CN111876434B - 密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因及其表达载体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了密码子优化的β‑葡萄糖苷酶基因及其表达载体。本发明按照里氏木霉的密码子偏好优化β‑葡萄糖苷酶基因，可以导入里氏木霉获得表达，能提高β‑葡萄糖苷酶的产量，对提高木质纤维素的降解效率具有重要意义。

Description

密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因及其表达载体
技术领域
本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因及其表达载体。
背景技术
纤维素是植物光合作用的主要产物，是自然界含量最丰富的可再生碳源物质，充分利用纤维素资源生产还原糖及乙醇等化学品，对于解决人类面临的能源危机、食品短缺和环境污染等问题具有及其重大的意义。
β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase)，又称纤维二糖酶，是纤维素酶的重要组分之一。纤维素酶是将纤维素分子降解为葡萄糖的一类酶系，根据纤维素酶的性质可分为外切-β-葡聚糖酶、内切-β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。外切-β-葡聚糖酶(又称纤维二糖水解酶)作用于线状纤维素大分子的两个末端，从纤维素分子两端依次切下纤维二糖分子；内切-β-葡聚糖酶作用于纤维素内部的非结晶区，通过随机水解β-1,4-糖苷键将长链纤维素分子截短；β-葡萄糖苷酶降解纤维二糖和纤维三糖等纤维寡糖为葡萄糖。在纤维素酶组分水解纤维素过程中，三种组分通过协同作用将纤维素分子降解为葡萄糖。在纤维素的降解时，纤维二糖的积累会抑制外切-β-葡聚糖酶和内切-β-葡聚糖酶的活性，提高β-葡萄糖苷酶的活性，会增强纤维素的酶解效率。
纤维素酶在自然界中的分布很广泛，在微生物、动物和植物中都有存在，其中在各类微生物报道较多。目前工业应用最广泛的纤维素酶生产菌株为里氏木霉，用里氏木霉生产纤维素酶具有生产原料成本低、周期较短、污染少，对环境温和等优点。里氏木霉能分泌较大量的外切-β-葡聚糖酶和内切-β-葡聚糖酶，但产β-葡萄糖苷酶的量较低，限制了酶解纤维素的效率。因此，提高里氏木霉酶系中β-葡萄糖苷酶的量，以期获得高活力的纤维素酶，是提高里氏木霉纤维素酶酶解效率的关键。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因。
本发明的目的之二在于提供所述密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因的表达载体。
本发明的目的之三在于提供一种含有所述密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因的表达载体的宿主细胞。
本发明提供的一种密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1(序列表中的序列1)所示。
本发明提供的一种重组表达载体，其含有所述密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因。
本发明提供的一种宿主细胞，其含有所述重组表达载体。
进一步地，所述宿主细胞为里氏木霉。
本发明的有益效果：按里氏木霉的密码子偏好优化了来源于葡萄汁曲霉中的β-葡萄糖苷酶基因，改造后的基因序列与野生型的序列(Genebank收录号为XM_025636497)同源性为95.6％。密码子偏好优化后的β-葡萄糖苷酶基因相对于野生型基因表达出较高酶活，可用于β-葡萄糖苷酶的合成。核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的β-葡萄糖苷酶基因由全基因合成，并连接到里氏木霉外切-β-葡聚糖酶1启动子下，并与潮霉素磷酸转移酶启动子及基因连接构建表达载体。采用原生质体转化法将合成的β-葡萄糖苷酶基因导入到里氏木霉中，获得重组木霉菌。
附图说明
图1为含原始β-葡萄糖苷酶基因的重组里氏木霉产酶折线图。
图2为含优化β-葡萄糖苷酶基因的重组里氏木霉产酶折线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：β-葡萄糖苷酶基因的获得
根据NCBI数据库中的野生型β-葡萄糖苷酶基因序列(Genebank收录号为JN121997.1)进行序列优化，序列优化按里氏木霉的密码子使用频率偏好和避免重复序列，优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。采用化学合成的方法，分别合成野生型和优化后的β-葡萄糖苷酶基因序列。
实施例2：表达载体的构建
里氏木霉基因组提取：将里氏木霉在LB固体培养基(配方：每升含10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠、16g琼脂粉)斜面试管中28℃培养6天，接入LB液体培养基(配方：每升含10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠)中培养2天；将菌体用纯水洗4次，离心后放入坩埚，加液氮后磨成粉，加70℃的CTAB抽提缓冲液(配方：每升含100mL的1MTris-Hcl、20mL的0.5MEDTA、100mL的10％CTAB、7g氯化钠)，65℃保温57min，保温期间每隔19分钟混匀一次。加入等体积酚:氯仿:异戊醇溶液，混匀并离心。取上层清液加入2倍体积的冰预冷无水乙醇，上下缓慢倒置混匀，1～5℃冰箱冷藏放置30min，离心6min，取沉淀用80％的乙醇洗涤；离心6min取沉淀再用无水乙醇洗涤；离心6min，取沉淀用含RNase的TE缓冲液(配方：每升含10mmol的Tris-Hcl、1mmol的EDTA、10mg的RNase，pH8.0)溶解后用温水浴20min，获得里氏木霉基因组。
以里氏木霉基因组为模板克隆纤维二糖水解酶I的启动子：上游引物为5-GCTCAATTCTGGAGACGGCTTGTT-3，下游引物为5-CGCCCTCCAAGTGTTGCCATCGTA-3，PCR反应的条件为95℃ 5min；95℃ 50s，70℃ 2min5s，28个循环；72℃ 5min。从质粒pDESTR(武汉淼灵科技有限公司，质粒pDESTR)中扩增潮霉素磷酸转移酶启动子及其潮霉素磷酸转移酶基因，上游引物为5-CATGTTGGGACGTTAACTGATATTGAAGG-3，下游引物为5-TCCGTTAACTGGTTCCCGGTCGGC-3，PCR反应条件为95℃ 5min；95℃ 50s，70℃ 2min15s，28个循环；72℃ 5min。将合成优化后的β-葡萄糖苷酶基因连接至纤维二糖水解酶I启动子和潮霉素磷酸转移酶启动子及潮霉素磷酸转移酶基因之间，构建表达载体。
P18BGW和P18BGY质粒制备：将野生型和优化后的β-葡萄糖苷酶基因和PUC18质粒分别进行KpnI和SacI酶切，双酶切体系：分别选取80μL的β-葡萄糖苷酶基因或80μL的PUC18载体、10×buffer缓冲液10μL、Kpn1和Sac1各2μL，加水补至100μL，在温度37℃的条件下酶切25min，将酶切产物放到96℃水浴中2min；然后以1％浓度的琼脂糖凝胶电泳分别回收β-葡萄糖苷酶基因片段和PUC18载体片段并用连接酶进行连接，反应体系：β-葡萄糖苷酶基因片段8μL、PUC18载体片段4μL、T4连接酶1μL、buffer缓冲液4μL，加纯水补至40μL，在温度16℃的条件下连接5h。将连接后的产物转化大肠杆菌DH5α感受态，转化方法：在60μL大肠杆菌感受态(上海昂羽生物技术有限公司，大肠杆菌DH5α感受态)中加入10μL连接产物，冰浴10min；在42℃的水浴中热激70s，然后冰浴5min；之后加1.5mL的LB液体培养基，吹匀后在37℃的培养箱中培养60min；将反应物8000r/min离心2min，弃去1.4mL上清液，重悬剩下培养液中的大肠杆菌，涂布到抗性LB平板；将抗性LB平板放到37℃的培养箱培养15h，挑取大肠杆菌转化子至6mL液体抗性LB培养基，于37℃下160r/min条件振荡培养14h，提取质粒，含野生型β-葡萄糖苷酶基因的质粒为P18BGW，含优化后β-葡萄糖苷酶基因的质粒为P18BGY。
P18BGWP质粒制备：将纤维二糖水解酶I启动子和P18BGW质粒分别进行HindⅢ和KpnI双酶切，酶切体系：分别选取80μL的纤维二糖水解酶I启动子或80μL的P18BGW质粒、10×buffer缓冲液10μL、HindⅢ和KpnI各2μL，加纯水补至100μL，在温度37℃的条件下酶切12min，将酶切产物放入94℃水浴中2min。以1％浓度的琼脂糖凝胶电泳分别回收纤维二糖水解酶I启动子片段和P18BGW质粒片段并进行连接，连接反应体系：纤维二糖水解酶I启动子基因8μL、P18BGW质粒片段4μL、T4连接酶1μL、buffer缓冲液4μL，加纯水补至40μL，于16℃下连接9h，将连接后的产物转化大肠杆菌DH5α感受态，再提取大肠杆菌DH5α感受态中的质粒，该质粒即为P18BGWP质粒。
P18BGYP质粒制备：将纤维二糖水解酶I启动子和P18BGY质粒分别进行HindⅢ和KpnI双酶切，酶切体系：分别选取80μL的纤维二糖水解酶I启动子或80μL的P18BGY质粒、10×buffer缓冲液10μL、HindⅢ和KpnI各2μL，加纯水补至100μL，在温度37℃的条件下酶切12min，将酶切产物放入94℃水浴中2min。以1％浓度的琼脂糖凝胶电泳分别回收纤维二糖水解酶I启动子片段和P18BGY质粒片段并进行连接，连接反应体系：纤维二糖水解酶I启动子基因8μL、P18BGY质粒片段4μL、T4连接酶1μL、buffer缓冲液4μL，加纯水补至40μL，于16℃下连接9h，将连接后的产物转化大肠杆菌DH5α感受态，再提取大肠杆菌DH5α感受态中的质粒，该质粒即为P18BGYP质粒。
P18BGWPH质粒制备：将潮霉素磷酸转移酶启动子及潮霉素磷酸转移酶基因和P18BGWP质粒分别进行SacI和EcoRI双酶切，酶切体系为：分别选取80μL的潮霉素磷酸转移酶的基因表达盒或80μL的P18BGWP质粒、10×buffer缓冲液10μL、SacI和EcoRI各2μL，加纯水补至100μL；在温度37℃的条件下酶切15min，将酶切产物移到94℃水浴中灭活3min。以1％浓度的琼脂糖凝胶电泳分别回收潮霉素磷酸转移酶的基因表达盒片段和P18BGWP质粒片段并进行连接，连接反应体系：潮霉素磷酸转移酶的基因表达盒片段8μL、P18BGWP质粒片段4μL、T4连接酶1μL、buffer缓冲液4μL，加纯水补至40μL，在温度16℃条件下连接5h，转化大肠杆菌DH5α感受态，再提取质粒，该质粒即为P18BGWPH质粒。
P18BGYPH质粒制备：将潮霉素磷酸转移酶启动子及潮霉素磷酸转移酶基因和P18BGYP质粒分别进行SacI和EcoRI双酶切，酶切体系为：分别选取80μL的潮霉素磷酸转移酶的基因表达盒或80μL的P18BGYP质粒、10×buffer缓冲液10μL、SacI和EcoRI各2μL，加纯水补至100μL；在温度37℃的条件下酶切15min，将酶切产物移到94℃水浴中灭活3min。以1％浓度的琼脂糖凝胶电泳分别回收潮霉素磷酸转移酶的基因表达盒片段和P18BGYP质粒片段并进行连接，连接反应体系：潮霉素磷酸转移酶的基因表达盒片段8μL、P18BGYP质粒片段4μL、T4连接酶1μL、buffer缓冲液4μL，加纯水补至40μL，在温度16℃条件下连接5h，转化大肠杆菌DH5α感受态，再提取质粒，该质粒即为P18BGYPH质粒。
实施例3：β-葡萄糖苷酶基因导入里氏木霉
在PDA斜面上培养里氏木霉170h，用无菌水收集木霉的绿色孢子，将孢子接种到LB液体培养基(配方：每升含10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠)中，继续培养8小时，离心后用无菌水洗两次，再用磷酸缓冲液(10mM磷酸钠缓冲液，pH6，含1.0MMgSO4)洗两次，重悬于磷酸缓冲液(10mM磷酸钠缓冲液，pH6，含5.5g/L蜗牛酶)中酶解3h。酶解后加同体积1M山梨醇溶液，离心去上清，再加入1M山梨醇溶液。取0.2mL加入表达载体P18BGWPH(另外取0.2mL加入表达载体P18BGYP)，再加入40μL的PEG6000溶液(20％PEG6000，20mMCaC12，10mMTrisHCl，pH7.5)，冰浴10min后加1mL的PEG6000溶液，室温放置半小时。最后加入1mL的山梨醇溶液，涂布潮霉素PDA平板(1M山梨醇，100μg/mL潮霉素)，在27℃条件下进行培养，将培养的重组菌株转接到PDA平板，分别保存载体P18BGWPH和P18BGYP转化的菌株。
将含原始β-葡萄糖苷酶基因的重组里氏木霉菌株和将含优化β-葡萄糖苷酶基因的重组里氏木霉菌株分别划线PDA斜面试管，在温度30℃条件下培养6天。再接种到LB液体培养基中培养48h。按接种量10％转接至50mL发酵培养基(配方：每升含乳糖16g、微晶纤维素20g、酵母粉20g、(NH4)2SO44g、KH2PO45g、MgSO40.8g、CaC121.0g、FeSO40.003g、MnSO40.001g、ZnSO40.001g、CoCl20.002g)产酶，检测β-葡萄糖苷酶活力。一个酶活力单位为每小时生成1.0mg葡萄糖而所需的酶量，以U/mL表示。重组里氏木霉菌株产酶的结果(附图1和附图2)显示优化β-葡萄糖苷酶基因的酶活高于原始β-葡萄糖苷酶基因。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，有关技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型，因此所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的保护范围应由权利要求限定。
Figure BDA0002597463010000071
Figure BDA0002597463010000081
                         序列表
<110>  江西省科学院微生物研究所
<120>  密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因及其表达载体
<160>  1
<170>  SIPOSequenceListing 1.0
<210>  1
<211>  2583
<212>  DNA
<213>  人工序列(Artificial Sequence)
<400>  1
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gatctgtcca actgggacgt tgccgcccag gactgggtca tcacttctta ccccaagaag 2520
gtccatgttg gcagctcttc gcgtcagctg cccctccacg ccgctctccc gaaggtgcaa 2580
tga                                                               2583

Claims (4)

1.一种密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种重组表达载体，其特征在于：含有权利要求1所述的密码子优化的β-葡萄糖苷酶基因。
3.一种宿主细胞，其特征在于：含有权利要求2所述的重组表达载体。
4.根据权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞为里氏木霉。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101182527A (zh) * 2007-10-10 2008-05-21 邢苗 一种碱性内切葡聚糖酶基因及其重组酶和应用
CN102220369A (zh) * 2011-05-11 2011-10-19 天津大学 里氏木霉β-葡萄糖苷酶基因BGL1的重组载体、重组菌及在重组菌中的表达
KR20130068006A (ko) * 2011-12-15 2013-06-25 대한민국(농촌진흥청장) 흑염소 반추위 미생물 유래의 베타 글루코시다아제 ｃｅｌ３－ＫＧ３９ 유전자 및 이의 용도
WO2016069541A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 Danisco Us Inc Compositions and methods related to beta-glucosidase
CN105695439A (zh) * 2014-11-27 2016-06-22 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种β-葡萄糖苷酶基因的重组表达方法
CN105861470A (zh) * 2016-05-19 2016-08-17 江西省科学院微生物研究所 一种密码子优化的内切葡聚糖酶及其制备方法和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101182527A (zh) * 2007-10-10 2008-05-21 邢苗 一种碱性内切葡聚糖酶基因及其重组酶和应用
CN102220369A (zh) * 2011-05-11 2011-10-19 天津大学 里氏木霉β-葡萄糖苷酶基因BGL1的重组载体、重组菌及在重组菌中的表达
KR20130068006A (ko) * 2011-12-15 2013-06-25 대한민국(농촌진흥청장) 흑염소 반추위 미생물 유래의 베타 글루코시다아제 ｃｅｌ３－ＫＧ３９ 유전자 및 이의 용도
WO2016069541A1 (en) * 2014-10-27 2016-05-06 Danisco Us Inc Compositions and methods related to beta-glucosidase
CN105695439A (zh) * 2014-11-27 2016-06-22 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种β-葡萄糖苷酶基因的重组表达方法
CN105861470A (zh) * 2016-05-19 2016-08-17 江西省科学院微生物研究所 一种密码子优化的内切葡聚糖酶及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周进 ; 银鹏 ; .葡萄糖苷酶在毕赤酵母中的重组表达及一步纯化.过程工程学报.(第05期),981-986. *

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