CN111825649A - 7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法 - Google Patents

7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111825649A
CN111825649A CN201910300833.2A CN201910300833A CN111825649A CN 111825649 A CN111825649 A CN 111825649A CN 201910300833 A CN201910300833 A CN 201910300833A CN 111825649 A CN111825649 A CN 111825649A
Authority
CN
China
Prior art keywords
formula
dihydroxyflavone
degrees
crystal form
solvent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910300833.2A
Other languages
English (en)
Inventor
章志宏
陈建丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Braegen Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Shanghai Braegen Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Braegen Pharmaceutical Co ltd filed Critical Shanghai Braegen Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN201910300833.2A priority Critical patent/CN111825649A/zh
Publication of CN111825649A publication Critical patent/CN111825649A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/64—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with oxygen atoms directly attached in position 8

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种7,8‑二羟基黄酮衍生物的纯化方法。其包括以下步骤：将如式I所示的7,8‑二羟基黄酮衍生物的溶液滴加至有机溶剂中，或将所述有机溶剂滴加至如式I所示的7,8‑二羟基黄酮衍生物的溶液滴中，得混合物，重结晶即可；溶液采用的溶剂包括DMSO、DMF和DMA中的一种或多种；有机溶剂包括C3～6酯溶剂、C1～5醇溶剂、C3～6酮溶剂和C4～10醚溶剂中的一种或多种。纯化后的7,8‑二羟基黄酮衍生物纯度较高，稳定性较好。例如可制得7,8‑二羟基黄酮衍生物晶型A，其不仅纯度较高，而且在水中具有较好的溶解度、高湿条件下具有较好的稳定性以及具有极低的吸湿性。
Figure DDA0002028168350000011

Description

7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法
技术领域
本发明涉及一种7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法。
背景技术
7,8-二羟基黄酮(7,8-Dihydroxyflavon，简称7,8-DHF)是酪氨酸激酶B(TrkB)受体的特异性激动剂，能够激活TrkB受体。体内外的试验证明，7,8-DHF对神经退行性疾病帕金森症、阿尔茨海默病、抑郁症、精神病学障碍、创伤后应激障碍、自闭症谱系障碍、中风、瑞特综合征等有疗效，起到重要的生物学作用。但是，7,8-DHF在体内很容易被代谢成二相代谢物排除体内，体内半衰期比较短，生物利用度较低，成药性较差。
中国专利申请CN201380062367.X公开了将7,8-DHF进行修饰得到7,8-二羟基黄酮衍生物，结构式为
Figure BDA0002028168330000011
(简称式I化合物或化合物R13)。式I化合物在体内非临床试验表明，其半衰期以及生物利用度较7,8-DHF均得到显著提高，具有较强的成药性。由中国专利申请CN201380062367.X制备得到的式I化合物纯度较低，稳定性较差，如何获得高纯度、稳定性好的式I化合物具有十分重要的意义。
发明内容
本发明提供一种7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法。本发明纯化后的7,8-二羟基黄酮衍生物纯度较高，稳定性较好。例如本发明纯化方法可制得7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A，其不仅纯度较高，而且在水中具有较好的溶解度、高湿条件下具有较好的稳定性以及具有极低的吸湿性。7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A对药物的优化和开发具有重要的价值。
本发明通过以下技术方案解决上述技术问题。
本发明提供了一种如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其包括以下步骤：
将如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的溶液滴加至有机溶剂中，或将所述有机溶剂滴加至如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的溶液滴中，得混合物，将所述混合物重结晶即可；
其中，所述溶液采用的溶剂包括二甲基亚砜DMSO、二甲基甲酰胺DMF和二甲基乙酰胺DMA中的一种或多种；所述有机溶剂包括C3～6酯类溶剂、C1～5醇类溶剂、C3～6酮类溶剂和C4～10醚类溶剂中的一种或多种；
Figure BDA0002028168330000021
本发明中，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的溶液中，所述溶液中的溶剂和如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的体积质量比可为本领域常规，优选1～30mL/g，更优选3～15，例如4mL/g、5mL/g、6mL/g、7mL/g、8mL/g或10mL/g。
本发明中，所述有机溶剂的用量可为本领域重结晶操作中常规的用量，优选所述有机溶剂与所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的体积质量比优选为(2～50)mL/g，更优选(10～45)mL/g，例如15mL/g、20mL/g、26mL/g、30mL/g、32mL/g、35mL/g、37mL/g或42mL/g。
本发明中，所述C3～6酯类溶剂可为本领域重结晶操作中的常规碳原子数目为3～6个的酯溶剂，优选乙酸异丙酯、乙酸乙酯和乙酸丙酯中的一种或多种。所述酯类一般是指酸(羧酸或无机含氧酸)与醇起反应生成的一类有机化合物。低分子量酯是无色、易挥发的芳香液体。
本发明中，所述C1～5醇类溶剂一般是指含有碳原子数目为1～5个醇溶剂，可为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇中的一种或多种，优选甲醇或乙醇。
本发明中，所述C3～6酮类溶剂一般是指含有碳原子数目为3～6个的酮溶剂，优选为C3～4酮类溶剂，例如丙酮。
本发明中，所述C4～10醚类溶剂可为本领域重结晶操作中的含有碳原子数目为4～10个的醚溶剂，优选C5～6醚类溶剂。所述C4～10醚类溶剂可为乙醚、异丙醚、甲基叔丁醚和正戊醚中的一种或多种，优选异丙醚和/或甲基叔丁醚。
本发明中，所述重结晶的操作可为本领域中重结晶的常规操作，优选将所述混合物中，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物形成饱和溶液，冷却，析晶。
本发明中，所述饱和溶液的温度一般为室温，例如为15～40℃，优选15～30℃，例如20℃。
本发明中，所述冷却的操作步骤前，一般将所述混合物搅拌0.5～2h，例如1h。
本发明中，所述冷却进行析晶的过程中，一般搅拌12～24h，以保证晶体充分析出。
本发明中，所述冷却后的温度可为本领域常规，一般为(-20℃)-10℃，例如-10℃、-5℃或者0℃。
本发明中，所述重结晶结束后，其还可包括以下操作步骤：将重结晶过程中得到的产品进行分离、洗涤产物和干燥。
其中，所述分离的方式可采用本领域中的常规分离的方式进行，优选离心或过滤。所述洗涤的方式可采用本领域中的常规洗涤的方式进行，一般用所述有机溶剂洗涤2～4次，例如3次。所述有机溶剂的种类如前所述。所述的干燥可采用本领域中的常规操作方法进行，例如常压干燥或减压干燥，例如50℃真空干燥20h。
本发明中，优选，当所述有机溶剂为C3～6酯类溶剂，所述C3～6酯类溶剂为乙酸异丙酯、乙酸乙酯和乙酸丙酯中的一种或多种时，经所述纯化方法制得如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A。
本发明中，优选，当所述有机溶剂为C1～5醇类溶剂和/或C3～6酮类溶剂时，经所述纯化方法制得如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A。
本发明中，优选，当所述有机溶剂为C4～10醚类溶剂，所述C4～10醚类溶剂为乙醚、异丙醚、甲基叔丁醚和正戊醚中的一种或多种时，经所述纯化方法制得如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A。
如前所述晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542,24.590，25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°和31.854±0.2°处有特征衍射峰。
进一步优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542±0.2°、24.590±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°、31.854±0.2°、33.229±0.2°和35.260±0.2°处有特征峰。
更进一步优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542±0.2°、24.590±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°、31.854±0.2°、33.229±0.2°、35.260±0.2°、36.131±0.2°和37.594±0.2°处有特征峰。
再进一步优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542±0.2°、24.590±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°、31.854±0.2°、33.229±0.2°、35.260±0.2°、36.131±0.2°、37.594±0.2°、38.678±0.2°和39.470±0.2°处有特征峰。
再更进一步优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的X-射线粉末衍射图还基本如图1所示。
所述X-射线粉末衍射均使用Cu靶的Kα谱线测得。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的热重分析图谱(TGA)中，在100±3℃处失重的质量占失重前的质量的0.07092％，所述“％”为质量百分比。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A为无溶剂化物。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的热重分析图还基本上如图2所示。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的差示扫描热图谱(DSC)中，在193.99±10℃处有吸收峰，其熔化热为223.9J/g，和，在221.1±10℃处有吸收峰，其熔化热为320.9J/g。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的差示扫描热图谱还基本如图3所示。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的动态水分吸附图谱(DVS)中，在0％～90％相对湿度范围内增重小于0.2％，例如0.1％，所述“％”为所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A增加的质量占初始质量的质量百分比。
作为优选，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的动态水分吸附图谱还基本如图4所示。
如前所述的制备方法制得的如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A可在制备用于防治和/或治疗与酪氨酸激酶B(TrkB)受体有关的疾病的药物中的应用。
在本领域技术人员均知，X-射线粉末衍射的峰强度和/或峰情况可能会因为实验条件不同而不同。同时由于仪器不同的精确度，测得的2θ值会有约±0.2度的误差。而峰的相对强度值比峰的位置更依赖于所测定样品的某些性质，如晶体的尺寸大小，纯度高低，因此测得的峰强度可能出现约±20％的偏差。尽管存在试验误差、仪器误差和取向优先等，本领域技术人员还是可以从本专利提供的X射线粉末衍射数据获得足够的鉴别各个晶型的信息。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明纯化后的7,8-二羟基黄酮衍生物纯度较高，可达98.9％以上，稳定性较好。
本发明纯化方法可制得7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A，其不仅纯度较高，而且在水中具有较好的溶解度、高湿条件下具有较好的稳定性以及具有极低的吸湿性。7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A对药物的优化和开发具有重要的价值。
附图说明
图1为实施例1得到如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的X-射线粉末衍射图。
图2为实施例1得到如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的热重分析图。
图3为实施例1得到如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的差示扫描热图。
图4为实施例1得到如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的动态水分吸附图。
图5为对比例1得到如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的X-射线粉末衍射图。
图6为效果实施例2中如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A在不同高湿条件下放置七天后的X-射线粉末衍射图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
测试方法
X-射线粉末衍射
仪器：Bruker，D8 advance
测试方法：光源为CuK，X-射线强度为40KV/40mA，扫描模式为Theta-theta，扫描角度范围4°～40°，样品盘转速15rpm，扫描速度为10deg/min。
热失重分析
仪器：TA，Q5000IR。
测试方法：以10℃/min的升温速率从25℃加热至300℃。
差示扫描量热分析(DSC)
仪器：TA，Q2000。
测试方法：样品在25℃平衡，然后以10℃/min的升温速率从25℃加热至300℃。
动态水分吸附分析(DVS)
仪器：SMS，DVS Advantage-1。
测试条件：将10～15mg样品用于DVS检测；平衡dm/dt：0.01％/min：(时间：10min最大180min)；干燥：0％RH，120minRH(％)；测量梯度：10％RH(％)；测量梯度范围：0％～90％～0％。判断标准如表1所示：
表1
引湿性分类 引湿增重
潮解 吸收足量水分形成液体
极具引湿性 引湿增重不小于15％
有引湿性 引湿增重小于15％但不小于2％
略有引湿性 引湿增重小于2％但不小于0.2％
无或几乎无引湿性 引湿增重小于0.2％
实施例和对比例中提及的纯度均采用液相方法测得，具体测试方法如下：
仪器：Agilent 1260
柱子：Waters Xbridge C18,4.6um*150mm,3.5um
波长：220nm
流速：1.0mL/min
流动相A：0.05％TFA in water(v/v)，流动相B：0.05％TFA in ACN(v/v)
洗脱梯度如表2所示。
表2
时间(时间) A％ B％
0 90 10
20.00 50 50
25.00 5 95
30.00 5 95
30.10 90 10
38.00 90 10
效果实施例中提及的水分含量的测定仪器是梅特勒-托利多水分仪ET08,按照中国药典2015版记载方法测定；DMSO测定方法：参照中国药典2015版记载方法测定。
实施例1
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为97.9％。
将上述式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物进行纯化，纯化方法如下：
将136.7g上述化合物I加入到1000mL圆底烧瓶中，加入540mL DMSO搅拌直至溶清，将溶液滴加至5L的乙酸异丙酯中，室温下搅拌1h，在0℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得106.5g化合物I，收率77.9％，纯度为99.47％。
经XRPD检测，上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其以2θ角表示的X-射线粉末衍射图，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、31.064±0.2°、33.229±0.2°、35.260±0.2°、36.131±0.2°、37.594±0.2°、38.678±0.2°和39.470±0.2°处有特征衍射峰，其XRPD图谱如图1所示。
经TGA检测，其为100±3℃处失重的重量占失重前的重量的0.45％，其为无溶剂化物，此处的失重为吸附在晶型表面的溶剂的重量，其TGA图谱如图2所示。
经DSC检测，其在183.4±10℃处有吸收峰，熔化热为211.7J/g，和，202.9±10℃处有吸收峰，熔化热为202.9J/g，其DSC图谱如图3所示。
所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的动态水分吸附图(DVS)中，在0％～90％相对湿度范围内增重0.1％，其DVS图谱如图4所示。
实施例2
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为97.9％。
将上述式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物进行纯化，纯化方法如下：
将570g上述化合物I，加入2.3L的DMSO，搅拌直至溶清，将24L的乙酸异丙酯缓慢滴加至前述所得溶液中，室温下搅拌1h，在0℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得399g化合物I，收率70％，纯度为99.08％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例3
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为84％。
将10g化合物I加入到1000mL圆底烧瓶中，加入50mL DMSO搅拌直至溶清，将溶液滴加至300mL的乙酸异丙酯中，室温下搅拌1h，在0℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得7.9g化合物I，收率79％，HPLC纯度为99.42％。
实施例4
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为93％。
将10g化合物I，加入40mL的DMSO，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至200mL的乙酸异丙酯中，室温下搅拌1h，在0℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得6.2g化合物I，收率62％，纯度为99.45％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例5
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为93％。
将10g化合物I，加入30mL的DMF，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至150mL的乙酸乙酯中，室温下搅拌1h，在-5℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸乙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得7.1g化合物I，收率71％，纯度为99.62％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例6
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为96％。
将10g化合物I，加入100mL的DMF，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至600mL的甲基叔丁基醚中，室温下搅拌1h，在-10℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用甲基叔丁基醚洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得6.9g化合物I，收率69％，纯度为99.37％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例7
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为96％。
将10g化合物I，加入80mL的DMA，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至320mL的丙酮中，室温下搅拌1h，在-10℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用丙酮洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得7.5g化合物I，收率75％，纯度为99.71％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例8
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为96％。
将10g化合物I，加入70mL的DMF，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至350mL的乙酸异丙酯中，室温下搅拌1h，在-10℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得6.7g化合物I，收率67％，纯度为99.62％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例9
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为92％。
将10g化合物I，加入60mL的DMF，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至300mL的乙醇中，室温下搅拌1h，在-10℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得7.8g化合物I，收率78％，纯度为98.93％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
实施例10
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为92％。
将10g化合物I，加入50mL的DMSO，搅拌直至溶清，将所得溶液缓慢滴加至260mL的乙醇中，室温下搅拌1h，在-10℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得8.6g化合物I，收率86％，纯度为98.93％。
上述纯化后的式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物为晶型A，其鉴定数据同实施例1。
对比例1
如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型D的制备
参照专利CN201380062367.X中4-氧代-2苯基-4H-色烯-7,8-二基双(二甲基氨基甲酸酯)化合物R7的制备，将原料中二甲基氨基甲酰氯替换为甲基氨基甲酰氯，得到如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物。
Figure BDA0002028168330000131
经XRPD检测，其以2θ角表示的X-射线粉末衍射图，在6.745±0.2°、7.896±0.2°、8.212±0.2°、8.839±0.2°、9.433±0.2°、10.201±0.2°、10.890±0.2°、13.300±0.2°、13.500±0.2°、14.432±0.2°、15.961±0.2°、16.814±0.2°、17.742±0.2°、18.472±0.2°、19.224±0.2°、19.692±0.2°、20.484±0.2°、21.078±0.2°、22.319±0.2°、22.873±0.2°、23.542±0.2°、24.545±0.2°、25.613±0.2°、26.146±0.2°、26.760±0.2°、28.653±0.2°、30.654±0.2°和31.061±0.2°处有特征衍射峰；其XRPD图谱如图5所示。
对比例2
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为97.9％。
10g化合物I加入到250mL圆底烧瓶中，加入20mL DMSO搅拌直至溶清，0℃搅拌12h，过滤，50℃下真空干燥20h，得4.7g化合物I，HPLC纯度98％。
对比例3
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为97.9％。
10g化合物I加入到250mL圆底烧瓶中，加入20mL NMP中搅拌直至溶清，滴加到30mL乙酸异丙酯中，室温下搅拌1h，0℃搅拌12h，过滤，50℃下真空干燥20h，得7.6g化合物I，HPLC纯度95％。
对比例4
按照对比例1的方法制备如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物，其HPLC纯度为97.9％。
将10g化合物I加入到250mL圆底烧瓶中，加入30mL DMSO搅拌直至溶清，将溶液倾倒至300mL的乙酸异丙酯中，室温下搅拌1h，在0℃搅拌12h，过滤，所得滤饼用乙酸异丙酯洗涤3次后，50℃下真空干燥20h，得8g化合物I，收率80％，纯度为98.2％。
效果实施例1
实施例1和实施例2如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A在水中的溶解度
分别称取实施例1或实施例2中如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A50mg，加入1mL蒸馏水，超声5min，过滤，进行HPLLC，按照外标法计算溶解度。对比例1中如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物晶型D的测试方法如前实施例1。具体结果如表3：
表3
测试项目 对比例1 实施例1
溶解度/mg/mL 2.5×10<sup>-3</sup> 3.6×10<sup>-3</sup>
溶解度结果表明，室温时，在水中，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A溶解度为3.6×10-3mg/mL；如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型D溶解度为2.5×10- 3mg/mL。如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的溶解度是如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型D的1.44倍。
效果实施例2
实施例1如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A在高湿条件下的稳定性
将适量的如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的样品置于培养皿上，分别于高湿25℃/60％RH和40℃/75％RH的条件下敞开放置。于7天、取样试验进行X-射线粉末衍射表征，具体结果图6。
由图6的X-射线粉末衍射图谱可知，将如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A分别在25℃/60％RH和40℃/75％RH放置7天，该晶型无转晶现象产生，几乎没有发生任何变化，其在高湿条件下较稳定。
实施例2～10的晶型A在高湿条件下的稳定性如上述实施例1。
将实施例1～2所得产品分别置于双层LDPE袋(浙江周庆盖业有限公司)中，每层LDPE袋分别用扎口扎紧，然后放在纤维桶中，拧紧金属盖子，在40±2℃/75±5％做稳定性试验。具体测试结果如表4、表5所示。表4为实施例1的产品在40±2℃/75±5％RH下起始、静置1个月、静置3个月、静置6个月稳定性结果，表5为实施例2的产品在40±2℃/75±5％RH下下起始、静置1个月、静置3个月、静置6个月稳定性结果。
表4
Figure BDA0002028168330000151
注：T1表示降解杂质；上述百分比均表示各组分相对于产品总量的质量百分比。
表5
Figure BDA0002028168330000152
将实施例3～10所得产品分别置于双层LDPE袋(浙江周庆盖业有限公司)中，每层LDPE袋分别用扎口扎紧，然后放在纤维桶中，拧紧金属盖子，在40±2℃/75±5％做稳定性试验。具体测试结果如表6所示。表6为实施例3～10的产品在40±2℃/75±5％RH下起始、静置3个月稳定性结果。
表6
Figure BDA0002028168330000161
效果实施例3
实施例1如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的吸湿性
取样品约10～15mg，湿度0％RH条件下干燥120分钟后，测试湿度从0％RH～90％RH变化时样品的吸湿特征，以及湿度从90％RH～0％RH变化时样品的去湿特征，湿度变化步长10％RH，平衡标为5min内重量变化率小于0.01％/min，最长平衡时间为180分钟。
结果显示：如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A增加的质量相比于初始的质量，从0％RH～90％RH样品增重0.1％，几乎无吸湿性，具体如图4所示。
实施例2～10制得的如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的吸湿性与实施例1效果相当。
效果实施例4
实施例1如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A在食蟹猴体内药物动力学分析
如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物进入受试体内之后，将代谢生成7,8-DHF。进一步地，7,8-DHF通过激活TrkB受体，进而发挥其生物活性。
1、药物、动物及试剂
药物如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A、药物如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型D、7,8-DHF由上海博芮健制药有限公司提供。以下试剂由测试公司购买和制备：乙腈为分析纯试剂(Sigma Aldrich)，甲酸(HCOOH)为分析纯试剂(河北百灵威超精细材料有限公司)，甲酸胺为分析纯(Honeywell公司)；分析用纯水由去离子水经MilliQ纯水仪制备而成；辅料二甲基亚砜(DMSO)由J&K公司提供，聚乙二醇-15羟基硬脂酸酯(solutol)，甲基纤维素(MC)，吐温80(Tween 80)由Sigma公司提供，柠檬酸钠由Adamas-deta公司提供。
食蟹猴，雄性，2.5-5kg,由海南金港生物技术股份有限公司提供。
实验仪器：液相-质谱联用分析系统(LC/MS/MS-AK)由Waters AcQuity UPLC串联QTRAP 6500质谱检测器组成(用于分析食蟹猴血浆样品)，
2、实验方法
将所有的待测化合物按照以下的方法配制成混悬液(浓度为5mg/mL)用于给药，口服灌胃给药食蟹猴。混悬液的溶媒为0.5％甲基纤维素/0.2％吐温80的水溶液(pH为3.0到3.2)，状态为均一混悬液。
将待测化合物药物如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A、药物如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型D按照25mg/kg剂量给予食蟹猴给药。
食蟹猴为灌胃给药组，一组3只，灌胃给药25mg/kg，灌胃给药前，给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、24小时后前肢头静脉取血0.4mL。
所有的血浆样品在采集后置于4℃、3000g离心力下离心10到15min，之后取血浆于带有标签的离心管中，并即刻进行样品的后续沉淀处理。
3、样品处理和检测方法
取出至少200μL食蟹猴血浆样品加入4倍体积的且含有内标维拉帕米的沉淀剂(v/v，1:4)，涡旋，混合均匀后在12000g离心力下离心10分钟，上清用于进样。
仪器：液相色谱系统：Acquity UPLC液相色谱系统(包括二元输液泵、自动进样器、柱温相、脱气机)，美国Waters公司
MS/MS系统：Triple Quad 6500+Low Mass
数据采集：Analyst 1.6.3软件，美国Applied Biosystems公司。
检测7,8-Dihydroxyflavone的LC条件：分析柱：ACQUITY UPLC ACE 5 PhenylColumn(50×2.1mm I.D.)，美国Waters公司
流速：0.6mL/min；进样量：3μL；柱温：45℃，采用的梯度洗脱顺序如表7所示：
表7
Figure BDA0002028168330000181
化合物7,8-DHF，其保留时间为1.59分钟，7,8-DHF的检测限为1-3000ng/mL，最低检测限为1ng/mL。
MS条件：离子源为电喷雾电离源(Turbo Spray IonDrive,ESI)；源喷射电压为5500V；温度为550℃。
表8食蟹猴灌胃给药后7,8-DHF在体内血浆药物浓度
Figure BDA0002028168330000182
Figure BDA0002028168330000191
备注：表8中“ND”表示未检测到或是峰信号太弱而未列在表中；“BQL”表示低于检测限。
表9灌胃给药后食蟹猴体内7,8-DHF主要的药代动力学参数
Figure BDA0002028168330000192
如表9所示，当剂量为25mg/kg时，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A在食蟹猴体内药-时浓度(AUC(0-last))为1116ng·h/mL，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型D的AUC为285ng·h/mL。如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的AUC为晶型D相应的AUC值的3.9倍。
实施例2～10制得的如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的在食蟹猴体内药物动力学分析与实施例1效果相当。
综上，本发明的如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A在水中具有较高的溶解性、高湿条件下较好的稳定性和极低的吸湿性；在受试体内具有较高的生物利用度。

Claims (10)

1.一种如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其包括以下步骤：
将如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的溶液滴加至有机溶剂中，或将所述有机溶剂滴加至如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的溶液滴中，得混合物，将所述混合物重结晶即可；
其中，所述溶液采用的溶剂包括二甲基亚砜、二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺中的一种或多种；所述有机溶剂包括C3～6酯类溶剂、C1～5醇类溶剂、C3～6酮类溶剂和C4～10醚类溶剂中的一种或多种；
Figure FDA0002028168320000011
2.如权利要求1所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的溶液中，所述溶液中的溶剂和如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的体积质量比为1～30mL/g，优选3～15，例如4mL/g、5mL/g、6mL/g、7mL/g、8mL/g或10mL/g；
和/或，所述有机溶剂与所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的体积质量比为(2～50)mL/g，优选(10～45)mL/g，例如15mL/g、20mL/g、26mL/g、30mL/g、32mL/g、35mL/g、37mL/g或42mL/g。
3.如权利要求1所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述C3～6酯类溶剂为乙酸异丙酯、乙酸乙酯和乙酸丙酯中的一种或多种；
和/或，所述C1～5醇类溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇和叔丁醇中的一种或多种，优选甲醇或乙醇；
和/或，所述C3～6酮类溶剂为C3～4酮类溶剂，优选丙酮；
和/或，所述C4～10醚类溶剂为乙醚、异丙醚、甲基叔丁醚和正戊醚中的一种或多种，优选异丙醚和/或甲基叔丁醚。
4.如权利要求1所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述重结晶为在所述混合物中，如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物形成饱和溶液，冷却，析晶。
5.如权利要求4所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述饱和溶液的温度为15～40℃，优选15～30℃；
和/或，所述冷却的操作步骤前，将所述混合物搅拌0.5～2h，例如1h；
和/或，所述冷却进行析晶的过程中，搅拌12～24h；
和/或，所述冷却后的温度为(-20℃)-10℃，例如-10℃、-5℃或者0℃。
6.如权利要求1所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，当所述有机溶剂为C3～6酯类溶剂，所述C3～6酯类溶剂为乙酸异丙酯、乙酸乙酯和乙酸丙酯中的一种或多种时，经所述纯化方法制得如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A；
当所述有机溶剂为C1～5醇类溶剂和/或C3～6酮类溶剂时，经所述纯化方法制得所述7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A；
当所述有机溶剂为C4～10醚类溶剂，所述C4～10醚类溶剂为乙醚、异丙醚、甲基叔丁醚和正戊醚中的一种或多种时，经所述纯化方法制得所述7,8-二羟基黄酮衍生物晶型A；
所述晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542,24.590，25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°和31.854±0.2°处有特征衍射峰。
7.如权利要求6所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542±0.2°、24.590±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°、31.854±0.2°、33.229±0.2°和35.260±0.2°处有特征峰；
和/或，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的热重分析图谱中，在100±3℃处失重的质量占失重前的质量的0.07092％，所述“％”为质量百分比；
和/或，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的差示扫描热图谱中，在193.99±10℃处有吸收峰，其熔化热为223.9J/g，和，在221.1±10℃处有吸收峰，其熔化热为320.9J/g；
和/或，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的动态水分吸附图谱中，在0％～90％相对湿度范围内增重小于0.2％，所述“％”为所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A增加的质量占初始质量的质量百分比。
8.如权利要求6所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542±0.2°、24.590±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°、31.854±0.2°、33.229±0.2°、35.260±0.2°、36.131±0.2°和37.594±0.2°处有特征峰；
和/或，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的热重分析图基本上如图2所示；
和/或，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的差示扫描热图谱基本如图3所示；
和/或，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的动态水分吸附图谱基本如图4所示。
9.如权利要求6所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A以2θ角度表示的X-射线粉末衍射，在6.710±0.2°、8.821±0.2°、10.203±0.2°、13.537±0.2°、14.267±0.2°、16.814±0.2°、18.511±0.2°、20.424±0.2°、22.910±0.2°、23.542±0.2°、24.590±0.2°、25.631±0.2°、26.857±0.2°、27.351±0.2°、28.830±0.2°、31.064±0.2°、31.854±0.2°、33.229±0.2°、35.260±0.2°、36.131±0.2°、37.594±0.2°、38.678±0.2°和39.470±0.2°处有特征峰。
10.如权利要求6所述的7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法，其特征在于，所述如式I所示的7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型A的X-射线粉末衍射图基本如图1所示。
CN201910300833.2A 2019-04-15 2019-04-15 7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法 Pending CN111825649A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910300833.2A CN111825649A (zh) 2019-04-15 2019-04-15 7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910300833.2A CN111825649A (zh) 2019-04-15 2019-04-15 7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111825649A true CN111825649A (zh) 2020-10-27

Family

ID=72914578

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910300833.2A Pending CN111825649A (zh) 2019-04-15 2019-04-15 7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111825649A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104812744A (zh) * 2012-11-05 2015-07-29 爱默蕾大学 7,8-二羟黄酮和7,8-取代的黄酮衍生物、组合物及其相关方法
CN109574975A (zh) * 2019-01-14 2019-04-05 上海博芮健制药有限公司 7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104812744A (zh) * 2012-11-05 2015-07-29 爱默蕾大学 7,8-二羟黄酮和7,8-取代的黄酮衍生物、组合物及其相关方法
CN109574975A (zh) * 2019-01-14 2019-04-05 上海博芮健制药有限公司 7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2657369C (en) Short-acting benzodiazepine salts and their polymorphic forms
CA3023851C (en) Crystal forms of crisaborole in free form and preparation method and use thereof
CN107827724B (zh) 姜黄素-2,5-二羟基苯甲酸共晶及其制备方法
WO2017203457A1 (en) Solid state forms of empagliflozin
KR102522895B1 (ko) Jak 키나아제 억제제 바이설페이트의 결정형 및 이의 제조방법
CN109574975B (zh) 7,8-二羟基黄酮衍生物的晶型及其制备方法和应用
CN106854203B (zh) 枸橼酸舒芬太尼的新晶型及其制备方法
CN111825649A (zh) 7,8-二羟基黄酮衍生物的纯化方法
WO2016131406A1 (zh) 一种口服丝裂原活化蛋白激酶抑制剂的晶型及其制备方法
CN113444073A (zh) 吗啉基喹唑啉类化合物的晶型ⅲ、其制备方法及应用
WO2016101412A1 (zh) 一种无结晶水二丁酰环磷腺苷钙晶型及其制备方法和应用
CN112538123A (zh) 一种舒更葡糖钠晶型m
CN112538124A (zh) 一种舒更葡糖钠晶型
CN102718676B (zh) 阿戈美拉汀硫酸盐及其制备方法
CN102391326B (zh) 一种盐酸克林霉素棕榈酸酯化合物及其制法
WO2021213453A1 (zh) 一种甲磺酸仑伐替尼晶型xi及其制备方法
JP2016533361A (ja) ピラゾロピリジン化合物の固体形態
CN115427397A (zh) 硝羟喹啉前药的晶型、含其的药物组合物及其制备方法和应用
CN109153676B (zh) Nbi-98854的晶型及其制备方法和用途
CN112441962A (zh) 替罗非班及其纯化方法
CN115583952B (zh) 5型磷酸二酯酶抑制剂的多晶物及其制备方法和应用
CN113195484B (zh) 一种丙酰胺类衍生物的结晶形式及其制备方法
CN113121456B (zh) 一种阿昔莫司尿素共晶
CN117263849A (zh) 一种雷芬那辛三水合物晶型及其制备方法
CN113820402A (zh) 一种米拉贝隆的杂质对照品的hplc分析方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination