CN111812252A - 一种对植物中降糖功能化合物的筛选及分离方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药有效成分的制备方法，具体提供一种对植物中降糖功能化合物的筛选及分离方法。所述对植物中降糖功能化合物的筛选方法包括对植物进行萃取得到粗提物，将粗提物与葡萄糖苷酶孵育，酶与混合物通过超滤膜，去除未结合的成分，使酶失活，去除，对剩余组分进行液相色谱分析，即得植物中具有降糖功能化合物。解决现有技术中对于化合物的分析方法通常先分离，再研究化合物的功能，造成极大浪费的同时，大大降低了效率的问题。

Description

一种对植物中降糖功能化合物的筛选及分离方法
技术领域
本发明涉及中药有效成分的制备方法，具体提供一种对植物中降糖功能化合物的筛选及分离方法。
背景技术
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。
岩白菜(虎耳草科)是一种多年生草本植物，位于海拔2700-4700米的喜马拉雅地区。在巴基斯坦吉尔吉特地区，该植物已被用作治疗糖尿病的草药。据报道，一种含有岩白菜的草药可治疗痤疮、糖尿病、肥胖症和病毒感染。此外，也有报道称该植物可用于治疗肾结石、伤口等，并且具有抗真菌作用、抗氧化剂、抗菌和免疫调节作用。岩白菜报道的主要化学成分包括岩白菜素或其衍生物萜烯、类黄酮等。
随着老龄化社会到来，伴随着人类肥胖和肥胖症的发展，由此引发的糖尿病等代谢性疾病日渐加剧。根据世界卫生组织报告，目前世界上超过2亿人患有II型糖尿病，因此预防糖尿病的治疗已成为全球性的健康问题。α-葡萄糖苷酶抑制剂已被广泛用于II型糖尿病患者的治疗，其通过延迟吸收来自小肠的碳水化合物摄入，降低餐后血糖和胰岛素水平。化学合成的α-葡萄糖苷酶抑制剂如阿卡波糖和伏格列波糖已被批准用于临床控制II型糖尿病，但长期服用会发生腹部不适、肠胃气胀和腹泻等不良副作用。因此，从天然产物中筛选和发现降血糖活性成分成为糖尿病新药研发的重要方向，建立目标植物中潜在降糖活性成分的特异性筛选、分离和药理评价具有重要意义。
发明人发现，现有技术中对于化合物的研究方法，通常是将化合物先分离，再对其进行功能性检测，然而，在分离的同时，常常会分离出不具备想要功能的化合物，再将多余化合物弃掉，造成了严重的浪费，且对于操作人员来说，大大降低了效率。且现有技术中尚未发现岩白菜或其提取物在糖尿病的预防或治疗中有联系。
发明内容
针对现有技术中对于化合物的分析方法通常先分离，再研究化合物的功能，造成极大浪费的同时，大大降低了效率的问题。
本公开一个或一些实施方式中，提供一种对植物中降糖功能化合物的筛选方法，对植物进行萃取得到粗提物，将粗提物与葡萄糖苷酶孵育，酶与混合物通过超滤膜，去除未结合的成分，使酶失活，去除，对剩余组分进行液相色谱分析，即得植物中具有降糖功能化合物。
本公开一个或一些实施方式中，提供一种对降糖化合物分离的方法，针对上述任一项对植物中降糖功能化合物的筛选方法得到的降糖化合物，采用逆流色谱制备目标成分峰，按照目标峰收集相应组分，减压浓缩，得到样品。
本公开一个或一些实施方式中，提供β-熊果苷在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
本公开一个或一些实施方式中，提供β-熊果苷在制备降糖药物中的应用。
本公开一个或一些实施方式中，提供6-O-没食子酰熊果苷在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
本公开一个或一些实施方式中，提供6-O-没食子酰熊果苷在制备降糖药物中的应用。
上述技术方案中的一个或一些技术方案具有如下优点或有益效果：
1)本公开区分于现有技术中先对化合物分离，再进行功能性研究的方法，提出了一种先对植物提取物中具备特定功能的化合物利用特定的底物酶结合，再将底物酶失活，将不能与底物酶结合的化合物筛除，剩余的化合物均为具备特定功能的化合物，只需将剩余具备特定功能的化合物分离，即得到所述功能的化合物，经细胞实验与动物实验发现，利用该方法得到的化合物果然具备预期的效果，可见本公开所述的筛分及分离方法效果较好，具备实用性。
2)本公开利用所述方法分离得到的化合物纯度达到95％，纯度高，因此所述方法实用性高。
附图说明
构成本公开一部分的说明书附图用来提供对本公开的进一步理解，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。
图1为实施例1、3的工艺流程图。
图2为实施例1岩白菜粗提物的α-葡萄糖苷酶特异性吸附图(A：总样；B：特异性吸附物)。
图3为实施例1β-熊果苷(1)和6-O-没食子酰熊果苷(2)的逆流色谱图。
图4为实施例1β-熊果苷(1)和6-O-没食子酰熊果苷(2)单体的液相色谱分析图。
图5为实施例3岩白菜粗提物和单体的细胞活力测试图。
图6为实施例3岩白菜粗提物和单体的降糖测试图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
针对现有技术中对于化合物的分析方法通常先分离，再研究化合物的功能，造成极大浪费的同时，大大降低了效率的问题。
本公开区分于现有技术中先对化合物分离，再进行功能性研究的方法，提出了一种先对植物提取物中具备特定功能的化合物利用特定的底物酶结合，再将底物酶失活，将不能与底物酶结合的化合物筛除，剩余的化合物均为具备特定功能的化合物，只需将剩余具备特定功能的化合物分离，即得到所述功能的化合物，经细胞实验与动物实验发现，利用该方法得到的化合物果然具备预期的效果，可见本公开所述的筛分及分离方法效果较好，具备实用性。
本公开一个或一些实施方式中，提供一种对植物中降糖功能化合物的筛选方法，对植物进行提取得到粗提物，将粗提物与葡萄糖苷酶孵育，酶与混合物通过超滤膜，去除未结合的成分，使酶失活，去除，对剩余组分进行液相色谱分析，即得植物中具有降糖功能化合物。
优选的，所述植物为岩白菜。本公开以岩白菜为原料进行分离，岩白菜廉价易得，分离出的化合物纯度高，应用范围广泛。
优选的，获得岩白菜粗提物的步骤包括：将岩白菜浸泡，并用提取剂提取，重复多次；合并所有提取液，旋转蒸发至干。
优选的，所述提取剂为乙醇。
进一步优选的，所述乙醇质量分数为80％。
优选的，提取取时间为20-26h。
进一步优选的，提取时间为24h。
优选的，重复次数为3次。
优选的，在40℃下旋转蒸发至干。
优选的，将粗提物在4℃的冰箱中储存备用。
优选的，所述葡萄糖苷酶为α-葡萄糖苷酶。所述α-葡萄糖苷酶的作用为分解葡萄糖，最终筛选出的化合物β-熊果苷(1)、6-O-没食子酰熊果苷(2)具备降糖作用的机理为抑制了α-葡萄糖苷酶分解葡萄糖的作用，相当于α-葡萄糖苷酶的抑制剂。
优选的，所述α-葡萄糖苷酶与粗提物的孵育步骤包括：将粗提物和α-葡萄糖苷酶在醋酸盐缓冲液下孵育一段时间，孵育后，将酶与混合物通过超滤膜，离心15分钟，缓冲液清洗3次，离心，去除未结合的成分，使酶失活，进行液相色谱分析。
优选的，醋酸盐缓冲液的pH为6-7。
进一步优选的，醋酸盐缓冲液的pH为6.8。
优选的，粗提物和α-葡萄糖苷酶25-38℃下孵育25-40分钟。
进一步优选的，粗提物和α-葡萄糖苷酶37℃下孵育30分钟。
优选的，所述超滤膜截留分子量为30000Da。
优选的，所述粗提物与α-葡萄糖苷酶体积比为4-6:1。
进一步优选的，所述粗提物与α-葡萄糖苷酶体积比为5:1。
优选的，酶失活步骤包括：酶加入甲醇/水，离心，收集离心液体。
优选的，所述甲醇和水的体积比为1:1，pH为3-4。
进一步优选的，所述甲醇和水混合物的pH为3.30。
本公开一个或一些实施方式中，提供一种对降糖化合物分离的方法，针对上述任一项对植物中降糖功能化合物的筛选方法得到的降糖化合物，采用逆流色谱制备目标成分峰，按照目标峰收集相应组分，减压浓缩，得到样品。
优选的，当植物为岩白菜，葡萄糖苷酶α-葡萄糖苷酶时，溶剂系统为：叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水(1:3:1:5，v/v)，上相为固定相，下相为流动相，转速为800转/min，流速为2.0mL/min，检测波长254nm，进样量：1.0g。
优选的，当植物为岩白菜，葡萄糖苷酶α-葡萄糖苷酶时，高效液相色谱液相条件为：Waters Symmetry C18 column(5μm,4.6mm×250mm,i.d.)，紫外检测波长254nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL；流动相采用水(A)和乙腈(B)，0-5min,88％A；5-15min，88％-70％A；15-20min，70％A；20-21min，70％-88％A；21-25min，12％B。
本公开一个或一些实施方式中，提供β-熊果苷在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
本公开一个或一些实施方式中，提供β-熊果苷在制备降糖药物中的应用。
优选的，β-熊果苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。
本公开一个或一些实施方式中，提供6-O-没食子酰熊果苷在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
本公开一个或一些实施方式中，提供6-O-没食子酰熊果苷在制备降糖药物中的应用。
优选的，6-O-没食子酰熊果苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。
实施例1：
本实施例提供一种对岩白菜中降糖功能化合物的筛选方法。
1.样品的提取
将岩白菜药材(采自巴基斯坦)5kg浸泡，并用2×12L的80％乙醇萃取24小时，重复3次。合并所有提取液，在40℃下旋转蒸发至干，得到粗提物256g，将其储存在4℃的冰箱中。
2.纳滤筛选降糖成分
岩白菜提取物(1.0mg/mL，250μL)与50μL的0.5U/mL浓度α-葡萄糖苷酶在pH 6.8的醋酸盐缓冲液37℃下孵育30分钟。孵育后，将酶与混合物通过超滤膜(截留分子量为30000Da)室温10000×g离心15分钟，缓冲液清洗3次，离心，去除未结合的成分。酶加入100μL的甲醇/水(50:50，v/v，pH 3.30)，离心，收集离心液体，进行液相色谱分析，见图2，其中，A为未加入α-葡萄糖苷酶之前的液相色谱图，B为α-葡萄糖苷酶失活之后的液相色谱图，显然，根据B所筛选的化合物，即为具备降糖功能的化合物。
3.逆流色谱分离
采用逆流色谱分离制备目标成分峰1和峰2，两相溶剂体系为叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水(1:3:1:5，v/v)，上相为固定相，下相为流动相，转速为800转/min，流速为2.0mL/min，检测波长254nm，根据色谱图收集目标峰，减压浓缩，得到样品，逆流色谱图见图3；液相色谱检测纯度超过95％，见图4。
利用高效液相色谱分析分离物，液相条件：Waters Symmetry C18 column(5μm,4.6mm×250mm,i.d.)，紫外检测波长254nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL；流动相采用水(A)和乙腈(B)，0-5min,88％A；5-15min，88％-70％A；15-20min，70％A；20-21min，70％-88％A；21-25min，12％B。
4.结构鉴定
对分离得到的单体应用Agilent 6520Q-TOF质谱仪和Bruker AV-400MHz核磁共振波谱仪分别进行MS、NMR谱的测定，所得数据如下：
化合物1：ESI-MS(负离子模式)m/z 271.0526.1H-NMR(MeOH-d4,400MHz)δ:3.69(1H,dd,J＝2.54,11.5Hz,H-6'a),3.87(1H,d,J＝11.9Hz,H-6'b),3.37(1H,m,H-4'),3.41(1H,m,H-2'),3.40(1H,m,H-5'),3.45(1H,m,H-3'),4.72(1H,d,J＝7.0Hz,H-1'),6.96(2H,d,J＝8.8Hz,H-2,H-6),6.68(2H,d,J＝8.8Hz,H-3,H-5).13C-NMR(MeOH-d4,100MHz)δ:62.6(CH2,C-6'),71.5(CH,C-4'),75.0(CH,C-2'),78.0(CH,C-5'),78.1(CH,C-3'),103.7(CH,C-1'),116.6(CH,C-2,C-6),119.4(CH,C-3,C-5),152.4(C-1),153.8(C-4)。鉴定为β-熊果苷。
化合物2：ESI-MS(负离子模式)m/z 425.3755.1H-NMR(MeOH-d4,400MHz)δ:4.57(1H,dd,J＝1.2,11.4Hz,Glc-H-6a),4.43(1H,dd,J＝6.8,11.7Hz,Glc-H-6b),3.41-3.49(1H,m,Glc-H-4),3.67-3.71(1H,m,Glc-H-5),3.41-3.49(1H,m,Glc-H-2),3.41-3.49(1H,m,Glc-H-3),4.69(1H,d,J＝6.94Hz,Glc-H-1),7.11(2H,s,H-2',H-6'),6.92(2H,d,J＝8.7Hz,H-2,H-6),6.61(2H,d,J＝8.7Hz,H-3,H-5).13C-NMR(MeOH-d4,100MHz)δ:64.9(CH2,Glc-6),71.8(CH,Glc-4),75.0(CH,Glc-5),75.6(CH,Glc-2),78.0(CH,Glc-3),103.9(CH,Glc-1),110.3(CH,C-2',C-6'),116.7(CH,C-2,C-6),119.5(CH,C-3,C-5),121.4(C-1'),139.9(C-4'),146.6(C-3',C-5'),152.4(C-4),153.9(C-1),168.2(CO,C-7')。鉴定为6-O-没食子酰熊果苷。
实施例2
本实施例提供不同溶剂组分下的下的KD值。
表1不同溶剂体系的目标化合物的KD值
Figure BDA0002649514870000071
选择合适的用于逆流色谱分离的两相溶剂系统是非常关键的步骤，而合适的两相溶剂系统可以成功完成分离实验。在本研究中，以不同比例测试了包括两种，三种或四种溶剂混合物在内的多种双相混合溶剂体系。良好的溶剂系统可为混合物中的目标化合物提供理想的分配系数(KD)值。KD值描述了相互平衡的两相溶剂体系之间溶质分布的比率。在我们的实验中研究的双相溶剂系统包括正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(1:9:1:9，v/v)，乙酸乙酯/正丁醇/水(1:4:5，v/v)。此外，研究了不同比例的双相溶剂体系叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水(1:3:1:5，2:2:1:5和3:1:1:5，v/v)。如表1所述，当双相正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水(1:9:1:9，v/v)溶剂体系时，大多数化合物的KD值均小于0.5，因此不适合用于逆流色谱分离。在乙酸乙酯/正丁醇/水(1:4:5，v/v)溶剂系统的情况下，发现KD值的范围大于建议值，因此对于更好地进行分离也不利。此外，使用了其他一些溶剂系统，例如叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水(2:2:1:5和3:1:1:5，v/v)，与前面提到的相比，结果更好溶剂系统，但仅用于少数目标化合物。此外，发现另一种溶剂系统，即叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水(1:3:1:5，v/v)最合适，因为目标组分的KD值非常可行。
实施例3
本实施例提供实施例1所筛选出的化合物β-熊果苷(1)、6-O-没食子酰熊果苷(2)的降糖测试实验。
1.HepG2细胞活性测试
将粗提物和单体化合物即总提取物、β-熊果苷(1)、6-O-没食子酰熊果苷(2)的细胞毒性按照MTT分析在HepG2(人肝癌细胞系)细胞中测定。首先，在补充有青霉素(100U/mL)/链霉素(100μg/mL)和10％FBS的DMEM中培养HepG2细胞。然后将细胞在5％CO2存在下于37℃孵育。胰蛋白酶溶液用于在对数生长期消化HepG2细胞。然后用培养基将细胞密度调节至5×105/mL。将细胞以100μL/孔的体积在37℃和5％CO2下接种到96孔细胞培养板中。之后，将种子细胞用适当浓度的测试样品处理24小时。吸光度的波长保持在570nm，以确定细胞活力。使用给定的公式计算组分对细胞生存力的影响：细胞活力(％)＝处理样品A570nm/未处理样品A570nm×100％。β-熊果苷(1)处理的HepG2细胞的情况下，在所有浓度下细胞活力均略有增加。在用6-O-没食子酰熊果苷(2)进行处理的情况下，在25和50μg/mL的浓度下，观察到HepG2细胞活力略有增加，见图5。
在每种浓度(25、50和100μg/mL)单体化合物作为测试样品的情况下，对数据进行统计评估。如图6所示，β-熊果苷(1)、6-O-没食子酰熊果苷(2)具有良好的降血糖作用。
2.糖尿病大鼠的降血糖作用
糖尿病大鼠模型建立：研究了预实验中活性最好的组分对糖尿病大鼠的降血糖作用。50只大鼠适应性喂养一周后随机抽取6只作为正常组，给予普通饲料，其余大鼠用高脂饲料喂养。4周后，大鼠禁食，高脂饲料组按45mg/kg的剂量腹腔注射1％的链脉佐菌素柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(0.1M，pH＝4.2-4.5)，正常组注射等体积的缓冲液，5天后大鼠禁食不禁水12小时，尾部采血，用血糖仪及血糖试纸检测血糖，以空腹血糖≥12视为造模成功。
高脂饲料喂养组大鼠随机分为糖尿病模型组、格列美脉组和给药组。其中给药组每组8只大鼠，正常组、模型组和格列美脉组每组6只大鼠。化合物相给药剂量为200mg/kg，格列美脉给药量定为1.5mg/kg，模型组和正常组灌胃等量纯净水，继续原喂养方式给药3周。给药期间，每周观察大鼠的精神状态、毛色、进食量、进水量和排尿量等，并且每周测一次空腹血糖。
糖耐量实验：给药3周后，大鼠禁食不禁水12h，以2g/kg剂量灌胃50％葡萄糖溶液，于灌胃前(0min)，灌胃后30、60和120min测定血糖。
胰岛素耐量实验：糖耐量实验1天后，血糖基本稳定，禁食不禁水12h，腹部皮下注射0.5U/kg胰岛素的生理盐水溶液，测定注射前(0min)，及注射后30、60和120min各时间点血糖。以0min血糖为100％，计算各时间点血糖变化。
活性组分对糖尿病大鼠状态的影响：与正常组大鼠相比，糖尿病大鼠反应迟钝、精神不振、毛色暗淡、无光泽，并且出现多饮、多食、多尿和尿糖等症状。给药三周后，与模型组相比，给药各组和格列美脉组大鼠毛色光泽改善，并且饮水量和尿量减少。
活性组分对糖尿病大鼠空腹血糖状况的影响：如表1所示，在造模后给药前正常组的血糖水平显著低于其他各组(P<0.01)，并且给药组各组和模型组没有明显差异(P<0.05)，说明本实验中糖尿病大鼠模型建立成功。
表1各组大鼠空腹血糖比较
Figure BDA0002649514870000091
在给药1周、2周和3周后，给药组大鼠的血糖较给药前均有所降低，并且低于格列美脉组(阳性对照组)。给药组大鼠随着给药时间的增加血糖水平也在降低，在给药第二周和第三周血糖水平已经显著低于模型组(P<0.01)。格列美脉组给药两周和三周后血糖较第一周升高，但与模型组相比仍有显著性差异(P<0.05)，这可能是由于大鼠胰岛细胞遭到破坏，胰岛素分泌不足，导致难以发挥格列美脉的降糖作用。
活性组分对糖尿病大鼠葡萄糖耐量的影响：表2表示各组大鼠口服葡萄糖后120分钟内血糖变化。结果表明，所有组大鼠在口服葡萄糖后30min内血糖均达到最高值，之后又逐渐下降，其中正常组和给药组在120min后血糖逐渐下降到口服葡萄糖前的水平(0min)，表现出了较好的降糖作用，而模型组和格列美脉组在30-120min内血糖虽然有所降低，但仍高于口服葡萄糖前的水平。正常组和给药组大鼠血糖水平在各时间点均显著低于模型组(P<0.01或P<0.05)。
表2各组大鼠的葡萄糖耐量比较
Figure BDA0002649514870000092
Figure BDA0002649514870000101
活性组分对糖尿病大鼠胰岛素耐量的影响：表3表示各组大鼠腹部皮下注射胰岛素后120分钟内血糖变化。分析结果可知，正常组和给药各时间点血糖与模型组相比存在显著差异(P<0.01或P<0.05)，各组大鼠在注射胰岛素后血糖水平均下降，其中正常组、给药组和格列美脉组在注射30min后变化率较大，在60min时各组大鼠血糖变化更为显著，而模型组下降很小，说明活性组分和格列美脉可显著增强糖尿病大鼠对外源性胰岛素的敏感性。
表3各组大鼠的胰岛素耐量比较
Figure BDA0002649514870000102
综上所述，数据证明了β-熊果苷(1)、6-O-没食子酰熊果苷(2)的降糖潜力。从以上给出的所有结果中，我们可以看到化合物β-熊果苷(1)和6-O-没食子酰熊果苷(3)对细胞活力具有显着的保护作用，同时β-熊果苷(1)和6-O-没食子酰熊果苷(3)为潜在的降糖药物。
以上所揭露的仅为本发明的优选实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明申请专利范围所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (10)

1.一种对植物中降糖功能化合物的筛选方法，其特征在于，对植物进行萃取得到粗提物，将粗提物与葡萄糖苷酶孵育，酶与混合物通过超滤膜，去除未结合的成分，使酶失活，去除，对剩余组分进行液相色谱分析，即得植物中具有降糖功能化合物。
2.如权利要求1所述的对植物中降糖功能化合物的筛选方法，其特征在于，所述植物为岩白菜，
优选的，获得岩白菜粗提物的步骤包括：将岩白菜浸泡，并用提取剂提取，重复多次；合并所有提取液，旋转蒸发至干；
优选的，所述萃取剂为乙醇醇；
进一步优选的，所述乙醇醇质量分数为80％；
优选的，萃取时间为20-26h；
进一步优选的，萃取时间为24h；
优选的，重复次数为3次；
优选的，在40℃下旋转蒸发至干
优选的，将粗提物在4℃的冰箱中储存备用。
3.如权利要求1所述的对植物中降糖功能化合物的筛选方法，其特征在于，所述葡萄糖苷酶为α-葡萄糖苷酶；
优选的，所述α-葡萄糖苷酶与粗提物的孵育步骤包括：将粗提物和α-葡萄糖苷酶在醋酸盐缓冲液下孵育一段时间，孵育后，将酶与混合物通过超滤膜，离心15分钟，缓冲液清洗3次，离心，去除未结合的成分，使酶失活，进行液相色谱分析；
优选的，醋酸盐缓冲液的pH为6-7；
进一步优选的，醋酸盐缓冲液的pH为6.8；
优选的，粗提物和α-葡萄糖苷酶25-38℃下孵育25-40分钟；
进一步优选的，粗提物和α-葡萄糖苷酶37℃下孵育30分钟；
优选的，所述超滤膜截留分子量为30000Da；
优选的，所述粗提物与α-葡萄糖苷酶体积比为4-6:1；
进一步优选的，所述粗提物与α-葡萄糖苷酶体积比为5:1；
优选的，酶失活步骤包括：酶加入甲醇/水，离心，收集离心液体，
优选的，所述甲醇和水的体积比为1:1，pH为3-4；
进一步优选的，所述甲醇和水混合物的pH为3.30。
4.一种对降糖化合物分离的方法，其特征在于，针对权利要求1-3任一项对植物中降糖功能化合物的筛选方法得到的降糖化合物，采用制备液相制备目标成分峰，按照目标峰收集相应组分，减压浓缩，得到样品。
5.如权利要求4所述的对降糖化合物分离的方法，其特征在于，当植物为岩白菜，葡萄糖苷酶α-葡萄糖苷酶时，溶剂系统为：叔丁基甲醚/正丁醇/甲醇/水(1:3:1:5，v/v)，上相为固定相，下相为流动相，转速为800转/min，流速为2.0mL/min，检测波长254nm，进样量：1.0g。
6.如权利要求4所述的对降糖化合物分离的方法，其特征在于，当植物为岩白菜，葡萄糖苷酶α-葡萄糖苷酶时，高效液相色谱液相条件为：Waters Symmetry C18 column(5μm,4.6mm×250mm,i.d.)，紫外检测波长254nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL；流动相采用水(A)和乙腈(B)，0-5min,88％A；5-15min，88％-70％A；15-20min，70％A；20-21min，70％-88％A；21-25min，12％B。
7.β-熊果苷在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
8.β-熊果苷在制备降糖药物中的应用，优选的，β-熊果苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。
9.6-O-没食子酰熊果苷在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
10.6-O-没食子酰熊果苷在制备降糖药物中的应用，优选的，6-O-没食子酰熊果苷在制备治疗糖尿病药物中的应用。
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