CN104322452A - 转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法 - Google Patents

转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104322452A
CN104322452A CN201410446376.5A CN201410446376A CN104322452A CN 104322452 A CN104322452 A CN 104322452A CN 201410446376 A CN201410446376 A CN 201410446376A CN 104322452 A CN104322452 A CN 104322452A
Authority
CN
China
Prior art keywords
wing
blue
rice
green
hidden
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410446376.5A
Other languages
English (en)
Inventor
华红霞
孟嘉蓉
韩宇
吴刚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huazhong Agricultural University
Original Assignee
Huazhong Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huazhong Agricultural University filed Critical Huazhong Agricultural University
Priority to CN201410446376.5A priority Critical patent/CN104322452A/zh
Publication of CN104322452A publication Critical patent/CN104322452A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5014—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing toxicity

Abstract

本发明涉及一种转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法,由三级营养试验，蛋白传递规律，Tier-1毒性测定试验3个部分组成。各部分分别评价转Bt基因抗虫水稻通过猎物介导对青翅蚁形隐翅甲的影响；评价青翅蚁形隐翅甲暴露于Bt蛋白的途径和程度；评价转Bt基因抗虫水稻表达的Bt蛋白对青翅蚁形隐翅甲的潜在毒性。最终，根据3个方面的数据综合评价所述转Bt基因抗虫水稻对该非靶标生物产生的生态后果。本发明建立了一套系统、科学的评价方法，对完善转Bt基因作物对非靶标生物的影响研究以及确定转Bt基因作物种植的生态安全性具有重要意义。

Description

转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法
技术领域
本发明属于转Bt基因作物生态风险评价技术领域,具体涉及一种转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法。
背景技术
水稻是世界上最重要的粮食作物之一，但同时也是虫害最多的粮食作物之一，每年虫害造成的产量损失约为10％(陈浩等，2009)。其中鳞翅目害虫为最主要害虫类群之一，特别是稻纵卷叶螟、二化螟和三化螟等为害严重威胁水稻生产。目前对鳞翅目害虫的防治主要依赖化学杀虫剂，化学杀虫剂不紧提高了生产成本，而且造成了严重的环境污染，并且随着杀虫剂的广泛使用，害虫产生了越来越高的抗性，这就又引起了杀虫剂越来越多的使用，因此导致了害虫抗性(Resistance)、农药残留(Residue)和害虫再猖獗(Resurgence)3R问题，形成恶性循环。因此高抗鳞翅目的抗性品种是一种经济、有效、环保的防治手段。然而，在水稻及野生稻中，难以找到高抗鳞翅目昆虫的抗源。要培育高抗鳞翅目害虫的水稻品种，需借助于外源抗虫基因。Bacillus thuringiensis(Bt)杀虫蛋白被用作生物源杀虫剂已经有五十多年的历史，对鳞翅目害虫有稳定的防治效果。目前是转Bt基因抗虫水稻是控制鳞翅目害虫的主要抗虫水稻。
转基因抗虫植物的利用是作物害虫防治技术的一次巨大绿色变革，但其为人类带来利益的同时，也可能对环境造成潜在的生态风险，近20年来，国内外已经开展了大量的实验室和田间试验来评价转基因植物的安全性，其中，转基因抗虫植物对非靶标生物安全性一直是相关研究者关注的焦点。目前，国际上的风险评价工作者以及转基因植物相关管理部门广泛采用“分层次评价体系”开展转基因植物对非靶标生物影响方面的研究工作(Romeis et al.，2008；王圆圆等，2011)。该评价体系就是选择合适的受试生物，然后依次开展从实验室试验到半田间试验，再到田间试验分层次分阶段进行的系统评价。
褐飞虱Nilaparvata lugens是温带和热带水稻田间最主要的害虫之一，是转Bt基因水稻种植过程中重要的非靶标植食性昆虫。青翅蚁形隐翅甲(Paederus fuscipes Curtis)是水稻重要天敌，尤其在早稻中、后期对稻飞虱种群的增长起着明显抑制作用(罗肖南等，1990)。其通过捕食过程能够摄取到Bt蛋白，有存在生态风险的可能性，那么，建立一套系统评价转Bt基因抗虫水稻对青翅蚁形隐翅甲的安全性尤为重要。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种安全有效、操作简便、成本低廉的转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法。
本发明目的的实现方式为，转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，包括如下三个部分：
(1)三级营养试验：通过水稻—褐飞虱—青翅蚁形隐翅甲的食物链评价转Bt基因抗虫水稻通过猎物介导对青翅蚁形隐翅甲的安全性影响；
转基因组：取24h内孵化的青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫，单头接入底部吸水海绵保湿的指形管内，置于温度28℃，光周期L:D＝12:12h，相对湿度65％-80％的智能人工气候箱内培养，每管每天饲喂2-3龄转Bt基因抗虫水稻品系上饲养的褐飞虱9-10头，并在青翅蚁形隐翅甲幼虫一龄第二天，二龄第二天每管每头补充一头果蝇成虫；
对照组，水稻品系为非转基因水稻品系，其它同转基因组；
每个指形管内各接青翅蚁形隐翅甲幼虫1头，每组共80头，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲幼虫的存活和蜕皮情况，直至幼虫羽化，初羽化成虫24h内用万分之一电子天平称重；
羽化24h的青翅蚁形隐翅甲成虫雌雄配对后，饲养于底部铺有湿润滤纸和湿润棉花的塑料培养皿内，每皿一对，每天每塑料培养皿饲喂相应水稻品系上的褐飞虱15头，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲成虫所产卵粒数；
将卵粒用毛笔挑入内置湿润棉球的24孔细胞培养板内，每孔一粒卵，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲卵的孵化数目，测定65d；
选择青翅蚁形隐翅甲的幼虫发育历期、幼虫存活率、雌性率以及初羽化体重、青翅蚁形隐翅甲成虫产卵前期、产卵量、卵孵化率作为评价参数指标，并进行统计分析，评价由褐飞虱若虫介导的转Bt基因抗虫水稻对青翅蚁形隐翅甲的安全性影响；
(2)蛋白传递规律：通过ELISA检测手段鉴定青翅蚁形隐翅甲暴露于转Bt基因抗虫水稻所表达Bt蛋白的途径和程度；
于2000ml玻璃罐中分别放入15日龄转基因水稻品系和非转基因水稻品系的稻苗，接入对应材料饲养的褐飞虱1龄若虫，待褐飞虱2-3龄时分别取水稻叶鞘和褐飞虱若虫；水稻叶鞘组织取样30±1mg，褐飞虱若虫取样约35±1mg；每组处理重复3次；
以不同组的稻苗饲养的2-3龄褐飞虱若虫饲养青翅蚁形隐翅甲幼虫直至羽化，对24h内的初羽化青翅蚁形隐翅甲成虫取样约35±2mg，每组处理重复3次；
采用ELISA技术，分别对以上转基因水稻品系样品中Bt蛋白的含量进行检测，确定通过食物链青翅蚁形隐翅甲暴露于转Bt基因抗虫水稻所表达Bt蛋白的程度；
(3)Tier-1毒性测定试验：评价转Bt基因抗虫水稻表达的Bt蛋白对非靶标生物青翅蚁形隐翅甲的潜在毒性；
用塑料培养皿饲养48h内孵化的青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫，培养皿底部放置厚度1±0.5cm的湿润基质土壤；
用三种形式的人工饲料搭配非转基因水稻品系上饲养的1-2龄褐飞虱若虫为青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲料，三种形式的饲料为：人工饲料、人工饲料与褐飞虱、添加转Bt基因抗虫水稻叶鞘组织Bt蛋白表达量的10倍以上剂量的饲料及褐飞虱与含有1mg/g砷酸二氢钾的人工饲料；每个塑料培养皿中各接青翅蚁形隐翅甲幼虫1头，每个处理共75头，每日更换饲料并观察记录青翅蚁形隐翅甲蜕皮及存活情况，直至羽化，初羽化成虫在24h内用万分之一电子天平称重；
添加褐飞虱是在青翅蚁形隐翅甲幼虫取食人工饲料第6、7、8三天补充；
所述人工饲料是伊威全机能肝粉与蜂蜜的混合物；
试验中通过ELISA和敏感昆虫生测技术全程监测Bt蛋白的浓度、稳定性以及生物活性；
选择青翅蚁形隐翅甲的幼虫发育历期、幼虫存活率、雌性率以及初羽化体重作为评价参数指标，对其进行统计分析，以评价转Bt基因抗虫水稻表达的Bt蛋白对青翅蚁形隐翅甲的毒性影响；
最终，根据三个方面的研究数据综合分析转Bt基因抗虫水稻的种植对该非靶标生物产生的生态后果。
本发明建立了一套系统、科学、安全有效、操作简便、成本低廉的评价方法，对完善转Bt基因抗虫水稻对非靶标生物的影响研究具有重要意义，对确定转Bt基因抗虫水稻种植的生态安全性具有重要意义。
附图说明
图1为T1C-19水稻叶鞘组织，2-3龄期褐飞虱若虫及取食褐飞虱若虫的青翅蚁形隐翅甲体内Cry1C蛋白含量图，
图2为以转cry1C水稻品系上饲养的褐飞虱若虫为猎物的青翅蚁形隐翅甲日产卵图，
图3为取食人工饲料以及加入Cry1C蛋白与PA人工饲料的青翅蚁形隐翅甲存活率图。
具体实施方式
本发明的转Bt基因抗虫水稻选择转cry1C基因水稻T1C-19，其对鳞翅目害虫有很高的抗性，非转基因亲本选择对照明恢63水稻，水稻种子均由华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室提供。水稻种子于长25cm×宽20cm×高3cm栽培盘中以Yoshida营养液培育至15±5cm高后用于评价试验。稻苗培育条件为温度26±2℃，相对湿度80％。
本发明的供试褐飞虱采自湖北武汉稻田，并在室内分别于T1C-19与明恢63的稻苗建立种群，饲养10代以上。青翅蚁形隐翅甲采自湖北孝感稻田，饲养条件为温度28℃，相对湿度65-80％，光暗比L 12h:D 12h。
本发明的评价方法由三级营养试验，蛋白传递规律，Tier-1毒性测定试验，3个关键部分组成。下面分别进行详细说明。
(1)三级营养试验：通过水稻—褐飞虱—青翅蚁形隐翅甲的食物链评价转Bt基因抗虫水稻通过猎物介导对青翅蚁形隐翅甲的安全性影响。
每日以不同水稻品系2-3龄褐飞虱若虫并补充果蝇成虫为食物饲喂青翅蚁形隐翅甲，具体操作如下：取24h内孵化的青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫，单头接入底部吸水海绵保湿的直径2cm，高12cm指形管内，指形管用200目的尼龙纱网和橡皮筋封口，置于温度28℃，光周期L:D＝12:12h，相对湿度65％-80％的智能人工气候箱内培养，每管每天饲喂2-3龄相应水稻品系上饲养的褐飞虱9-10头，并在青翅蚁形隐翅甲幼虫一龄第二天，二龄第二天每管每头补充一头果蝇成虫。每组各接青翅蚁形隐翅甲幼虫80头，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲幼虫的存活和蜕皮情况，直至幼虫羽化，初羽化成虫24h内用万分之一电子天平称重。
羽化24h后的青翅蚁形隐翅甲成虫雌雄配对后饲养于底部铺有湿润滤纸和湿润棉花的的直径9cm塑料培养皿内，培养皿边缘用封口膜封口并留缝隙作为通气孔，每皿一对，每天每皿饲喂相应品系上的褐飞虱15头，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲成虫所产卵粒数，测定65d，结果如图2所示，青翅蚁形隐翅甲在羽化一周以后产卵量增加，且在羽化30-50d达到产卵高峰期，羽化60d后产卵量明显下降。
将卵粒用毛笔挑入内置湿润棉球的24孔细胞培养板内，每孔一粒卵，培养板用扎有小孔的封口膜封口，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲卵的孵化数目，从青翅蚁形隐翅甲羽化开始测量。
以不同水稻材料饲养的褐飞虱若虫为食物的青翅蚁形隐翅甲生命表参数如表1所示，
表1
注：表中数据为平均数±标准误。
同一行中，转Bt基因抗虫水稻T1C-19与对照水稻明恢63进行统计学比较，
aU检验；b卡方检验；c学生t检验。
由表1可见，转Bt基因抗虫水稻T1C-19与亲本对照相比，青翅蚁形隐翅甲的各项生命表参数均无显著性差异。
(2)蛋白传递规律：通过ELISA检测手段鉴定青翅蚁形隐翅甲暴露于Bt蛋白的途径和程度。
于玻璃罐中分别放入15日龄不同水稻品系的稻苗，接入对应水稻材料饲养的褐飞虱1龄若虫，待褐飞虱2-3龄时分别取水稻叶鞘和褐飞虱若虫。叶鞘30±1mg、褐飞虱若虫35±1mg，每个处理重复3次。
以不同组稻苗饲养的2-3龄褐飞虱若虫饲养青翅蚁形隐翅甲幼虫直至羽化，对24h内的初羽化青翅蚁形隐翅甲成虫进行取样，隐翅甲成虫取样约35±2mg，每个处理重复3次。
T1C-19水稻--褐飞虱若虫-青翅蚁形隐翅甲三级营养关系中，其Cry1C蛋白传递规律如图1所示，T1C-19叶鞘组织中Cry1C蛋白含量显著高于褐飞虱若虫体内含量，青翅蚁形隐翅甲体内没有检测到Cry1C蛋白的存在。对照品系明恢63的所有处理均未检测到Cry1C蛋白。
以上结果表明，Cry1C蛋白通过食物链在青翅蚁形隐翅甲成虫体内无累积，且随着营养级的增加其Cry1C蛋白含量呈下降趋势。
(3)Tier-1毒性测定试验：评价转Bt基因抗虫水稻表达的Bt蛋白对非靶标生物青翅蚁形隐翅甲的潜在毒性。
用直径9cm的塑料培养皿饲养48h内孵化的青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫，培养皿底部放置厚度1±0.5cm的湿润基质土壤。基质土壤具体指园艺作物播种育苗有机基质土壤。人工饲料放于盖玻片上，盖玻片置于培养皿中的基质土表面，饲料每天更换。用封口膜封培养皿盖边缘，并留一小孔作为通气孔。适时给基质土表面喷洒自来水保证基质土湿润。
用三种形式的人工饲料搭配非转基因水稻品系(明恢63)上饲养的1-2龄褐飞虱若虫为青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲料，三种形式的饲料为：人工饲料、人工饲料与褐飞虱、添加转Bt基因抗虫水稻叶鞘组织Bt蛋白表达量的10倍以上剂量的饲料及褐飞虱与含有1mg/g砷酸二氢钾的人工饲料。褐飞虱只在青翅蚁形隐翅甲幼虫取食人工饲料第6、7、8三天补充；每个塑料培养皿中各接青翅蚁形隐翅甲幼虫1头，每个处理各接青翅蚁形隐翅甲幼虫75头，每日更换人工饲料并观察记录青翅蚁形隐翅甲蜕皮及存活情况，直至羽化，初羽化成虫在24h内用万分之一电子天平称重。
所述人工饲料是购买的伊威全机能肝粉与蜂蜜的混合物，人工饲料中全机能肝粉与蜂蜜按质量比5:1混合，所述全机能肝粉营养成分含量为：猪肝50％、鸡肝20％、鹅肝15％、红枣10％、低聚半乳糖5％。
取食三种形式的人工饲料的青翅蚁形隐翅甲生命表参数如表2所示，
表2
注：表中数据为平均数±标准误，-表明数量小不足以进行统计分析。
aU检验；b卡方检验；c学生t检验。数值后跟**表示与对照相比差异显著(P<0.01)。
从表2可见，与对照组(人工饲料)相比，含50μg/g Cry1C蛋白剂量的人工饲料处理组青翅蚁形隐翅甲各龄期发育历期、幼虫存活率、雌性率以及初羽化体重均无显著性差异；而阳性对照(1mg/g砷酸二氢钾的人工饲料)，其青翅蚁形隐翅甲1龄发育历期与对照相比没有显著性差异，2龄及以上龄期存活数量≦3头，无法进行发育历期统计分析，只有2头青翅蚁形隐翅甲幼虫发育为成虫。卡方检验对存活率进行分析，结果表明：与对照组相比，取食含有50μg/g Cry1C蛋白剂量人工饲料的青翅蚁形隐翅甲幼虫存活率无显著性差异(P＝0.729)；而取食含1mg/g砷酸二氢钾(PA)人工饲料的青翅蚁形隐翅甲幼虫，其存活率显著下降(P<0.001)(图3)。
此外，利用ELISA技术检测青翅蚁形隐翅甲幼虫取食前后，含Cry1C蛋白的人工饲料Cry1C蛋白含量分别为12.38±0.89ug/g和11.49±0.14μg/g，下降了7.20％，但其含量远高于水稻叶鞘组织的表达量。
将青翅蚁形隐翅甲幼虫取食前后含Cry1C蛋白的人工饲料与不含Cry1C蛋白的人工饲料(对照)进行适当稀释，按0.1％比例加入Triton X-100混匀后，用毛笔涂抹到玉米叶片表面，自然晾干后，每个处理接稻纵卷叶螟1龄幼虫15头，重复3次，48小时后记录死亡情况。结果表明，取食前后，含Cry1C蛋白的人工饲料对稻纵卷叶螟幼虫的致死率分别为55.56％和48.89％，显著高于对照人工饲料17.78％，整个取食过程中，Cry1C蛋白都具有较高的杀虫活性。
综上所述，青翅蚁形隐翅甲暴露于高剂量且具有杀虫活性的Cry1C蛋白。
综合三级营养生命表参数，蛋白传递规律，高剂量Cry1C蛋白喂食试验结果，证明了转cry1C基因抗虫水稻对青翅蚁形隐翅甲的生态安全性。

Claims (7)

1.转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于包括如下三个部分：
(1)三级营养试验：通过水稻—褐飞虱—青翅蚁形隐翅甲的食物链评价转Bt基因抗虫水稻通过猎物介导对青翅蚁形隐翅甲的安全性影响；
转基因组：取24h内孵化的青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫，单头接入底部吸水海绵保湿的指形管内，置于温度28℃，光周期L:D＝12:12h，相对湿度65％-80％的智能人工气候箱内培养，每管每天饲喂2-3龄转Bt基因抗虫水稻品系上饲养的褐飞虱9-10头，并在青翅蚁形隐翅甲幼虫一龄第二天，二龄第二天每管每头补充一头果蝇成虫；
对照组，水稻品系为非转基因水稻品系，其它同转基因组；
每组在指形管内各接青翅蚁形隐翅甲幼虫80头，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲幼虫的存活和蜕皮情况，直至幼虫羽化，初羽化成虫24h内用万分之一电子天平称重；
羽化24h后的青翅蚁形隐翅甲成虫雌雄配对，饲养于底部铺有湿润滤纸和湿润棉花的塑料培养皿内，每皿一对，每天每塑料培养皿饲喂相应水稻品系上的褐飞虱15头，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲成虫所产卵粒数，测定65d；
将卵粒用毛笔挑入内置湿润棉球的24孔细胞培养板内，每孔一粒卵，每天上午观察记录青翅蚁形隐翅甲卵的孵化数目；
选择青翅蚁形隐翅甲的幼虫发育历期、幼虫存活率、雌性率以及初羽化体重、青翅蚁形隐翅甲成虫产卵前期、产卵量、卵孵化率作为评价参数指标，并进行统计分析，评价由褐飞虱若虫介导的转Bt基因抗虫水稻对青翅蚁形隐翅甲的安全性影响；
(2)蛋白传递规律：通过ELISA检测手段鉴定青翅蚁形隐翅甲暴露于转Bt基因抗虫水稻所表达Bt蛋白的途径和程度；
于2000ml玻璃罐中分别放入15日龄转基因水稻品系和非转基因水稻品系的稻苗，接入对应材料饲养的褐飞虱1龄若虫，待褐飞虱2-3龄时分别取水稻叶鞘和褐飞虱若虫；水稻叶鞘组织取样30±1mg，褐飞虱若虫取样35±1mg；每组处理重复3次；
以不同组的稻苗饲养的2-3龄褐飞虱若虫饲养青翅蚁形隐翅甲幼虫直至羽化，对24h内的初羽化青翅蚁形隐翅甲成虫取样35±2mg，每组处理重复3次；
采用ELISA技术，分别对以上转基因水稻品系样品中Bt蛋白的含量进行检测，确定通过食物链青翅蚁形隐翅甲暴露于转Bt基因抗虫水稻所表达Bt蛋白的程度；
(3)Tier-1毒性测定试验：评价转Bt基因抗虫水稻表达的Bt蛋白对非靶标生物青翅蚁形隐翅甲的潜在毒性；
用塑料培养皿饲养48h内孵化的青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫，培养皿底部放置厚度1±0.5cm的湿润基质土壤；
用三种形式的人工饲料搭配非转基因水稻品系上饲养的1-2龄褐飞虱若虫为青翅蚁形隐翅甲幼虫的饲料，三种形式的饲料为：人工饲料、人工饲料与褐飞虱、添加转Bt基因抗虫水稻叶鞘组织Bt蛋白表达量的10倍以上剂量的饲料及褐飞虱与含有1mg/g砷酸二氢钾的人工饲料；每个培养皿接青翅蚁形隐翅甲幼虫1头，每个处理共75头，每日更换饲料并观察记录青翅蚁形隐翅甲蜕皮及存活情况，直至羽化，初羽化成虫在24h内用万分之一电子天平称重；
添加褐飞虱是在青翅蚁形隐翅甲幼虫取食人工饲料第6、7、8三天补充；
所述人工饲料是伊威全机能肝粉与蜂蜜的混合物；
试验中通过ELISA和敏感昆虫生测技术全程监测Bt蛋白的浓度、稳定性以及生物活性；
选择青翅蚁形隐翅甲的幼虫发育历期、幼虫存活率、雌性率以及初羽化体重作为评价参数指标，对其进行统计分析，以评价转Bt基因抗虫水稻表达的Bt蛋白对青翅蚁形隐翅甲的毒性影响；
最终，根据三个方面的研究数据综合分析转Bt基因抗虫水稻的种植对该非靶标生物产生的生态后果。
2.根据权利要求1所述的转基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于转Bt基因抗虫水稻为转cry1C基因水稻T1C-19，非转基因水稻为明恢63水稻。
3.根据权利要求1或2所述的转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于水稻种子于长25cm×宽20cm×高3cm栽培盘中以Yoshida营养液培育至15±5cm以上，稻苗培育条件为温度26±2℃，相对湿度80％。
4.根据权利要求1所述的转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于供试褐飞虱在室内分别于转cry1C基因水稻T1C-19与明恢63的稻苗建立种群，饲养10代以上；青翅蚁形隐翅甲饲养条件为温度28℃，相对湿度65-80％，光暗比L 12h:D 12h。
5.根据权利要求1所述的转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于青翅蚁形隐翅甲一龄幼虫单头接入底部吸水海绵保湿的直径2cm，高12cm指形管内，指形管用200目的尼龙纱网和橡皮筋封口。
6.根据权利要求1所述的转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于青翅蚁形隐翅甲成虫雌雄配对后饲养于直径9cm塑料培养皿内，培养皿边缘用封口膜封口并留缝隙作为通气孔。
7.根据权利要求1所述的转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法，其特征在于人工饲料中全机能肝粉与蜂蜜按质量比5:1混合，所述全机能肝粉营养成分含量为：猪肝50％、鸡肝20％、鹅肝15％、红枣10％、低聚半乳糖5％。
CN201410446376.5A 2014-09-03 2014-09-03 转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法 Pending CN104322452A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410446376.5A CN104322452A (zh) 2014-09-03 2014-09-03 转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410446376.5A CN104322452A (zh) 2014-09-03 2014-09-03 转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104322452A true CN104322452A (zh) 2015-02-04

Family

ID=52397383

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410446376.5A Pending CN104322452A (zh) 2014-09-03 2014-09-03 转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104322452A (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104813855A (zh) * 2015-04-29 2015-08-05 广西壮族自治区农业科学院水稻研究所 转基因抗除草剂水稻对黑肩绿盲蝽环境安全性的评价方法
CN107917852A (zh) * 2017-11-15 2018-04-17 中国农业科学院植物保护研究所 一种有毒物质对绿盲蝽若虫影响的生物测定方法
CN107950489A (zh) * 2017-12-22 2018-04-24 江西省农业科学院植物保护研究所 一种室内饲养青翅蚁形隐翅虫的方法
CN109892289A (zh) * 2018-05-29 2019-06-18 华中农业大学 转基因作物表达的杀虫蛋白对麦蛾柔茧蜂幼虫安全性评价方法
CN110150236A (zh) * 2019-06-19 2019-08-23 北京林业大学 一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法
CN111066734A (zh) * 2019-12-24 2020-04-28 广东省生物资源应用研究所 一种红火蚁饵料田间评价方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103875608A (zh) * 2014-03-24 2014-06-25 华中农业大学 转基因抗虫水稻对捕食性天敌黑肩绿盲蝽安全性评价方法
CN103931564A (zh) * 2014-04-15 2014-07-23 华中农业大学 转基因抗虫水稻对寄生性天敌稻虱缨小蜂安全性评价方法
CN103931563A (zh) * 2014-04-15 2014-07-23 华中农业大学 转基因抗虫水稻对捕食性天敌草间钻头蛛安全性评价方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103875608A (zh) * 2014-03-24 2014-06-25 华中农业大学 转基因抗虫水稻对捕食性天敌黑肩绿盲蝽安全性评价方法
CN103931564A (zh) * 2014-04-15 2014-07-23 华中农业大学 转基因抗虫水稻对寄生性天敌稻虱缨小蜂安全性评价方法
CN103931563A (zh) * 2014-04-15 2014-07-23 华中农业大学 转基因抗虫水稻对捕食性天敌草间钻头蛛安全性评价方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
古德祥 等: "青翅蚁形隐翅虫在稻田捕食性天敌中的地位与作用", 《中国生物防治》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104813855A (zh) * 2015-04-29 2015-08-05 广西壮族自治区农业科学院水稻研究所 转基因抗除草剂水稻对黑肩绿盲蝽环境安全性的评价方法
CN107917852A (zh) * 2017-11-15 2018-04-17 中国农业科学院植物保护研究所 一种有毒物质对绿盲蝽若虫影响的生物测定方法
CN107950489A (zh) * 2017-12-22 2018-04-24 江西省农业科学院植物保护研究所 一种室内饲养青翅蚁形隐翅虫的方法
CN109892289A (zh) * 2018-05-29 2019-06-18 华中农业大学 转基因作物表达的杀虫蛋白对麦蛾柔茧蜂幼虫安全性评价方法
CN109892289B (zh) * 2018-05-29 2021-04-06 华中农业大学 转基因作物表达的杀虫蛋白对麦蛾柔茧蜂幼虫安全性评价方法
CN110150236A (zh) * 2019-06-19 2019-08-23 北京林业大学 一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法
CN110150236B (zh) * 2019-06-19 2021-04-06 北京林业大学 一种利用黑腹果蝇评价三唑类农药的生长发育毒性的方法
CN111066734A (zh) * 2019-12-24 2020-04-28 广东省生物资源应用研究所 一种红火蚁饵料田间评价方法
CN111066734B (zh) * 2019-12-24 2022-03-04 广东省科学院动物研究所 一种红火蚁饵料田间评价方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103875608B (zh) 转基因抗虫水稻对捕食性天敌黑肩绿盲蝽安全性评价方法
CN103931564B (zh) 转基因抗虫水稻对寄生性天敌稻虱缨小蜂安全性评价方法
Hill Agricultural insect pests of temperate regions and their control
CN101971931B (zh) 一种大螟的人工饲料,其制备方法及饲养方法
Jian et al. Conservation of traditional rice varieties in a globally important agricultural heritage system (GIAHS): Rice-fish co-culture
CN104322452A (zh) 转Bt基因抗虫水稻对捕食性天敌青翅蚁形隐翅甲安全性评价方法
CN103155906A (zh) 食蚜瘿蚊批量繁殖工艺及应用技术
CN110199743A (zh) 一种草地贪夜蛾的防治方法
Brygadyrenko et al. Trophic relations of Opatrum sabulosum (Coleoptera, Tenebrionidae) with leaves of cultivated and uncultivated species of herbaceous plants under laboratory conditions
CN104133054B (zh) 一种评价转基因棉花对大草蛉影响的生物测定方法
CN104957107B (zh) 一种室内饲养龟纹瓢虫的方法
Islam et al. Novel evidence for systemic induction of silicon defences in cucumber following attack by a global insect herbivore
CN104459095A (zh) 一种Bt蛋白对龟纹瓢虫的安全性评价方法
Crisol et al. Planthopper‐rice interactions: unequal stresses on pure‐line and hybrid rice under similar experimental conditions
CN107980729A (zh) 一种室内繁育粉蚧及班氏跳小蜂的方法
CN111066731A (zh) 一种评价新型Bt杀虫蛋白对瓢虫影响的生物测定方法
CN103931563B (zh) 转基因抗虫水稻对捕食性天敌草间钻头蛛安全性评价方法
Ramzan et al. Biology of fall armyworm, Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) a new alien invasive Pest in Pakistan
Tende et al. Evaluation of Chilo partellus and Busseola fusca susceptibility to δ-endotoxins in Bt maize
CN109892289A (zh) 转基因作物表达的杀虫蛋白对麦蛾柔茧蜂幼虫安全性评价方法
CN103340107B (zh) 一种鉴定棉花枯萎病抗性的适乐时包衣菌土营养钵法
CN108617890B (zh) 一种铜绿丽金龟幼虫用饲料及其制备方法和无土饲养方法
US20040151699A1 (en) Bactericidal, bacteriostatic and fungicidal composition, comprising two or more live species of trichoderma and its preparation procedure, and a composition based on latex for a pruning cicatrizing that includes a latex base and a composition of two or more live species of trichoderma
Phungula et al. Developmental diet, life stage and thermal acclimation affect thermal tolerance of the fall armyworm, Spodoptera frugiperda
Bhoi et al. Developmental biology of Chilo partellus on different maize genotypes and their effects on larval establishment and adult

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150204