5011直接插入凝血分析仪，避免了与上层电极4之间的干扰；所述上层芯片3上还设有5个排气孔7，5个所述排气孔7均设置在所述上层芯片3的一端且设置在与所述检测室9相对应的位置处；通过在上层芯片3贯穿设置5个排气孔7，使得待测流体的流动阻力减小，流动更快速，实现快速填充检测室9；排气孔7的设置有利于样本的流动，方便进样，若没有设置排气孔7，则样本不能流进检测室9进行反应，检测室9内预先包埋检测试剂；所述反面电极检测端4011分别与所述中层连通孔201及所述下层连通孔101一一对应设置；一个中层连通孔201对应一个下层连通孔101且对应一个反面电极检测端4011，这样使每个电极一401均能与凝血分析仪相接触；所述中层芯片2设有接液口202，所述接液口202与所述加样孔8的位置相对应设置，所述主流通道601的一端与所述接液口202相连接，即所述主流通道601的一端通过所述接液口202与所述加样孔8相连通；所述主流通道6的另一端通过所述分微流体通道602连接所述检测室9，所述检测室9的宽度大于所述分微体通道602的宽度；所述主流通道601向远离所述接液口202的一端沿水平方向延伸设有分微流体通道一6021连接检测室一901，所述主流通道601向远离所述接液口202的一端沿垂直方向分别向两侧延伸设有分微流体通道二6022和分微流体通道三6023，所述分微流体通道二6022沿与所述主流通道601平行的方向分别向两端延伸连接有检测室二902和检测室三903，所述分微体通道三6023沿与所述主流通道601平行的方向分别向两端延伸连接有检测室四904和检测室五905；通过设计特定结构形式的多通道和多检测室，用于引导血液样本的流动，使得一个样品腔室，能够同时向5个反应腔室注入样品，使得流动更快捷，提高检测准确率和效率；同时这样的设计缩小了该多通道微流体凝血检测芯片的大小，长和宽的长度较之前缩小了25~45%，降低了生产成本，且使芯片更小巧便携；所述电极一401与所述电极二501的数量均为5个，相应的，所述中层连通孔201与所述下层连通孔101的数量也均为5个；每个所述反面电极检测端4011均为大小相同的矩形，且每个所述反面电极检测端4011之间的间距相等，相应的，每个所述中层连通孔201及所述下层连通孔101均为大小相同的矩形，且每个所述中层连通孔201之间及每个所述下层连通孔101之间的间距均相等；所述反面电极检测端4011的大小大于或等于所述中层连通孔201及所述下层连通孔101的大小；所述中层连通孔201与所述下层连通孔101的大小相同；每个所述正面电极检测端5011的形状均为矩形且每个所述正面电极检测端5011之间的间距相等；所述正面电极检测端5011裸露在所述下层芯片1、中层芯片2与上层芯片3粘合成一体后相对于所述上层芯片3和中层芯片2的一端的外部的长度不超过1cm；5个所述排气孔7均设置在与所述检测室9远离分微流体通道602的端部且与所述检测室9的边缘相齐平的相对应的位置处。
如图15~22所示，上述实施例1~3中的凝血分析仪中的检测模块包括PCB底板10、PCB顶板11和测试卡连接器，所述测试卡连接器包括正面电极连接器12和反面电极连接器13，所述正面电极连接器12安装在所述PCB顶板11上，所述反面电极连接器13安装在所述PCB底板10上；该检测模块还包括测试卡后端支持块14、加热片15和温度传感器16，所述测试卡后端支持块14与所述反面电极连接器13的一端相连接且安装在所述PCB底板10上，所述加热片15和温度传感器16均安装在所述测试卡后端支持块14上；所述测试卡后端支持块14在远离所述加热片15的一面设有凹槽1501，所述凹槽1501用于放置测试卡20；该检测模块还包括测试卡前端支持块17，所述测试卡前端支持块17连接在所述反面电极连接器13的另一端，且所述测试卡前端支持块17的上表面与在所述PCB顶板11相连接，所述测试卡前端支持块17的下表面与所述PCB底板10相连接，所述测试卡前端支持块17用于支撑测试卡20裸露在所述反面电极连接器13以外的部分和所述PCB顶板11；由测试卡后端支持块14上的凹槽、反面电极连接器13、卡盖、测试卡前端支持块17以及正面电极连接器12组合连接形成用于测试卡20插入的卡槽，测试卡20的加样孔8裸露在该加热模块的外面；该实施例中测试卡前端支持块17不采用金属材质，可以避免热量散失过快，使检测结果准确稳定；所述正面电极连接器12包括金属连接片一1201和支撑块一1202，所述金属连接片一1201设在所述支撑块一1202的表面，所述支撑块一1202的另一表面与所述PCB顶板1相连接；所述反面电极连接器13包括金属连接片二1301和支撑块二1302，所述金属连接片二1301设在所述支撑块二1302的表面，所述支撑块二1302的另一表面与所述PCB底板10相连接；金属连接片一1301和金属连接片二1302均为拱形，这样的设计便于与测试卡20的正面电极1002和反面电极1003相连接，同时便于测试卡20的插入和抽出；正面电极连接器12和反面电极连接器13分别通过金属连接片一1201和金属连接片二1301与测试卡20的正面电极和反面电极相压触形成导电连接；该检测模块还包括卡盖18，所述卡盖18与所述测试卡后端支持块14远离所述加热片15的一面相连接；所述测试卡后端支持块14为导热支持板，用于传导安装在所述测试卡后端支持块14上的所述加热片15的热量，使测试卡20的反应腔的温度恒定，该实施例中，测试卡后端支持块14为金属材料，金属导热快，测试卡后端支持块14的下面设置加热片15，且温度传感器16安装在测试卡后端支持块14中，探测的是金属板温度变化，依靠金属材质的测试卡后端支持块14与测试卡20的温度传输，使测试卡20的反应腔的温度恒定，改善了加热性能；所述卡盖18上设有两个贯穿方孔用于安装所述凝血测试卡压条1801，所述凝血测试卡压条1801为弹压片；设计两个弹性的凝血测试卡压条1801分别压住测试卡20两个侧边，可以压紧凝血测试卡20，利于检测时的稳定反应；所述加热片15卡嵌在所述测试卡后端支持块14上的加热片卡槽中且通过与所述加热片15相连接的连接头一1501穿过所述测试卡后端支持块14上的圆孔一与凝血分析仪的主板相连接；相应地，所述温度传感器16卡嵌在所述测试卡后端支持块14上的温度传感器槽内且通过与温度传感器16相接的连接头二1601穿过所述测试卡后端支持块14上的圆孔二与凝血分析仪的主板相连接；该检测模块还包括信号运放芯片19，设置在PCB底板10上，用于检测过程中的信号运放。
采用上述实施例1的检测方法对样本进行测试，并将改进前的对同一样本的测试结果作为对比参照实验；表1为采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡20及凝血分析仪的测试结果；活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系如图1所示，表2为采用本发明的检测方法和改进前的测试卡20及凝血分析仪对同一样本的测试结果，活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系如图2所示。
表1实施例1采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的测试结果
编号 肝素用量（u） 测试值（s）
1 0 122
2 0.3 143
3 0.5 169
4 1.0 276
5 1.2 334
6 1.5 385
7 2.0 428
8 2.4 503
9 2.8 652
10 3.5 807
表2 实施例1采用本发明的检测方法和改进前的测试卡及凝血分析仪对同一样本的测试结果
编号 肝素用量（u） 测试值（s）
1 0 121
2 0.3 155
3 0.5 253
4 1.0 241
5 1.2 389
6 1.5 334
7 2.0 372
8 2.4 484
9 2.8 527
10 3.5 745
通过表1和表2的测试结果以及图1和图2的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系，可以看出，改进后的ACT测试曲线线性明显提高，检测结果更准确稳定。
采用上述实施例2的检测方法对样本进行测试，并将改进前的对同一样本的测试结果作为对比参照实验；表3为采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡20及凝血分析仪的测试结果；活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系如图3所示，表4为采用本发明的检测方法和改进前的测试卡20及凝血分析仪对同一样本的测试结果，活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系如图4所示。
表3实施例2采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的测试结果
编号 肝素用量（u） 测试值（s）
1 0 123
2 0.3 138
3 0.5 153
4 1.0 186
5 1.2 247
6 1.5 425
7 2.0 434
8 2.4 484
9 2.8 729
10 3.5 843
表4 实施例2采用本发明的检测方法和改进前的测试卡及凝血分析仪对同一样本的测试结果
编号 肝素用量（u） 测试值（s）
1 0 116
2 0.3 147
3 0.5 328
4 1.0 269
5 1.2 394
6 1.5 336
7 2.0 365
8 2.4 475
9 2.8 548
10 3.5 765
通过表3和表4的测试结果以及图3和图4的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系，可以看出，改进后的ACT测试曲线线性明显提高，检测结果更准确稳定。
采用上述实施例3的检测方法对样本进行测试，并将改进前的对同一样本的测试结果作为对比参照实验；表5为采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡20及凝血分析仪的测试结果；活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系如图5所示，表6为采用本发明的检测方法和改进前的测试卡20及凝血分析仪对同一样本的测试结果，活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系如图6所示。
表5 实施例3采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的测试结果
编号 肝素用量（u） 测试值（s）
1 0 122
2 0.3 143
3 0.5 159
4 1.0 204
5 1.2 236
6 1.5 374
7 2.0 455
8 2.4 478
9 2.8 649
10 3.5 867
表6 实施例3采用本发明的检测方法和改进前的测试卡及凝血分析仪对同一样本的测试结果
编号 肝素用量（u） 测试值（s）
1 0 119
2 0.3 235
3 0.5 283
4 1.0 267
5 1.2 229
6 1.5 372
7 2.0 393
8 2.4 474
9 2.8 657
10 3.5 785
通过表5和表6的测试结果以及图5和图6的活化凝血时间的测试结果与肝素用量的关系，可以看出，改进后的ACT测试曲线线性明显提高，检测结果更准确稳定。
对实施例1进行数据准确性验证，得到凝血分析仪基于不同样本的ACT检测结果与目标靶值的对比数据，如表7所示；其中目标靶值以目前市面上的美国海伦娜ACT凝血分析仪Actalyke Mini Ⅱ的测试结果为标准。
表7 凝血分析仪基于不同样本的ACT检测结果与目标靶值数据对比（单位：s）
样本号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
目标靶值 136 105 127 138 110 131 105 114 128 116
检测结果 138 106 131 139 112 136 107 115 131 120
相应的，图7为凝血分析仪基于不同样本的ACT检测结果与目标靶值数据对比的准确性关系图，从图7中可以看出，采用本发明的检测方法和本发明改进后的测试卡及凝血分析仪的ACT检测结果与目标靶值的线性相关性R2=0.9887（r=0.9943），r>0.975，结果相关性较好，其中线性回归方程为：y=1.032x-1.3727，从而说明ACT检测结果准确。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，例如对测试卡表面处理的有机溶剂的替换、点胶液配方的改变、测试卡结构的调整等，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (21)

1.一种活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1：将检测试剂固定在电极基片上，贴膜片后切条为凝血测试卡成品，封装；
S2：检测时将测试卡插入凝血分析仪，加入待测血液样本；
S3：所述凝血分析仪检测到所述待测血液样本进入所述测试卡的反应腔后，则施加交流电压，并启动检测模块的加热片进行加热，使温度控制在37℃±0.5范围内；
S4：检测过程中，随着血液样本凝固，所述测试卡的反应腔内电流信号发生变化，所述凝血分析仪的检测模块接收电流信号，电流信号再经运算放大芯片转换为电压信号，经过数据采集处理，最后运用数学算法得到凝血反应曲线的拐点，所述拐点经校准即为检测结果，所述检测结果在检测结束后显示在所述凝血分析仪的显示屏界面。
2.根据权利要求1所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括以下步骤：
S11：凝血指标检测试剂固定；
S111：凝血指标测试的点胶液的制备；
S112：将所述点胶液依次喷入所述电极基片的反应区域，进行连续喷点处理；
S113：将喷点后的电极基片置于烘干传送带上进行干燥处理；
S12：将所述电极基片与已黏合为一体的包含上层芯片和中层芯片的膜片在一起压实；
S13：将整张黏贴好的测试卡片放入模切机切成成品的测试卡大小，对所述测试卡的表面采用有机溶剂进行擦拭处理后封袋，塑封机封口。
3.根据权利要求2所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S111中制备了五种凝血指标测试的点胶液，五种所述凝血指标测试的点胶液的具体制备方法为：
S1111 A液的配制：按比例称取磷酸盐或醋酸盐，用纯水溶解，获得A液，冷藏保存备用；
S1111-1 凝血酶原点胶液的制备：按比例称取凝血激酶加入所述A液中混合至充分溶解，获得凝血酶原点胶液，冷藏保存备用；
S1111-2 活化部分凝血活酶点胶液的制备：按比例取磷脂和液态硅土加入所述A液，混合均匀，获得活化部分凝血活酶点胶液，置常温保存备用；
S1111-3纤维蛋白原点胶液配制：按比例称取凝血酶加入所述A液溶解，混合均匀，获得纤维蛋白原点胶液，冷藏保存备用；
S1111-4活化凝血点胶液配制：按比例取高岭土和硅藻土，加入所述A溶液，混合均匀，获得活化凝血点胶液，置常温保存备用；
S1111-5凝血酶点胶液配制：按比例秤取凝血酶，加入所述A溶液，混合均匀，获得凝血酶点胶液，置常温保存备用。
4.根据权利要求3所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1111中所述A液中的磷酸盐为十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠；所述醋酸盐为醋酸钠或醋酸铵；其中所述十二水磷酸氢二钠和二水磷酸二氢钠浓度为5~15%；使用的纯水的体积为100mL；所述A液冷藏的温度为4℃，保质期为2d。
5.根据权利要求4所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1111-1中配制凝血酶原点胶液中凝血激酶含量为0.05~0.3%；所述凝血酶原点胶液的冷藏温度为4℃。
6.根据权利要求4所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1111-2中配制活化部分凝血活酶点胶液所使用的磷脂含量为1~5%，液态硅土的含量为1~10%，所述活化部分凝血活酶点胶液的保存温度为25℃。
7.根据权利要求4所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1111-3中配制纤维蛋白原点胶液的凝血酶含量0.05~0.2%，所述纤维蛋白原点胶液冷藏的温度为4℃，保质期为1d。
