CN111574486B - 香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 - Google Patents
香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111574486B CN111574486B CN202010442043.0A CN202010442043A CN111574486B CN 111574486 B CN111574486 B CN 111574486B CN 202010442043 A CN202010442043 A CN 202010442043A CN 111574486 B CN111574486 B CN 111574486B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- geranyl
- trihydroxychromone
- ethyl acetate
- preparation
- petroleum ether
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- -1 Geranyl trihydroxy chromone Chemical compound 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 9
- 239000000766 liver X receptor agonist Substances 0.000 title abstract description 6
- 229940122761 Liver X receptor agonist Drugs 0.000 title abstract description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 22
- 241001523629 Pestalotiopsis Species 0.000 claims abstract 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 241000722930 Pestalotiopsis neglecta Species 0.000 claims description 12
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 claims description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 108090000865 liver X receptors Proteins 0.000 abstract description 53
- 102000004311 liver X receptors Human genes 0.000 abstract description 52
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 13
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102100020870 La-related protein 6 Human genes 0.000 description 3
- 108050008265 La-related protein 6 Proteins 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 125000002350 geranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 108020001756 ligand binding domains Proteins 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- JXLYPSRUFZEBQO-UHFFFAOYSA-N O1C(O)=C(O)C(=O)C2=C1C=CC=C2O Chemical compound O1C(O)=C(O)C(=O)C2=C1C=CC=C2O JXLYPSRUFZEBQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- OTAFHZMPRISVEM-UHFFFAOYSA-N chromone Chemical group C1=CC=C2C(=O)C=COC2=C1 OTAFHZMPRISVEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001026 1H--1H correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000182067 Fraxinus ornus Species 0.000 description 1
- 235000002917 Fraxinus ornus Nutrition 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 238000010818 SYBR green PCR Master Mix Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000031154 cholesterol homeostasis Effects 0.000 description 1
- 150000004777 chromones Chemical class 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 102000006255 nuclear receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 108091008023 transcriptional regulators Proteins 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
- C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了香叶基三羟基色酮及其在制备肝X受体激动剂中的应用。本发明从Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403的发酵培养物中分离得到了与蛋白LXRα受体结合良好，且可以显著上调LXRα的mRNA水平的新颖结构小分子LXRα激动剂香叶基三羟基色酮pestalotiochromoneA，能够将其开发用于肝X受体激动剂的药物。
Description
技术领域
本发明属于天然产物应用技术领域，具体涉及香叶基三羟基色酮及其在制备肝X受体激动剂中的应用。
背景技术
肝X受体(1iver X receptor，LXR)属于核受体超家族成员，包含LXRα和LXRβ两种亚型，其中，LXRα主要分布在肝脏，而LXRβ则遍布全身组。LXR在动脉粥样硬化的发生和发展中起关键性作用，以LXRs为靶点寻找抗动脉粥样硬化的药物，对心血管疾病的治疗具有重要意义。LXRs作为胆固醇感受器，可以调节包括胆固醇流出、转运、排泄等大量与胆固醇代谢有关的基因的表达，LXR又被发现是脂代谢和糖代谢的关键转录调节因子。另外，LXR在巨噬细胞和系统水平均有抗炎作用，LXR激动剂在脑和中枢神经系统中对免疫和胆固醇稳态也有作用。因此，LXR有望作为治疗动脉粥样硬化、高胆固醇血症、Ⅱ型糖尿病等的药物靶点。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种具有结合LXRα蛋白并提高LXRα基因表达水平的、作为LXRα激动剂的香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A。
本发明的香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A，或其药用盐，其结构式如式(I)所示：
本发明发现，新颖结构的化合物香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A与蛋白LXRα受体相互作用时结合较好，可以显著上调LXRα的mRNA水平，作用强于同剂量的LXRα激动剂GW3965，证实了pestalotiochromone A是自然来源的新颖结构小分子LXRα激动剂。
因此，本发明的第二个目的是提供所述的香叶基三羟基色酮pestalotiochromoneA，或其药用盐在制备肝X受体激动剂中的应用。
本发明的第三个目的是提供一种肝X受体激动剂，其包括香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A，或其药用盐作为活性成分。
本发明的第四个目的是提供一种香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A的制备方法，是从Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403的发酵培养物中分离制备得到的。
优选，所述的制备方法，包括以下步骤：
将Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403的发酵培养物用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩去除乙酸乙酯后得到浸膏，浸膏经硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯从体积比20：1、10：1、5：1、2：1、1：1和0：1梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱馏分，再次经过硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯从10：1～1：1梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱馏分，经纯化后得到香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A。
所述的纯化是半制备HPLC纯化，采用SunFireTM C18色谱柱，柱温40℃，CH3CN/H2O梯度洗脱：0-3min，25％CH3CN；3-20min，25％-55％CH3CN；20-23min，55％-100％CH3CN；23-28min，100％CH3CN；28-30min，100％-5％CH3CN；30-33min，5％CH3CN；2mL/min，保留时间为22.5min时分离得到香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A。
所述的Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403的发酵培养物是将Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403接种到发酵培养基中，28℃，180转/min，培养7天获得的发酵培养物；所述的发酵培养基：每升含有甘露醇20g、大豆蛋白胨10g、磷酸氢二钾0.35g、碳酸钙0.5g和豆油0.5ml，余量为水，pH 7.0。
本发明的第五个目的是提供Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403在制备香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A中的应用。
本发明从Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403的发酵培养物中分离得到了与蛋白LXRα受体结合良好，且可以显著上调LXRα的mRNA水平的新颖结构小分子LXRα激动剂pestalotiochromone A，能够将其用于作为肝X受体激动剂。
本发明涉及的真菌Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403，于2020年3月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为GDMCC No：60987(该保藏信息公开于专利申请CN202010258928.5中)。
附图说明
图1是香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A(PCA)的化学结构式及重要的二维核磁1H–1H COSY和HMBC相关信息。
图2是香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A(PCA)的实验ECD和计算ECD曲线对比图。
图3是香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A(PCA)与肝X受体α配体结合域(T090复合物)的分子对接分析；(a)PCA与LXRα配体结合口袋的三维结构；(b)PCA与LXRα配体结合模式的二维推测结构；计算机分析结果显示PCA与肝X受体α结合较好。
图4是香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A(PCA)与肝X受体α(LXRα)的作用；(a)PCA与LXRα受体的蛋白-小分子相互作用实验(SPR)，实验结果显示PCA与LXRα受体结合较好；(b)PCA共培养后的ACHN细胞中LXRα的mRNA水平，结果以平均值±SD表示(n＝9,****p<0.0001)，实验结果显示PCA可以显著上调LXRα的mRNA水平，证实PCA是LXRα激动剂。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：真菌Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403发酵和香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A的分离
将种子培养基各组分(麦芽糖6.25g，麦芽提取物6.25g，酵母提取物1g，蛋白胨6.25g，磷酸二氢钾1.25g)溶解于1L蒸馏水中，1M NaOH溶液调节pH至7.0。配制4L体积后将其分装于500ml三角瓶(200ml/瓶，20瓶)，每瓶加入10-15颗玻璃珠以避免菌丝振摇成团，棉塞封口包扎后放入高压灭菌锅121℃灭菌30min。待灭菌种子培养基冷却后，从保存斜面挑取真菌Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403菌丝体接种入瓶中种子培养基，25℃下摇床振摇(180转/min)。
种子发酵液培养3天后，按10％v/v的接种量接种种子发酵液于5L发酵罐中进行大量发酵。所用的发酵培养基：每升含有甘露醇20g、大豆蛋白胨10g、磷酸氢二钾0.35g、碳酸钙0.5g和豆油0.5ml，余量为水，pH 7.0；其配制方法是将各成分混合，1M NaOH溶液调节pH至7.0，灭菌制得。除分装体积不同，且不添加玻璃珠外，其它配置步骤与种子发酵液一致，发酵体积共计40L(1L/罐，40罐)，培养条件为28℃，180转/min，培养7天，获得发酵液。
发酵液用乙酸乙酯萃取3次，减压回收溶剂得到提取物浸膏。提取物浸膏(10g)以少量甲醇溶解后硅胶拌样，进行中压硅胶柱层析(200-300目)，洗脱液为石油醚/乙酸乙酯从体积比20：1、10：1、5：1、2：1、1：1和0：1梯度洗脱，顺序得到6个洗脱部位Fr.a–Fr.f。Fr.c(石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱馏分)再次经过硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯从10：1～1：1梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱馏分，经半制备HPLC纯化，采用SunFireTMC18色谱柱，柱温40℃，CH3CN/H2O v/v梯度洗脱：0-3min，25％CH3CN；3-20min，25％-55％CH3CN；20-23min，55％-100％CH3CN；23-28min，100％CH3CN；28-30min，100％-5％CH3CN；30-33min，5％CH3CN；2mL/min，保留时间为22.5min时分离得到纯化合物香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A(PCA)。
实施例2:Pestalotiochromone A(PCA)的结构鉴定
对化合物PCA进行结构分析测试，得到以下理化性质数据：
PCA：黄色油状；
(c 0.56,MeOH)；UV(MeOH)λmax(logε)202(4.32),301(3.72)nm；IR(film)νmax 3377,2927,1662,1616,1471,1319,1205,1043,1016,914cm-1；ECD(c 0.2mM,MeOH)λmax(Δε)203(+1.80),267(-0.10),302(+0.17)；1H和13C NMR数据见表1；HRESIMS m/z 359.1865[M-H]-(计算值为C21H27O5,359.1864)。
根据HRESIMS数据推测其分子式为C21H28O5。13C NMR(表1)显示亚甲基[δC 48.2(C-3)]和羰基[δC 194.2(C-4)]信号，表明PCA为4-色酮衍生物。单峰芳香质子信号[δH 6.78(1H,s,H-5)]和低场区碳信号[δC 141.5(C-6),143.6(C-7),135.0(C-8)]则表明PCA中C-6，C-7和C-8位被羟基取代。侧链的NMR数据分析为香叶基侧链结构，该推论可由具体的1H–1HCOSY和HMBC相关信号加以证实(图1)。通过比较计算ECD图谱(图2)，确定PCA的绝对构型为2S。因此，PCA化学结构鉴定为如图1所示的香叶基三羟基色酮化合物，命名为pestalotiochromone A(PCA)，其结构式如式(I)所示：
香叶基三羟基色酮pestalotiochromone A的化学结构式及重要的二维核磁1H–1HCOSY和HMBC相关信息见图1。
表1 PCA的1H和13CNMR数据(1H 500MHz,13C 125MHz,CD3OD)
实施例3：Pestalotiochromone A(PCA)作用肝X受体α活性测定
为了寻找潜在的LXR激动剂，我们通过高性能计算机的分子对接分析对进行筛选。使用
2017-1软件进行对接，从可用的晶体结构(PDB ID：1UHL)中检索出与T090形成复合物的LXRα配体结合域，按照Maestro软件包中的Protein Prepare Wizard工作流程进行构建。使用Grid生成程序选择键合位点，然后再使用默认参数下的Glide(XP模式)将制备的配体灵活对接到受体上。研究分析LXRα配体结合域与化合物PCA之间的分子相互作用。结果发现，PCA可与LXRα受体结合域进行结合(图3)，结合自由能值(S值)为-11.113。在二维结合模型中，色酮结构上三羟基与LXRα的活性位点残基THR302或HID421形成氢键相互作用。由此推测色酮结构上三羟基具有促进PCA与LXRα受体蛋白结合的作用。
体外表面等离子体共振(SPR)分析用于测量LXRα受体和配体的亲和相互作用。将LXRα蛋白固定于CM5芯片上。以50μL/min的流速注入不同稀释浓度的受试化合物，持续180s后用50mM NaOH作为清洗液使芯片再生。用GT Biacore T100在25℃采集数据，使用BiacoreEvaluation Software 2.0计算蛋白与小分子之间的亲和力KD值。用LXR强激动剂GW3965作为阳性对照。PCA与LXRα受体结合作用较佳，呈剂量依赖型，解离平衡常数(KD)为6.2μM，优于LXR强效激动剂GW3965的KD值(20.6μM)(图4a)。
为了进一步研究PCA对LXRα的作用，通过定量聚合酶链反应(qPCR)方法检测PCA对细胞中的LXRα的mRNA水平的影响。体外培养ACHN细胞，分别：(1)加入终浓度为10μM的PCA化合物(处理组)，(2)加入终浓度为10μM的GW3965(阳性对照)，(3)不加任何试剂(Control)；共培养48小时。使用RNAprep纯组织试剂盒(中国天根生物科技有限公司)，分别提取处理组、阳性对照、Control组的ACHN细胞裂解物中的总RNA。使用PrimeScript RT试剂盒(日本Takara公司)和SYBR Green PCR预混液(美国Promega公司)进行qPCR检测，按试剂盒说明书操作。β-肌动蛋白作为对照基因，以评估LXRα的相对mRNA水平。。结果显示，PCA可以显著上调LXRα的mRNA水平(图4b)，作用强于同剂量的GW3965，证实了PCA是LXRα激动剂。
Claims (4)
1.一种香叶基三羟基色酮的制备方法，其特征在于，将Pestalotiopsis neglectaSCSIO41403的发酵培养物用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩去除乙酸乙酯后得到浸膏，浸膏经硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯从体积比20：1、10：1、5：1、2：1、1：1和0：1梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱流 分，再次经过硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯从10：1～1：1梯度洗脱，收集石油醚/乙酸乙酯体积比5：1洗脱流 分，经纯化后得到香叶基三羟基色酮；
所述的香叶基三羟基色酮的结构式如式(I)所示
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的纯化是半制备HPLC纯化，采用SunFireTMC18色谱柱，柱温40℃，CH3CN/H2O梯度洗脱：0-3min，25％CH3CN；3-20min，25％-55％CH3CN；20-23min，55％-100％CH3CN；23-28min，100％CH3CN；28-30min，100％-5％CH3CN；30-33min，5％CH3CN；2mL/min，保留时间为22.5min时分离得到香叶基三羟基色酮。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的Pestalotiopsis neglectaSCSIO41403的发酵培养物是将Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403接种到发酵培养基中，28℃，180转/min，培养7天获得的发酵培养物；所述的发酵培养基：每升含有甘露醇20g、大豆蛋白胨10g、磷酸氢二钾0.35g、碳酸钙0.5g和豆油0.5ml，余量为水，pH 7.0。
4.Pestalotiopsis neglecta SCSIO41403在制备香叶基三羟基色酮中的应用；
所述的香叶基三羟基色酮的结构式如式(I)所示
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010442043.0A CN111574486B (zh) | 2020-05-22 | 2020-05-22 | 香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010442043.0A CN111574486B (zh) | 2020-05-22 | 2020-05-22 | 香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111574486A CN111574486A (zh) | 2020-08-25 |
| CN111574486B true CN111574486B (zh) | 2022-04-26 |
Family
ID=72110331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010442043.0A Active CN111574486B (zh) | 2020-05-22 | 2020-05-22 | 香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111574486B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1073357A (zh) * | 1991-11-22 | 1993-06-23 | 利普格尼斯公司 | 生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其使用方法 |
| WO1999034794A1 (en) * | 1998-01-12 | 1999-07-15 | Lipogenics, Inc. | Methods for treating diabetic dyslipidemia using tocotrienols |
| CN1249306A (zh) * | 1998-09-23 | 2000-04-05 | Basf公司 | 用于制备苯并二氢吡喃醇衍生物的方法 |
-
2020
- 2020-05-22 CN CN202010442043.0A patent/CN111574486B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1073357A (zh) * | 1991-11-22 | 1993-06-23 | 利普格尼斯公司 | 生育三烯酚和类生育三烯酚化合物及其使用方法 |
| WO1999034794A1 (en) * | 1998-01-12 | 1999-07-15 | Lipogenics, Inc. | Methods for treating diabetic dyslipidemia using tocotrienols |
| CN1249306A (zh) * | 1998-09-23 | 2000-04-05 | Basf公司 | 用于制备苯并二氢吡喃醇衍生物的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 肝X 受体:代谢疾病药物研发的新方向;张静波等;《中华临床医师杂志(电子版)》;20160630;第10卷(第12期);第1780-1783页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111574486A (zh) | 2020-08-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113773217B (zh) | 一种长链脂肪酸甘油醇类化合物Rubracin C、制备方法及其应用 | |
| CN113134006B (zh) | 熊果酸衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN112142819B (zh) | 白桦脂酸衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109942658A (zh) | 一类杂萜化合物及其制备方法与应用和抗肿瘤的药物 | |
| CN101220334A (zh) | 卷枝毛霉菌株、其培养方法及其在c21、c19甾体和氮杂甾体生物转化中的应用 | |
| CN109988217B (zh) | 白桦醇衍生物及其制备方法与应用 | |
| CN111233694B (zh) | 具有降血脂作用的线性聚酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111574486A (zh) | 香叶基三羟基色酮及其在制备肝x受体激动剂中的应用 | |
| CN109985044B (zh) | 白桦醇及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109020991B (zh) | 一类美达霉素类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN111393492B (zh) | 一种炔烯对苯二酚糖苷及其制备方法和在制备肝x受体激动剂中的应用 | |
| CN113620970B (zh) | 混源萜类化合物及其制备方法和在制备降脂降胆固醇药物中应用 | |
| CN110452940A (zh) | 一种链霉菌的次级代谢产物的分离提取方法 | |
| CN103467560A (zh) | 新积雪草酸衍生物的制备及在抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109439705A (zh) | 一种柳珊瑚酸的微生物制备方法 | |
| CN103214543A (zh) | 新山楂酸衍生物、其制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN109985043B (zh) | 白桦醇及其衍生物在具有抗肝纤维化作用药物中的应用 | |
| CN101921300B (zh) | 一种异黄酮苷类化合物及其制备方法 | |
| CN102311442A (zh) | 具有抗肿瘤活性的螺内酰胺生物碱化合物及其制备方法与应用 | |
| CN119019352B (zh) | 海洋真菌来源倍半萜talaroterpene D及其制备方法和在制备RORα激动剂中的应用 | |
| CN111808050A (zh) | 混源萜penicimeroterpenoids A–C及其制备方法和应用 | |
| CN104497001B (zh) | 莪术烯醇微生物转化衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN116082358B (zh) | 一类4-羟基-2-吡啶酮生物碱类衍生物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN116730884B (zh) | 一种含硫角环素二聚体结构化合物、其制备方法和用途 | |
| CN108410750A (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的海洋放线菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |