CN111544658B - 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法 - Google Patents

一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111544658B
CN111544658B CN202010590492.XA CN202010590492A CN111544658B CN 111544658 B CN111544658 B CN 111544658B CN 202010590492 A CN202010590492 A CN 202010590492A CN 111544658 B CN111544658 B CN 111544658B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cardiovascular implant
cardiovascular
implant body
regeneration
vascular
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010590492.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN111544658A (zh
Inventor
曾文
朱楚洪
李彦朝
薛方超
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Third Military Medical University TMMU
Original Assignee
Third Military Medical University TMMU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Third Military Medical University TMMU filed Critical Third Military Medical University TMMU
Priority to CN202010590492.XA priority Critical patent/CN111544658B/zh
Publication of CN111544658A publication Critical patent/CN111544658A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111544658B publication Critical patent/CN111544658B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/507—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials for artificial blood vessels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/28—Materials for coating prostheses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/28—Materials for coating prostheses
    • A61L27/34—Macromolecular materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/23—Carbohydrates
    • A61L2300/232—Monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, lipopolysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/41—Anti-inflammatory agents, e.g. NSAIDs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/42—Anti-thrombotic agents, anticoagulants, anti-platelet agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/60—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a special physical form
    • A61L2300/62—Encapsulated active agents, e.g. emulsified droplets
    • A61L2300/624—Nanocapsules

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种心血管植入物及其制备方法，具体涉及一种原位调控免疫反应促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法。心血管植入物，包括心血管植入物本体，心血管植入物本体上修饰有CD133适配子和缓释纳米颗粒。将CD133适配子和含有神经轴突导向分子‑1的缓释纳米颗粒修饰到心血管植入物本体上，原位调控免疫反应并促进内膜再生，有效克服血栓形成，促进血管的长期通畅。尤其对于临床有炎症性基础病变的患者来说，本发明提供了一种制备简便快速、适用性广，能够原位调节过度炎症反应，促进内膜再生维持长期功能的心血管植入物，具有良好的应用前景。

Description

一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备 方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种心血管植入物及其制备方法，具体涉及一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法。
背景技术
心血管疾病是威胁人类健康的第一大疾病，全球每年有730万人死于缺血性心脏病，列各病之首，因此对心血管植入物的需求日益增大。其中，生物人工血管是冠状动脉旁路移植术、血液透析和外周血管闭塞治疗的血管植入物的发展方向。并且肝、肾、肺、胰岛等复杂组织器官的构建也均需血管化，导致对生物人工血管的需求量的进一步增加。心血管植入物进入宿主后免疫反应是引起血栓形成和再生困难的关键。心血管植入物植入体内后，巨噬细胞所引起的免疫反应是促进血栓形成的因素。接受血管成形术和支架置入术的患者中，有单核细胞-血小板聚集体(MPA)形成。高危患者的循环MPA升高与动脉粥样硬化血栓形成有关。血小板-中性粒细胞复合体和血小板-单核细胞复合体与活化的内皮和血小板共同作用进一步加剧了自我强化的血栓炎性循环。巨噬细胞与促炎信号(如干扰素-γ)导致“经典激活”或M1表型的出现，M1巨噬细胞具有高抗原呈递能力，并能促进淋巴细胞的Th1分化，这些细胞产生有毒的活性氧中间体并加剧促炎反应来损害微环境中的邻近细胞，长时间的M1巨噬细胞存在会导致严重的肉芽肿和纤维包囊等，导致血栓形成不可避免。目前，小口径生物人工血管(口径1-4mm)需求大，临床冠脉搭桥、外周血管病变等都需要小口径生物人工血管替代，但是小口径生物人工血管因血栓形成和再生困难等难题，至今没有临床可用产品。因此，构建能够实现长期通畅的小口径生物人工血管仍是领域内难题和全球性挑战。
发明内容
本发明的目的在于提供一种原位调控免疫反应促进内膜再生的心血管植入物，该心血管植入物可以有效防止血栓形成和再生困难等问题的出现，提高人工血管移植的成功率。
为解决上述技术问题，本发明技术方案如下：一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，包括心血管植入物本体，心血管植入物本体上修饰有CD133适配子和缓释纳米颗粒；所述CD133适配子的序列为：5’-CAGAACGUAUACUAUUCUG-3’，所述缓释纳米颗粒含有神经轴突导向分子-1。
采用上述技术方案，技术原理如下：心血管植入物本体由于具有一定的免疫原性，所以在植入体内后会引起机体炎症反应，尤其在血管和心血管植入物的吻合口处。此外，血管发生急性炎症还会通过促进白细胞和血浆蛋白渗透而传播慢性炎症，而急慢性炎症反应是引起血管植入物血栓和内膜再生困难或异常增生的重要诱因。在本方案中，将CD133适配子和含有神经轴突导向分子-1的缓释纳米颗粒修饰到心血管植入物本体上，原位调控免疫反应并促进内膜再生，有效克服血栓形成，促进血管的长期通畅。CD133适配子可捕获循环中内皮前体细胞，在此基础上，神经轴突导向分子-1调控炎症逐渐消退，从而促进了心血管植入物(一般为小口径工程血管)的早期内皮化，增加了心血管植入物移植的成功率。植入前期，低强度炎症以及CD133适配子促进内皮前体细胞归巢到血管植入物，而神经轴突导向分子-1调控炎症及时消退又为内皮前体细胞的增殖分化提供了良好的促进微环境。
有益效果：
(1)炎症对于组织再生是一把“双刃剑”，低强度的炎症可以促进干细胞的动员和增殖，持续存在又会对干细胞功能产生损害。本发明利用了不同程度的炎症对于心血管植入物再生的影响和作用，构建了修饰有CD133适配子和缓释纳米颗粒的心血管植入物，可促进循环中的内皮前体细胞诱导归巢到心血管植入物部位，并促进内皮前体细胞分化为内皮细胞，促进心血管植入物的早期内皮化。
(2)如何实现原位有效调控免疫反应，促进炎症消退，仍是领域内的重要难题。本发明利用神经轴突导向因子-1对免疫反应的调控能力，提高了心血管植入物的抗血栓功能和促进了心血管植入物的原位再生。
(3)本发明的心血管植入物可原位调节免疫反应，及时促进炎症消退对心血管植入物抗血栓形成和内膜正常再生重建有重要意义，可使得心血管植入物保持长期通畅。CD133适配子联合装载促炎症消退分子实现对心血管植入物支架的多种修饰，其中包括用神经轴突导向分子调控免疫细胞的转变，降低炎症反应的危害。另外，单纯CD133修饰的血管(图32)炎症反应严重，出现明显内膜增生和剥离。单纯神经轴突导向分子-1修饰的血管，由于缺乏捕获内皮祖细胞能力，内皮化受阻，并且也出现了中膜平滑肌细胞异常增殖和迁移。而同时修饰CD133和神经轴突导向分子-1纳米颗粒的小口径生物人工血管，既能够有效捕获血液中内皮祖细胞，促进早期内皮化，又能同时促进炎症消退，并且不会出现植入早期的中膜平滑肌细胞异常增殖和迁移的现象，达到原位调控免疫反应促进血管植入物原位再生、保持长期良好通畅的优良效果。CD133在本方案中除了可以募集内皮祖细胞，促进植入物内皮化，CD133和神经轴突导向分子-1协同作用，可保持植入物良好通畅，无内膜增生，不会出现中膜平滑肌细胞异常增殖和迁移的现象。
进一步，所述缓释纳米颗粒由神经轴突导向分子-1与壳聚糖组装形成。
采用上述技术方案，壳聚糖是生物医药领域常用物质，安全性和生物相容性均较高。利用壳聚糖纳米颗粒机械强度大、承压能力强和生物相容性好的特点，通过层层自主装的方式将神经轴突导向分子-1包裹于壳聚糖中并交联于心血管植入物本体表面，可实现神经轴突导向分子-1的缓释，延长心血管植入物的有效期。心血管植入物在植入体内较快较好地完成内皮化后，可保持长达12个月的通畅。
进一步，所述心血管植入物本体表面通过N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯偶联有神经轴突导向分子-1。
采用上述技术方案，在缓释的基础上进一步表面偶联的目的是对早期粘附的巨噬细胞快速产生作用。
进一步，所述CD133适配子由如下方法修饰到心血管植入物本体上：通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐将聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒交联到心血管植入物本体上，然后将CD133适配子结合到聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒上。
采用上述技术方案，通过聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒，可将CD133适配子较为稳固的附着到心血管植入物本体。
进一步，所述缓释纳米颗粒由如下方法制备：将神经轴突导向分子-1溶液与壳聚糖溶液混合，在PH值为5.1-6.0和加入三聚磷酸钠的条件下，自组装获得缓释纳米颗粒。
采用上述技术方案，可自主装获得包裹有神经轴突导向分子-1的缓释纳米颗粒。
进一步，在缓释纳米颗粒中，神经轴突导向分子-1与壳聚糖的摩尔质量比为1:2。
采用上述技术方案，保证了神经轴突导向分子-1在壳聚糖上的稳定交联。
进一步，所述心血管植入物本体由如下方法制备：先脱去离体血管中的细胞，然后脱去离体血管中的核酸和脂肪，获得血管基质材料，再在血管基质材料表面覆盖胶原，获得心血管植入物本体。
采用上述技术方案，脱细胞基质作为支架材料并做适当处理以避免机体强烈的免疫排斥。
进一步，心血管植入物为管状，口径为1-4mm，长度为0.5-20cm。
采用上述技术方案，将本方案的心血管植入物制作成小口径心血管植入物(即小口径组织工程血管，也称为小口径TEBV，口径为1-4mm)，可解决小口径血管移植后失败率高的临床问题。一般小口径组织工程血管的长度在0.5-20cm，可满足血管移植等临床应用的需求。
进一步，心血管植入物的制备方法，包括如下步骤：
(1)构建心血管植入物本体；
(2)在所述心血管植入物本体上偶联CD133适配子；
(3)制备缓释纳米颗粒，并在所述心血管植入物本体上偶联所述缓释纳米颗粒，所述缓释纳米颗粒含有神经轴突导向分子-1；
(4)通过N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯将神经轴突导向分子-1偶联到所述心血管植入物本体上。
采用上述技术方案，可制备获得修饰有CD133适配子和缓释纳米颗粒的心血管植入物，并且其表面上覆盖有神经轴突导向分子-1。采用本方案制备的心血管植入物进行血管移植治疗，CD133适配子和缓释纳米颗粒可原位调控免疫反应并促进内膜再生，有效克服血栓形成，促进其长期通畅。通过本方法构建的心血管植入物能够高效捕获循环中的内皮前体细胞，同时对趋附而来的巨噬细胞实现原位调控，从而促进炎症转归、营造良好的局部微环境促进内膜再生。
进一步，在步骤(3)中，使用缓释纳米颗粒和胶原共孵育血管基质材料，获得血管材料A；然后用N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺和肝素共孵育血管材料A，获得血管材料B；再使用N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯孵育血管材料B，获得血管材料C；最后使用二硫苏糖醇孵育血管材料C，将缓释纳米颗粒偶联在所述心血管植入物本体上。
采用上述技术方案，可将缓释纳米颗粒稳定地交联在心血管植入物上，实现神经轴突导向分子-1的缓释，在较长时间内，可维持神经轴突导向分子-1的消炎作用。
附图说明
图1为本发明实施例1中的CD133适配子结构示意图。
图2为本发明实施例1的流式细胞术检测CD133适配子结合细胞比例。
图3为CD133适配子捕获效果图(对照组，箭头所指为CD133阳性细胞)。
图4为CD133适配子捕获效果图(心血管植入物组，箭头所指为CD133阳性细胞)。
图5为CD133适配子捕获效果实验结果柱状图(平行板流动腔模拟组织工程血管的内表面)。
图6为本发明实施例1的血管基质材料的内表面形貌(扫描电镜观察)。
图7为本发明实施例1的孵育胶原后的血管基质材料的内表面形貌(扫描电镜观察)。
图8为本发明实施例1的心血管植入物的内表面形貌(扫描电镜观察)。
图9为本发明实施例1的心血管植入物植入7天后的内表面形貌(扫描电镜观察)。
图10为本发明实施例2的促炎型MΦ的检测实验结果。
图11为本发明实施例2的抗炎型MΦ检测实验结果。
图12为本发明实施例2的抗炎细胞因子IL-1β检测实验结果。
图13为本发明实施例2的抗炎细胞因子TNF-α检测实验结果。
图14为本发明实施例2的抗炎细胞因子IL-6检测实验结果。
图15为本发明实施例2的抗炎细胞因子TGF-β检测实验结果。
图16为本发明实施例2的抗炎细胞因子IL-4检测实验结果。
图17为本发明实施例2的抗炎细胞因子IL-10检测实验结果。
图18为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物外观(箭头所指位置展示了Blocking-A2b组植入2月，取出前心血管植入物图像)。
图19为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物外观(箭头所指位置展示了Blocking-A2b组植入2月，取出后心血管植入物图像)。
图20为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物外观(箭头所指位置展示了Netrin-1组植入6月，取出前心血管植入物图像)。
图21为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物外观(箭头所指位置展示了Netrin-1组植入6月，取出后心血管植入物图像)。
图22为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物外观(箭头所指位置展示了Netrin-1组植入14月，取出前心血管植入物图像)。
图23为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物外观(箭头所指位置展示了Netrin-1组植入14月，取出后心血管植入物图像)。
图24为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物H&E染色切片结果图(Blocking-A2b组植入2月)。
图25为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物H&E染色切片结果图(Netrin-1组植入6月)。
图26为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物H&E染色切片结果图(Netrin-1组植入14月)。
图27为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物电镜扫描图(Blocking-A2b组植入2月)。
图28为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物电镜扫描图(Netrin-1组植入2个月)。
图29为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物电镜扫描图(Netrin-1组植入6个月)。
图30为本发明实施例2的验证实验B中的心血管植入物电镜扫描图(Netrin-1组植入14个月)。
图31为本发明实验例1的心血管植入物冷冻切片图(对照组)。
图32为本发明实验例1的心血管植入物冷冻切片图(单纯CD133修饰的血管)。
图33为本发明实验例1的心血管植入物冷冻切片图(单纯神经轴突导向分子-1修饰的血管)。
图34为本发明实验例1的心血管植入物冷冻切片图(三重修饰的血管)。
具体实施方式
实施例1：单纯CD133适配子修饰的心血管植入物
天然脱细胞的血管基质材料的制备：在无菌条件下，从250-300g SD大鼠中提取颈总动脉，生理盐水冲洗血液，分离取出颈总动脉的外层结缔组织，然后剪成长0.5-1cm的小段血管(一般长度为0.5-20cm的组织工程血管可满足血管移植等临床应用的需求，制成的心血管植入物的移植对象为大鼠，所以以长0.5-1cm的小段血管为宜)，用M199培养基稀释胰酶为0.05％浓度并在37℃的条件下消化处理血管30min去除细胞，之后用RNase、DNase及脂肪去除核酸和脂肪从而获得只有胶原和弹力纤维的血管基质材料。其中，血管基质材料的口径为1-4mm，以保证制备获得口径符合要求的小口径心血管植入物(TEBV)。使用4mg/ml的胶原溶液孵育血管基质材料24h，获得心血管植入物本体。
CD133适配子(SEQ ID NO:1)锚定修饰：用5mMEDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)对孵育了胶原的血管基质材料(即心血管植入物本体)进行交联，时间为24h，然后用PBS清洗3次。PEI/金纳米颗粒采用一步法进行合成，1％的PEI溶液(聚乙烯亚胺)(1.44ml)缓慢的加入14mM的HAuCl4水溶液中(25ml)，室温下搅拌24h，形成(低密度的)PEI/金纳米颗粒(在此步骤中可通过增加HAuCl4的浓度来调节最终获得的PEI/金纳米颗粒的浓度，例如采用28mM的HAuCl4水溶液，可获得高密度的PEI/金纳米颗粒)。然后，20000g/min、4℃下离心分离，蒸馏水洗三遍后，冷冻干燥。之后将血管基质材料加入事先制备好的PEI/金纳米颗粒(聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒)，在5mM EDC中进行交联，时间为24h，然后PBS清洗3次后置于4℃冰箱中保存，获得纳米金颗粒修饰的心血管植入物本体。进行移植前，将纳米金颗粒修饰的心血管植入物本体置于CD133适配子溶液中孵育0.5h，然后用PBS清洗3次，获得CD133适配子锚定修饰的心血管植入物本体，即本实施例的心血管植入物。
将本实施例制备的心血管植入物移植到大鼠颈总动脉处，经一段时间培养后将心血管植入物取出，观测形貌和各项指标。本实验也设置了对照组，对照组为心血管植入物本体(制备方法参见本实施例第一段，即通过胶原孵育血管基质材料获得的心血管植入物本体)。培养5d后，从大鼠体内取出心血管植入物，取该心血管植入物上的细胞，对细胞进行流式细胞术检测。细胞流式的结果显示经过5d的选择性培养，如图2所示，约有71％的细胞阳性表达CD133。CD133适配子能特异性地与CD133阳性细胞结合，结合的比例约为53％，而非特异性结合细胞的比例约为8％。这说明CD133适配子能高度特异性的识别CD133阳性细胞。
为了研究CD133适配子对CD133阳性细胞的捕获作用，在体外运用平行板流动腔模拟血管的内表面的血液流动情况，检测本实施例制备的心血管植入物对CD133阳性细胞的捕获作用，对照组为心血管植入物本体)，心血管植入物本体的制备方法参见本实施例第一段，即通过胶原孵育血管基质材料获得的心血管植入物本体。实验结束之后取心血管植入物内表面附着的细胞进行检测，CD133适配子能捕获流动中的CD133阳性细胞，CD133适配体组粘附的细胞数量比对照组增加了9.4倍(如图3-5所示)。图3和图4为光镜下本实施例制备的心血管植入物对CD133阳性细胞的捕获情况，对照组是没有完成CD133适配子锚定修饰的心血管植入物(相对于本实施例的心血管植入物的制备方法，对照组的心血管植入物仅缺植入前的CD133适配子锚定修饰步骤，即胶原修饰的血管基质材料)。图5为统计结果柱状图，说明CD133适配子能够对CD133阳性细胞形成较好的捕获作用。
从大鼠体内取出心血管植入物，并使用戊二醛或多聚甲醛固定，梯度脱水后使用扫描电镜观察取出的心血管植入物内表面的形貌(如图6-9所示)。移植7天后，发现实验组血管腔面被细胞的粘附和定植，CD133适配子组明显捕获了更多内皮细胞。
实施例2：纳米缓释颗粒修饰和表面改性的心血管植入物
本实施例对心血管植入物本体进行了纳米缓释颗粒修饰和表面改性处理，但是不对心血管植入物本体进行CD133适配子修饰，具体如下：
在心血管植入物本体上进行缓释纳米颗粒的修饰，将100ng/ml神经轴突导向分子-1(R&D,USA)与壳聚糖以摩尔质量1:2的比例混合，调整溶液PH值为5.1-6.0，搅拌中缓慢加入0.15％TPP(三聚磷酸钠)，在持续搅拌得到乳白色液体后20000g，4℃离心10min，双蒸水洗3次沉淀后冷冻干燥获得纳米缓释颗粒。在4℃，120rpm的条件下使用0.1％(w/v)缓释纳米颗粒与0.4％胶原溶液共孵育心血管植入物本体24h(获得血管材料A)，再用1％EDC，0.6％NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)和0.5％肝素溶液在4℃，120rpm的条件下孵育心血管植入物本体24h，之后PBS洗3次(获得血管材料B)。接下来用2mg/ml的N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)溶液，处理血管2h，然后PBS洗3遍(获得血管材料C)。之后将血管置于10mg/ml的DTT(二硫苏糖醇)溶液中孵育30min，然后PBS洗3次(缓释纳米颗粒已经偶联在所述心血管植入物本体)。使用2mg/ml SPDP与500ng/ml神经轴突导向分子-1溶液混合处理以上缓释纳米颗粒修饰的心血管植入物本体24h，PBS洗3次后在含肝素的生理盐水中4℃保存，获得本实施例的心血管植入物。
进行验证实验A(促炎型MΦ、抗炎型MΦ以及抗炎细胞因子检测实验)来研究心血管植入物的功能。将本实施例制备的心血管植入物植入大鼠体内(植入到颈总动脉处)(Netrin-1组)，同时设置对照组(Control组)和MRS处理组(Netrin-1+MRS组)。在对照组中，使用胶原修饰的血管基质材料(即心血管植入物本体)作为植入物植入到大鼠颈总动脉处；在MRS处理组中，心血管植入物的制备基本同Netrin-1组，不同点为，在“使用2mg/ml SPDP与500ng/ml神经轴突导向分子-1溶液混合处理以上缓释纳米颗粒修饰的心血管植入物本体24h”这一步中，同时使用100uM/ml MRS(MRS1754，一种A2b受体抑制剂，A2b受体为神经轴突导向分子-1的受体，可阻断A2b受体)和500ng/ml神经轴突导向分子-1一并处理缓释纳米颗粒修饰的心血管植入物本体24h，获得本组的心血管植入物。定期将供试植入物取出，检测心血管植入物内表面促炎型MΦ和抗炎型MΦ，并大鼠尾静脉中抽取血液对血浆中的炎症因子进行检验，实验结果如图10-图17所示，在每一个时间点的三个数据柱，从左往右依次代表Control组、Netrin-1组和Netrin-1+MRS组。本实施例的心血管植入物炎症发生期在移植入1d以后，在3-7d时免疫反应较为强烈。在此期间(3-7d)对照组血管内膜表面可见大量促炎型MΦ(CD86表型)的浸润，且血浆中也存在大量促炎细胞因子IL-1β，TNF-α和IL-6，证明机体在此期间存在急性炎症。然后在移植入14d后血管表面出现少量抗炎型MΦ(CD163表型)，促炎型MΦ量也有所减少，但至30d时仍持续存在证明局部转化为慢性炎症，血浆中炎症因子的表达也验证了该结论。采用本发明获得的小口径血管植入物(心血管植入物)，移植入3d后局部浸润的MΦ就开始被重编程为抗炎表型，移植入3-7d期间，血浆中也含有大量的抗炎细胞因子TGF-β，IL-4和IL-10，之后MΦ开始从局部流出，14-30d时血浆中无论促炎还是抗炎细胞因子都逐渐减少，证明工程血管局部和机体炎症都逐渐消退，从而为动员归巢进入的EPCs(内皮前体细胞)提供了良好微环境。以上结果表明，将神经突触导向分子-1修饰的小口径组织工程血管(心血管植入物)植入体内，发现移植后7d浸润到工程血管表面的巨噬细胞能有效转化为CD163型巨噬细胞，炎性因子表达降低，抑炎因子表达增高，明显促进了炎症的消退。
除了检测大鼠心血管植入物内表面促炎型MΦ和血液中的炎症因子，还对心血管植入物内表面进行了免疫荧光染色实验(结果图像转化为黑白图像后信息大量缺失，故未展示)，实验结果文字描述如下：在荧光显微镜下，CD86阳性细胞呈红色荧光，CD163阳性细胞呈绿色荧光，使用DAPI染活细胞核呈蓝色荧光。免疫荧光染色实验的实验结果和细胞因子检测实验的结果一致。采用本发明获得的小口径血管植入物(心血管植入物)，移植入3d后CD163阳性细胞开始出现，移植7d后浸润到心血管植入物表面的巨噬细胞能有效转化为CD163型巨噬细胞，移植14d后CD86阳性细胞和CD163阳性细胞均逐渐减少，到30d后CD86阳性细胞和CD163阳性细胞进一步减少，说明炎症已经消退。而对照组和MRS处理组，CD86阳性细胞到CD163阳性细胞的转换受阻，到抑制30d后，炎症还未消退。
进行验证实验B(血流监测、SEM观测以及组织染色实验)来研究心血管植入物的功能。本实验使用本实施例制备的心血管植入物(即Netrin-1组)植入大鼠颈总动脉处，经2m、6m和14m后，进行超声观察，然后将心血管植入物取出进行组织染色观察。本实验还设置了Blocking-A2b组，本组中的心血管植入物的制备方法同验证实验A的MRS处理组(Netrin-1+MRS组)。移植心血管植入物的大鼠饲养至指定时间点后，进行如下实验：2％戊巴比妥钠麻醉大鼠，大鼠取头正中位仰卧固定于鼠板上，备皮剃毛后均匀涂抹超声凝胶，首先设置彩色多普勒超声仪频率为13.0MHz，深度2.5cm，机械指数M10.4，灰度46。探头紧贴大鼠皮肤，并保证有标志处对准右侧颈部。探头长边与大鼠颈总动脉呈垂直角度，调整探头角度与方向至图像上出现规律放大缩小的红色与蓝色圆点，红色为朝向探头的正向血流，蓝色为远离探头方向的血流，区分颈动脉与颈静脉。通过尾静脉向大鼠注射1ml肝素，5min后打开胸腔，并将血管造影剂碘海醇注入心脏左心室，小动物CT成像仪设置层厚参数为0.625mm，ADW4.2，观察各组大鼠移植侧血管通畅情况，工作站Volume Rendering重建血管模型。完成在体测试后，取出移植工程血管，并使用戊二醛或多聚甲醛固定，梯度脱水后SEM观察血管(心血管植入物)内膜内皮化程度，或将血管冷冻切片并做H&E染色观察各组大鼠血管通畅和内膜增生情况。
图18-23展示了各实验组中心血管植入物在大鼠体内以及取出后的状态，H&E染色结果如图24-26所示，Blocking-A2b组的植入物在移植2月后基本堵塞，这与血管炎症进程结果一致，揭示了炎症反应在工程血管自体化中所起的关键作用。CTA和多普勒超声结果显示神经轴突导向分子-1修饰的本方案制备的血管植入物可以在体内保持长达6个月和14个月的良好的通畅。扫描电镜图像如图27-30所示，与Blocking-A2b组相比，本实施例获得的心血管植入物中由于炎症及时消退，为内皮前体细胞的归巢、增殖和内皮化提供了良好的条件，故未见有血栓形成和内膜增生。
综上所述，本发明获得的血管植入物在各个时间点(包括移植后2个月、6个月、14个月)相对于对照组均附着有更多的血管的内皮细胞，且在30d时完成了早期内皮化，提高了组织工程血管移植成功率。
实施例3:三重修饰的心血管植入物
本实施例中，天然脱细胞的血管基质材料和心血管植入物本体的制备方法同实施例1，不同点在于本实施例对心血管植入物本体进行了三重修饰，具体情况如下：
CD133适配子锚定修饰：用5mM EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)对孵育了胶原的血管基质材料(即心血管植入物本体)进行交联，时间为24h，然后用PBS清洗3次。PEI/金纳米颗粒采用一步法进行合成，1％的PEI溶液(聚乙烯亚胺)(1.44ml)缓慢的加入14mM或28mM的HAuCl4水溶液中(25ml)，室温下搅拌24h，形成低密度和高密度的PEI/金纳米颗粒。然后，20000g/min、4℃下离心分离，蒸馏水洗三遍后，冷冻干燥。之后将血管基质材料加入事先制备好的PEI/金纳米颗粒(聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒)，在5mM EDC中进行交联，时间为24h，然后PBS清洗3次后置于4℃冰箱中保存，获得纳米金颗粒修饰的心血管植入物本体。进行移植前，将纳米金颗粒修饰的心血管植入物本体置于CD133适配子溶液中孵育0.5h，然后用PBS清洗3次，获得CD133适配子锚定修饰的心血管植入物本体。
纳米缓释颗粒修饰：使用缓释纳米颗粒修饰心血管植入物本体(在纳米金颗粒修饰的心血管植入物本体上进行，为了保证CD133适配子的稳定性，CD133适配子锚定修饰需要在移植前临时进行)。将100ng/ml神经轴突导向分子-1与壳聚糖以摩尔质量1:2的比例混合，调整溶液PH值为5.1-6.0，搅拌中缓慢加入0.15％TPP(三聚磷酸钠)，在持续搅拌得到乳白色液体后20000g，4℃离心10min，双蒸水洗3次沉淀后冷冻干燥获得纳米缓释颗粒。在4℃，120rpm的条件下使用0.1％(w/v)缓释纳米颗粒与0.4％胶原溶液共孵育心血管植入物本体(即纳米金颗粒修饰的心血管植入物本体)24h，再用1％EDC，0.6％NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)和0.5％肝素溶液在4℃，120rpm的条件下孵育心血管植入物本体24h，之后PBS洗3次。接下来用2mg/ml的N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)溶液，处理血管2h，然后PBS洗3遍。之后将血管置于10mg/ml的DTT(二硫苏糖醇)溶液中孵育30min，然后PBS洗3次。
表面修饰：使用2mg/ml SPDP与500ng/ml神经轴突导向分子-1溶液混合处理以上缓释纳米颗粒修饰的心血管植入物本体(此时心血管植入物本体上已经修饰有缓释纳米颗粒和PEI/金纳米颗粒)24h，PBS洗3次后在含肝素的生理盐水中4℃保存，获得本实施例的心血管植入物。在完成上述修饰之后和血管移植之前，完成CD133适配子锚定修饰，获得本实施例的心血管植入物。
实验例1：心血管植入物效果对比实验
取实施例1(参见实施例1的第1-3段)、实施例2(参见实施例2的第1和第2段)和实施例3(参见实施例3的第1-3段)制备的心血管植入物进行实验研究，对照组取的是实施例1中的心血管植入物本体(制备方法参见实施例1第一段，即通过胶原孵育血管基质材料获得的心血管植入物本体)。将各组供试植入物植入到大鼠颈总动脉后，比较移植后两个月血管通畅情况，通过尾静脉向大鼠注射1ml肝素，5min后打开胸腔，取出各组供试植入物，并使用戊二醛将血管冷冻切片并做HE染色观察各组大鼠血管通畅和内膜增生情况。实验结果如图31-34所示，对照组(图31)已经闭塞，单纯CD133修饰的血管(图32)炎症反应严重，出现明显内膜增生和剥离。单纯神经轴突导向分子-1修饰的血管，内皮化受阻(图33)。同时有本实施例制备的三重修饰的小口径生物人工血管(心血管植入物，图34)保持良好通畅，无内膜增生。表面单纯CD133锚定修饰的小口径生物人工血管虽然具有较好内皮祖细胞捕获能力，但不能促进炎症消退，不会改善局部微环境，血管内膜会受到严重损伤而引起内膜增生。发明人研究发现，虽然单纯神经轴突导向分子-1具有一定的验证调控能力，但是在心血管植入物植入体内的早期，会出现中膜平滑肌细胞异常增殖和迁移的现象。导致在植入早期，心血管植入物并不能适应体内环境，出现心血管植入物管壁异常等情况，进而影响了植入早期心血管植入物的通畅度。由实验结果(图33)可知，单纯神经轴突导向分子-1修饰的血管，由于缺乏捕获内皮祖细胞能力，内皮化受阻，并且也出现了中膜平滑肌细胞异常增殖和迁移。而同时修饰CD133和神经轴突导向分子-1纳米颗粒的小口径生物人工血管，既能够有效捕获血液中内皮祖细胞，促进早期内皮化，又能同时促进炎症消退，并且不会出现植入早期的中膜平滑肌细胞异常增殖和迁移的现象，达到原位调控免疫反应促进血管植入物原位再生、保持长期良好通畅的优良效果。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
SEQUENCE LISTING
<110>中国人民解放军陆军军医大学
<120>一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法
<130>2020.6.24
<160>1
<170>PatentIn version 3.5
<210>1
<211>19
<212>RNA
<213>人工序列
<400>1
cagaacguauacuauucug
SEQUENCE LISTING
<110> 中国人民解放军陆军军医大学
<120> 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法
<130> 2020.6.24
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 1
cagaacguau acuauucug 19

Claims (10)

1.一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，包括心血管植入物本体，心血管植入物本体上修饰有CD133适配子和缓释纳米颗粒；所述CD133适配子的序列为：5’-CAGAACGUAUACUAUUCUG-3’，所述缓释纳米颗粒含有神经轴突导向分子-1。
2.根据权利要求1所述的一种调控免疫反应和 促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，所述缓释纳米颗粒由神经轴突导向分子-1与壳聚糖组装形成。
3.根据权利要求2所述的一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，所述神经轴突导向分子-1还通过N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯偶联在所述心血管植入物本体表面。
4.根据权利要求3所述的一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，所述CD133适配子由如下方法修饰到心血管植入物本体上：通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐将聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒交联到心血管植入物本体上，然后将CD133适配子结合到聚乙烯亚胺修饰的金纳米颗粒上。
5.根据权利要求3所述的一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，所述缓释纳米颗粒由如下方法制备：将含神经轴突导向分子-1的溶液与含壳聚糖的溶液混合，在pH值为5.1-6.0和加入三聚磷酸钠的条件下，自组装获得缓释纳米颗粒。
6.根据权利要求5所述的一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，在缓释纳米颗粒中，神经轴突导向分子-1与壳聚糖的摩尔比为1:2。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，所述心血管植入物本体由如下方法制备：先脱去离体血管中的细胞，然后脱去离体血管中的核酸和脂肪，获得血管基质材料，再在血管基质材料表面覆盖胶原，获得心血管植入物本体。
8.根据权利要求7所述的一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物，其特征在于，心血管植入物为管状，口径为1-4mm，长度为0.5-20cm。
9.根据权利要求8所述的心血管植入物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)构建心血管植入物本体；
(2)在所述心血管植入物本体上偶联CD133适配子；
(3)制备缓释纳米颗粒，并在所述心血管植入物本体上偶联所述缓释纳米颗粒，所述缓释纳米颗粒含有神经轴突导向分子-1；
(4)通过N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯将神经轴突导向分子-1偶联到所述心血管植入物本体上。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用缓释纳米颗粒和胶原共孵育血管基质材料，获得血管材料A；然后用N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺和肝素共孵育血管材料A，获得血管材料B；再使用N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯孵育血管材料B，获得血管材料C；最后使用二硫苏糖醇孵育血管材料C，将缓释纳米颗粒偶联在所述心血管植入物本体上。
CN202010590492.XA 2020-06-24 2020-06-24 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法 Active CN111544658B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010590492.XA CN111544658B (zh) 2020-06-24 2020-06-24 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010590492.XA CN111544658B (zh) 2020-06-24 2020-06-24 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111544658A CN111544658A (zh) 2020-08-18
CN111544658B true CN111544658B (zh) 2022-02-01

Family

ID=71997948

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010590492.XA Active CN111544658B (zh) 2020-06-24 2020-06-24 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111544658B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115487350B (zh) * 2021-06-17 2023-10-31 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 一种调节免疫炎症微环境水凝胶支架及其制备方法和应用
CN114306747A (zh) * 2021-12-29 2022-04-12 中国人民解放军陆军军医大学 一种小口径心血管植入物及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101066477A (zh) * 2007-05-17 2007-11-07 中国人民解放军第三军医大学 能在体捕获内皮祖细胞的生物人工血管
CN101172168A (zh) * 2007-10-10 2008-05-07 大连理工大学 胺糖聚糖负载cd133抗体的金属血管支架涂层与制法
CN101195047A (zh) * 2007-12-30 2008-06-11 中国人民解放军第三军医大学 一种抗血栓、再狭窄的血管支架及其制备方法
CN104043109A (zh) * 2014-03-05 2014-09-17 山东省眼科研究所 神经轴突导向因子在制备促进角膜损伤修复制品中的应用
CN104758985A (zh) * 2015-03-20 2015-07-08 西南交通大学 一种捕获内皮祖细胞EPCs的新型抗凝血支架涂层的制备方法
CN108926747A (zh) * 2017-05-24 2018-12-04 上海微创医疗器械（集团）有限公司 一种抗黏附多肽的应用、一种植入医疗器械及其制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL162803A0 (en) * 2002-02-06 2005-11-20 Orbus Medical Technologies Inc Medical device with coating that promotes endothelial cell adherence and differentiation
CN101357241B (zh) * 2008-09-12 2012-06-13 西南交通大学 一种钛及其合金心血管植入装置的表面定向固定cd34抗体或cd133抗体的方法
EP3233121A4 (en) * 2014-12-17 2018-05-16 New York University Methods for treating inflammatory arthritis

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101066477A (zh) * 2007-05-17 2007-11-07 中国人民解放军第三军医大学 能在体捕获内皮祖细胞的生物人工血管
CN101172168A (zh) * 2007-10-10 2008-05-07 大连理工大学 胺糖聚糖负载cd133抗体的金属血管支架涂层与制法
CN101195047A (zh) * 2007-12-30 2008-06-11 中国人民解放军第三军医大学 一种抗血栓、再狭窄的血管支架及其制备方法
CN104043109A (zh) * 2014-03-05 2014-09-17 山东省眼科研究所 神经轴突导向因子在制备促进角膜损伤修复制品中的应用
CN104758985A (zh) * 2015-03-20 2015-07-08 西南交通大学 一种捕获内皮祖细胞EPCs的新型抗凝血支架涂层的制备方法
CN108926747A (zh) * 2017-05-24 2018-12-04 上海微创医疗器械（集团）有限公司 一种抗黏附多肽的应用、一种植入医疗器械及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Netrin-1调控炎症消退改善归巢内皮祖细胞微环境促小口径工程血管早期内皮化;李彦朝等;《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》;20190725;第169页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111544658A (zh) 2020-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4943844B2 (ja) 三次元組織構造体
Walles et al. Influence of scaffold thickness and scaffold composition on bioartificial graft survival
US10736989B2 (en) Methods and compositions for stabilizing the myocardium
Ko et al. Enhanced re-endothelialization of acellular kidney scaffolds for whole organ engineering via antibody conjugation of vasculatures
JP2022107023A (ja) 臓器および組織を脱細胞化および再細胞化する方法
JP4624800B2 (ja) 細胞の成長を促進するための工学設計骨格
EP2322600A2 (en) Cultured three dimensional tissues and uses thereof
US11331348B2 (en) Compositions comprising extracellular matrix of primitive animal species and related methods
JP2002501513A (ja) 心筋瘢痕への移植体および方法ならびにそのための細胞調製物
CN106619723A (zh) 用于心脏治疗的组合物和方法
JP2011519616A (ja) 組織工学による血管
EP3041522B1 (en) A flap for de-novo tissue regeneration
CN111544658B (zh) 一种调控免疫反应和促进内膜再生的心血管植入物及其制备方法
JP2020523173A (ja) 細胞生着のためのパッチグラフト組成物
JP2015526148A (ja) インプラント及びインプラントの製法
WO2017175870A1 (ja) 肝切除を受けた肝臓の組織再構築用移植材、その製造方法、及び肝切除を受けた肝臓の再構築方法
CN114288478A (zh) 一种组织工程神经复合体及其制备方法和应用
Bashur et al. Composition of intraperitoneally implanted electrospun conduits modulates cellular elastic matrix generation
JP2005278711A (ja) ハニカムフィルムを用いた機能的人工組織の生産
Gadre et al. Decellularization and Their Significance for Tissue Regeneration in the Era of 3D Bioprinting
US20220323510A1 (en) Compositions Comprising Extracellular Matrix of Primitive Animal Species and Related Methods
CN111454467B (zh) 一种涂抹式生物可降解血管外支架及其制备方法
CN116676258A (zh) 一种可应用于自体血管和小口径组织工程血管抗钙化的工程化外泌体及其制备方法和应用
Mourad et al. Compounding effects of diabetes in vessel formation in microvessel fragment–based engineered constructs
Mehta A Novel Approach for Vascularizing Tissue Engineered Cardiac Scaffolds

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant