CN111826426A - 一种基于kasp技术检测分子标记的方法 - Google Patents
一种基于kasp技术检测分子标记的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111826426A CN111826426A CN202010762318.9A CN202010762318A CN111826426A CN 111826426 A CN111826426 A CN 111826426A CN 202010762318 A CN202010762318 A CN 202010762318A CN 111826426 A CN111826426 A CN 111826426A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- kasp
- primer
- sequence
- snp
- target dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
Abstract
本发明属于生物技术领域，具体为分子标记检测方法，尤其涉及一种基于KASP技术检测分子标记的方法。所述的分子标记为非SNP和InDels；所述的步骤为：在标记扩增目标DNA序列内部设计KASP引物；对于共显性标记，有两条目标DNA序列，需要设计3条引物，包括2条位点特异引物和1条共用引物；对于显性标记，仅有一条目标DNA序列，需要设计2条引物，包括1条位点特异引物和1条共用引物；所述的位点特异引物的3’端为SNP位点，引物Tm值比KASP接头序列Tm值高1度以上，扩增片段大小为170±130bp。本发明所述的方法拓宽了KASP技术的检测范围；实现对STS或SCAR的快速检测。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体为分子标记检测方法，尤其涉及一种基于KASP技术检测分子标记的方法。
背景技术
KASP(Kompetitive Allele-Specific PCR，竞争性等位基因特异性PCR)是基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP(single nucleotide polymorphism，单核苷酸多态性)分型以及检测InDels(Insertions and Deletions，插入和缺失)。该项技术可以对广泛存在于基因组DNA中的SNPs或InDels进行精准的判断，是一种高通量、低成本、低失误率的SNP分型技术。而且KASP标记可避免实验室凝胶电泳，实现自动化、平台化操作，具有高通量、低成本、遗传稳定性好等特点。鉴于此特点，KASP标记目前已经在小麦基因定位、图位克隆及分子标记辅助选择育种中发挥了重要作用。得益于近年来小麦近缘种属植物基因测序信息的不断完善，小麦背景下追踪外缘物质也不断有成功的报道。
目前用于已知基因辅助选择的分子标记类型主要包括SNP、STS、SCAR等，其中SNP(包括Indel)可以用KASP技术进行检测(Semagn K, Babu R, Hearne S, et al. Singlenucleotide polymorphism genotyping using Kompetitive Allele Specific PCR(KASP): overview of the technology and its application in crop improvement[J]. Mol Breed, 2014, 33: 1-14.)，而STS、SCAR和其他分子标记的检测仍采用琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳。凝胶电泳检测一般需要经过凝胶制备、点样、电泳、染色和照相等多个步骤，过程复杂且容易出错，花费时间也较长。
发明内容
为了简化分子标记的检测，实现自动化检测，本专利发明了一种基于KASP技术检测分子标记的方法；分子标记为非SNP和InDels。通过本发明的方法可以扩宽KASP技术的检测范围。且提高非SNP和InDels的分子标记的检测工艺，实现了批量化和自动化检测。
为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种基于KASP技术检测分子标记的方法，所述的分子标记为非SNP和InDels；
包括以下步骤：在标记扩增目标DNA序列内部设计KASP引物；对于共显性标记，有两条目标DNA序列，需要设计3条引物，包括2条位点特异引物和1条共用引物；对于显性标记，仅有一条目标DNA序列，需要设计2条引物，包括1条位点特异引物和1条共用引物；
所述的位点特异引物的3’端为SNP位点，引物Tm值比KASP接头序列Tm值高1度以上，扩增片段大小为170±130bp。
优选地，所述的分子标记为STS或SCAR。
上述的方法，具体包括以下步骤：
（1）寻找相似序列：将标记扩增目标DNA序列与参考基因组进行BLAST比对，找到基因组中与目标DNA相似度>85%的序列并下载；
（2）重新引物设计：将目标DNA序列和步骤（1）下载的序列进行多序列比对，寻找目标DNA独有的SNP或Indel位点用于设计引物，以SNP或Indel位点为3’端，截取KASP位点特异引物，然后在SNP或Indel位点两端寻找第二个SNP位点用于设计共用引物，将第二个SNP用于共用引物设计可以增加扩增的特异性；如果找不到第二个SNP共用引物，将共用引物设计在无SNP区域；使扩增片段大小在170±130bp，共用引物Tm值与位点特异引物相差小于2度；
（3） KASP检测：采用KASP技术进行PCR反应和荧光检测。
所述步骤（1）中目标DNA序列为野生型或突变体。
优选地，所述野生型位点特异引物加上FAM接头，在KASP检测结果中为蓝色；所述突变体位点特异引物加上Hex接头，在KASP检测结果中为红色。
所述的FAM接头和Hex接头的碱基序列为：
FAM接头碱基序列如SEQ No.1所示；具体序列为：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；
Hex接头碱基序列如SEQ No.2所示；具体序列为：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。
所述步骤（3）中KASP检测中位点特异引物和共用引物按2：2：5共显性标记或2：5显性标记的比例混合。
本发明的有益效果
1、拓宽了KASP技术的检测范围
本发明利用KASP技术体系，可实现分子标记中STS或SCAR等非SNP和InDels的荧光检测。KASP技术是基于SNP创立的技术创立，应用到STS或SCAR中需重新设计引物，并按照相应的比例混合，才能实现STS或SCAR的检测；与凝胶电泳检测相比，普通PCR的反应体系一般大于10μL，而KASP检测的反应体系最低为1μL，可以有效节约试剂，降低成本；
2、时间短且可批量检测
KASP检测具有低成本、简便省时、高精度、高通量的特点，KASP检测效率是基于普通PCR和凝胶电泳检测的45倍。KASP检测荧光检测384样品仅需42s，而同样的样品数采用凝胶电泳时凝胶制备、点样和电泳过程约需要1小时；采用EB染色的凝胶电泳检测精度约为10ng，而KASP采用荧光染料检测精度更高；KASP检测所采用的PHERAstar荧光检测仪可以实现一次放入40块1536孔板进行自动检测功能，实现了批量化和自动化检测。
附图说明
图1为实施例1的KASP反应和检测结果图；
图2为实施例2的KASP反应和检测结果图。
具体实施方式
为便于更好的理解本发明，通过以下实施例加以说明，这些实施例属于本发明的保护范围，但不限制本发明的保护范围。
实施例1
已报道小麦糯性基因Wx-A1位于7A染色体，其分子标记MAG264为共显性STS标记，在野生型264A1a的扩增片段如SEQ No.3所示；具体序列为：CGGCGGTGCCTCTCCATGGTGGTGCGCGCCACGGGCAGCGGCGGCATGAACCTCGTGTTCGTCGGCGCCGAGATGGCGCCCTGGAGCAAGACTGGCGGCCTCGGCGACGTCCTCGGGGGCCTCCCCGCCGCCATGGCCGTAAGCTTGCGCCACTGCCTTCTTATAAATGTTTCTTCCTGCAGCCATGCCTGCCGTTACAACGGGTGCCGTGTCCGTGCAGGCCAACGGTCACCGGGTCATGGTCATCTCCCCGCGCTACGACCAGTACAAGGACGCCTGGGACA
在突变体264A1b的扩增片段如SEQ No.4所示；具体序列为：CGGCGGTGCCTCTCCATGGTGGTGCGCGCCACGGGCAGCGGCGGCATGAACCTCGTGTTCGTCGGCGCCGAGATGGCGCCCTGGAGCAAGACTGGCGGCCTCGGCGACGTCCTCGGGGGCCTCCCCGCCGCGGACGCCTTCTTATAAATGTTTCTTCCTGCAGCCATGCCTGCCGTTACAACGGGTGCCGTGTCCGTGCAGGCCAACGGTCACCGGGTCATGGTCATCTCCCCGCGCTACGACCAGTACAAGGACGCCTGGGACA
用264A1a序列在URGI网站对小麦参考基因组进行blast比对，在7D和4A处找到高度相似序列。
将相似序列下载后利用DNAMAN软件进行多序列比对，确定野生型Wx-A1a的特异SNP为G，突变体Wx-A1b的特异Indel为GGAC。左侧存在高GC含量区域不适合设计引物，向右侧截取序列设计2条位点特异引物，用在线PCR退火温度计算器(http://www.ab126.com/Chemistry/3160.html) 计算截取序列的Tm值（KASP接头Tm值为54度，不同计算方法略有差异），保证特异SNP或Indel为引物3’端不变，通过在5’端增加或删除碱基使KASP位点特异引物WxA-F和WxA-H的Tm值均为55度。在距离位点特异引物约100bp位置设计共用引物WxA-C，Tm值也为55度。扩增片段长度分别为133bp和115bp。
FAM接头碱基序列如SEQ No.1所示；具体序列为：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；
Hex接头碱基序列如SEQ No.2所示；具体序列为：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。
分别在两个位点特异引物5’端加上上述KASP接头，和共用引物一起送公司合成。
所述的接上FAM接头的WxA-F的序列如SEQ No.5所示；所述的接上Hex接头的WxA-H的序列如SEQ No.6所示；所述的WxA-C的序列如SEQ No.7所示；
| WxA-F | GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAAGAAACATTTATAAGAAGGCAGTGGC |
| WxA-H | GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAAGAAACATTTATAAGAAGGCGTCC |
| WxA-C | GGCATGAACCTCGTGTTCGTC |
合成好后的引物按FAM引物：Hex引物：共用引物=2：2：5比例混合后进行KASP反应和检测，检测结果见图1。其中所述野生型位点特异引物加上FAM接头，在KASP检测结果中为蓝色；所述突变体位点特异引物加上Hex接头，在KASP检测结果中为红色。
从图1可以看出，靠近横轴为Wx-A1b（蓝色），靠近纵轴为Wx-A1a（红色）。
实施例2
已报导小麦抗秆锈基因Sr2位于3B染色体，CAPS分子标记csSr2在我国大部分小麦材料中为显性,与分子标记SCAR类似。csSr2扩增片段DNA序列如SEQ No.8所示；具体为：
CAAGGGTTGCTAGGATTGGAAAACAAAATTGTATTCTTTGTGATTGTAATTGTTTGGTTCAAACATGAATAAAATAATATTCGATTTTCCATTGCTCTACACAACAAGTGTTCATGATTCTAGAACCCTCAAATGGTCGAGCACAAGCTCTAATTTCTTTGGAATCATGAGTGTTGGATGTCTCGCACACCTAGCTTAATACATGCAGATACTTGTTGGGAAGTAACGCTGCTAAAGAAACTTATGTATGGTTCTTAGCTAAATTAGGTTTGAGAGGGGCTAATGGTTCTATGTTGTGTAGCTTGCCCAGAAAAATGTAAGATCATAAGAGTTATCT
将其与参考基因组进行BLAST比对，在3D和3B染色体找到多个高相似度序列，下载后用DNAMAN进行可视化比较在已知SNP位点设计1条位点特异引物Sr2H3如SEQ No.9所示（5’-CGAGCACAAGCTCTAATTTCTTTGG AATCA-3’），Tm值59度，在右侧98bp处找到另一个SNP位点，设计共用引物Sr2C3如SEQ No.10所示（5’-AGAACCATACATAAGTTTCTTTAGCAGCGT-3’），Tm值58度，开发了KASP标记Sr2K3，扩增片段至123bp。合成时给Sr2F-3加上Hex接头，合成好后引物按Sr2H3：Sr2C3=2：5比例混合后进行KASP反应和检测，Sr2K3分型结果中靠近纵轴为Sr2+（抗病），无信号（位于原点附近）为Sr2-（感病）（图2）。
序列表
<110> 山东省农业科学院作物研究所
<120> 一种基于KASP技术检测分子标记的方法
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 1
gaaggtgacc aagttcatgc t 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 2
gaaggtcgga gtcaacggat t 21
<210> 3
<211> 284
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 3
cggcggtgcc tctccatggt ggtgcgcgcc acgggcagcg gcggcatgaa cctcgtgttc 60
gtcggcgccg agatggcgcc ctggagcaag actggcggcc tcggcgacgt cctcgggggc 120
ctccccgccg ccatggccgt aagcttgcgc cactgccttc ttataaatgt ttcttcctgc 180
agccatgcct gccgttacaa cgggtgccgt gtccgtgcag gccaacggtc accgggtcat 240
ggtcatctcc ccgcgctacg accagtacaa ggacgcctgg gaca 284
<210> 4
<211> 265
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 4
cggcggtgcc tctccatggt ggtgcgcgcc acgggcagcg gcggcatgaa cctcgtgttc 60
gtcggcgccg agatggcgcc ctggagcaag actggcggcc tcggcgacgt cctcgggggc 120
ctccccgccg cggacgcctt cttataaatg tttcttcctg cagccatgcc tgccgttaca 180
acgggtgccg tgtccgtgca ggccaacggt caccgggtca tggtcatctc cccgcgctac 240
gaccagtaca aggacgcctg ggaca 265
<210> 5
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 5
gaaggtgacc aagttcatgc taagaaacat ttataagaag gcagtggc 48
<210> 6
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 6
gaaggtcgga gtcaacggat tgaagaaaca tttataagaa ggcgtcc 47
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 7
ggcatgaacc tcgtgttcgt c 21
<210> 8
<211> 337
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 8
caagggttgc taggattgga aaacaaaatt gtattctttg tgattgtaat tgtttggttc 60
aaacatgaat aaaataatat tcgattttcc attgctctac acaacaagtg ttcatgattc 120
tagaaccctc aaatggtcga gcacaagctc taatttcttt ggaatcatga gtgttggatg 180
tctcgcacac ctagcttaat acatgcagat acttgttggg aagtaacgct gctaaagaaa 240
cttatgtatg gttcttagct aaattaggtt tgagaggggc taatggttct atgttgtgta 300
gcttgcccag aaaaatgtaa gatcataaga gttatct 337
<210> 9
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 9
cgagcacaag ctctaatttc tttggaatca 30
<210> 10
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(artiartificial sequence)
<400> 10
agaaccatac ataagtttct ttagcagcgt 30
Claims (6)
1.一种基于KASP技术检测分子标记的方法，其特征在于，
所述的分子标记为非SNP和InDels；
包括以下步骤：在标记扩增目标DNA序列内部设计KASP引物；对于共显性标记，有两条目标DNA序列，需要设计3条引物，包括2条位点特异引物和1条共用引物；对于显性标记，仅有一条目标DNA序列，需要设计2条引物，包括1条位点特异引物和1条共用引物；
所述的位点特异引物的3’端为SNP位点，引物Tm值比KASP接头序列Tm值高1度以上，扩增片段大小为170±130bp。
2.根据权利要求1所述的基于KASP技术检测分子标记的方法，其特征在于，所述的分子标记为STS或SCAR。
3.根据权利要求1所述的基于KASP技术检测分子标记的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）寻找相似序列：将标记扩增目标DNA序列与参考基因组进行BLAST比对，找到基因组中与目标DNA相似度>85%的序列并下载；
（2）重新引物设计：将目标DNA序列和步骤（1）下载的序列进行多序列比对，寻找目标DNA独有的SNP或Indel位点用于设计引物，以SNP或Indel位点为3’端，截取KASP位点特异引物；然后在SNP或Indel位点两端寻找第二个SNP位点用于设计共用引物，将第二个SNP用于共用引物设计可以增加扩增的特异性；如果找不到第二个SNP共用引物，将共用引物设计在无SNP区域；使扩增片段大小在170±130bp，共用引物Tm值与位点特异引物相差小于2度；
（3） KASP检测：采用KASP技术进行PCR反应和荧光检测。
4.根据权利要求3所述的基于KASP技术检测分子标记的方法，其特征在于，所述步骤（1）中目标DNA序列为野生型或突变体。
5.根据权利要求4所述的基于KASP技术检测分子标记的方法，其特征在于，所述野生型位点特异引物加上FAM接头，在KASP检测结果中为蓝色；所述突变体位点特异引物加上Hex接头，在KASP检测结果中为红色；
所述的FAM接头和Hex接头的碱基序列为：
FAM接头碱基序列如SEQ No.1所示；具体序列为：5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCT-3’；
Hex接头碱基序列如SEQ No.2所示；具体序列为：5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATT-3’。
6.根据权利要求3所述的基于KASP技术检测分子标记的方法，其特征在于，所述步骤（3）中KASP检测中位点特异引物和共用引物按2：2：5共显性标记或2：5显性标记的比例混合。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010762318.9A CN111826426A (zh) | 2020-07-31 | 2020-07-31 | 一种基于kasp技术检测分子标记的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010762318.9A CN111826426A (zh) | 2020-07-31 | 2020-07-31 | 一种基于kasp技术检测分子标记的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111826426A true CN111826426A (zh) | 2020-10-27 |
Family
ID=72920800
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010762318.9A Pending CN111826426A (zh) | 2020-07-31 | 2020-07-31 | 一种基于kasp技术检测分子标记的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111826426A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112266975A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-01-26 | 山东省农业科学院作物研究所 | 一种检测与小麦籽粒pod活性相关的kasp标记的引物组、试剂盒及应用 |
| CN112662805A (zh) * | 2021-01-26 | 2021-04-16 | 山东省农业科学院作物研究所 | 一种检测小麦糯性基因的kasp标记引物组及其应用 |
| CN113481318A (zh) * | 2021-08-10 | 2021-10-08 | 河北省农林科学院经济作物研究所 | 检测黄瓜白粉病抗病基因mlo的KASP引物及其应用 |
| CN113755633A (zh) * | 2021-10-11 | 2021-12-07 | 山东省农业科学院 | 高通量检测棉花GhFAD2-1基因高油酸突变位点的KASP分子标记 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105256031A (zh) * | 2015-10-22 | 2016-01-20 | 北京市农林科学院 | 利用高通量分子标记转育甜瓜雌性系的方法及其专用引物 |
| CN107385024A (zh) * | 2017-07-04 | 2017-11-24 | 华智水稻生物技术有限公司 | 水稻育性恢复基因辅助育种分子标记及其应用 |
| CN108330201A (zh) * | 2017-01-18 | 2018-07-27 | 中国种子集团有限公司 | 鉴定番茄花叶病毒抗性基因的分子标记及其应用 |
-
2020
- 2020-07-31 CN CN202010762318.9A patent/CN111826426A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105256031A (zh) * | 2015-10-22 | 2016-01-20 | 北京市农林科学院 | 利用高通量分子标记转育甜瓜雌性系的方法及其专用引物 |
| CN108330201A (zh) * | 2017-01-18 | 2018-07-27 | 中国种子集团有限公司 | 鉴定番茄花叶病毒抗性基因的分子标记及其应用 |
| CN107385024A (zh) * | 2017-07-04 | 2017-11-24 | 华智水稻生物技术有限公司 | 水稻育性恢复基因辅助育种分子标记及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| AWAIS RASHEED等: "Development and validation of KASP assays for genes underpinning key economic traits in bread wheat", 《 THEORETICAL AND APPLIED GENETICS 》, vol. 129, pages 1843 - 201 * |
| LOVEPREET SINGH等: "Development and Validation of a Perfect KASP Marker for Fusarium Head Blight Resistance Gene Fhb1 in Wheat", vol. 35, no. 3, pages 200 - 207 * |
| 张强等: "一个辣椒胞质雄性不育 SCAR 标记的 KASP 转化及其应用", vol. 34, no. 5, pages 93 * |
| 张强等: "一个辣椒胞质雄性不育SCAR标记的KASP转化及其应用", 《华北农学报》, vol. 34, no. 5, pages 93 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112266975A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-01-26 | 山东省农业科学院作物研究所 | 一种检测与小麦籽粒pod活性相关的kasp标记的引物组、试剂盒及应用 |
| CN112662805A (zh) * | 2021-01-26 | 2021-04-16 | 山东省农业科学院作物研究所 | 一种检测小麦糯性基因的kasp标记引物组及其应用 |
| CN112662805B (zh) * | 2021-01-26 | 2022-11-22 | 山东省农业科学院作物研究所 | 一种检测小麦糯性基因的kasp标记引物组及其应用 |
| CN113481318A (zh) * | 2021-08-10 | 2021-10-08 | 河北省农林科学院经济作物研究所 | 检测黄瓜白粉病抗病基因mlo的KASP引物及其应用 |
| CN113481318B (zh) * | 2021-08-10 | 2023-02-17 | 河北省农林科学院经济作物研究所 | 检测黄瓜白粉病抗病基因mlo的KASP引物及其应用 |
| CN113755633A (zh) * | 2021-10-11 | 2021-12-07 | 山东省农业科学院 | 高通量检测棉花GhFAD2-1基因高油酸突变位点的KASP分子标记 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111826426A (zh) | 一种基于kasp技术检测分子标记的方法 | |
| EP2370596B1 (en) | Novel combination of fluorescent dyes for the detection of nucleic acids | |
| KR101923647B1 (ko) | 쥬빌리 타입 또는 크림슨 타입 수박 품종 판별용 snp 마커 | |
| CN106434859B (zh) | 先天性肾上腺皮质增生症基因筛查试剂盒、筛查方法及其应用 | |
| CN108913757B (zh) | 一种染色体非整倍体数目异常的引物组与检测试剂盒及其应用 | |
| AU2012352205B2 (en) | Methods and compositions for analyzing AHASL genes in wheat | |
| CN109628628B (zh) | 水稻抗稻瘟病基因Pi2的SNP标记的开发和应用 | |
| CN110923333B (zh) | 山羊zbp1基因第一内含子内与产羔数关联的单倍型标记及其应用 | |
| CN110564861B (zh) | 人类Y染色体STR基因座和InDel位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 | |
| CN110093346B (zh) | 与紫菜薹薹色基因连锁的分子标志物及其用途 | |
| CN113215267B (zh) | 用于大熊猫个体识别及亲子鉴定的snp引物组及应用 | |
| CN108642201B (zh) | 与谷子株高性状相关的snp标记及其检测引物和应用 | |
| CN107937493B (zh) | 一种用于等位基因pcr的发夹修饰引物 | |
| CN114317776B (zh) | 一种与鸭产蛋性状相关的分子标记组合、获得方法及应用 | |
| CN115976226A (zh) | Snp标记在近交系小鼠品系鉴定中的应用及引物序列 | |
| CN110257505B (zh) | 一种非缺失型α地中海贫血点突变快速检测试剂盒及检测方法 | |
| CN108707685B (zh) | 与谷子分蘖数性状相关的snp标记及其检测引物和应用 | |
| CN114262741A (zh) | 苏氏圆腹鲶抗病性状相关的snp分子标记及其应用 | |
| CN111172241B (zh) | 绵羊四碱基重复微卫星标记及其筛选方法、引物组和应用 | |
| CN110423826B (zh) | 一种c57bl/6亚系小鼠kasp遗传检测试剂盒及引物 | |
| CN108841931B (zh) | 一种检测人4号染色体str基因座的引物组与检测试剂盒及其应用 | |
| CN108315396B (zh) | 一种简单便捷检测snp的新方法 | |
| CN108642199B (zh) | 与谷子旗叶长性状相关的snp标记及其检测引物和应用 | |
| CN108642203B (zh) | 与谷子茎粗性状相关的snp标记及其检测引物和应用 | |
| CN108707684B (zh) | 一种与谷子旗叶长性状相关的snp标记及其检测引物和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |