CN111544387B - 一种复方槲皮素抗菌纳米乳及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医药领域，涉及一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物及其制备方法。所述复方槲皮素抗菌纳米乳，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂24.00％～40.00％、助表面活性剂0％～20％、油3.00％～23.5％、槲皮素0.1976％～0.2056％、单宁0.0466％～0.0486％、川楝素0.7904％～0.8224％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。本发明所制备得到的蒙药复方槲皮素纳米乳具有良好的抗菌效果，且具有良好的热力学稳定性。

Description

一种复方槲皮素抗菌纳米乳及其制备方法
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一种抗菌药物的新剂型，特别涉及一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物及其制备方法。
背景技术
蒙药森登-4是蒙医临床上常用的抗风湿药，具有清热燥湿、抗炎镇痛的疗效，用于治疗关节炎、水肿等病症。近年研究发现蒙药森登-4对于手足癣的治疗也有一定的功效。作为森登-4质量控制指标的三种有效成分对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌，均有一定的抑制作用。
目前，市场上森登-4主要有汤剂、胶囊，其纳米乳剂未见报道。森登-4中君药文冠木的主要成分槲皮素水溶性差，生物利用度低；且各成分之间抗菌配伍机制不明。因此，基于森登-4的复方简化药方和成分开发一种具有较高载药量的复方纳米乳剂，既可以提高疗效，又可以阐释蒙药森登-4中主要成分的配伍机制。
发明内容
针对上述现在技术中存在的问题与缺陷，本发明的目的是提供一种溶解性好、性质稳定、生物利用度高、具有较好抗菌作用的蒙药复方槲皮素纳米乳及其制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种复方槲皮素抗菌纳米乳，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂24.00％～40.00％、助表面活性剂0％～20％、油3.00％～23.5％、槲皮素0.1976％～0.2056％、单宁0.0466％～0.0486％、川楝素0.7904％～0.8224％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
进一步的，在表面活性剂的选择上，本发明选用无毒和生物相容性好的非离子表面活性剂，非离子表面活性剂在溶液中比较稳定，不受强电解质、无机盐类的影响，也不受强碱的影响，并且与其他表面活性剂的相容性好。本发明选用HLB为10～15的非离子表面活性剂，可选择Tween-80(聚山梨酯-80)、RH-40(聚氧乙烯氢化蓖麻油)、EL-40(蓖麻油聚氧乙烯醚)、乳化剂OP-10中的一种或几种的混合物。
进一步的，本发明根据当乳化油相所需的表面活性剂的HLB与表面活性剂相近时，所形成的乳液稳定的原则，选用的油是乙酸乙酯、三乙酸甘油酯和肉豆蔻酸异丙酯中的任一种或几种的混合物。
进一步的，所述助表面活性剂是无水乙醇、异丙醇、1,2-丙二醇中的任一种或几种的混合物。
进一步的，所述纳米乳的粒径为1～100nm。
进一步的，所述纳米乳中还含有质量百分比为0.1784％～0.1804％的栀子苷，所述栀子苷的主要化学成分环烯醚萜抗炎效果显著，可以增强纳米乳的抗炎效果。
进一步的，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂25％、助表面活性剂12.5％、油4.4％、槲皮素0.2016％、单宁0.0476％、川楝素0.8064％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
进一步的，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂25％、助表面活性剂12.5％、油4.4％、槲皮素0.2016％，单宁0.0476％、栀子苷0.1794％、川楝素0.8064％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
进一步的，由下列质量百分比的原料组成：Tween-80 25.0％、无水乙醇12.5％、乙酸乙酯4.4％、槲皮素0.2016％、单宁0.0476％、栀子苷0.1794％、川楝素0.8064％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
一种复方槲皮素抗菌纳米乳的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，按配方比例称取表面活性剂、油、助表面活性剂、槲皮素、单宁、川楝素和蒸馏水，备用；
步骤2，将所述槲皮素和川楝素溶于油中，并将其加热至40～60℃，作为油相；
步骤3，将所述表面活性剂加入到所述油相中，搅拌混匀；
步骤4，将所述助表面活性剂加入到油相与表面活性剂的混合物中，搅拌混匀；
步骤5，将所述单宁加入到蒸馏水中，将其加热至40～60℃，混匀，作为水相；
步骤6，搅拌油相、表面活性剂和助表面活性剂的混合物的同时滴加水相，继续搅拌至混合物呈透明液体，得到所述复方槲皮素抗菌纳米乳。
进一步的，当所述纳米乳原料中含栀子苷时，在步骤5中将按配方比例称取的栀子苷和单宁一起加入到蒸馏水中，并加热混匀，作为水相。
进一步的，步骤3中搅拌时间为30分钟，搅拌的转速为800rpm/min；
步骤4中搅拌时间为15分钟，搅拌的转速为800rpm/min。
本发明所述蒙药复方槲皮素纳米乳抗菌药物，与现有技术相比，具有以下优点：
(1)本发明所述蒙药复方槲皮素纳米乳具有良好的抗菌效果。
(2)本发明所述蒙药复方槲皮素纳米乳为O/W型(水包油型)，具有良好的热力学稳定性，其液滴粒径在1～100nm，流动性好，不分层、不沉淀，贮存稳定性高。
(3)本发明所述蒙药复方槲皮素纳米乳分布均匀，澄清透明，可以在水中无限稀释，吸收好。
(4)本发明所述蒙药复方槲皮素抗菌纳米乳的制备方法具有良好的增溶作用，大大增加了槲皮素、单宁的溶解度，从而增强了纳米乳的抗菌性能。
(5)本发明所述蒙药复方槲皮素纳米乳制备方法简单、安全性高。
附图说明
图1为槲皮素纳米乳、槲皮素+单宁纳米乳、槲皮素+单宁+川楝素纳米乳、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷纳米乳对绿脓假单胞菌的抑菌试验平板结果；
图2槲皮素纳米乳、槲皮素+单宁纳米乳、槲皮素+单宁+川楝素纳米乳、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷纳米乳对大肠杆菌的抑菌试验平板结果；
图3槲皮素纳米乳、槲皮素+单宁纳米乳、槲皮素+单宁+川楝素纳米乳、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷纳米乳对金黄色葡萄球菌的抑菌试验平板结果；
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种复方槲皮素抗菌纳米乳，该纳米乳的粒径大小在1～100nm之间，由下列质量百分比的原料组成：Tween-80 25.0％、乙酸乙酯4.4％、无水乙醇12.5％、槲皮素0.2016％、单宁0.0476％、川楝素0.8064％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
上述复方槲皮素抗菌纳米乳的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，按配方比例称取Tween-80、乙酸乙酯、无水乙醇、槲皮素、单宁、川楝素和蒸馏水，备用；
步骤2，将所述槲皮素和川楝素溶于乙酸乙酯中，并将其加热至40～60℃，使其充分溶解，作为油相；
步骤3，将所述Tween-80加入到所述油相中，800rpm/min搅拌30分钟混匀；
步骤4，将所述无水乙醇加入到油相与表面活性剂的混合物中，800rpm/min搅拌15分钟混匀；
步骤5，将所述单宁加入到蒸馏水中，将其加热至40～60℃，混匀，作为水相；
步骤6，迅速搅拌油相、表面活性剂和助表面活性剂的混合物，搅拌的同时缓慢滴加水相，不断搅拌直至混合物呈透明液体，即得到所述蒙药复方槲皮素抗菌纳米乳。
实施例2
一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物，各组分的质量：RH-40 27％，肉豆蔻酸异丙酯3.3％，无水乙醇1％,槲皮素0.2％，单宁0.0486％，栀子苷0.18％，川楝素0.8％，余量为蒸馏水。
实施例3
一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物，各组分的质量：EL-40 36％，无水乙醇12％，乙酸乙酯4％，槲皮素0.2％，单宁0.0475％，栀子苷0.18％，川楝素0.8224％，余量为蒸馏水。
实施例4
一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物，各组分的质量：Tween-80 27％，乙酸乙酯4.4％，1,2-丙二醇13.5，槲皮素0.2％，单宁0.0486％，栀子苷0.18％，川楝素0.8％，余量为蒸馏水。
实施例5
一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物，各组分的质量：Tween-80 30％，乙酸乙酯4.0％，异丙醇10.5，槲皮素0.1976％，单宁0.0486％，川楝素0.7904％，余量为蒸馏水。
实施例6
一种复方槲皮素抗菌纳米乳药物，各组分的质量：Tween-80 30％，肉豆蔻酸异丙酯3.0％，无水乙醇5％，槲皮素0.2050％，单宁0.0476％，川楝素0.8％，余量为蒸馏水。
实施例7
通过以下试验检测所述蒙药复方纳米乳的抗菌作用：
(1)受试样品为槲皮素、单宁、川楝素、栀子苷中一种或几种的混合物纳米乳。
(2)菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌。
(3)培养基；营养肉汤培养基、营养肉汤琼脂培养基。
(4)抑菌实验方法步骤：
1)将所需培养基按配方配好后灭菌、配制、备用；
2)将所需菌种进行活化；
3)将活化后菌种调至0.5麦氏浓度；
4)将本发明各抗菌剂分别稀释成所需浓度后加入液体培养基试管，混匀备用(倍比稀释法)；
5)在步骤4)制好的含药培养基中加入105cfu/ml的实验菌悬液；
6)将完成上述步骤5)的试管室温培养18-24h，以肉眼观察无菌生长为最小抑菌浓度。
7)得出各个受试样品各自的MIC，将单宁纳米乳、栀子苷纳米乳、川楝素纳米乳三种纳米乳分别与槲皮素纳米乳组合，再将单宁纳米乳、栀子苷纳米乳和川楝素纳米乳各自2MIC质量浓度的药液50μl加入微孔中，其中单宁纳米乳、栀子苷纳米乳或川楝素纳米乳以横列方式，单宁纳米乳、栀子苷纳米乳或川楝素纳米乳与槲皮素纳米乳的混合物以纵列方式；
8)加入步骤2)活化后的菌悬液，使菌液浓度为105cfu，混匀；
迅速置于酶标仪中，在600nm波长处测定各培养孔光密度(OD)；
37℃孵育18-24h，摇匀，再次置于酶标仪中测定各培养孔的OD；
供试药抑菌的OD＝培养后OD-培养前OD。OD差值越小，表明细菌越少，药物的抑菌活性最强。记录2种药物的最佳组合，得出联用MIC；
FIC指数＝甲药联用时MIC/甲药单用时MIC+乙药联用时MIC/乙药单用时MIC
FIC指数≤0.5协同作用，FIC指数＞0.5-1相加作用，FIC指数＞1-2无关作用，FIC指数＞2拮抗作用；
依据上述得出的受试样品俩俩组合的最佳浓度，分别制备槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷四种含药纳米乳，试验方法同步骤4)二倍稀释法，药物依次倍比稀释，分别标为①②③④⑤⑥，比较四种含药纳米乳的抗菌效能。
结果以肉眼观察无菌生长为最小抑菌浓度，将所有肉眼可见无菌生长的试管中的液体，摇匀，进行涂板。
(5)试验结果
表1槲皮素、单宁、川楝素、栀子苷四种有效成分纳米乳MIC(mg/ml)
Figure BDA0002456578820000051
Figure BDA0002456578820000061
表2槲皮素纳米乳/单宁纳米乳单用的MIC和联用时的FIC
Figure BDA0002456578820000062
表3槲皮素纳米乳/川楝素纳米乳单用的MIC和联用时的FIC
Figure BDA0002456578820000063
表4槲皮素纳米乳/栀子苷纳米乳单用的MIC和联用时的FIC
Figure BDA0002456578820000064
通过单宁、川楝素、栀子苷分别和槲皮素的联合抗菌实验可以得出：槲皮素和单宁联用时表现为协同作用，联用时对金黄色葡萄球菌的MIC分别是单用时的1/16和1/8倍，对绿脓假单胞菌的MIC分别是单用时的1/64和1/4倍；槲皮素和川楝素联用时表现为协同作用，联用时对金黄色葡萄球菌的MIC分别是单用时的1/16和1/64倍，对绿脓假单胞菌的MIC分别是单用时的1/4和1/32倍；槲皮素和栀子苷联用时则表现为拮抗作用。
参考图1～图3，分别为槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷四种含药纳米乳对大肠杆菌、绿脓假单胞菌和金黄色葡萄球菌的抑菌试验结果，其中，图1中a、b、c、d，图2中e、f、g、h和图3中i、j、k、l分别依次为槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷四种含药纳米乳，结果如下：
表5槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷四种含药纳米乳对绿脓假单胞菌的抑菌试验结果
Figure BDA0002456578820000065
表6槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷四种含药纳米乳对大肠杆菌的抑菌试验结果
Figure BDA0002456578820000071
表7槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷三种含药纳米乳对金黄色葡萄球菌菌的抑菌试验结果
Figure BDA0002456578820000072
注：－无细菌生长、+有1个菌落，++有2个菌落，+++有3个菌落，++++有4个菌落，+++++有5个菌落，++++++菌落数大于5个
通过二倍稀释法比较槲皮素、槲皮素+单宁、槲皮素+单宁+川楝素、槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷三种含药纳米乳抗菌性能，可以得出；槲皮素+单宁+川楝素纳米乳＞槲皮素+单宁纳米乳＞槲皮素纳米乳＞槲皮素+单宁+川楝素+栀子苷纳米乳，说明槲皮素+单宁+川楝素纳米乳组合抗菌性能最强。
实施例8
上述实施例所制备得到的纳米乳外观为淡黄色透明液体，经透射电子显微镜检测，纳米乳的粒径大小在1～100nm之间，具有良好的稳定性，其稳定性检测试验如下：
(1)加速稳定性：将该蒙药复方纳米乳置于10ml离心管中，以12000r/min离心20min，该纳米乳外观澄清透明，未见分层、破乳现象。
(2)热贮稳定性：将该蒙药复方纳米乳置于西林瓶中，密封，置于40℃恒温箱中贮存3个月，该纳米乳外观澄清透明，未见分层、破乳现象。
(3)抗冷冻稳定性：将该蒙药复方纳米乳置于-4℃保存，分别于0、5、10天观察纳米乳外观依旧澄清透明，液体均匀，未见分层、破乳等现象。
(4)光照稳定性：将该蒙药复方纳米乳于(4500±500)lx条件下，分别于0、5、10天观察，纳米乳外观澄清透明，未见分层、破乳现象。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂24.00％～40.00％、助表面活性剂0％～20％、油3.00％～23.5％、槲皮素0.1976％～0.2056％、单宁0.0466％～0.0486％、川楝素0.7904％～0.8224％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
2.根据权利要求1所述的复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，所述表面活性剂为HLB值为10～15的非离子表面活性剂。
3.根据权利要求1所述的复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，
所述表面活性剂是Tween-80、RH-40、EL-40、乳化剂OP-10中的任一种或几种的混合物；
所述油是乙酸乙酯、三乙酸甘油酯和肉豆蔻酸异丙酯中的任一种或几种的混合物；
所述助表面活性剂是无水乙醇、异丙醇、1,2-丙二醇中的任一种或几种的混合物。
4.根据权利要求1所述的复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，所述纳米乳的粒径为1～100nm。
5.根据权利要求1所述的复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，还含有质量百分比为0.1784％～0.1804％的栀子苷。
6.根据权利要求1所述的复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂25％、助表面活性剂12.5％、油4.4％、槲皮素0.2016％、单宁0.0476％、川楝素0.8064％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
7.根据权利要求5所述的复方槲皮素抗菌纳米乳，其特征在于，由下列质量百分比的原料组成：表面活性剂25％、助表面活性剂12.5％、油4.4％、槲皮素0.2016％、单宁0.0476％、川楝素0.8064％、栀子苷0.1794％，余量为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。
8.一种复方槲皮素抗菌纳米乳的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，按配方比例称取表面活性剂、油、助表面活性剂、槲皮素、单宁、川楝素和蒸馏水，备用；
步骤2，将所述槲皮素和川楝素溶于油中，并将其加热至40～60℃，作为油相；
步骤3，将所述表面活性剂加入到所述油相中，搅拌混匀；
步骤4，将所述助表面活性剂加入到油相与表面活性剂的混合物中，搅拌混匀；
步骤5，将所述单宁加入到蒸馏水中，将其加热至40～60℃，混匀，作为水相；
步骤6，搅拌油相、表面活性剂和助表面活性剂的混合物的同时滴加水相，继续搅拌至混合物呈透明液体，得到所述复方槲皮素抗菌纳米乳。
9.根据权利要求8所述的复方槲皮素抗菌纳米乳的制备方法，其特征在于，当所述纳米乳原料中含栀子苷时，在步骤5中将按配方比例称取的栀子苷和单宁一起加入到蒸馏水中，并加热混匀，作为水相。
10.根据权利要求8所述的复方槲皮素抗菌纳米乳的制备方法，其特征在于，
步骤3中搅拌时间为30分钟，搅拌的转速为800rpm/min；
步骤4中搅拌时间为15分钟，搅拌的转速为800rpm/min。
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