8.根据权利要求4所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1111-4中配制活化凝血点胶液所使用的高岭土含量为1~10%，硅藻土含量为3~10%，所述活化凝血点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d。
9.根据权利要求4所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S1111-5中配制凝血酶点胶液所使用的凝血酶含量0.002~0.02%，所述凝血酶点胶液的保存温度为25℃，保质期为1d。
10.根据权利要求4所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述步骤S112根据点胶液浓度，每点喷量为0.5~5mg，喷点处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；所述步骤S113中干燥处理的温度为35~65℃，干燥时间为30min~120min；干燥处理时的环境温度为15~28℃，湿度≤35%；所述步骤S12中表面处理所采用的有机溶剂为异丙醇或二甲基亚砜DMSO或乙醇；所述步骤S13中封袋的环境温度为15～28℃，湿度≤35%。
11.根据权利要求2所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述测试卡包括芯片本体，所述芯片本体从下往上依次包括下层芯片、中层芯片和上层芯片，所述下层芯片、中层芯片与上层芯片相配合界定出封闭的微流道和多个相互独立的反应腔，所述上层芯片上设有加样孔，所述加样孔通过所述微流道与所述反应腔相连通；其特征在于，所述芯片本体还包括电极，所述电极包括上层电极和下层电极，所述上层电极设置在所述上层芯片的背面，所述下层电极设置在所述下层芯片的正面，所述上层电极与所述下层电极之间有间隙；所述反应腔的长度为6~9mm。
12.根据权利要求11所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述上层芯片上还设有多个排气孔，多个所述排气孔均设置在与所述反应腔远离分微流体通道的端部且与所述反应腔的边缘相齐平的对应的位置处；所述排气口的面积为1~2mm2。
13.根据权利要求2所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述凝血分析仪中的检测模块包括PCB底板、PCB顶板和测试卡连接器，所述测试卡连接器包括正面电极连接器和反面电极连接器，所述正面电极连接器安装在所述PCB顶板上，所述反面电极连接器安装在所述PCB底板上。
14.根据权利要求13所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述检测模块还包括测试卡后端支持块、加热片和温度传感器，所述测试卡后端支持块与所述反面电极连接器的一端相连接且安装在所述PCB底板上，所述加热片和温度传感器均安装在所述测试卡后端支持块上。
15.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述测试卡后端支持块在远离所述加热片的一面设有凹槽，所述凹槽用于放置测试卡。
16.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述检测模块还包括测试卡前端支持块，所述测试卡前端支持块连接在所述反面电极连接器的另一端，且所述测试卡前端支持块的上表面与在所述PCB顶板相连接，所述测试卡前端支持块的下表面与所述PCB底板相连接，所述测试卡前端支持块用于支撑测试卡裸露在所述反面电极连接器以外的部分和所述PCB顶板。
17.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述正面电极连接器包括金属连接片一和支撑块一，所述金属连接片一设在所述支撑块一的表面，所述支撑块一的另一表面与所述PCB顶板相连接；所述反面电极连接器包括金属连接片二和支撑块二，所述金属连接片二设在所述支撑块二的表面，所述支撑块二的另一表面与所述PCB底板相连接。
18.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述检测模块还包括信号运放芯片，设置在所述PCB底板上，用于检测过程中的信号运放。
19.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述检测模块还包括卡盖，所述卡盖与所述测试卡后端支持块远离所述加热片的一面相连接；所述卡盖上设有至少一条凝血测试卡压条，用于测试卡插入所述凹槽后压紧测试卡。
20.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述测试卡后端支持块为导热支持板，用于传导安装在所述测试卡后端支持块上的所述加热片的热量，使测试卡的反应腔的温度恒定。
21.根据权利要求14所述的活化凝血时间的电化学检测方法，其特征在于，所述加热片卡嵌在所述测试卡后端支持块上的加热片卡槽中且通过与所述加热片相连接的连接头一穿过所述测试卡后端支持块上的圆孔一与凝血分析仪的主板相连接；相应地，所述温度传感器卡嵌在所述测试卡后端支持块上的温度传感器槽内且通过与温度传感器相接的连接头二穿过所述测试卡后端支持块上的圆孔二与凝血分析仪的主板相连接。
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