CN111593078A - 以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法 - Google Patents

以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111593078A
CN111593078A CN202010492508.3A CN202010492508A CN111593078A CN 111593078 A CN111593078 A CN 111593078A CN 202010492508 A CN202010492508 A CN 202010492508A CN 111593078 A CN111593078 A CN 111593078A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermentation
corn steep
steep liquor
nutrient
pha
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010492508.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111593078B (zh
Inventor
佟毅
李义
袁恺
刘安妮
彭超
陈博
周卫强
李大勇
刘海军
吴琼
陈国强
叶健文
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tsinghua University
Cofco Nutrition and Health Research Institute Co Ltd
Jilin COFCO Bio Chemical Co Ltd
Cofco Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Tsinghua University
Cofco Nutrition and Health Research Institute Co Ltd
Jilin COFCO Bio Chemical Co Ltd
Cofco Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tsinghua University, Cofco Nutrition and Health Research Institute Co Ltd, Jilin COFCO Bio Chemical Co Ltd, Cofco Biotechnology Co Ltd filed Critical Tsinghua University
Priority to CN202010492508.3A priority Critical patent/CN111593078B/zh
Publication of CN111593078A publication Critical patent/CN111593078A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111593078B publication Critical patent/CN111593078B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters
    • C12P7/625—Polyesters of hydroxy carboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及PHA发酵领域，具体涉及一种以玉米浆为原料进行发酵制备PHA的方法。该方法包括：在能够发酵产PHA的条件下，将PHA发酵菌种接种至发酵培养基中进行发酵；所述发酵培养基的氮源由酶解玉米浆提供；所述酶解玉米浆的制备方法包括：将玉米浆进行酶解，获得酶解产物，然后将所述酶解产物进行固液分离，得到所述酶解玉米浆；所述酶解所用酶为纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶。该方法能够一定程度降低PHA的生产成本，并使发酵效率得到了提升，而且还减少了玉米浆的排放，提高了玉米浆的附加值。

Description

以玉米浆为原料进行发酵制备PHA的方法
技术领域
本发明涉及PHA发酵领域，具体涉及一种以玉米浆为原料进行发酵制备PHA的方法。
背景技术
在过去半个世纪里，全球塑料产量从1964年的1500万吨猛增到2015年的3.22亿吨，总产量达到78亿吨。且自2015年以来，每年超过3亿吨塑料垃圾流入环境。尽管世界各地出台了一系列的“限塑令”，但是“白色污染”愈演愈烈。PHA（Polyhydroxybutyrate，聚羟基丁酸酯）是一种由微生物合成的生物聚酯，其性能类似于聚乙烯、聚丙烯等传统石油基塑料。同时又因为具有良好的生物降解性而被认为是传统石油基塑料的绿色替代品。但是通过微生物发酵合成PHA所面临的发酵原料价格贵、发酵成本高等问题大大阻碍了PHA取代廉价传统石油基塑料的进程。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供以廉价玉米浆为原料进行发酵制备PHA的方法，该方法能够有效降低PHA的生产成本，并使发酵效率得到了提升，而且还减少了玉米浆的排放，提高了玉米浆的附加值。
为了实现上述目的，本发明提供一种发酵制备PHA的方法，该方法包括：在能够发酵产PHA的条件下，将PHA发酵菌种接种至发酵培养基中进行发酵；
其中，所述发酵培养基的氮源由酶解玉米浆提供；
所述酶解玉米浆的制备方法包括：将玉米浆进行酶解，获得酶解产物，然后将所述酶解产物进行固液分离，得到所述酶解玉米浆；
其中，所述酶解所用酶为纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶。
优选的，所述发酵在搅拌的条件下进行，从发酵0h到发酵8-12h，所述搅拌的转速为400-600rpm；
从发酵8-12h到发酵16-20h，所述搅拌的转速为600-1000rpm；
从发酵16-20h到发酵结束，所述搅拌的转速为400-600rpm。
优选的，所述营养物质的补加方法包括：
（1）当发酵培养基中的糖含量第一次下降至12g/L以下，优选下降至10g/L以下，更优选下降至5-8g/L以下时，补充第一营养物质，所述第一营养物质的碳氮比为10-20：1，第一营养物质的补充量为发酵培养基的8-12体积%；
（2）当第一营养物质补充结束时，补充第二营养物质，所述第二营养物质的碳氮比为30-50：1，第二营养物质的补充量为发酵培养基的5-10体积%；
（3）当第二营养物质补充结束时，补充第三营养物质，所述第三营养物质为葡萄糖，第三营养物质的补充量为发酵培养基的20-30体积%。
通过上述技术方案，本发明能够获得如下有益技术效果：
1）本发明的方法能够充分利用玉米浆中具有较高氮源含量的优势，为PHA发酵菌种的发酵提供足够的氮源供给和环境要求，为该种工业废物的利用带来了新的途径，且可有效提高发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量；
2）本发明由于采用廉价玉米浆用于PHA发酵，相应的减少了配液水的用量，而且培养基中可少添加甚至不添加氮源即可顺利进行发酵，降低了配制培养基的成本；
3）将廉价玉米浆用于PHA发酵，不仅解决了PHA工业化生产过程中面临的发酵原料成本高的问题，还解决了企业处理废玉米浆液所消耗的资源和能源，降低了处理废玉米浆的成本；
4）将廉价玉米浆用于PHA发酵，解决了排放问题，降低了环保的压力；
5）本发明通过先将玉米浆进行酶解，然后再进行固液分离，得到酶解玉米浆，将其应用于PHA发酵中，能够有效提高PHA发酵效率，并且所得发酵液色泽较浅。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供了一种发酵制备PHA的方法，该方法包括：在能够发酵产PHA的条件下，将PHA发酵菌种接种至发酵培养基中进行发酵；
其中，所述发酵培养基的氮源由酶解玉米浆提供；
所述酶解玉米浆的制备方法包括：将玉米浆进行酶解，获得酶解产物，然后将所述酶解产物进行固液分离，得到所述酶解玉米浆；
其中，所述酶解所用酶为纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶。
玉米浆是玉米深加工产业的副产物之一，玉米浸泡水经浓缩后得到米浆。玉米浆是极富营养的物质，当玉米浆浓缩至固形物含量为40-50重量%时，蛋白质含量将会超过40重量%。除此之外玉米浆中还含有多种氨基酸、维生素、无机盐磷、钾等营养成分。
玉米浆的用途广泛，将玉米浆与玉米皮混合加工成玉米片作为饲料原料使用，但是玉米浆液使用量较少，剩余的大部分玉米浆被直接排放至污水处理厂进行处理；将廉价玉米浆经袋式过滤、多次蒸发浓缩、二次过滤、低温离心喷雾干燥一系列操作制成玉米浆干粉进行出售，但是制粉操作过程复杂、能源资源消耗巨大，商业附加价值低。
根据本发明，所述玉米浆可以为玉米加工过程中产生的各种玉米浆液，例如，中粮集团的中粮生物科技股份有限公司，作为国内规模最大、技术领先的玉米深加工企业，具有700万吨玉米加工能力。本发明中使用的玉米浆可以来自中粮生化能源(榆树)有限公司，其每年加工转化玉米60万吨，产生的废玉米浆液体量巨大，废玉米浆液排放处理投入较高。以中粮生化能源(榆树)有限公司的廉价玉米浆液为基质利用盐单胞菌生产PHA，不仅解决了PHA工业化生产过程中面临的发酵原料成本高的问题，还解决了企业处理废玉米浆液所消耗的资源和能源的问题。
根据本发明一种优选的实施方式，所述玉米浆的固含量为10-50重量%（比如，10重量%、15重量%、20重量%、25重量%、30重量%、35重量%、40重量%、45重量%、50重量%，或者之间的任意数值），更优选为40-50重量%。
根据本发明，所述玉米浆可以为任意的在固含量上符合如上要求的玉米浆。
根据本发明，所述玉米浆可以为经除杂后的玉米浆，也可以为未经除杂的玉米浆，优选的，所述玉米浆为经除杂后的玉米浆。
根据本发明中，优选地，所述除杂的方法为过滤。
更优选地，所述过滤选自滤网过滤、纱布过滤和抽真空过滤中的至少一种。
本发明通过对玉米浆进行酶解，将所述玉米浆中的纤维素、蛋白质、淀粉等不溶性的物质水解成小分子的糖类和氨基酸，作为营养物质被微生物利用，提高了原料的利用率，从而提高了PHA的产率。
根据本发明，优选地，所述酶解所用的酶为纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶。
根据本发明，所述酶的用量可以在较宽的范围内选择，优选地，相对于1000重量份的玉米浆，纤维素酶的用量为0.01-0.15重量份（比如可以为0.01重量份、0.03重量份、0.05重量份、0.07重量份、0.09重量份、0.11重量份、0.13重量份、0.15重量份，或者之间的任意值），更优选0.08-0.1重量份；半纤维素的用量为0.01-0.15重量份（比如可以为0.01重量份、0.03重量份、0.05重量份、0.07重量份、0.09重量份、0.11重量份、0.13重量份、0.15重量份，或者之间的任意值），更优选为0.08-0.1重量份；淀粉酶的用量为0.01-0.06重量份（比如可以为0.01重量份、0.02重量份、0.03重量份、0.04重量份、0.05重量份、0.06重量份，或者之间的任意值），更优选为0.02-0.05重量份；酸性蛋白酶的用量为0.08-0.2重量份（比如可以为0.08重量份、0.1重量份、0.12重量份、0.14重量份、0.16重量份、0.18重量份、0.2重量份，或者之间的任意值），更优选为0.12-0.18重量份。
根据本发明，所述酶解的条件可以在较宽的范围内选择，优选地，所述酶解的条件包括：温度为40-55℃（比如可以为40℃、43℃、46℃、49℃、52℃、55℃，或者之间的任意值），更优选为45-50℃；时间为20-50min（比如可以为20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min，或者之间的任意值），更优选为30-40min；酶解的pH值为4-6（比如可以为4、4.5、5、5.5、6，或者之间的任意值），更优选为5-5.5。
根据本发明，优选地，酶解在搅拌的条件下进行，搅拌的转速为200-1000rpm（比如可以为200rpm、300rpm、400rpm、500rpm、600rpm、700rpm、800rpm、900rpm、1000rpm，或者之间的任意值），更优选为500-800rpm。
根据本发明，所述固液分离可以为常规的各种固液分离的方法，例如，可以包括但不限于离心、膜分离、板框过滤等，优选为膜过滤，所述膜的孔径为100-600nm。
更优选地，所述膜为陶瓷膜。
根据本发明，在所述发酵培养基中，所述酶解玉米浆的含量可以在较宽的范围内选择，优选的，相对于1L发酵培养基，所述酶解玉米浆的含量为5-45ml，例如，可以为5mL、10mL、15mL、20mL、25mL、30mL、35mL、40mL、45mL，更优选为10-40mL，进一步优选为32-36mL。
根据本发明，所述发酵培养基中的其他组分可以为PHA发酵培养基中的常规组分，优选的，还含有葡萄糖、磷酸盐、镁盐和钠盐。
根据本发明，在所述发酵培养基中，所述葡萄糖的含量可以在较宽的范围内选择，优选地，相对于1L发酵培养基，葡萄糖的含量为10-35g，例如，可以为10g、15g、20g、25g、30g、35g，更优选为15-30g。
根据本发明，在所述发酵培养基中，所述磷酸盐的含量可以在较宽的范围内选择，优选的，相对于1L发酵培养基，所述磷酸盐的含量为5-20g，例如，可以为5g、7g、9g、11g、13g、15g、16g、17g、18g、19g、20g。
其中，所述磷酸盐可以为PHA发酵过程中常规使用的磷酸盐，例如，磷酸的钠盐、磷酸的钾盐，优选的，所述磷酸盐为磷酸氢二钾和磷酸氢二钠；进一步优选的，相对于1L发酵培养基，磷酸氢二钾的含量为2-5g，优选为3-4g，例如，可以为3.2 g、3.4g、3.6g、3.8g、4g，磷酸氢二钠的含量为5-8g，优选为6-7.5g，例如，可以为6g、6.5g、7g、7.5g。
根据本发明，所述镁盐可以为常规的各种镁盐，但不包括磷酸的镁盐，优选的，所述镁盐为硫酸镁和/或氯化镁。
其中，在所述发酵培养基中，所述镁盐的含量可以在较宽的范围内选择，优选的，相对于1L发酵培养基，所述镁盐的含量为0.1-0.5g，例如，可以为0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g，优选为0.2-0.3g。
根据本发明，所述钠盐可以为常规的各种钠盐，但不包括磷酸的钠盐，优选的，钠盐为氯化钠。
其中，在所述发酵培养基中，所述钠盐的含量可以在较宽的范围内选择，优选的，相对于1L发酵培养基，所述钠盐的含量为40-70g，例如，可以为40g、45g、50g、55g、60g、65g、70g，更优选为45-55g。
根据本发明一种优选的实施方式，所述发酵培养基含有酶解玉米浆、葡萄糖、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁和氯化钠；相对于1L发酵培养基，酶解玉米浆的含量为32-36ml、葡萄糖的含量为15-30g、磷酸氢二钾的含量为2-5g、磷酸氢二钠的含量为5-8g、硫酸镁的含量为0.2-0.3g、氯化钠的含量为45-55g。
需要说明的是，如上各物质的含量指的是在培养基中各物质的含量，而并非是指各物质的总投料量。
根据本发明，PHA发酵的温度可以为其常规的发酵温度，优选的，温度为30-45℃，例如，可以为30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、35.5℃、36℃、36.5℃、37℃、37.5℃、38℃、38.5℃、39℃、40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃。更优选的，温度为35-39℃。
根据本发明，PHA发酵的pH可以为其常规的发酵pH，优选的，pH值为7-9，例如，可以为7、7.5、8、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、9。更优选的，pH值为8.3-8.7。其中，所述pH值可以使用常规的碱进行调节，例如，8-12mol/L的氢氧化钠溶液。
根据本发明，PHA发酵的溶氧量可以为其常规的发酵溶氧量，优选的，溶氧量为1-40%，例如，可以为1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%。更优选的，溶氧量为1-30%。
根据本发明，所述PHA的发酵条件还优选包括搅拌，其中，所述搅拌的转速可以在较宽的范围内选择，优选的，以2-7L发酵罐计，所述搅拌的转速为400-1000rpm，例如，可以为400rpm、450rpm、500rpm、550rpm、600rpm、650rpm、700rpm、750rpm、800rpm、850rpm、900rpm、950rpm、1000rpm。
本发明的发明人在研究的过程中发现，通过在不同的发酵阶段控制不同的搅拌转速，能够进一步提高最终的发酵效果。优选的，所述发酵在搅拌的条件下进行，从发酵0h到发酵8-12h（例如，可以为0-8h、0-9h时、0-10h、0-11h、0-12h），优选到发酵9-11h，所述搅拌的转速为400-600rpm；
从发酵8-12h（优选9-11h）到发酵16-20h（例如，可以为8-16h、9-17h、10-18h、11-19h、12-20h、9-20h、10-20h等等，优选17-19h，具体起始时间依据上一阶段终止时间而定），所述搅拌的转速为600-1000rpm；
从发酵16-20h（优选17-19h）到发酵结束（例如，16h至发酵结束、17h至发酵结束、18h至发酵结束、19h至发酵结束、20h至发酵结束，具体起始时间依据上一阶段终止时间而定），所述搅拌的转速为400-600rpm。
根据本发明，所述PHA的发酵条件还优选包括对通风量进行控制，优选的，通风量为0.5-1.5vvm，例如，可以为0.5vvm、0.6vvm、0.7vvm、0.8vvm、0.9vvm、1vvm、1.1vvm、1.2vvm、1.3vvm、1.4vvm、1.5vvm，优选为1-1.2vvm。
根据本发明，所述PHA的发酵可以在不补料情况下进行，也可以在补料的情况下进行。根据本发明一种优选的实施方式，所述PHA的发酵为补料发酵，也即，在发酵的过程中补加营养物质。
其中，所述营养物质的添加量可以根据PHA发酵菌种对糖的需求情况而定，优选的，所述营养物质的补加量优选使得发酵培养基中的糖含量控制在5-20g/L，例如，5 g/L、6g/L、7 g/L、8 g/L、9 g/L、10 g/L、11 g/L、12 g/L、13 g/L、14 g/L、15 g/L、16 g/L、17 g/L、18 g/L、19 g/L、20 g/L，优选为8-15 g/L。
根据本发明，所述营养物质的添加时机可以根据PHA发酵菌种对糖的需求情况而定，优选的，当发酵培养基中的糖含量下降至12g/L以下，优选下降至10g/L以下，更优选下降至5-8g/L（例如，5 g/L、6 g/L、7 g/L、8 g/L）以下时，开始补加所述营养物质。
其中，所述糖含量是指利用SBA-90生物传感分析仪测定的发酵离心上清液中的糖含量。
其中，优选的，在发酵的过程中实时监测发酵体系中的糖含量。
其中，当所述发酵液的OD600的增速小于5/h时即可结束发酵，根据发明人的发酵经验，当发酵36-48小时，优选39-42小时时，OD600的增速可以降低至如上的水平。
其中，OD600指的是发酵液在分光光度计中在600nm波长处的吸光值。
其中，优选的，在发酵的过程中实时监测发酵体系中的OD600。
根据本发明，所述营养物质可以为常规的发酵过程中的补料，只要能够满足如上的要求即可，例如，所述营养物质可以含有葡萄糖。
本发明的发明人进一步发现，在发酵的不同阶段补加不同的营养物质，能够进一步提高发酵效果，优选的，所述营养物质的补加方法包括：
（1）当发酵培养基中的糖含量第一次下降至12g/L以下，优选下降至12g/L以下，更优选下降至5-8g/L以下时，补充第一营养物质，所述第一营养物质的碳氮比为10-20：1，优选为14-18:1，第一营养物质的补充量为发酵培养基的8-12体积%，优选为9-11体积%。
优选的，所述第一营养物质含有酶解玉米浆和葡萄糖。
优选的，相对于1L的第一营养物质，酶解玉米浆的含量为480-690ml，优选为480-552ml，葡萄糖的含量为480-720g，优选为540-600g。
（2）当第一营养物质补充结束后，补充第二营养物质，所述第二营养物质的碳氮比为30-50：1，优选为35-45:1；第二营养物质的补充量为发酵培养基的5-10体积%，优选为6-8体积%。
优选的，所述第二营养物质含有酶解玉米浆和葡萄糖。
优选的，相对于1L的第二营养物质，酶解玉米浆的含量为272-326ml，优选为272-282ml，葡萄糖的含量为680-1000g，优选为765-850g。
其中，所述第二营养物质可以在第一营养物质补充结束马上补充，也可以间隔一定的时间，但间隔的时间要使得发酵培养基中的糖含量在5-20g/L，优选8-15 g/L。
（3）当第二营养物质补充结束后，补充第三营养物质，所述第三营养物质为葡萄糖，第三营养物质的补充量为发酵培养基的20-30体积%，优选为23-27体积%。
优选的，相对于1L的第三营养物质，葡萄糖的含量为700-900g，优选为750-850g。
其中，所述第三营养物质可以在第二营养物质补充结束马上补充，也可以间隔一定的时间，但间隔的时间要使得发酵培养基中的糖含量在5-20g/L，优选8-15 g/L。
优选的，在第三营养物质补加结束后，继续发酵1-3小时时结束发酵。
根据本发明，所述营养物质的补加可以采用间歇式的补加方式，也可以采用流加的方式，本领域技术人员可以根据实际情况而定。
根据本发明，所述发酵制备PHA的方式可以为连续式发酵，也可以为间歇式发酵。
根据本发明，所述PHA发酵菌种可以为常规的各种能够发酵产PHA的嗜盐发酵菌种，优选的，所述PHA发酵菌种为盐单胞菌(Halomonas sp.)；更优选的，所述PHA发酵菌种为盐单胞菌(Halomonas sp.)TD01，其保藏编号为CGMCC NO.4353（CN201010578858.8）。
根据本发明，所述发酵菌种的接种量可以不受特别的限制，优选的，相对于1L发酵培养基，所述发酵菌种的接种量为5-15体积%；例如，可以为5体积%、7体积%、9体积%、11体积%、13体积%、15体积%。
根据本发明，接种至所述发酵培养基中的发酵菌种优选为活化后的发酵种子液，所述发酵种子液的OD600值优选为3-5。
其中，所述活化的方式可以采用本领域常规的技术手段，例如，将低温保藏菌种接种至种子培养基中进行活化培养。所述种子培养基可以含有5-10g/L的酵母粉、10-15g/L的蛋白胨以及50-60g/L的氯化钠，高温高压灭菌即得。
其中，所述活化培养的条件优选包括：温度为30-40℃，转速为150-250rpm，培养至OD600达到3-5。
其中，所述活化培养优选为多级活化培养，例如，2-3级，从而得到充分活化后的种子液。
根据本发明，所述方法还包括对从发酵得到的发酵液中进行PHA的提取。所述PHA提取的方法可以为本领域常规的方法。例如，参照文献：Chung A , Liu Q , Ouyang S P ,et al. Microbial production of 3-hydroxydodecanoic acid by phaoperon andfadBA knockout mutant of Pseudomonas putida KT2442 harboring tesB gene[J].Applied Microbiology & Biotechnology, 2009, 83(3):513-519.。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，
PHA发酵菌种为盐单胞菌(Halomonas sp.)TD01，其保藏编号为CGMCC NO.4353，来自CN201010578858.8；
糖含量根据SBA-90生物传感分析仪方法测定；
发酵液中盐单胞菌生物量的测定方法为取25-45 ml发酵液离心（8000rpm，10min）留沉淀，无菌水洗涤2次，使用真空冷冻干燥机对洗涤后的沉淀进行干燥48h后称重；
玉米浆来自中粮生化能源(榆树)有限公司；
参照文献：Chung A , Liu Q , Ouyang S P , et al. Microbial production of 3-hydroxydodecanoic acid by phaoperon and fadBA knockout mutant of Pseudomonas putida KT2442 harboring tesB gene[J]. Applied Microbiology & Biotechnology,2009, 83(3):513-519. 从发酵液中进行PHA的提取；
发酵罐体积5L。
制备例1
本制备例用于说明发酵菌种的活化
种子培养基：含有5g/L的酵母粉、10g/L的蛋白胨以及60g/L的氯化钠。
将盐单胞菌接种于种子培养基中在37℃和200rpm的条件下进行一级活化培养，培养至OD600达到4左右，得到一级种子液；
将所述一级种子液以10体积%的接种量接种于种子培养基中，在37℃和200rpm的条件下进行二级活化培养，培养至OD600达到4左右，得到二级种子液，得到发酵种子液。
制备例2
本制备例用于说明酶解玉米浆的制备
1）在固含量为45重量%的玉米浆中加入纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶，相对于1000重量份的玉米浆，纤维素酶的用量为0.09重量份、半纤维素的用量为0.09重量份、淀粉酶的用量为0.04重量份、酸性蛋白酶的用量为0.15重量份；
2）在搅拌的转速为650rpm，温度为47℃、pH值为5.5条件下，酶解35min，停止搅拌得到酶解产物，将所得酶解产物进行陶瓷膜过滤（滤膜孔径为250nm），得到酶解玉米浆。
对比制备例1
用于说明参比的酶解玉米浆的制备
按照制备例2的方法进行酶解玉米浆的制备，不同的是，将纤维素酶调换为等量的半纤维素酶。
对比制备例2
用于说明参比的酶解玉米浆的制备
按照制备例2的方法进行酶解玉米浆的制备，不同的是，将纤维素酶调换为等量的蛋白酶。
对比制备例3
用于说明参比的酶解玉米浆的制备
按照制备例2的方法进行酶解玉米浆的制备，不同的是，酶解结束后，不对酶解产物进行过滤。
对比例1
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
发酵培养基：相对于1L发酵培养基，玉米浆（固含量45重量%）的含量为32mL、葡萄糖的含量为15g、磷酸氢二钾的含量为3g、磷酸氢二钠的含量为6.8g、硫酸镁的含量为0.2g、氯化钠的含量为45g。调节pH至8.5。
补料一：碳氮比为14:1，相对于1L的第一营养物质，玉米浆的含量为552ml，葡萄糖的含量为540g；补料一与发酵培养基的用量体积比为9：100；
补料二：碳氮比为35:1，相对于1L的第二营养物质，玉米浆的含量为315ml，葡萄糖的含量为765g；补料二与发酵培养基的用量体积比为6：100；
补料三：相对于1L的第三营养物质，葡萄糖的含量为850g；补料三与发酵培养基的用量体积比为23:100。
将制备例制得的种子液以10体积%的接种量接种于发酵培养基中，在37℃以及1vvm通风量的条件下发酵培养，同时控制发酵过程中的pH在8.5左右，溶氧量控制在10-30%。此外，在发酵的过程中分阶段控制搅拌转速，发酵0-10h，所述搅拌的转速为400rpm；发酵10-18h，所述搅拌的转速为800rpm；发酵18h至发酵结束，所述搅拌的转速为400rpm。
在发酵的过程中，实时监测发酵体系的糖含量和pH。
当发酵体系中的糖含量第一次下降至6g/L以下时，流加补料一，当补料一结束时，流加补料二，当补料二结束时，流加补料三。
补料的流加速度使得发酵液中的糖含量维持在10g/L左右，补料三流加结束后，继续发酵2小时结束发酵。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
实施例1
本实施例用于说明本发明提供的发酵制备PHA的方法
按照对比例1的方法进行PHA的发酵，不同的是，将玉米浆替换为制备例2制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例2
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
发酵培养基：相对于1L发酵培养基，玉米浆（固含量40重量%）的含量为34mL、葡萄糖的含量为25g、磷酸氢二钾的含量为3.5g、磷酸氢二钠的含量为6g、硫酸镁的含量为0..52g、氯化钠的含量为50g。调节pH至8.3。
补料一：碳氮比为16:1，相对于1L的第一营养物质，玉米浆的含量为504ml，葡萄糖的含量为560g；补料一与发酵培养基的用量体积比为10：100；
补料二：碳氮比为40:1，相对于1L的第二营养物质，玉米浆的含量为282ml，葡萄糖的含量为794g；补料二与发酵培养基的用量体积比为7：100；
补料三：相对于1L的第三营养物质，葡萄糖的含量为800g；补料三与发酵培养基的用量体积比为25:100。
将制备例制得到的种子液以12体积%的接种量接种于发酵培养基中，在35℃以及1.1vvm通风量的条件下发酵培养，同时控制发酵过程中的pH在8.3左右，溶氧量控制在10-30%。此外，在发酵的过程中分阶段控制搅拌转速，发酵0-9h，所述搅拌的转速为500rpm；发酵9-17h，所述搅拌的转速为900rpm；发酵17h至发酵结束，所述搅拌的转速为500rpm。
在发酵的过程中，实时监测发酵体系的糖含量和pH。
当发酵体系中的糖含量第一次下降至5g/L以下时，流加补料一，当补料一结束时，流加补料二，当补料二结束时，流加补料三。
补料的流加速度使得发酵液中的糖含量维持在8g/L左右，补料三流加结束后，继续发酵2小时结束发酵。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
实施例2
本实施例用于说明本发明提供的发酵制备PHA的方法
按照对比例2的方法进行PHA的发酵，不同的是，将玉米浆替换为制备例2制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例3
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
发酵培养基：相对于1L发酵培养基，玉米浆（固含量50重量%）的含量为36mL、葡萄糖的含量为30g、磷酸氢二钾的含量为4g、磷酸氢二钠的含量为7.5g、硫酸镁的含量为0.3g、氯化钠的含量为55g。调节pH至8.7。
补料一：碳氮比为18:1，相对于1L的第一营养物质，玉米浆的含量为480ml，葡萄糖的含量为600g；补料一与发酵培养基的用量体积比为11：100；
补料二：碳氮比为45:1，相对于1L的第二营养物质，玉米浆的含量为272ml，葡萄糖的含量为850g；补料二与发酵培养基的用量体积比为8：100；
补料三：相对于1L的第三营养物质，葡萄糖的含量为750g；补料三与发酵培养基的用量体积比为27:100。
将制备例制得到的种子液以15体积%的接种量接种于发酵培养基中，在39℃以及1.2vvm通风量的条件下发酵培养，同时控制发酵过程中的pH在8.7左右，溶氧量控制在10-30%。此外，在发酵的过程中分阶段控制搅拌转速，发酵0-11h，所述搅拌的转速为600rpm；发酵11-19h，所述搅拌的转速为1000rpm；发酵19h至发酵结束，所述搅拌的转速为600rpm。
在发酵的过程中，实时监测发酵体系的糖含量和pH。
当发酵体系中的糖含量第一次下降至8g/L以下时，流加补料一，当补料一结束时，流加补料二，当补料二结束时，流加补料三。
补料的流加速度使得发酵液中的糖含量维持在15g/L左右，补料三流加结束后，继续发酵2小时结束发酵。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
实施例3
本实施例用于说明本发明提供的发酵制备PHA的方法
按照对比例3的方法进行PHA的发酵，不同的是，将玉米浆替换为制备例2制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例4
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
发酵培养基：相对于1L发酵培养基，玉米浆（固含量10重量%）的含量为5mL、葡萄糖的含量为10g、磷酸氢二钾的含量为2g、磷酸氢二钠的含量为4g、硫酸镁的含量为0.1g、氯化钠的含量为40g。调节pH至7。
补料一：碳氮比为10:1，相对于1L的第一营养物质，玉米浆的含量为690ml，葡萄糖的含量为480g，补料一与发酵培养基的用量体积比为8:100；
补料二：碳氮比为30：1，相对于1L的第二营养物质，玉米浆的含量为326ml，葡萄糖的含量为680g，补料二与发酵培养基的用量体积比为5:100；
补料三：相对于1L的第三营养物质，葡萄糖的含量为900g，补料三与发酵培养基的用量体积比为20:100。
将制备例制得到的种子液以10体积%的接种量接种于发酵培养基中，在30℃以及1.5vvm通风量的条件下发酵培养，同时控制发酵过程中的pH在7左右。此外，在发酵的过程中转速控制在800rpm左右。
在发酵的过程中，实时监测发酵体系的糖含量和pH。
当发酵体系中的糖含量第一次下降至10g/L以下时，流加补料一，当补料一结束时，流加补料二，当补料二结束时，流加补料三。
补料三的流加速度使得发酵液中的糖含量维持在5g/L左右，补料三流加结束后，继续发酵2小时结束发酵。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
实施例4
本实施例用于说明本发明提供的发酵制备PHA的方法
按照对比例4的方法进行PHA的发酵，不同的是，将玉米浆替换为制备例2制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例5
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
发酵培养基：相对于1L发酵培养基，玉米浆（固含量30重量%）的含量为45mL、葡萄糖的含量为35g、磷酸氢二钾的含量为5g、磷酸氢二钠的含量为11g、硫酸镁的含量为0.4g、氯化钠的含量为70g。调节pH至9。
补料：碳氮比为20:1，相对于1L的补料，玉米浆的含量为516ml，葡萄糖的含量为720g，补料与发酵培养基的用量体积比为42:100。
将制备例制得到的种子液以10体积%的接种量接种于发酵培养基中，在45℃以及0.5vvm通风量的条件下发酵培养，同时控制发酵过程中的pH在9左右，溶氧量控制在10-30%。此外，在发酵的过程中分阶段控制搅拌转速，发酵0-12h，所述搅拌的转速为400rpm；发酵12-20h，所述搅拌的转速为800rpm；发酵20h至发酵结束，所述搅拌的转速为400rpm。
在发酵的过程中，实时监测发酵体系的糖含量和pH。
当发酵体系中的糖含量第一次下降至12g/L以下时，仅流加补料一。
补料的流加速度使得发酵液中的糖含量维持在20g/L左右，补料流加结束后，继续发酵2小时结束发酵。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
实施例5
本实施例用于说明本发明提供的发酵制备PHA的方法
按照对比例5的方法进行PHA的发酵，不同的是，将玉米浆替换为制备例2制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例6
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
按照实施例4的方法进行PHA的制备，不同的是，以氮元素计，将所述酶解玉米浆替换为等量的尿素。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例7
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
按照实施例4的方法进行PHA的制备，不同的是，以氮元素计，将所述酶解玉米浆替换为等量酵母粉。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例8
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
按照实施例4的方法进行PHA的制备，不同的是，以氮元素计，将所述酶解玉米浆替换为对比例制备例1制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例9
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
按照实施例4的方法进行PHA的制备，不同的是，以氮元素计，将所述酶解玉米浆替换为对比例制备例2制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
对比例10
本对比例用于说明参比的发酵制备PHA的方法
按照实施例4的方法进行PHA的制备，不同的是，以氮元素计，将所述酶解玉米浆替换为对比例制备例3制备的酶解玉米浆。
发酵液中盐单胞菌生物量、PHA产量以及单位产品的原料成本比较如表1所示。
表1
Figure DEST_PATH_IMAGE001
通过表1的结果可以看出，将实施例4与对比例6-7相比，采用本发明技术方案不仅能够有效降低PHA的生产成本，还能够提高发酵液中菌体生物量以及PHA的产量。将实施例1-3与实施例4-5相比可以看出，将发酵过程控制在本发明的优选方式下，能够进一步提高发酵液中菌体生物量以及PHA的产量。将实施例1-6与对比例1-6相比可以看出，将酶解玉米浆用于PHA发酵，能够更显著的提高发酵液中菌体生物量以及PHA的产量。将实施例4与对比例8-9相比可以看出，采用本发明的酶解方法能够提高发酵液中菌体生物量以及PHA的产量。同时，酶解玉米浆经过固液分离后还能够降低发酵液的色泽。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (14)

1.一种发酵制备PHA的方法，其特征在于，该方法包括：在能够发酵产PHA的条件下，将PHA发酵菌种接种至发酵培养基中进行发酵；
其中，所述发酵培养基的氮源由酶解玉米浆提供；
所述酶解玉米浆的制备方法包括：将玉米浆进行酶解，获得酶解产物，然后将所述酶解产物进行固液分离，得到所述酶解玉米浆；
其中，所述酶解所用酶为纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和酸性蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述玉米浆的固含量为10-50重量%。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，相对于1000重量份的玉米浆，纤维素酶的用量为0.01-0.15重量份，半纤维素酶的用量为0.01-0.15重量份，淀粉酶的用量为0.01-0.06重量份，酸性蛋白酶的用量为0.08-0.2重量份。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，酶解的条件包括：温度为40-55℃，时间为20-50min，pH值为4-6。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，所述发酵培养基含有酶解玉米浆、葡萄糖、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、硫酸镁和氯化钠；相对于1L发酵培养基，酶解玉米浆的含量为32-36ml、葡萄糖的含量为15-30g、磷酸氢二钾的含量为2-5g、磷酸氢二钠的含量为5-8g、硫酸镁的含量为0.2-0.3g、氯化钠的含量为45-55g。
6.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，所述发酵的条件包括：温度为30-45℃，pH值为7-9，溶氧量为1-40%；和/或
所述发酵在通风的条件下进行，通风量为0.5-1.5vvm。
7.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，所述发酵在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速为400-1000rpm。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，从发酵0h到发酵8-12h，所述搅拌的转速为400-600rpm；
从发酵8-12h到发酵16-20h，所述搅拌的转速为600-1000rpm；
从发酵16-20h到发酵结束，所述搅拌的转速为400-600rpm。
9.根据权利要求1-4和8中任意一项所述的方法，其中，该方法还包括在发酵的过程中补加营养物质，所述营养物质的补加量使得发酵培养基中的糖含量控制在5-20g/L。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，在发酵的过程中，当发酵培养基中的糖含量下降至12g/L以下时，开始补加所述营养物质。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述营养物质的补加方法包括：
（1）当发酵培养基中的糖含量第一次下降至12g/L以下时，补充第一营养物质，所述第一营养物质的碳氮比为10-20：1，第一营养物质的补充量为发酵培养基的8-12体积%；
（2）当第一营养物质补充结束后，补充第二营养物质，所述第二营养物质的碳氮比为30-50：1，第二营养物质的补充量为发酵培养基的5-10体积%；
（3）当第二营养物质补充结束后，补充第三营养物质，所述第三营养物质为葡萄糖，第三营养物质的补充量为发酵培养基的20-30体积%。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述第一营养物质含有酶解玉米浆和葡萄糖；和/或
所述第二营养物质含有酶解玉米浆和葡萄糖；和/或
所述第三营养物质为葡萄糖。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，所述PHA发酵菌种为盐单胞菌(Halomonas sp.)。
14.根据权利要求1所述的方法，其中，所述发酵为连续式发酵或间歇式发酵。
CN202010492508.3A 2020-06-03 2020-06-03 以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法 Active CN111593078B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010492508.3A CN111593078B (zh) 2020-06-03 2020-06-03 以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010492508.3A CN111593078B (zh) 2020-06-03 2020-06-03 以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111593078A true CN111593078A (zh) 2020-08-28
CN111593078B CN111593078B (zh) 2020-10-23

Family

ID=72186129

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010492508.3A Active CN111593078B (zh) 2020-06-03 2020-06-03 以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111593078B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114214213A (zh) * 2021-12-30 2022-03-22 北京百奥茵诺生物科技有限公司 灵芝多糖的发酵方法和灵芝发酵培养基
CN115044624A (zh) * 2022-06-22 2022-09-13 珠海麦得发生物科技股份有限公司 一种利用盐单胞菌重复批次发酵生产pha的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05260984A (ja) * 1992-03-24 1993-10-12 Mitsubishi Kasei Corp ３−ヒドロキシ酪酸および／またはその３量体の製造方法
AU4835197A (en) * 1996-12-12 1998-06-18 Korea Advanced Institute Of Science And Technology A recombinant Escherichia coli producing poly-3-hydroxybutyrate (PHB) and a process for preparing PHB employing the same
KR0164282B1 (ko) * 1995-06-26 1999-01-15 윤덕용 필라멘테이션 억제에 의한 재조합 대장균으로 부터 고농도 phb를 제조하는 방법
CN104195185A (zh) * 2014-07-09 2014-12-10 北京工业大学 嗜盐古菌在开放条件下连续处理糖蜜酒精废水生产pha的方法
CN107244990A (zh) * 2016-12-07 2017-10-13 滨州市科学技术情报研究所 一种利用海陆生物资源制备盐碱地改良专用生物有机肥料的方法
CN109504714A (zh) * 2017-09-15 2019-03-22 北京蓝晶微生物科技有限公司 一种无灭菌发酵生产聚羟基脂肪酸酯的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05260984A (ja) * 1992-03-24 1993-10-12 Mitsubishi Kasei Corp ３−ヒドロキシ酪酸および／またはその３量体の製造方法
KR0164282B1 (ko) * 1995-06-26 1999-01-15 윤덕용 필라멘테이션 억제에 의한 재조합 대장균으로 부터 고농도 phb를 제조하는 방법
AU4835197A (en) * 1996-12-12 1998-06-18 Korea Advanced Institute Of Science And Technology A recombinant Escherichia coli producing poly-3-hydroxybutyrate (PHB) and a process for preparing PHB employing the same
CN104195185A (zh) * 2014-07-09 2014-12-10 北京工业大学 嗜盐古菌在开放条件下连续处理糖蜜酒精废水生产pha的方法
CN107244990A (zh) * 2016-12-07 2017-10-13 滨州市科学技术情报研究所 一种利用海陆生物资源制备盐碱地改良专用生物有机肥料的方法
CN109504714A (zh) * 2017-09-15 2019-03-22 北京蓝晶微生物科技有限公司 一种无灭菌发酵生产聚羟基脂肪酸酯的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MONA K . GOUDA等: "Production of PHB by a Bacillus megaterium strain using sugarcane molasses and corn steep liquor as sole carbon and nitrogen sources", 《MICROBIOL. RES.》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114214213A (zh) * 2021-12-30 2022-03-22 北京百奥茵诺生物科技有限公司 灵芝多糖的发酵方法和灵芝发酵培养基
CN114214213B (zh) * 2021-12-30 2022-08-26 北京百奥茵诺生物科技有限公司 灵芝多糖的发酵方法和灵芝发酵培养基
CN115044624A (zh) * 2022-06-22 2022-09-13 珠海麦得发生物科技股份有限公司 一种利用盐单胞菌重复批次发酵生产pha的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111593078B (zh) 2020-10-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109504719B (zh) 一种提高谷氨酸产酸率及提取率的方法
CN111500650B (zh) 一种高效生产pha的方法
CN111593078B (zh) 以玉米浆为原料进行发酵制备pha的方法
CN109504720B (zh) 谷氨酸的绿色生产工艺
CN101705253B (zh) 一种木糖母液的处理方法
CN109628513B (zh) 一种氨基酸发酵培养基及其制备方法
CN110923273A (zh) 一种提高微生物发酵产苏氨酸的方法
CN113621674B (zh) 利用白酒丟糟生产l-乳酸的方法
Moo-Young et al. Fermentative conversion of cellulosic substrates to microbial protein by Neurospora sitophila
CN111394398B (zh) 以高盐糖蜜为原料进行发酵制备pha的方法
CN109097416B (zh) 木质纤维素一锅法生物转化方法
CN108925747B (zh) 一种利用水产蛋白和酵母菌制备的功能性蛋白及其方法
CN112481330B (zh) 一种藻源β-1,3-葡聚糖发酵生产方法
CN112725189B (zh) 一种猴头菌全营养流加半连续发酵的方法
CN110511885B (zh) 一种适用凝结芽孢杆菌发酵的复合氮源及使用方法
RU2410419C1 (ru) Способ переработки крахмалсодержащего растительного сырья для приготовления компонентов ферментационных сред, используемых в микробиологической промышленности при культивировании микроорганизмов
CN111349662B (zh) 以利用pha发酵工艺废水进行发酵制备pha的方法
CN114230380A (zh) 一种7-氨基头孢烷酸生产废弃物的利用方法
CN108410929B (zh) 阿尼芬净前体的制备方法
CN105238838A (zh) 有机酸发酵黑曲霉菌丝体抽取物的生产方法
CN102212484A (zh) 控制丝状真菌发酵过程中生长形态的方法
CN112143770A (zh) 一种海洋红酵母及其在以秸秆为原料生产β-胡萝卜素中的应用
CN109182407A (zh) 一种色氨酸制备方法及其使用的发酵培养基和色氨酸发酵专用营养元
CN115232806B (zh) 一种中性蛋白酶微丸及其制备方法
CN102390906B (zh) 一种赖氨酸发酵废水的处理方法和发酵制柠檬酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant