CN110199743A - 一种草地贪夜蛾的防治方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种草地贪夜蛾的防治方法，包括以下步骤：步骤一：用水将昆虫病原线虫从海绵块中洗脱，制备昆虫病原线虫悬浮液，昆虫病原线虫悬浮液由水与昆虫病原线虫组成；步骤二：将步骤一中获得的昆虫病原线虫悬浮液均匀施用在农作物叶面上和/或农作物土壤上；步骤三：昆虫病原线虫侵染农作物叶面上和/或土壤表面的草地贪夜蛾幼虫，并侵染农作物土壤下方的草地贪夜蛾老熟幼虫、预蛹和蛹。本发明应用昆虫病原线虫侵染草地贪夜蛾叶面虫态和地下虫态，进行草地贪夜蛾的生物防治，不污染环境，不会对草地贪夜蛾产生抗药性，昆虫病原线虫环境中不断增殖，能够在环境中建立种群，达到持续稳定控制害虫致可控可防的状态。

Description

一种草地贪夜蛾的防治方法

技术领域

本发明涉及生物防治的技术领域，尤其是涉及一种草地贪夜蛾的防治方法。

背景技术

草地贪夜蛾是一种玉米、高粱、甘蔗等多种粮食和经济作物上的重大害虫，联合国粮农组织曾与2017年发布全球预警。该虫于2019年1月入侵我国云南省以来，正逐渐北上靠近中国玉米主产区。

线虫是土壤中最为丰富的土壤无脊椎动物，大部分生活在植物根际。根据食性可分为3类：腐生线虫、植物寄生线虫和动物寄生线虫。昆虫病原线虫专性寄生于昆虫体内，已知有1000多种。昆虫病原线虫借助水膜运动，寻找到寄主昆虫，通过昆虫自然孔口或表皮进入寄主血腔后，释放共生菌，共生菌在昆虫体内增殖，并产生毒素，一般在常温下24～48h内可致死寄主。国际上应用昆虫病原线虫较大面积防治的害虫主要有葡萄根象甲、桔根象甲、透翅蛾和草坪蝼蛄等，我国主要用于防治蛴螬、跳甲、出土期的越冬代桃小食心虫、危害部位隧道简单的某些天牛等土栖性或隐蔽性害虫。

专利号为201610164901.3，发明名称为一种通过昆虫病原线虫防治地下害虫的方法，该发明公开了使用昆虫病原线虫防治地下害虫的方法，但是当害虫为害农作物叶面时，会对农作物产生更大的影响，该发明未解决下列技术问题：一是昆虫病原线虫是否能够寄生叶面虫态；二是叶面环境是否能够让昆虫病原线虫成功寄生叶面虫态；三是什么样的用量和方法能够让昆虫病原线虫成功寄生叶面虫态。同时该发明主要用于防治蛴螬、蝼蛄、地老虎、金针虫四种害虫，而未对草地贪夜蛾进行过试验与研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种草地贪夜蛾的防治方法，本发明应用昆虫病原线虫侵染草地贪夜蛾叶面虫态和地下虫态，进行草地贪夜蛾的生物防治，不污染环境，不会对草地贪夜蛾产生抗药性，昆虫病原线虫环境中不断增殖，能够在环境中建立种群，达到持续稳定控制害虫致可控可防的状态。

本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：一种草地贪夜蛾的防治方法，包括以下步骤：

步骤一：用水将昆虫病原线虫从海绵块中洗脱，制备昆虫病原线虫悬浮液，昆虫病原线虫悬浮液由水与昆虫病原线虫组成；

步骤二：将步骤一中获得的昆虫病原线虫悬浮液均匀施用在农作物叶面上和/或农作物土壤上；

步骤三：昆虫病原线虫侵染农作物叶面上和/或土壤表面的草地贪夜蛾幼虫，并侵染农作物土壤下方的草地贪夜蛾老熟幼虫、预蛹和蛹。草地贪夜蛾老熟幼虫是指草地贪夜蛾最后一个幼虫龄期且落到土中时所处的阶段，预蛹是指老熟幼虫停止取食至化蛹之前的这个发育阶段。

目前现有技术尚未解决如何使用昆虫病原线虫侵染草地贪夜蛾，更未解决农作物叶面上的草地贪夜蛾防治，上述通过将昆虫病原线虫与水制备成悬浮液，并施用在叶面上，通过昆虫病原线虫侵染草地贪夜蛾，达到防治草地贪夜蛾的效果，该过程不污染环境，不会对草地贪夜蛾产生抗药性，昆虫病原线虫能够在环境中不断增殖，持续使用一段时间以后，能够在环境中建立一定的种群，与其他环境友好的害虫防治方法共同发挥作用，达到持续稳定控制害虫致可控可防的状态。

作为优选，昆虫病原线虫为异小杆科或斯氏线虫科的线虫。

作为优选，昆虫病原线虫悬浮液制备的浓度为100-6667IJs/ml。昆虫病原线虫使用剂量为叶面每亩1亿尾IJs(感染期线虫infectivejuveniles)～4亿尾IJs，地表每亩1尾IJs～4亿尾IJs。通过该剂量可以制备合适的浓度，浓度需要根据草地贪夜蛾的数量进行制备。

作为优选，步骤二中所述均匀喷洒在农作物叶面上是指喷洒在玉米喇叭口。由于昆虫病原线虫的生活环境要求湿润、避光，喷洒在玉米喇叭口从而保证昆虫病原线虫能够存活。

作为优选，还包括步骤一前的步骤1，步骤1包括以下内容：

农作物叶面与土壤表面的草地贪夜蛾的数量调查：采用五点取样法调查农作物叶面虫口基数，每块土地选择若干个点，每点选择5棵农作物，拨开农作物叶子，调查叶面与土壤表面草地贪夜蛾各龄期的数量；

农作物土壤内的草地贪夜蛾的数量调查：挖开农作物根际1-20cm面积内、距地表1-8cm深度内的土壤，调查土壤中草地贪夜蛾的老熟幼虫、预蛹和蛹的数量。通过对草地贪夜蛾的调查，可以更明确应该使用多少尾昆虫病原线虫、使用哪个浓度的昆虫病原线虫悬浮液更加有利于消除草地贪夜蛾。

作为优选，步骤二中的施用是指喷雾或水肥一体化或滴灌或飞防。水肥一体化是借助压力系统(或地形自然落差)，将可溶性固体或液体肥料，按土壤养分含量和作物种类的需肥规律和特点，配兑成的肥液与灌溉水一起，通过可控管道系统供水、供肥，使水肥相融后，通过管道和滴头形成滴灌,均匀、定时、定量浸润作物根系发育生长区域，使主要根系土壤始终保持疏松和适宜的含水量；同时根据不同的作物的需肥特点，土壤环境和养分含量状况,作物不同生长期需水，需肥规律情况进行不同生育期的需求设计，把水分、养分定时定量，按比例直接提供给作物。滴灌是利用塑料管道将水通过直径约10mm毛管上的孔口或滴头送到作物根部进行局部灌溉。飞防是通过通用飞机喷洒农药的一种大面积、短时期压低虫口密度的有效方法，具有其它常规措施难以比拟的优越性。

作为优选，还包括步骤一和步骤二之间的昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法，昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法包括昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定方法、昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定方法、昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定方法。通过昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法，能够检测昆虫病原线虫对草地贪夜蛾防治的敏感性，防止由于昆虫病原线虫死亡等原因，在田间投放后无效后导致农作物被大量损伤、减产等情况发生。通过对不同阶段的草地贪夜蛾进行测定，确保昆虫病原线虫对草地贪夜蛾防治的有效性。

作为优选，昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定方法包括以下步骤：

步骤A1：在室温环境下，在放有滤纸的培养皿中用新鲜的玉米秸秆或幼嫩的玉米叶单独将草地贪夜蛾幼虫饲养至2龄、3龄、4龄、5龄、6龄；

步骤A2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至滤纸上；

步骤A3：每天加入清水至滤纸中保湿，并且同时观察草地贪夜蛾幼虫的存活情况，记录草地贪夜蛾幼虫死亡率；

步骤A4：观察到草地贪夜蛾幼虫死亡后继续保湿保存虫尸，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

作为优选，昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定方法包括以下步骤：

步骤B1：在室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫至6龄幼虫后，在培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，在培养皿中加水至土壤相对水含量在40％-60％，在土壤表面放一张滤纸，滤纸上用清水保湿，将6龄期的草地贪夜蛾老熟幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上后，将培养皿密封并每天更换新鲜的玉米秸秆，直至草地贪夜蛾老熟幼虫自行钻入土壤中；

步骤B2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至土壤表面，每24小时观察草地贪夜蛾老熟幼虫的存活情况，记录草地贪夜蛾老熟幼虫死亡率；

步骤B3：观察到草地贪夜蛾老熟幼虫死亡后，将虫尸转移至另外的培养皿中，培养皿底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

作为优选，昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定方法包括以下步骤：

步骤C1：在室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫至6龄幼虫后，在培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，在培养皿中加水至土壤相对水含量在40％-60％，在土壤表面放一张滤纸，滤纸上用清水保湿，将6龄期的草地贪夜蛾老熟幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上后，将培养皿密封并每天更换新鲜的玉米秸秆，直至草地贪夜蛾老熟幼虫自行钻入土壤中，2-3天后草地贪夜蛾发育至预蛹或蛹；

步骤C2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至土壤表面，每24小时观察草地贪夜蛾预蛹和/或蛹的存活情况，记录草地贪夜蛾预蛹和/或蛹的死亡率；

步骤C3：观察到草地贪夜蛾预蛹和/或蛹，将虫尸转移至另外的培养皿中，培养皿底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

本发明具有的有益效果是：

1、昆虫病原线虫能够在环境中不断增殖，持续使用一段时间以后，能够在环境中建立一定的种群，与其他环境友好的害虫防治方法共同发挥作用，达到持续稳定控制害虫致可控可防的状态；

2、具有施用方便、搜索寄主能力强，侵染致死有效性高，起效时间快，对人畜、天敌、环境安全等特点。

3、化学农药防治易使害虫产生抗药性，农药残留污染土壤和环境，其他生物农药防治效果不稳定；而昆虫病原线虫本身是一种害虫天敌，用天敌防治害虫，遵循了人与自然的和谐发展，并且突破了传统菌剂生物农药起效慢，效果不稳定，地下害虫防治效果不理想等缺陷。

具体实施方式

以下采用实施方式对本发明作进一步的说明。

本发明一种草地贪夜蛾的防治方法，包括以下步骤：

步骤一：用水将昆虫病原线虫从海绵块中洗脱，制备昆虫病原线虫悬浮液，昆虫病原线虫悬浮液由水与昆虫病原线虫组成；

步骤二：将步骤一中获得的昆虫病原线虫悬浮液均匀施用在农作物叶面上和/或农作物土壤上；

步骤三：昆虫病原线虫侵染农作物叶面上和/或土壤表面的草地贪夜蛾幼虫，并侵染农作物土壤下方的草地贪夜蛾老熟幼虫、预蛹和蛹。

昆虫病原线虫施用于叶面，防治草地贪夜蛾营叶面生活的幼虫，昆虫病原线虫施用于土壤表面，防治草地贪夜蛾落入土壤中生活的老熟幼虫、预蛹和蛹。

昆虫病原线虫为异小杆科(Heterorhabditidae)或斯氏线虫科(Steinernematidae)的线虫。

昆虫病原线虫悬浮液制备的浓度为100-6667IJs/ml。

步骤二中所述均匀喷洒在农作物叶面上是指喷洒在玉米喇叭口。由于昆虫病原线虫的生活环境要求湿润、避光，喷洒在玉米喇叭口从而保证昆虫病原线虫能够存活。

还包括步骤一前的步骤1，步骤1包括以下内容：

农作物叶面与土壤表面的草地贪夜蛾的数量调查：采用五点取样法调查农作物叶面虫口基数，每块土地选择若干个点，每点选择5颗农作物，拨开农作物叶子，调查叶面与土壤表面草地贪夜蛾各龄期的数量；

农作物土壤内的草地贪夜蛾的数量调查：挖开农作物根际1-20cm面积内、距地表1-8cm深度内的土壤，调查土壤中草地贪夜蛾的老熟幼虫、预蛹和蛹的数量。通过对草地贪夜蛾的调查，可以更明确应该使用多少尾昆虫病原线虫、使用哪个浓度的昆虫病原线虫悬浮液更加有利于消除草地贪夜蛾。

步骤二中的施用是指喷雾或水肥一体化或滴灌或飞防。

还包括步骤一和步骤二之间的昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法，昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法包括昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定方法、昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定方法、昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定方法。

昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定方法包括以下步骤：

步骤A1：在室温环境下，在放有滤纸的培养皿中用新鲜的玉米秸秆或幼嫩的玉米叶单独将草地贪夜蛾幼虫饲养至2龄、3龄、4龄、5龄、6龄；

步骤A2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至滤纸上；

步骤A3：每天加入清水至滤纸中保湿，并且同时观察草地贪夜蛾幼虫的存活情况，记录草地贪夜蛾幼虫死亡率；

步骤A4：观察到草地贪夜蛾幼虫死亡后继续保湿保存虫尸，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定方法包括以下步骤：

步骤B1：在室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫至6龄幼虫后，在培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，在培养皿中加水至土壤相对水含量在40％-60％，在土壤表面放一张滤纸，滤纸上用清水保湿，将6龄期的草地贪夜蛾老熟幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上后，将培养皿密封并每天更换新鲜的玉米秸秆，直至草地贪夜蛾老熟幼虫自行钻入土壤中；

步骤B2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至土壤表面，每24小时观察草地贪夜蛾老熟幼虫的存活情况，记录草地贪夜蛾老熟幼虫致死率；

步骤B3：观察到草地贪夜蛾老熟幼虫死亡后，将虫尸转移至另外的培养皿中，培养皿底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定方法包括以下步骤：

步骤C1：在室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫至6龄幼虫后，在培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，在培养皿中加水至土壤相对水含量在40％-60％，在土壤表面放一张滤纸，滤纸上用清水保湿，将6龄期的草地贪夜蛾老熟幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上后，将培养皿密封并每天更换新鲜的玉米秸秆，直至草地贪夜蛾老熟幼虫自行钻入土壤中，2-3天后草地贪夜蛾发育至预蛹或蛹；

步骤C2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至土壤表面，每24小时观察草地贪夜蛾预蛹和/或蛹的存活情况，记录草地贪夜蛾预蛹和/或蛹的致死率；

步骤C3：观察到草地贪夜蛾预蛹和/或蛹，将虫尸转移至另外的培养皿中，培养皿底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

下列实施例中，实施例一到实施例四是实验室测定的数据，实施例五是在实际田间测定的数据。

实施例一

昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定

在温度为26℃左右的室温环境下，于培养皿中单独饲养草地贪夜蛾幼虫，在直径为9cm的玻璃培养皿中放入一张直径为9cm的滤纸，草地贪夜蛾用新鲜的玉米秸秆或幼嫩的玉米叶，每隔24小时加入1ml清水至滤纸上保湿，在培养皿中单独饲养至2龄、3龄、4龄、5龄或6龄幼虫。将斯氏线虫从海绵块中洗脱，用清水稀释至100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml浓度的线虫悬浮液，用移液枪吸取1ml昆虫病原线虫悬浮液，均匀加入至滤纸上。仍然每天加入1ml清水至滤纸中保湿，并且同时观察记录草地贪夜蛾幼虫的存活情况。观察到草地贪夜蛾幼虫死亡后继续保湿保存虫尸，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖。除了能致死寄主之外，还能够在体内增殖，成熟后钻出来继续寄生新的寄主，也就是表中的侵染力数据。

表1草地贪夜蛾幼虫的平均死亡率(％)和线虫的侵染率(％)

	100IJs/ml	250IJs/ml	500IJs/ml
				幼虫死亡率	50.5±6.2	74.0±4.1	95.3±8.7
线虫侵染率	89.1±7.3	91.7±3.6	100

实施例二

昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定

在温度为26℃左右的室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫，将草地贪夜蛾幼虫饲养至6龄幼虫后，在9cm培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，加入适量水至土壤相对含水量50％左右，在土表放一张滤纸，喷入约2ml清水保湿，将6龄期幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上，将同样大小的培养皿下盖盖在上面，四周用封口膜封住防止逃逸。每天更换新鲜的玉米秸秆，直至老熟幼虫自行钻入土壤中。将异小杆线虫从海绵块中洗脱，用清水稀释至100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml浓度的线虫悬浮液，用移液枪吸取1ml昆虫病原线虫悬浮液，均匀加入至土表，盖上上盖保湿，每24h观察记录草地贪夜蛾老熟幼虫的存活情况。观察到草地贪夜蛾幼虫死亡后，将虫尸转移至另外的培养皿中，底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖。

表2草地贪夜蛾老熟幼虫的平均死亡率(％)和线虫的侵染率(％)

实施例三

昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定

在温度为26℃左右的室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫，将草地贪夜蛾幼虫饲养至6龄幼虫后，在9cm培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，加入适量水至土壤相对含水量50％左右，在土表放一张滤纸，喷入约2ml清水保湿，将6龄期幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上，将同样大小的培养皿下盖盖在上面，四周用封口膜封住防止逃逸。每天更换新鲜的玉米秸秆，直至老熟幼虫自行钻入土壤中，2天～3天以后，草地贪夜蛾发育至预蛹或蛹。将两种品系的斯氏线虫从海绵块中洗脱，用清水稀释至100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml浓度的线虫悬浮液，用移液枪吸取1ml昆虫病原线虫悬浮液，均匀加入至土表，盖上上盖保湿，每24h观察记录草地贪夜蛾预蛹/蛹的存活情况。观察到草地贪夜蛾预蛹/蛹死亡后，将虫尸转移至另外的培养皿中，底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖。

表3草地贪夜蛾老熟幼虫的平均死亡率(％)和线虫的侵染率(％)

实施例四

昆虫病原线虫防治玉米上的草地贪夜蛾

在直径20cm的花盆中播下玉米种子，待玉米长至小喇叭口期，将室温条件下饲养的草地贪夜蛾2～3龄幼虫释放到玉米叶上，每株玉米释放10头低龄幼虫，放置两天后开始花盆防治试验。将斯氏线虫从海绵块中洗脱，用清水稀释至200IJs/ml、500IJs/ml和1000IJs/ml，将配置好的线虫悬浮液置于小型喷雾器中，对准玉米喇叭口喷雾，每株玉米喷入约30ml线虫悬浮液。5天以后将玉米叶小心剥开，记录草地贪夜蛾幼虫的存活情况。将虫尸放在装有滤纸的培养皿中保湿保存，3天以后解剖虫尸，记录寄主体内有线虫增殖的虫尸数量。

表4草地贪夜蛾幼虫的平均死亡率(％)和线虫的侵染率(％)

	200IJs/ml	500IJs/ml	1000IJs/ml
				幼虫死亡率	29.4±3.4	56.0±5.2	80.5±7.2
线虫侵染率	69.1±5.0	87.2±4.3	90.2±6.0

实施例五

昆虫病原线虫防治玉米上的草地贪夜蛾

防治试验在云南开展。玉米处于拔节期，线虫施用前采用五点取样法调查虫口基数，每点选择5棵玉米，剥开玉米叶，调查地上部草地贪夜蛾各龄期的数量，挖开玉米根际直径1-20cm面积内、距地表1-8cm深度内的土壤，调查土壤中老熟幼虫、预蛹和蛹的数量。

傍晚施用线虫，气温32℃，土壤相对含水量30％。将斯氏线虫从海绵块中洗脱，处理一，用清水稀释至2000IJs/ml，每亩地地上部分用线虫悬浮液50kg，对准喇叭口均匀喷雾。地下部分用线虫悬浮液30kg，浓度为3333IJs/ml，对地表均匀喷雾，以喷施等量的清水为对照，7天以后调查各小区玉米地上部和地下部的虫口数量，计算得出矫正死亡率为25％～57％。处理二，用清水稀释至4000IJs/ml浓度的线虫悬浮液，每亩地地上部分用线虫悬浮液50kg，对准喇叭口均匀喷雾。地下部分用线虫悬浮液30kg，浓度为6667IJs/ml，对地表均匀喷雾。以喷施等量的清水为对照。7天以后调查各小区玉米地上部和地下部的虫口数量，计算得出矫正死亡率为48％～76％。处理三，用清水稀释至4000IJs/ml浓度的线虫悬浮液，每亩地地上部分用线虫悬浮液50kg，对准喇叭口均匀喷雾。地下部分用线虫悬浮液30kg，浓度为3333IJs/ml，对地表均匀喷雾，以喷施等量的清水为对照，7天以后调查各小区玉米地上部和地下部的虫口数量，计算得出矫正死亡率为35％～69％。

说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (8)

1.一种草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：用水将昆虫病原线虫从海绵块中洗脱，制备昆虫病原线虫悬浮液，昆虫病原线虫悬浮液由水与昆虫病原线虫组成；

步骤二：将步骤一中获得的昆虫病原线虫悬浮液均匀施用在农作物叶面上和/或农作物土壤上；

步骤三：昆虫病原线虫侵染农作物叶面上和/或土壤表面的草地贪夜蛾幼虫，并侵染农作物土壤下方的草地贪夜蛾老熟幼虫、预蛹和蛹。

2.根据权利要求1所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：昆虫病原线虫为异小杆科或斯氏线虫科的线虫。

3.根据权利要求1或2所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：还包括步骤一前的步骤1，步骤1包括以下内容：

农作物叶面与土壤表面的草地贪夜蛾的数量调查：采用五点取样法调查农作物叶面虫口基数，每块土地选择若干个点，每点选择5棵农作物，拨开农作物叶子，调查叶面上草地贪夜蛾各龄期的数量；

农作物土壤内的草地贪夜蛾的数量调查：挖开农作物根际1-20cm面积内、距地表1-8cm深度内的土壤，调查土壤中草地贪夜蛾的老熟幼虫、预蛹和蛹的数量。

4.根据权利要求3所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：步骤二中的施用是指喷雾或水肥一体化或滴灌或飞防。

5.根据权利要求1或2或4所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：还包括步骤一和步骤二之间的昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法，昆虫病原线虫对草地贪夜蛾的生物测定方法包括昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定方法、昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定方法、昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定方法。

6.根据权利要求5所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：昆虫病原线虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的生物测定方法包括以下步骤：

步骤A1：在室温环境下，在放有滤纸的培养皿中用新鲜的玉米秸秆或幼嫩的玉米叶单独将草地贪夜蛾幼虫饲养至2龄、3龄、4龄、5龄、6龄；

步骤A2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至滤纸上；

步骤A3：每天加入清水至滤纸中保湿，并且同时观察草地贪夜蛾幼虫的存活情况，记录草地贪夜蛾幼虫死亡率；

步骤A4：观察到草地贪夜蛾幼虫死亡后继续保湿保存虫尸，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

7.根据权利要求5所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：昆虫病原线虫对草地贪夜蛾老熟幼虫的生物测定方法包括以下步骤：

步骤B1：在室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫至6龄幼虫后，在培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，在培养皿中加水至土壤相对水含量在40％-60％，在土壤表面放一张滤纸，滤纸上用清水保湿，将6龄期的草地贪夜蛾老熟幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上后，将培养皿密封并每天更换新鲜的玉米秸秆，直至草地贪夜蛾老熟幼虫自行钻入土壤中；

步骤B2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至土壤表面，每24小时观察草地贪夜蛾老熟幼虫的存活情况，记录草地贪夜蛾老熟幼虫死亡率；

步骤B3：观察到草地贪夜蛾老熟幼虫死亡后，将虫尸转移至另外的培养皿中，培养皿底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。

8.根据权利要求5所述的草地贪夜蛾的防治方法，其特征在于：昆虫病原线虫对草地贪夜蛾预蛹和蛹的生物测定方法包括以下步骤：

步骤C1：在室温环境下，单独饲养草地贪夜蛾老熟幼虫至6龄幼虫后，在培养皿下盖中加入田间采集的土壤至下盖平齐，在培养皿中加水至土壤相对水含量在40％-60％，在土壤表面放一张滤纸，滤纸上用清水保湿，将6龄期的草地贪夜蛾老熟幼虫和新鲜的玉米秸秆放置在滤纸上后，将培养皿密封并每天更换新鲜的玉米秸秆，直至草地贪夜蛾老熟幼虫自行钻入土壤中，2-3天后草地贪夜蛾发育至预蛹或蛹；

步骤C2：取步骤一制备好的浓度分别为100IJs/ml、250IJs/ml、500IJs/ml的昆虫病原线虫悬浮液，用移液枪吸取昆虫病原线虫悬浮液，均匀滴至土壤表面，每24小时观察草地贪夜蛾预蛹和/或蛹的存活情况，记录草地贪夜蛾预蛹和/或蛹的死亡率；

步骤C3：观察到草地贪夜蛾预蛹和/或蛹，将虫尸转移至另外的培养皿中，培养皿底部放滤纸加水保湿，3天后在显微镜下解剖，观察是否有昆虫病原线虫在虫尸内增殖，记录昆虫病原线虫侵染率。