CN111624353A - 一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；其中，所述的结合垫上包被有标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有人血清白蛋白(HSA)，所述的第二检测线上包被有肌酐和蛋白的半抗原偶联物。本发明采用免疫层析技术，可以实现肌酐和微量白蛋白的同时快速免疫定量分析，并实时提供微量白蛋白/肌酐比值(ACR)数据，即可用于定量测定人尿中的微量白蛋白、肌酐和微量白蛋白/肌酐比(ACR)，本发明的尿微量白蛋白/肌酐比值检测试剂盒属于体外诊断试剂，尿微量白蛋白、肌酐和ACR的测定有助于肾病的辅助诊断。

Description

一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡及其制备方法。
背景技术
白蛋白是一种小蛋白，在血浆中的浓度很高。在正常情况下，只有少量白蛋白排泄到尿液中。尿微量白蛋白浓度持续性升高被称作微量白蛋白尿。在六个月内，如果三次尿样检测中至少有两次的尿微量白蛋白排泄率(AER)在20到200μg/min之间，即可确诊为微量白蛋白尿，意味着肾功能的病变。
肌酐是肌肉组织蛋白质肌酸的降解产物。所有的肌酐都会透过肾小球基膜，并且排泄到尿中。由于肌肉的降解是一个连续的过程，肌酐的滤过也具有一个恒定的速率。因此，测定尿中的肌酐可以对尿液排泄的波动进行校正。
尿液中微量白蛋白(mALB)的含量用尿肌酐(CRE)做校正可以消除取样方式和尿量对尿白蛋白排泌量的影响，因此将对白蛋白排泄率提供更准确的评价，可用于肾病的辅助诊断，对预防糖尿病肾病的发生有较大的临床意义。
目前，ACR已经成为肾病诊断十分重要的预测指标，并且也用于确定存在罹患糖尿病并发症和高血压的风险。美国糖尿病协会指南建议每年进行一次检验，以便在诊断开始时评估有5年以上糖尿病史的1型糖尿病患者以及所有2型糖尿病患者尿液白蛋白分泌量。
目前检测尿液中微量白蛋白和肌酐使用的方法比较多，常见的检测方法有试纸比色法，免疫生化法，放射免疫法等。试纸比色法操作简便，能够迅速看到结果，但结果特异性和灵敏度比较差，更适用于人群筛查而不适用于临床诊断。免疫生化法灵敏度和特异性都比较好，但一般耗时较长(一般1到2小时)，可同时测较多样本，需要大型仪器，检测过程复杂步骤多。放射免疫法的优点是灵敏、特异、简便易行、用样量少等。本法的缺点是用到放射性物质，存在辐射损伤污染的可能性，且操作仪器较大，步骤繁琐。
目前，检验室里通常需要用蛋白分析仪测定mALB，用大型生化分析仪测定CRE，然后数据传输到电脑上，需要人工数据统计计算微量白蛋白/肌酐比值(ACR)数据。
申请号201610697730.0公开了用干化学法测试肌酐，胶体金层析方法测试微量白蛋白，该专利需要准备两份检测样本分别加样，单独检测肌酐值和微量白蛋白，然后再求微量白蛋白/肌酐比值，操作较为繁琐，且胶体金检测灵敏度仍有待提高。
发明内容
本发明的目的是提供一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡及其制备方法，该试剂卡可以简单便捷的同时测定微量白蛋白和肌酐的含量。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明一方面提供一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；其中，所述的结合垫上包被有标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有人血清白蛋白(HSA)，所述的第二检测线上包被有肌酐和蛋白的半抗原偶联物。
优选地，所述的肌酐和蛋白的半抗原偶联物中的蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、酪蛋白中的一种或多种。
进一步优选地，所述的肌酐和蛋白的半抗原偶联物中的蛋白为钥孔血蓝蛋白(KLH)。
本发明中的标记物为易测定且具有高度敏感性的物质，优选地，所述的标记物为荧光素、磷光素、荧光微球、磷光微球、胶体金、酶、生物素、磁性微球、发光底物、彩色胶乳、量子点中的一种或多种。
进一步优选地，所述的标记物为时间分辨荧光微球。
进一步优选地，所述的标记物的粒径为纳米级。
优选地，所述样品垫和所述的结合垫采用玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜或纤维素滤纸或无纺布。
优选地，所述的分析膜材采用硝酸纤维素膜或者尼龙膜。
优选地，所述的分析膜上还设置有质控线。
进一步地，质控线上包被有二抗，例如羊抗兔、羊抗鸡、鼠抗鸡等。
优选地，所述的试剂卡采用时间分辨荧光免疫分析仪进行检测，时间分辨荧光免疫层析法灵敏度高，特异性好，能定量检测到痕量的蛋白质，因而有较大的技术优势，白蛋白(ALB) 与肌酐(CR)因为在病人尿液中含量低，正好可以发挥时间分辨荧光免疫层析的灵敏度高的检测优势，同时在同一仪器上检测尿微、肌酐，得到的ACR更准确。
优选地，所述的试剂卡的长度为5～10cm，宽度为2～8mm。
本发明的试剂卡可以对尿液样本直接进行检测，也可以将尿液样本稀释后加样，也可以是先加尿液蛋白，然后再加稀释液进行检测。
本发明的另一个方面是提供一种所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡的制备方法，包括如下步骤：
(1)制备标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体的混合物，其中，所述的标记有标记物的肌酐抗体的浓度和所述的标记有标记物的白蛋白抗体的浓度独立地为0.05 mg/mL～5mg/mL；
(2)将步骤(1)制得的混合物按照0.25～15μL/cm喷涂在所述的结合垫上；
(3)制备浓度独立地为0.1～5mg/mL的人血清白蛋白液体和肌酐和蛋白的半抗原偶联物液体，然后用点膜仪以0.25～4.0μL/cm的喷量喷涂在分析膜材上分别形成所述的第一检测线和所述的第二检测线；
(4)将所述的样品垫、所述的结合垫、所述的分析膜以及所述的吸收垫组装在底板上制得所述的试剂卡。
优选地，所述的底板可为PVC或其他替代板材。
本发明中的混合物以及液体可以是溶液，也可以是混悬液。
本发明的检测原理为：
将尿液样本或样本稀释液和尿液样本进行混合后加入试剂卡中，尿液样本中待测物 (mALB、CR)分别与结合垫上的标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体结合形成复合物(即待测物-抗体标记物复合物)，并通过毛细管作用层析至分析膜(上有两条检测线、一条控制线)，最后层析至吸收垫上。此时，未与尿液样本中待测物结合的标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体分别与相应的检测线上包被的白蛋白以及肌酐半抗原和蛋白的偶联物结合形成复合物(即抗原-抗体标记物复合物)，多余的仍未反应的标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体则继续层析至质控线。因此尿液样本中待测物越多，相应检测线上形成的抗原-抗体标记物复合物越少。因此当开启检测设备对检测线和控制线上的荧光信号进行检测时，检测线上荧光强度与尿液样本中待测物(mALB、 CR)的浓度成负相关。时间分辨荧光免疫分析仪读取IC卡中回归方程数据，并测试检测线上的荧光强度，再将荧光强度代入回归方程进行自动计算，即输出样本中待测物(mALB、 CR)的浓度，并计算其比值。
由于采用上述技术方案，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明采用免疫层析技术，可以实现肌酐和微量白蛋白的同时快速免疫定量分析，并实时提供微量白蛋白/肌酐比值(ACR)数据，即可用于定量测定人尿中的微量白蛋白、肌酐和微量白蛋白/肌酐比(ACR)，本发明的尿微量白蛋白/肌酐比值检测试剂盒属于体外诊断试剂，尿微量白蛋白、肌酐和ACR的测定有助于肾病的辅助诊断。
附图说明
图1为具体实施方式的试剂卡的结构示意图；其中，1、样品垫；2、结合垫；3、分析膜； 4、吸收垫；5、底板；31、检测线；32、质控线；
图2为mALB的线性方程；
图3为CRE的线性方程。
具体实施方式
下面结合具体的实施案例对本发明的技术方案进一步描述，但本发明不只限于下面的实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体要求做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件。本实施例中采用的试剂或原料均可市购获得，或者按照本领域常规方法制备得到。
实施例1
一种mALB、CRE的联合检测试剂条的制备方法：具体制备步骤包括：
1)抗体标记荧光微球：
1.1微球活化：向1mg/ml纳米级的时光分辨荧光微球中加入用50mM，pH 7.0MES(2-(N- 吗啉)乙磺酸一水合物)溶解的5mg EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)和5mgNHS (N-羟基琥珀酰亚胺)，活化60min，15000rpm离心30min，弃上清，沉淀用pH 7.0的 50mMPBS(磷酸盐缓冲液)重悬，得到1mg/ml活化的荧光微球溶液；
1.2抗体偶联：将1.0mg抗人白蛋白单克隆抗体、抗人CRE抗体分别加入2mL 1mg/mL活化的荧光微球溶液中，室温混匀1h，15000rpm离心30min，弃上清，沉淀用含5mg BSA (乙酰胺)的50mM PBS(磷酸盐缓冲液)溶液封闭1h，搅拌混匀，15000rpm离心30min，收集的沉淀保存于pH7.0含0.5％BSA(牛血清白蛋白)的20mM Tris缓冲液中，得到浓度为0.1mg/mLmALB抗体标记荧光微球溶液、0.1mg/ml CRE抗体标记荧光微球溶液；
2)结合垫制作：将步骤1)中得到的mALB抗体标记荧光微球溶液、CRE抗体标记荧光微球溶液按照体积比1:1混合成荧光微球混合液，按照10μL/cm喷涂在结合膜材上，即为结合垫干燥备用；
3)分析膜制作：分别将人血清白蛋白HSA、CRE-BSA和羊抗鸡二抗稀释至1mg/ml，在点膜仪上以1μL/cm的喷量喷涂在硝酸纤维素膜上，形成mALB检测线、CRE检测线和质控线，即为分析膜，干燥备用；
4)试剂盒的组装：将样品垫1、结合垫2、分析膜3和吸收垫4依次搭接地粘贴在PVC底板5上且结合垫2部分搭接在分析膜3的一侧，吸收垫4部分搭接在分析膜3的另一侧，样品垫1部分搭接在结合垫2上制成试纸条(如图1所示)；然后将试纸条裁切成长度为6.5cm，宽度为4mm的纸条，并装入卡壳以及包装中，即得mALB、CRE联合检测试剂卡；试剂条可装入任意形式外卡壳，也可不装外卡壳直接使用。本实施例中，样品垫1和结合垫2的材质为玻璃纤维素膜。
试验例1尿液样品中mALB和CRE含量的检测
1、mALB标准曲线的建立
在样本稀释液中分别添加mALB至终浓度为0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、4mg/L、8mg/L、16mg/L、32mg/L、64mg/L、128mg/L、256mg/L，取实施例1制得的试纸条进行检测，每个样品重复测定三次。将测定的三次重复结果取平均值后，在时间分辨荧光免疫分析仪上进行标定。
2、CRE检测标准曲线的建立
在样本稀释液中分别添加CRE至终浓度为0.78125mmol/L、1.5625mmol/L、3.125mmol/L、 6.25mmol/L、12.5mmol/L、25mmol/L、50mmol/L，取实施例1制得的试纸条进行检测，每个样品重复测定三次。将测定的三次重复结果取平均值后，在时间分辨荧光免疫分析仪上进行标定。
3、尿液中mALB和CRE的检测
(1)样本的前处理；
①检测前将尿液样本恢复至室温20-25℃；
②移取50ul尿液样本；
③加入1mL样品检测液得到待测样本；
(2)用实施例1制得的试纸条进行检测
①开启时间分辨荧光免疫分析仪，插入对应IC卡，读取标准曲线；
②正面朝上平放检测卡，向试纸条的样品孔中加入待测样本60-120μL，室温反应5-15min 后，将检测卡放入时间分辨荧光免疫分析仪中进行检测；
③截留在检测线和质控线的荧光微球在最佳激发光下，发出强烈的荧光条带；
④采用时间分辨荧光免疫分析仪读取检测线和质控线的荧光强度，并给出T1/C、T2/C值，分析仪可通过内置的标准曲线可以同时计算出样品中mALB和CRE的浓度以及两者的比值，并判断阴阳性。
4、检出限：用样本稀释液进行重复测定20次，计算20次结果的均值M与标准差SD，以空白均值加两倍标准差(M+2SD)报告方法的检测限，结果mALB的检测限为2mg/L，CRE 的检测线为1mmol/L。
5、线性范围：分别取高值和低值的mALB临床样本和高值低值的CRE临床样本，按比例混合后进行检测，每个浓度重复测量三次，将测定浓度平均值与理论值进行线性分析，得到mALB的线性方程y＝1.0256X-2.7135，R2＝0.997。(实验结果及分析见表1、图2)；得到CRE的线性方程为y＝1.0195x-0.4205，R2＝0.9958。(实验结果及分析见表2、图3)。并将mALB的线性方程以及CRE的线性方程写入IC卡中以供时间分辨荧光免疫分析仪读取IC卡中回归方程数据。
表1 mALB线性范围检测结果(5-125mg/L)
相对浓度 test1 test2 test3 mean
125.590 114.500 139.156 132.018 128.558
95.883 95.213 96.457 93.686 95.119
66.178 68.235 57.698 58.123 61.352
36.472 33.334 31.990 36.632 33.985
6.766 7.117 7.398 5.850 6.788
表2 CRE线性范围检测结果(2-25mmol/L)
相对浓度 test1 test2 test3 mean
24.602 25.920 24.967 24.145 25.011
19.248 18.273 19.124 18.467 18.621
13.894 15.593 14.003 13.111 14.236
8.539 8.042 7.493 7.404 7.646
3.185 2.911 3.554 3.150 3.205
6、准确度：用样品检测液分别配制浓度为5mg/L的mALB标品、10mmol/L的CRE标品和浓度分别为10mg/L的mALB和CRE的混合液，用实施例1中所制备试纸条进行检测，重复检测三次，检测结果取平均值进行计算。回收率＝检测浓度/实际加入浓度×100％，计算得mALB回收率为102.05％；CRE的回收率为98.64％；混合液中mALB的回收率为101.04％、 CRE的回收率为98.31％。
7、精密度：取三批实施例1中所制备的时间分辨荧光定量mALB和CRE双联检测试纸条，检测浓度为5mg/L的mALB和10mmol/的CRE混合液，每批试纸条标品平行检测10次，结果显示，三批批次内mALB的CV值分别为6.21％，5.43％，11.61％，三批批次间CV值为9.744％；CRE的的CV值分别4.855％、3.979％、4.047％；三批批次间CV值为3.934％。
本发明的试剂条可用于尿液样本中mALB/CRE定量(定性)检测，且无需对样本进行前处理，操作简便，方便快捷。将样本加入加样口，加入一定体积0～200μL样本稀释液(如0.09％NaCl)，3～30min后通过配套仪器进行检测并自动计算，即可得到样本中 mALB/CRE/sST2的浓度。一份样本，一次加样，一次检测，同时得到mALB、CRE、mALB/CRE 三个项目的检测结果，简化操作步骤，减少样本用量，节约时间，节省成本。并且，本发明以尿液为样本，取样方便且无创。本发明的检测灵敏度高，特异性好。
以上对本发明做了详尽的描述，目的在于让本领域内的技术人员了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，且本发明不限于上述的实施例，凡根据本发明的精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：包括样品垫、结合垫、分析膜以及吸收垫；其中，所述的结合垫上包被有标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体；所述的分析膜上设置有第一检测线和第二检测线，其中，所述的第一检测线上包被有人血清白蛋白，所述的第二检测线上包被有肌酐和蛋白的半抗原偶联物。
2.根据权利要求1所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述的肌酐和蛋白的半抗原偶联物中的蛋白为牛血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、酪蛋白中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述的肌酐和蛋白的半抗原偶联物中的蛋白为钥孔血蓝蛋白。
4.根据权利要求1所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述的标记物为荧光素、磷光素、荧光微球、磷光微球、胶体金、酶、生物素、磁性微球、发光底物、彩色胶乳、量子点中的一种或多种。
5.根据权利要求4所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述的标记物为时间分辨荧光微球。
6.根据权利要求1所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述样品垫和所述的结合垫采用玻璃纤维素膜或聚酯纤维素膜或纤维素滤纸或无纺布；所述的分析膜材采用硝酸纤维素膜或者尼龙膜。
7.根据权利要求1所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述的分析膜上还设置有质控线。
8.根据权利要求1所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡，其特征在于：所述的试剂卡采用时间分辨荧光免疫分析仪进行检测。
9.一种如权利要求1至8中任一项所述的微量白蛋白/肌酐联合检测试剂卡的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)制备标记有标记物的肌酐抗体和标记有标记物的白蛋白抗体的混合物，其中，所述的标记有标记物的肌酐抗体的浓度和所述的标记有标记物的白蛋白抗体的浓度独立地为0.05mg/mL～5mg/mL；
(2)将步骤(1)制得的混合物按照0.25～15μL/cm喷涂在所述的结合垫上；
(3)制备浓度独立地为0.1～5mg/mL的人血清白蛋白液体和肌酐和蛋白的半抗原偶联物液体，然后用点膜仪以0.25～4.0μL/cm的喷量喷涂在分析膜材上分别形成所述的第一检测线和所述的第二检测线；
(4)将所述的样品垫、所述的结合垫、所述的分析膜以及所述的吸收垫组装在底板上制得所述的试剂卡。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140249484A1 (en) * 2013-03-01 2014-09-04 Sio2 Medical Products, Inc. Plasma or cvd pre-treatment for lubricated pharmaceutical package, coating process and apparatus
CN109239366A (zh) * 2018-11-08 2019-01-18 北京怡成生物电子技术股份有限公司 一种尿微量白蛋白/尿肌酐一体化测试卡
WO2019153630A1 (zh) * 2018-02-07 2019-08-15 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种检测人粪便中钙卫蛋白的试剂盒及制备方法
CN110988365A (zh) * 2019-10-31 2020-04-10 湖南工业大学 尿胱抑素c、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140249484A1 (en) * 2013-03-01 2014-09-04 Sio2 Medical Products, Inc. Plasma or cvd pre-treatment for lubricated pharmaceutical package, coating process and apparatus
WO2019153630A1 (zh) * 2018-02-07 2019-08-15 深圳市伯劳特生物制品有限公司 一种检测人粪便中钙卫蛋白的试剂盒及制备方法
CN109239366A (zh) * 2018-11-08 2019-01-18 北京怡成生物电子技术股份有限公司 一种尿微量白蛋白/尿肌酐一体化测试卡
CN110988365A (zh) * 2019-10-31 2020-04-10 湖南工业大学 尿胱抑素c、尿微量白蛋白和尿肌酐定量免疫胶体金检测卡及试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘丽: "胶体金免疫层析技术", 河南科学技术出版社, pages: 26 - 27 *

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