CN111721943B - 一种酸放散试验室内质控品及质控方法 - Google Patents

一种酸放散试验室内质控品及质控方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种放散试验室内质控品，包括：阴性质控品：其有效成分为压积红细胞，该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性。强阳性质控品：其有效成分为强致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由单克隆IgG型抗‑D原液致敏得到。弱阳性质控品：其有效成分为弱致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由稀释的单克隆IgG型抗‑D原液致敏得到。采用该质控品试验，可在临床上提供可信赖的实验依据。

Description

一种酸放散试验室内质控品及质控方法
【技术领域】
本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种酸放散试验室内质控品及质控方法。
【背景技术】
放散试验是输血检验工作中常用的实验方法，广泛应用于疑难血型、疑难配血、新生儿溶血病检测等临床工作中。输血相容性检测的室内质量控制(IQC)已在临床工作中广泛开展，既可以购买成品质控物，也可以实验室自制；而放散这一重要试验的质量控制却少有人问津。放散试验较输血相容性检测更精密，更容易受到测试环境、操作规范性等因素的影响，更需要做好质量控制工作。室内质量控制可及时发现试验各环节存在的误差，是确保检测结果准确、可靠的重要措施；合格有效的质控品是IQC中的关键因素之一，能够监测和控制实验的精密度，连续评价本实验室检测工作的可靠性，给临床医生提供可信赖的实验依据。
【发明内容】
本发明的目的是提供酸放散试验室内质控品及质控方法，在临床上提供可信赖的实验依据。
本发明采用以下技术方案：一种酸放散试验室内质控品，包括：
阴性质控品：其有效成分为压积红细胞，该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性；
强阳性质控品：其有效成分为强致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由单克隆IgG型抗-D原液致敏得到。
弱阳性质控品：其有效成分为弱致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏得到。各有效成分的体积相等。
进一步地，还包括细胞保护液，用于保存各有效成分，该混合液中的各成分如下：氯化钠1.8g/L，甘氨酸12g/L，乙二胺四乙酸钠3g/L，pH为6.7±0.2，渗透压：330±20mOsm/(Kg·H2O)。
进一步地，该红细胞为O型RhD阳性。
进一步地，该阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品中的有效成分均为100μl～1ml。
进一步地，该稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原液而得，稀释液与原液的体积比为1～2000。
本发明还公开了上述一种酸放散试验室内质控品的制备方法，该制备方法如下：
选取血样，且血样直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性。
将血样离心，弃去血浆，得红细胞。
将红细胞用生理盐水洗涤，离心，去除上清液，得压积红细胞。
对压积红细胞进行酸放散试验，并进行如下操作：
a.当试验结果为阴性时，则：
取部分压积红细胞作为阴性质控品的有效成分；
另取部分压积红细胞，由单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为强阳性质控品的有效成分；
另取部分压积红细胞，由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为弱阳性质控品的有效成分；
b.当试验结果为阳性时，则另外选取血样制备，直至得到符合a试验结果的质控品。
本发明还公开了一种酸放散试验室内质控方法，采用上述的一种酸放散试验室内质控品，包括单次质控方法和连续质控方法；
上述单次质控方法如下：
分别取含有相同体积有效成分的阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品，同时取一份或多份待检样本，将质控品和待检样本离心、洗涤处理，得到各自的压积红细胞；然后进行如下操作：
步骤一、在阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品和待检样本的压积红细胞中均分别加入与各压积红细胞相同体积的洗脱液，混合均匀，离心，得一次上清液。
步骤二、分别吸取各一次上清液；在各一次上清液中分别滴入中和液，摇匀，液体由黄色变为蓝色。
步骤三、对步骤二中的液体离心处理，得二次上清液，该二次上清液为放散液。
步骤四、将各放散液各自加入低离子抗人球蛋白卡的测试孔中，在各放散液中分别加入与各分散液中的抗体对应的红细胞悬液，孵育，离心处理。
当上述测试孔中的结果如下时：
阴性质控品的放散液的孔中：红细胞完全沉积在凝胶底部，未发生凝集。
强阳性质控品的放散液的孔中：红细胞全部位于凝胶表面，凝集强度以4+为靶值，偏差不大于±1。
弱阳性质控品的放散液的孔中：红细胞主要位于凝胶中部，凝集强度以2+为靶值，偏差不大于±1。
则表明单次结果在控，执行步骤五。
当测试孔中的结果有一项不符合上述结果时，则表明结果失控，执行步骤六；
上述连续质控方法如下：
连续记录单次质控方法的结果，当强阳性质控品的放散液的孔中：凝集强度连续三次低于或高于靶值；或者弱阳性质控品的放散液的孔中：凝集强度连续三次低于或高于靶值；则表明第三次单次质控结果失控，执行步骤六。
步骤五、输出待检样本的检测结果。
步骤六、重复步骤一～五，重新检测待检样本。
进一步地，该阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品的有效成分的量为100μl～1ml，一份待检样本中压积红细胞为500μl～1ml。
进一步地，该洗脱液的有效成分为甘氨酸。
进一步地，该中和液的有效成分为三羟甲基氨基甲烷。
本发明的有益效果是：1.制备出适用于酸放散的强阳性、弱阳性、阴性三个水平的质控品，有助于室内质控的开展。2.使用单克隆IgG型抗-D这样的高亲和力抗体可节约制备阳性质控品的时间，提高工作效率。3.不需要采用额外的特殊设备，一般的输血相容性检测实验室即可制备和使用。
【具体实施方式】
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明一种酸放散试验室内质控品，包括：阴性质控品：其有效成分为压积红细胞，该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性；
强阳性质控品：其有效成分为强致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由单克隆IgG型抗-D原液致敏得到；
弱阳性质控品：其有效成分为弱致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏得到；稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原液而得，稀释液与原液的体积比为1～2000。上述质控品中各有效成分的体积相等。
还包括细胞保护液，用于保存各有效成分，该混合液中的各成分如下：氯化钠1.8g/L，甘氨酸12g/L，乙二胺四乙酸钠3g/L，pH为6.7±0.2，渗透压：330±20mOsm/(Kg·H2O)。
上述红细胞为O型RhD阳性。阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品中的有效成分均为100μl～1ml。稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原液而得，稀释液与原液的体积比为1～2000。
为了增强结果的稳定性，选择可购买的、批量生产的、成分单一的单克隆IgG型抗-D试剂致敏O型RhD阳性红细胞。单克隆IgG型抗-D与O型RhD阳性红细胞结合迅速，1min即可与O型RhD阳性红细胞结合。与孵育15min、30min得到的致敏细胞直接抗人球蛋白试验凝集强度无差异。
采用微柱凝胶法检测多个批次的单克隆IgG型抗-D效价均为256，表明单克隆IgG型抗-D很稳定，批间差异小，以该试剂制备阳性质控品有利于本制备方法在不同实验室的推广和使用。
上述的一种酸放散试验室内质控品的制备方法如下：
选取血样，且血样直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性。
将血样离心，弃去血浆，得红细胞；
将红细胞用生理盐水洗涤，离心，去除上清液，得压积红细胞；
对压积红细胞进行酸放散试验，并进行如下操作：
a.当结果为阴性时，则：
取部分所述压积红细胞作为阴性质控品的有效成分；
另取部分所述压积红细胞，由单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为强阳性质控品的有效成分；
另取部分所述压积红细胞，由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为弱阳性质控品的有效成分。
b.当上述结果为阳性时，则另外选取血样制备，直至得到符合a试验结果的质控品。
一种放散试验室内质控方法，采用上述的一种酸放散试验室内质控品，包括单次质控方法和连续质控方法。
上述单次质控方法如下：
分别取含有相同体积有效成分的所述阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品，同时取一份或多份待检样本，将所述质控品和待检样本离心、洗涤处理，得到各自的压积红细胞；然后进行如下操作：
步骤一、在所述阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品和待检样本的压积红细胞中均分别加入与各压积红细胞相同体积的洗脱液，混合均匀，离心，得一次上清液；
步骤二、分别吸取各所述一次上清液；在各所述一次上清液中分别滴入中和液，摇匀，液体由黄色变为蓝色；
步骤三、对所述步骤二中的液体离心处理，得二次上清液，该所述二次上清液为放散液；
步骤四、将各所述放散液各自加入低离子抗人球蛋白卡的测试孔中，在各所述放散液中分别加入与各分散液中的抗体对应的红细胞悬液，孵育，离心处理；
当所述测试孔中的结果如下时：
阴性质控品的放散液的孔中：红细胞完全沉积在凝胶底部，未发生凝集；
强阳性质控品的放散液的孔中：红细胞全部位于凝胶表面，凝集强度以4+为靶值，偏差不大于±1；
弱阳性质控品的放散液的孔中：红细胞主要位于凝胶中部，凝集强度以2+为靶值，偏差不大于±1；
则表明单次结果在控，执行步骤五；
当所述测试孔中的结果有一项不符合上述结果时，则表明结果失控，执行步骤六；
上述连续质控方法如下：
连续记录所述单次质控方法的结果，当强阳性质控品的放散液的孔中：凝集强度连续三次低于或高于靶值；或者弱阳性质控品的放散液的孔中：凝集强度连续三次低于或高于靶值；则表明第三次单次质控结果失控，执行步骤六；
步骤五、输出待检样本的检测结果；
步骤六、重复步骤一～五，重新检测待检样本。
与放散液一起加入反应孔共孵育的红细胞悬液为用生理盐水稀释后得到体积浓度为0.8％～1％的红细胞悬液。质控品使用人ABO血型反定型用红细胞试剂盒中的O型RhD阳性红细胞。待检样本使用的红细胞类型与其放散液中的潜在抗体类型相对应。包括可购买的标准红细胞试剂盒中的A型RhD阳性红细胞，B型RhD阳性红细胞，O型RhD阳性红细胞、不规则抗体筛查细胞和谱细胞。
上述阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品的有效成分的量为100μl～1ml，一份待检样本中压积红细胞为500μl～1ml。
本发明还公开了一种细胞保存液，用于保存上述的一种酸放散试验室内质控品的有效成分，其为一混合液，该混合液溶剂为蒸馏水，其内的主要成分为：氯化钠1.8g/L，甘氨酸12g/L，乙二胺四乙酸钠3g/L，pH为6.7±0.2，渗透压：330±20mOsm/(Kg·H2O)。在用于保存质控品时，保存液的体积与压积红细胞的体积比为10～100。实际试验中，比例为10时，即能满足凝集强度的要求。由于红细胞在无保存液条件下会破裂，所以可以选择比例大于10的的保存液。
为了验证本发明中的方法，进行如下实验，具体如下：
1.1仪器与试剂：
采用的红细胞放散液试剂盒，购自珠海贝索生物技术有限公司；ABO、RhD血型检测卡、低离子抗人球蛋白卡选自Bio-Rad公司；医用离心机，购自长春博研科学仪器有限责任公司品；孵育器、专用离心机(DiaMed GmbH)；水浴恒温振荡器、水浴箱，购自西安英达医疗器械有限责任公司；单克隆抗-A、抗-B试剂血清，单克隆IgM型抗-D、IgG型抗-D试剂、人ABO血型反定型用红细胞试剂盒、抗体筛选红细胞试剂、抗人球蛋白试剂均购自上海血液生物医药有限责任公司。
1.2阴性、强阳性、弱阳性三个水平质控品的制备：
1.2.1阴性质控品的制备：选用健康体检者的血液标本。体检者及其血样入选要求：(1)体检者无输血史、妊娠史及自身免疫疾病；(2)进行了肝功、输血前8项筛查，且其丙氨酸转氨酶(ALT)、HBsAg、抗-HCV、抗-HIV及梅毒抗体均符合《献血者健康检查要求》(GB18467-2011)规定；(3)血液采集时间≤5天的EDTA抗凝外周静脉血；(4)血型鉴定O型RhD阳性，直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查以及自身对照试验阴性。收集符合以上要求的血样10人份混合，1000×g离心5分钟，弃去血浆，得红细胞，将得到的红细胞用生理盐水洗涤、离心1 000×g离心1分钟，上层为上清液，操作4次，每次尽可能吸尽末次上清液，得到底部的压积红细胞。
取压积红细胞进行放散试验，若结果为阴性，则取200μl压积红细胞作为阴性质控品的有效成分。
1.2.2强阳性质控品的制备方法及条件优化：取200μl上述压积红细胞，由单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为强阳性质控品的有效成分。为了得到最佳致敏条件，采用正交试验原理对压积红细胞与抗体混合比例、孵育时间两个实验条件进行摸索，具体如下：将200μl压积红细胞分别与10μl、25μl、50μl、100μl的IgG型抗-D原液在37℃孵育1min、15min，30min。再分别用生理盐水各洗涤4次，得到的强致敏压积红细胞作为强阳性质控品的有效成分，然后进行放散试验。
1.2.3弱阳性质控品的制备及条件优化：取200μl上述压积红细胞，由单克隆IgG型抗-D原液的稀释液致敏，作为弱阳性质控品的有效成分。采用微柱凝胶卡式法检测单克隆IgG抗-D效价，选择64、128、256三个稀释倍数的IgG抗-D致敏基础细胞，以生理盐水进行稀释，该倍数表示IgG型抗-D原液的稀释液与IgG型抗-D原液的体积比。采用正交试验原理对红细胞与抗体稀释度、孵育时间两个实验条件进行摸索：200μl压积红细胞与等体积的64、128、256三个稀释倍数的IgG抗-D分别在37℃孵育1min、15min，30min，再用生理盐水洗涤4次，得到的弱致敏压积红细胞作为弱阳性质控品的有效成分，然后进行放散试验。
稀释液的稀释比例与质控品中的有效成分的量有关，如果有效成分的量越多，稀释的比例越大；还与低离子抗人球蛋白卡有关，根据不同厂家的低离子抗人球蛋白卡有关，要进行试验调整。
在上述制备中，各质控品中的有效成分均选择的为200ul，在试验中，可选择的范围为100ul～1ml，但是，一般不会选择大剂量的红细胞，因为太浪费血样。
1.3三个水平的质控品对酸放散试验的适用性评价：
1.3.1酸放散试验：具体试验方法如下：取一定体积的待检压积红细胞与等体积的洗脱液轻轻混合均匀，室温下反应约15秒，立即以1000×g离心1min。洗脱液的有效成分为甘氨酸。离心完成后，迅速分离压积红细胞和上清液，用吸管吸取上清液转移入另一试管。在分离的上清液中滴入中和液，边滴边摇匀，液体颜色由黄色变为蓝色即可。中和液的有效成分为三羟甲基氨基甲烷。再以1 000×g离心1min，将二次上清液转移入另一试管，二次上清液即为放散液。取低离子抗人球蛋白卡，用前离心。取待检压积红细胞的放散液25μl，加入低离子抗人球蛋白卡的对应的检测孔中，再加入50μl 1％ O型RhD阳性红细胞悬液，置于卡式孵育器离心15min后，立即放入卡式离心机85×g离心10min，观察记录结果。微柱凝胶卡式法结果判读方式如下：(1)红细胞完全沉积在凝胶底部，未发生凝集，反应结果为阴性，凝集强度用“-”表示。(2)红细胞全部位于凝胶表面，发生强凝集，凝集强度用“4+”表示。(3)红细胞主要位于凝胶的上半部，发生较强凝集，凝集强度用“3+”表示。(4)红细胞主要位于凝胶的中部，发生中等强度的凝集，凝集强度用“2+”表示。(5)红细胞主要位于凝胶的下半部，发生较弱的凝集，凝集强度用“+”表示。
1.3.2酸放散试验强阳性质控品的最佳制备条件：
酸放散试验强阳性质控品的最佳制备条件如表1所示：选择10μl、25μl、50μl、100μl的单克隆IgG型抗-D原液在三个孵育时间梯度下均可成功致敏O型RhD阳性红细胞，得到3+～4+的强阳性放散结果；末次洗液凝集强度为阴性。以抗体用量最少、孵育时间最短、凝集强度为4+的制备条件作为强阳性质控品的最佳制备条件：200μl压积红细胞与25μl的单克隆IgG型抗-D原液在37℃孵育1min。
表1强阳性质控品制备的抗体用量、孵育时间a
a表示凝集强度检测采用微柱凝胶卡式法。
1.3.3酸放散试验弱阳性质控品的最佳制备条件：
酸放散试验弱阳性质控品的最佳制备条件如表2所示：64、128、256三个稀释倍数的IgG抗-D致敏O型RhD阳性红细胞直接抗人球蛋白试验均阴性，但放散试验阳性。以凝集强度为2+、孵育时间最短的制备条件作为弱阳性质控品的最佳制备条件：200μl压积红细胞与200μl的256倍稀释的单克隆IgG型抗-D在37℃孵育1min。
表2弱阳性质控品制备的抗体用量、孵育时间a
a表示凝集强度检测采用微柱凝胶卡式法。
1.4三个水平的质控品对热放散试验的适用性评价：
热放散试验：试验方法如下：取一定体积的待检红细胞与等体积0.9％生理盐水混合，56℃孵育一定时间，离心套管一同孵育，1000×g保温离心1min得到上清液，该上清液即为放散液。取低离子抗人球蛋白卡，用前离心。取待检压积红细胞的放散液25μl，加入低离子抗人球蛋白卡的对应的检测孔中，再加入50μl浓度为1％ O型RhD阳性红细胞悬液，置于卡式孵育器离心15min后，立即放入卡式离心机85×g离心10min，观察记录结果。为了探讨阴、阳性质控品最佳放散剂量和时间，采用正交试验原理分别采用200μl、500μl、1ml三种体积的压积红细胞，56℃放散1min、3min、5min、10min、15min五个时间梯度进行比较。
最终，不论以何种条件，热放散结果均为阴性。由此可见，单克隆IgG型抗-D致敏的红细胞并不适用于热放散，热放散不能将抗-D抗体从阳性质控品的红细胞上释放下来。
1.5采用本发明中的方法制备的质控品的重复性评价：
连续20天每天分别制备强阳性、弱阳性、阴性质控品各1份，与临床样本同步进行酸放散试验，观察本发明中的制备方法是否稳定。本发明中，强阳性质控品的凝集强度靶值为4+，弱阳性质控品凝集强度靶值为2+，阴性质控品凝集强度为阴性。连续20天的稳定性监测显示，阴性质控品(-)和强阳性质控品(4+)凝集强度完全没有变化，稳定性非常好；弱阳性对照凝集强度仅有一次结果为1+，其余十九次均为2+。稳定性不如前两者，但可满足实验室对弱阳性质控品的质量要求。综上所述，本发明中的质控品制备方法重复性良好，可满足质控品制备的要求。
1.6采用本发明中三个水平质控品的保存稳定性评价：
分别制备阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品，其中有效成分压积红细胞均为200μl，各加入细胞保存液2ml，分别分装于各塑料试管内，将各塑料试管密封保存于4℃冰箱。细胞保存液为混合液，在混合液中氯化钠1.8g/L，甘氨酸12g/L，乙二胺四乙酸钠3g/L，pH为6.7±0.2，渗透压：330±20mOsm/(Kg·H2O)。
自制备之日起，在第0天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天进行酸放散试验，结果如表3所示。结果说明三个水平的质控品可以在以上条件下稳定保存，满足质控品稳定性的要求。
表3质控品不同保存时间的酸放散试验凝集强度a
a凝集强度检测采用微柱凝胶卡式法。

Claims (8)

1.一种酸放散试验室内质控品，其特征在于，包括：
阴性质控品：其有效成分为压积红细胞，该压积红细胞直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性；
强阳性质控品：其有效成分为强致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由单克隆IgG型抗-D原液致敏得到；
弱阳性质控品：其有效成分为弱致敏压积红细胞，选自直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性，且酸放散法检测阴性的压积红细胞，并由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏得到；
各所述有效成分的体积相等；
还包括细胞保护液，用于保存各所述有效成分，该细胞保护液中包括如下：氯化钠1.8g/L，甘氨酸12g/L，乙二胺四乙酸钠3g/L，pH为6.7±0.2，渗透压：330±20mOsm/(Kg·H2O)；
所述红细胞为O型RhD阳性。
2.根据权利要求1所述的一种酸放散试验室内质控品，其特征在于，所述阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品中的有效成分均为100μl～1ml。
3.根据权利要求2所述的一种酸放散试验室内质控品，其特征在于，所述稀释的单克隆IgG型抗-D原液是由生理盐水稀释单克隆IgG型抗-D原液而得，稀释液与原液的体积比为1～2000。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种酸放散试验室内质控品的制备方法，其特征在于，该制备方法如下：
选取血样，且所述血样直接抗人球蛋白试验、不规则抗体筛查试验以及自身对照试验阴性；
将所述血样离心，弃去血浆，得红细胞；
将所述红细胞用生理盐水洗涤，离心，去除上清液，得压积红细胞；
对所述压积红细胞进行酸放散试验，并进行如下操作：
a.当试验结果为阴性时，则：
取部分所述压积红细胞作为阴性质控品的有效成分；
另取部分所述压积红细胞，由单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为强阳性质控品的有效成分；具体为：200μl压积红细胞与25μl的单克隆IgG型抗-D原液在37℃孵育1min；
另取部分所述压积红细胞，由稀释的单克隆IgG型抗-D原液致敏，作为弱阳性质控品的有效成分；具体为：200μl压积红细胞与200μl的256倍稀释的单克隆IgG型抗-D在37℃孵育1min；
b.当所述试验结果为阳性时，则另外选取血样制备，直至得到符合a试验结果的质控品。
5.一种酸放散试验室内质控方法，采用权利要求1-3中任一项所述的一种酸放散试验室内质控品，其特征在于，包括单次质控方法和连续质控方法；
所述单次质控方法如下：
分别取含有相同体积有效成分的所述阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品，同时取一份或多份待检样本，将所述质控品和待检样本离心、洗涤处理，得到各自的压积红细胞；然后进行如下操作：
步骤一、在所述阴性质控品、强阳性质控品、弱阳性质控品和待检样本的压积红细胞中均分别加入与各压积红细胞相同体积的洗脱液，混合均匀，离心，得一次上清液；
步骤二、分别吸取各所述一次上清液；在各所述一次上清液中分别滴入中和液，摇匀，液体由黄色变为蓝色；
步骤三、对所述步骤二中的液体离心处理，得二次上清液，该所述二次上清液为放散液；
步骤四、将各所述放散液各自加入低离子抗人球蛋白卡的测试孔中，在各所述放散液中分别加入与各分散液中的抗体对应的红细胞悬液，孵育，离心处理；
当所述测试孔中的结果如下时：
阴性质控品的放散液的孔中：红细胞完全沉积在凝胶底部，未发生凝集；
强阳性质控品的放散液的孔中：红细胞全部位于凝胶表面，凝集强度以4+为靶值，偏差不大于±1；
弱阳性质控品的放散液的孔中：红细胞主要位于凝胶中部，凝集强度以2+为靶值，偏差不大于±1；
则表明单次结果在控，执行步骤五；
当所述测试孔中的结果有一项不符合上述结果时，则表明结果失控，执行步骤六；
所述连续质控方法如下：
连续记录所述单次质控方法的结果，当强阳性质控品的放散液的孔中：凝集强度连续三次低于或高于靶值；或者弱阳性质控品的放散液的孔中：凝集强度连续三次低于或高于靶值；则表明第三次单次质控结果失控，执行步骤六；
步骤五、输出待检样本的检测结果；
步骤六、重复步骤一～五，重新检测待检样本。
6.根据权利要求5所述的一种酸放散试验室内质控方法，其特征在于，所述阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品的有效成分的量为100μl～1ml，一份待检样本中压积红细胞为500μl～1ml。
7.根据权利要求5或6所述的一种酸放散试验室内质控方法，其特征在于，所述洗脱液的有效成分为甘氨酸。
8.根据权利要求7所述的一种酸放散试验室内质控方法，其特征在于，所述中和液的有效成分为三羟甲基氨基甲烷。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN107691430A (zh) * 2017-11-15 2018-02-16 迈克生物股份有限公司 一种红细胞保存液

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不规则抗体筛查室内质控品的制备及初步应用;张敏 等;《临床检验杂志》;20151231;第33卷(第12期);第929-931页 *
袁红 等.吸收放散实验标准操作程序.《输血医学实验室质量管理体系范文》.四川科学技术出版社,2019,第283-287页. *

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