CN111518891B - Sp8基因作为诊治青光眼的生物标志物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了SP8基因作为诊治青光眼的生物标志物的用途。本发明证明青光眼患者SP8基因表达显著下调，根据SP8基因表达差异区分青光眼与正常人。体外实验证明，过表达SP8基因可逆转视网膜神经节细胞损伤状态，因此SP8基因可作为靶点用于开发临床治疗青光眼的药物。

Description

SP8基因作为诊治青光眼的生物标志物的用途

技术领域

本发明涉及青光眼诊断和治疗领域，更具体地，本发明涉及SP8基因作为诊治青光眼的生物标志物的用途。

背景技术

眼睛是人体十分重要的感觉器官，能够接受外部的光刺激，并将光冲动传送到大脑中枢而引起视觉。达芬奇曾说：“眼睛是心灵的窗户，通过眼睛，人们得以拥抱和欣赏世界的无限美妙，灵魂才得以安居于体内”。信息时代，人通过感觉器官从外界获得的信息中，大约90％是由眼睛来完成的。世界卫生组织的资料显示，眼科疾病已成为继肿瘤、心血管疾病之后的第三位危害及影响人们生存质量的疾病。在所有眼科疾病中，青光眼则是首位不可逆转的致盲性眼病，其影响视觉质量的原因是通过威胁和损害视神经及其通路而导致失明，从而严重威胁人类的视觉健康，给个人、家庭和社会造成难以估量的损失。

青光眼造成的主要危害是影响视觉功能，即便是在发达国家中，也只有50％左右的青光眼患者能够得到及时的诊断和治疗，而且，青光眼的发病因素、遗传学规律等均不明了，因此我们要科学地掌握其发生发展规律，从而进行早期诊断和早期治疗，避免青光眼患者的失明。目前，青光眼的诊断主要是依靠病史、形态学和功能学方面的检查，如眼压测量、超声生物显微镜、眼底照相、光学相干断层扫描和视野检查等。虽然这些检查可以诊断青光眼，但研究表明，通过形态学和功能学手段诊断的青光眼，患者视觉功能的损害已经超过50％。而青光眼相关的生化检查、血清学筛查及检测标准仍处于相对空白状态，因此寻找一种高灵敏度和高特异性的标志物对青光眼诊断和监控尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过检测SP8基因或蛋白表达差异来诊断青光眼的方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了检测SP8基因或SP8蛋白的产品在制备青光眼诊断工具中的用途。

进一步，所述检测SP8基因或SP8蛋白的产品包括检测SP8基因或SP8蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合SP8基因的核酸或者能够结合SP8蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测SP8基因的表达水平；所述物质能够检测SP8蛋白的表达水平。

本发明的检测SP8基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。

包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。

进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(Amplification RefractoryMutation System，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。

上面所述的核酸包括扩增SP8基因的引物，产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。

在本发明的具体实施方案中，所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.1(正向序列)和SEQ ID NO.2(反向序列)所示。

上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。

本发明的检测SP8蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。

本发明的检测SP8蛋白的产品包括特异性结合SP8蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本发明的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)₂、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本发明的检测SP8蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。

抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的SP8蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对SP8蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。

标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(Dojindo Laboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)647标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；及DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗体标记试剂盒、Qdot(TM)抗体标记试剂盒(Invitrogen Corporation)和EZ-标记物蛋白质标记试剂盒(Funakoshi Corporation)。为了正确标记，可以使用适宜的仪器来检测经过标记的抗体或其片段。

进一步，所述检测SP8基因或SP8蛋白的产品可以是检测SP8基因或SP8蛋白的试剂、也可以是包含所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。

利用前面所述的检测产品检测受试者样本中的SP8基因或SP8蛋白的表达水平，与正常人相比，受试者样本中的SP8基因或SP8蛋白的表达水平降低，则诊断该受试者为青光眼患者或诊断该受试者患有青光眼的风险高。

作为依照本发明的检测产品的样本，可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样本不受特别限制，只要它适于本发明的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。

在本发明的具体实施方案中，所述样本来自受试者的组织，具体的，所述组织是视神经乳头组织。

本发明还提供了一种诊断青光眼的工具，所述工具能够检测受试者样本中SP8基因或SP8蛋白的表达水平。所述工具包括能够结合SP8基因的核酸或者能够结合SP8蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测SP8基因的表达水平；所述物质能够检测SP8蛋白的表达水平。

进一步，所述核酸和所述物质的性质同前面所述。

进一步，所述诊断青光眼的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断青光眼的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知SP8基因的异常与青光眼相关也属于SP8基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。

本发明的检测产品、诊断工具中使用的抗SP8抗体或其片段所识别的氨基酸的数目没有特别限制，只要抗体能够结合SP8即可。当抗体作为治疗药物时，优选的是它能够识别尽可能多的氨基酸，只要它能抑制SP8功能。抗体或其片段识别的氨基酸的数目是至少一个，更优选至少三个。抗体的免疫球蛋白类别不受限制，可以是IgG、IgM、IgA、IgE、IgD或IgY。

本发明的检测产品、诊断工具中使用的抗SP8抗体的其他性质同前面所述。

进一步，所述受试者样本可以使用例如自活检受试者获得的组织样品或流体。样本不受特别限制，只要它适于本发明的测定；例如，它可以包括组织、血液、血浆、血清、淋巴液、尿液、浆膜腔液、脊髓液、滑液、房水、泪液、唾液、或其级分或经过处理的材料。在本发明的具体实施方案中，所述样本来自受试者的组织，具体的，所述组织是视神经乳头组织。

本发明还提供了一种诊断青光眼的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)获取青光眼受试者的样品；

(2)检测受试者样品中SP8基因或蛋白的表达水平；

(3)将测得的SP8基因或蛋白的表达水平与受试者的患病与否关联起来。

(4)与正常对照相比，SP8基因或蛋白的表达水平降低，则该受试者被诊断为青光眼，或该受试者被诊断为将来患有青光眼的风险高。

在本发明的上下文中，“诊断青光眼”既包括判断受试者是否已经患有青光眼、也包括判断受试者是否存在患有青光眼的风险。

本发明的“SP8基因”在NCBI上的信息为：Chromosome 7,NC_000007.14(20782279..20786886,complement)。

本发明还提供了一种含有促进SP8基因表达的物质的药物。

本发明还提供了SP8基因在制备治疗青光眼的药物中的应用。

本发明还提供了SP8基因表达产物在制备治疗青光眼的药物中的应用。

本发明还提供了促进SP8基因表达的物质在制备治疗青光眼的药物中的应用。

本发明的促进SP8基因表达的物质不受限制，只要是可以促进SP8基因或涉及SP8基因上游或下游途径的因子的表达或活性，且对于治疗青光眼有效的药物即可。

在本发明的具体实施方案中，所述促进SP8基因表达的物质包括SP8基因过表达载体。

本发明的药物可以作为医药单独施用或与其它药物一起施用。可以与本发明的药物一起施用的其它药物不受限制，只要它不损害本发明的治疗性或预防性药物的效果即可。

本发明的药物可根据需要制备成各种剂型。包括但不限于，经皮、粘膜、鼻、口颊、舌下或经口使用的片剂、溶液剂、颗粒剂、贴剂、膏剂、胶囊剂、气雾剂或栓剂。

本发明的药物的施用途径不受限制，只要它能发挥期望的治疗效果或预防效果即可，包括但不限于静脉内，腹膜内，眼内，动脉内，肺内，口服，小泡内，肌肉内，气管内，皮下的，通过皮肤，通过胸膜，局部的，吸入，通过粘膜，皮肤，肠胃，关节内，心室内，直肠，阴道，颅骨内，尿道内，肝内。在某些情况下，可以系统地给药。在某些情况下是局部地给药。

本发明的药物的剂量不受限制，只要获得期望的治疗效果或者预防效果即可，可以依据症状、性别、年龄等来恰当的确定。本发明的治疗药物或预防药物的剂量可以使用例如对疾病的治疗效果或者预防效果作为指标来确定。

本发明还提供了一种青光眼的治疗方法，所述方法包括促进SP8基因表达。

本发明的优点和有益效果：

本发明的发现了一种诊断青光眼的分子标志物，使用该分子标志物可以在青光眼发生的早期即可作为判断，提供了患者的生存率。

本发明的包括促进SP8基因的物质可用作新的青光眼的治疗药物，为临床治疗青光眼提供了一种新的治疗方法。

附图说明

图1显示利用QPCR检测SP8基因在青光眼患者和正常对照人群中的表达差异统计图；

图2显示利用QPCR检测SP8基因表达的情况的统计图；

图3显示利用TUNEL检测细胞凋亡情况的统计图。

具体的实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选青光眼患者和正常人群中差异表达的基因

1、样本收集

青光眼手术过程收集病变的视神经乳头组织共50例和正常外伤人的视神经乳头组织共45例作为对照。

2、总RNA提取

采用TRIzol(Invitrogen)试剂提取，并保存于-80℃备用。加入TRIzol后室温放置10min，使样品充分裂解(注：如不进行下一步操作，样品可放入-70℃长期保存)。每1mlTRIzol加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀后室温放置3-5min使其自然分相。4℃12,000rpm离心15min。样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，把水相转移到新管中。在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，室温放置15min。4℃12,000rpm离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。RNA沉淀中加入1ml 75％乙醇(用RNase-free水配制)，温和振荡离心管，悬浮沉淀。每1ml TRIzol加入1ml 75％乙醇。4℃8,000rpm离心5min，弃上清。室温放置晾干后，在沉淀内加入50μl RNase-free水，以充分溶解RNA，-70℃保存。

3、RNA样品的质量分析

利用Nanodrop2000对所提RNA的浓度和纯度进行检测，琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，Agilent2100测定RIN值。单次建库要求RNA总量5μg，浓度≥200ng/μL，OD260/280介于1.8～2.2之间。

4、逆转录

逆转录采用TaKaRa公司PrimeScript^TM RT reagent Kit，按照试剂盒提供的体系(20μl)(如表1所示)分别加入反应管中。

表1反应体系

试剂	体积
		5*PrimeScript<sup>TM</sup> buffer	4μl
5*PrimeScript<sup>TM</sup> RT Enzyme mix I	1μl
		Oligo dT Primer(50μM)	1μl
Random 6mers(100μM)	4μl
		总RNA	2μl
Rnase free ddH<sub>2</sub>O	13μl

将以上体系置于无Rnase的0.2μl EP管中，按下面程序反转为cDNA：37℃15min，85℃5sec，得到的cDNA放于-20℃中保存。

5、实时荧光定量PCR

实时荧光定量PCR反应体系(50μl)，配置如下：

SYBR Green Mix 25μl，SP8特异性的qRT-PCR的上游引物、SP8特异性的qRT-PCR下游引物、GAPDH特异性qRT-PCR上游引物、GAPDH qRT-下游引物各1μl，dNTP 2μl，cDNA 2μl，ddH₂O 19μl。

PCR反应条件：

92℃5min，(92℃30s；60℃30s；72℃30s 40个循环)，72℃5min。

以SYBR Green作为荧光标记物，在Light Cycler荧光实时定量PCR仪上进行PCR反应，通过融解曲线分析和电泳确定目的条带。

sp8基因扩增引物

上游引物：5’-ATGGCAACTTCACTTCTA-3’(SEQ ID NO.1)；

下游引物：5’-CTATCTTATTACAGGTAGCG-3’(SEQ ID NO.2)，

GAPDH基因扩增引物

上游引物：5’-TCAAGATCATCAGCAATG-3’(SEQ ID NO.3)；

下游引物：5’-CGATACCAAAGTTGTCAT-3’(SEQ ID NO.4)。

6、数据分析

基因表达值用Delta Ct的方法计算，假设目的和参照基因扩增效率都接近100％且相对偏差不超过1Ct；ΔCt＝目的基因Ct均数-参照基因Ct均数，分别确定对照人群和青光眼患者的ΔCt范围。ΔΔCT法进行相对定量。

7、结果

结果显示，与对照人群平均表达量相比(平均相对表达量设为1)，青光眼患者SP8基因mRNA平均水平明显下调(平均相对表达量为0.018)，差异具有统计学意义(**P<0.01)(图1)。

为了SP8基因对青光眼的诊断效能，统计了对照人群和青光眼患者中SP8基因上下调人数，结果显示：对照人群中SP8基因表达下调的有7例，青光眼患者中SP8基因表达下调的有43例，敏感度为86％，特异性为84％，表明SP8基因可作为诊断青光眼的分子标志物。

实施例2SP8的治疗功效检测

1、RGC-5细胞株的培养

复苏RGC-5细胞，将RGC-5细胞株从液氮罐中取出，立即放入36℃水浴1min，见有少量冰时轻轻摇晃冻存管使冰融化。1000r/min离心5min，吸出上清后加入含10％血清的DMEM重悬细胞，调整密度后接种于洁净培养瓶中。置于95％空气、37℃、5％CO₂饱和湿度的细胞培养箱中培养，当细胞达到70％融合时进行后续试验。

2、构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-SP8

根据genebank SP8的编码序列，设计并合成引物扩增获得SP8的编码序列，两端添加酶切位点并将其插入线性化的pcDNA3.1(+)载体中，构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-SP8，转化大肠杆菌筛选阳性克隆并扩增提取大量pcDNA3.1(+)-SP8备用。

3、细胞转染

细胞接种于10％血清的培养基中，37℃、5％CO₂培养箱中培养，至对数生长期用于实验。细胞铺于6孔板中，待细胞长至70％密度时根据Lipofectamine2000说明书转染等量的pcDNA3.1(+)-SP8和pcDNA3.1(+)空载体，6h后换成新鲜培养基，培养48h后检测SP8基因表达。QPCR结果如图2所示，转染pcDNA3.1(+)-SP8的细胞中SP8基因相对表达量大幅度上调，与空载体组相比差异具有统计学意义(*P<0.05)。

4、凋亡实验

4.1Müller细胞培养

取出生3d的清洁级SD(Sprague-Dawley)大鼠5只，75％酒精消毒30s，处死后无菌条件下取出眼球置于D-Hanks液中，冲洗数遍，解剖显微镜下角巩膜缘处剪开，钝性分离去除眼前节组织，小心剥离视网膜组织，剔除干净血管组织。显微眼科剪将其剪碎(小于1mm²)，加入D-Hanks，1000r/min离心5min，去除上清，加入4mL0.25％胰酶(复温后使用)(Gibco公司，美国)，37℃消化8min，加入4mL含15％FBS(Gibco公司，美国)的DMEM/F12(Gibco公司，美国)培养基终止消化，1000r/min离心5min，弃去上清液。加入含9mL 15％FBS的DMEM/F12培养基(Gibco公司，美国)，吸管吹打成细胞悬液后，接种于3个培养瓶中，将培养瓶置于95％空气、37％、5％CO₂饱和湿度的细胞培养箱中培养。48～72h后首次换液，以后3～4d换液1次，原代细胞约10d后融合。融合后传代，弃去培养基，D-Hanks液冲洗3遍，加入0.25％胰酶消化，显微镜下观察细胞待形态变圆，部分细胞悬浮后，弃去培养液及少量悬浮细胞，加入含15％血清的培养基，吹打，以1：2方式分瓶传代，选取2次传代后的细胞进行鉴定及作为后续实验。

4.2RGC-5细胞凋亡诱导

诱导RGC-5细胞凋亡的基本方法是：DHPG刺激Müller细胞后的培养液(conditioned medium，CM)作为条件培养基加入RGC-5细胞株(RGC-5预先使用MPEP及MPMQ处理2h)从而诱导细胞凋亡。

具体方法如下：

CM制备：Müller细胞种植培养于6孔板中，待细胞长满后备用，每孔添加1mL DMEM/F12作为培养基，在加入DHPG之前，去除原先的培养基，改为1mL低血清浓度培养基。加入100μmol/L DHPG后6h，24h收集离心培养基上清，作为CM。

TUNEL法检测RGC-5凋亡情况：24孔板置入已消毒的细胞爬片，按照之前的步骤转染质粒。将细胞分为两组，CM处理组和对照组(加入CM前为避免DHPG对RGC-5产生直接损伤作用，两组细胞提前2h加入mGluR1及mGluR5的阻断剂MPMQ及MPEP)，处理一定时间后，使用TUNEL检测试剂盒检测(罗氏公司)细胞凋亡，按照产品说明书操作，大致步骤如下：细胞经0.01mol/L PBS漂洗1遍，4％多聚甲醛固定1h，PBS漂洗5min×3，滴加0.1％Triton X-100冰上破膜2min，0.01mol/L PBS漂洗5min×3次，吸弃PBS，干燥细胞爬片。配置TUNEL染色液，阳性对照液及阴性对照液，滴加在相应细胞爬片上，置入湿盒防止干燥，37℃避光孵育60min，0.01mol/L PBS漂洗5min×3次。室温下DAPI复染核15min，PBS漂洗5min×3次后封片剂封片，荧光显微镜下观察。

4.3统计学方法

各组数据以均数±标准差(x±s)表示，多组数据比较使用单因素方差分析进行统计检验两组数据比较采取t检验进行统计分析，所有数据分析采用SPSS17.0统计学分析软件，以*P<0.05为差异有统计学意义，统计图采用Sigma plot绘制。每组实验独立重复3次或以上。

4.4结果

结果如图3所示，相比空载体对照组，pcDNA3.1(+)-SP8组细胞凋亡个数显著降低，表明SP8过表达可以抑制RGC-5细胞凋亡。上述研究成果提示促进SP8表达可以治疗青光眼。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 青岛市中医医院(青岛市海慈医院、青岛市康复医学研究所)

<120> SP8基因作为诊治青光眼的生物标志物的用途

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggcaactt cacttcta 18

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ctatcttatt acaggtagcg 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tcaagatcat cagcaatg 18

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

cgataccaaa gttgtcat 18

Claims (7)

1.检测视神经乳头组织中SP8基因mRNA水平的产品在制备青光眼诊断工具中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测视神经乳头组织中SP8基因mRNA水平的产品包括检测视神经乳头组织中SP8基因的表达水平的产品。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用所述产品检测受试者视神经乳头组织中样本中的SP8基因的表达水平，与正常人相比，受试者视神经乳头组织中样本中的SP8基因的表达水平降低，则诊断该受试者为青光眼患者或者诊断该受试者患有青光眼的风险高。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括能够结合SP8基因的核酸的物质；所述核酸能够检测视神经乳头组织中SP8基因的表达水平。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述核酸是实时定量PCR中使用的特异扩增SP8基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

6.促进SP8基因表达的试剂在制备治疗青光眼的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述促进SP8基因表达的试剂是SP8基因过表达载体。

Images