CN113721033A - 一种u型微孔板、试剂盒及其应用 - Google Patents

一种u型微孔板、试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113721033A
CN113721033A CN202111067006.7A CN202111067006A CN113721033A CN 113721033 A CN113721033 A CN 113721033A CN 202111067006 A CN202111067006 A CN 202111067006A CN 113721033 A CN113721033 A CN 113721033A
Authority
CN
China
Prior art keywords
platelet
kit
shaped
microporous plate
polylysine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111067006.7A
Other languages
English (en)
Inventor
李翠莹
肖军
沈伟
李小薇
雷慧芬
孟方园
高瞻
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Air Force Specialty Medical Center of PLA
Original Assignee
Air Force Specialty Medical Center of PLA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Air Force Specialty Medical Center of PLA filed Critical Air Force Specialty Medical Center of PLA
Priority to CN202111067006.7A priority Critical patent/CN113721033A/zh
Publication of CN113721033A publication Critical patent/CN113721033A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及血小板检测技术领域，特别是涉及一种U型微孔板、试剂盒及其应用。本发明提供了一种U型微孔板，所述U型微孔板包被有多聚赖氨酸和血小板裂解物。利用本发明所述U型微孔板制备得到的试剂盒具有成本低、可用于全自动分析、检测时间短无需多次添加试剂、试剂保存期长的优势，而且操作简单。

Description

一种U型微孔板、试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及血小板检测技术领域，特别是涉及一种U型微孔板、试剂盒及其应用。
背景技术
随着输血医学研究的不断发展，成分输血不断推广使用，血小板输注已成为临床输血治疗的重要手段之一，其可用于预防和治疗血小板减少或血小板功能缺陷的患者，并成为各种血液病及肿瘤患者放化疗有效的支持疗法。但在多次输血(包括全血、红细胞、血小板)后，易产生血小板相关抗体，导致血小板输注无效或血小板输血紫癜。
导致血小板输注无效的原因有两大类：(1)非免疫因素：多发生在脾肿大、发热、感染、DIC等患者中；(2)免疫因素：由于输血产生同种免疫性抗体或自身抗体造成血小板寿命缩短、被破坏，最终导致输注无效。当反复输血的患者出现血小板输注无效或血小板输血紫癜时，必须确定是否是有免疫因素引起，这就必须检查患者血小板抗体，若存在血小板抗体，则可说明是由免疫因素引起的，应针对抗体特异性选择抗原阴性的供体血小板，若盲目地输注血小板，可能会导致严重的输血反应和血小板计数极度降低，发生出血甚至死亡的风险。因此，选择一种敏感性和特异性较好的血小板抗体检测方法对患者极其重要。
目前，常用的血小板抗体检测方法有：1、淋巴细胞毒性试验；2、单克隆抗体固相血小板抗体实验；3、流式细胞术方法；4、微柱凝胶法。但这些方法存在操作复杂需多次添加试剂、检测时间长，有的方法需要昂贵专业仪器才能完成检测，同时部分试剂保存期短、检测成本高等缺点，同时由于这些包被的方式使得现有技术无法完成全自动操作，所有操作均需手工完成，增大了人工和时间成本，难以大规模推广。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种U型微孔板、试剂盒及其应用。利用本发明所述U型微孔板制备得到的试剂盒具有成本低、可用于全自动分析、检测时间短无需多次添加试剂、试剂保存期长的优势，而且操作简单。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种U型微孔板，所述U型微孔板包被有多聚赖氨酸和血小板裂解物。
优选的，所述U型微孔板中多聚赖氨酸的包被浓度为50～100μg/mL。
优选的，所述血小板裂解物中血小板的浓度为(1～2)×1010个/L。
本发明提供了上述的U型微孔板的制备方法，包括以下步骤：
依次利用多聚赖氨酸和血小板裂解物包被U型微孔板。
本发明提供了上述的U型微孔板在制备检测血小板抗体的试剂盒中的应用。
本发明提供了一种用于检测血小板抗体的试剂盒，所述试剂盒包括独立包装的上述的U型微孔板、缓冲液和小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞。
优选的，所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞的制备方法，包括以下步骤：
将小鼠抗人IgG抗体、O型红细胞和CrCl3混合后洗涤，得小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞。
优选的，所述小鼠抗人IgG抗体、O型红细胞和CrCl3的体积比为200:50:200。
优选的，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为多价HLA抗血清；所述阴性对照为AB型血浆。
本发明提供了上述试剂盒在检测血小板抗体中的应用。
有益效果：本发明提供了一种U型微孔板，所述U型微孔板包被有多聚赖氨酸和血小板裂解物。本发明所述U型微孔板预先用多聚赖氨酸处理后直接包被血小板裂解物抗原的方式，可降低U型微孔板包被的成本和时间，增强血小板裂解物抗原与U型微孔板的粘附，可为下一步全自动检测奠定基础，而且相较于现有技术，本发明提前采用多聚赖氨酸处理U型微孔板并将血小板裂解物作为抗原一并包被，形成复合的U型微孔板，缩短了实验时间和操作步骤，相较于现有技术缩短了10～15min；同时也减少了添加试剂次数；而且本发明采用的是血小板裂解物作为抗原包被，可显著延长保存时间而不受影响；同时本发明所述U型微孔板包被多聚赖氨酸和血小板裂解物，使抗原抗体结合更加牢固，实现自动洗涤，可通过成像自动识别结果。
附图说明
图1为实施例2检测结果，其中第1列中第1～4孔为血浆受检样品，第5～8孔为血清受检样品，第2列中第1～2孔为阴性对照，第3～4孔为阳性对照，第5～8孔为未处理孔。
具体实施方式
如无特殊说明，本发明采用的试剂均为本领域技术人员常规购买所得。
本发明提供了一种U型微孔板，所述U型微孔板包被有多聚赖氨酸和血小板裂解物。在本发明中，所述U型微孔板中多聚赖氨酸的浓度优选为50～100μg/mL，更优选为100μg/mL；所述血小板裂解物中血小板的浓度优选为(1～2)×1010个/L，更优选为2×1010个/L。在本发明中，所述多聚赖氨酸溶液用量优选为100μL/孔；所述血小板裂解物的用量优选为50μL/孔。本发明采用U型微孔板能够使红细胞聚集，便于观察结果。
在本发明中，所述血小板裂解物的制备方法优选包括以下步骤：将O型静脉血与酸性柠檬酸葡萄糖抗凝剂(ACD-A)混合后离心，得血小板；将血小板反复冻融，得血小板裂解物。
在本发明中，所述O型静脉血与ACD-A的体积比优选为7:1；本发明对所述ACD-A的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员所熟知的试剂即可，本发明具体实施例中，优选购自于北京雷根生物技术有限公司，货号为R10211。本发明采用的酸性柠檬酸葡萄糖抗凝剂能够达到更好的血液保存和抗凝效果。
在本发明中，所述离心包括第一离心和第二离心；所述第一离心优选为对静脉血与ACD-A混合所得混合物进行第一离心，得上清液和富血小板血浆(Platelet-richplasma，PRP)。在本发明中，所述第一离心的离心力优选为1000g；所述离心的时间优选为7～8min，更优选为8min。在本发明中，所述第二离心优选为对第一离心后所得上清液进行第二离心，得浓缩血小板。在本发明中，所述第二离心的离心力优选为3000g；所述第二离心的时间优选为7～15min，更优选为15min。本发明利用第一离心获得了富血小板血浆(即血浆和血小板的混合物)，第二次离心能够获得浓缩的血小板。
所述离心后，本发明优选对离心所得的血小板进行洗涤和调整。在本发明中，所述洗涤优选采用生理盐水(0.9％)进行洗涤；所述洗涤的次数优选为3次。本发明优选采用生理盐水对所述血小板进行调整，经所述调整后，血小板的浓度优选为2×1010个/L。
在本发明中，所述反复冻融的具体操作步骤优选为-80℃保持1h，37℃保持15min；所述反复冻融的次数优选为3次；每次冻融的间隔时间优选为≥10min。
本发明提供了上述U型微孔板的制备方法，包括以下步骤：依次利用多聚赖氨酸和血小板裂解物包被U型微孔板。
在本发明中，所述多聚赖氨酸溶液中多聚赖氨酸的浓度优选为50～100μg/mL，更有选为100μg/mL；所述多聚赖氨酸溶液中的溶剂优选为生理盐水。
本发明所述多聚赖氨酸包被U型微孔板后，优选还包括静置，所述多聚赖氨酸溶液用量优选为100μL/孔；所述静置的温度优选为37℃或4℃；所述室温优选为37℃；当所述静置的温度为37℃时，所述静置的时间优选为2h；当所述静置的温度为4℃时，所述静置的时间优选为≥12h(过夜)，能够让多聚赖氨酸有充分的时间在U型微孔板中包被，避免出现包被不全的情况，影响实验效果。
所述静置后，本发明优选包括对静置后所得包被多聚赖氨酸的U型微孔板进行清洗。在本发明中，所述清洗优选采用生理盐水清洗；所述清洗的次数优选为3次。
在本发明中，所述血小板裂解物的用量优选为50μL/孔。
加入血小板裂解物后，本发明优选还包括对加入血小板裂解物后所得包被多聚赖氨酸和血小板裂解物的U型微孔板进行离心。在本发明中，所述离心的离心力优选为1000g；所述离心的时间优选为2min。
本发明在所述离心后优选还包括清洗。在本发明中，所述清洗优选采用生理盐水清洗；所述清洗的次数优选为3次，使血小板在U型孔底形成单层细胞。
本发明将浓度为100μg/mL的多聚赖氨酸包被于U型微孔板中，然后加入制备好的血小板裂解物让其吸附于多聚赖氨酸包被的U型微孔板中，使其形成单层细胞，在加入受检的血清/血浆和阴、阳对照，37℃孵育半小时后加入指示细胞即可观察结果，以判断受检血清/血浆是否含有血小板抗体，本发明所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液作为指示红细胞可直接与血清中的血小板抗体反应获得结果，因此本发明所述U型微孔板能够用于检测血小板抗体的试剂盒的制备。
本发明提供了上述的U型微孔板在制备检测血小板抗体的试剂盒中的应用。
本发明提供了一种用于检测血小板抗体的试剂盒中，所述试剂盒包括独立包装的上述的U型微孔板、缓冲液和小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液。本发明所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液作为指示红细胞可直接与血清中的血小板抗体反应获得结果，而现有技术中指示红细胞是由人IgG致敏的红细胞，在检测前还需要加入试剂抗人IgG抗体才能完成检测，因此，本发明所述试剂盒中采用小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液作为指示红细胞减少一步试剂添加，可大大节约检测时间。
在本发明中，所述缓冲液的用量优选为100μL/孔；所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液的用量优选为50μL/孔；所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液中小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞的体积百分含量优选为0.3％～0.8％，更优选为0.5％；所述缓冲液优选为Liss缓冲液；所述试剂盒优选还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照优选为多价HLA抗血清；所述阴性对照优选为AB型血浆；阴性对照的用量优选为50μL/孔，阳性对照的用量优选为50μL/孔。在本发明中，所述AB型血浆的制备方法同O型红细胞的制备方法，后续进行了详细的描述，在此不作赘述。
本发明优选提供了所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液的制备方法，包括以下步骤：
将小鼠抗人IgG抗体、O型红细胞和CrCl3混合后洗涤，得小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液。
本发明对所述小鼠抗人IgG抗体的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员所熟知的方式即可；在本发明具体实施例中，所述小鼠抗人IgG抗体优选购自Abcam公司，所述货号优选为ab181236，所述小鼠抗人IgG抗体、O型红细胞和CrCl3的体积比优选为200:50:200；所述CrCl3的浓度优选为12.5μg/mL。在本发明中，所述O型红细胞优选为经生理盐水洗涤离心所得O型红细胞；所述洗涤离心的温度优选为22±2℃；所述常洗涤离心的转速优选为1000g/分，即每分钟的离心力为1000g；所述洗涤离心的时间为1min。
本发明所述混合的时间优选为4min；所述混合的温度优选为室温。在本发明中，所述洗涤优选采用ACD-A或生理盐水进行洗涤；所述洗涤的次数优选为3次。
所述洗涤后，本发明对所述洗涤所得初级红细胞进行离心洗涤，得压积红细胞。在本发明中，所述离心洗涤的离心力优选为1000g/分；所述离心洗涤的时间优选为1min；所述离心洗涤的温度优选为22±2℃；所述离心洗涤的次数优选为3次。
所述离心洗涤后，本发明对所述压积红细胞进行稀释，得小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞悬液。本发明所述稀释优选采用ACD-A或生理盐水进行稀释。
本发明所述O型红细胞的制备方法优选包括以下步骤：将O型全血于含ACD-A的采血袋中后离心、分离血浆，将收集到的红细胞悬液加入等体积生理盐水离心洗涤，得O型红细胞。
在本发明中，所述O型全血的用量优选为200ml；所述含ACD-A的采血袋中ACD-A的用量优选为30ml；所述离心的离心力优选为1000g；所述离心的时间优选为7～8min，更优选为8min；所述离心的温度优选为22±2℃。在本发明中，所述分离血浆的方式优选为夹板法分离；本发明对所述夹板法分离的方式没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的方式即可；在本发明具体实施例中，所述夹板法优选为将采血袋垂直放入血浆挤压器夹板之间，用夹板法分离血浆。
在本发明中，所述离心洗涤的离心力优选为1000g；所述离心洗涤的时间优选为1min；所述离心洗涤的温度优选为22±2℃；所述离心洗涤的次数优选为3次。
本发明所述试剂盒基于固相被动血凝法得到的，具有检查成本低廉的优势，可适用于全自动分析，而且能够缩短血小板抗体检测的时间，因此，本发明所述试剂盒能够用于检测血小板抗体中。
本发明所述试剂盒的判定结果优选为：阳性，红细胞呈膜状均匀分布于孔底；阴性，红细胞在孔底中央呈扣状沉淀。本发明所述阳性是由于U型微孔板由多聚赖氨酸处理后进行血小板裂解物包被后，血小板抗原散在分布在U型微孔板中，当血小板抗体阳性患者血清与血小板抗原反应后，加入的指示红细胞则会与这些结合在U型微孔板的血小板抗体结合，离心后不能聚集在U型微孔板孔底而形成散在的单层红细胞膜；所述阴性是由于受检患者体内无血小板抗体，则不存在与血小板抗原反应，加入的指示红细胞则不会与这些结合在U型微孔板的血小板抗体结合，离心后会聚集在U型微孔板孔底而形成扣状沉淀。
本发明提供了上述试剂盒在检测血小板抗体中的应用。本发明具体实施例利用本发明所述试剂盒，可准确检测血小板抗体。
本发明还优选提供了一种利用上述试剂盒检测血小板抗体的方法，所述方法优选包括以下步骤：
在所述试剂盒中的U型微孔板的各孔内中加入缓冲液和受检血清/血浆混合后进行孵育，待孵育结束后，在所述U型微孔板的各孔内添加指示红细胞离心，即可观察结果。
在本发明中，所述缓冲液得用量优选为100μL；所述受检血清/血浆的用量优选为50μL；所述孵育的温度优选为37℃；孵育的时间优选为30min；所述指示红细胞的用量优选为50μL；所述指示红细胞的体积百分含量优选为0.5％；所述离心的离心力优选为200g；所述离心的时间优选为2min。
本发明所述孵育接受后，优选还包括洗涤；所述洗涤优选采用生理盐水洗涤；所述洗涤的次数优选为5次。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种U型微孔板、试剂盒及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
血小板抗体检测实验材料准备：
1、包被多聚赖氨酸的U型微孔板的制备方法
1.1、用生理盐水(生理盐水中氯化钠的质量浓度为0.9％)稀释多聚赖氨酸，使其浓度为100μg/mL。
1.2、各孔加入上述溶液100μL，37℃放置2h，用生理盐水洗U型微孔板3次，得包被多聚赖氨酸的U型微孔板。
2、血小板裂解物的制备方法
2.1、采献血者静脉血10mL，用酸性柠檬酸葡萄糖(ACD-A)抗凝剂，O型全血(静脉血)与酸性柠檬酸葡萄糖(ACD-A)抗凝剂的体积比为7:1，其中ACD-A的购买厂家为北京雷根生物技术有限公司，货号为R10211。
2.2、1000g离心8min得富血小板血浆(Platelet-Rich Plasma，PRP)，取上清，再用3000g离心15min，获得浓缩血小板。
2.3、以生理盐水洗涤血小板3次。最终用生理盐水调整血小板浓度为2×1010个/L。
2.4、将制备好的血小板采用连续反复冻融(-80℃/37℃)3次，其中-80℃保持1h，37℃保持15min，每次冻融间隔10min，获得血小板裂解物，备用。
3、指示红细胞的制备方法
3.1、在一支小试管内分别加入小鼠抗人IgG抗体200μL，O型红细胞50μL及CrCl3(12.5μg/mL)200μL，其中O型红细胞为经生理盐水洗涤离心所得O型红细胞；洗涤离心的温度为22±2℃，转速优选为1000g/分，时间为1min，小鼠抗人IgG抗体购自Abcam公司，货号：ab181236；
O型红细胞的制备方法：1、取来自血型为O型的志愿者全血200ml于含30ml ACD-A的采血袋中，充分混匀；2、将血袋连同转移袋一起放入大容量离心机离心，在22±2℃条件下1000g离心8min；3、将血袋垂直放入血浆挤压器夹板之间，用夹板法分离血浆；4、收集到的红细胞悬液加入等体积生理盐水离心洗涤红细胞3次，离心洗涤条件22±2℃，1000g离心1min，最后收集悬浮红细胞备用。
3.2、于室温轻轻混合4min。用生理盐水洗涤3次后进行离心洗涤，其中离心洗涤的时间为1min，温度为22±2℃，转速为1000g/分，得压积红细胞；压积红细胞用生理盐水洗涤制成体积比为0.3％的指示红细胞悬液备用。
实施例2
1、研究对象
选择需要进行检测血小板抗体的患者，即血小板输注无效患者，受检样品为8例，其中4例受检血浆，4例受检血清。
2、血液样本收集
在知情同意的原则下，取EDTA抗凝外周血1mL或不抗凝外周血1ml，若收集血清采用不抗凝外周血1ml，若收集血浆则EDTA抗凝外周血1mL，以1500g离心10min，收集患者血清/血浆。
3、用多聚赖氨酸处理后的U型孔内加入制备好的血小板裂解物悬液50μL，1000g离心2min后用生理盐水洗涤3次，获得包被多聚赖氨酸和血小板裂解物的U型微孔板。
4、加入100μL Liss缓冲液(低离子强度溶液，Low ion strength solution，购自于江阴力博医药生物技术有限公司，注册证号：苏锡械备20140025号)于包被多聚赖氨酸和血小板裂解物的U型微孔板的各孔内，再加入50μL的受检血清/血浆，以AB型血浆为阴性对照，多价HLA抗血清为阳性对照(武汉爱博泰克生物科技有限公司，货号：A8754，其中阴性对照的用量为50μL/孔，阳性对照的用量为50μL/孔，轻轻摇动，使血清/血清与Liss缓冲液混匀；
AB型血浆的制备方法：1、采集血型为AB型的志愿者全血200ml于含30ml ACD-A抗凝的采血袋中，充分混匀；2、将血袋连同转移袋一起放入大容量离心机离心，在22±2℃条件下，1000g离心7min；3、将血袋垂直放入血浆挤压器夹板之间，用夹板法分离血浆，是血浆流入转移袋中，即为AB型血浆。
5、37℃孵育30min，用生理盐水洗涤5次。
6、各孔内加入0.5％指示红细胞50μL，200g离心2min，观察结果。
结果判定：
a)阳性，红细胞呈膜状均匀分布于孔底；
b)阴性，红细胞在孔底中央呈扣状沉淀。
对8例受检血清/血浆的结果进行验证，结果如图1所示，其中，第一列中第1～4孔为血浆受检样品，第5～8孔为血清受检样品，第1列的第1、2、4孔受检样品为阴性，第3孔受检样品为阳性，第1列第5～8孔受检样品为阴性，第2列1～2孔为阴性对照，第3～4孔为阳性对照，采用本发明所述试剂盒能够准确得到检测结果。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种U型微孔板，其特征在于，所述U型微孔板包被有多聚赖氨酸和血小板裂解物。
2.根据权利要求1所述的U型微孔板，其特征在于，所述U型微孔板中多聚赖氨酸的包被浓度为50～100μg/mL。
3.根据权利要求1所述的U型微孔板，其特征在于，所述血小板裂解物中血小板的浓度为(1～2)×1010个/L。
4.权利要求1～3任一项所述的U型微孔板的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
依次利用多聚赖氨酸和血小板裂解物包被U型微孔板。
5.权利要求1～3任一项所述的U型微孔板在制备检测血小板抗体的试剂盒中的应用。
6.一种用于检测血小板抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括独立包装的权利要求1～3任一项所述的U型微孔板、缓冲液和小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞的制备方法，包括以下步骤：
将小鼠抗人IgG抗体、O型红细胞和CrCl3混合后洗涤，得小鼠抗人IgG抗体致敏的红细胞。
8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述小鼠抗人IgG抗体、O型红细胞和CrCl3的体积比为200:50:200。
9.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为多价HLA抗血清；所述阴性对照为AB型血浆。
10.权利要求6～9任一项所述试剂盒在检测血小板抗体中的应用。
CN202111067006.7A 2021-09-13 2021-09-13 一种u型微孔板、试剂盒及其应用 Pending CN113721033A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111067006.7A CN113721033A (zh) 2021-09-13 2021-09-13 一种u型微孔板、试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111067006.7A CN113721033A (zh) 2021-09-13 2021-09-13 一种u型微孔板、试剂盒及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113721033A true CN113721033A (zh) 2021-11-30

Family

ID=78683392

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111067006.7A Pending CN113721033A (zh) 2021-09-13 2021-09-13 一种u型微孔板、试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113721033A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115272325A (zh) * 2022-09-28 2022-11-01 广州知力医学诊断技术有限公司 一种血小板抗体检测结果判读装置及方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4959308A (en) * 1987-08-27 1990-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoassay for antibodies binding platelets
CN105137096A (zh) * 2015-08-27 2015-12-09 中国人民解放军总医院 一种用于血型抗体检测的试剂盒及其应用
CN107422111A (zh) * 2017-07-25 2017-12-01 冀学斌 一种检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的流式微球方法
CN112698043A (zh) * 2020-12-31 2021-04-23 宝锐生物科技泰州有限公司 一种血小板抗体检测试剂盒、应用及检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4959308A (en) * 1987-08-27 1990-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoassay for antibodies binding platelets
CN105137096A (zh) * 2015-08-27 2015-12-09 中国人民解放军总医院 一种用于血型抗体检测的试剂盒及其应用
CN107422111A (zh) * 2017-07-25 2017-12-01 冀学斌 一种检测免疫性血小板减少症血小板自身抗体的流式微球方法
CN112698043A (zh) * 2020-12-31 2021-04-23 宝锐生物科技泰州有限公司 一种血小板抗体检测试剂盒、应用及检测方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115272325A (zh) * 2022-09-28 2022-11-01 广州知力医学诊断技术有限公司 一种血小板抗体检测结果判读装置及方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Carpentier et al. Clinical relevance of circulating immune complexes in human leukemia: Association in acute leukemia of the presence of immune complexes with unfavorable prognosis
Kang et al. Comparison of ABO antibody titers on the basis of the antibody detection method used
Gralnick et al. Hemolytic anemia associated with cephalothin
Dunstan et al. Erythrocyte antigens on human platelets. Absence of Rh, Duffy, Kell, Kidd, and Lutheran antigens
NO753638L (zh)
CN108680756A (zh) 一种不完全抗体检测试剂盒及检测方法
Kurata et al. New approach to eliminate HLA class I antigens from platelet surface without cell damage: acid treatment at pH 3.0
WO2018187348A1 (en) Red cell diluent with edta and methods for making and using the same
WO2013029472A1 (zh) 一种从疾病动物模型外周血中快速提取循环的非血缘性有核细胞的组合物和试剂盒及其应用
Skogen et al. Minimal expression of blood group A antigen on thrombocytes from A2 individuals
Svejgaard et al. Complement-fixing platelet iso-antibodies
Lalezari et al. Identification of a specific leukocyte antigen: another presumed example of 5b
CN113721033A (zh) 一种u型微孔板、试剂盒及其应用
CN113337463B (zh) 一种适用于血小板抗体检测的抗筛细胞、其制备方法及其应用
CN113156143A (zh) 血型不规则抗体特异性鉴定方法及其试剂
US4745053A (en) Process for producing human interferon and method for assaying the interferon productivity of blood
CN111175488A (zh) 一种应用流式细胞术检测血小板抗体特异性的方法及检测试剂盒
US4403042A (en) Detection of cell membrane antigens and corresponding antibodies
CN110174520A (zh) 一种基于固相凝集技术的新生儿溶血病实验检测试剂盒及其制备方法
CN112285361B (zh) 排除抗-cd38单克隆抗体药物对抗人球蛋白检测干扰的试剂
Bialek et al. Distribution and quantity of leukocyte antigens in the formed elements of the blood
CN101109752B (zh) 单克隆抗体spa红细胞花环法检测淋巴细胞亚群的方法
Fong et al. Characterization of maternal isoagglutinins in ABO hemolytic disease of the newborn
Stuart et al. A biological test for injury to the human red cell
CN111721943A (zh) 一种放散试验室内质控品及质控方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination