CN111647570A - 一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS及其编码基因 - Google Patents

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彭世清
郭冬
王颖
朱家红
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Abstract

本发明实施例公开了一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS及其编码基因，属于生物技术领域。一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS，是如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。本发明的荧光定量PCR分析结果为进一步阐明巴西橡胶树HbPDS基因在植物生长发育和胁迫应答中的功能和调控机制提供了研究基础，以及为建立VIGS和CRISPR/Cas9基因沉默体系研究橡胶树基因的功能提供了直观快捷的内源检测报告基因。本发明将HbPDS基因克隆到pET‑28a表达载体上，然后转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导表达，可高效表达橡胶树八氢番茄红素脱氢酶，为进行番茄红素生产研究提供了新的八氢番茄红素脱氢酶源。

Description

一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS及其编码基因
技术领域
本发明实施例涉及生物技术领域，具体涉及一种橡胶树八氢番茄红素脱 氢酶HbPDS及其编码基因。
背景技术
八氢番茄红素脱氢酶(PDS)是类胡萝卜素合成途径中上游的首要限速 酶，它可催化无色八氢番茄红素生成有色的番茄红素，进而转变为类胡萝卜 素。类胡萝卜素在植物中具有光保护作用，能够吸收光能和淬灭多余光能。 当PDS基因沉默，叶绿体失去了这种保护作用，导致叶绿素降解，富含叶绿 素的叶片等组织会褪色、黄化甚至变成白色，形成光漂白现象。这种表型很 容易分辨，所以PDS基因作为近年来新兴发展的病毒诱导的VIGS和CRISPR/Cas9基因沉默体系的直观快捷的内源检测报告基因。
巴西橡胶树是热带的一种主要经济林木，是天然橡胶的主要来源。目前 对橡胶树八氢番茄红素脱氢酶(HbPDS)基因的研究还没有见报道。
目前商品化番茄红素主要是从番茄中提取，这种方法受气候条件影响较 大，仅靠有限的番茄提取不能满足市场需求。另一种生产番茄红素的方法是 微生物发酵法，微生物发酵法生产番茄红素主要是利用八氢番茄红素合成酶 和八氢番茄红素脱氢酶同时转入微生物中对微生物本身提供的底物生成番茄 红素。橡胶树八氢番茄红素脱氢酶(HbPDS)可以缓解目前市场上进行番茄红 素生产的有限的八氢番茄红素脱氢酶源。
发明内容
为此，本发明实施例提供一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS及其编 码基因。
为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
根据本发明实施例的第一方面，本发明提供一种橡胶树八氢番茄红素脱 氢酶HbPDS，是如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。编码上述的橡胶树八氢 番茄红素脱氢酶HbPDS的基因，是如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
根据本发明实施例的第二方面，本发明提供了一种含有上述的核苷酸序 列的表达载体。
根据本发明实施例的第三方面，本发明提供了上述的基因在制备番茄红 素中的应用。
本发明实施例具有如下优点：
本发明基于基因组数据，对HbPDS基因的完整读码框(ORF)进行了克 隆，得到橡胶树八氢番茄红素脱氢酶(HbPDS)及其编码基因。HbPDS基因 在巴西橡胶树不同组织器官中均有表达，尤其在叶中的表达量最高；树叶的 发育程度对HbPDS基因表达也有影响，随着叶发育进程表达量逐渐增高； HbPDS基因表达受水杨酸(SA)、脱落酸(JA)和乙烯(ET)激素的调控， 为进一步阐明巴西橡胶树HbPDS基因在植物生长发育和胁迫应答中的功能和 调控机制提供了研究基础，以及为建立VIGS和CRISPR/Cas9基因沉默体系研 究橡胶树基因的功能提供了直观快捷的内源检测报告基因。
本发明将HbPDS基因克隆到pET-28a表达载体上，然后转化大肠杆菌 BL21(DE3)，经IPTG诱导表达，可高效表达橡胶树八氢番茄红素脱氢酶，为 进行番茄红素生产研究提供了新的八氢番茄红素脱氢酶源。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将 对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见 地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在 不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附 图。
图1为HbPDS与其它植物PDS蛋白的氨基酸序列比对；其中， XP_021691516.1：橡胶树Heveabrasiliensis；XP_021613095.1：木薯Manihot esculenta；XP_012078425.1：麻枫树Jatropha curcas；XP_015574341.1：蓖麻 Ricinus communis；XP_002321104.3：毛果杨Populus trichocarpa； ABE99707.1：烟草Nicotiana benthamiana；BOXⅠ：NAD(P)结合域；BOXⅡ：类胡萝卜素结合域。
图2为HbPDS与其他植物PDS蛋白的系统进化分析；其中，Hevea brasiliensis XP_021691516.1：橡胶树；Manihot sculenta XP_021613095.1：木 薯；Jatropha curcas XP_012078425.1：麻疯树；Ricinus communis XP_015574341.1：蓖麻；Populus trichocarpaXP_002321104.3：毛果杨； Quercus suber XP_023880331.1：栓皮槠；Carica papaya XP_021888908.1：番 木瓜；Salix brachista KAB5569689.1：小垫柳；Diospyros kakiACY78343.1： 柿树；Camellia sinensis XP_028107084.1：野茶树；Prunus avium XP_021803084.1：甜樱桃；Acer palmatum AWF94348.1：槭树；Gossypium hirsutum XP_016683750.1：陆地棉；Ziziphus jujube XP_015887115.1：枣； Vitis vinifera XP_002264267.1：葡萄；Malus domestica XP_008337492.2：苹 果；Catharanthus roseusAGH32499.1：长春花；Arabidopsis thaliana NP_193157.1：拟南芥；Nicotianabenthamiana ABE99707.1：烟草；Oryza sativa Japonica Group X1 XP_015633098.1：水稻；Setaria italica XP_004985463.1：谷子。
图3A为HbPDS基因在橡胶树不同组织的表达分析；图3B为HbPDS基 因在橡胶树叶不同成熟期的表达分析；图3C为HbPDS基因在不同激素处理 橡胶树后胶乳组织的表达分析。
图4为重组质粒pET-28a-HbPDS的构建；其中，1：DNA Marker；2：重 组质粒；3：双酶切重组质粒：4：全长HbPDS；5：DNA Marker。
图5为八氢番茄红素脱氢酶HbPDS的表达及纯化；其中，1：标准蛋白Marker；2：阴性对照；3：IPTG诱导的融合蛋白；4：纯化的融合蛋白。
图6为八氢番茄红素不进行酶促反应样品与进行酶促反应样品的HPLC色 谱；其中，A：不进行酶促反应样品HPLC；B：进行酶促反应样品HPLC。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可 由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描 述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其 他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例中使用的试剂和方法，如无特 殊说明，均采用常规试剂和使用常规方法。
材料
1.本研究所用巴西橡胶树均来自中国热带农业科学院试验农场。材料处 理：(1)采集正常割胶的热研7-33-97橡胶树的不同组织，胶乳、茎、不同 时期叶、根、雄花、雌花和种子，立即置于液氮中冻存备用。(2)外源激素 SA(水杨酸)、ABA(脱落酸)、JA(茉莉酸)和ET(乙烯)处理，处理方 法参照Hao和Wu(2000)的方法[Hao Bingzhong,Wu Jilin.Laticiferdifferentiation in Hevea brasiliensis：Induced by exogenous jas monic acid andlinolenic acid.[J].Annals of Botany,2000,85(1):37-43]。每种外源激素处理均 设置三个重复，每个重复包括8棵树。
2.质粒及菌种
克隆载体pMD18-T Vector购自Takara公司。E.coli DH5α、BL21(DE3)菌 株、原核表达载体质粒PET-28a(+)由本实验室保存。
3.生化试剂
限制性内切酶、TaqDNA聚合酶、T4-DNA连接酶、cDNA第一链的合成 Prime ScriptRTreagent Kit、荧光定量试剂盒均购自Takara公司。PCR产物回 收TIANgel Midi Pμrification Kit购自TIANGEN公司。其他生化试剂和常规试 剂均为超纯和分析纯。
实施例1
HbPDS的合成及分析
1.总RNA的提取和cDNA的合成
根、茎、叶、雄花、雌花及种子的总RNA提取按照李辉亮的方法[李 辉亮.橡胶树自根幼态无性系与其供体(老态无性系)差异的分子基础研究 [D].海口:海南大学，2010]进行。胶乳总RNA提取按照Tang等的方 法[Tang C,Qi J,Li H,et al.A convenient andefficient protocol for isolating high-quality RNA from latex of Heveabrasiliensis(para rubber tree)[J]. Biochem Biophys Methods,2007,70(5):749-754.]进行。分别取不同材料1μl 总RNA稀释至100μl进行紫外分光光度计检测，其A260/A280比值均为 1.90～2.10，表明RNA样品几乎没有蛋白质污染，且A260/A230的比值均匀大于2.0，表明几乎没有酚和多糖类物质的污染。cDNA第一链的合成按照 宝生物公司PrimeScript RTreagent Kit说明书进行。
2.HbPDS基因的克隆及序列分析
依据烟草中NbPDS基因(DQ469932.1)序列，在NCBI数据库中搜索 橡胶树基因组，获得一条同源序列，并将该基因命名为HbPDS基因。根据 基因序列结果设计一对特异引物HbPDSF和HbPDSR(表1)，以巴西橡胶 树叶cDNA为模板对HbPDS基因的开放阅读框(ORF)全长进行克隆。在 0.2ml的Eppendorf管中顺次加入以下成分：
Figure BDA0002480890910000051
混匀后，在DNA Thermo Cycler T1上进行PCR反应，反应参数：预变性 95℃ 3min；变性95℃ 10s；退火58℃ 30s；延伸72℃ 60s；35个循环；延 伸72℃ 5min。
扩增产物经凝胶电泳回收后连接PMD-18T Vector，并转化大肠杆菌感受 态细胞DH5a，挑取阳性克隆测序。
结果显示，巴西橡胶树HbPDS基因的ORF为1749bp，测得其核苷酸序 列如SEQ IDNO:2所示，该基因编码582个氨基酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.HbPDS的生物信息学分析
利用ExPASy Proteomics Server在线工具Prot-param (http://www.expasy.ch/tools/protparam.html)预测HbPDS编码蛋白的理化性质， 保守结构域运用smart(http://smart.embl-heidelberg.de/)软件分析，利用Clustal X软件和MEGA 6.0软件进行氨基酸序列多重比对分析和构建系统进化树， 以了解与其他PDS同源蛋白在系统进化的关系。
结果显示，HbPDS编码蛋白的分子量为64.98kD，等电点为7.10。比对 HbPDS编码的氨基酸序列和其他植物PDS蛋白序列，显示HbPDS与多种植 物PDS氨基酸序列均具有较高同源性。其编码的蛋白与木薯(Manihot sculenta)、麻疯树(Jatropha curcas)同源蛋白的相似性最高。ExPASy Proteomics Server软件分析结果显示均含有1个保守的二核苷酸结合域和1个 类胡萝卜素结合域(图1)，显示其高度的保守性。与HbPDS遗传关系最近 的是木薯、蓖麻和麻疯树的PDS，遗传关系较远的是拟南芥、水稻、谷子等 的PDS(图2)。
4.HbPDS基因的荧光定量PCR分析
荧光定量采用SYBR Premix Ex TaqⅡ，用于定量PCR的引物为HbPDSQF 和HbPDSQR(表1)；以肌动蛋白基因HbACT为其表达分析的内参基因， 引物为HbACTF和HbACTR(表1)。Q-RT-PCR在MX3500实时荧光定量 PCR仪上进行操作，一次平行实验设3次重复。20μL定量RT-PCR反应体系 如下：
Figure BDA0002480890910000071
轻轻混匀。PCR反应程序：预变性95℃3min；变性95℃10s；退火 58℃30s；延伸72℃20s；40个循环。
利用荧光定量PCR技术分析巴西橡胶树HbPDS基因在不同组织和处理中 的表达特性。结果显示，HbPDS基因在巴西橡胶树胶乳、根、茎、叶、雌 花、雄花和种子中均有表达，在叶中的表达量高于其他部位，其次是茎，种 子和胶乳中的表达量较低，叶片中的表达量分别是种子和胶乳的20来倍(图 3A)。
树叶的发育程度对HbPDS基因表达也有影响，随着叶发育进程表达量逐 渐增高，以成熟叶(D期)中表达最高，比幼叶期高4倍多(图3B)。
外源激素SA处理后HbPDS基因的表达先下降后逐渐上升，在SA处理3 小时后达到最低，随之开始升高；ABA处理化后HbPDS基因表达量变化不明 显；而ET在处理化后表达量逐渐下降，一直到24小时后还是降低，可能ET 对HbPDS的调控影响持续时间比较长；JA对HbPDS基因的表达量也有一定 的影响(图3C)。
实施例2
含有HbPDS基因的表达载体的构建
用于构建载体的带有BamHI和XhoI酶切位点的引物HbPDS-PETF和 HbPDS-PETR见表1。以测序正确的阳性克隆质粒为模板进行PCR扩增。 PCR产物的回收后连接到pMD18-TVector，转入E.coli DH5α，进行阳性克隆 的PCR鉴定，挑选3个阳性克隆测序并提取质粒；将连接到pMD18-T Vector 上的HbPDS片段用BamH I/Xho I酶切后连接到采用同样酶切后的原核表达载 体质粒pET-28a(+)上；将所得的pET-28a-HbPDS转入E.coli DH5α，进行阳性克隆的PCR鉴定(图4)，表明表达载体pET-28a-HbPDS构建成功。
表1 本文所用引物序列
Figure BDA0002480890910000081
实施例3
蛋白的诱导表达
将构建好的pET-28a-HbPDS表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行阳 性克隆的PCR鉴定，获得带pET-28a-HbPDS质粒的BL21(DE3)菌株。
37℃培养含有表达载体的BL21(DE3)菌株，按照1:100的比例扩大培养至 OD600＝0.5左右。取1ml菌液作对照。向剩余菌液IPTG终浓度为0.5mmol/L IPTG诱导剂，继续诱导培养24小时。离心收集菌体细胞，用Tris-HCl (pH＝8.0)重悬后超声波破碎。留样用来跑胶，其余破碎液12000rpm离心20分 钟并用0.45μm过滤膜过滤后用镍亲和层析柱进行重组八氢番茄红素脱氢酶的 纯化。用SDS-PAGE电泳进行检测，跑胶到合适位置，将取下的胶置于考马 斯亮蓝溶液中轻摇染色过夜，胶体置于乙醇-乙酸溶液中轻摇脱色。电泳结果 显示酶蛋白分子量为64kD左右(图5)，与预测的HbPDS编码蛋白64.98kD 基本一致，说明HbPDS蛋白在大肠杆菌中得到表达。
实施例4
橡胶树八氢番茄红素脱氢酶活测定
酶活测定所用试剂及配方按照戎清清的方法进行[戎清清.八氢番茄红素 脱氢酶活性测定体系的相关研究[D].天津：南开大学，2012]，准备以下 母液：5mg/mL NADP储备液；0.6g/mL卵磷脂储备液；0.5mol/L MgCl2；4℃ 储存备用。色谱条件：流动相为色谱纯甲醇-四氢呋喃(75:25)；色谱柱为 ODS C18反相色谱柱(4.6mm×250mm，5.0μm)；流速为1ml/min，进样 量为50μl；温度为30℃，检测波长287nm，该波长为八氢番茄红素的最大吸 收波长，理论板数按八氢番茄红素峰计算不低于3000[Zeng bao WU et al., Determinationof Phytoene Content in Tomato Ketchup by HPLC[J].Agricultural Science&Technology,2016,17(11):2627-2628,2635.]。
总反应体系为100μL，取1.5ml Eppendorf管放于冰上，然后顺次加入如 下成分：
Figure BDA0002480890910000091
轻轻混匀，取50μL留样不进行酶促反应，另50μL放37℃恒温箱，100 rpm/min，缓慢震荡温浴。HPLC检测。
试验得出，没有酶促反应样品保留时间为10.4min，样品中的八氢番茄 红素与其他各峰之间分离良好，而进行了酶促反应的样品几乎不出峰(图 6)。结果说明HbPDS蛋白酶有催化八氢番茄红素脱氢作用。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述， 但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是 显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均 属于本发明要求保护的范围。
Figure BDA0002480890910000101
Figure BDA0002480890910000111
Figure BDA0002480890910000121
Figure BDA0002480890910000131
Figure BDA0002480890910000141
序列表
<110> 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
<120> 一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS及其编码基因
<130> 2020
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 582
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Met Thr Leu His Gly Ser Val Ser Ala Leu Asn Leu Asn Trp His Thr
1 5 10 15
Gly Ile Leu Asp Gly Arg Lys Leu Gln Ser Ser Leu Gly Tyr Gly Tyr
20 25 30
Pro Asn Cys Ser Lys Gln Thr Asn Ala Leu Ala Phe Arg Val Ser Glu
35 40 45
Ser Met Gly His Ala Leu Arg Ile Pro Leu Gly Asn Ala Thr Lys Thr
50 55 60
Arg Met Arg Thr Ala Gly Cys Pro Leu Gln Val Val Cys Val Asp Tyr
65 70 75 80
Pro Arg Pro Asp Leu Asp Asn Thr Val Asn Phe Leu Glu Ala Ala Tyr
85 90 95
Leu Ser Ser Ser Phe Arg Asn Ser Pro Arg Pro Ala Lys Pro Leu Lys
100 105 110
Ile Val Val Ala Gly Ala Gly Leu Ala Gly Leu Ser Thr Ala Lys Tyr
115 120 125
Leu Ala Asp Ala Gly His Lys Pro Val Leu Leu Glu Ala Arg Glu Val
130 135 140
Leu Gly Gly Lys Val Ala Ala Trp Lys Asp Asp Asp Gly Asp Trp Tyr
145 150 155 160
Glu Thr Gly Leu His Ile Phe Phe Gly Ala Tyr Pro Asn Ile Gln Asn
165 170 175
Leu Phe Gly Glu Leu Gly Ile Asn Asp Arg Leu Gln Trp Lys Glu His
180 185 190
Ser Met Ile Phe Ala Met Pro Asn His Pro Gly Glu Phe Ser Arg Phe
195 200 205
Asp Phe Ala Glu Val Leu Pro Ala Pro Leu Asn Gly Met Trp Ala Ile
210 215 220
Leu Lys Asn Asn Glu Met Leu Thr Trp Pro Glu Lys Val Lys Phe Ala
225 230 235 240
Ile Gly Leu Leu Pro Ala Met Val Gly Gly Gln Ala Tyr Val Glu Ala
245 250 255
Gln Asp Gly Leu Thr Val Gln Asp Trp Met Arg Lys Gln Gly Val Pro
260 265 270
Asp Arg Val Thr Lys Glu Val Phe Ile Ala Met Ser Lys Ala Leu Asn
275 280 285
Phe Ile Asn Pro Asp Glu Leu Ser Met Gln Cys Ile Leu Ile Ala Leu
290 295 300
Asn Arg Phe Leu Gln Glu Lys His Gly Ser Lys Met Ala Phe Leu Asp
305 310 315 320
Gly Asn Pro Pro Glu Arg Leu Cys Met Pro Ile Val Asp His Ile Gln
325 330 335
Ser Leu Gly Gly Glu Val Arg Leu Asn Ser Arg Ile Lys Lys Ile Glu
340 345 350
Leu Asn Asn Asp Gly Thr Val Lys Ser Phe Leu Leu Asn Thr Gly Glu
355 360 365
Ile Ile Glu Gly Asp Ala Tyr Val Phe Ala Thr Pro Val Asp Ile Leu
370 375 380
Lys Leu Leu Leu Pro Asp Asn Trp Lys Glu Ile Pro Tyr Phe Lys Lys
385 390 395 400
Leu Glu Lys Leu Val Gly Val Pro Val Ile Asn Val His Ile Trp Phe
405 410 415
Asp Arg Lys Leu Lys Asn Thr Tyr Asp His Leu Leu Phe Ser Arg Ser
420 425 430
Pro Leu Leu Ser Val Tyr Ala Asp Met Ser Val Thr Cys Lys Glu Tyr
435 440 445
Tyr Asn Pro Asn Gln Ser Met Leu Glu Leu Val Phe Ala Pro Ala Glu
450 455 460
Glu Trp Ile Ser Cys Ser Asp Ser Glu Ile Ile Asp Ala Thr Ile Arg
465 470 475 480
Glu Leu Ala Lys Leu Phe Pro Asp Glu Ile Ser Ala Asp Gln Ser Lys
485 490 495
Ala Lys Ile Val Lys Tyr His Val Val Lys Thr Pro Arg Ser Val Tyr
500 505 510
Lys Thr Leu Pro Asn Cys Glu Pro Cys Arg Pro Leu Gln Arg Ser Pro
515 520 525
Ile Glu Gly Phe Tyr Leu Ala Gly Asp Tyr Thr Lys Gln Lys Tyr Leu
530 535 540
Ala Ser Met Glu Gly Ala Val Leu Ser Gly Lys Leu Cys Ala Gln Ala
545 550 555 560
Ile Val Gln Asp Tyr Glu Leu Leu Val Ala Arg Glu Gln Gly Lys Leu
565 570 575
Val Glu Ala Thr Ile Ser
580
<210> 2
<211> 1749
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
atgactttgc acgggagtgt ttctgcattg aatttaaatt ggcacactgg tatcttagat 60
ggtagaaaat tgcaatcttc actgggatat ggttatccta actgttctaa gcaaaccaat 120
gcattagctt ttagagtaag tgaatcgatg ggccatgctt tgagaatacc gcttggaaat 180
gctactaaga caagaatgag gactgctggc tgccctttgc aggtagtttg tgtggactat 240
cctagaccag accttgataa tacggtgaat ttcttggaag ctgcatattt atcatcgtcc 300
tttcgtaatt ctccacgtcc agctaaacca ttgaaaattg tggttgctgg ggcaggattg 360
gctggtttat caactgcaaa atatttggca gatgctggcc ataagcctgt actacttgaa 420
gcaagagaag ttttgggcgg aaaggtggct gcatggaaag atgatgatgg ggactggtat 480
gagactggcc tgcatatatt ctttggagca tacccaaata ttcagaacct gtttggagaa 540
cttggtatca atgataggtt gcagtggaag gaacattcta tgatatttgc gatgccaaat 600
catccaggag agttcagccg atttgatttt gcagaagttc ttcctgcacc attaaatggg 660
atgtgggcaa ttctaaaaaa caatgagatg ctgacttggc ctgagaaagt gaagtttgcg 720
attggactcc tgccagcaat ggttggtgga caggcttatg ttgaggctca agatggtttg 780
actgttcaag attggatgag aaagcaggga gttcctgatc gagtcactaa agaggtgttt 840
attgccatgt caaaggcgct taactttatt aaccctgatg aactttcaat gcagtgtata 900
ttgatagcat tgaaccgatt tcttcaggag aaacatggtt caaagatggc tttcttagat 960
gggaatcccc cagagagact ttgcatgcca attgttgatc atattcagtc tctgggtggt 1020
gaagtccggc taaattcacg aataaagaaa attgagctaa ataatgatgg aacagttaaa 1080
agctttttac taaatactgg ggagatcatt gaaggagatg cttatgtgtt tgccactcca 1140
gttgacatcc tgaagcttct tttgcctgat aactggaaag agattcctta cttcaagaaa 1200
ttggagaaat tagttggtgt tcctgttatt aatgttcaca tatggttcga caggaaacta 1260
aagaatacat atgaccacct acttttcagc agaagtcccc ttcttagtgt ttatgcagac 1320
atgtctgtaa catgtaagga atattataat ccaaatcagt ctatgctgga gttagttttt 1380
gcacctgcag aagaatggat ctcatgcagt gactcagaaa tcattgatgc tacaatcagg 1440
gaactggcaa aactctttcc tgatgaaata tctgcagatc agagcaaagc aaaaattgtg 1500
aagtatcatg ttgttaaaac tccaaggtct gtttacaaga ctcttccaaa ttgtgaacct 1560
tgccgcccct tacaaagatc tcctatagag ggcttctatt tagctggcga ctacacaaag 1620
caaaaatatt tggcttcaat ggagggagct gtcctatctg ggaagctttg tgcacaggct 1680
attgtacagg attatgagtt gcttgttgct cgggagcaag gaaagttggt ggaggcaact 1740
attagttga 1749

Claims (4)

1.一种橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS，其特征在于，是如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
2.编码权利要求1所述的橡胶树八氢番茄红素脱氢酶HbPDS的基因，其特征在于，是如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。
3.一种含有权利要求2所述的核苷酸序列的表达载体。
4.权利要求2所述的基因在制备番茄红素中的应用。
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