CN111840639B - 胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用 - Google Patents

胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111840639B
CN111840639B CN201910331613.6A CN201910331613A CN111840639B CN 111840639 B CN111840639 B CN 111840639B CN 201910331613 A CN201910331613 A CN 201910331613A CN 111840639 B CN111840639 B CN 111840639B
Authority
CN
China
Prior art keywords
collagen
fibrin
sdf1
scaffold
paclitaxel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910331613.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111840639A (zh
Inventor
戴建武
李晓然
张海敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS
Original Assignee
Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS filed Critical Suzhou Institute of Nano Tech and Nano Bionics of CAS
Priority to CN201910331613.6A priority Critical patent/CN111840639B/zh
Publication of CN111840639A publication Critical patent/CN111840639A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111840639B publication Critical patent/CN111840639B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/416—Anti-neoplastic or anti-proliferative or anti-restenosis or anti-angiogenic agents, e.g. paclitaxel, sirolimus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/602—Type of release, e.g. controlled, sustained, slow
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/32—Materials or treatment for tissue regeneration for nerve reconstruction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用。所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇。本发明的胶原/纤维蛋白有序纤维支架制备方法简单精密度高，重复性好，药物因子结合量高，从而提高药物因子在支架上持续时间。通过SDF1α梯度快速释放、紫杉醇缓慢释放，可产生促进神经干细胞先迁移再分化生物学效应，从而为脊髓修复研究提供了更好的平台。胶原/纤维蛋白有序纤维支架作为神经干细胞迁移/分化的载体可很好地模拟体内三维空间和梯度微环境，可以同时解决神经再生过程涉及的种子干细胞、信号分子的递送及再生微环境等问题。

Description

胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用
技术领域
本发明涉及一种胶原/纤维蛋白有序纤维支架，具体涉及一种顺序释放生物活性因子的胶原/纤维蛋白有序纤维支架材料及其制备方法，以及以其作为载体用于脊髓损伤修复中的应用，属于生物医学材料技术领域。
背景技术
脊髓损伤(Spinal Cord Injury，SCI)修复是一个动态、复杂、多细胞的过程，涉及细胞外基质、细胞因子、神经干细胞等多种因素。由于SCI发生过程的病理生理复杂性，其再生难以达到理想效果。近年来，组织工程中生物活性支架、细胞及药物因子这三大要素在SCI中都发挥着重要作用。生物活性支架可以充当受损中枢神经系统断端部分之间的桥梁，在组织工程和再生医学研究领域，支架一方面自身参与到组织再生过程，另一方面为研究组织再生相关细胞或者药物因子提供一个释放载体。但是如何结合这三方面因素通过其协同作用来解决SCI修复是一个难题。目前，在SCI研究领域，已经有较多国内外课题组关注这种多因素结合方式，并且取得突破性成果。
从复杂的病理学过程看，SCI发生后，一方面，在损伤区域星形胶质细胞增生分泌SDF1α(stromal cell derived factor 1α,SDF1α)，形成梯度分布，SDF1α作为一种趋化因子，其受体CXCR4在神经干细胞(NSCs)、间充质干细胞及心脏干细胞等表面均有表达，是损伤后介导内源性NSCs归巢的主要信号分子，但由于体液冲刷原因，导致损伤区域SDF1α浓度受限，通常募集NSC数量有限；另一方面，损伤区域由于缺乏神经营养因子、产生多种神经再生抑制分子，往往抑制迁移到中心区域NSCs的向神经元方向分化，产生严重的角质瘢痕，阻碍神经信号传导。多种神经退行性疾病与微管病变有关，与微管稳定相关的药物已被证明对SCI和神经退行性疾病如阿尔茨海默病的治疗是有益的。而紫杉醇(PTX)作为一种有丝分裂抑制剂，有助于微管结构的稳定。研究证实，低浓度紫杉醇对神经轴突延伸，神经干细胞向神经元分化方向均有促进作用。
目前，开发具有促进NSCs迁移及向神经元分化的双功能支架用于脊髓损伤修复未见报道，具有较大挑战。近年来，双功能支架的实现大多依赖于支架结合两种生物活性分子，通过支架界面结构或者支架担载微球、多层微球、纳米颗粒等，控制两种生物活性分子的释放顺序，从而达到双功能效应，这种方法往往需要复杂组成的支架结构，且操作精确度难以控制。目前类似研究方式大多应用在血管、伤口敷料、骨修复方面，而在治疗脊髓损伤疾病方面未见报道。因此，在脊髓损伤修复研究中，体外构建顺序释放生物活性分子的生物支架能否解决NSCs的迁移及分化这个难题成为业界研究人员关注的重点。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种胶原/纤维蛋白有序纤维支架及其制备方法，以克服现有技术中的不足。
本发明的另一目的还在于提供所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架在脊髓损伤修复中的应用。
为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：
本发明实施例提供了一种胶原/纤维蛋白有序纤维支架在制备修复脊髓损伤的产品中的应用；
其中，所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇。
在一些实施例中，所述SDF1α和紫杉醇分别通过化学交联和物理担载的方式均匀分布于所述胶原/纤维蛋白支架材料的表面和内部。
进一步地，所述SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布。
进一步地，所述产品至少具有修复脊髓损伤的功能。
进一步地，所述产品至少具有先诱导神经干细胞长距离定向迁移至损伤区域，再促进迁移的神经干细胞向神经元分化的功能。
本发明实施例还提供了一种胶原/纤维蛋白有序纤维支架，其包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇。
本发明实施例还提供了前述胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备方法，其包括：
采用静电纺丝技术制备担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料；
采用静电喷雾技术，通过交联剂把SDF1α化学交联到担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料上，并使SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布，获得所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架。
本发明实施例还提供了一种修复脊髓损伤的功能产品，其包含前述的胶原/纤维蛋白有序纤维支架。
与现有技术相比，本发明的优点包括：
本发明提供的顺序释放生物活性分子SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架制备方法简单精密度高，重复性好，药物因子结合量高，从而提高药物因子在支架上持续时间。本发明以有序结构支架作为载体，一方面经4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯磺化衍生物活化SDF1α可以与引入巯基有序支架特异性结合，可以避免有机试剂引入影响SDF1α活性，另一方面物理担载具有分化作用的紫杉醇药物可以实现缓慢长期释放，最终实现SDF1α和紫杉醇顺序释放。通过SDF1α梯度快速释放、紫杉醇缓慢释放，可产生促进神经干细胞先迁移再分化生物学效应，从而为脊髓修复研究提供了更好的平台。另外，此顺序释放生物活性分子胶原/纤维蛋白有序纤维支架作为神经干细胞迁移/分化的载体可很好地模拟体内三维空间和梯度微环境，可以同时解决神经再生过程所涉及的种子干细胞、信号分子的递送及再生微环境三个方面的问题。
附图说明
图1A为本发明一典型实施例中SDF1α梯度担载紫杉醇胶原/纤维蛋白有序纤维支架制备时采用的静电纺丝装置原理示意图。
图1B为本发明一典型实施例中SDF1α梯度担载紫杉醇胶原/纤维蛋白有序纤维支架制备时采用的静电喷雾装置原理示意图。
图1C为本发明一典型实施例中胶原/纤维蛋白支架材料的SEM照片。
图1D为本发明一典型实施例中担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料的SEM照片。
图2A和图2B为本发明一典型实施例中SDF1α与胶原/纤维蛋白支架材料化学反应原理图。
图3A和图3B为本发明一典型实施例中阶跃式连续梯度SDF1α梯度载药胶原/纤维蛋白支架材料的荧光照片及荧光强度示意图。
图3C和图3D为本发明一典型实施例中不连续梯度SDF1α梯度载药胶原/纤维蛋白支架材料的荧光照片及荧光强度示意图。
图3E和图3F为本发明一典型实施例中连续梯度SDF1α梯度载药胶原/纤维蛋白支架材料的荧光照片及荧光强度示意图。
图4A为本发明一典型实施例中SDF1α梯度担载胶原/纤维蛋白支架材料的区域划分示意图。
图4B为本发明一典型实施例中SDF1α梯度担载胶原/纤维蛋白支架材料不同区域SDF1α的释放曲线图。
图4C为本发明一典型实施例中SDF1α梯度担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架上SDF1α和PTX的释放曲线图。
图5A-图5D为本发明一典型实施例中GFP-NSCs在不同浓度SDF1α梯度担载胶原/纤维蛋白有序纤维支架上培养3天后的迁移分布图。
图5E为本发明一典型实施例中GFP-NSCs在不同支架上每个区域的迁移数量统计图。
图6A为本发明一典型实施例中担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架促进神经干细胞向神经元分化时，培养7d后Tuj-1+和GFAP+免疫染色的代表性图像。
图6B和图6C为本发明一典型实施例中担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架促进神经干细胞向神经元分化时，NSCs分化率统计图。
图7为本发明一典型实施例中NSCs在顺序释放生物活性分子胶原/纤维蛋白有序纤维支架上迁移及向神经元分化行为结果示意图。
具体实施方式
鉴于现有技术中的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案，提供了一种顺序释放生物活性分子的胶原/纤维蛋白有序纤维支架用于调控神经干细胞NSCs行为。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。
本发明以诱导NSCs“先迁移再分化”这个新颖的角度出发，首次将SDF1α和紫杉醇(下文可简称为PTX)结合，选用胶原/纤维蛋白支架材料这种具有良好生物相容性和可降解的物质，作为支架组成成分，制备SDF1α梯度担载PTX的胶原/纤维蛋白有序纤维支架，利用胶原/纤维蛋白有序纤维支架作为载体，实现SDF1α梯度和紫杉醇顺序释放。
本发明实施例的一个方面提供的胶原/纤维蛋白有序纤维支架在制备修复脊髓损伤的产品中的应用；
其中，所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇。
在一些实施例中，所述SDF1α和紫杉醇分别通过化学交联和物理担载的方式均匀分布于所述胶原/纤维蛋白支架材料的表面和内部。
进一步地，所述SDF1α与紫杉醇的质量比为1：14～1：34。
进一步地，所述胶原/纤维蛋白支架材料为巯基化胶原/纤维蛋白支架材料。
进一步具体的，所述胶原/纤维蛋白支架材料与SDF1α的结合就是通过化学修饰实现的：胶原/纤维蛋白支架材料修饰上巯基，SDF1α引入马来酰亚胺官能团，巯基与马来酰亚胺官能团发生反应实现所述胶原/纤维蛋白支架材料与SDF1α的结合。
更进一步地，所述胶原/纤维蛋白支架材料的长度不超过2cm，直径可控，单根直径为580～620nm。
在一些实施例中，所述SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布。
进一步地，所述梯度分布可以根据调节载物台实现不同种梯度分布形式：比如连续梯度分布和阶跃式梯度分布，又比如线性梯度分布或非线性梯度分布等。
进一步地，在所述胶原/纤维蛋白支架材料上，所述SDF1α能够呈现梯度快速释放，并诱导神经干细胞(下文可简称为NSCs)长距离定向迁移至损伤区域，所述紫杉醇能够呈现缓慢长期释放，并促进迁移的神经干细胞向神经元分化。
进一步地，所述产品至少具有修复脊髓损伤的功能。
进一步地，所述产品至少具有先诱导神经干细胞长距离定向迁移至损伤区域，再促进迁移的神经干细胞向神经元分化的功能。
本发明实施例的另一个方面提供了一种胶原/纤维蛋白有序纤维支架，其包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇。
在一些实施例中，所述SDF1α和紫杉醇分别通过化学交联和物理担载的方式均匀分布于所述胶原/纤维蛋白支架材料的表面和内部。
进一步地，所述SDF1α与紫杉醇的质量比为1：14～1：34。
进一步地，所述胶原/纤维蛋白支架材料为巯基化胶原/纤维蛋白支架材料。
进一步具体的，所述胶原/纤维蛋白支架材料与SDF1α的结合就是通过化学修饰实现的：胶原/纤维蛋白支架材料修饰上巯基，SDF1α引入马来酰亚胺官能团，巯基与马来酰亚胺官能团发生反应实现所述胶原/纤维蛋白支架材料与SDF1α的结合。
更进一步地，所述胶原/纤维蛋白支架材料的长度不超过2cm，直径可控，单根直径为580～620nm。
在一些实施例中，所述SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布。
进一步地，所述梯度分布可以根据调节载物台实现不同种梯度分布形式：比如连续梯度分布和阶跃式梯度分布，又比如线性梯度分布或非线性梯度分布等。
进一步地，在所述胶原/纤维蛋白支架材料上，所述SDF1α能够呈现梯度快速释放，并诱导神经干细胞长距离定向迁移至损伤区域，所述紫杉醇能够呈现缓慢长期释放，并促进迁移的神经干细胞向神经元分化。
本发明实施例的另一个方面还提供了前述胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备方法，其包括：
采用静电纺丝技术制备担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料；
采用静电喷雾技术，通过交联剂把SDF1α化学交联到担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料上，并使SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布，获得所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架。
进一步地，所述交联剂包括2-亚氨基硫烷盐酸盐(Traut’s)和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯磺化衍生物(Sulfo-SMCC)。
静电纺丝技术是一种制备有序纳米纤维的简单、便捷的方法。而有序纳米纤维支架同时是良好的药物释放载体。因此，首先采用静电纺丝技术制备担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架，解决疏水性PTX药物溶解度问题，实现长时间缓慢释放为长期脊髓组织修复提供依据；然后通过2-亚氨基硫烷盐酸盐(Traut’s)和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯磺化衍生物(Sulfo-SMCC)交联剂，把SDF1α直接化学交联到担载PTX的胶原/纤维蛋白有序纤维支架上，这种方法一方面提高SDF1α与支架的结合能力，可以提供足够SDF1α释放量募集内源性干细胞，另一方面可以减慢有序支架的降解速度，为脊髓组织修复提供长期桥接；最终结合静电喷雾技术成功制备SDF1α梯度担载PTX的胶原/纤维蛋白有序纤维支架，SDF1α呈现梯度快速释放，可以诱导更多内源性NSCs长距离定向迁移至损伤区域，与此，同时缓慢释放的PTX，可以促进迁移的NSCs向神经元分化。
本发明还将顺序释放生物活性分子的胶原/纤维蛋白有序纤维支架固定在载玻片上，并在支架周围固定液池壁，形成培养池，采用改良的种细胞方式，将NSCs种植在支架两端，研究其迁移及分化行为。
本发明实施例还提供了一种修复脊髓损伤的功能产品，其包含前述的胶原/纤维蛋白有序纤维支架。
综上所述，本发明的顺序释放生物活性分子SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架制备方法简单精密度高，重复性好，药物因子结合量高，从而提高药物因子在支架上持续时间。本发明以有序结构支架作为载体，一方面经4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯磺化衍生物活化SDF1α可以与引入巯基有序支架特异性结合，可以避免有机试剂引入影响SDF1α活性，另一方面物理担载具有分化作用的紫杉醇药物可以实现缓慢长期释放，最终实现SDF1α和紫杉醇顺序释放。通过SDF1α梯度快速释放、紫杉醇缓慢释放，可产生促进神经干细胞先迁移再分化生物学效应，从而为脊髓修复研究提供了更好的平台。另外，此顺序释放生物活性分子胶原/纤维蛋白有序纤维支架作为神经干细胞迁移/分化的载体可很好地模拟体内三维空间和梯度微环境，可以同时解决神经再生过程所涉及的种子干细胞、信号分子的递送及再生微环境三个方面的问题。
以下通过若干实施例并结合附图进一步详细说明本发明的技术方案。然而，所选的实施例仅用于说明本发明，而不限制本发明的范围。
实施例1
顺序释放SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备
1.梯度SDF1α担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备
首先制备胶原/纤维蛋白的纺丝液(浓度为0.12g/mL，质量比5.8：6.7，溶剂为六氟异丙醇：DMEM＝9：1)。通过静电纺丝技术，如图1A所示，采用自制两极平行接收装置，制备胶原/纤维蛋白电纺纤维，图1C为制备胶原/纤维蛋白电纺纤维的SEM照片，显示其有序性、均一性较好。然后将紫杉醇溶解在DMSO中，制备紫杉醇胶原/纤维蛋白纺丝液，获得担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序电纺纤维支架，其SEM照片如图1D所示，显示担载紫杉醇胶原/纤维蛋白电纺纤维支架有序性、均一性较好，表明紫杉醇的加入不会影响有序电纺纤维形貌。同时采用静电喷雾技术如图1B所示，利用蛋白质生物交联剂Traut’s和Sulfo-SMCC试剂，把SDF1α直接交联到胶原/纤维蛋白有序纤维支架上，并使SDF1α在支架上呈现梯度分布。反应原理如图2A和图2B所示，具体过程如下：(1)将胶原/纤维蛋白有序纤维支架浸入Traut’s(2.5mg/mL pH＝8.0，4mm EDTA PBS溶液)试剂中，静置4℃过夜，采用PBS溶液洗去未反应Traut’s试剂，得到巯基化胶原/纤维蛋白有序纤维支架；(2)配置Sulfo-SMCC溶液(0.625mg/mL pH＝7.2，4mm EDTA PBS溶液)，然后按照SDF1α：Sulfo-SMCC＝8:3.7(μg/μL)比例室温反应1h制备SDF1α-Mal；(3)利用静电喷雾技术进行SDF1α-Mal溶液电喷，将巯基化胶原/纤维蛋白有序支架固定在可移动的载物台上，用灭菌滤纸擦干纤维支架，注射泵推动速度0.1mL h-1，电压3.8-4.2kV，接收距离约为1.0cm。以有序纤维支架水平方向为X方向，垂直方向为Y方向，通过改变可移动载物台X、Y方向成功地制备了SDF1α梯度担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架；(4)电喷液滴与支架结合需要室温反应1h，采用PBS溶液洗去未反应的SDF1α-Mal，最后将未电喷区域通过上述Sulfo-SMCC溶液室温孵育1h进行交联。为了直观呈现SDF1α在载药有序纤维上梯度分布，低浓度的罗丹明(0.1mg/mL)被加到SDF1α-Mal溶液制备SDF1α梯度载药有序纤维支架。本案发明人通过调节载物台X、Y方向和控制电喷时间，得到3种形式的SDF1α-Mal梯度分布，通过共聚焦观察，将得到的的荧光照片分为8等份，用image J计算各部分荧光强度,结果如图3A-图3F所示，其中图3A和图3B代表阶跃式连续梯度，图3C和图3D代表不连续梯度，图3E和图3F代表连续梯度。图3A和图3B、图3C和图3D、图3E和图3F分别呈现出3组不同梯度形式的SDF1α梯度载药有序纤维沿着X方向，液滴大小约为500μm，大小均匀，均呈现中间荧光强度高，两端强度低，从图3A和图3B、图3C和图3D可以看出，液滴之间不存在明显的线性梯度，而图3E和图3F显示了连续的线性梯度。本发明想要的是稳定的线性梯度信号，它可以逐渐诱导更多的NSCs沿趋化因子浓度梯度方向长距离迁移。
2.顺序释放SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架的表征
选用500nmol SDF1α-Mal作为电喷溶液，制备SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维。将有序纤维支架材料从左至右分为均等的三个区域(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，如图4A所示。每个区域加入270μL PBS，置于37℃培养箱，每24h收取每部分溶液，再重新加入270μL新鲜的PBS，连续收取7天，-80℃冻存。采用人的SDF1α的ELISA试剂盒检测样品，结果如图4B所示，图4B为SDF1α有序纤维支架不同区域SDF1α的释放曲线图。可以清楚看到Ⅱ区域释放量明显高于Ⅰ和Ⅲ区，表明SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上可以达到梯度释放，为实现更多的NSCs沿着SDF1α梯度浓度沿中间区域迁移提供依据。在PTX的释放实验中，将担载0.025％PTX的胶原/纤维蛋白有序纤维(12±1mg)固定在细胞培养皿中，选用350μL PBS/0.1M水杨酸钠作为释放介质，放置在37℃培养箱，每24h收取溶液，再重新加入350μL新鲜的PBS，连续收取7天，-80℃冻存。通过高效液相方法，以乙腈和水(85:15，v/v)为流动相，C-18为固定相，流速0.2mL/min，进样量20μL，采用紫外检测器在227nm处检测样品。SDF1α和PTX的释放速率如图4C所示，图4C为SDF1α梯度担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架上SDF1α和PTX的释放曲线图。可以明显看到，在连续7天释放过程中，与PTX释放速率相比较，SDF1α释放速率较快，通过SDF1α优先地释放，有望实现更多的的NSCs优先长距离迁移至损伤区域，在此过程，PTX缓慢长时间释放，为迁移的NSCs向神经元方向分化提供依据。
实施例2
以顺序释放SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架作为载体进行神经干细胞培养
1.顺序释放SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备
SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备：将胶原/纤维蛋白有序电纺纤维固定在玻璃片上，采用道康宁3140硅酮粘合剂固定，室温条件下固化24h，形成具有5mm壁高的细胞培养池，75％乙醇灭菌4h，然后使用大量的PBS浸泡，清洗，然后晾干；按照实施例1中的方法制备SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维支架，备用。
担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备：将制备的担载不同浓度紫杉醇胶原/纤维蛋白有序纤维支架固定在细胞培养皿，选用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、Ca2+/凝血酶，作为交联剂，37℃交联3h，75％乙醇灭菌4h，然后使用大量的PBS浸泡，清洗，然后晾干，备用。
SDF1α梯度担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备：将担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序电纺纤维固定在玻璃片上，按照SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备方法，制备SDF1α梯度担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架。
2.顺序释放SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架进行神经干细胞的培养
出生24h的ICR乳鼠(表达绿色荧光蛋白)分离出海马区，剪碎，加干细胞培养液用钝头粗口滴管轻轻吹打直到组织团块消失，400目尼龙膜过滤，转移到培养瓶中成球培养。传代3次后将神经球消化成单细胞，接种于顺序释放SDF1α和紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架上，接种密度为2×105-3×105。
3.SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维支架促进神经干细胞的迁移
按照上述方法分别制备0、100nM、500nM和2500nM SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维支架，两个自制的圆形圈(已灭菌，直径5mm，高度5mm)被放置在每个SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维支架两端(间距4mm)，将消化好的第三代GFP-NSCs，接种在两个圆形圈内，贴壁培养4-6h后，轻轻去掉两个圆形圈，采用PBS轻轻洗去未贴壁的神经干细胞，加入500μL的分化培养基，培养3天后，用4％多聚甲醛室温固定30min，PBS浸洗3遍，通过激光共聚焦显微镜在同一曝光强度下拍摄拼接得到细胞的整体形貌。将得到的荧光照片中间迁移区域分成五个区域(1、2、3、4、5)进行每部分细胞个数统计，如图5E所示，为GFP-NSCs在不同支架上每个区域的迁移数量统计图。从图5A(对照组(仅胶原/纤维蛋白有序纤维))、图5B(100nM)、图5C(500nM)和图5D(2500nM)，可以看出每个支架材料上，神经干细胞都有不同程度从两端的圆形圈内向中间迁移。与图5A对照组相比(16.5±1.8)，500nM组的5个区域迁移细胞个数相对较多(53.5±2.5)，且具有统计学差异。因此，本实施例选用500nM SDF1α电喷浓度作为最佳促进神经干细胞迁移浓度。
4.担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架促进神经干细胞向神经元方向分化
将神经干细胞分别接种在不同浓度的担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架上，贴壁4-6后，采用PBS轻轻洗去未贴壁的神经干细胞，加入500μL的分化培养基，每2天更换新的分化培养基，培养7天后。4％多聚甲醛室温固定30min，PBS浸洗3遍；0.08％TritonX-100孵育15min,PBS浸洗3遍；5％BSA室温封闭30min，PBS洗3次；孵育TUj-1,GFAP一抗，4℃，过夜，PBS洗3次；二抗孵育37℃，40min，PBS洗3次；DAPI染核20min,PBS洗3次，通过激光共聚焦在同一曝光强度下连续拍摄。在正常培养环境下，NSCs培养在对照组(只有胶原/纤维蛋白有序纤维)，0.125％，0.025％和0.1％担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维，结果如图6A-图6C所示，图6A为培养7天后Tuj-1+和GFAP+免疫染色的代表性图像，图6B和图6C为NSCs分化率统计图。可以明显得到，NSCS在担载紫杉醇浓度0.025％有序纤维支架上，促进神经干细胞向神经元分化效果最好。
5.SDF1α梯度担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架促进神经干细胞迁移及分化
将上述获得最佳担载紫杉醇浓度与最佳SDF1α浓度梯度结合起来，进行对NSCs的迁移/分化协同研究。种细胞方式：将消化的NSCs单细胞种植到有序纤维两端。NSCs在顺序释放生物活性分子胶原/纤维蛋白有序纤维支架上迁移及向神经元分化行为的结果示意图请参阅图7，右边图像显示了中间迁移区域的放大倍数。NSCs分别培养在对照组(只有胶原/纤维蛋白有序纤维)，SDF1α梯度胶原/纤维蛋白有序纤维，担载紫杉醇胶原/纤维蛋白有序纤维和SDF1α梯度担载紫杉醇胶原/纤维蛋白有序纤维上。如图7所示：与单独胶原/纤维蛋白有序纤维相比，在其上电喷SDF1α可以促使更多的NSCs从两端迁移至中心位置；与担载相同含量紫杉醇的胶原/纤维蛋白有序纤维支架相比，电喷SDF1α可以促使更多的神经干细胞从两端迁移至中心位置分化成神经元。
综合分析以上结果，本案发明人采用静电纺丝和静电喷雾技术，通过化学交联方法和物理担载方式，成功制备了顺序释放生物活性因子的胶原/纤维蛋白有序纤维支架，该方法操作简单，稳定性好。以上实施例结果显示：SDF1α优先释放，达到诱导神经干细胞向SDF1α高浓度方向迁移，且紫杉醇缓慢长时间释放，促进迁移过来的神经干细胞向神经元方向分化。通过这种技术，可以提高损伤区域神经元数量，有助于重新建立神经信号传导，从而为脊髓损伤修复带来新的治疗希望。
应当理解，以上所述的仅是本发明的一些实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的创造构思的前提下，还可以做出其它变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.胶原/纤维蛋白有序纤维支架在制备修复脊髓损伤的产品中的应用；
所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇，所述胶原/纤维蛋白支架材料为巯基化胶原/纤维蛋白支架材料，所述SDF1α和紫杉醇分别通过化学交联和物理担载的方式均匀分布于所述胶原/纤维蛋白支架材料的表面和内部，所述SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布，所述SDF1α与紫杉醇的质量比为1：14~1：34；在所述胶原/纤维蛋白支架材料上，所述SDF1α能够呈现梯度快速释放，并诱导神经干细胞长距离定向迁移至损伤区域，所述紫杉醇能够呈现缓慢长期释放，并促进迁移的神经干细胞向神经元分化。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述梯度分布选自连续梯度分布或阶跃式梯度分布。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述梯度分布选自线性梯度分布或非线性梯度分布。
4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述胶原/纤维蛋白支架材料的长度不超过2 cm，单根直径为580~620 nm。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于：所述产品具有修复脊髓损伤的功能。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于：所述产品具有先诱导神经干细胞长距离定向迁移至损伤区域，再促进迁移的神经干细胞向神经元分化的功能。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架的制备方法包括：
采用静电纺丝技术制备担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料；
采用静电喷雾技术，通过交联剂把SDF1α化学交联到担载紫杉醇的胶原/纤维蛋白支架材料上，并使SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布，获得所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述交联剂为2-亚氨基硫烷盐酸盐和4-（N-马来酰亚胺基甲基）环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯磺化衍生物。
9.一种修复脊髓损伤的功能产品，其特征在于包含胶原/纤维蛋白有序纤维支架，所述胶原/纤维蛋白有序纤维支架包括胶原/纤维蛋白支架材料，以及结合在所述胶原/纤维蛋白支架材料上的SDF1α和紫杉醇，所述胶原/纤维蛋白支架材料为巯基化胶原/纤维蛋白支架材料，所述SDF1α和紫杉醇分别通过化学交联和物理担载的方式均匀分布于所述胶原/纤维蛋白支架材料的表面和内部，所述SDF1α在胶原/纤维蛋白支架材料上呈现梯度分布，所述SDF1α与紫杉醇的质量比为1：14~1：34；在所述胶原/纤维蛋白支架材料上，所述SDF1α能够呈现梯度快速释放，并诱导神经干细胞长距离定向迁移至损伤区域，所述紫杉醇能够呈现缓慢长期释放，并促进迁移的神经干细胞向神经元分化。
CN201910331613.6A 2019-04-24 2019-04-24 胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用 Active CN111840639B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910331613.6A CN111840639B (zh) 2019-04-24 2019-04-24 胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910331613.6A CN111840639B (zh) 2019-04-24 2019-04-24 胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111840639A CN111840639A (zh) 2020-10-30
CN111840639B true CN111840639B (zh) 2022-04-19

Family

ID=72952057

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910331613.6A Active CN111840639B (zh) 2019-04-24 2019-04-24 胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111840639B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114533966A (zh) * 2020-11-26 2022-05-27 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 一种功能化水凝胶支架及其制备方法和应用
CN113577108B (zh) * 2021-08-31 2023-07-07 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 一种多功能胶原支架、其制备方法与应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104383596A (zh) * 2014-10-24 2015-03-04 东华大学 一种tpgs载药脂质体-天然材料复合纳米纤维支架的制备方法
CN106237384A (zh) * 2015-06-09 2016-12-21 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 复合梯度浓度生物活性因子组织支架、其制备方法及应用
CN106730031A (zh) * 2016-12-30 2017-05-31 清华大学 一种用于脊髓损伤修复的仿生纤维蛋白水凝胶束及其制备方法
CN107510862A (zh) * 2016-06-15 2017-12-26 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 担载梯度浓度生物活性分子的有序纤维支架、制法及应用
CN109010915A (zh) * 2017-06-09 2018-12-18 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 有序胶原支架及其在制备修复脊髓损伤的产品中的应用
CN109106981A (zh) * 2017-06-26 2019-01-01 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 双重修饰的胶原支架及在修复脊髓损伤的产品中的应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006138718A2 (en) * 2005-06-17 2006-12-28 Drexel University Three-dimensional scaffolds for tissue engineering made by processing complex extracts of natural extracellular matrices
FR2917293B1 (fr) * 2007-06-13 2010-11-26 Olivier Paul Christian Schussler Support collagenique modifie par greffage covalent de molecules d'adhesion : procedes et applications pour l'ingenierie de tissu contractile, la therapie cellulaire en thoracique et cardiovasculaire

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104383596A (zh) * 2014-10-24 2015-03-04 东华大学 一种tpgs载药脂质体-天然材料复合纳米纤维支架的制备方法
CN106237384A (zh) * 2015-06-09 2016-12-21 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 复合梯度浓度生物活性因子组织支架、其制备方法及应用
CN107510862A (zh) * 2016-06-15 2017-12-26 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 担载梯度浓度生物活性分子的有序纤维支架、制法及应用
CN106730031A (zh) * 2016-12-30 2017-05-31 清华大学 一种用于脊髓损伤修复的仿生纤维蛋白水凝胶束及其制备方法
CN109010915A (zh) * 2017-06-09 2018-12-18 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 有序胶原支架及其在制备修复脊髓损伤的产品中的应用
CN109106981A (zh) * 2017-06-26 2019-01-01 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 双重修饰的胶原支架及在修复脊髓损伤的产品中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A collagen microchannel scaffold carrying paclitaxel-liposomes induces neuronal differentiation of neural stem cells through Wnt/β-catenin signaling for spinal cord injury repair;Xiaoran Li et al;《Biomaterials》;20180822;第183卷;第114–127页 *
完全性脊髓损伤再生机制的探讨;李佳音 等;《中国修复重建外科杂志》;20180630;第32卷(第6期);第641-649页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111840639A (zh) 2020-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wu et al. In vitro and in vivo biocompatibility evaluation of a 3D bioprinted gelatin-sodium alginate/rat Schwann-cell scaffold
Zhu et al. Modulation of macrophages by bioactive glass/sodium alginate hydrogel is crucial in skin regeneration enhancement
Mastrullo et al. Angiogenesis in tissue engineering: as nature intended?
Lev et al. Hydrogel biomaterials and their therapeutic potential for muscle injuries and muscular dystrophies
Del Gaudio et al. Induction of angiogenesis using VEGF releasing genipin-crosslinked electrospun gelatin mats
Guo et al. Creating 3D angiogenic growth factor gradients in fibrous constructs to guide fast angiogenesis
Dinis et al. Complementary effects of two growth factors in multifunctionalized silk nanofibers for nerve reconstruction
Wang et al. Evaluation of the potential of rhTGF-β3 encapsulated P (LLA-CL)/collagen nanofibers for tracheal cartilage regeneration using mesenchymal stems cells derived from Wharton's jelly of human umbilical cord
JP7219428B2 (ja) 多成分系電界紡糸繊維スキャフォールド
Patel et al. Suspension matrices for improved Schwann-cell survival after implantation into the injured rat spinal cord
Wang et al. The effect of thick fibers and large pores of electrospun poly (ε-caprolactone) vascular grafts on macrophage polarization and arterial regeneration
Jin et al. Controlled release of multiple epidermal induction factors through core–shell nanofibers for skin regeneration
Oh et al. Effect of surface pore structure of nerve guide conduit on peripheral nerve regeneration
Li et al. Construction of dual-biofunctionalized chitosan/collagen scaffolds for simultaneous neovascularization and nerve regeneration
Wang et al. Effect of electrospun silk fibroin–silk sericin films on macrophage polarization and vascularization
US20230158208A1 (en) Scaffolds fabricated from electrospun decellularized extracellular matrix
Wang et al. Enhanced vascularization in hybrid PCL/gelatin fibrous scaffolds with sustained release of VEGF
US20160325013A1 (en) Biomimetic scaffolds
Nseir et al. Biodegradable scaffold fabricated of electrospun albumin fibers: mechanical and biological characterization
Joo et al. Effects of phosphate glass fiber–collagen scaffolds on functional recovery of completely transected rat spinal cords
Shafiq et al. In situ vascular regeneration using substance P-immobilised poly (L-lactide-co-ε-caprolactone) scaffolds: stem cell recruitment, angiogenesis, and tissue regeneration
Zigdon‐Giladi et al. VEGF release from a polymeric nanofiber scaffold for improved angiogenesis
Zhou et al. Nanofibrous nerve conduits with nerve growth factors and bone marrow stromal cells pre-cultured in bioreactors for peripheral nerve regeneration
Zhang et al. Repairing sciatic nerve injury with an EPO-loaded nerve conduit and sandwiched-in strategy of transplanting mesenchymal stem cells
CN111840639B (zh) 胶原/纤维蛋白有序纤维支架及在脊髓损伤修复中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant