CN111534421A - 一种厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、一种厌氧装置的取样方法 - Google Patents

一种厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、一种厌氧装置的取样方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、一种厌氧培养装置的取样方法，属于厌氧培养技术领域。本发明提供的厌氧培养装置结构简单、操作方便、经济实用，便于携带至野外现场操作。此外，该装置气密性良好，且操作步骤简单，保证了样品在厌氧条件下培养，效果良好。同时，第一注射器样品管和第二注射器样品管和样品瓶上带有刻度，可控性好。本发明提供的土壤厌氧培养的方法操作简单，且厌氧环境容易创造和维持。本发明还提供了上述技术方案所述的厌氧培养装置的取样方法，该取样方法避免了取样过程中样品与氧气的接触，保证了厌氧环境。

Description

一种厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、一种厌氧装置的取 样方法
技术领域
本发明涉及厌氧培养技术领域，尤其涉及一种厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、一种厌氧培养装置的取样方法。
背景技术
人们在进行厌氧细菌或者土壤厌氧产物研究时，需要对土壤进行厌氧培养，一般是将样品放在独立的血清瓶进行培养，厌氧培养后进行取样时，均是破坏性取样，取样过程复杂且工作量巨大。因此，人们希望可以建立一种简易的、气密性好的厌氧培养装置，以克服上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、一种厌氧装置的取样方法。本发明提供的厌氧培养装置结构简单、操作方便、用途广泛。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种厌氧培养装置，包括样品瓶，与所述样品瓶配套的橡胶塞；所述橡胶塞上插有第一注射器针头和第二注射器针头；所述第一注射器针头与第一注射器样品管连接；所述第二注射器针头与第二注射器样品管连接。
优选地，所述第一注射器针头与第二注射器针头的针孔直径为0.45mm。
优选地，所述样品瓶的材质为玻璃或石英。
本发明还提供了一种利用上述技术方案所述的厌氧培养装置进行土壤厌氧培养的方法，包括以下步骤：
在所述样品瓶中加入培养基和样品，塞好所述橡胶塞，进行厌氧培养；
所述第一注射器针头和第二注射器针头穿透所述橡胶塞并位于所述培养基液面以上；所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中注入水液封。
优选地，所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中水的高度为0.5cm。
本发明还提供了上述技术方案所述的厌氧培养装置的取样方法，包括以下步骤：
用装有惰性气体的充气注射器代替第二注射器样品管，所述第二注射器针头位于厌氧样品液面以上；
将无菌注射器排净空气，替代第一注射器样品管，同时将所述第一注射器针头插入厌氧样品中，拉动所述无菌注射器活塞吸取厌氧样品。
优选地，所述取样方法还包括：
取样完成后，将所述第一注射器针头向上抽出直至针尖离开厌氧样品液面，将所述无菌注射器换回第一注射器样品管，并在所述第一注射器样品管内加入水液封，将所述充气注射器换回第二注射器样品管，并在所述第二注射器样品管内加入水液封。
本发明提供了一种厌氧培养装置，包括样品瓶，与所述样品瓶配套的橡胶塞；所述橡胶塞上插有第一注射器针头和第二注射器针头；所述第一注射器针头与第一注射器样品管连接；所述第二注射器针头与第二注射器样品管连接。本发明提供的厌氧培养装置结构简单、操作方便、经济实用，便于携带至野外现场操作。此外，该装置气密性良好，且操作步骤简单，保证了厌氧条件，效果良好。同时，第一注射器样品管和第二注射器样品管和样品瓶上带有刻度，可控性好。且厌氧反应过程中，产生的二氧化碳等气体可排出。
本发明还提供了利用上述技术方案所述的厌氧培养装置进行土壤厌氧培养的方法，本发明提供的方法操作简单，且厌氧环境容易创造和维持。
本发明还提供了上述技术方案所述的厌氧培养装置的取样方法，本发明的取样方法避免了取样过程中厌氧样品与氧气的接触，保证了厌氧环境。
附图说明
图1为本发明提供的厌氧培养装置，其中，1为样品瓶，2为橡胶塞，3为第一注射器针头，4为第一注射器样品管，5为第二注射器针头，6为第二注射器样品管。
具体实施方式
本发明提供了一种厌氧培养装置，包括样品瓶，与所述样品瓶配套的橡胶塞；所述橡胶塞上插有第一注射器针头和第二注射器针头；所述第一注射器针头与第一注射器样品管连接；所述第二注射器针头与第二注射器样品管连接。
本发明提供的厌氧培养装置包括样品瓶。在本发明中，所述样品瓶的材质优选为玻璃或石英。
本发明提供的厌氧培养装置包括与所述样品瓶匹配的橡胶塞。
本发明提供的厌氧培养装置包括所述橡胶塞上插有的第一注射器针头和第二注射器针头，所述第一注射器针头和第二注射器针头的针孔直径为0.45mm。本发明将所述第一注射器针头和第二注射器针头的针孔直径设置为0.45mm，避免了注射器样品管中水在气压的作用下滴入样品管瓶培养基中。
本发明提供的厌氧培养装置包括与所述第一注射器针头连接的第一注射器样品管。
本发明提供的厌氧培养装置包括与所述第二注射器针头连接的第二注射器样品管。
本发明还提供了一种利用上述技术方案所述的厌氧培养装置进行土壤厌氧培养的方法，包括以下步骤：
在所述样品瓶中加入培养基和样品，塞好所述橡胶塞，进行厌氧培养；
所述第一注射器针头和第二注射器针头穿透所述橡胶塞并位于所述培养基液面以上；所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中注入水液封。
在本发明中，当所述厌氧培养需要在避光条件下进行时，优选采用锡纸对所述样品瓶进行遮盖，以进行厌氧培养。
本发明对所述培养基、样品的种类及比例不做具体限定，本领域技术人员根据实际情况进行设置即可。
在本发明中，所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中水的高度优选为0.5cm。本发明在所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中加入水进行液封，避免了氧气等气体通过第一注射器样品管和第二注射器样品管中进入样品瓶中的样品中，维持了培养过程中的厌氧环境。
本发明对所述厌氧培养的参数不做具体限定，本领域技术人员根据实际情况进行设置即可。
本发明还提供了上述技术方案所述的厌氧培养装置的取样方法，包括以下步骤：
用装有惰性气体的充气注射器代替第二注射器样品管，所述第二注射器针头位于厌氧样品液面以上；
将无菌注射器排净空气，替代第一注射器样品管，同时将所述第一注射器针头插入厌氧样品中，拉动所述无菌注射器活塞吸取厌氧样品。
在本发明中，所述惰性气体优选包括氦气、氖气、氩气、氪气或氙气。
在本发明中，由于厌氧培养时，所述第一注射器样品管和第二注射器样品管用水液封，而水会暴露在空气，可能会有细菌滋生，所以用装有惰性气体的充气注射器代替第二注射器样品管，用排净空气的无菌注射器替代第一注射器样品管，以保证取样过程中的无菌环境。
取样结束后，本发明优选还包括：将所述第一注射器针头向上抽出直至针尖离开厌氧样品液面，将所述无菌注射器换回第一注射器样品管，并在所述第一注射器样品管内加入水液封，将所述充气注射器换回第二注射器样品管，并在所述第二注射器样品管内加入水液封。
下面结合实施例对本发明提供的厌氧培养装置及土壤厌氧培养方法、厌氧培养装置的取样方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
图1为本发明提供的厌氧培养装置，其中，1为样品瓶，2为橡胶塞，3为第一注射器针头，4为第一注射器样品管，5为第二注射器针头，6为第二注射器样品管。按照图1所示的连接方式得到厌氧培养装置。
利用图1所示的厌氧培养装置进行土壤厌氧培养，包括以下步骤：
所述培养基采用淡水/海水富集培养基(FWM)，参照Lovley(1986)的配方，在淡水/海水富集培养基(FWM)加入终浓度为60mmol/L的无定形氧化铁，同时使淡水/海水富集培养基(FWM)的pH至7.0，得到培养基。
所述淡水/海水富集培养基的组成如表1所示。
表1淡水/海水富集培养基的组成
Figure BDA0002491316930000041
Figure BDA0002491316930000051
将样品瓶、橡胶塞、培养基、湿地表层土壤样品灭菌处理后，将培养基、湿地表层土壤样品在样品瓶中混合，并塞好橡胶塞，在所述橡胶塞上插入第一注射器针头和第二注射器针头，所述第一注射器针头(针孔直径为0.45mm)和第二注射器针头(针孔直径为0.45mm)穿透所述橡胶塞并位于培养基液面上方；在所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中加入约0.5cm高的水；置于黑暗条件下分别在15℃、25℃培养80天，分别于第1天、2天、3天、5天、10天、15天、20天、30天、40天、60天、80天抽取2.5mL进行检测；测定Fe2+和石油烃含量变化。
厌氧样品的取样过程包括以下步骤：
用装有惰性气体的充气注射器代替第二注射器样品管，所述第二注射器针头位于所述厌氧样品液面上方；
将无菌注射器排净空气，替代第一注射器样品管，同时将所述第一注射器针头插入厌氧样品液面，拉动所述无菌注射器活塞吸取样品；
取样完成后，将所述第一注射器针头向上抽出直至针尖离开厌氧样品液面，将所述无菌注射器换回第一注射器样品管，并在所述第一注射器样品管内加入水液封，将所述充气注射器换回第二注射器样品管，并在所述第二注射器样品管内加入水液封。
在装有厌氧样品的无菌注射器样品管中吸取盐酸浸提后再吸取菲洛嗪显色液进行显色，结果发现：随着培养时间的增加，样品显色程度逐渐增加，在一定培养天数后，样品颜色逐渐变浅，与使用独立的血清瓶进行破坏性取样的显色效果相差较小。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种厌氧培养装置，其特征在于，包括样品瓶，与所述样品瓶配套的橡胶塞；所述橡胶塞上插有第一注射器针头和第二注射器针头；所述第一注射器针头与第一注射器样品管连接；所述第二注射器针头与第二注射器样品管连接。
2.根据权利要求1所述的厌氧培养装置，其特征在于，所述第一注射器针头与第二注射器针头的针孔直径为0.45mm。
3.根据权利要求1所述的厌氧培养装置，其特征在于，所述样品瓶的材质为玻璃或石英。
4.一种利用权利要求1～3任一项所述的厌氧培养装置进行土壤厌氧培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
在所述样品瓶中加入培养基和样品，塞好所述橡胶塞，进行厌氧培养；
所述第一注射器针头和第二注射器针头穿透所述橡胶塞并位于所述培养基液面以上；所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中注入水液封。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一注射器样品管和第二注射器样品管中水的高度为0.5cm。
6.一种权利要求1～3任一项所述的厌氧培养装置的取样方法，其特征在于，包括以下步骤：
用装有惰性气体的充气注射器代替第二注射器样品管，所述第二注射器针头位于厌氧样品液面以上；
将无菌注射器排净空气，替代第一注射器样品管，同时将所述第一注射器针头插入厌氧样品中，拉动所述无菌注射器活塞吸取厌氧样品。
7.根据权利要求6所述的取样方法，其特征在于，还包括：
取样完成后，将所述第一注射器针头向上抽出直至针尖离开厌氧样品液面，将所述无菌注射器换回第一注射器样品管，并在所述第一注射器样品管内加入水液封，将所述充气注射器换回第二注射器样品管，并在所述第二注射器样品管内加入水液封。
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