CN111617138A

CN111617138A - 痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用

Info

Publication number: CN111617138A
Application number: CN202010647584.7A
Authority: CN
Inventors: 张小利; 穆竟伟; 刘绍勇; 杜学航
Original assignee: SHANGHAI KAIBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SHANGHAI KAIBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2020-07-07
Filing date: 2020-07-07
Publication date: 2020-09-04
Also published as: JP2022014868A; KR20220005973A; US20220008495A1; AU2021200606B2; TWI804811B; AU2021200606A1; TW202202162A

Abstract

本发明公开了痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用。本发明通过研究痰热清对慢性阻塞性肺病急性加重模型大鼠的影响，实验结果表明痰热清高、中、低剂量均可不同程度改善慢性阻塞性肺病急性加重期大鼠肺功能、肺组织病理损伤，并呈一定的剂量依赖性；痰热清高、中、低剂量可不同程度改善炎症反应，痰热清高、中剂量优于低剂量，因此，痰热清可用于制备治疗慢性阻塞性肺病急性加重的药物。

Description

痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用

技术领域

本发明涉及痰热清的新用途领域，尤其涉及痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用。

背景技术

慢性阻塞性肺病(下文称为“COPD”)是一种慢性支气管炎、引起肺泡结构损伤的疾病的肺气肿、或者两者出现的混合并且从支气管到肺泡的气道关闭的疾病。这种疾病的症状包括：长期咳嗽带痰、由于气道阻塞引起的空气流速下降而导致的呼吸困难以及常见的呼吸道感染(诸如，普通感冒)。这种疾病在全球造成了高死亡率，并且由于吸烟、空气污染等迅速增加。

COPD的急性加重对健康状况、住院率和重返入院率以及COPD的进展造成负担影响。COPD的急性加重也是复杂的事件，常常伴随着气道炎症的加重、粘液分泌的增多以及显著的气体陷闭。这些变化导致呼吸困难这一急性加重的关键症状的加重。其他症状有痰液变浓、变多，咳嗽和喘息。

痰热清制剂由黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花、连翘科学组方，有清热解毒、化痰、解痉、抑菌、抗病毒、解热、免疫调节等作用。临床主要可用于呼吸系统疾病、肝胆疾病、消化系统疾病等。但目前尚未有该组方在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中应用的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

提供了痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用。

在另一优选例中，所述痰热清的处方组成为黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花和连翘。

在另一优选例中，所述药物还包括药剂学上可接受的辅料。

在另一优选例中，所述药物的剂型为口服给药剂型或非口服给药剂型。

在另一优选例中，所述口服给药剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂、糖浆剂或喷雾剂。

在另一优选例中，所述非口服给药剂型是注射剂。

本发明通过研究痰热清对慢性阻塞性肺病急性加重模型大鼠的影响，实验结果表明痰热清高、中、低剂量均可不同程度改善慢性阻塞性肺病急性加重期大鼠肺功能、肺组织病理损伤，并呈一定的剂量依赖性；痰热清高、中、低剂量可不同程度改善炎症反应，痰热清高、中剂量优于低剂量，因此，痰热清可用于制备治疗慢性阻塞性肺病急性加重的药物。

附图说明

图1为空白对照组肺组织(左)、支气管(右)HE染色后的电镜图；

图2为模型对照组肺组织(左)、支气管(右)HE染色后的电镜图；

图3为痰热清高剂量组肺组织(左)、支气管(右)HE染色后的电镜图；

图4为痰热清中剂量组肺组织(左)、支气管(右)HE染色后的电镜图；

图5为痰热清底剂组量肺组织(左)、支气管(右)HE染色后的电镜图；

图6为地塞米松组的肺组织(左)、支气管(右)HE染色后的电镜图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。

本实施例提供了痰热清对慢性阻塞性肺病急性加重模型大鼠的影响。

1.实验材料

1.1痰热清胶囊

生产厂家：上海凯宝药业股份有限公司，批号：1911102

处方组成：黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花和连翘。

临床人用剂量(人以60kg计)：0.06g/Kg/d

按体型系数换算成大鼠等效剂量为：

D大鼠＝D人*(HI鼠/HI人)(W鼠/W人)2/3

D大鼠＝D人*6.3＝0.06g/kg/d*6.3＝0.38g/kg/d

1.1.2地塞米松片

规格：0.75mg×100片，批号：191067，生产厂家：浙江仙琚制药股份有限公司。临用前取片剂6片共0.6g，纯化水50ml，配制成终浓度为0.012g/ml的混悬液。

用法用量：口服。成人开始剂量为1次0.75-3.00mg(1-4片)，1日2-4次。维持量约1日0.75mg(1片)，视病情而定。

本实验采用0.75mg/次，1日3次剂量计算。

临床人用剂量(人以60kg计)：

按体型系数换算成大鼠等效剂量为：

D大鼠＝D人*(HI鼠/HI人)(W鼠/W人)2/3

D大鼠＝D人*6.3＝0.0075mg/kg/d*6.3＝0.23mg/kg/d

1.2实验动物

SD大鼠，SPF级，80只，体重260～300g，雌雄各40只。动物质量合格证号：1107261911004350，购自山东济南朋悦实验动物繁育有限公司，许可证号：SCXK(鲁)2019-0003。

饲养环境：河南中医药大学第一附属医院IVC实验室SPF级动物房，许可证号：SYXK(豫)2015-0005。环境温度(23±2)℃，湿度50％～65％，12h光照明暗交替，良好通风。动物分笼饲养于消毒塑料盒内，每笼6～8只，自由饮水。

饲料：实验动物全价营养饲料，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2019-0010，饲料营养质量检测报告证明为合格。经121℃、15min湿热灭菌，干燥后备用。

饮水：纯化水，当日自制。

1.3实验试剂

红旗渠牌烤烟型过滤嘴香烟(焦油量：10mg；烟气烟碱量：1.0mg；烟气一氧化碳量：11mg；河南中烟工业公司)；多聚甲醛(天津化学试剂公司)；磷酸二氢钠(西安化学试剂厂)；磷酸氢二钠(洛阳化学试剂厂)；EDTA-K₂抗凝管(上海化学试剂研究所)；无水乙醇(郑州派尼化学试剂厂)；IL-6、IL-10和TNF-αELISA试剂盒(规格均为：96T，武汉博士德生物工程有限公司)。CRP和SAA ELISA试剂盒(规格均为：96T，Elabscience有限公司)

细菌：肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae，KP)(菌株号：46114)购自中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心，用前将细菌浓度调整为6×10⁸CFU/ml。

脂多糖(LPS)：购自美国Sigma公司，批号：L2880。

2.动物实验

2.1模型构建

大鼠购回后适应环境7天。灭菌饲料喂养，自由饮用灭菌水，定期检查净化及水电操作系统，保持环境安静。留取14只作为空白对照组，剩余大鼠采用香烟熏吸联合肺炎克雷伯杆菌(KP)反复感染的方法建立慢性阻塞性肺病(COPD)稳定期模型大鼠，具体方法为：点燃香烟，使烟雾浓度达到3000±500ppm，每天2次，两次吸烟间隔至少3h，共12周。第1～8周造模大鼠经鼻腔滴入KP悬液(6×10⁸CFU/ml)0.1ml，每5天1次。经鼻腔滴入方法：以消毒的1ml注射器吸取KP悬液0.1ml，趁大鼠吸气时滴入，左、右鼻孔交替进行。第13周第一天气管内滴注脂多糖(LPS)2mg/kg建立慢性阻塞性肺疾病急性加重期大鼠模型。造模成功后将模型大鼠随机分为模型对照组、痰热清高、中、低剂量组、地塞米松组，每组12只。

2.2给药和处理

自第13周第2天开始给药，空白对照组和模型对照组给予同体积纯化水(10ml/kg/d)灌胃；其余各组分别给予痰热清高、中、低剂量和地塞米松，每日1次，给药时间为1周(如表1所示)。取材前12h所有大鼠禁食，不禁水。首先进行血常规样品的取材，取尾静脉血；之后进行大鼠腹腔注射10％乌拉坦1.0ml/100g麻醉，进行暴露式气管插管，采用动物肺功能检测系统(PFT)检测大鼠肺功能变化；腹主动脉取血，放置2h后离心取血清用于检测炎症因子IL-6、IL-10、CRP和SAA水平；开胸取出大鼠气管及全肺，将右主支气管结扎后抽取左肺肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，用于检测炎症因子TNF-α水平；左肺用4％的多聚甲醛灌流1h，灌流后直接固定在4％的多聚甲醛中，待进行病理检查。

表1

2.3统计学处理

数据采用SPSS 22.0软件进行统计分析。采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行组间比较，符合方差齐性检验者采用最小显著值法(Least Significant Difference，LSD)，不符合方差齐性检验者采用Dunnett’s T3法。结果以均数±标准差

进行描述，检验水准α＝0.05。

3.检测指标及结果

3.1一般状况观察

每天观察各组大鼠皮毛色泽、肢体活动、精神状况、打喷嚏及呼吸是否加深等症状。

造模两周后，模型大鼠出现不同程度的精神倦怠、进食减少；第4～8周，造模大鼠出现皮毛枯黄无光泽、倦怠喜卧，呼吸喘促，大便溏，垫料潮湿等情况；第8～12周时呼吸喘促部分伴有痰鸣，精神倦怠喜卧，口鼻部有少量分泌物，饮食进水量均减少，气管内滴注LPS后，大鼠出现较为明显的呼吸急促伴痰鸣音，部分大鼠出现咳嗽、频繁抓鼻、喷嚏等症状。给药后，痰热清高、中剂量组大鼠精神好转，呼吸喘促喉中痰鸣减轻，咳嗽、喷嚏减少，饮食进水量及活动量增多；痰热清低剂量组大鼠精神稍好转，活动量增多，呼吸急促改善不明显；地塞米松组大鼠活动增多，呼吸喘促及痰鸣减轻明显，咳嗽、喷嚏消失。

大鼠死亡情况：造模过程中5只大鼠死亡，其中1只雌鼠于造模第10周死亡，解剖示肺部肿胀，伴散在暗红色斑块及肺脓肿，1只雄鼠于急性加重期造模时麻醉过量死亡，3只大鼠(2只雄鼠，1只雌鼠)气管内滴注LPS后死亡，喉中痰鸣，呼吸困难，解剖发现肺部暗红色斑块较多，肺肿胀，其中1只肺脓肿明显，1只伴喉头水肿。给药过程中模型对照组死亡1只，解剖示支气管分泌物多，肺肿胀并呈暗红色，伴散在脓点。

3.2肺组织病理学检查

左肺用4％的多聚甲醛固定后，常规脱水，石蜡包埋，切片4μm，常规HE染色，光镜下观察肺部病理改变。每组取8张切片，每张切片在光镜下随机选取6个视野，用高清晰度彩色病理图文分析系统截取图片，计算肺泡平均截距(mean linear intercept，MLI)和平均肺泡数(mean alveolar numbers，MAN)以计算肺泡大小和密度，方法为在每张切片中间画“十”，测量其长度(L)，记录肺泡隔膜数(Ns)，MLI(μm)＝L/Ns，另计算每个视野的肺泡数(Na)，每个视野的面积(S)，MAN(/mm2)＝Na/S。用支气管管壁厚度(Wall thickness，Wt)表示支气管的病理变化，支气管短直径需在100-300μm范围内以规定支气管等级，在400×镜下，测量每个支气管过中心的3个长直径(c1/c2/c3)和短直径(d1/d2/d3)，Wt(μm)＝[(c1-d1)+(c2-d2)+(c3-d3)]/(3×2)。

对于肺组织形态观察的结果如图1-6所示：

如图1所示，空白对照组(8只)：各例肺组织肺泡结构正常，肺泡腔中无明显炎症浸润，肺泡壁无明显增厚或变窄，各级细支气管结构基本正常，管腔中未见明显炎症细胞浸润；

如图2所示，模型对照组(8只)：各例肺组织出现肺泡明显扩张，肺泡壁断裂，部分肺泡相互融合，肺泡腔和支气管中炎症细胞浸润，支气管壁增厚，周围可见大量炎症细胞浸润，管腔狭窄；

如图3所示，痰热清高剂量组(8只)：各例肺组织可见部分肺泡扩张，肺泡腔中少量炎症细胞浸润，肺泡壁结构基本正常；各级细支气管上皮无明显脱落，支气管管腔中可见少量淋巴细胞浸润，病变程度与模型对照组比较明显减轻；

如图4所示，痰热清中剂量组(8只)：各例肺组织可见部分肺泡壁断裂，肺泡腔中少量炎症细胞浸润，各级细支气管结构基本正常，上皮细胞无明显脱落，管腔中无明显炎症细胞浸润，病变程度与模型对照组比较有所减轻；

如图5所示，痰热清低剂量组(8只)：各例肺组织部分肺泡壁断裂，附近肺泡融合扩张，肺泡腔及肺泡间隔可见少量炎症细胞浸润，支气管管腔及周围可见炎症细胞浸润，与模型对照组相比病变程度改善不明显；

如图6所示，地塞米松组(8只)：各例肺组织可见部分肺泡壁断裂，肺泡腔增大，可见少量炎症细胞浸润，各级细支气管结构基本正常，上皮细胞无明显脱落，管腔中无明显炎症细胞浸润，与模型对照组相比病变程度有所减轻.

对于肺泡结构和支气管壁厚度测定的结果，各组肺泡结构和支气管壁厚度变化(

n＝8)如表2所示：

表2

与空白对照组比较，模型对照组MLI升高，MAN降低，支气管壁厚度增大(P<0.05)；与模型对照组比较，痰热清高、中剂量组及地塞米松组MLI有降低趋势，MAN有升高趋势，无显著统计学差异(P＞0.05)；痰热清高剂量组和地塞米松组支气管壁厚度有所降低(P＞0.05)痰热清中剂量组支气管壁厚度高于地塞米松组(P<0.05)。

3.3肺功能

取材前大鼠腹腔注射10％乌拉坦1.0ml/100g麻醉，进行暴露式气管插管，采用动物肺功能检测系统(PFT)检测每只大鼠的相关参数，包括每只大鼠的相关参数，包括用力肺活量(FVC)，第0.1s用力呼气容积(FEV0.1)，第0.3s用力呼气容积(FEV0.3)，最大呼气流速(PEF)，最大呼气中段流量(MMEF)，功能残气量(FRC)等参数，各组大鼠肺功能变化

如表3所示。

表3

注：n＝6-12；与空白对照组比较：aP<0.05，aaP<0.01；与模型组比较：bP<0.05，bbP<0.01。

与空白对照组比较，模型对照组FVC、FEV0.3降低，FRC升高(P<0.05)；与模型对照组比较，痰热清高、中、低剂量组和地塞米松组FVC均升高(P<0.05，P<0.01)，痰热清高、中剂量组和地塞米松组FEV0.3、MMEF升高(P<0.05，P<0.01)，痰热清高剂量组PEF升高，痰热清高、低剂量组FRC降低明显(P<0.05)。

3.4血常规

取材前尾静脉取血进行血常规检测，统计白细胞计数(WBC)、中性粒细胞比率(NEU％)、淋巴细胞百分比(％LYMPH)和单核细胞百分比(％MONO)。

各组外周血炎症细胞变化

结果如表4所示：

表4

与空白对照组比较，模型对照组外周血WBC、NEU％显著升高，LYM％显著降低(P<0.01)；与模型对照组比较，地塞米松组WBC显著降低(P<0.01)，痰热清中、低剂量组降低NEU％、升高LYM％显著(P<0.05，P<0.01)，痰热清高、中、低剂量及地塞米松组降低MONO％均显著(P<0.05，P<0.01)；与地塞米松组比较，痰热清中、低剂量组降低NEU％、升高LYM％均显著(P<0.05，P<0.01)。

3.5血清CRP、SAA水平测定

采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)测定血清中CRP、SAA表达，各组血清CRP、SAA水平变化

的结果如表5所示：

表5

注：n＝9-12。与空白对照组比较：aP<0.05，aaP<0.01；与模型组比较：bP<0.05，bbP<0.01；与低剂地塞米松组比较：ccP<0.05。

与空白对照组比较，模型对照组血清CRP、SAA水平明显升高(P<0.05，P<0.01)；与模型对照组比较，地塞米松组血清SAA水平明显降低，而CRP升高(P<0.01)，痰热清高剂量组有降低CRP的趋势，痰热清高、中、低剂量组有降低SAA的趋势，但无显著统计学差异(P＞0.05)；与地塞米松组比较，痰热清高、中、低剂量组CRP水平均显著降低(P<0.01)。

3.6血清IL-6、IL-10和肺泡灌洗液中TNF-α水平测定

采用ELISA测定血清中IL-6、IL-10和肺泡灌洗液中TNF-α表达，结果如表6所示：

表6

注：n＝10-12。与空白对照组比较：aP<0.05，aaP<0.01；与模型组比较：bP<0.05，bbP<0.01；与地塞米松组比较：cP<0.05，ccP<0.01；与低剂量组比较：dP<0.05，ddP<0.01。

与空白对照组比较，模型对照组血清IL-6、BALF中TNF-α水平显著升高，血清IL-10显著降低(P<0.05，P<0.01)；与模型对照组比较，痰热清高、中、低剂量组血清IL-10均显著升高(P<0.01)，痰热清高、中剂量组及地塞米松组血清IL-6、BALF中TNF-α水平均降低(P<0.05，P<0.01)；与地塞米松组比较，痰热清高、中、低剂量组IL-6、IL-10水平均升高(P<0.05，P<0.01)，痰热清低剂量组BALF中TNF-α水平升高(P<0.05)；痰热清三个剂量间比较，高剂量组IL-6较低剂量组明显降低(P<0.05)，中剂量组TNF-α水平较低剂量组降低，IL-10较低剂量组升高(P<0.05)。

综上，痰热清可用于制备治疗慢性阻塞性肺病(COPD)急性加重的药物。

上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。

Claims

1.痰热清在制备慢性阻塞性肺病急性加重治疗药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述痰热清的处方组成为黄芩、熊胆粉、山羊角、金银花和连翘。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药剂学上可接受的辅料。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为口服给药剂型或非口服给药剂型。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述口服给药剂型为片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、乳剂、糖浆剂或喷雾剂。

6.根据权利要求4所述的生物转化熊胆粉在制备抗炎药物中的应用，其特征在于，所述非口服给药剂型是注射剂。