CN1117586A

CN1117586A - 乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测装置及方法

Info

Publication number: CN1117586A
Application number: CN 94115014
Authority: CN
Inventors: 张永新; 李建国
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1994-08-24
Filing date: 1994-08-24
Publication date: 1996-02-28

Abstract

本发明涉及一种乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测装置及方法，其特征在于检测装置由反应池、反应膜、反应管组成，在反应池底口装有反应膜，其膜上有包被点，当样本含有被检测的物与膜上包被点结合时，当再加入酶标记物时，使底物呈色，从而可达到检测的目的，该装置结构简单，方法简便迅速，结果准确率高，适用于家庭和医院临床及身体检查。

Description

乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测装置及方法

本发明涉及一种免疫学检测装置及方法，特别是乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测装置及方法。

一般免疫学检测多为单项检测单项结果，其检测过程复杂，时间长、速度慢，不能适应要求快速多项结果的检测，如在机场，对旅客进行免疫检测，多数是多次取血单项检测，因此不仅工作量大，更不能用微量样本在短时间内测得多项结果。

本发明的目的在于克服上述已有技术存在的缺点与不足，而提供一种膜型三联免疫检测装置和方法，能快速简便的一次取血检测，同时得到三个检测结果，为免疫检测提供了极大方便。

本发明的技术方案是根据酶联免疫测定原理结合斑点膜免疫渗滤技术，对样本含有的乙肝表面抗原(HBsAg)，艾滋病毒抗体和梅毒抗体三种病原感染标志同时检测，当样本含乙肝表面抗原，艾滋病抗体(抗—HIV)或/和梅毒抗体时，这些待检物便会分别与反应膜包被物(点、杠、点)结合，当再加入酶标记乙肝表面抗体和酶标抗一人—IgG时，这此酶结合物便能和结合在抗原上的抗体或/和结合在抗—HBS上的HBSAg结合，即会分别选择地与圆点上结合的HBsAg，或/和杠(8)上结合的抗—HIV，或/和杠(9)上结合的梅毒抗体结合，由于酶标记乙肝表面抗体和酶标抗—人—IgG均为单克隆抗体，故均可被杠(10)上的抗—鼠—IgG所捕获，即无论(7)(8)和(9)号有无待检物，点(10)上均有酶标抗体，当多余的酶标抗体洗掉后，加入的底物显色液即可被酶催化，使点(7)杠(8)或/和点(9)阳性样本呈色，而阴性样本无色，而做为质控点的杠(10)则无论是否有阳性样本均可呈色，说明检测试剂有效，过程正确。

本发明的技术方案是通过下列方式实现的：

乙肝、艾滋病、酶毒膜型三联免疫检测装置，其特征在于它由反应池、反应膜、反应管组成，反应池下口与反应管上部配合，其底口装有反应膜和软纸垫，条形反应膜装在软纸垫正中线上，反应管封闭的底部中心有一通气孔，内部填有吸水填充料。

乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测方法，包括试剂的配制，反应膜的包被和检测步骤，其特征在于：

a)检测试剂由酶标抗体工作液、清洗液、显色液、血液处理液和终止液组成，酶标抗体工作液按同等敏感性酶联免疫所需的酶标抗体浓度的10—150倍配制，并加入适量硫柳汞钠及0.4—3.0％乙二胺四乙酸二钠，即为试剂1；清洗液采用0.01—0.2M吐温磷酸盐缓冲液，即为试剂2；显色液采用二氨基联苯胺或邻联甲苯胺，即为试剂3；血液处理液采用0.5—3.0％拧檬酸三钠，0.2—3.0％聚二乙醇，0.2‰叠氮钠溶于0.1M磷酸盐缓冲液中，即为试剂4；终止液采用0.2N硫酸即为试剂。

b)反应膜包被采用微机或人工包被或电泳包被或为上述方法混合包被，用微机包被时先编好包被点、杠、点和杠程序，用4个打印机喷头，4种包被液分别灌入喷头，按次序装上喷头上反应膜打印；或采用人工方法将包被液滴加在膜上或人工喷雾点膜，或通过电脉转移包被物到反应膜上，也可用上述两种方法或三种方法同时使用。

c)检测步骤：

(1)用吸管将未稍血与血液处理液试剂4混合摇匀，加入滤管，制备样本；

(2)通过滤管的样本加入检测装置的反应池内，静置；

(3)然后在反应池内加入酶标抗体工作液试剂1静置；

(4)静置后再加入清洗液试剂2；

(5)待试剂2渗滤完毕立即加入显色液试剂3，后观察结果；

(6)当质控杠显色后加入终止液试剂5保留结果；

(7)结果阅读。

不同的检测项目的相应包被物质在反应膜上，以不同形状或/和不同位置以区别不同结果，例在反应膜上从左至右排列乙肝抗体为圆点(7)，艾滋病抗原为杠(8)，酶毒抗原为圆点(9)，抗—鼠IgG为杠(10)，杠(10)为质控标志；除抗—鼠IgG外，所有抗体均需用纯化的单克隆抗体，活性较高，抗体活性＞1∶10⁴反应膜可以先硝纤膜或含有硝酸纤维素的绲纤膜，包被稀释液为磷酸盐或碳酸盐缓冲液、糖、聚乙二醇、叠氮钠组成，检测试剂的敏感性与所用原料的纯度剂量及生物性原料的活性有关，艾滋病抗原和酶毒抗原及酶结合物的纯度越高，物异性越好。

根据具体检测要求，本装置及方法可进行单项或两项检测结果，用单项或两项包被点即可。

由于采取上述技术方案，本发明技术与已有技术相比具有如下优点及效果：

a)通过一次采集微量样本可同时得到三个免疫检测结果，即可同时检测几个抗原和几个抗体；

b)一次检测过程只需10分钟；

c)采血样量小，减少洗液对环境的污染，防止医务人员的交叉感染；

d)可长期保存结果；

e)操作简便，适用于家庭，医院临床和健康人的体检。

附图说明：

图1为检测装置示意图；

图2为图1的俯视图；

图3为反应膜包被实例；

图4为各种检测结果显示。

下面结合附图实例进一步说明本发明技术，图1、2为本发明的检测装置，它由反应池(1)、反应膜(6)、反应管(3)组成，反应池下口与反应管上口配合，其底口装有反应膜(6)和软纸垫(2)，条形反应膜按装在软纸垫正中线上，反应管封闭的底部中心有一通气孔(5)，内部填有吸水充填料(4)。

人工制作反应膜包被，见图(3)所示，点(7)为乙肝包被点，杠(8)为艾滋病包被杠，点(9)为梅毒包被点，杠(10)为质控点包效杠。

配制试剂：

试剂1、酶标抗体工作液中含有0.5乙二胺四乙酸二钠，适量硫柳汞钠

试剂2、0.1％吐温磷盐缓冲液；

试剂3、二氨基联苯胺；

试剂4、0.1％柠檬酸三钠、1.5％＋聚乙二醇、0.2‰叠氮钠(溶于磷酸盐缓冲液)

试剂5、0.2NH₂SO₄；

检测步骤：

(1)用吸管收20ul未稍血与200ul试剂4混合加入滤管，制备样本，试剂4除了抗凝、加速免疫反应外，使抗原—抗体结合更牢固提高反应敏感性；

(2)将样本加入检测装置的反应池内，静置3分钟；

(3)然后在反应池内加入试剂1使酶结合物与待检物结合，静置4分钟；

(4)静置后再加入200ul试剂2；

(5)待试剂2(清洗未结合物)渗净后立即加入100ul试剂3，30—60秒，观察结果；

(6)当质控杠显色1—2分后加入试剂5，保留结果；

(7)结果阅读。

图4各种检测结果显示，阅读结果：

反应膜(11)的结果为乙肝、艾滋病、梅毒均为阴性(-)；

反应膜(12)的结果为梅毒为阳性(+)；

反应膜(13)的结果为艾滋病为阳性(+)；

反应膜(14)的结果为乙肝为阳性(+)；

反应膜(15)的结果为无效；

反应膜(16)的结果为艾滋病、梅毒阳性(+)；

反应膜(17)的结果为乙肝、梅毒为阳性(+)；

反应膜(18)的结果为乙肝、艾滋病为阳性(+)；

反应膜(19)的结果为乙肝、艾滋病、梅毒均为阳性(+)。

Claims

1、乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测装置，其特征在于它由反应池、反应膜、反应管组成，反应池下口与反应管上部配合，其底口装有反应膜和软纸垫，条形反应膜装在软纸垫正中线上，反应管封闭的底部中心有一通气孔，内部填有吸水填充料。

2、乙肝、艾滋病、梅毒膜型三联免疫检测方法，包括试剂的配制，反应膜的包被和检测步骤，其特征在于：

c)检测步骤：

(2)通过滤管的样本加入检测装置的反应池内，静置；

(3)然后在反应池内加入酶标抗体工作液试剂1静置；

(4)静置后再加入清洗液试剂2；

(5)待试剂2渗滤完毕立即加入显色液试剂3，后观察结果；

(6)当质控杠显色后加入终止液试剂5保留结果；

(7)结果阅读。

3、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于用于不同的检测项目的相应包被物质包被在反应膜上，以不同形状或/和不同位置以区别不同结果，例如在反应膜(6)上从左至右排列乙肝抗体为圆点(7)，艾滋病抗原为杠(8)，梅毒抗原为圆点(9)，抗—鼠IgG为杠(10)，为质控标志。

4、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于反应膜可以是硝纤膜或含有硝酸纤维素的混纤膜。

5、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于包被稀释液为磷酸盐或碳酸盐缓冲液、糖、聚乙二醇、叠氮钠组成。

6、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于除抗—鼠IgG外，所有的抗体均需用纯化的单克隆抗体，抗体活性＞1∶10⁴(ELISA)；

7、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于检测试剂的敏感性与所用原料的纯度剂量及生物性原料的活性有关。

8、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于艾滋病抗原和梅毒抗原及酶结合物的纯度越高，特异性越好。

9、根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于反应膜可以用单项或两项包被液包被，进行单项或两项免疫检测。