CN111787982A - 乙型肝炎免疫方案和组合物 - Google Patents
乙型肝炎免疫方案和组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111787982A CN111787982A CN201880089468.9A CN201880089468A CN111787982A CN 111787982 A CN111787982 A CN 111787982A CN 201880089468 A CN201880089468 A CN 201880089468A CN 111787982 A CN111787982 A CN 111787982A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hbc
- hbs
- hepatitis
- composition
- vector
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 345
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 238000002649 immunization Methods 0.000 title description 53
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title description 46
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 309
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 238
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 238
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 222
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 195
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 122
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 122
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 claims abstract description 110
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 108
- 208000016350 chronic hepatitis B virus infection Diseases 0.000 claims abstract description 106
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims abstract description 105
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims abstract description 101
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims abstract description 99
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims abstract description 95
- 241001217856 Chimpanzee adenovirus Species 0.000 claims abstract description 88
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 64
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 61
- 241000737598 recombinant Hepatitis B virus Species 0.000 claims abstract description 37
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 75
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 108010028930 invariant chain Proteins 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 123
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 99
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 75
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 71
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 66
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 62
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 60
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 51
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 46
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 45
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 43
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 43
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 40
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 40
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 39
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 37
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 37
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 37
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 36
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 36
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 35
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 230000004044 response Effects 0.000 description 26
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 25
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 24
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 21
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 18
- 238000011748 CB6F1 mouse Methods 0.000 description 17
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 16
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 16
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 12
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 12
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 12
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 11
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 10
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 10
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 9
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 9
- 238000013461 design Methods 0.000 description 9
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 8
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 7
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 7
- 230000000091 immunopotentiator Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 6
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 5
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 5
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 5
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 5
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 5
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 5
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 210000000852 deltoid muscle Anatomy 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 5
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 4
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 4
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 4
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 4
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 4
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 3
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 101001082628 Mus musculus H-2 class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 3
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 3
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 3
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 3
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 3
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 3
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 3
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 3
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 102400000124 Cyclin-dependent kinase 5 activator 1, p35 Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 101150029662 E1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N adefovir depivoxil Chemical compound N1=CN=C2N(CCOCP(=O)(OCOC(=O)C(C)(C)C)OCOC(=O)C(C)(C)C)C=NC2=C1N WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003205 adefovir dipivoxil Drugs 0.000 description 2
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 159000000013 aluminium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012512 bulk drug substance Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 229960000980 entecavir Drugs 0.000 description 2
- YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N entecavir hydrate Chemical compound O.C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)C1=C YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 229960005311 telbivudine Drugs 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N telbivudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- LDEKQSIMHVQZJK-CAQYMETFSA-N tenofovir alafenamide Chemical compound O([P@@](=O)(CO[C@H](C)CN1C2=NC=NC(N)=C2N=C1)N[C@@H](C)C(=O)OC(C)C)C1=CC=CC=C1 LDEKQSIMHVQZJK-CAQYMETFSA-N 0.000 description 2
- 229960004946 tenofovir alafenamide Drugs 0.000 description 2
- 229960004693 tenofovir disoproxil fumarate Drugs 0.000 description 2
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000990167 unclassified Simian adenoviruses Species 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000768957 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000823746 Acidianus ambivalens Uncharacterized 17.7 kDa protein in bps2 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000916369 Acidianus ambivalens Uncharacterized protein in sor 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000769342 Acinetobacter guillouiae Uncharacterized protein in rpoN-murA intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000823696 Actinobacillus pleuropneumoniae Uncharacterized glycosyltransferase in aroQ 3'region Proteins 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 101000786513 Agrobacterium tumefaciens (strain 15955) Uncharacterized protein outside the virF region Proteins 0.000 description 1
- 101000618005 Alkalihalobacillus pseudofirmus (strain ATCC BAA-2126 / JCM 17055 / OF4) Uncharacterized protein BpOF4_00885 Proteins 0.000 description 1
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 1
- 101000666833 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 20.8 kDa protein in FGF-VUBI intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000967489 Azorhizobium caulinodans (strain ATCC 43989 / DSM 5975 / JCM 20966 / LMG 6465 / NBRC 14845 / NCIMB 13405 / ORS 571) Uncharacterized protein AZC_3924 Proteins 0.000 description 1
- 101000977027 Azospirillum brasilense Uncharacterized protein in nodG 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000823761 Bacillus licheniformis Uncharacterized 9.4 kDa protein in flaL 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000819719 Bacillus methanolicus Uncharacterized N-acetyltransferase in lysA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000789586 Bacillus subtilis (strain 168) UPF0702 transmembrane protein YkjA Proteins 0.000 description 1
- 101000792624 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YbxH Proteins 0.000 description 1
- 101000790792 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YckC Proteins 0.000 description 1
- 101000819705 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxR Proteins 0.000 description 1
- 101000948218 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YtxJ Proteins 0.000 description 1
- 101000962005 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 23.6 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000718627 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Putative RNA polymerase sigma-G factor Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101000641200 Bombyx mori densovirus Putative non-structural protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 101000947633 Claviceps purpurea Uncharacterized 13.8 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101000785191 Drosophila melanogaster Uncharacterized 50 kDa protein in type I retrotransposable element R1DM Proteins 0.000 description 1
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 101000747704 Enterobacteria phage N4 Uncharacterized protein Gp1 Proteins 0.000 description 1
- 101000948901 Enterobacteria phage T4 Uncharacterized 16.0 kDa protein in segB-ipI intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000861206 Enterococcus faecalis (strain ATCC 700802 / V583) Uncharacterized protein EF_A0048 Proteins 0.000 description 1
- 101000805958 Equine herpesvirus 4 (strain 1942) Virion protein US10 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000790442 Escherichia coli Insertion element IS2 uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000769180 Escherichia coli Uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000788354 Escherichia phage P2 Uncharacterized 8.2 kDa protein in gpA 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000770304 Frankia alni UPF0460 protein in nifX-nifW intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 101000797344 Geobacillus stearothermophilus Putative tRNA (cytidine(34)-2'-O)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000748410 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in fumA 3'region Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 1
- 241000285387 HBV genotype A Species 0.000 description 1
- 102100030595 HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Human genes 0.000 description 1
- 108010093013 HLA-DR1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000772675 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) UPF0438 protein HI_0847 Proteins 0.000 description 1
- 101000631019 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Uncharacterized protein HI_0350 Proteins 0.000 description 1
- 101000768938 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.9 kDa protein in int-C1 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 108700024845 Hepatitis B virus P Proteins 0.000 description 1
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001082627 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen gamma chain Proteins 0.000 description 1
- 101000579123 Homo sapiens Phosphoglycerate kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 101000908757 Human adenovirus C serotype 2 Early 4 ORF4 protein Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000782488 Junonia coenia densovirus (isolate pBRJ/1990) Putative non-structural protein NS2 Proteins 0.000 description 1
- 101000811523 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 55.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 101000818409 Lactococcus lactis subsp. lactis Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in lacX 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101710084021 Large envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 101710173438 Late L2 mu core protein Proteins 0.000 description 1
- 101000878851 Leptolyngbya boryana Putative Fe(2+) transport protein A Proteins 0.000 description 1
- 101000976301 Leptospira interrogans Uncharacterized 35 kDa protein in sph 3'region Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000758828 Methanosarcina barkeri (strain Fusaro / DSM 804) Uncharacterized protein Mbar_A1602 Proteins 0.000 description 1
- 101001122401 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF3 Proteins 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 101001055788 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) Pentapeptide repeat protein MfpA Proteins 0.000 description 1
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 101000658690 Neisseria meningitidis serogroup B Transposase for insertion sequence element IS1106 Proteins 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101000740670 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Protein C42 Proteins 0.000 description 1
- 101710160102 Outer membrane protein B Proteins 0.000 description 1
- 241000282576 Pan paniscus Species 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 101000769182 Photorhabdus luminescens Uncharacterized protein in pnp 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 101710150114 Protein rep Proteins 0.000 description 1
- 101000961392 Pseudescherichia vulneris Uncharacterized 29.9 kDa protein in crtE 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000731030 Pseudomonas oleovorans Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001065485 Pseudomonas putida Probable fatty acid methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000748660 Pseudomonas savastanoi Uncharacterized 21 kDa protein in iaaL 5'region Proteins 0.000 description 1
- -1 QS21 or squalene) Chemical class 0.000 description 1
- 241001092473 Quillaja Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101710152114 Replication protein Proteins 0.000 description 1
- 101000711023 Rhizobium leguminosarum bv. trifolii Uncharacterized protein in tfuA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000948156 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 47.3 kDa protein in thcA 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000917565 Rhodococcus fascians Uncharacterized 33.6 kDa protein in fasciation locus Proteins 0.000 description 1
- 101000584469 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P1 Proteins 0.000 description 1
- 101000790284 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 488) Uncharacterized 9.5 kDa protein in DHFR 3'region Proteins 0.000 description 1
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 description 1
- 101000818096 Spirochaeta aurantia Uncharacterized 15.5 kDa protein in trpE 3'region Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 101000936719 Streptococcus gordonii Accessory Sec system protein Asp3 Proteins 0.000 description 1
- 101000766081 Streptomyces ambofaciens Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in unstable DNA locus Proteins 0.000 description 1
- 101000788499 Streptomyces coelicolor Uncharacterized oxidoreductase in mprA 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101001102841 Streptomyces griseus Purine nucleoside phosphorylase ORF3 Proteins 0.000 description 1
- 101000708557 Streptomyces lincolnensis Uncharacterized 17.2 kDa protein in melC2-rnhH intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 239000004376 Sucralose Substances 0.000 description 1
- 101000804403 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized HIT-like protein Synpcc7942_1390 Proteins 0.000 description 1
- 101000750910 Synechococcus elongatus (strain PCC 7942 / FACHB-805) Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator Synpcc7942_2319 Proteins 0.000 description 1
- 101000644897 Synechococcus sp. (strain ATCC 27264 / PCC 7002 / PR-6) Uncharacterized protein SYNPCC7002_B0001 Proteins 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 101000649826 Thermotoga neapolitana Putative anti-sigma factor antagonist TM1081 homolog Proteins 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 101710110895 Uncharacterized 7.3 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 101000827562 Vibrio alginolyticus Uncharacterized protein in proC 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000778915 Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 (strain RIMD 2210633) Uncharacterized membrane protein VP2115 Proteins 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036141 Viral hepatitis carrier Diseases 0.000 description 1
- 101710086987 X protein Proteins 0.000 description 1
- 101000916336 Xenopus laevis Transposon TX1 uncharacterized 82 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101001000760 Zea mays Putative Pol polyprotein from transposon element Bs1 Proteins 0.000 description 1
- 101000678262 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 10988 / DSM 424 / LMG 404 / NCIMB 8938 / NRRL B-806 / ZM1) 65 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- KZENBFUSKMWCJF-UHFFFAOYSA-N [5-[5-[5-(hydroxymethyl)-2-thiophenyl]-2-furanyl]-2-thiophenyl]methanol Chemical compound S1C(CO)=CC=C1C1=CC=C(C=2SC(CO)=CC=2)O1 KZENBFUSKMWCJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000329 aluminium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003263 anti-adenoviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008350 antigen-specific antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000001217 buttock Anatomy 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 101150071738 chb gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035071 co-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012297 crystallization seed Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 102000045429 human PGK1 Human genes 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011293 immunotherapeutic strategy Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000002956 necrotizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N sucralose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](Cl)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@]1(CCl)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CCl)O1 BAQAVOSOZGMPRM-QBMZZYIRSA-N 0.000 description 1
- 235000019408 sucralose Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 108700020534 tetracycline resistance-encoding transposon repressor Proteins 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 229940023147 viral vector vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000010464 virion assembly Effects 0.000 description 1
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
- A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/01—DNA viruses
- C07K14/02—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/00071—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
提供了治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:a)向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;b)向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和c)向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
Description
发明领域
本发明涉及特别适合于治疗慢性乙型肝炎的免疫方案,用于治疗慢性乙型肝炎的方法以及用于此类方案和方法中的组合物。所述方案和方法涉及施用包含递送乙型肝炎抗原的载体的组合物和包含重组乙型肝炎抗原蛋白的组合物。
发明背景
乙型肝炎病毒(HBV)感染是主要的公共卫生问题。全球近似2.57亿人被HBV感染[WHO,2017]。HBV感染的临床过程和结果在很大程度上取决于感染时的年龄以及病毒和宿主免疫应答之间复杂的相互作用[Ott, 2012; Maini, 2016]。因此,暴露于HBV可能导致急性肝炎,其自行解决或可能进展为各种形式的慢性感染,包括非活动性乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者状态、慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌(HCC) [Liaw, 2009]。成年群体中HBsAg的流行率>2%,其中东南亚和中国的比率为5-8%,且非洲地区的比率为>8%。15-40%的具有慢性乙型肝炎感染的人(定义为检测到超过6个月的血清HBsAg)将发展肝脏后遗症,其中肝硬化(LC)、肝代偿不全和HCC是主要并发症。
尽管在婴儿中实施普遍的预防性乙型肝炎免疫已经高度有效地降低许多流行国家中的乙型肝炎的发病率和流行率,但其尚未导致青少年和成人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的流行率的强烈降低,并且不预期其影响HBV相关的死亡,直到引入后数十年。在2015年,乙型肝炎导致887,000例死亡,主要死于肝硬化和肝癌[WHO, 2017]。
慢性乙型肝炎的临床管理旨在通过预防疾病进展并因此预防HCC发展来改善生存率和生活质量[Liaw, 2013]。当前的治疗策略主要基于长期抑制HBV DNA复制,以实现HBV诱导的肝病的稳定并预防进展。血清HBV DNA水平是所有当前治疗方式的基石终点。实现(可检测的)乙型肝炎e-抗原(HBeAg)的丧失是另一种有价值的生物标志物,然而无论是否存在抗HBs血清转化,HBsAg丧失通常被认为是代表“功能性治愈”的最佳终点,因为它表明HBV复制和病毒蛋白表达的深刻抑制[Block, 2017; Cornberg, 2017]。目前,对于CHB患者存在两种主要的治疗选项:通过聚乙二醇化干扰素α (PegIFNα)或通过核苷(核苷酸)类似物(NA)[EASL, 2017]。目的在于用有限持续时间治疗诱导长期免疫控制的PegIFNα可以实现持续的治疗外控制(off-treatment control),但持久的病毒学应答和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)丢失限于小部分的患者。此外,由于其耐受性差和长期安全性担忧,显著量的患者不适合进行这种类型的治疗。
NA通过经由抑制HBV聚合酶逆转录酶活性来抑制DNA复制而起作用。在欧洲获准用于HBV治疗的NAs包括恩替卡韦(ETV)、富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)和替诺福韦艾拉酚胺(TAF)(其与针对HBV抗性的高屏障相关),以及拉米夫定(LAM)、阿德福韦酯(adefovirdipivoxil)(ADV)和替比夫定(TBV)(其与针对HBV抗性的低屏障相关)。用具有对抗性的高屏障的有效NA进行治疗的主要优势是其可预测的长期高抗病毒效力(导致绝大多数顺应性患者中的HBV DNA抑制)以及其有利安全性概况。NA治疗的缺点是其长期治疗方案,因为NA通常没有实现HBV根除,并且NA停用可以导致HBV复发[Kranidioti, 2015]。代表功能性治愈的HBsAg丢失现在是CHB中的金标准治疗终点[Block, 2017; Cornberg, 2017],然而,其很少用NA治疗实现[Zoutendijk, 2011]。
由于HBsAg血清清除率低[Zoutendijk, 2011]和NA外病毒复发的风险高[Kranidioti, 2015],大多数患者被维持在长期或甚至无限NA疗法下,这可能与患者对疗法的顺从性降低、财务成本的增加以及长期暴露后药物毒性和耐药性突变的风险增加相关[Terrault, 2015]。因此,新的策略对于补充NA疗法以实现用有限方案的“功能性治愈”是必要的。
目前正在探索的新的治疗策略包括新的抗病毒策略以及加强HBV-特异性适应性免疫应答或活化先天性肝内免疫力的新型免疫治疗策略[Durantel, 2016]。迄今为止,这些实验治疗无一显示有效。在所评估的接种疫苗策略中,无一能够诱导对HBV核心抗原(HBcAg)的稳健的多功能CD8+ T-细胞应答,这对于恢复对该病毒的免疫控制是至关重要的[Lau, 2002; Li, 2011; Liang, 2011; Bertoletti, 2012; Boni, 2012]。关于基于HBV表面和/或PreS抗原的重组疫苗的早期努力初步诱导抗体应答,但没有HBV特异性CD8 + T-细胞应答,其中没有临床或病毒学益处[Jung, 2002; Vandepapelière, 2007]。表达HBV包膜的DNA疫苗无法恢复对HBsAg和HBcAg特异性的T细胞应答,因此并不降低NA停用后患者中复发的风险[Fontaine, 2015]。用新的递送系统,编码S、preS1/S2的DNA疫苗(引发疫苗)和MVA病毒载体疫苗(加强疫苗)没有显示T细胞诱导或病毒血症的降低,表明单独的HBV PreS和表面抗原不足以治愈患者[Cavenaugh, 2011]。更近来,已经研究了靶向多种HBV抗原的疫苗策略和新的递送系统。重组HBsAg/HBcAg疫苗导致仅一半患者中的病毒载量降低到非常低的水平(即~50 IU/ml) [Al-Mahtab, 2013]。编码S、preS1/S2、核心、聚合酶和X蛋白的DNA疫苗与遗传佐剂化的IL-12连同拉米夫定一起在一半患者中诱导多特异性T细胞应答以及病毒载量的>2 log10降低。然而,在任何患者中均未观察到HBsAg的定量检测的变化,HBsAg的丧失或HBsAg血清转化[Yang, 2012]。GS-4774疫苗,一种基于酵母的表达HBV的大S、核心和X蛋白的T细胞疫苗,在病毒抑制的CHB患者中没有提供HBsAg的显著降低[Lok,2016]。
仍然存在对可以清除HBsAg以允许患者安全地中止NA治疗而没有病毒学或临床复发的治疗的未满足需求。
发明概述
在一个方面,提供了治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤c)之前。任选地,可以重复步骤c)。在另一个实施方案中,步骤c)与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。
因此,在另一个方面,提供了治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用i)包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,ii)包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;和
b) 向所述人施用i)包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前。任选地,可以重复步骤b)。
在另一个方面,提供了免疫原性组合产品,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合产品包含:
a) 包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物,
其中所述方法包括将所述组合物依次或同时施用于所述人。
在另一个方面,提供了免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸、编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸和编码与所述HBc融合的人恒定链(hIi)的核酸,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在某些实施方案中,用于治疗慢性CHB的方法中的免疫原性组合物进一步包含一种或多种重组HBV蛋白抗原。
在一个进一步方面,提供了免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在某些实施方案中,用于治疗慢性CHB的方法中的免疫原性组合物进一步包含一种或多种重组HBV蛋白抗原。
在一个进一步方面,提供了免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、C-末端截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和含有MPL (3-D单磷酰基脂质A)和QS-21(从皂树(Quillaja saponaria)的树皮纯化的三萜糖苷)的佐剂,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在某些实施方案中,用于治疗慢性CHB的方法中的免疫原性组合物进一步包含一种或多种编码一种或多种HBV抗原的载体。
图/附图描述
图1 – 用ChAd155-HBV(有和没有hIi)初次免疫后14天和MVA-HBV加强免疫后7天的HBc-特异性(A)和HBs-特异性(B) CD8+ T-细胞应答(代表具有中值的个体动物)。
图2 – 用ChAd155-HBV(有和没有hIi)初次免疫后14天和MVA-HBV加强免疫后7天的HBc-特异性抗体应答(代表具有几何平均值滴度(GMT)的个体动物)。
图3 - 在50µl AS01B-4中配制的NaCl、HBc、HBs或HBc-HBs的第三次给药后7天的HBc和HBs-特异性CD4+ T-细胞应答(代表具有中值的5只动物/组的合并物)。
图4 - 在50µl AS01B-4中配制的NaCl、HBc、HBs或HBc-HBs的第三次给药后7天的HBs特异性CD8+ T-细胞应答(代表具有中值的5只动物/组的合并物)。
图5 - 在50µl AS01B-4中配制的NaCl、HBc、HBs或HBc-HBs的第三次给药后14天的抗HBc和抗HBs抗体应答(代表具有几何平均值和95% CI的个体动物)。
图6 - 在NaCl、HBc-HBs、HBc-HBs加上明矾、HBc-HBs加上AS01B-4或HBc-HBs加上AS01E-4的第三次给药后7天的HBs- (A)和HBc- (B)特异性CD4+和HBs-特异性CD8+ (C) T-细胞应答(代表具有中值的5只动物/组的合并物)。
图7 - 在NaCl、HBc-HBs、HBc-HBs加上明矾、HBc-HBs加上AS01B-4或HBc-HBs加上AS01E-4的第三次给药后14天的HBs- (A)和HBc- (B)特异性抗体应答(代表具有几何平均值和95% CI的个体动物)。
图8 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次和第四次给药后7天的HBc- (A)和HBs- (B)特异性CD8+ T-细胞应答(具有中值的个体动物)。
图9 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次和第四次给药后7天的HBc- (A)或HBs- (B)特异性CD4+ T-细胞应答(具有中值的个体动物)。
图10 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第四次给药后7天的肝脏浸润性淋巴细胞中的HBc-和HBs-特异性CD4+(A)和CD8+ (B) T-细胞(具有中值的3或4只动物的合并物)。
图11 – 引发加强疫苗方案后的HBc-特异性(A)和HBs-特异性(B)抗体应答(代表具有几何平均值的个体动物)。
图12 – PBS或ChAd155-mIi-HBV载体(109 vp)的第一次或第二次注射后2周的mIi-、HBc-和HBs-特异性IFNγ ELISpot应答。
图13 - 在第一次和第二次注射后2周在CB6F1小鼠中由ChAd155-mIi-HBV(109vp)的2次施用引发的抗mIi抗体应答(ELISA)。
图14 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次给药后7天和第四次给药后7天的HBc-特异性脾脏(A)或肝脏(B)CD8+ T细胞(具有中值的个体动物)。
图15 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次给药后7天和第四次给药后7天的HBc-特异性脾脏(A)或肝脏(B)CD4+ T细胞(具有中值的个体动物)。
图16 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次给药后7天和第四次给药后7天的HBs-特异性脾脏(A)或肝脏(B)CD8+ T细胞(具有中值的个体动物)。
图17 - 在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次给药后7天和第四次给药后7天的HBs-特异性脾脏(A)或肝脏(B)CD4+ T细胞(具有中值的个体动物)。
图18 - 在第23天、第65天和第93天(给药前,在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次给药后7天和第四次给药后7天)的抗HBs(A)和抗HBc(B)结合抗体应答。
图19 - 在第38天、第65天和第93天(在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第一次、第二次和第四次给药后7天,第1组、第2组、第3组)或在93天(第4组)在来自小鼠(第1组、第2组、第3组和第4组)的血清中测量的AST (A)和ALT (B)水平。
图20 - 在给药前,在NaCl、用随后重组蛋白的异源载体引发-加强或用同时重组蛋白的异源载体引发-加强的第二次给药后7天和第四次给药后7天的来自AAV2/8-HBV注射的小鼠的血清中的HBs抗原水平。
图21 - HBc-2A-HBs构建体的结构。
图22 - hIi-HBc-2A-HBs构建体的结构。
图23 - 在用各种比率的佐剂化的HBc、HBs和HBc/HBs的第2次免疫后7天的CB6F1小鼠的白细胞中的HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞的频率。
图24 - 在用各种比率的佐剂化的HBc、HBs和HBc/HBs的第3次免疫后7天的CB6F1小鼠的白细胞中的HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞的频率。
图25 - 在用各种比率的佐剂化的HBc、HBs和HBc/HBs的第2次和第3次免疫后7天的CB6F1小鼠的白细胞中的HBs-特异性CD8+ T-细胞的频率。
图26 - 在用各种比率的佐剂化的HBc、HBs和HBc/HBs的第2次免疫后14天的CB6F1小鼠中诱导的抗HBc和HBs体液应答。
图27 - 在用各种比率的佐剂化的HBc、HBs和HBc/HBs的第3次免疫后14天的CB6F1小鼠中诱导的抗HBc和HBs体液应答。
序列表
SEQ ID NO:1:HBs的氨基酸序列
SEQ ID NO:2:HBc截短物的氨基酸序列
SEQ ID NO:3:并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的氨基酸序列
SEQ ID NO:4:编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的核苷酸序列
SEQ ID NO:5:HBc-2A-HBs的氨基酸序列
SEQ ID NO:6:编码HBc-2A-HBs的核苷酸序列
SEQ ID NO:7:hIi的氨基酸序列
SEQ ID NO:8:编码hIi的核苷酸序列
SEQ ID NO:9:hIi-HBc-2A-HBs的氨基酸序列
SEQ ID NO:10:编码hIi-HBc-2A-HBs的核苷酸序列
SEQ ID NO:11:HBc的氨基酸序列
SEQ ID NO:12:hIi替代变体的氨基酸序列
SEQ ID NO:13:编码hI替代变体的核苷酸序列
SEQ ID NO:14:hIi-HBc-2A-HBs的替代核酸序列
SEQ ID NO:15:hIi-HBc-2A-HBs的替代氨基酸序列。
发明详述
定义
除非另有定义,否则本文所使用的所有技术和科学术语都具有如本领域普通技术人员所通常理解的相同含义。例如,本文所使用的术语是如"A multilingual glossary ofbiotechnological terms:(IUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel,B.和Klbl, H.编辑(1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)中所述进行定义。
在本说明书和随后的权利要求书全文中,除非上下文另有要求,否则词语“包含(comprise)”和变型诸如“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将被理解为暗示包括所述的整数或步骤或者整数或步骤组,但不排除任何其他的整数或步骤或者整数或步骤组。
在本说明书的文本全文中引用了几篇文献。本文所引用的每篇文献(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、指示等),无论在上文或下文,都由此通过引用以其整体并入。本文没有任何内容被解释为承认本发明无权由于在先发明而先于此类公开内容。在本发明的一个方面的上下文中提供的所有定义也适用于本发明的其他方面。
术语“蛋白”、“多肽”和“肽”在本文可互换使用,并且是指任何肽连接的氨基酸链,而无论长度、共翻译或翻译后修饰。融合蛋白(或“嵌合蛋白”)是包含两个或更多个肽连接蛋白的重组蛋白。通过连接最初编码分离蛋白的两个或更多个基因来产生融合蛋白。该融合基因的翻译产生单一融合蛋白。关于蛋白或多肽,重组意味着蛋白是从重组多核苷酸表达的。
术语“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用,并且是指由核苷酸单体制成的聚合物大分子。合适地,本发明的多核苷酸是重组的。重组意味着,所述多核苷酸是克隆、限制或连接步骤或其他程序中的至少一个的产物,所述其他程序产生不同于在自然界中发现的多核苷酸的多核苷酸。
异源核酸序列是指并非分离自、源自或基于宿主生物体中发现的天然存在的核酸序列的任何核酸序列。“天然存在的”意指在自然界中发现的且不是合成地制备或修饰的序列。当一个序列分离自一个来源、但是经过合适地修饰(例如,通过缺失、取代(突变)、插入或其他修饰)从而不破坏来源基因的正常功能时,所述序列“源自”所述来源。
合适地,本发明中使用的多核苷酸是分离的。“分离的”多核苷酸是从它的原始环境取出的多核苷酸。例如,如果它与天然系统中的一些或全部共存物质分离,则天然存在的多核苷酸是分离的。例如,如果将它克隆进不是它的天然环境的部分的载体中或如果将它包含在cDNA内,则认为多核苷酸是分离的。
如本文所用,与慢性乙型肝炎感染相关的术语“治疗”是指施用合适的组合物,其目的在于降低CHB的症状,防止CHB的进展或降低CHB的一种或多种可检测标志物的水平。术语“治疗”应相应地解释。例如,预防CHB的进展可以包括预防肝脏疾病的发作或稳定先前存在的肝脏疾病,如ALT(丙氨酸转氨酶)水平、肝纤维化或其他合适的可检测标志物所指示。CHB的其他标志物包括血清HBV DNA水平(其为病毒复制的指标)和血清HBs抗原水平(其为病毒载量的指标),因此治疗CHB可以包括将血清HBsAg(例如,如通过定量免疫测定法所确定)或HBV DNA(例如,如通过Cobas® HBV测定法(Roche)或等效法所确定)的水平降低至不可检测的水平(“清除” HBsAg或HBV DNA)。
如本文所用的“同时”施用是指相同的进行中的免疫应答期间的施用,且“同时地”应当相应地理解。优选地,同时施用两种组分(诸如同时施用包含载体的组合物和包含蛋白的组合物),然而,可以在另一组分的几分钟内(例如,在同一次医学预约或医生就诊)或几小时内施用一种组分。这种施用也被称为共同施用。分开组分的同时施用可以经由相同的施用途径(例如肌肉内注射)进行。或者,分开组分的同时施用可以经由不同的施用途径(例如肌肉内注射和皮内注射,肌肉内和鼻内施用,吸入和皮下施用等)进行。在一些实施方案中,同时施用可以是指腺病毒载体和蛋白组分的施用。在其他实施方案中,共同施用是指一种腺病毒载体和另一种病毒载体(例如痘病毒诸如MVA)的施用。在其他实施方案中,共同施用是指腺病毒载体和蛋白组分(其中蛋白组分任选地佐剂化)的施用。
“依次”施用是指施用第一组合物,随后在大量时间后施用第二组合物。两次依次施用之间的时间段为1周和12个月之间,例如2周和12周之间,例如1周、2周、4周、6周、8周或12周,6个月或12个月。更具体地,其在4周和8周之间,例如依次施用之间的时间段可以是4周。因此,依次施用涵盖在引发-加强设置中的第一次和随后的施用,即当在第一次施用引起的正在进行的免疫应答期间不实施第二组合物的施用时。
如本文所用,“免疫原性组合产品”是指在单一免疫方案(即引发-加强方案)中依次和/或同时施用的多种分开配制的免疫原性组合物,每种分开配制的免疫原性组合物都是免疫原性组合产品的组分。
关于百分比同源性,查看两个序列的成对比对,可以观察到两个序列之间的比对的相同残基('同一性')。可以通过将(a)同一性数目和参考序列的全长之间的商乘以100来计算同一性(或同源性)的百分比(即百分比同一性 = (同一性数目 x 100)/参考序列的长度。
方案
本公开涵盖一种疫苗方案,其提供了用编码乙型肝炎核心(HBc)和乙型肝炎表面(HBs)抗原的两种病毒载体的异源的引发-加强时间表,以诱导强烈的CD8+ T-细胞应答,其中依次或同时施用佐剂化的重组HBc和HBs蛋白,以诱导强烈的抗原特异性CD4+ T-细胞和抗体应答。公开的疫苗方案在概括人慢性HBV感染的病毒学和免疫学特征的小鼠模型中成功恢复了HBs-和HBc-特异性抗体和CD8+ T细胞应答以及HBs-特异性CD4+ T细胞应答,而没有相关的肝脏改变副作用的体征。
更具体地,提供了治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤c)之前。任选地,可以重复步骤c)。在某些实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是2至12周,例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周。在一个实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是4至8周。在一个实施方案中,根据该方法依次施用组合物之间的时间段是4周。在另一个实施方案中,步骤c)与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。在某些实施方案中,可以重复同时的步骤b)和c)。在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤b)在步骤a)之前,且步骤c)在步骤a)之后,或者与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤c)在步骤a)之前,且步骤a)在步骤b)之前。在另一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤c)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤a)之前。在一个进一步实施方案中,重复步骤c,且该方法的步骤以以下顺序实施:步骤a)、步骤b)、步骤c)、步骤c)。在某些实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是2至12周,例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周。在一个实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是4至8周。在一个实施方案中,根据该方法依次施用组合物之间的时间段是4周。
在某些实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd载体,其选自ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、ChAd157、Pan 5、Pan 6、Pan 7 (也称为C7)和Pan 9,尤其是ChAd63或ChAd155。在某些实施方案中,所述ChAd载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在某些实施方案中,将HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列或SEQ ID NO:12或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)。例如,将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7),或者将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:12)。在一个具体实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd155载体,其包含编码hIi、HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图22中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd载体,其包含编码SEQ ID NO:9的氨基酸序列或SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在某些实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列或SEQID NO:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个具体实施方案中,所述载体是ChAd155载体。因此,在某些实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:9的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在其他实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在其他实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ IDNO:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物包含MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的序列隔开。在一个具体实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物包含MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ IDNO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ IDNO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物包含MVA载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物包含MVA载体,其包含具有SEQ ID NO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物包含1:1比率的重组HBc和重组HBs。在另一个实施方案中,所述组合物中的HBc与HBs的比率为大于1,例如,HBc与HBs的比率可以是1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1或更大,尤其是3:1至5:1,诸如3:1、4:1或5:1,特别是4:1的比率。在具体实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物包含4:1或更大的比率的重组HBc和重组HBs。在某些实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物包含全长重组乙型肝炎表面抗原(HBs)(例如,SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)、在C-末端截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在某些实施方案中,截短的重组HBc包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149(例如SEQ ID NO:2或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)。在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物包含全长重组HBs、HBc的氨基酸1-149和包含MPL和QS-21的佐剂。例如,在该方法的步骤c)中施用的组合物包含全长重组HBs (SEQ ID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。
在一个进一步实施方案中,提供了治疗人中的CHB的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
c) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;和
d) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在本发明的另一个方面,提供了治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用i)包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,ii)包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;和
b) 向所述人施用i)包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在本发明的该方面的一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前。任选地,可以重复步骤a)。在一个实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤a),随后是步骤a),随后是步骤b)。在一个替代实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤a),随后是步骤b),随后是步骤a)。任选地,可以重复步骤b)。在一个实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤a),随后是步骤b),随后是步骤b)。在一个替代实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤b),随后是步骤a),随后是步骤b)。任选地,可以超过一次重复步骤b)。任选地,可以重复步骤a)和步骤b)两者。在本发明的该方面的一个实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤a),随后是步骤b),随后是步骤b),随后是步骤b)。在一个替代实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤b),随后是步骤a),随后是步骤b),随后是步骤b)。在一个进一步实施方案中,方法步骤以以下顺序实施:步骤a),随后是步骤a),随后是步骤b),随后是步骤b),任选地随后是步骤b)。在某些实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是2至12周,例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周。在一个实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是4至8周。在一个实施方案中,根据该方法依次施用组合物之间的时间段是4周。
因此,在本发明的该方面的另一个实施方案中,提供了治疗人中的CHB的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用i)包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,ii)包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;
b) 向所述人施用i)包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码HBs抗原的多核苷酸和编码HBc抗原的核酸,和,同时地,ii)包含重组HBs蛋白抗原、重组HBc蛋白抗原和佐剂的组合物;
c) 向所述人施用i)包含MVA载体的组合物,所述MVA载体包含编码HBs抗原的多核苷酸和编码HBc抗原的核酸,和,同时地,ii)包含重组HBs蛋白抗原、重组HBc蛋白抗原和佐剂的组合物;和
d) 向所述人施用i)包含MVA载体的组合物,所述MVA载体包含编码HBs抗原的多核苷酸和编码HBc抗原的核酸,和,同时地,ii)包含重组HBs蛋白抗原、重组HBc蛋白抗原和佐剂的组合物。
在某些实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是2至12周,例如2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周。在一个实施方案中,该方法的步骤之间的时间段是4至8周。在一个实施方案中,根据该方法依次施用组合物之间的时间段是4周。在一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物i)包含ChAd载体,其选自ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、ChAd157、Pan 5、Pan 6、Pan 7 (也称为C7)和Pan 9,尤其是ChAd63或ChAd155。在某些实施方案中,所述ChAd载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的序列隔开。在某些实施方案中,HBc与hIi融合。在一个具体实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物i)包含ChAd155载体,其包含编码hIi、HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图22中显示的结构的构建体的插入物。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在某些实施方案中,将HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列或SEQ ID NO:12或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)。例如,将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7),或者将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:12)。在一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物i)包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:9的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在另一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物i)包含ChAd155载体,其包含编码SEQ IDNO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物i)包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在另一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物i)包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID No:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在某些实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物ii)包含全长重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、在C-末段截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在某些实施方案中,截短的重组HBc包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149。在一个实施方案中,在该方法的步骤a)中施用的组合物ii)包含全长重组HBs (例如SEQ ID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (例如SEQ IDNO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。
在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物i)包含MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在一个具体实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含具有SEQ IDNO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在某些实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物ii)包含全长重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、在C-末段截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在某些实施方案中,截短的重组HBc包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149。在一个实施方案中,在该方法的步骤b)中施用的组合物ii)包含全长重组HBs (例如SEQ ID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (例如SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。
在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物i)包含MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在一个具体实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含具有SEQ IDNO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在某些实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物ii)包含全长重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、在C-末段截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在某些实施方案中,截短的重组HBc包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物ii)包含全长重组HBs (例如SEQ IDNO:1)、HBc的氨基酸1-149 (例如SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂。
在一个实施方案中,在该方法的步骤c)中施用的组合物i)包含MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在一个具体实施方案中,在该方法的步骤d)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤d)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,在该方法的步骤d)中施用的组合物i)包含MVA载体,其包含具有SEQ IDNO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在某些实施方案中,在该方法的步骤d)中施用的组合物ii)包含全长重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、在C-末段截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在某些实施方案中,截短的重组HBc包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149。在一个实施方案中,在该方法的步骤d)中施用的组合物ii)包含全长重组HBs (例如SEQ ID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (例如SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。
本发明还提供了诱导具有CHB的人中的细胞免疫应答和体液免疫应答、特别是CD4+应答和CD8+应答以及抗体应答的方法,所述方法包括以下步骤:
a) 向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤c)之前。任选地,可以重复步骤c)。在另一个实施方案中,步骤c)与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。在一个进一步实施方案中,诱导具有CHB的人中的细胞免疫应答和体液免疫应答、特别是CD4+应答和CD8+应答以及抗体应答的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用i)包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,ii)包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;和
b) 向所述人施用i)包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前。任选地,可以重复步骤b)。
本发明还提供了降低具有CHB的人中的血清HBsAg的水平和/或血清HBV DNA的水平的方法,所述方法包括以下步骤:
a) 向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤c)之前。任选地,可以重复步骤c)。在另一个实施方案中,步骤c)与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。
在一个进一步实施方案中,降低具有CHB的人中的血清HBsAg的水平和/或血清HBVDNA的水平的方法包括以下步骤:
a) 向所述人施用i)包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,ii)包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;和
b) 向所述人施用i)包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
在一个实施方案中,依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前。任选地,可以重复步骤b)。在一个进一步实施方案中,血清HBsAg的水平降低至不可检测的水平,如通过定量免疫测定法所测定。在另一个实施方案中,血清HBV DNA的水平降低至不可检测的水平,如通过Cobas® HBV测定法或等效法所测定。在另一个实施方案中,血清HBsAg的水平和/或血清HBV DNA的水平降低至并维持在不可检测的水平,持续至少6个月。在另一个实施方案中,血清HBsAg的水平和/或血清HBV DNA的水平降低至并维持在不可检测的水平,且ALT水平维持在正常范围内,持续至少6个月。
抗原
已经鉴定了至少九种HBV的基因型(A至I),其基因组差异超过8%。在给定HBV基因型内,已经鉴定了多种基因亚型,其差异为4-8%。合适地选择用于所公开的方法中的抗原以提供跨多种、优选所有HBV基因型的免疫学覆盖范围。乙型肝炎核心蛋白抗原(HBc)跨基因型和基因亚型高度保守,并且合适地选择乙型肝炎表面蛋白抗原(HBs)序列以包括关键的跨基因型保留的B-细胞表位,其允许诱导广泛的中和应答。合适地,用于公开的方法和组合物中的HBc和HBs的序列基于来自基因型/亚型A2的那些。
合适地,用于公开的方法和组合物中的HBs抗原源自小、中或大表面抗原蛋白。具体而言,合适的HBs抗原包含HBV adw2毒株、基因型A的小(S)蛋白。例如,合适的HBs抗原具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的226个氨基酸。当用作重组蛋白时,HBs抗原优选组装成病毒样颗粒。该抗原包括在充分研究的市售乙型肝炎预防性疫苗(Engerix B、Fendrix、Twinrix和其他)中,并且已被证明针对跨基因型的乙型肝炎是保护性的。优选地,重组HBs蛋白抗原从酵母表达并纯化以用于本发明的疫苗组合物和方法中。用于表达和纯化的合适方法是已知的,例如从EP1307473B1已知。
乙型肝炎核心蛋白(HBc)是包装病毒基因组的核衣壳的主要组分。该蛋白(183-185 aa长)在受感染细胞的细胞质中表达,并且保持未糖基化。HBc包含149个残基的组装结构域和在C末端的34-36个残基的RNA-结合结构域。用于公开的方法和组合物中的HBc抗原可以是全长的,或者可以包含C-末端截短的蛋白(缺乏RNA-结合C-末端),例如包括野生型核心抗原蛋白的组装结构域的145-149个氨基酸,例如野生型乙型肝炎核心抗原蛋白的氨基酸1-145、1-146、1-147、1-148或氨基酸1-149。截短的蛋白保留组装成核衣壳颗粒的能力。用于公开的方法和组合物中的合适的HBc抗原具有来自HBV adw2毒株、基因型A的氨基酸序列。当用作重组蛋白时,HBc抗原合适地在C-末端从野生型截短,具体而言,所述抗原可以具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列。优选地,重组HBc蛋白抗原从大肠杆菌表达并纯化以用于本发明的疫苗组合物和方法中。用于在大肠杆菌中重组表达病毒蛋白的方法是本领域中众所周知的。
当用作重组蛋白时,HBc抗原优选组装成病毒样颗粒。当从病毒载体表达时,HBc抗原可以是全长或截短的,例如合适地是全长HBc抗原(例如SEQ ID NO:11)。用于本文公开的方法中的重组HBs抗原的合适剂量为每剂10ug至每剂100ug,诸如每剂10ug、15ug、20ug、25ug、30ug、35ug、40ug、45ug、50ug、55ug、60ug、65ug、70ug、75ug、80ug、85ug、90ug、95ug或100ug。用于本文公开的方法中的重组HBc抗原的合适剂量为每剂10ug至每剂100ug,诸如每剂10ug、15ug、20ug、25ug、30ug、35ug、40ug、45ug、50ug、55ug、60ug、65ug、70ug、75ug、80ug、85ug、90ug、95ug或100ug。
抗原是在体内诱导免疫应答、尤其是抗体的产生的物质。抗原可以是外来起源的,即病原体起源的,或来自生物体本身,后者被称为自身或自体抗原。抗原可以通过MHC分子呈递在抗原呈递细胞的表面上。存在两类MHC分子,MHC I类(MHC-I)和MHC II类(MHC-II)。MHC-II分子是膜结合的受体,其在内质网中合成并在MHC II类隔室中离开内质网。为了防止内源性肽(即自身抗原)结合MHC-II分子并呈递以生成免疫应答,新生的MHC-II分子与另一种蛋白(恒定链)(其阻断MHC-II分子的肽-结合裂缝)组合。人恒定链(hIi,当在质膜上表达时也称为CD74)是一种进化保守的II型膜蛋白,其在细胞内和整个免疫系统中具有几种作用[Borghese, 2011]。当MHC II类隔室融合至含有吞噬和降解的外来蛋白的晚期内体时,恒定链被切割,仅留下与MHC-II分子结合的CLIP区域。在第二步中,通过HLA-DM分子除去CLIP,使MHC-II分子游离以结合外来蛋白的片段。一旦MHC II类隔室与质膜融合,所述片段就呈递在抗原呈递细胞的表面上,因此将外来抗原呈递给其他细胞,主要是T-辅助细胞。
已知当编码恒定链和所述抗原的融合体的腺病毒表达系统用于疫苗接种时,针对抗原的免疫应答增加(参见WO2007/062656,其也公开为US2011/0293704,并且出于公开恒定链序列的目的而通过引用并入),即恒定链增强抗原的免疫原性,且恒定链诸如hIi有时被称为识别该作用中的“遗传佐剂”。此外,已经证明所述腺病毒构建体可用于在引发-加强接种疫苗方案的背景下引发免疫应答(参见WO2014/141176,其也公开为US2016/0000904;和WO2010/057501,其也公开为US2010/0278904并且为了公开恒定链序列和编码恒定链序列的腺病毒载体的目的而通过引用并入)。具体而言,hIi序列和hIi具有增加CD8+ T-细胞应答的潜能[Spencer, 2014; Capone, 2014]。在某些实施方案中,用于本文公开的方法、用途和组合物中使用的载体内包括的核苷酸序列可以包括编码hIi的核苷酸序列。如公开的腺病毒载体ChAd155-hIi-HBV中可以包括的hIi的氨基酸序列示于SEQ ID NO:7中,且替代序列示于SEQ ID NO:12中。编码这些氨基酸序列的核苷酸序列示于SEQ ID NO:8和SEQID NO:13中。合适地,将编码hIi的核苷酸序列融合至编码HBc抗原的核苷酸序列,以产生其中hIi多肽N-末端融合至HBc抗原的融合蛋白。
载体
除了编码抗原蛋白的多核苷酸(在本文中也称为“插入物”)以外,用于本文公开的方法和组合物中使用的载体还可以包括常规的控制元件,其以允许其在用载体转染的细胞中转录、翻译和/或表达的方式与编码多核苷酸可操作连接。因此,将编码蛋白抗原的载体插入物多核苷酸并入具有合适控制元件的表达盒中。
表达控制序列包括适当的转录起始、终止、启动子和增强子序列;有效的RNA加工信号诸如剪接和聚腺苷酸化(聚A)信号,包括兔β-珠蛋白聚A;稳定细胞质mRNA的序列;增强翻译效率的序列(例如,Kozak共有序列);增强蛋白稳定性的序列;和当期望时,增强编码的产物的分泌的序列。
启动子是允许RNA聚合酶的结合并指导基因的转录的核苷酸序列。通常,启动子位于靠近所述基因的转录起始位点的基因的5'非编码区域中。在转录的起始中发挥功能的启动子内的序列元件经常通过共有核苷酸序列表征。启动子的实例包括但不限于来自细菌、酵母、植物、病毒和哺乳动物(包括人)的启动子。大量表达控制序列(包括内部的、天然的、组成型的、诱导型的和/或组织特异性的启动子)是本领域中已知的并且可以进行利用。
组成型启动子的实例包括TBG启动子、逆转录病毒劳斯肉瘤病毒(RSV) LTR启动子(任选地与RSV增强子一起)、巨细胞病毒(CMV)启动子(任选地与CMV增强子一起,参见,例如,Boshart等人, Cell, 41:521-530 (1985))、CASI启动子、SV40启动子、二氢叶酸还原酶启动子、β-肌动蛋白启动子、磷酸甘油激酶(PGK)启动子和EF1a启动子(Invitrogen)。合适地,所述启动子是CMV启动子或其变体,更合适地是人CMV (HCMV)启动子或其变体。
腺病毒载体
由于其在各种靶标组织中实现高度有效基因转移的能力以及其大转基因容量,腺病毒已被广泛用于基因转移应用。常规地,将腺病毒的E1基因缺失并用转基因盒替换,从而产生复制缺陷的重组病毒,所述转基因盒由选择的启动子、目标基因的cDNA序列和聚腺苷酸信号组成。在动物模型以及人中,已经显示人腺病毒载体是用于诱导对转基因的CD8+ T-细胞应答的有效载体。腺病毒具有广泛的嗜性,并且具有感染复制和非复制细胞的能力。基于人腺病毒的载体的临床应用的主要限制是中和抗体在普通群体中的普遍流行。分离自替代物种的腺病毒已被认为是潜在的疫苗载体,以绕开人中预先存在的抗腺病毒免疫力的问题。它们中,源自黑猩猩、大猩猩或倭黑猩猩的猿猴腺病毒可适用于递送抗原和在人中引发针对那些抗原的靶向T细胞和/或体液应答。猿猴腺病毒,包括源自黑猩猩的那些,已在临床研究中进行测试。黑猩猩腺病毒载体在人群中具有低血清阳性率/没有血清阳性率,已知在人中不引起病理性疾病,并且一些ChAd载体可以在先前用于生产临床级材料的细胞系、诸如人胚肾细胞293 (HEK 293)中生长至高滴度。
不能复制的或复制缺陷的腺病毒是不能复制的腺病毒,因为其已经被工程改造以至少包含功能缺失(或“功能丧失”突变),即在不将基因完全除去的情况下损害该基因的功能的缺失或突变,例如人工终止密码子的引入,活性位点或相互作用结构域的缺失或突变,基因的调节序列的突变或缺失等,或编码对于病毒复制必需的基因产物的基因的完全除去,诸如选自E1A、E1B、E2A、E2B、E3和E4 (诸如E3 ORF1、E3 ORF2、E3 ORF3、E3 ORF4、E3ORF5、E3 ORF6、E3 ORF7、E3 ORF8、E3 ORF9、E4 ORF7、E4 ORF6、E4 ORF4、E4 ORF3、E4 ORF2和/或E4 ORF1)的腺病毒基因中的一个或多个的完全除去。合适地,E1和E3基因被缺失。更合适地,E1、E3和E4基因被缺失。
用于本文公开的方法和组合物中的合适的载体是复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体,例如ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、ChAd157、Pan 5、Pan 6、Pan 7 (也称为C7)或Pan 9。此类毒株的实例描述于WO03/000283、WO2005/071093、WO2010/086189和WO2016/198621中。ChAd155载体(参见WO2016/198621,其出于公开ChAd155载体序列和方法的目的通过引用并入)属于与ChAd3载体(组C)相同的系统发生腺病毒组。在一个实施方案中,用于本文公开的方法和组合物中的载体是系统发生组C的ChAd载体,例如ChAd3或ChAd155。在一个具体实施方案中,本文公开的治疗慢性乙型肝炎的方法包括以下步骤:向人施用包含ChAd155载体的组合物,所述ChAd155载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸。用于本文公开的方法中的ChAd载体的合适剂量是每剂1x108 –1x1011个病毒颗粒(vp),例如每剂约1x108、5x108、1x109、5x109、1x1010、5x1010或1x1011个病毒颗粒(vp)。
更具体地,在一个实施方案中,用于本文公开的方法和组合物中的载体是复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体ChAd155,其编码源自以下两种HBV蛋白的序列的融合体:HBc(核心,核衣壳蛋白)和HBs(小表面抗原)。在某些具体实施方案中,所述载体是ChAd155,其编码HBc和HBs,其被SEQ ID NO:3(并入编码口蹄疫病毒(FMDV)的2A切割区域的序列的间隔区)隔开[Donnelly等人 2001](产生在上游蛋白的C-末端的23个氨基酸的尾部和在下游蛋白的N-末端的单个脯氨酸),用于将HBc和HBs加工成分开的蛋白。从表面抗原切割核心容许HBs的正确折叠,允许生成对表面抗原的抗体应答。或者,所述腺病毒载体可以是双重启动子(双顺反子)载体,以允许HBs和HBc抗原的独立表达。
在某些实施方案中,可以将编码HBc蛋白的基因的N-末端部分融合至编码人主要组织相容性复合体(MHC) II型相关的恒定链、p35同种型(即hIi或CD74)的基因。因此,用于本文公开的方法和组合物中的具体ChAd155载体包含编码具有图22中显示的结构的构建体的多核苷酸载体插入物,所述构建体包含hIi、HBc、2A和HBs。这种构建体的氨基酸序列在SEQ ID NO:9中给出,且编码该构建体的氨基酸序列的核苷酸序列在SEQ ID NO:10中给出。这种替代构建体的氨基酸序列在SEQ ID NO:15中给出,且编码该构建体的氨基酸序列的核苷酸序列在SEQ ID NO:14中给出。
修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体
在人和其他哺乳动物中复制缺陷的修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)源自牛痘病毒。其属于痘病毒家族,并且最初被开发来通过将牛痘病毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)细胞中传代超过570次,导致多次缺失,此后该病毒在人和其他哺乳动物中高度减毒且复制缺陷,来提高天花接种疫苗的安全性。复制缺陷发生在病毒粒子组装的后期,使得病毒和重组基因表达不受损,使MVA成为不能引起哺乳动物中的感染的有效的单轮表达载体。MVA随后已被广泛用作病毒载体,以在动物模型和人两者中诱导针对转基因的抗原-特异性免疫力。MVA的描述可见于Mayr A, 等人 (1978)和Mayr, A., 等人 (1975)。
在一个实施方案中,MVA源自从牛痘病毒在CEF细胞上的第571次传代获得的病毒种子批次460 MG。在另一个实施方案中,MVA源自病毒种子批次MVA 476 MG/14/78。在一个进一步实施方案中,MVA在1978年12月31日之前衍生或产生,并且没有病毒污染。用于本文公开的方法中的MVA载体的合适剂量是每剂1x106 – 1x109个噬斑形成单位(pfu),例如每剂约1x106、2x106、5x106、1x107、2x107、5x107、1x108、2x108、5x108或1x109 pfu。
在一个具体实施方案中,本文公开的治疗慢性乙型肝炎的方法包括以下步骤:向人施用包含MVA载体的组合物,所述MVA载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸。
更具体地,在一个实施方案中,用于本文公开的方法和组合物中的载体是MVA,其编码源自以下两种HBV蛋白的序列的融合体:HBc(核心核衣壳蛋白)和HBs(小表面抗原)。在某些实施方案中,用于本文公开的方法和组合物中的载体是MVA,其编码HBc和HBs,其被SEQID NO:3(并入编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列的间隔区)隔开(产生在上游蛋白的C-末端的23个氨基酸的尾部和在下游蛋白的N-末端的单个脯氨酸),用于将HBc和HBs加工成分开的蛋白。因此,用于本文公开的方法和组合物中的具体MVA载体包含编码具有图21中显示的结构的构建体的多核苷酸载体插入物,所述构建体包含HBc、2A和HBs。这种构建体的氨基酸序列在SEQ ID NO:5中给出,且编码氨基酸插入物构建体的核苷酸序列在SEQ ID NO:6中给出。
药物组合物
在某些实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd载体,其选自ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、ChAd157、Pan 5、Pan 6、Pan 7 (也称为C7)和Pan 9,尤其是ChAd63或ChAd155。在某些实施方案中,所述ChAd载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在某些实施方案中,将HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列或SEQ ID NO:12或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)。例如,将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7),或者将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ IDNO:12)。在一个具体实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd155载体,其包含编码hIi、HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图22中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd载体,其包含编码SEQID NO:9的氨基酸序列或SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在某些实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列或SEQ ID NO:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个具体实施方案中,所述载体是ChAd155载体。因此,在某些实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:9的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在其他实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在其他实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒载体的组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含MVA载体的组合物包含这样的MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列隔开。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc和HBs,其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的序列隔开。在一个具体实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含MVA载体的组合物包含这样的MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含MVA载体的组合物包含这样的MVA 载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含MVA载体的组合物包含这样的MVA 载体,其包含具有SEQ ID NO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含重组HBs抗原、重组HBc抗原和佐剂的组合物包含1:1比率的重组HBc和重组HBs。在另一个实施方案中,所述组合物中的HBc与HBs的比率为大于1,例如,HBc与HBs的比率可以是1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1或更大,尤其是3:1至5:1,诸如3:1、4:1或5:1,特别是4:1的比率。在具体实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含重组HBs抗原、重组HBc抗原和佐剂的组合物包含4:1或更大的比率的重组HBc和重组HBs。在某些实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含重组HBs抗原、重组HBc抗原和佐剂的组合物包含全长重组乙型肝炎表面抗原(HBs)(例如SEQ ID NO:1)、在C-末段截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在某些实施方案中,截短的重组HBc包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149(例如SEQ IDNO:2)。在一个实施方案中,用于治疗CHB的方法中使用的包含重组HBs抗原、重组HBc抗原和佐剂的组合物包含全长重组HBs、HBc的氨基酸1-149和包含MPL和QS-21的佐剂。例如,用于治疗CHB的方法中使用的包含重组HBs抗原、重组HBc抗原和佐剂的组合物包含全长重组HBs(SEQ ID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。
在可用于公开的方法中的本文公开的组合物合适地是药学上可接受的组合物。合适地,药物组合物将包括药学上可接受的载体。
包含ChAd或MVA载体的组合物可以通过将病毒载体颗粒悬浮于药学上或生理学上可接受的载体、诸如等渗盐水或其他等渗盐溶液中而制备用于施用。适当的载体对本领域技术人员将是显而易见的,并且将大部分取决于施用的途径。
包含重组蛋白抗原的组合物可以通过如下来制备:从表达它们的细胞培养物分离和纯化蛋白,悬浮于包含一种或多种盐、表面活性剂和/或冷冻保护剂的配制缓冲液中并冻干。例如,合适的配制缓冲液可以包含作为冷冻保护剂的糖或糖(例如蔗糖、海藻糖或三氯蔗糖)的混合物,和作为表面活性剂的非离子共聚物,例如泊洛沙姆。对于施用,将冻干的重组蛋白制剂在药学上或生理学上可接受的载体、诸如等渗盐水或其他等渗盐溶液中重构以用于注射或吸入。适当的载体对本领域技术人员将是显而易见的,并且将大部分取决于施用的途径。重构的组合物还可以包含佐剂或佐剂的混合物,在一个实施方案中,将冻干的重组蛋白在液体佐剂系统制剂中重构。
如本文所用的术语“载体”是指药理学上无活性的物质,诸如但不限于与治疗性活性成分一起施用的稀释剂、赋形剂或媒介物。液体载体包括但不限于无菌液体,诸如在水和油中的盐水溶液,所述油包括石油、动物、植物或合成来源的那些,诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。盐水溶液以及含水右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体,特别是用于可注射溶液。合适的药学载体的实例描述于E. W. Martin的"Remington's PharmaceuticalSciences"中。
除了组合物的载体或重组蛋白以外,用于本文公开的方法中使用的组合物可以包括佐剂系统。术语“佐剂”是指在细胞或体液水平加强、刺激、活化、强化或调节对组合物的抗原的免疫应答的试剂,例如,免疫佐剂刺激免疫系统对抗原的应答,但自身没有免疫学作用。无论组合物中包含的载体是否还编码“遗传佐剂”、诸如hIi,本文公开的组合物都可以在制剂中包括佐剂作为分开的成分。
合适的佐剂是可以增强具有慢性病况和颠覆的免疫能力的受试者中的免疫应答的那些。CHB患者的特征在于其无法对病毒产生有效的先天性和适应性免疫应答,这使得有效的疫苗开发有挑战性。在这些患者中,佐剂化的疫苗制剂的一种关键功能应当旨在将细胞介导的免疫应答引导至公认为对除去细胞内病原体至关重要的T辅助1(Th1)概况。
合适的佐剂的实例包括但不限于:无机佐剂(例如无机金属盐诸如磷酸铝或氢氧化铝)、有机非肽佐剂(例如皂苷,诸如QS21或角鲨烯)、基于油的佐剂(例如弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂)、细胞因子(例如IL-1β、IL-2、IL-7、IL-12、IL-18、GM-CFS和INF-γ)、微粒佐剂(例如免疫刺激性复合物(ISCOMS)、脂质体或可生物降解的微球)、病毒体、细菌佐剂(例如单磷酰脂质A (MPL),诸如3-脱-O-酰化单磷酰脂质A (3D-MPL)或胞壁酰基肽)、合成的佐剂(例如非离子的嵌段共聚物、胞壁酰基肽类似物或合成的脂质A)、合成的多核苷酸佐剂(例如聚精氨酸或聚赖氨酸)和含有未甲基化的CpG二核苷酸(“CpG”)的免疫刺激性寡核苷酸。具体而言,所述佐剂可以是有机非肽佐剂(例如皂苷,诸如QS21或角鲨烯)和/或细菌佐剂(例如单磷酰脂质A(MPL),诸如3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A (3D-MPL)
一种合适的佐剂是单磷酰脂质A (MPL),尤其是3-脱-O-酰化单磷酰脂质A (3D-MPL)。在化学上,它经常作为具有4、5或6个酰化链的3-脱-O-酰化的单磷酰脂质A的混合物供应。它可以通过在GB 2122204B中教导的方法纯化和制备,该参考文献也公开了二磷酰基脂质A及其3-O-去酰化变体的制备。已经描述了其他纯化的和合成的脂多糖[美国专利号6,005,099和EP0729473B1; Hilgers, 1986; Hilgers, 1987; 和EP0549074B1]。
皂苷也是合适的佐剂[Lacaille-Dubois, 1996]。例如,皂苷Quil A (源自南美洲树皂皮树的树皮)及其级分描述于美国专利号5,057,540和Kensil, 1996; 和EP 0 362279 B1。Quil A的纯化级分也被称为免疫刺激剂,诸如QS21和QS17;它们的生产方法公开在美国专利号5,057,540和EP 0 362 279 B1。QS21的用途进一步描述于Kensil, 1991。QS21和聚山梨醇酯或环糊精的组合也是已知的(WO 99/10008)。包含QuilA的级分(诸如QS21和QS7)的微粒佐剂系统描述于WO 96/33739和WO 96/11711中。
佐剂诸如上述的那些可以与载体诸如脂质体、水包油乳剂和/或金属盐(包括铝盐诸如氢氧化铝)一起配制。例如,可以将3D-MPL与氢氧化铝(EP 0 689 454)或水包油乳剂(WO 95/17210)一起配制;可以将QS21与含有胆固醇的脂质体(WO 96/33739)、水包油乳剂(WO 95/17210)或明矾(WO 98/15287)一起配制。
可以在公开的组合物中利用佐剂的组合,尤其是单磷酰脂质A和皂苷衍生物的组合(参见,例如,WO 94/00153; WO 95/17210; WO 96/33739; WO 98/56414; WO 99/12565;WO 99/11241),更特别是如WO 94/00153中公开的QS21和3D-MPL的组合,或其中将QS21在含有胆固醇的脂质体(DQ)中淬灭的组合物(如在WO 96/33739中公开的)。涉及在水包油乳剂中的QS21、3D-MPL和生育酚的有效佐剂制剂描述在WO 95/17210中,且是可用于公开的组合物中的另一种制剂。因此,合适的佐剂系统包括,例如,单磷酰脂质A(优选3D-MPL)与铝盐一起的组合(例如如在WO00/23105中所述)。另一种示例性的佐剂包含QS21和/或MPL和/或CpG。可以将QS21在含有胆固醇的脂质体中淬灭,如在WO 96/33739中公开的。
因此,用于公开的组合物中使用的合适的佐剂是AS01,含有MPL和QS-21的基于脂质体的佐剂。作为MPL和QS-21免疫增强剂的媒介物的脂质体由磷酸盐缓冲盐水溶液中的二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)和胆固醇构成。AS01B-4是AS01佐剂的一种特别优选的变体,其由免疫增强剂QS-21(从皂树的树皮纯化的三萜糖苷)和MPL (3-D单磷酰脂质A)与DOPC/胆固醇脂质体(作为这些免疫增强剂的媒介物)以及PBS溶液中的山梨醇构成。具体而言,单人剂量的AS01B-4 (0.5 mL)含有50µg QS-21和50µg MPL。AS01E-4对应于AS01B-4的两倍稀释液,即其每人剂量含有25µg QS-21和25µg MPL。
在一个实施方案中,提供了免疫原性组合产品,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合产品包含组合物,所述组合物包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在一个实施方案中,所述免疫原性组合产品包含组合物,所述组合物包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂。在一个实施方案中,所述免疫原性组合产品包含组合物,所述组合物包含重组HBs、截短的重组HBc和AS01佐剂。在一个具体实施方案中,所述免疫原性组合产品包含组合物,所述组合物包含4:1或更大的比率的截短的重组HBc和重组HBs,以及AS01佐剂,例如AS01B-4或AS01E-4。
在一个实施方案中,提供了免疫原性组合产品,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合产品包含:
a) 包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物,
其中所述方法包括将所述组合物依次或同时施用于所述人。
在另一个方面,提供了免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸、编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸和编码与所述HBc融合的人恒定链(hIi)的核酸,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在一个实施方案中,所述组合物包含ChAd载体,其选自ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、ChAd157、Pan5、Pan 6、Pan 7 (也称为C7)和Pan 9,尤其是ChAd63或ChAd155。在某些实施方案中,所述ChAd载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被并入编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列的间隔区隔开。在一个具体实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含编码hIi、HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图22中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:9的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在另一个实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在另一个实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个进一步方面,提供了免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在一个实施方案中,所述组合物包含MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被并入编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列的间隔区隔开。在一个具体实施方案中,所述组合物包含MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在一个实施方案中,所述组合物包含MVA载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,所述组合物包含MVA载体,其包含具有SEQ ID NO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个进一步方面,提供了免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、C-末端截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和含有MPL和QS-21的佐剂,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在一个实施方案中,所述组合物包含截短的重组HBc,其包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149。在一个实施方案中,所述组合物包含全长重组HBs、HBc的氨基酸1-149和包含MPL和QS-21的佐剂。更具体地,用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中使用的组合物包含全长重组HBs (例如SEQ ID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (例如SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂以及包含二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)和胆固醇的脂质体。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。在一个具体实施方案中,所述组合物包含4:1或更大的比率的截短的重组HBc和全长重组HBs以及AS01佐剂。在某些实施方案中,所述组合物包含4:1比率的由HBc的氨基酸1-149(例如SEQ ID NO:2)组成的截短的核心抗原和全长重组HBs(例如SEQ IDNO:1)以及AS01B-4。
在另一个方面,提供了免疫原性组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合物包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸、编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸和编码与所述HBc融合的人恒定链(hIi)的核酸,其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在一个实施方案中,所述组合物包含ChAd载体,其选自ChAd3、ChAd63、ChAd83、ChAd155、ChAd157、Pan 5、Pan 6、Pan 7 (也称为C7)和Pan 9,尤其是ChAd63或ChAd155。在某些实施方案中,所述ChAd载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被并入编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列的间隔区隔开。在一个具体实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含编码hIi、HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图22中显示的结构的构建体的插入物。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在某些实施方案中,将HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列或SEQ ID NO:12或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)。例如,将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:7),或者将HBc(例如SEQ ID NO:11)融合至hIi(例如SEQ ID NO:12)。在一个实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:9的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个替代实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含编码SEQ ID NO:15的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:10中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个替代实施方案中,所述组合物包含ChAd155载体,其包含具有SEQ ID NO:14中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个进一步方面,提供了免疫原性组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合物包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在一个实施方案中,所述组合物包含MVA载体,所述MVA载体包括载体插入物,其编码HBc和HBs,其被并入编码口蹄疫病毒的2A切割区域的序列的间隔区隔开。在一个具体实施方案中,所述组合物包含MVA载体,其包含编码HBc、2A和HBs的多核苷酸载体插入物,例如,编码具有图21中显示的结构的构建体的插入物。在某些实施方案中,所述载体插入物编码HBc(例如SEQ ID NO:11或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)和HBs(例如SEQ ID NO:1或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列),其被编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区(例如SEQ ID NO:3或与其具有至少98%同源性的氨基酸序列)的序列隔开。在一个实施方案中,所述组合物包含MVA载体,其包含编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸载体插入物。在一个实施方案中,所述组合物包含MVA载体,其包含具有SEQ ID NO:6中给出的核苷酸序列的多核苷酸载体插入物。
在一个进一步方面,提供了免疫原性组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合物包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、C-末端截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和含有MPL和QS-21的佐剂,其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。在一个实施方案中,所述组合物包含截短的重组HBc,其包含HBc的组装结构域,例如HBc的氨基酸1-149。在一个实施方案中,所述组合物包含全长重组HBs (例如SEQID NO:1)、HBc的氨基酸1-149 (例如SEQ ID NO:2)和包含MPL和QS-21的佐剂(例如AS01佐剂,例如AS01B-4或AS01E-4)。在某些实施方案中,重组蛋白HBs和HBc抗原呈病毒样颗粒的形式。
在一个实施方案中,提供了免疫原性组合产品在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合产品包含:
i. 包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
ii. 包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
iii. 包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物,
其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括将所述组合物依次或同时施用于所述人。
在一个具体实施方案中,免疫原性组合产品在制备用于治疗CHB的药物中的用途包括:
i. 包含复制缺陷的ChAd载体的组合物,所述复制缺陷的ChAd载体包含编码HBs的多核苷酸、编码HBc的核酸和编码hIi的多核苷酸;
ii. 包含MVA载体的组合物,所述MVA载体包含编码HBs的多核苷酸和编码HBc的核酸;和
iii. 包含重组HBs、截短的HBc和包含MPL和QS-21的佐剂的组合物,
其中治疗CHB的方法包括以下步骤:
a) 将组合物i.施用于所述人;
b) 将组合物ii.施用于所述人;和
c) 将组合物iii.施用于所述人,
其中依次实施该方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤c)之前。在一个进一步实施方案中,重复步骤c),且该方法的步骤以顺序a)、b)、c)、c)依次实施。在另一个实施方案中,步骤c)与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。
在一个进一步方面,本发明提供了试剂盒,其包含:
a) 包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物,
与用于依次或同时施用所述组分用于治疗CHB的说明书。
施用
在公开的方法的一个实施方案中,公开的组合物经由鼻内、肌肉内、皮下、皮内或局部途径施用。优选地,经由肌肉内途径施用。
鼻内施用是将组合物施用于包括肺的整个呼吸道的粘膜。更具体地,将组合物施用于鼻的粘膜。在一个实施方案中,通过喷雾或气溶胶的方式实现鼻内施用。肌肉内施用是指将组合物注射至个体的任何肌肉中。将示例性肌肉内注射施用至三角肌、股外侧肌或腹臀和背臀区域中。优选地,施用至三角肌中。皮下施用是指将组合物注射至下皮中。皮内施用是指将组合物注射至皮肤层之间的真皮中。局部施用是将组合物施用于皮肤或粘膜的任何部分而不用针或相当装置穿透皮肤。可以将组合物局部施用于嘴、鼻、生殖器区域和/或直肠的粘膜。局部施用包括施用方式,诸如舌下和/或经颊施用。舌下施用是在舌下施用组合物(例如,使用经口薄膜(OTF))。经颊施用是经由脸颊的颊粘膜施用载体。
本文公开的方法可以采取引发-加强免疫方案的形式。因此,本文公开了用于治疗CHB的方法中使用的组合物,所述治疗CHB的方法是引发-加强免疫方法。在许多情况下,免疫原性组合物的单次施用不足以生成有效保护或治疗上治疗疾病所需的许多长效免疫细胞。因此,为了建立针对特定病原体或疾病的持久和保护性免疫力或治疗或功能治愈给定疾病,可能需要用对于所述病原体或疾病特异性的生物制剂的重复攻击。包括重复施用针对相同病原体或疾病的免疫原性组合物或疫苗的施用方案被称为“引发-加强方案”。在一个实施方案中,引发-加强方案涉及针对乙型肝炎的免疫原性组合物的至少两次施用。免疫原性组合物的第一次施用被称为“引发”,并且相同免疫原性组合物或针对相同病原体的免疫原性组合物的任何随后施用被称为“加强”。应当理解,还考虑2、3、4或甚至5次施用用于加强免疫应答。引发和加强之间的时间段是任选地1周、2周、4周、6周、8周或12周。更具体地,其为4周或8周。如果进行多于一次加强,则在先前的加强后1周、2周、4周、6周、8周或12周、6个月或12个月施用随后的加强。例如,任何两次加强之间的间隔可以是4周或8周。
用于公开的方法中使用的组合物在治疗方案中施用,所述治疗方案涉及施用另外的免疫原性组分,其各自配制在不同的组合物中。所述组合物有利地在相同部位处或相同部位附近共位置地施用。例如,可以将所述组分肌肉内施用至相同侧或肢体(“同侧”施用)或相对侧或肢体(“对侧”施用)。例如,在对侧施用中,可以将第一组合物施用于左三角肌,并且可以将第二组合物依次或同时施用于右三角肌。或者,在同侧施用中,可以将第一组合物施用于左三角肌,并且可以将第二组合物也依次或同时施用于左三角肌。
一般制备方法
· ChAd155-hIi-HBV:
作为转基因插入重组复制缺陷的猿猴(黑猩猩来源的)腺病毒组C载体ChAd155中的DNA片段源自两种HBV蛋白抗原,核心核衣壳蛋白抗原HBc和小表面抗原HBs,其被口蹄疫病毒(FMDV)的自切割2A区域隔开[Donnelly等人 2001]。FMDV的2A区域允许将HBc-HBs融合体加工为分开的蛋白抗原。此外,已经将编码HBc蛋白的基因的N-末端部分融合至编码人主要组织相容性复合体(MHC) II类相关的恒定链p35同种型(hIi)的基因。hIi-HBV转基因序列的示意图提供于(图22)中。
2A区域(18个氨基酸)已经在其N-末端补充有6个氨基酸的间隔区;已经报道了该性质的间隔区增加2A介导的切割的效率。区域2A-介导的蛋白酶切割发生在2A氨基酸序列中恰好最后一个脯氨酸之前的2A的C-末端。脯氨酸保留在HBs蛋白的N-末端,而hIi-HBc-2A多肽保留脯氨酸切割位点之前的23个氨基酸。
由此,在蛋白酶加工之后,转基因的表达导致产生两个分开的多肽:hIi-HBc-间隔区-2A和HBs。为简洁起见,hIi-HBc-间隔区-2A多肽被称为hIi-HBc蛋白。当在细胞培养物中表达时,在细胞培养物上清液中检测到hIi-HBc抗原,而在细胞内级分中检测到HBs蛋白。
将以允许在宿主细胞中表达的方式可操作连接至调节组分的编码抗原蛋白的表达盒组装至如前所述的ChAd155载体质粒构建体中(参见WO2016/198621,其出于公开ChAd155载体序列和方法的目的通过引用并入),以得到ChAd155-hIi-HBV。hIi-HBV转基因在人巨细胞病毒(hCMV)启动子和牛生长激素聚腺苷酸化信号(BGH pA)的转录控制之下。表达盒编码HBs、HBc和hIi氨基酸序列,其中hIi序列融合至HBc的HBc N-末端,并且HBs和HBc序列被并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区隔开,用于将HBc和HBs加工成分开的蛋白。
为了生成复制缺陷的重组ChAd155腺病毒,缺失的腺病毒的复制和感染性所需的基因区域的功能必须由辅助病毒或细胞系(即,互补或包装细胞系)提供给重组病毒。一种特别合适的互补细胞系是Procell 92细胞系。Procell 92细胞系是基于表达腺病毒E1基因(在人磷酸甘油酸激酶-1 (PGK)启动子的控制下用Tet阻遏物转染)和G418-抗性基因的HEK293细胞(Vitelli等人. PLOS One (2013) 8(e55435):1-9)。Procell 92.S适合于在悬浮条件中生长,且可用于生产表达毒性蛋白的腺病毒载体。
ChAd155-hIi-HBV原料药的生产:
ChAd155-hIi-HBV病毒颗粒(原料药)的制备涉及感染时以5e5个细胞/ml细胞密度培养Procell-92.S细胞。然后,使用200 vp/细胞的感染复数用ChAd155-hIi-HBV主病毒种子(MVS)感染细胞。在通过包括阴离子交换色谱的多步骤过程细胞裂解、裂解物澄清和浓缩(过滤步骤)后,纯化ChAd155-hIi-HBV病毒收获物。
疫苗配制和填充
纯化的ChAd155-hIi-HBV散装原料药随后如下处理:
− 在配制缓冲液中稀释纯化的ChAd155-hIi-HBV原料药。
− 无菌过滤。
− 填充最终容器。
ChAd155-hIi-HBV疫苗是小瓶中含有的液体制剂。配制缓冲液包括Tris (10mM)、L-组氨酸(10mM)、NaCl (75mM)、MgCl (1mM)和EDTA (0.1mM)与蔗糖(5% w/v)、聚山梨醇酯-80 (0.02% w/v)和乙醇(0.5% w/v),其用HCl调节至pH 7.4(注射用水至最终体积)。
· MVA-HBV:
MVA-HBV是一种重组修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA),其携带两种不同的HBV蛋白:核心和S蛋白,其被2A肽隔开。MVA-HBV构建体由MVA-Red载体系统生成[Di Lullo等人2010],所述MVA-Red载体系统源自由Anton Mayr教授[Mayr, A.等人 1978]描述的来自减毒第571代(被称为MVA-571)的MVA病毒种子批次。
MVA-HBV转基因编码HBV的核心核衣壳蛋白HBc和小表面抗原HBs。HBc-HBs序列由口蹄疫病毒的自切割2A区域隔开,所述自切割2A区域允许融合蛋白加工成如上对于腺病毒载体所述的分开的HBc和HBs抗原。转基因的示意图提供于图21中。
在蛋白酶加工后,转基因的表达导致产生两个分开的多肽:HBc-间隔区-2A和HBs。为简洁起见,HBc-间隔区-2A多肽被称为HBc蛋白。
将表达盒亚克隆至MVA穿梭载体p94-elisaRen中,生成转移载体p94-HBV。p94-HBV含有抗原表达盒,其在牛痘P7.5早期/晚期启动子控制下,且侧接FlankIII-2区域和FlankIII-1区域,以允许通过同源重组插入MVA的delIII中。
重组病毒的产生基于CEF细胞中的体内重组的两个事件。
简而言之,原代鸡胚成纤维细胞(CEF)用MVA-Red感染,且然后用携带抗原转基因(以及在合成启动子sP的控制下的EGFP标记基因)的p94-HBV转染。第一重组事件发生在MVA-Red基因组和转移载体p94-HBV两者中均存在的同源序列(FlankIII-1和-2区域)之间,并且导致Hcred蛋白基因被转基因/eGFP盒替代。含有MVA-Green中间体的感染细胞通过FACS分选进行分离,并用于感染新鲜CEF。由第一重组产生的中间重组MVA携带转基因和eGFP盒两者,但由于存在重复的Z区域而不稳定。
因此,涉及Z区域的自发的第二重组事件发生并除去eGFP盒。所得的重组MVA是无色的,并且携带转基因盒。
最后,通过FACS分选无标记的重组病毒(MVA-HBV)感染的细胞,通过终末稀释克隆MVA-HBV,并通过常规方法在CEF中扩增。
MVA-HBV原料药的生产
在鸡胚成纤维细胞(CEF)细胞的原代细胞培养物中制备MVA-HBV病毒颗粒(原料药)至1E6和2E6细胞/ml之间的细胞密度,且然后用MHC-HBV主病毒种子(MVS)以0.01和0.05 PFU/细胞之间的感染复数感染。MVA-HBV病毒收获物通过多步骤过程纯化,所述多步骤过程基于通过离心沉淀、重悬浮和分级梯度离心步骤。
疫苗配制和填充
纯化的MVA-HBV散装原料药随后如下处理:
− 在配制缓冲液中稀释纯化的MVA-HBV DS。
− 填充最终容器。
MVA-HBV疫苗是小瓶中含有的液体制剂。配制缓冲液包括Tris(羟甲基)氨基甲烷pH7.7 (10mM)、NaCl (140mM)和注射用水至最终体积。
· HBs-HBc重组蛋白混合物:
HBc原料药的生产
HBc重组蛋白(原料药)制备过程由以下组成:使用重组大肠杆菌工作种子接种预培养烧瓶,随后为发酵过程和多步骤纯化过程,包括收获、提取、澄清以及多次色谱和过滤步骤。
HBs原料药的生产
HBs重组蛋白(原料药)制备过程由以下组成:使用重组酿酒酵母工作种子接种预培养烧瓶,随后为发酵过程和多步骤纯化过程,包括收获、提取、澄清以及多次色谱和过滤步骤。
疫苗配制和填充
将纯化的HBs原料药和HBc原料药在包括作为冷冻保护剂的蔗糖和作为表面活性剂的泊洛沙姆的配制缓冲液中稀释,填充并冻干在4 mL透明玻璃小瓶中。
实施例
非临床开发的目标:
强烈和功能性的CD8+和CD4+ T细胞应答,特别是对HBcAg的应答,已经与HBV清除和解决性感染相关[Boni, 2012; Li, 2011; Liang, 2011; Lau, 2002; Bertoletti, 2012]。此外,抗S抗体防止HBV传播至未感染的肝细胞,并且可以对于控制治疗后HBV复制反弹是关键的[Rehermann2005; Neumann2010]。提出的接种疫苗方案包括用编码乙型肝炎核心(HBc)和乙型肝炎表面(HBs)抗原的两种病毒载体化疫苗(ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV)的异源的引发-加强时间表,以诱导强烈的CD8+ T-细胞应答,连同依次或同时施用AS01B-4-佐剂化的HBc-HBs蛋白,以诱导CHB患者中的强烈的抗原特异性CD4+ T-细胞和抗体应答。这种疫苗诱导的免疫应答最终应转化为HBsAg浓度的实质下降或HBsAg损失(即HBsAg浓度低于可检测的水平),其被视为HBV感染的完全和持久控制的标志。
非临床开发的主要目标是:
· 证明研究性疫苗组分(例如ChAd155-hIi-HBV、MVA-HBV和HBc-HBs/AS01B-4)在未处理和HBV-耐受的小鼠中的免疫原性,以指导载体构建体的选择,hIi的包括,蛋白制剂的组成(包括佐剂系统)选择,和免疫的时间表。
· 证明完整疫苗方案在HBV耐受小鼠(非-GLP研究)中和在NZW兔中进行的重复剂量GLP毒性研究中的安全性
· 记录所述载体在接种疫苗的动物中的生物分布(GLP研究)。
选择动物模型的非临床策略和基本原理
首先在健康小鼠中生成免疫原性包装,以指导载体构建体的选择,蛋白制剂(包括佐剂系统)选择,和免疫的时间表。
大多数临床前实验在近交CB6F1 (C57Bl/6和BALB/c小鼠的杂交种)小鼠(先前用于评估AS01佐剂化候选疫苗和腺病毒载体引发的T-细胞应答的模型[Lorin, 2015])中进行,以支持载体构建体的选择,蛋白制剂(包括佐剂系统)选择和免疫的时间表。
使用HLA.A2/DR1小鼠(对人HLA-A2和HLA-DR1分子转基因的)来评估候选疫苗诱导HBc-特异性CD8+ T-细胞应答的能力,因为在近交CB6F1小鼠中未检测到针对该抗原的此类应答。这最可能是由于研究疫苗的HBc序列中不存在H2-Kb MHC-I-限制的免疫优势表位(MGLKFRQL),所述表位基于HBV基因型A/亚型adw的序列,其具有一个氨基酸差异,其中在表位(MGLKIRQL)中异亮氨酸(I)替代苯丙氨酸(F),如Riedl等人[Riedl, 2014]所报道。在同一HLA.A2/DR1小鼠中评估HBV特异性CD4+ T-细胞和抗体。
可用于评价治疗性疫苗的效力的动物模型受限制,因为HBV仅自然感染黑猩猩和人。已经开发了小鼠模型,其中通过将病毒基因组整合于宿主基因组中(HBV转基因小鼠)或者通过用复制性HBV DNA或表达HBV基因组的载体感染来表达整个HBV基因组。尽管这些不重现慢性HBV发病机理,但可以在肝脏中检测到病毒复制中间体和蛋白,并且观察到免疫耐受性。
AAV2/8-HBV-转导的HLA.A2/DR1鼠模型概括慢性HBV感染的病毒学和免疫学特征,并且进行选择[Dion, 2013; Martin, 2015]
· 以证明疫苗方案可以克服对HBs和HBc抗原的耐受性。
· 以评估可能靶向表达HBcAg的肝细胞的肝脏浸润性HBc-特异性CD8+ T-细胞对肝脏的组织学(苏木精-伊红[H&E]染色)和ALT/AST水平的影响。
最后,已经选择用于生物分布(Sprague-Dawley大鼠)和毒理学研究(NZW兔)的标准动物模型来评估候选疫苗,因为尽管它们不是感染模型,但它们能够产生药理学相关的对载体表达和重组蛋白的免疫应答,并且是用于疫苗的毒性测试的公认的物种。这些物种先前也已用于AS01B佐剂及其免疫增强剂MPL和QS-21的毒理学测试程序中。
非临床药理学
进行许多临床前研究,以证明研究性疫苗组分(例如ChAd155-hIi-HBV、MVA-HBV和HBc-HBs/AS01B-4)在肌肉内施用后在未处理和HBV-耐受的动物中的免疫原性。首先分别对于病毒载体(ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV)和HBV重组蛋白佐剂化的研究性疫苗(HBc-HBs/AS01B-4)评估抗原-特异性免疫原性概况。在第二阶段中评估FTiH(在人中首次)中所意欲的完整疫苗方案的免疫原性和安全性概况。
材料
非临床免疫原性研究中使用的AS01佐剂系统的剂量
AS01B-4佐剂系统由免疫增强剂QS-21(从皂树的树皮纯化的三萜糖苷)和MPL (3-D单磷酰脂质A)与作为这些免疫增强剂的媒介物的脂质体以及山梨醇构成。具体而言,单人剂量的AS01B-4 (0.5 mL)含有50µg QS-21和50µg MPL。人剂量的1/10(即50µl)是在小鼠中注射的体积(对应于5µg QS-21和MPL)。
AS01E-4佐剂系统对应于AS01B-4稀释液的两倍稀释液。人剂量的1/10(即50µl)是在小鼠中注射的体积(对应于2.5µg QS-21和MPL)。
细胞免疫应答 - 细胞内细胞因子染色(ICS)
在不同时间点收集的外周血白细胞(PBL)、脾细胞或肝脏浸润性淋巴细胞的新鲜合并物用11aa重叠、覆盖HBc或HBs序列的15-聚体的合并物离体刺激6小时。通过ICS测量表达IFN-γ和/或IL-2和/或肿瘤坏死因子(TNF)-α的CD4+或CD8+ T-细胞的量来评估HBc和HBs-特异性细胞应答。考虑ICS结果的技术接受标准包括获取的CD8+ T或CD4+ T细胞的最小数量> 3000个事件。或者,在用与ICS相同的肽再刺激脾细胞后进行IFN-γ-ELISpot。
体液免疫应答 - 酶联免疫吸附测定(ELISA)
通过ELISA对在不同时间点来自免疫小鼠的血清测量HBc-和HBs-特异性抗体应答。简而言之,96-孔板用HBc或HBs抗原包被。各个血清样品然后以连续稀释度添加,并孵育2小时。然后添加生物素化的抗小鼠F(ab)’2片段,并通过与链霉抗生物素蛋白辣根过氧化物酶复合物和过氧化物酶底物邻苯二胺二盐酸盐/H2O2孵育来揭示抗原-抗体复合物。对于每个时间点和每种抗原(HBc、HBs),在log10滴度(包括组、研究和相互作用作为固定效应)上且使用异质方差模型(假设各组之间没有相同的方差)拟合方差分析(ANOVA)模型。该模型用于估算几何平均值(及其95% CI)以及几何平均比率及其95% CI。由于未设置任何预先定义的标准,该分析是描述性的,并且在不调整多重性的情况下计算各组之间的比率的95% CI。
ALT/AST量度
使用以下商业试剂盒定量小鼠血清中的ALT和AST的水平:
· 丙氨酸转氨酶活性测定试剂盒Sigma Aldrich目录号MAK052
· 天冬氨酸转氨酶活性测定试剂盒Sigma Aldrich目录号MAK055。
血清HBs抗原定量
使用来自BIO-RAD(目录号72566)的Monolisa Anti-HBs PLUS和国际标准(AbbottDiagnostics)定量小鼠血清中的循环的HBs抗原。
组织病理学分析
收集肝脏(每个肝脏一个叶)并保存在10%甲醛固定剂中。用于显微镜检查的所有样品都基于RITA指南[Ruehl-Fehlert, 2003; Kittel 2004; Morawietz 2004]进行修整,包埋在石蜡中,以近似4微米的厚度切片,并用H&E染色。根据METAVIR评分系统进行组织学活性(坏死性炎性病变)和纤维化的分级[Bedossa, 1996; Mohamadnejad, 2010; Rammeh,2014]。根据Desmet评分进行炎性细胞灶的分级,如Buchmann等人[Buchmann, 2013]所述。
在涉及每个单独研究的部分中详述每个研究中进行的统计分析。
实施例1 –在HLA.A2/DR1转基因小鼠模型中评估ChAd155-HBV(有和没有hIi)引发
和MVA-HBV加强
目标
该实验的主要目标是确定用一个剂量的ChAd155-HBV(有或没有hIi)引发、随后加强剂量的MVA-HBV是否能够在对于人MHC-I/II分子转基因的HLA.A2/DR1小鼠中诱导针对HBc的强烈CD8+ T细胞应答。此外,进行有和没有hIi的ChAd155-HBV之间的头对头比较,以研究hIi序列进一步增加HBc-特异性CD8+ T-细胞应答的潜能,如先前对于其他抗原所报道[Spencer, 2014; Capone, 2014]。还评估HBs-特异性CD8+ T-细胞应答以及HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞和抗体应答。
研究设计
HLA.A2/DR1小鼠(每组11只小鼠)在第0天通过肌肉内途径用108 vp的ChAd155-HBV(有和没有hIi)进行免疫,并在第28天用107 pfu的MVA-HBV(没有hIi)进行加强(表1)。在第一次免疫后14天(14dpI)(引发)或第二次免疫后7天(7dpII)(加强)处死小鼠,以分别测定血清和脾脏中的HBc-和HBs-特异性体液和细胞免疫应答。
表1 在HLA.A2/DR1小鼠中ChAd155-HBV(有和没有hIi)引发/MVA-HBV(没有hIi)加强实验的研究设计。
组 | 引发 | 加强 | 处死 |
1 | 10<sup>8 </sup>vp ChAd155-HBV (第0天) | 10<sup>7</sup> pfu MVA-HBV (第28天) | 14dpI和7dpII |
2 | 10<sup>8</sup> vp ChAd155-hIi-HBV (第0天) | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV (第28天) | 14dpI和7dpII |
3 | NaCl (第0天) | NaCl (第28天) | 14dpI和7dpII |
统计分析
在包括2组(有或没有hIi)和实验(引发后3次实验的结果和加强后2次实验的结果)作为固定参数的log10 CD8+ T-细胞频率上并使用异质方差模型拟合ANOVA模型。该模型用于估算几何平均值(及其95% CI)以及几何平均比率及其95% CI。
结果
HBc-和HBs-特异性T-细胞应答
ChAd155-HBV和ChAd155-hIi-HBV载体两者均诱导HBc-特异性CD8+ T-细胞应答(图1A)。hIi的存在倾向于诱导更高的针对HBc抗原的CD8+ T-细胞应答。用ChAd155-hIi-HBV免疫的小鼠的MVA-HBV加强诱导HBc-特异性CD8+ T-细胞应答的3倍增加,而对于ChAd155-HBV组未观察到增加。
两种载体均诱导HBs-特异性CD8+ T-细胞应答,且MVA-HBV加强作用在用ChAd155-HBV构建体引发的小鼠中更明显(图1B)。
HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞应答低(数据未显示)。
该实验的结果与两个其他类似的独立实验的那些一致(数据未显示)。尽管由于与动物的可得性相关的限制,每项独立研究都没有统计学能力以比较各组,但进行对3项研究的宏分析,以比较引发后和MVA-HBV加强后由ChAd155-HBV vs. ChAd155-hIi-HBV诱导的HBc-特异性CD8+ T-细胞应答。
统计分析显示,在引发后和MVA-HBV加强后,由使用ChAd155-hIi-HBV构建体的引发-加强方案的HBc-特异性CD8+ T-细胞应答显著高于由使用ChAd155-HBV的引发-加强方案引发的那些,支持与HBc序列融合的人恒定链序列的使用。
a. 剂量I后14天,几何平均比率(hIi/无hIii)被估算为3.27 (95% CI:1.57 –6.79)
b. 剂量II后7天,几何平均比率(hIi/无hIii)被估算为6.25 (95% CI:2.11 –18.51)。
HBc-和HBs-特异性抗体应答
用ChAd155-HBV免疫诱导HBc-特异性抗体,但用ChAd155-hIi-HBV免疫则不诱导。在MVA-HBV加强后,在用ChAd155-HBV或ChAd155-hIi-HBV引发的组之间,抗HBc抗体应答是相当的(图2)。未检测到HBs-特异性抗体应答(数据未显示)。
结论
当与ChAd155-HBV相比时,ChAd155-hIi-HBV诱导最高的针对HBc的CD8+ T-细胞应答,并且在MVA-HBV加强后,该应答进一步增加。
实施例2 - 在近交小鼠(CB6F1)中的HBc-HBs/AS01B-4免疫原性研究
目标
该免疫原性研究的主要目标是确定当在AS01B-4中共同配制时HBc和HBs蛋白是否能够诱导HBc-和HBs-特异性的体液和T细胞应答。
研究设计
6至8周龄的CB6F1小鼠(每组30只小鼠)在第0、14和28天用50µl AS01B-4中配制的HBc、HBs或HBc-HBs(列于下表2中)肌肉内免疫3次。在第二次和第三次给药后7天,对新鲜PBL测量HBc-和HBs-特异性T细胞应答,并且在第二次和第三次给药后14天测量抗HBs和抗HBc抗体应答。
表2:治疗组
组 | 抗原 |
1 | 1µg HBc/AS01<sub>B-4</sub> (HBc/AS01<sub>B-4</sub>) |
2 | 1 µg HBs/AS01<sub>B-4</sub> (HBs/AS01<sub>B-4</sub>) |
3 | 1µg HBc + 1µg HBs/AS01<sub>B-4</sub>(HBc-HBs/AS01<sub>B-4</sub>) |
4 | NaCl |
统计分析
使用异质方差模型对具有1个因子(组)的log10值使用ANOVA进行统计分析,即,对于因子的不同水平,未假定相同的方差。已通过时间点(第2次和第3次免疫后)、T细胞应答(CD4+和CD8+ T细胞)和抗原特异性(HBs和HBc)进行该分析。使用对log10值的反向转换获得各组之间的几何平均比率及其95%置信区间(CI)的估算值。使用Tukey的方法进行多重性的调整。提供了多重性调整的95%置信区间。
结果
HBc-和HBs-特异性T-细胞应答
用HBc/AS01B-4、HBs/AS01B-4或HBc-HBs/AS01B-4免疫小鼠诱导针对两种抗原的有效CD4+T-细胞应答(图3)。与HBc/AS01B-4相比,HBc-HBs/AS01B-4制剂的HBc-特异性CD4+ T-细胞应答的幅度显著更低(2.3倍,P-值= 0.0468),表明HBs对HBc-特异性T-细胞应答的干扰。尽管如此,HBc-特异性CD4+ T-细胞的水平仍然被认为是强烈的,远高于对照组中的水平。在HBs-特异性CD4+ T-细胞应答的水平上未观察到此类干扰。
HBs/AS01B-4或HBc-HBs/AS01B-4制剂诱导强烈的HBs-特异性CD8+ T-细胞应答(图4)。候选疫苗无一诱导可检测到的HBc-特异性CD8+ T-细胞应答(数据未显示),如用该小鼠模型所预期,因为我们的疫苗候选物的HBc序列中不存在H2-Kb MHC-I限制的免疫优势表位- MGLKFRQL- 如其他人[Riedl, 2014]所报道。
HBc-和HBs-特异性抗体应答
三种制剂各自都诱导高水平的抗HBc和/或抗HBs抗体(参见图5)。与HBc/AS01B-4相比,在HBc-HBs/AS01B-4制剂中观察到显著更低水平的抗HBc抗体应答(2.35倍,P <0.0001)。相反,HBc-HBs/AS01B-4组合中HBc的存在并不负面影响抗HBs抗体应答(图5)。
结论
所有制剂(HBs/AS01B-4、HBc/AS01B-4和HBc-HBs/AS01B-4)都是免疫原性的,并诱导针对两种抗原的细胞和体液应答,除了HBc-特异性CD8+ T细胞应答(如该模型中所预期)。由HBc-HBs/AS01B-4制剂引发的抗HBc应答低于由HBc/AS01B-4引发的应答,表明在该小鼠模型中与HBs的存在相关的干扰。进一步评估这种干扰;参见实施例7,其中HBc与HBs的4:1的比率能够恢复抗HBc免疫应答(抗体和特异性CD4+ T-细胞)而不影响抗HBs抗体应答。选择该制剂HBc-HBs 4-1/AS01B-4用于随后的用佐剂化蛋白制剂的非临床免疫原性研究。
实施例3 - 近交小鼠(CB6F1)中的佐剂比较实验
目标
该实验的主要目的是比较以4:1的比率与不同佐剂(明矾,AS01B-4或AS01E-4)一起配制或不含佐剂的HBc和HBs抗原诱导针对两种抗原的强烈CD4+ T-细胞和体液应答的能力。
研究设计
6至8周龄的CB6F1小鼠(对于第1-4组35只小鼠,且对于第5组25只小鼠)在第0、14和28天用与明矾、AS01B-4或AS01E-4配制的HBc-HBs抗原(4µg-1µg)(列于下表3中)肌肉内免疫3次。与AS01B-4相比,AS01E-4佐剂系统含有一半量的免疫增强剂QS-21和MPL。在第二次和第三次给药后7天,在用肽的合并物离体再刺激6小时后,对新鲜PBL测量HBc-和HBs-特异性T细胞应答,并且在第二次和第三次给药后14天通过ELISA测量抗HBs和抗HBc抗体应答。
表3:治疗组
组 | 抗原 |
1 | HBc-HBs 4-1 |
2 | HBc-HBs 4-1/Alum |
3 | HBc-HBs 4-1 /AS01<sub>B-4</sub> |
4 | HBc-HBs 4-1/AS01<sub>E-4</sub> |
5 | NaCl |
统计分析
对于统计分析,在log2 T细胞频率上和在log10抗体滴度上(包括组作为固定效应)并使用异质方差模型拟合ANOVA模型(各组之间未假定相同方差,从分析中排除NaCl组)。该模型用于估算几何平均值(及其95% CI)以及几何平均比率(AS01B相比于3个其他组)及其95%CI。对在第三次给药后14天测量的HBc-和HBs-特异性CD4+ T细胞频率(主要终点)和抗HBs抗体滴度(次要终点)应用Dunnett氏调整。对于其他应答/时间点,分析是描述性的,并且没有应用任何调整。
结果
HBc-和HBs-特异性T-细胞应答
与明矾-佐剂化和未佐剂化的制剂相比,AS01-佐剂化制剂引发显著更高的HBc特异性CD4+ T-细胞应答(图6B)。在AS01B-4和AS01E-4制剂之间未观察到统计学显著的差异。如先前在CB6F1小鼠中所观察到,无论测试的制剂如何,都无法检测到HBc-特异性CD8+ T-细胞应答(数据未显示)。
与明矾-佐剂化和未佐剂化的制剂相比,AS01-佐剂化的制剂的HBs-特异性CD4+ (图6A)和CD8+ (图6C) T-细胞应答显著更高。在AS01B-4和AS01E-4制剂之间未观察到统计学显著的差异。
HBc和HBs-特异性抗体应答
与明矾-佐剂化和未佐剂化的制剂相比,AS01-佐剂化制剂引发显著更高的抗HBc和抗HBs总IgG应答(图7)。由AS01B-4和AS01E-4-佐剂化的制剂引发的总IgG抗体应答没有统计学差异。
结论
总体而言,在CB6F1小鼠中,与基于明矾的制剂或未佐剂化的制剂相比,AS01佐剂系统(AS01E-4或AS01B-4)诱导针对HBc和HBs的最高体液和细胞应答。
实施例4 - HLA.A2/DR1转基因小鼠中的ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV/HBs-HBc/
AS01B-4疫苗方案的免疫原性评估
目标
该研究的目标是评估由以下组成的不同疫苗方案的免疫原性:用ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV病毒载体引发/加强,随后为或者两个剂量的HBc-HBs 4-1/AS01B-4蛋白,或与两个剂量的HBc-HBs 4-1/AS01B-4蛋白共同施用。
研究设计
第一组小鼠(N=16)在第0天用ChAd155-hIi-HBV免疫,随后在28天后用MVA-HBV免疫。这种引发/加强病毒载体方案后间隔14天注射两个剂量的HBc-HBs 4-1µg/AS01B-4(表4)。第二组小鼠(N=16)在第0天用ChAd155-hIi-HBV和HBc-HBs 4-1/AS01B-4免疫,随后在28天后用与HBc-HBs 4-1/AS01B共同施用的MVA-HB加强。间隔14天进行两次随后的MVA-HBV和HBc-HBs4-1/AS01B的共同免疫(表4)。向第三组小鼠(N=8)注射NaCl作为阴性对照。在第二次免疫后7天(7dpII)和第四次免疫后7天(7dpIV)处死小鼠,以测定HBc-和HBs-特异性的体液(血清)和细胞免疫应答(对脾细胞和肝脏浸润性淋巴细胞)。
该研究是描述性的,并且没有进行统计学样品大小论证和分析。
表4:治疗组
组 | 第0天 | 第28天 | 第42天 | 第56天 | 处死 |
1 | 10<sup>8 </sup>vp ChAd155-hIi-HBV | 10<sup>7</sup> pfu MVA-HBV | HBc-HBs 4-1/AS01<sub>B-4</sub> | HBc-HBs 4-1/AS01<sub>B-4</sub> | 7dpII和7dpIV |
2 | 10<sup>8</sup> vp ChAd155-hIi-HBV+ HBc-HBs 4-1/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV +HBc-HBs 4-1/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV +HBc-HBs 4-1/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV +HBc-HBs 4-1/AS01<sub>B-4</sub> | 7dpII和7 dpIV |
3 | NaCl | NaCl | NaCl | NaCl | 7dpII和7 dpIV |
结果
HBc-和HBs-特异性CD8+ T-细胞应答(脾细胞)
当与在7dpII仅注射ChAd155-hli-HBV/MVA-HBV(第1组)相比时,将HBc-HBs 4-1/AS01B-4与ChAd155-hIi-HBV载体共同施用作为引发并与MVA-HBV载体共同施用作为加强(第2组)诱导HBc-特异性CD8+ T-细胞应答的4倍增加(图8)。在两组中均诱导类似的针对HBs的CD8+ T-细胞应答(图8)。
在7dpIV时,随后施用HBc-HBs/AS01B-4后,HBc-、但非HBs-特异性CD8+ T-细胞应答明显加强(与7dpII相比增加5倍)(第1组)。当共同施用两个额外剂量的MVA-HBV/HBc-HBs4-1/AS01B-4时,未观察到HBc-或HBs-特异性CD8+ T-细胞的进一步增加(第2组)。
HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞应答(脾细胞)
在引发-加强ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV免疫后检测到低水平的HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞(中值分别为0.17%和0.11%)(第1组),而当在7 dpII时HBc-HBs 4-1/AS01B-4与引发-加强ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV共同施用时(第2组)观察到针对两种抗原的有效应答(图9)。
在7dpIV时,在ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV引发-加强后随后施用HBc-HBs 4-1/AS01B-4(第1组)显著增强HBc-和HBs特异性CD4+ T-细胞应答(中值分别为1.64%和2.32%)。最后,当将两个额外剂量的MVA-HBV和HBc-HBs/AS01B-4共同施用于已经用与HBc-HBs/AS01B-4在同一时间点共同施用的引发加强ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV接种疫苗的小鼠时(第2组),观察到HBs-特异性CD4+ T-细胞的稳健增加。在该同一组中,HBc-特异性CD4+ T-细胞保持在与7dpost II相同的水平。
在肝脏浸润性淋巴细胞中检测到的HBc-和HBs-特异性T-细胞应答
最后一次免疫后7天,通过ICS研究疫苗诱导的T-细胞应答在肝脏中的存在。为了具有足够数目的肝脏浸润性淋巴细胞来进行体外再刺激和ICS,对于每个数据点构成灌注3或4个肝脏后回收的细胞的合并物。由于数据点数目少,未进行统计分析,并且结果是描述性的。
两种疫苗方案均引发在接种疫苗的小鼠的肝脏中可检测到的HBc-和HBs-特异性CD4+ T-细胞(图10)。在用两种疫苗方案接种疫苗的动物的肝脏中测量到强烈的HBc-特异性CD8+ T-细胞应答,而测量到低得多的HBs-特异性CD8+ T-细胞的频率。
HBc-和HBs-特异性抗体应答
ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV与HBc-HBs 4-1/AS01B-4的共同施用(第2组)在7dpII诱导最高量的抗HBc抗体(图11)。MVA-HBV + HBc-HBs/AS01B-4的随后注射不进一步增加抗HBc抗体应答的水平(7dpIV)。在用ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV初步免疫的小鼠中注射HBc-HBs/AS01B-4后,在7dpIV观察到抗HBc-特异性抗体应答的明显增加(第1组)。HBc-HBs/AS01B-4组分的存在看起来在引发有效的抗HBs抗体的时间表中是重要的,因为在用 ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV免疫后在动物中未检测到抗HBs抗体应答(图11)。在最后一次免疫后,在共同施用组(第2组)中观察到最高的应答幅度。
结论
在HLA.A2/DR1转基因小鼠中,ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV引发低、但可检测的HBc-特异性CD4+ T-细胞应答,而HBc-HBs 4-1/AS01B-4明显增强该应答。用ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV的初始引发-加强免疫诱导有效的HBc-和HBs-特异性CD8+ T-细胞应答,其中依次给予的HBc-HBs/AS01B-4加强后,HBc-特异性应答进一步增加。
有趣的是,当ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV与HBc-HBs 4-1/AS01B-4共同施用时,在只有两次免疫后诱导高水平的HBc-和HBs-特异性CD4+和CD8+ T-细胞以及抗体。用MVA-HBV +HBc-HBs/AS01B-4的进一步免疫并不进一步增加这些应答的水平。
此外,在用两种疫苗方案接种疫苗的动物的肝脏中也检测到疫苗诱导的HBc-和HBs-特异性CD4+和CD8+ T-细胞。
实施例5 - 对由ChAd155载体编码的“恒定链”序列Ii的T和B-细胞耐受性的评估:
在CB6F1小鼠中使用编码小鼠Ii序列(mIi)的ChAd155构建体
目标
使用编码小鼠Ii序列(mIi)的ChAd155构建体:ChAd155-mIi-HBV,在CB6F1小鼠中进行免疫原性研究,以研究同源模型中T-和B-细胞对“恒定链”序列Ii的耐受性。
研究设计
用高剂量(109 vp)的ChAd155-mIi-HBV载体进行2次肌肉内免疫后(第0天和第14天),通过IFN-γ ELISpot(在脾细胞中)和通过ELISA(在血清中)评估自体mIi-特异性免疫应答的诱导(表5)。
表5:治疗组
组 | 制剂 |
1 | ChAd155-mIi-HBV (10<sup>9</sup> vp),在第0天和第14天 |
2 | PBS,在第0天和第14天 |
方法
对于T-细胞应答,在IFN-γ-ELISpot测定中,使用重叠11个氨基酸、涵盖鼠Ii序列且排列成合并物的15聚体肽作为抗原。对于抗体应答,分别使用市售的鼠Ii重组蛋白和对鼠Ii特异性的单克隆抗体来包被ELISA板并作为阳性对照。作为“疫苗使用”的阳性对照,在IFN-γ- ELISpot测定中监测HBc-和HBs-特异性T-细胞应答。
结果
在用ChAd155-mIi-HBV第一次和第二次免疫后,测量有效的HBc-特异性T-细胞应答和较低、但可检测的HBs-特异性T-细胞应答。值得注意的是,在该构建体中添加HBc Kb-限制的优势I类表位(MGLKFRQL),以监测该小鼠品系中的HBc-特异性CD8+ T-细胞应答,并在ELISpot测定中用该特定序列再刺激脾细胞。在第一次或第二次免疫后2周,在任何动物中都未检测到抗mIi抗体(图13)和mIi-特异性T-细胞(图12),表明保留对mIi序列的免疫耐受性。
实施例6 – ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV/HBc-HBs/AS01B-4疫苗方案在AAV2/8-HBV
转导的HLA.A2/DR1小鼠中的免疫原性和安全性的评估
目标
AAV2/8-HBV-转导的HLA.A2/DR1鼠模型概括慢性HBV感染的病毒学和免疫学特征。在该模型中,用携带能够复制的HBV DNA基因组的腺相关病毒血清型2/8 (AAV2/8)载体转导小鼠的肝脏。
5x1010vg (病毒基因组)的AAV2/8-HBV载体的单尾静脉注射导致AAV2/8-HBV-转导的小鼠的肝脏中的HBV复制和基因表达[Dion; 2013]。在注射后最长达1年,在肝脏中检测到HBV DNA复制中间体、HBV RNA转录物和HBc抗原,而没有相关的显著的肝脏炎症。可以最长达1年在血清中检测到HBs和HBe抗原以及HBV DNA。此外,在慢性HBV感染的该替代模型中观察到对HBV抗原的免疫耐受性的建立。
在AAV2/8-HBV转导的HLA.A2/DR1小鼠中进行的该研究的目标是
· 证明疫苗方案可以克服对HBs和HBc抗原的耐受性。
· 评估可能靶向表达HBcAg的肝细胞的肝脏浸润性HBc-特异性CD8+ T-细胞对肝脏的组织学(H&E染色)以及ALT和AST水平(作为肝脏功能的替代参数)的影响。
研究设计
测试两种不同的疫苗方案,其基于用单独或与HBc-HBs 4-1/AS01B-4组合的ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV(两者均编码HBV核心[HBc]和表面[HBs]抗原)的依次免疫,随后为两个额外剂量的HBc-HBs 4-1/AS01B-4 (单独或与MVA-HBV组合)(表6)。
来自第1、2和3组的HLA.A2/DR1小鼠在第0天用5x1010vg的AAV2/8-HBV载体(静脉内施用)转导,而第4组充当免疫原性的阳性对照(接种疫苗前未建立耐受性)。
来自第1组的动物(N=21)在第31天用ChAd155-hIi-HBV免疫,随后在第58天用MVA-HBV免疫。在这种引发/加强病毒载体方案后第72天和第86天注射两个剂量的HBc-HBs 4-1µg/AS01B-4(表6)。
来自第2组的动物(N=21)在第31天用ChAd155-hIi-HBV免疫,并与HBc-HBs 4-1/AS01B-4共同施用,随后在第58天用与HBc-HBs 4-1/AS01B共同施用的MVA-HBV加强。在第72天和第86天进行两次随后的MVA-HBV和HBc-HBs 4-1/AS01B的共同免疫(表6)。
来自第3组的动物(N=21)在第31、58、72和86天用NaCl注射作为阴性对照。
来自第4组的动物(N=8)接受与第2组相同的疫苗方案(除了它们未用AAV2/8-HBV进行转导)。
所有疫苗都肌肉内注射。
在第23、65和93天(第1、2和3组)的血清中测量HBs循环抗原的水平。
通过ELISA在第23天(AAV2/8-HBV转导后)、第65天(第二次免疫后7天)和第93天(第四次免疫后7天)在来自所有动物的血清中测量HBs-和HBc-特异性抗体应答。在离体再刺激和ICS后(第1、2和3组),在第65天(9只动物/组)和第93天(12只动物/组)在脾细胞和肝脏浸润性淋巴细胞中评估HBs-和HBc-特异性CD4+和CD8+ T细胞应答。对于来自第4组的动物(8只动物),仅在第93天进行这些免疫原性读出。
关于肝脏相关的安全性参数,在第38、65和93天在血清中测量AST和ALT的水平,并且在第65和93天进行用H&E染色的肝脏切片的显微镜检查,以检测潜在的疫苗相关的组织病理学变化或炎症(第1、2和3组)。
表6:治疗组
组 | N* | 第0天 | 第31天 | 第58天 | 第72天 | 第86天 |
1 | 21 | AAV2/8-HBV | 10<sup>8 </sup>vp ChAd155-hIi-HBV | 10<sup>7</sup> pfu MVA-HBV | HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> |
2 | 21 | AAV2/8-HBV | 10<sup>8</sup> vp ChAd155-hIi-HBV + HBc-HBs4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV+ HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV +HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV + HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> |
3 | 21 | AAV2/8-HBV | NaCl | NaCl | NaCl | NaCl |
4 | 8 | 无载体 | 10<sup>8</sup> vp ChAd155-hIi-HBV + HBc-HBs4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV+ HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV +HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> | 10<sup>7 </sup>pfu MVA-HBV + HBc-HBs 4-1µg/AS01<sub>B-4</sub> |
*在第65天之前在第3组中发现1只小鼠死亡,且在第93天之前在第2组中发现1只小鼠死亡。
统计分析
AST和ALT水平
使用非结构化协方差结构,在log10-转化的酶促活性值上拟合重复量度(包括性别、天、组和三个两两相互作用)的ANOVA模型。验证模型假设。从模型中除去在5%水平上不显著的相互作用。对于两种酶,最终模型包括性别、天、组以及组和天之间的相互作用。从该模型推导在每个时间点每组的酶促活性的几何平均值。通过还从该模型推导的几何平均值比率(GMR)报告目标组比较。所有这些统计值都呈现有双侧95%置信区间。当计算这些GMR时未考虑多重性。
所有分析都使用SAS 9.2进行。
体液应答
进行描述性统计以计算应答者的数目。抗HBc或抗HBs抗体应答的应答性的截止值基于第3组(AAV2/8-HBV转导但未接种疫苗)中计算的几何平均滴度定义。
细胞应答
进行描述性分析以定义HBc-、HBs-特异性CD4+或CD8+ T细胞的应答者的数目。应答性的截止值被定义为第3组(AAV2/8-HBV转导但未接种疫苗)中进行的测量值的第95个百分位数。
结果
HBc-特异性CD8+和CD4+ T细胞
在AAV2/8-HBV-转导的HLA-A2/DR1小鼠中,在所有测试的时间点,在没有免疫的情况下,HBc-特异性CD8+或CD4+ T细胞的背景水平非常低至检测不到(第3组)。
用单独(第1组)或与HBc-HBs 4-1/AS01B-4组合(第2组)的ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV载体的免疫诱导HBc-特异性CD8+ T细胞(在II后7天,分别有6/7和9/9个应答者),表明绕过对HBc抗原的耐受性(图14A)。单独或与MVA-HBV组合的两个额外剂量的HBc-HBs 4-1/AS01B-4仅适度增加这些HBc-特异性CD8+ T细胞应答,如在第四次给药后7天所测量,在第1组中达到1%的中值频率,且在第2组中达到1.45%的中值频率。由与第2组中相同的疫苗方法诱导的HBc-特异性CD8+ T细胞的频率在来自第4组的非转导的HLA.A2/DR1小鼠中更高(8/8个应答者,其中在IV后7天频率高~4倍),如由于对HBc抗原的免疫耐受性所预期。在接种疫苗的小鼠的肝脏中也检测到HBc-特异性CD8+ T细胞,其中概况与脾脏中相同(图14B)。
两种疫苗方案在AAV2/8-HBV-转导的HLA-A2/DR1小鼠(第1组和第2组)中引发的HBc特异性CD4+ T细胞非常低至检测不到,而在未转导的小鼠(第4组)中测量到稳健的应答,表明疫苗方案在这些实验条件下没有克服对HBc抗原的CD4+ T细胞耐受性(图15A,B)。
HBs-特异性CD8+和CD4+ T细胞
在AAV2/8-HBV转导的小鼠中,用单独(第1组)或与HBc-HBs 4-1/AS01B-4组合(第2组)的ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV载体的免疫引发HBs-特异性CD8+ T细胞,其中在单独或与MVA-HBV组合的两个额外剂量的HBc-HBs 4-1/AS01B-4后的强度没有进一步增加(图16A)。在接种疫苗时间表结束时(第四次给药后7天),在来自第1组和第2组的动物中测量的HBs-特异性CD8+ T细胞的频率接近于在第4组中检测到的频率(未转导的HLA.A2/DR1小鼠,IV后7天的中值= 0.62%,5/8个应答者),表明对HBs抗原的T细胞耐受性得到克服。在大多数接种疫苗的动物中,在来自第1、2和4组的动物的肝脏中检测到HBs-特异性CD8+ T细胞(图16B)。
在施用单独或与载体组合的HBc-HBs 4-1/AS01B-4后,在第2组中从第二次接种疫苗后7天起以及在第1组中从第四次接种疫苗后7天起,诱导HBs-特异性CD4+ T细胞(图17A)。与来自第1组的动物中使用的疫苗时间表(IV后7天的中值= 1.34%,11/12个应答者)相比,来自第2组的动物中使用的疫苗时间表引发HBs-特异性CD4+ T细胞的频率高约3倍(IV后7天的中值= 3.7%,11/11个应答者),达到与第4组中相似的水平(未转导的HLA.A2/DR1小鼠,IV后7天的中值= 3%,8/8个应答者),表明对HBs抗原的T细胞耐受性得到完全克服。与全身CD4+ T细胞应答相似,在所有接种疫苗的动物中,在来自第1、2和4组的动物的肝脏中检测到HBs-特异性CD4+ T细胞(图17B)。
HBs-和HBc-特异性抗体应答
在注射AAV2/8-HBV载体后23天,在HLA.A2/DR1小鼠中未检测到抗HBs抗体应答,表明对HBs抗原的强烈的体液耐受性。用单独的ChAd155-hIi-HBV和MVA-HBV载体免疫(第1组)没有破坏这种耐受性,而与HBc-HBs 4-1/AS01B-4组合的载体的免疫导致在第65天21只动物中的15只中的抗HBs抗体应答的诱导(第2组)(图18A)。在第1组中进一步施用2个剂量的HBc-HBs4-1/AS01B-4引发可检测到的抗HBs抗体(在第93天116.8的几何平均滴度(GMT)和8/12个应答者),并且第2组中的2个额外剂量的与HBc-HBs 4-1/AS01B-4组合的MVA-HBV将抗HBs抗体应答的强度进一步增加直至775的GMT (11/11个应答者),而在第93天保持比来自第4组的非-AAV2/8-HBV转导的动物(GMT= 3933)中低~5倍。
类似地,只有当在疫苗方案中存在HBc-HBs 4-1/AS01B-4组分时,才诱导抗HBc抗体应答,其中与第1组(GMT=442.8;12/12个应答者)相比,在第93天来自第2组的动物中测量的水平高3倍(GMT=1335,5;11/11个应答者)(图18B)。用与第2组中相同的疫苗方案,在非转导小鼠(第4组)中诱导的抗HBc抗体滴度更高(~ 27倍,GMT=357822)。
这些结果显示,疫苗方案中的佐剂化蛋白组分的存在对于打破对HBc和HBs抗原两者的体液耐受性至关重要。此外,在第2组中使用的疫苗方案(含有HBc-HBs 4-1/AS01B-4的4次施用)引发最高的抗HBc和抗HBs抗体应答,但仍然低于非-AAV2/8-HBV转导的小鼠(第4组)中。
AST/ALT水平
作为肝脏相关的炎症参数,在第38天(第一次接种疫苗后7天)、第65天(第二次接种疫苗后7天)和/或第93天(第四次接种疫苗后7天)(所有组)测量AST和ALT的血清活性。总体而言,AST和ALT水平在AAV2/8-HBV转导的HLA.A2/DR1小鼠中的疫苗方案(第1组和第2组)的过程期间是稳定的,并且类似于未接受疫苗的小鼠(第3组)中测量的水平(图19)。在第65天,与对照组3相比,发现AST水平在来自疫苗组(第1组和第2组)的动物中统计学显著更高。然而,在第65天,与动力学的剩余部分相比,在来自第3组的动物中,AST水平令人惊讶地低,表明这些差异相当地是由于在该时间点在对照组3中获得的尤其出乎意料地低的值,而不是疫苗组(第1组和第2组)中的AST水平的升高(图19A)。
在第38天,与来自第3组的对照动物相比,来自第1组的动物中测量到略微低的ALT水平,但这种差异不被认为是临床相关的(图19B)。
肝脏显微镜检查
在第65天和第93天进行用H&E染色的肝脏切片的显微镜检查,以检测潜在的疫苗相关的组织病理学改变或炎症(第1组、第2组和第3组)(表7)。
在第65天(在注射第二种病毒载体化疫苗、有或没有HBc-HBs 4-1/AS01B-4的MVA-HBV后7天)或第93天(在最后一次注射后7天)在AAV2/8-HBV转导的HLA-A2/DR小鼠中没有测试项目相关的显微镜发现,即没有可以与疫苗组分ChAd155-hIi-HBV、MVA-HBV和HBc-HBs4-1/AS01B-4的使用相关的组织病理学变化。
另外,除了对照动物3.13(其呈现局灶性1级零碎坏死),动物无一呈现慢性肝炎的形态学体征。
在治疗的动物中注意到的其他显微镜发现被认为是偶然的变化,因为它们也发生在对照组中,发病率/幅度低,和/或在类似周龄的小鼠中是常见的背景发现[McInnes,2012]。
来自AAV2/8-HBV注射的小鼠的血清中的HBs抗原水平。
如Dion等人[Dion, 2013]中已经报道,用AAV2/8-HBV载体注射后23天,与雌性相比,雄性中的HBs抗原水平更高。这些水平在所有组中都保持稳定,没有接种疫苗方案的可检测到的影响(图20)。然而,AAV2/8-HBV注射的小鼠不是用于研究疫苗对HBsAg的效力的动物模型。
结论
在其中建立对HBc和HBs抗原的免疫耐受性的慢性HBV感染的替代模型(即AAV2/8-HBV转导的HLA-A2/DR1小鼠)中,两种测试的疫苗方案均通过诱导HBc-和HBs-特异性IgG和CD8+T细胞应答以及HBs-特异性CD4+ T细胞应答而绕过耐受性,尽管水平比未转导的小鼠中更低,如由于强烈的免疫耐受性所预期。当将ChAd155-hIi-HBV/MVA-HBV载体与HBc-HBs 4-1/AS01B-4共同施用时,疫苗诱导的抗体和T细胞应答的强度高于其中依次施用载体和佐剂化蛋白的疫苗方案。此外,在通过测量AST和ALT的血清活性和通过进行肝脏组织病理学评估来评价疫苗相关的肝脏炎症的同时,当与未接种疫苗的组相比,在疫苗组中未检测到肝脏酶的增加,并且没有显微镜发现可以与疫苗治疗相关。总而言之,这些结果显示,在这些实验条件下,测试的疫苗候选物成功地恢复HBs-和HBc-特异性抗体和CD8+ T细胞应答以及HBs-特异性CD4+ T细胞应答,而未检测到肝脏改变的相关体征。
实施例1-6的非临床免疫学数据的概述
用在AS01B-4佐剂系统中配制的疫苗蛋白(HBc-HBs)接种疫苗的CB6F1小鼠中的研究表明,HBs抗原对HBc-诱导的抗体和CD4+ T-细胞应答的负面影响。然而,HBc-HBs/AS01B-4组合疫苗能够产生对两种疫苗抗原的稳健的特异性CD4+ T-细胞和抗体应答。
− 当与基于明矾或非佐剂的制剂相比时,基于AS01家族的制剂诱导显著更高的对HBc和HBs抗原两者的CD4+ T-细胞和抗体应答。
在HLA.A2/DR1转基因小鼠中施用ChAd155-hIi-HBV诱导对HBc抗原的强烈CD8+ T-细胞应答,并且在较小程度诱导对HBs抗原的CD8+ T-细胞应答。在构建体中存在hIi明显增强对HBc抗原的应答。MVA-HBV的随后施用进一步增加针对HBc抗原的CD8+ T-细胞应答:在MVA加强后,与用ChAd155-HBV引发的小鼠相比,在用ChAd155-hIi-HBV引发的小鼠中观察到HBc-特异性CD8+ T-细胞的频率更高,而HBs-特异性CD8+ T-细胞应答未进一步增强。
当施用于HLA.A2/DR1转基因小鼠时,完整的接种疫苗方案(即依次或同时施用病毒载体和佐剂化蛋白)诱导对两种疫苗抗原的稳健的CD4+ T-细胞、CD8+ T-细胞和抗体应答。此外,在用两种疫苗方案接种疫苗的动物的肝脏中检测到疫苗诱导的HBs-和HBc-特异性CD4+和CD8+ T-细胞。
使用编码小鼠Ii序列(mIi)的ChAd155构建体:ChAd155-mIi-HBV,在CB6F1中进行免疫原性研究,以研究同源模型中T和B细胞对“恒定链”序列(Ii)的耐受性。在以高剂量(109 vp)的ChAd155-mIi-HBV载体2次免疫(第0天和第14天)后,评估自体mIi-特异性免疫应答的诱导。在第一次或第二次免疫后2周,在任何动物中都未检测到抗mIi抗体和mIi-特异性T-细胞,表明保留对mIi序列的免疫耐受性。
在临床前HBV-持久性小鼠模型(AAV2/8-HBV转导的HLA.A2/DR1小鼠)(其中观察到对HBV抗原的免疫耐受性)中,疫苗方案能够通过诱导HBc-和HBs-特异性CD8+ T细胞、HBs-特异性CD4+ T细胞以及对HBs和HBc抗原两者的抗体应答来打破耐受性,尽管没有观察到HBc-特异性CD4+ T细胞应答。然而,AAV-转导的小鼠中疫苗诱导的应答水平(且如所预期)低于未处理的HLA.A2/DR1小鼠中检测到的那些。此外,在通过测量天冬氨酸转氨酶(AST)和ALT的血清活性和通过进行肝脏组织病理学评估来评价疫苗相关的肝脏炎症的同时,当与未接种疫苗的组相比,在疫苗组中未检测到肝脏酶的增加,并且没有显微镜发现可以与疫苗治疗相关。总而言之,这些结果显示,在这些实验条件下,测试的疫苗候选物成功地恢复HBs-和HBc-特异性抗体和CD8+ T细胞应答以及HBs-特异性CD4+ T细胞应答,而未检测到肝脏改变的相关体征。
实施例7 –不同佐剂化的重组蛋白HBc/HBs比率的免疫原性评估
目标
实验的目的是证实HBs抗原对HBc-诱导的CD4+ T细胞应答的负面干扰,如实施例2中在第三次免疫后第7天所见,其中HBs和HBc抗原以1:1的比率混合。进一步目的是评估HBs/HBc的各种比率,以限制这种干扰并确保至少有效的HBc-特异性CD4+ T细胞应答,而同时生成稳健的HBc和HBs-特异性抗体应答。
研究设计
在第0天、第14天和第28天,6-8周龄的CB6F1小鼠(每组30只小鼠)用50µl AS01B或AS01B-4中含有HBc和HBs抗原的各种制剂(列于表8中)肌肉内(腓肠肌)免疫3次。将CB6F1小鼠随机分配至研究组之一。通过细胞内细胞因子染色(ICS)对HBc和HBs特异性T细胞应答的评估通过使用在第二次和第三次免疫后7天从5只小鼠/组的6种合并物收集的白细胞进行。在第二次和第三次免疫后14天从个体小鼠收集血清,并且由于统计样品大小分析,仅测试20只随机化小鼠的血清,以评估HBc-和HBs-特异性抗体总Ig应答。
表8:CB6F1小鼠中的HBc/HBs比率实验的研究设计。
实验中包括第6组和第7组,以解决另一个目标,并且为了清楚目的,将其省略。
HD:人剂量。
统计分析
评估HBc-HBs组与相应HBc组相比的非劣效性。如果在给药III后7天,与相应的HBc-HBs组相比的HBc组的表达至少一种细胞因子(IL-2和/或IFN-γ和/或IFN-α)的HBc-特异性CD4+ T-细胞的频率(以%计)的几何平均比的95% CI的UL低于2,则将达到这种非劣效性。由于其为第一次评估并且由于标准没有预先定义,没有应用多重性的调整。
ANOVA(方差分析)模型用于回答两个主要目标。在给药III后的log10 CD4+频率(包括组(4至12)、相互作用作为固定效应)上且使用异质方差模型(在各组之间未假定相同的方差)拟合该模型。该模型用于使用log10平均值和差值的反向转换来估算几何平均值(及其95% CI)以及几何平均比率及其95% CI。
结果
抗原特异性CD4+ T细胞应答
第2次免疫后的所有制剂都诱导强烈的抗HBc和HBs特异性CD4+ T细胞应答(±1%)。尽管当与单独的HBc /AS01B-4组相比时,在AS01B-4中含有相等量的HBc和HBs的制剂引发的HBc-特异性CD4+ T-细胞应答的幅度倾向于更低(图23),但这些差异不是统计学显著的,因为该比率为±1.4 (p=0.143)(图23)。第三次免疫后,当与单独的HBc /AS01B-4组相比时,在AS01B-4中含有相等量的HBc和HBs的制剂引发的HBc-特异性CD4+ T-细胞应答的幅度统计学更低(GMR 0.391和95% CI [0.184-0.828])(图24)。这证实实施例2中的HBs对HBc-特异性CD4+ T细胞应答的干扰的观察。当抗原以HBc和HBs抗原的4:1的比率配制时,干扰不太明显。当查看HBs-特异性CD4+ T细胞应答时,没有看到这种负面影响(图23和图24)。
通过进一步增加HBc与HBs的比率,存在这种HBc-特异性CD4+ T细胞应答的额外恢复的趋势,其中中值最高达表达IFN-γ和/或IL-2和/或TNFα的总HBc-特异性CD4+ T细胞的1.7%,尽管统计学不显著。
在第2次和第3次免疫后评估HBs-特异性CD8+ T细胞应答(图25)。第2次和第3次免疫后观察到HBs-特异性剂量范围应答。第三次免疫后,当与等量的HBc抗原共同配制时,HBs特异性CD8+ T细胞应答趋于降低(GMR 0.66和95% CI [0.337-1.295]),然而,该比率统计学不显著(p=0.1717)。HBc-特异性CD8+ T细胞应答低至检测不到(低于0.1%,数据未显示)。
抗原特异性抗体应答
当在AS01B-4佐剂系统中以1:1比率共同配制HBs和HBc时,第2次免疫后的所有制剂都诱导高和相似的抗HBc和HBs总Ig应答,而没有负面影响(图26)。第三次免疫后,抗HBc特异性总Ig应答加强(图27)。当在AS01B-4佐剂系统中以1:1比率共同配制HBs和HBc时,在HBc-特异性抗体应答的水平上看到HBs干扰。GMT比率和95%置信区间为1.88 [1.44; 2.44],其中p-值<0.0001。将HBc与HBs的比率增加4允许恢复HBc体液应答,GMT比率和95%置信区间为1.37[1.04; 1.80],其中p=0.0262。HBc对HBs-特异性抗体应答的水平没有负面影响,如先前所报道(图26和27)。
结论
这些实验的结果表明,对于HBc/HBs比率≥4的制剂克服当两种抗原以1/1比率共同配制时观察到的HBs对HBc-特异性CD4+ T细胞和体液应答的负面干扰。作为结果,选择4µgHBc和1µg HBs的剂量用于进一步临床前实验。
序列表
SEQ ID NO:1:HBs的氨基酸序列
SEQ ID NO:2:HBc截短物的氨基酸序列
SEQ ID NO:3:并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的氨基酸序列
SEQ ID NO:4:编码并入口蹄疫病毒的2A切割区域的间隔区的核苷酸序列
SEQ ID NO:5:HBc-2A-HBs的氨基酸序列
SEQ ID NO:6:编码HBc-2A-HBs的核苷酸序列
SEQ ID NO:7:hIi的氨基酸序列
SEQ ID NO:8:编码hIi的核苷酸序列
SEQ ID NO:9:hIi-HBc-2A-HBs的氨基酸序列
SEQ ID NO:10:编码hIi-HBc-2A-HBs的核苷酸序列
SEQ ID NO:11:HBc的氨基酸序列
SEQ ID NO:12:hIi替代变体的氨基酸序列
SEQ ID NO:13:编码hI替代变体的核苷酸序列
SEQ ID NO:14:hIi-HBc-2A-HBs的替代核酸序列
SEQ ID NO:15:hIi-HBc-2A-HBs的替代氨基酸序列
Claims (18)
1.治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 向所述人施用包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 向所述人施用包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
2.根据权利要求1所述的方法,其中依次实施所述方法的步骤,其中步骤a)在步骤b)之前,且步骤b)在步骤c)之前。
3.根据权利要求2所述的方法,其中重复所述方法的步骤c)。
4.根据任一前述权利要求所述的方法,其中每个步骤之间的时间段是1周、2周、4周、6周、8周、12周、6个月或12个月,例如4周或8周。
5.根据权利要求1所述的方法,其中步骤c)与步骤a)和/或与步骤b)同时实施。
6.治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法,其包括以下步骤:
a) 向所述人施用i)包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,ii)包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物;和
b) 向所述人施用i)包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,和,同时地,包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物。
7.免疫原性组合产品,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合产品包含:
a) 包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物,
其中所述方法包括将所述组合物依次或同时施用于所述人。
8.免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸、编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸和编码与所述HBc融合的人恒定链(hIi)的核酸,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。
9.根据权利要求7所用的免疫原性组合物,其进一步包含一种或多种重组HBV蛋白抗原。
10.免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。
11.根据权利要求9所用的免疫原性组合物,其进一步包含一种或多种重组HBV蛋白抗原。
12.免疫原性组合物,其用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB)的方法中,所述免疫原性组合物包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、C-末端截短的重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和含有MPL和QS-21的佐剂,其中所述方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。
13.根据权利要求12所用的免疫原性组合物,其中所述组合物中的HBc与HBs的比率大于1。
14.根据权利要求13所用的免疫原性组合物,其中所述组合物中的HBc与HBs的比率为4:1。
15.根据权利要求12至14中任一项所用的免疫原性组合物,其进一步包含一种或多种编码一种或多种HBV抗原的载体。
16.免疫原性组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合物包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸、编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸和与编码HBc的核酸融合的编码人恒定链(hIi)的核酸,其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。
17.免疫原性组合物在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合物包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸,其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括在引发-加强方案中施用所述组合物与至少一种其他免疫原性组合物。
18.免疫原性组合产品在制备药物中的用途,所述药物用于治疗人中的慢性乙型肝炎感染(CHB),所述免疫原性组合产品包含:
a) 包含复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体的组合物,所述复制缺陷的黑猩猩腺病毒(ChAd)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;
b) 包含修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体的组合物,所述修饰的牛痘病毒安卡拉(MVA)载体包含编码乙型肝炎表面抗原(HBs)的多核苷酸和编码乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的核酸;和
c) 包含重组乙型肝炎表面抗原(HBs)、重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)和佐剂的组合物,
其中治疗慢性乙型肝炎感染的方法包括将所述组合物依次或同时施用于所述人。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB1721068.3A GB201721068D0 (en) | 2017-12-15 | 2017-12-15 | Hepatitis B immunisation regimen and compositions |
GB1721068.3 | 2017-12-15 | ||
PCT/EP2018/085085 WO2019115816A1 (en) | 2017-12-15 | 2018-12-14 | Hepatitis b immunisation regimen and compositions |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111787982A true CN111787982A (zh) | 2020-10-16 |
Family
ID=61008811
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880089468.9A Pending CN111787982A (zh) | 2017-12-15 | 2018-12-14 | 乙型肝炎免疫方案和组合物 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210069322A1 (zh) |
EP (1) | EP3723861A1 (zh) |
JP (1) | JP2021506767A (zh) |
CN (1) | CN111787982A (zh) |
BR (1) | BR112020011517A2 (zh) |
CA (1) | CA3084281A1 (zh) |
GB (1) | GB201721068D0 (zh) |
MX (1) | MX2020006090A (zh) |
WO (1) | WO2019115816A1 (zh) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW202043256A (zh) | 2019-01-10 | 2020-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 前列腺新抗原及其用途 |
US20220339281A1 (en) * | 2019-03-05 | 2022-10-27 | GalxoSmithKline Biologicals SA | Hepatitis b immunisation regimen and compositions |
WO2021067181A1 (en) | 2019-09-30 | 2021-04-08 | Gilead Sciences, Inc. | Hbv vaccines and methods treating hbv |
IL293051A (en) | 2019-11-18 | 2022-07-01 | Janssen Biotech Inc | calr and jak2 mutant-based vaccines and their uses |
TW202144389A (zh) | 2020-02-14 | 2021-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 在多發性骨髓瘤中表現之新抗原及其用途 |
TW202144388A (zh) | 2020-02-14 | 2021-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 在卵巢癌中表現之新抗原及其用途 |
EP4175721A1 (en) | 2020-07-06 | 2023-05-10 | Janssen Biotech, Inc. | Prostate neoantigens and their uses |
US20230035403A1 (en) | 2020-07-06 | 2023-02-02 | Janssen Biotech, Inc. | Method For Determining Responsiveness To Prostate Cancer Treatment |
WO2022009052A2 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-13 | Janssen Biotech, Inc. | Prostate neoantigens and their uses |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017025782A1 (en) * | 2014-09-17 | 2017-02-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Improved poxviral vaccines |
WO2017121791A1 (en) * | 2016-01-12 | 2017-07-20 | Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Means and methods for treating hbv |
Family Cites Families (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4436727A (en) | 1982-05-26 | 1984-03-13 | Ribi Immunochem Research, Inc. | Refined detoxified endotoxin product |
US5057540A (en) | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
CA1331443C (en) | 1987-05-29 | 1994-08-16 | Charlotte A. Kensil | Saponin adjuvant |
ZA929870B (en) | 1991-12-23 | 1993-08-18 | Duphar Int Res | Adjuvants |
PT761231E (pt) | 1992-06-25 | 2000-06-30 | Smithkline Beecham Biolog | Composicao de vacina contendo adjuvantes |
EP1175912A1 (en) | 1993-03-23 | 2002-01-30 | SmithKline Beecham Biologics SA | Vaccine compositions containing 3-O deacylated monophosphoryl lipid A |
SI0729473T1 (en) | 1993-11-17 | 2001-02-28 | Om Pharma | Glucosamine disaccharides, method for their preparation, pharmaceutical composition comprising same, and their use |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
AUPM873294A0 (en) | 1994-10-12 | 1994-11-03 | Csl Limited | Saponin preparations and use thereof in iscoms |
GB9620795D0 (en) | 1996-10-05 | 1996-11-20 | Smithkline Beecham Plc | Vaccines |
UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
GB9711990D0 (en) | 1997-06-11 | 1997-08-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
EP1009429B1 (en) | 1997-08-29 | 2009-07-08 | Antigenics Inc. | Compositions comprising the adjuvant qs-21 and polysorbate or cyclodextrin as excipient |
GB9718901D0 (en) | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
CA2302554C (en) | 1997-09-05 | 2007-04-10 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Oil in water emulsions containing saponins |
DE69935606T9 (de) | 1998-10-16 | 2021-03-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Adjuvanzsysteme und impfstoffe |
UA79735C2 (uk) | 2000-08-10 | 2007-07-25 | Глаксосмітклайн Байолоджікалз С.А. | Очищення антигенів вірусу гепатиту b (hbv) для використання у вакцинах |
NZ530245A (en) | 2001-06-22 | 2007-04-27 | Wistar Inst | Methods of inducing a cytotoxic immune response and recombinant simian adenovirus compositions useful therein |
PL1711518T3 (pl) | 2004-01-23 | 2010-06-30 | St Di Richerche Di Biologia Molecolare P Angeletti S P A | Nośniki szczepionek pochodzące od szympansich adenowirusów |
SI1957528T1 (sl) | 2005-11-30 | 2013-02-28 | University Of Copenhagen | Nukleotidno cepivo |
HUE045093T2 (hu) | 2008-11-21 | 2019-12-30 | Kobenhavns Univ University Of Copenhagen | Immunválasz kiváltása |
BRPI1008018A2 (pt) | 2009-02-02 | 2016-03-15 | Okairos Ag | ácidos nucleicos de adenovírus símio e sequências de aminoácidos, vetores contendo os mesmos e uso dos mesmos |
US10076570B2 (en) * | 2009-08-07 | 2018-09-18 | Transgene S.A. | Composition for treating HBV infection |
WO2014139587A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Okairòs Ag | Improved poxviral vaccines |
WO2016020538A1 (en) * | 2014-08-08 | 2016-02-11 | Transgene Sa | Hbv vaccine and antibody combination therapy to treat hbv infections |
JP6983665B2 (ja) | 2015-06-12 | 2021-12-17 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | アデノウイルスポリヌクレオチド及びポリペプチド |
-
2017
- 2017-12-15 GB GBGB1721068.3A patent/GB201721068D0/en not_active Ceased
-
2018
- 2018-12-14 CA CA3084281A patent/CA3084281A1/en active Pending
- 2018-12-14 MX MX2020006090A patent/MX2020006090A/es unknown
- 2018-12-14 US US16/772,203 patent/US20210069322A1/en not_active Abandoned
- 2018-12-14 CN CN201880089468.9A patent/CN111787982A/zh active Pending
- 2018-12-14 BR BR112020011517-7A patent/BR112020011517A2/pt unknown
- 2018-12-14 WO PCT/EP2018/085085 patent/WO2019115816A1/en unknown
- 2018-12-14 JP JP2020531719A patent/JP2021506767A/ja active Pending
- 2018-12-14 EP EP18830428.1A patent/EP3723861A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017025782A1 (en) * | 2014-09-17 | 2017-02-16 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Improved poxviral vaccines |
WO2017121791A1 (en) * | 2016-01-12 | 2017-07-20 | Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) | Means and methods for treating hbv |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
ALEXANDER D. DOUGLAS等: "Tailoring subunit vaccine immunogenicity: Maximizing antibody and T cell responses by using combinations of adenovirus, poxvirus and protein-adjuvant vaccines against Plasmodium falciparum MSP1" * |
ANNA D. KOSINSKA等: "DNA Prime-Adenovirus Boost Immunization Induces a Vigorous and Multifunctional T-Cell Response against Hepadnaviral Proteins in the Mouse and Woodchuck Model" * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB201721068D0 (en) | 2018-01-31 |
MX2020006090A (es) | 2020-11-09 |
BR112020011517A2 (pt) | 2020-11-24 |
US20210069322A1 (en) | 2021-03-11 |
WO2019115816A1 (en) | 2019-06-20 |
JP2021506767A (ja) | 2021-02-22 |
CA3084281A1 (en) | 2019-06-20 |
EP3723861A1 (en) | 2020-10-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111787982A (zh) | 乙型肝炎免疫方案和组合物 | |
EP3371316B1 (en) | Vaccines against hepatitis b virus | |
JP6246778B2 (ja) | Hbv感染を治療するための組成物 | |
CN103998604B (zh) | Hbv聚合酶突变体 | |
EA021391B1 (ru) | Способ индукции иммунного ответа, вакцинная композиция, ее применение и набор | |
JP2024028762A (ja) | B型肝炎免疫化レジメン及び組成物 | |
EP3655539A1 (en) | Chikungunya virus antigen constructs | |
US20240002879A1 (en) | Gorilla adenovirus nucleic acid- and amino acid-sequences, vectors containing same, and uses thereof | |
US20220339281A1 (en) | Hepatitis b immunisation regimen and compositions | |
Alekseeva et al. | Enhancement of the expression of HCV core gene does not enhance core-specific immune response in DNA immunization: advantages of the heterologous DNA prime, protein boost immunization regimen | |
US20160324954A1 (en) | Immunogenic compositions for inhibiting hepatitis d virus | |
US20110177115A1 (en) | Vaccination regimen | |
NZ620867B2 (en) | Hbv polymerase mutants |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |