CN111771820A - 一种提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，包括：（1）饲养：巴氏新小绥螨以取食麦麸的椭圆食粉螨为猎物，在温度为25±1°C、相对湿度70‑80%、光周期14 L:10 D的环境条件下进行规模化饲养繁殖;（2）失水锻炼：将正常饲养的巴氏新小绥螨雌成螨用无水氯化钙干燥处理6 h（温度为25°C,相对湿度为5.8%），使得雌成螨失水量占总体重约20%;（3）葡萄糖的饲喂：将失水锻炼后的雌成螨在25°C,100% RH条件下饲喂20%（w/v）的葡萄糖溶液8 h;本发明能有效提高巴氏新小绥螨雌成螨对高温低湿共胁迫的耐受力，延长其在高温低湿条件下的存活时间。
Description
技术领域
本发明涉及一种提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，属于生物防治天敌繁殖技术领域。
背景技术
巴氏新小绥螨属蜱螨亚纲、寄型螨目、植绥螨科、新小绥螨属，是一种已商品化的捕食螨，被广泛用于果树、蔬菜、花卉等植物上防治各种害螨与害虫。
不少研究发现，捕食螨在夏季对害虫害螨防效差，容易导致害虫害螨的爆发。在夏季，高温和低湿相伴发生。随着一天中气温的升高，叶片表面相对湿度降低，并且当植物受到干旱胁迫或者周围环境多风时，叶表面湿度近似于大气湿度，而夏季一天温度最高的数小时中，大气相对湿度往往低于50%。相对于害螨，捕食螨对高温和干燥环境更为敏感，表现为捕食螨的热昏迷温度低于害螨的热昏迷温度，在较低的湿度条件下，捕食螨对害螨的防控失效。在我国南方夏季常见高温和低湿条件下（38 °C, 50% RH）,巴氏新小绥螨雌成螨50%和95%个体死亡时间分别为4.1 h和6.1 h，而夏季中午至下午往往有6 h左右高温低湿胁迫，雌成螨在此期间容易大量死亡。因此寻求提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下存活时间的方法迫在眉睫。
而目前提高捕食螨抗逆性的方法多为通过长期逆境驯化培育抗逆性品系。然而该方法下捕食螨往往存在明显的适合度代价，并且操作过程耗时长，成本高。已有研究表明，失水锻炼和糖类饲喂均能显著提高巴氏新小绥螨雌成螨在高温低湿条件下的存活时间。而通过短期逆境锻炼和饲喂糖类物质提高捕食螨抗逆性的方法仍未见报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述的不足之处，提供一种提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，本方法通过失水锻炼和葡萄糖饲喂的方式显著降低了雌成螨高温低湿下的死亡率，延长其存活时间，对提高捕食螨高温低湿条件下的适应性具有重要意义。
一种提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，包括以下步骤：
（1）巴氏新小绥螨饲养
巴氏新小绥螨以取食麦麸的椭圆食粉螨为猎物，在温度为25±1 °C、相对湿度70-80%、光周期14 L:10 D的环境条件下进行规模化饲养繁殖；饲养容器为5 L透明保鲜盒，保鲜盒盖中央开有10 cm×6 cm孔，并用300目筛网焊接通风，防止捕食螨逃跑；保鲜盒放置在有水的托盘上，保持培养箱中的相对湿度在80%以上，每天需要摇动混匀麦麸，每隔7天更换一次新鲜麦麸。
（2）巴氏新小绥螨的失水锻炼
在直径为15 cm的培养皿中放入一个比培养皿略小的圆形海绵，海绵上放一张和海绵大小基本一致的圆形黑布；将海绵与黑布用自来水完全浸湿，水面齐平于海绵顶部；在黑布上放一片圆形塑料薄膜，其直径略微小于黑布但不低于10 cm；在塑料薄膜上放置一个直径为8 cm的培养皿。将保鲜盒中饲养的麦麸进行60目筛网过筛，得到“捕食螨-粉螨-麦麸粉”混合物，将该混合物用柔软的毛笔扫入直径为8 cm的培养皿。用毛笔将雌成螨200-500头挑入图1所示的长×宽×高为16 cm×16 cm×0.8 cm的处理小室中，小室中部有直径为10 cm的圆形孔，小室底部用300目筛网焊接封闭，顶部用16 cm×16 cm×0.1 cm亚克力板封闭，避免捕食螨逃逸。将小室和雌成螨放置于0% RH的保鲜盒中（图2），保鲜盒底部盛放无水氯化钙，保鲜盒放置于25 °C恒温箱中。将雌成螨在无水氯化钙干燥盒中处理6 h，使得雌成螨失水量占总体重约20%。
（3）巴氏新小绥螨的葡萄糖饲喂
将锻炼后的巴氏新小绥螨用毛笔轻轻扫入如图3所示的饲喂培养皿中，每个培养皿中放置约200头雌成螨，培养皿中滴有20%（w/v）的葡萄糖溶液4滴，每滴10 μL，培养皿中放入1.5 cm×0.3 cm的长条形对折纸片，为雌成螨提供栖息场所，雌成螨饲喂8 h。培养皿放置于如图2所示的保鲜盒中，保鲜盒底部盛放蒸馏水，避免培养皿中水分蒸发以及葡萄糖溶液浓缩。
（4）高温低湿下耐受力检测
将失水锻炼并饲喂葡萄糖的巴氏新小绥螨雌成螨与常规饲养的雌成螨分别挑入如图4所示的处理小室中，小室长×宽×高为3 cm×3 cm×0.3 cm的处理小室中，小室底部用300目筛网焊接封闭，顶部用3 cm×3 cm×0.1 cm的玻璃片封闭，避免捕食螨逃逸。每个处理小室放置10头捕食螨。而后置于38 °C, 50% RH的保鲜盒内，分别于4 h, 6 h统计雌成螨的死亡率。经历失水锻炼并饲喂葡萄糖的雌成螨在4 h的死亡率低于20%，在6 h的死亡率低于50%；而对照雌成螨在4 h的死亡率高于50%，在6 h的死亡率高于90%。
在失水锻炼和葡萄糖饲喂中，在无水氯化钙的干燥盒中失水锻炼6 h；并在25 °C,100% RH条件下饲喂20%（w/v）的葡萄糖8 h。
在高温低湿下耐受力检测中，若雌成螨在38 °C, 50% RH处理4 h时的死亡率低于20%，在6 h的死亡率低于50%，则为失水锻炼后饲喂葡萄糖的雌成螨；若雌成螨在38 °C,50% RH处理4 h时死亡率高于50%，在6 h的死亡率高于90%，则为一般饲养雌成螨。
本发明与已有技术相比具有以下优点：
1．操作时间短，避免长期驯化带来的适合度代价；
2．能较为精确控制捕食螨对高温低湿共胁迫的耐受力，使得不同批次捕食螨耐受力稳定；
3．解决多逆境胁迫下捕食螨防效差的问题，更符合捕食螨所面临的实际胁迫情况，即田间高温条件下低湿环境相伴发生的实际情况。
附图说明
图1为巴氏新小绥螨雌成螨失水锻炼装置示意图；
图2为湿度控制装置示意图；
图3为巴氏新小绥螨雌成螨葡萄糖饲喂装置示意图；
图4为测定巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下死亡率的装置示意图。
图中，1-1为玻璃片，1-2为橡皮筋，1-3为桌面，1-4为300目筛网，2-1为饱和盐溶液或干燥剂，2-2为铁丝网支架，2-3为保鲜盒盖子。
具体实施方式
下面本发明将结合实施例作进一步描述：
实施例1
巴氏新小绥螨饲养
巴氏新小绥螨的具体的饲养方法见中国发明专利“一种巴氏新小绥螨耐高温的品系培育及鉴定方法”，公开号为“CN109997791A”。
巴氏新小绥螨的失水锻炼，包括以下步骤：
（1）在直径为15 cm的培养皿中放入一个比培养皿略小的圆形海绵，海绵上放一张和海绵大小基本一致的圆形黑布；将海绵与黑布用自来水完全浸湿，水面齐平于海绵顶部；在黑布上放一片圆形塑料薄膜，其直径略微小于黑布但不小于10 cm；在塑料薄膜上放置一个直径为8 cm的培养皿。
（2）将保鲜盒中饲养的巴氏新小绥螨进行60目筛网过筛，得到“捕食螨-粉螨-麦麸粉”混合物，将该混合物用柔软的毛笔扫入直径为8 cm的培养皿。培养皿放置在25 °C室温下。
（3）当捕食螨爬出培养皿后，用毛笔将雌成螨200-500头挑入图1所示的长×宽×高为16cm×16 cm×0.8 cm的处理小室中，小室中部有直径为10 cm的圆形孔，小室底部用300目筛网焊接封闭，顶部用16 cm×16 cm×0.1 cm亚克力板封闭，并用燕尾夹夹紧，避免捕食螨逃逸。将装有雌成螨的小室放置于底部有无水氯化钙相对湿度为0% RH的保鲜盒中（图2），保鲜盒放置于25 °C恒温箱中。将雌成螨在无水氯化钙的干燥盒中处理6 h，使得雌成螨失水量占总体重约20%。
巴氏新小绥螨的葡萄糖饲喂，包括以下步骤：
（1）制备如图3所示培养皿，在直径为8 cm的培养皿中放入一个比培养皿略小的圆形海绵，海绵上放一张和海绵大小基本一致的圆形黑布；将海绵与黑布用自来水完全浸湿，水面齐平于海绵顶部；在黑布上放一片圆形塑料薄膜，其直径略微小于黑布；
（2）将锻炼后的巴氏新小绥螨用毛笔轻轻扫入如图3所示的饲喂培养皿中，每个培养皿中放置约200头雌成螨，在培养皿中放入1.5 cm×0.3 cm的长条形对折纸片，为雌成螨提供栖息场所。
（3）在培养皿中滴有20%（w/v）的葡萄糖溶液4滴，每滴10 μL。培养皿放置于如图2所示的保鲜盒中，保鲜盒底部盛放蒸馏水并放入饲养巴氏新小绥螨的培养箱中，雌成螨饲喂8 h。
高温低湿下耐受力检测方法，包括以下步骤：
（1）将失水锻炼并饲喂葡萄糖的巴氏新小绥螨雌成螨与常规饲养的雌成螨分别用毛笔挑入如图4所示的处理小室中，小室长×宽×高为3 cm×3 cm×0.3 cm的处理小室中，小室底部用300目筛网焊接封闭，顶部用3 cm×3 cm×0.1 cm的玻璃片封闭，避免捕食螨逃逸。每个处理小室放置10头捕食螨，并用橡皮筋捆绑，防止捕食螨逃逸。
（2）将处理小室置于38 °C, 50% RH的保鲜盒内，保鲜盒底部放有饱和的硝酸镁溶液，并于先前放置在38 °C下24 h。分别于4 h, 6 h统计常雌成螨的死亡率。将小室放置于体视显微镜下在，观测死亡雌成螨数量。抖动小室后，若雌成螨不能站立则视为死亡。统计并计算死亡率。
（3）耐受力判断：经历失水锻炼并饲喂葡萄糖的雌成螨在4h的死亡率低于20%，在6h的死亡率低于50%；而对照雌成螨在4h的死亡率高于50%，在6h的死亡率高于90%。
Claims (4)
1.一种提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，其特征是，包括以下步骤：
巴氏新小绥螨的失水锻炼：将正常饲养的巴氏新小绥螨用筛网过筛，将雌成螨挑入处理小室中，处理小室底部具有筛网，其余部分密封；将处理小室放置于无水氯化钙干燥盒中，使得雌成螨失水量占总体重约20%；
巴氏新小绥螨的葡萄糖饲喂：将锻炼后的巴氏新小绥螨挑入饲喂培养皿中，培养皿中放有一个比培养皿略小的圆形海绵，海绵上放有与海绵大小基本一致的圆形黑布；将海绵与黑布用水完全浸湿，水面齐平于海绵顶部；在黑布上放一片圆形塑料薄膜，其直径略微小于黑布；在培养皿中滴葡萄糖溶液，进行饲喂，其间避免水分蒸发以及葡萄糖溶液浓缩。
2.如权利要求1所述的提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，其特征是，将正常饲养的巴氏新小绥螨用60目筛网过筛，将雌成螨200-500头挑入处理小室中，小室的底部用300目筛网焊接封闭。
3.如权利要求1所述的提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，其特征是，干燥剂为无水氯化钙。
4.如权利要求1所述的提高巴氏新小绥螨高温低湿共胁迫下耐受力的方法，其特征是在失水锻炼和葡萄糖饲喂步骤中，在无水氯化钙干燥盒中失水锻炼6 h；并在25 °C, 100%RH条件下饲喂质量浓度为20%的葡萄糖8 h。
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| 罗立平 等: "外源海藻糖对花绒寄甲成虫存活和耐寒性的影响", 《昆虫学报》 * |
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