CN111818803A - 用于减少农作物真菌感染的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

一种可用于施加至植物、种子或土壤以抑制真菌感染的组合物包含蛋白质源，该蛋白质源接种有每克所述蛋白质源5×107cfu至5×109cfu的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株。

Description

用于减少农作物真菌感染的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年2月1日提交的美国申请号15/886,124的权益，该美国申请以引用方式并入本文。
技术领域
本公开涉及用于使用非致病性细菌减少或消除生长中和/或收获的农作物的真菌感染的方法和组合物。
背景技术
据报道物种芽孢杆菌属(Bacillus)的成员可用于预防农作物的感染和/或促进农作物的生长。例如，短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌株QST2808、短小芽孢杆菌菌株GB34、枯草芽孢杆菌(Bacillus Substilis)菌株QST713、枯草芽孢杆菌(BacillusSubtilis)菌株GB03、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)和坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)的各种菌株以及解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株FZB42已经用于商购可得的生物防治产品中。
尽管已知的天然非致病性生物杀真菌剂已经实现了一些商业成功，但是仍然需要安全高效的生物杀真菌剂。
发明内容
本公开涉及一种安全的(无毒无致病性的)生物杀真菌剂组合物，该生物杀真菌剂组合物包含蛋白质源，该蛋白质源接种有每克所述蛋白质源5×107cfu至5×109cfu的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefcicias)菌株。已发现蛋白质源和杀生物的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacies)菌株的组合与单独任一组分相比更有效地减少和/或抑制农作物中真菌感染，从而提供了出乎意料的和协同的改善。
附图说明
图1是条形图，示出了来自不同细菌菌株的发酵培养基流出物对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)分生孢子萌发的抑制作用。
图2是条形图，示出了来自不同细菌菌株的发酵培养基流出物对尖孢镰刀菌分生孢子数量的抑制作用。
图3是条形图，示出了向植物生长的土壤中添加包含接种有解淀粉芽孢杆菌菌株的蛋白质源的组合物的抑制作用。
图4是条形图，示出了将不含蛋白质源的单独解淀粉芽孢杆菌菌株添加到植物生长的土壤中未有效抑制尖孢镰刀菌。
图5是条形图，示出了接种有解淀粉芽孢杆菌菌株的大豆粉比单独的大豆粉更加有效地抑制土壤中的尖孢镰刀菌。
具体实施方式
基于筛选各种芽孢杆菌属(Bacillus)物种促进用选自棉籽粕(cotton seedmeal)、大豆粉和水解羽毛粉(feather meal)的蛋白质源处理过的罗勒植物生长的能力的实验，确定了无论所用的芽孢杆菌属的物种和所用的芽孢杆菌属的量如何，对棉籽粕和大豆粉的生长响应都非常不良。还确定了无论所使用的芽孢杆菌属的量或物种如何，对水解羽毛粉的生长响应都是良好的。这向发明人暗示大豆粉和棉籽粕正在被细菌消耗并且被并入到细菌质量中。负责代谢所述蛋白质源的细菌可以是天然细菌、添加的细菌(蛋白质源接种物)，或接种物和天然细菌二者的组合。这向发明人暗示了某些蛋白质源(诸如大豆粉和棉籽粕)可以用于补充生物防治生物体(诸如杀真菌细菌)的生长。
基于筛选各种芽孢杆菌属菌株抑制水中分生孢子萌发的能力和在水中裂解分生孢子的能力的单独实验，确定了来自用于培养各种测试的芽孢杆菌属菌株的胰酶解大豆液体培养基(tryptic soy broth，TSB)的流出物通常包含能够抑制来自尖孢镰刀菌的分生孢子的萌发的分泌物质。然而，如图1所示，存在例外，诸如短小芽孢杆菌菌株BP，其未明显抑制尖孢镰刀菌。同样，如图1所示，解淀粉芽孢杆菌菌株OBT 730(以ATCC登录号PTA-124660保藏)和OBT 712(以ATCC登录号PTA-122189保藏)特别有效地抑制镰刀菌属(Fusarium)分生孢子萌发。
图2示出了来自菌株OBT 730和OBT 712的流出物裂解尖孢镰刀菌分生孢子的能力特别好，超过70％的分生孢子消失了。在剩余的分生孢子中，使用来自菌株OBT 730和OBT712的流出物的萌发百分率要比用来自其他培养物的流出物处理分生孢子时所观察到的低得多。
菌株OBT 712是在由佛罗里达州Sarasota的Osprey Biotechnics销售的大多数基于芽孢杆菌属的产品中出售的储备菌株，并且菌株OBT 730是由Osprey Biotechnics从土壤样品中分离的。
选择菌株OBT 712进行进一步分析。具体地，进行实验以确定菌株OBT712在有或没有大豆粉的情况下降低土壤中镰刀菌属分生孢子浓度的能力。大豆粉接种了每克大豆粉5×108cfu的解淀粉芽孢杆菌菌株OBT 712。将已接种的大豆粉以零、0.33％、1％和5％的量添加到土壤中，并将尖孢镰刀菌分生孢子以每克土壤5×105个分生孢子添加。如图3所示，接种了解淀粉芽孢杆菌的大豆粉的添加极大地减少了可从土壤中回收的镰刀菌属。
本发明人进行了几项其他研究以确定OBT 712菌株是否能够在没有大豆粉的情况下减少镰刀菌属计数，以及对镰刀菌属的作用是否仅由于单独的大豆粉或是否需要所述细菌。接种了每克大豆粉5×108cfu的菌株OBT712的百分之一大豆粉将递送每克土壤5×106cfu的菌株OBT 712。该浓度或每克土壤5×105cfu的菌株OBT 712似乎都没有明显影响镰刀菌属(图4)。然而，当与单独的大豆粉相比时，大豆粉加菌株OBT 712使镰刀菌属回收率降低了约80％(图5)。
本发明人已经从以上实验得出的结论是包含接种有解淀粉芽孢杆菌的大豆粉的土壤改良剂可用于减少农作物的镰刀菌属感染。大豆粉似乎与测试的其他氮源相比具有优势。观察到对镰刀菌属回收率的有益作用所需的大豆量远低于其他有机氮供应。在0.5％的大豆粉时，盆栽土壤中的氮含量为约375ppm。通常人们希望氮浓度在100-200ppm的范围内，但是考虑到解淀粉芽孢杆菌正在底物上生长并同化氮，可以想到游离氮会比200ppm低得多并且将不会观察到对植物的有害作用。
或者，发酵液本身可以制成合适的抗真菌产品。可以使用常规实验来确定可用作杀真菌剂的所述材料的百分比。可能负责解淀粉芽孢杆菌菌株的抗真菌活性的分泌产物是脂肽。示例是伊枯草菌素(iturin)、表面活性肽(surfactin)和丰原素(fengycin)。编码合成这些化合物所需的酶的基因存在于菌株OBT 712基因组中。这些肽已显示为溶血的，因此尚未被商业化，
本文所公开的组合物(接种的蛋白质源和来自培养物的流出物)可用于通过将组合物施加至植物、生长成植物的种子或植物生长的土壤来抑制植物的真菌感染。土壤浓度通常是指植物根部接触的土壤内的浓度。施加至种子是指将所公开的组合物掺入种子覆盖物中。“流出物”是指从培养所公开的细菌的培养基中获得的经过滤的液体。
所描述的实施方案是优选的和/或说明性的，而不是限制性的。各种修改认为在所附权利要求书的范围和范畴内。

Claims (20)

1.一种组合物，其包含：
蛋白质源，其接种有每克所述蛋白质源5×107至5×109cfu的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株。
2.权利要求1的组合物，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-122189保藏的命名为菌株OBT 712的细菌的鉴定特征。
3.权利要求1的组合物，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-124660保藏的命名为菌株OBT 730的细菌的鉴定特征。
4.权利要求1的组合物，其中所述蛋白质源是大豆粉。
5.权利要求1的组合物，其中所述蛋白质源是棉籽粕。
6.一种组合物，其包含：
来自在培养基中生长的解淀粉芽孢杆菌菌株的流出物。
7.权利要求6的组合物，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-122189保藏的命名为菌株OBT 712的细菌的鉴定特征。
8.权利要求6的组合物，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-124660保藏的命名为菌株OBT 730的细菌的鉴定特征。
9.权利要求6的组合物，其中所述培养基是胰酶解大豆液体培养基。
10.一种抑制植物真菌感染的方法，所述方法包括：
向生长成所述植物的种子或所述植物生长的地方施加组合物，所述组合物包括蛋白质源，所述蛋白质源接种有每克所述蛋白质源5×107至5×109cfu的解淀粉芽孢杆菌菌株。
11.权利要求10的方法，其中将所述组合物添加到所述植物生长的土壤中，使得所述组合物以所述土壤质量的约0.33％至约5％的量存在于所述土壤中。
12.权利要求10的方法，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-122189保藏的命名为菌株OBT 712的细菌的鉴定特征。
13.权利要求10的方法，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-124660保藏的命名为菌株OBT 730的细菌的鉴定特征。
14.权利要求10的方法，其中所述蛋白质源是大豆粉。
15.权利要求10的方法，其中所述蛋白质源是棉籽粕。
16.权利要求10的方法，其中将所述植物受尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)菌株感染。
17.一种抑制植物真菌感染的方法，所述方法包括：
向所述植物或所述植物生长的地方施加来自在培养基中生长的解淀粉芽孢杆菌菌株的流出物。
18.权利要求17的方法，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-122189保藏的命名为菌株OBT 712的细菌的鉴定特征。
19.权利要求17的方法，其中所述解淀粉芽孢杆菌菌株具有以ATCC登录号PTA-124660保藏的命名为菌株OBT 730的细菌的鉴定特征。
20.权利要求17的方法，其中所述培养基是胰酶解大豆液体培养基。
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