CN111514298B - 质子泵抑制剂与pd-1轴结合拮抗剂的组合及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于抗肿瘤药技术领域，涉及质子泵抑制剂与PD‑1轴结合拮抗剂的组合及其用途。该组合中的质子泵抑制剂不仅具有选择性抑制肿瘤细胞的作用，可以选择性抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移和趋化，并提高肿瘤细胞PD‑L1表达，还可以增强PD‑1轴结合拮抗剂的疗效，抑制皮下移植瘤的生长和肺转移。另外，该组合还可以提高PD‑1轴结合拮抗剂的临床疗效，改善耐药现象，拓宽适用范围，降低临床用量，从而降低毒副作用，提高用药的安全性。

Description

质子泵抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂的组合及其用途
技术领域
本发明属于抗肿瘤药技术领域，涉及两种活性成分的组合，尤其涉及一种抗肿瘤药物制剂组合。
背景技术
随着社会的发展，恶性肿瘤的发生率显著增加，对人类生命健康构成严重威胁。近年来，寻找有效且毒副作用小的治疗方法已经成为重中之重。
肿瘤免疫治疗(Tumor Immunotherapy)是继手术、放疗、化疗和靶向治疗之后新崛起的一种肿瘤治疗技术，主要通过激活机体自身抗肿瘤免疫反应或者从体外培养和扩增后回输到病人体内的方法来增强甚至是激发机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。肿瘤免疫治疗的安全性高、特异性强、副作用小，成为肿瘤治疗研究的新热点。目前，多个肿瘤免疫治疗药物已经获得美国FDA批准临床应用(参见Bocanegra A.,Fernandez-HinojalG.,Zuazo-Ibarra M.,et al.,PD-L1 Expression in Systemic Immune CellPopulations as a Potential Predictive Biomarker of Responses to PD-L1/PD-1Blockade Therapy in Lung Cancer[J],Int.J.Mol.Sci.,2019,20(7):1631)。另外，由于肿瘤免疫治疗具有卓越的疗效和创新性，被《科学》杂志评为2013年度最重要的科学突破。
PD-1轴结合拮抗剂包括一系列与PD-1、PD-L1、PD-L2相关的结合拮抗剂或抗体，其可以特异性阻断PD-1/PD-Ls通路的信号传导，激活机体免疫反应(参见Sun Y.,Jing Y.,Huang M.,et al.,The PD-1/PD-Ls pathway is up-regulated during the suppressionof experimental autoimmune encephalomyelitis treated by Astragaluspolysaccharides[J].,J.Neuroimmunol.,2019,332:78-90)。然而，并非所有肿瘤患者都能从中获益，有的患者存在原发性耐药，有的患者存在继发性耐药，耐药现象明显(参见杨莹,白春梅,孙昭等,抗PD-1/PD-L1药物治疗肿瘤耐药机制研究进展,癌症进展,2017,15(12):1365-1368,1374)，适用范围相对较窄，只对如黑色素瘤或者非小细胞肺癌等特定瘤种或者某些特定患者有效，有效率低(约为20％～30％)，并且与其他药物联合使用时副作用显著。因此，如何提高PD-1轴结合拮抗剂的有效率，并且解决其耐药现象以及联用后的副作用，已成为亟待解决的问题。
胃壁细胞分泌酸是通过膜上的H+-K+-ATP酶，以H+对K+交换的方式，将细胞内H+泵出。质子泵抑制剂(Proton Pump Inhibitors，PPIs)是一类重要的抑制胃酸分泌药，该药吸收入血后，弥散进胃壁细胞内，与H+-K+-ATP酶共价结合，不可逆地使泵分子失活，只有在新的泵分子合成并插入到细胞膜上后，胃酸分泌才重新开始。因此，该类药物抑制胃酸的作用强而持久，同时可以使胃蛋白酶的分泌减少。部分临床研究表明，质子泵抑制剂能够抑制食管返流和胃酸分泌，从而降低胃癌和食管癌的发病(参见Zhang B.,Ling T.,Zhaxi P.,etal.,Proton pump inhibitor pantoprazole inhibits gastric cancer metastasis viasuppression of telomerase reverse transcriptase gene expression[J],CancerLett.,2019,452:23-30以及黄琼，杜洁，成舒乔等,癌症患者质子泵抑制剂使用的研究进展[J],中国临床药理学与治疗学,2018,23(10):1179-1187)。但是，也有大量数据报道证实，长期应用质子泵抑制剂可能会诱导胃癌、食管癌甚至是胰腺癌等肿瘤的发生和进展(参见刘莹,蒋敦科,质子泵抑制药物中长期使用对胃癌及癌前病变发病的影响[J],实用癌症杂志,2015,30(08):1212-1214以及Cheung K.S.,Leung W.K.,Long-term use of proton-pump inhibitors and risk of gastric cancer:a review of the current evidence[J],Therap.Adv.Gastroenterol.,2019,12:1-11)。因此，对于质子泵抑制剂究竟是治癌还是致癌，国内外学术界至今尚无定论。另外，未有文献报道称质子泵抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂联用能够发挥协同作用。
发明内容
发明要解决的问题
为了解决PD-1轴结合拮抗剂存在的有效率低、适用范围窄、联用后副作用显著等问题，本发明提供了质子泵抑制剂与PD-1轴结合拮抗剂的联用组合及其相应的医药用途。
用于解决问题的方案
本发明基于本发明人的意外发现，即质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐与PD-1轴结合拮抗剂的组合展示出治疗肿瘤的协同治疗作用。
第一方面，本发明提供了一种活性成分的组合：
1)质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药；和
2)PD-1轴结合拮抗剂。
进一步地，在上述活性成分的组合中，所述质子泵抑制剂选自下组当中的至少一种：奥美拉唑、埃索美拉唑、泮托拉唑、左旋泮托拉唑、兰索拉唑、右旋兰索拉唑、雷贝拉唑、右旋雷贝拉唑、艾普拉唑、安纳拉唑和泰妥拉唑。
进一步地，在上述活性成分的组合中，所述PD-1轴结合拮抗剂选自下组当中的至少一种：PD-1结合拮抗剂和PD-L1结合拮抗剂。
更进一步地，在上述活性成分的组合中，所述PD-1结合拮抗剂选自下组当中的至少一种：nivolumab、pembrolizumab、pidilizumab、AMP-224、sintilimab、camrelizumab、tislelizumab和toripalimab。
更进一步地，在上述活性成分的组合中，所述PD-L1结合拮抗剂选自下组当中的至少一种：YW243.55.S70、atezolizumab、MDX-1105和durvalumab。
进一步地，在上述活性成分的组合中，所述质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与所述PD-1轴结合拮抗剂的重量比为0.05～350:1，优选1～50:1，更优选3.5～35:1。
第二方面，本发明提供了一种药物制剂，其包含上述活性成分的组合，以及药学上可接受的辅料。
进一步地，上述药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂处于同一单位制剂当中，或者分别处于不同的单位制剂当中。
更进一步地，当上述药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂处于同一单位制剂当中时，所述药物制剂为注射剂。
更进一步地，当上述药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂分别处于不同的单位制剂当中时，所述药物制剂中包含质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药的单位制剂为口服制剂或注射剂，包含PD-1轴结合拮抗剂的单位制剂为注射剂。
第三方面，本发明提供了上述活性成分的组合或上述药物制剂在制备用于预防、控制和/或治疗肿瘤的药物中的用途。
进一步地，在上述用途中，所述肿瘤包括(但不限于)肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、黑色素瘤、成胶质细胞瘤和成神经细胞瘤。
第四方面，本发明提供了一种用于预防、控制和/或治疗肿瘤的方法，其包括将治疗有效量的上述活性成分的组合或上述药物制剂施用于对其有需求的受试者的步骤。
进一步地，在上述方法中，所述活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂同时、连续或间隔地施用于对其有需求的受试者。
第五方面，本发明提供了上述活性成分的组合或上述药物制剂在制备用于增强肿瘤患者自身抗肿瘤免疫功能的药物中的用途。
进一步地，在上述用途中，所述肿瘤包括(但不限于)肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、黑色素瘤、成胶质细胞瘤和成神经细胞瘤。
第六方面，本发明提供了一种用于增强肿瘤患者自身免疫功能的方法，其包括将治疗有效量的上述活性成分的组合或上述药物制剂施用于对其有需求的受试者的步骤。
进一步地，在上述方法中，所述活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂同时、连续或间隔地施用于对其有需求的受试者。
发明的效果
与现有技术相比，本发明中的技术方案具有以下效果：
(1)本发明的活性成分的组合中的质子泵抑制剂本身具有选择性抑制肿瘤细胞的作用，可以选择性抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移和趋化，并提高肿瘤细胞PD-L1表达；
(2)本发明的活性成分的组合中的质子泵抑制剂可以增强PD-1轴结合拮抗剂的疗效，抑制皮下移植瘤的生长和肺转移；
(3)通过本发明的活性成分的组合可以提高PD-1轴结合拮抗剂的临床疗效，改善耐药现象，拓宽适用范围，降低临床用量，从而降低毒副作用，提高用药的安全性。
附图说明
图1显示了质子泵抑制剂对小鼠黑色素瘤细胞系B16、小鼠非小细胞肺癌细胞系LLC以及小鼠成纤维细胞L929和MEF的抑制作用的IC50曲线。
图2A显示了在质子泵抑制剂的使用剂量下，B16、MC38、LLC细胞系发生凋亡坏死的流式分析结果；图2B显示了在质子泵抑制剂的使用剂量下，B16、MC38、LLC的凋亡率(％)结果；图2C显示了B16、MC38、LLC的细胞周期中G0/G1期比值的定量分析。
图3A显示了在质子泵抑制剂的使用剂量下，MC38和LLC细胞系的细胞转移和趋化的变化情况；图3B显示了MC38和LLC细胞系的细胞转移和趋化细胞数的具体定量分析情况。
图4显示了在质子泵抑制剂的使用剂量下，B16、MC38、LLC细胞系膜表面的PD-L1表达定量分析。
图5A显示了PD-L1抗体选取0、0.001、0.01、0.1μg/ml等4个剂量，奥美拉唑选取0、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μM等8个剂量，奥美拉唑联合PD-L1抗体来促进脾细胞杀伤B16肿瘤细胞的效率和剂量的依赖关系；图5B显示PD-L1抗体选取0、0.001、0.01、0.1μg/ml等4个剂量，埃索美拉唑选取0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100μM等8个剂量，埃索美拉唑联合PD-L1抗体来促进脾细胞杀伤B16肿瘤细胞的效率和剂量的依赖关系。
图6A显示了联用质子泵抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂对LLC和MC38细胞系的皮下移植瘤生长的抑制作用；图6B显示了联用质子泵抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂对小鼠体重的影响情况。
图7显示了联用质子泵抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂对LLC细胞系的皮下移植瘤肺转移的抑制作用。
具体实施方式
本发明提供了一种活性成分的组合。该组合为(1)质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药；和(2)PD-1轴结合拮抗剂。
活性成分的组合
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“活性成分(activeingredient)”，又称“有效成分”，是指具有医疗效果或生理活性的物质。术语“组合(association)”是指由若干个部分或个体组成的整体。术语“活性成分的组合”是指由若干个具有医疗效果或生理活性的部分或个体组成的整体，该整体会表现出不同于各个部分或个体的性质。
质子泵抑制剂
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“质子泵抑制剂”是指一类重要的抑制胃酸分泌药，其通过与H+-K+-ATP酶共价结合，从而不可逆地使泵分子失活。
本发明的活性成分的组合中的质子泵抑制剂包括(但不限于)奥美拉唑(Omeprazole)、埃索美拉唑(Esomeprazole)、泮托拉唑(Pantoprazole)、左旋泮托拉唑(Levopantoprazole)、兰索拉唑(Lansoprazole)、右旋兰索拉唑(Dexlansoprazole)、雷贝拉唑(Rabeprazole)、右旋雷贝拉唑(Dexrabeprazole)、艾普拉唑(Ilaprazole)、安纳拉唑(Anaprazole)和泰妥拉唑(Tenatoprazole)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂选自下组当中的至少一种：奥美拉唑、埃索美拉唑、泮托拉唑、左旋泮托拉唑、兰索拉唑、右旋兰索拉唑、雷贝拉唑、右旋雷贝拉唑、艾普拉唑、安纳拉唑和泰妥拉唑。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为奥美拉唑(其结构如下所示)，如AstraZeneca的
Figure BDA0002458712440000061
Figure BDA0002458712440000062
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为埃索美拉唑(奥美拉唑的S-(-)-异构体，其结构如下所示)，如AstraZeneca的
Figure BDA0002458712440000063
Figure BDA0002458712440000064
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为泮托拉唑(其结构如下所示)，如Takeda的
Figure BDA0002458712440000065
Figure BDA0002458712440000066
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为左旋泮托拉唑(泮托拉唑的S-(-)-异构体，其结构如下所示)，如正大天晴的左旋泮托拉唑。
Figure BDA0002458712440000071
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为兰索拉唑(其结构如下所示)，如Takeda的
Figure BDA0002458712440000072
Figure BDA0002458712440000073
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为右旋兰索拉唑(兰索拉唑的R-(+)-异构体，其结构如下所示)，如Takeda的
Figure BDA0002458712440000074
Figure BDA0002458712440000075
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为雷贝拉唑(其结构如下所示)，如Eisai的
Figure BDA0002458712440000076
Figure BDA0002458712440000077
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为右旋雷贝拉唑(雷贝拉唑的R-(+)-异构体，其结构如下所示)，如Emcure的
Figure BDA0002458712440000078
Figure BDA0002458712440000079
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为艾普拉唑(其结构如下所示)，如丽珠医药的
Figure BDA00024587124400000710
Figure BDA0002458712440000081
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为安纳拉唑(其结构如下所示)，如四环医药的安纳拉唑。
Figure BDA0002458712440000082
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂为泰妥拉唑(其结构如下所示)，如Mitsubishi Tanabe Pharma的UT-199。
Figure BDA0002458712440000083
PD-1轴结合拮抗剂
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“PD-1轴结合拮抗剂”是指一类通过抑制PD-1轴结合配偶与其一种或多种结合配偶之间的相互作用来消除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍，进而恢复或增强T细胞功能(例如增殖、细胞因子生成、靶细胞杀伤等)的活性分子，包括PD-1结合拮抗剂、PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
本发明的活性成分的组合中的PD-1轴结合拮抗剂选自下组当中的至少一种：PD-1结合拮抗剂和PD-L1结合拮抗剂。
PD-1结合拮抗剂
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“PD-1结合拮抗剂”是指一类减少、阻断、抑制、消除或干扰源自PD-1与其一种或多种结合配偶(例如PD-L1、PD-L2)的相互作用的信号传导的活性分子。
当本发明的活性成分的组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂时，其选自下组当中的至少一种：nivolumab、pembrolizumab、pidilizumab、AMP-224、sintilimab、camrelizumab、tislelizumab和toripalimab。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂nivolumab(纳武单抗)，如BMS的
Figure BDA0002458712440000091
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂pembrolizumab(帕博利珠单抗)，如Merck的
Figure BDA0002458712440000092
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂pidilizumab(皮迪利珠单抗)，如Cure Tech的CT-011。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂AMP-224(GSK)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂sintilimab(信迪利单抗)，如信达生物制药的
Figure BDA0002458712440000096
(IBI308)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂camrelizumab(卡瑞利珠单抗)，如恒瑞医药的
Figure BDA0002458712440000097
(SHR-1210)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂tislelizumab(替雷利珠单抗)，如百济神州的BGB-A317。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-1结合拮抗剂toripalimab(特瑞普利单抗)，如君实生物的JS001。
PD-L1结合拮抗剂
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“PD-L1结合拮抗剂”是指一类减少、阻断、抑制、消除或干扰源自PD-L1与其一种或多种结合配偶(例如PD-1、B7-1，参见A.Chaughri,Y.Xiao,A.N.Klee,et al.,PD-L1 Binds to B7-1 Only In Cis on the SameCell Surface[J],Cancer Immunology Research,2018,6(8):921-929)的相互作用的信号传导的活性分子。
当本发明的活性成分的组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-L1结合拮抗剂时，其选自下组当中的至少一种：YW243.55.S70、atezolizumab、MDX-1105和durvalumab。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-L1结合拮抗剂YW243.55.S70(WO2010/077634A1)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-L1结合拮抗剂atezolizumab(阿特珠单抗)，如Roche的
Figure BDA0002458712440000095
(MPDL3280A)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-L1结合拮抗剂MDX-1105(BMS，又名BMS-936559)。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的PD-1轴结合拮抗剂为PD-L1结合拮抗剂durvalumab(度伐单抗)，如AstraZeneca的
Figure BDA0002458712440000101
(MEDI4736)。
在本发明的活性成分的组合中，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂均具有一定的用量范围，这样才能更加有效地发挥二者的协同效果。
在本发明的一项实施方案中，当该组合中的PD-1轴结合拮抗剂的用量为1重量份时，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药的最小用量为0.05重量份，最大用量为350重量份，此时二者的重量比为0.05～350:1。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的重量比为0.05:1。
在本发明的一项实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的重量比为350:1。
在本发明的一项优选的实施方案中，当该组合中的PD-1轴结合拮抗剂的用量为1重量份时，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药的最小用量为1重量份，最大用量为50重量份，此时二者的重量比为1～50:1。
在本发明的一项优选的实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的重量比为1:1。
在本发明的一项优选的实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的重量比为50:1。
在本发明的一项更优选的实施方案中，当该组合中的PD-1轴结合拮抗剂的用量为1重量份时，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药的最小用量为3.5重量份，最大用量为35重量份，此时二者的重量比为3.5～35:1。
在本发明的一项更优选的实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的重量比为3.5:1。
在本发明的一项更优选的实施方案中，该组合中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的重量比为35:1。
本发明提供了一种药物制剂。该药物制剂包含如上文所述的活性成分的组合，以及药学上可接受的辅料。
药物制剂
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“药物制剂”是指根据活性成分(或药效成分)的性质和使用目的而制备得到的具有一定理化形态、适于特定给药方式的药物成品。
按照给药途径划分，药物制剂可分为两大类：
(I)经胃肠道给药剂型(经口服后进入胃肠道，发挥局部作用或经吸收后发挥全身作用)，包括散剂、口服片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂等；
(II)非经胃肠道给药剂型(除口服给药途径以外的所有其他剂型，可在给药部位发挥局部作用或经吸收后发挥全身作用)，包括(II-1)注射给药剂型，如注射剂；(II-2)呼吸道给药剂型，如喷雾剂、气雾剂、粉雾剂等；(II-3)皮肤给药剂型，如洗剂、搽剂、软膏剂、糊剂、贴剂等；(II-4)粘膜给药剂型，如滴眼剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂、贴膜剂等；(II-5)腔道给药剂型，如栓剂、滴剂、滴丸剂等。
药学上可接受的辅料
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“药学上可接受的”是指能够施用于作为受试者的人和/或其他动物，并且不会产生过度的不良反应或副作用(如毒性、刺激反应、过敏反应等)。术语“辅料”是指与活性成分同时存在于药物制剂当中，并且不会产生过度的不良反应或副作用的辅助材料，包括渗透压调节剂、pH调节剂、稀释剂、崩解剂、增溶剂、稳定剂、防腐剂等。术语“药学上可接受的辅料”是指适用于特定的药物制剂且药学上常规使用的高安全性辅料。
在本发明的药物制剂中，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的存在形式较为灵活，既可以处于同一单位制剂当中，也可以分别处于不同的单位制剂当中。
在本发明的一项实施方案中，该药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂处于同一单位制剂当中。
当该质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与该PD-1轴结合拮抗剂处于同一单位制剂当中时，该药物制剂为注射剂。
在本发明的一项实施方案中，该药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂分别处于不同的单位制剂当中。
当该质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与该PD-1轴结合拮抗剂分别处于不同的单位制剂当中时，该药物制剂中包含质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药的单位制剂为口服制剂或注射剂，包含PD-1轴结合拮抗剂的单位制剂为注射剂。
基于细胞水平的剂量依赖实验，推测针对人(例如体重为50～70kg的成人)的药物制剂中包含大于10mg的质子泵抑制剂以及大于25mg的PD-1轴结合拮抗剂。进一步地，该药物制剂中质子泵抑制剂的最佳用量范围为20～500mg，PD-1轴结合拮抗剂的最佳用量范围为50～700mg。
本发明提供了如上文所述的活性成分的组合或药物制剂在制备用于预防、控制和/或治疗肿瘤的药物中的用途。
预防、控制和/或治疗
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“预防”是指向健康患者预防性地施用活性成分或药物制剂，以防止疾病发生。术语“控制”是指向处于待治疗疾病前期的患者施用活性成分或药物制剂，以防止疾病加重或恶化。术语“治疗”是指向处于待治疗疾病中后期的患者施用活性成分或药物制剂，以减缓、中断或终止疾病发展，但并非完全消除所有症状。
肿瘤
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“肿瘤”是指异常组织团块，包括良性团块和恶性团块。从狭义上讲，本说明书的上下文中所提及的术语“肿瘤”是指恶性团块(又称癌症)，包括(但不限于)白血病、淋巴瘤、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、咽喉癌、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、睾丸癌、黑色素瘤、皮肤癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、脑癌、骨肉瘤等。
在本发明的用途中，该肿瘤包括(但不限于)肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、黑色素瘤、成胶质细胞瘤和成神经细胞瘤。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为肺癌。
在本发明的一项优选的实施方案中，该用途中的肿瘤为非小细胞肺癌(NSCLC)。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为乳腺癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为胰腺癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为肝癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为食道癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为胃癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为结肠癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为结直肠癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为肾癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为膀胱癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为卵巢癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为子宫内膜癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为前列腺癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为黑色素瘤。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为成胶质细胞瘤。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为成神经细胞瘤。
同时，本发明提供了一种用于预防、控制和/或治疗肿瘤的方法。该方法包括将治疗有效量的如上文所述的活性成分的组合或药物制剂施用于对其有需求的受试者的步骤。
治疗有效量
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“治疗有效量”是指当为了预防、控制和/或治疗某种疾病或其至少一种临床症状而为受试者给药时，足以影响该疾病或症状的药物(活性成分或其组合或者包含活性成分或其组合的药物制剂)的用量。本领域技术人员可以理解，“治疗有效量”可以根据活性成分的性质、疾病和/或症状的程度、受试者的情况等因素而变化。
施用
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“施用”是指全身性和/或局部施用。术语“全身性施用”是指非局部地施用，从而使所施用的物质可能影响受试者的若干器官或组织，或者从而使所施用的物质可能穿越受试者的若干器官或组织而到达作用靶点。本领域技术人员可以理解，“全身性施用”涵盖各种形式的施用，包括(但不限于)肠胃外施用、静脉内施用、肌内施用、皮下施用、经皮施用、口服施用等。术语“局部施用”是指在特异性位点处或其周围施用。本领域技术人员可以理解，“局部施用”涵盖各种形式的施用，例如直接注射到特定位点处或注射到其周围(例如肿瘤内施用)。
受试者
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“受试者”包括(但不限于)人类(任何年龄组的男性或女性，例如儿科受试者中的婴儿、幼儿或青少年，以及成人受试者中的青壮年、中年或老年)和非人类的动物(例如哺乳动物中的猴、牛、猪、马、羊、鼠、兔、猫或狗)。
在本发明的一项实施方案中，该方法中的受试者是人类。
在本发明的一项实施方案中，该方法中的受试者是非人类的动物，例如小鼠。
在本发明的方法中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的施用方式较为灵活，二者既可以同时施用于受试者，也可以连续施用于受试者(先施用质子泵抑制剂，然后立刻施用PD-1轴结合拮抗剂，反之亦然)，还可以间隔施用于受试者(先施用质子泵抑制剂，间隔一段时间后再施用PD-1轴结合拮抗剂，反之亦然)。
在本发明的一项实施方案中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂同时施用于受试者，施用方式为注射(例如静脉注射、腹腔注射、瘤内注射等)。
在本发明的一项实施方案中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂连续施用于受试者，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药或者包含其的单位制剂的施用方式为口服、灌胃或注射，PD-1轴结合拮抗剂或者包含其的单位制剂的施用方式为注射。
在本发明的一项实施方案中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂间隔施用于受试者，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药或者包含其的单位制剂的施用方式为口服、灌胃或注射，PD-1轴结合拮抗剂或者包含其的单位制剂的施用方式为注射。施用两种活性成分的间隔时间不超过7天，优选不超过3天，更优选不超过1天。
本发明提供了如上文所述的活性成分的组合或药物制剂在制备用于增强肿瘤患者自身抗肿瘤免疫功能的药物中的用途。
在本发明的用途中，该肿瘤包括(但不限于)肺癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、结肠癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、黑色素瘤、成胶质细胞瘤和成神经细胞瘤。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为肺癌。
在本发明的一项优选的实施方案中，该用途中的肿瘤为非小细胞肺癌(NSCLC)。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为乳腺癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为胰腺癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为肝癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为食道癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为胃癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为结肠癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为结直肠癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为肾癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为膀胱癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为卵巢癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为子宫内膜癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为前列腺癌。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为黑色素瘤。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为成胶质细胞瘤。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的肿瘤为成神经细胞瘤。
患者
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“患者”与术语“受试者”可以互换，包括(但不限于)人类(任何年龄组的男性或女性，例如儿科受试者中的婴儿、幼儿或青少年，以及成人受试者中的青壮年、中年或老年)和非人类的动物(例如哺乳动物中的猴、牛、猪、马、羊、鼠、兔、猫或狗)。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的患者是人类。
在本发明的一项实施方案中，该用途中的患者是非人类的动物，例如小鼠。
免疫功能
除非另有说明，本说明书的上下文中所提及的术语“免疫功能”是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。免疫功能是一种生理功能，机体依靠此功能可以识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入机体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。
同时，本发明提供了一种用于增强肿瘤患者自身抗肿瘤免疫功能的方法。该方法包括将治疗有效量的如上文所述的活性成分的组合或药物制剂施用于对其有需求的受试者的步骤。
在本发明的方法中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂的施用方式较为灵活，二者既可以同时施用于受试者，也可以连续施用于受试者，还可以间隔施用于受试者。
在本发明的一项实施方案中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂同时施用于受试者，施用方式为注射。
在本发明的一项实施方案中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂连续施用于受试者，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药或者包含其的单位制剂的施用方式为口服、灌胃或注射，PD-1轴结合拮抗剂或者包含其的单位制剂的施用方式为注射。
在本发明的一项实施方案中，活性成分的组合或药物制剂中的质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药与PD-1轴结合拮抗剂间隔施用于受试者，质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、同位素标记物或前药或者包含其的单位制剂的施用方式为口服、灌胃或注射，PD-1轴结合拮抗剂或者包含其的单位制剂的施用方式为注射。施用两种活性成分的间隔时间不超过7天，优选不超过3天，更优选不超过1天。
以下将结合具体的实施例来进一步解释或说明本发明中的技术方案。除非另有说明，下列实施例中所使用的仪器、材料或试剂等均可通过常规商业手段获得。
肿瘤细胞系：B16小鼠黑色素瘤细胞系、MC38小鼠结直肠癌细胞系、LLC小鼠非小细胞肺癌细胞系、A549人非小细胞肺癌细胞系、Hela人宫颈癌细胞系、L929及MEF小鼠胚胎成纤维细胞系，购自美国模式菌种收集中心(ATCC)及中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。
实验动物：C57BL/6小鼠，雌性，6-8周龄，购自北京维通利华实验动物有限公司，饲养于中国医学科学院苏州系统医学研究所实验动物中心SPF级动物房，12h明暗交替，温度20～25℃，湿度45～55％，自由进食饮水。所有动物实验操作均按照北京协和医学院苏州系统医学研究所动物伦理委员会有关条例规定执行。
药品及试剂：质子泵抑制剂：奥美拉唑和埃索美拉唑钠，购自美国Sigma公司；PD-1轴结合拮抗剂：atezolizumab(MPDL3280A)，购自美国Roche公司；1640培养基、DMEM培养基、PBS、胎牛血清和流式抗体等由商购获得。
实施例1：质子泵抑制剂选择性抑制肿瘤细胞增殖。
1.实验步骤：
对照组1(MEF)：用DMEM培养基饲养MEF细胞，待细胞状态良好，铺96孔板；对照组2(L929)：用1640培养基饲养L929细胞，待细胞状态良好，铺96孔板；实验组(LLC、B16)：用1640培养基饲养LLC、B16细胞，待细胞状态良好，铺96孔板。
待细胞贴壁过夜后，分别在各组96孔板中，从左至右加入奥美拉唑，药物浓度从0开始依次2倍梯度升高。药物处理4天后，弃去培养基用CCK-8试剂盒检测各孔吸光度，作IC50曲线。
2.实验结果：
从图1中可以看出，奥美拉唑对LLC和B16细胞的IC50远远低于MEF和L929细胞，表明奥美拉唑对肿瘤细胞的杀伤和抑制能力远远高于正常组织细胞，对肿瘤细胞的IC50均在100μM左右，而对成纤维细胞的IC50均在1000μM以上，表明在使用剂量下，奥美拉唑对正常细胞没有影响，而对肿瘤细胞的杀伤和抑制作用具有选择性。
实施例2：质子泵抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡。
1.实验步骤：
将LLC、MC38和B16肿瘤细胞系铺于24孔板，在贴壁完全之后加入质子泵抑制剂奥美拉唑(100μM)处理，在药物处理3天后，弃上清，将细胞消化下来后根据细胞凋亡试剂盒的操作流程，检测各组肿瘤细胞系经药物处理后的凋亡情况，同时用未处理的肿瘤细胞系做对照。
2.实验结果：
从图2A中可以看出，奥美拉唑处理3天后，可以显著提高三株肿瘤细胞系的早期凋亡和晚期凋亡的比例。从图2B中可以看出，奥美拉唑处理使LLC凋亡细胞数提升了5倍，使MC38凋亡细胞数提升了2倍，而使B16凋亡细胞数显著提升。从图2C中可以看出，奥美拉唑处理3天后，B16、MC38、LLC的肿瘤细胞周期中G2/M期的比例显著增加，表明奥美拉唑可以诱导肿瘤细胞的G2/M期周期阻滞。
实施例3：质子泵抑制剂抑制肿瘤细胞转移和趋化。
1.实验步骤：
对照组(未经药物处理)：从Transwell细胞板中取出小室，向24孔内加入700μl含有20％FBS的1640培养基，向小室内加入200μl不含血清的培养基，室温静置20分钟；实验组1(奥美拉唑/50μM)：从Transwell细胞板中取出小室，向24孔内加入700μl含有20％FBS和50μM奥美拉唑的1640培养基，向小室内加入200μl不含血清但含50μM奥美拉唑的培养基，室温静置20分钟；实验组2(奥美拉唑/100μM)从Transwell细胞板中取出小室，向24孔内加入700μl含有20％FBS和100μM奥美拉唑的1640培养基，向小室内加入200μl不含血清但含100μM奥美拉唑的培养基，室温静置20分钟。
将MC38和LLC细胞系经胰酶消化后用不含血清的1640培养基重悬，计数。待预处理完毕后，弃去小室内原有液体，向小室内加入200μl含有1.5×105个细胞细胞悬液。将小室小心放回24孔板中，不要摇晃，如果小室下方有气泡必须要排出小室下方气泡(因为气泡会使结果存在误差)，放置完毕后在培养箱中培养24～48h。取出上室，弃去小室培养基，用无菌棉棒擦拭上室，并用PBS清洗，重复两次。静置晾干，加入甲醇固定30分钟。弃去甲醇固定液，加入0.1％结晶紫溶液进行染色1h，染色完毕后用洗瓶冲洗数次后晾干。将小室底膜切下，膜底面朝上，置于24孔板内并在白光下观察和拍照计数。
2.实验结果：
从图3A中可以看到，采用奥美拉唑处理细胞(不论是50μM还是100μM)，对MC38和LLC肿瘤细胞的转移和趋化都具有显著抑制作用。从图3B中可以看出，不同浓度的奥美拉唑对MC38和LLC细胞的转移和趋化具有不同程度抑制作用，其中：在MC38细胞中，50μM和100μM奥美拉唑可以抑制73％的细胞转移和趋化；在LLC细胞中，50μM和100μM奥美拉唑分别可以抑制46％和70％的细胞转移和趋化。
实施例4：质子泵抑制剂提高肿瘤细胞PD-L1表达。
1.实验步骤：
将LLC、MC38和B16肿瘤细胞系铺于24孔板，在贴壁完全之后加入质子泵抑制剂奥美拉唑、埃索美拉唑、泮托拉唑和兰索拉唑(100μM)处理，在药物处理3天后，弃上清，将细胞消化下来后用流式抗体染色细胞表面的PD-L1蛋白，检测实验组(药物处理组)PD-L1蛋白的表达变化，进而判断质子泵抑制剂对肿瘤细胞PD-L1表达的影响。
2.实验结果：
从图4中可以看出，经质子泵抑制剂(100μM)处理细胞3天后，肿瘤细胞膜表面的PD-L1表达会有显著提升，理论上会增强PD-L1抗体的疗效。
实施例5：制剂中质子泵抑制剂和PD-1轴结合拮抗剂的用量范围考察。
1.实验步骤：
对照组(未经药物处理)：将B16细胞消化、计数铺于96孔板，每孔3×103个细胞，每孔加入6×104个小鼠脾细胞(其中含有大量免疫细胞，具有杀伤小鼠肿瘤细胞的功能)，加入CD3抗体(2μg/ml)活化共培养体系中的T细胞；实验组1(质子泵抑制剂剂量梯度)：将B16细胞消化、计数铺于96孔板，每孔3×103个细胞，每孔加入6×104个小鼠脾细胞，加入CD3抗体(2μg/ml)活化共培养体系中的T细胞；实验组2(PD-L1抗体剂量梯度)：将B16细胞消化、计数铺于96孔板，每孔3×103个细胞，每孔加入6×104个小鼠脾细胞，加入CD3抗体(2μg/ml)活化共培养体系中的T细胞。
对照组不加药处理，其他操作同实验组。实验组1固定PD-L1抗体的剂量不变，分别加入奥美拉唑0、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μM和埃索美拉唑0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100μM，正常条件下培养4天，确定奥美拉唑和埃索美拉唑的剂量依赖曲线，得出药物制剂中质子泵抑制剂的有效剂量。实验组2固定质子泵抑制剂的剂量不变，分别加入PD-L1抗体0、0.001、0.01、0.1μg，正常条件下培养4天，确定PD-L1抗体的剂量依赖曲线，得出药物制剂中PD-L1抗体的有效剂量。
2.实验结果：
从图5A中可以看出，药物制剂中PD-L1抗体的有效剂量应大于0.005μg/ml，质子泵抑制剂奥美拉唑的有效剂量应大于50μM。从图5B中可以看出，药物制剂中PD-L1抗体的有效剂量应大于0.005μg/ml，质子泵抑制剂埃索美拉唑的有效剂量应大于25μM。
实施例6：质子泵抑制剂抑制皮下移植瘤生长并增强PD-L1抗体疗效。
1.实验步骤：
对照组(溶剂组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，每次在实验组给药时，对照组均给予药物溶剂当做对照；实验组1(奥美拉唑组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，给予奥美拉唑，给药剂量为50mg/kg，每2天给药1次；实验组2(PD-L1抗体组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，给予PD-L1抗体，给药剂量为10mg/kg，每7天给药1次；实验组3(活性成分组合组/联合治疗组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，给予PD-L1抗体和奥美拉唑进行联合治疗，PD-L1抗体的给药剂量为10mg/kg，每7天给药1次，奥美拉唑的给药剂量为50mg/kg，每2天给药一次；每2-3天用游标卡尺测量一次移植瘤体积，体积计算公式为1/2L*W2。同时，每2-3天测量一次小鼠体重。
2.实验结果：
从图6A中可以看出，单独施用质子泵抑制剂奥美拉唑对皮下移植瘤的生长就表现出显著的抑制作用，而PD-1轴结合拮抗剂与质子泵抑制剂联用后可以显著增加其疗效。从图6B中可以看出，在本剂量下联合使用PD-1轴结合拮抗剂和质子泵抑制剂未对小鼠体重产生显著影响，进而可以推知在本剂量下的两种活性成分的联用不会产生明显的毒性作用。
实施例7：质子泵抑制剂增强PD-1轴结合拮抗剂对皮下移植瘤肺转移的抑制作用。
1.实验步骤：
为了高效地定量分析药物处理对肿瘤细胞转移能力的影响，在LLC小鼠非小细胞肺癌细胞系的基础上构建稳定表达红色荧光蛋白的LLC-t2细胞系。具体构建方法如下：
1)293T细胞铺板：每孔2×105个细胞，一般是细胞铺板14～16h后进行转染，细胞密度约为70％～80％；
2)DNA(体积)+dH2O＝40μl，MSCV-t2，1μg/pMD2.G，0.125μg/pCgp，1μg；
3)吸取10μl的CaCl2(1.25M)，加入到离心管中，然后迅速加入50μl的2×HBS，用200μl的移液器从离心管的底部连续地吹泡，使沉降的DNA分散；
4)室温静置2～3min，然后吸取100μl混匀的磷酸钙转染试剂加入到铺好细胞的24孔板内；
5)转染6～8h，换液，吸去转染试剂，每孔加入1ml新鲜的完全培养基继续培养；
6)36h后可观察荧光，估计转染效果；
7)48h后收病毒液(转染后的293T细胞上清)；
8)病毒侵染(24孔)：LLC细胞，每孔铺板1×105细胞，铺板16h后，吸去孔板内的培养基，每孔按100μl新鲜的DMEM+200μl病毒液，37℃培养箱内侵染4～6h，然后吸去带病毒液的培养基，加入1ml新鲜的培养基继续培养，一般病毒侵染48h后就能观察到荧光(注：polybrene终浓度：6μg/ml病毒液)；
9)侵染48h后，开始进行药物筛选：细胞加嘌呤霉素(puro)筛选3d后，可直接将细胞从24孔内传代出，按1:2～1:3进行传代，将细胞铺入新的24孔，铺板20h后，进行第2次筛选，筛选好的细胞经流式验证后即可扩大培养用于后续实验。
对照组(溶剂组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射LLC-t2肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，每次在实验组给药时，对照组均给予药物溶剂当做对照；实验组1(奥美拉唑组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射LLC-t2肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，给予奥美拉唑，给药剂量为50mg/kg，每2天给药1次；实验组2(PD-L1抗体组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射LLC-t2肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，给予PD-L1抗体，给药剂量为10mg/kg，每7天给药1次；实验组3(活性成分组合组/联合治疗组)：C57BL/6小鼠右后肢背部皮下注射LLC-t2肿瘤细胞系，等到肿瘤组织体积达到200mm3后，给于PD-L1抗体和奥美拉唑进行联合治疗，PD-L1抗体的给药剂量为10mg/kg，每7天给药1次，奥美拉唑的给药剂量为50mg/kg，每2天给药一次。
当对照组的肿瘤体积达到2000mm3时，将小鼠用CO2安乐处死，平铺于泡沫板上，取4根针头固定小鼠四肢，用剪刀在腹腔处横向剪开，然后用镊子将腹腔切口撕开并将皮与腹膜稍微分离，后延切口中线将腹腔和胸腔小心剪开，用镊子撕开胸腔和胸膜，找到肺部，用镊子夹紧肺部和心脏连接处，用力将肺部撕下，取到较为完整的肺。将肺组织在PBS中漂洗2遍，吸干水分后放入12孔板中，在倒置荧光显微镜下观察对照组和实验组小鼠肺组织中的转移数和转移面积，用ImageJ进行面积和转移点数统计。
2.实验结果：
从图7中可以看出，不但单独施用奥美拉唑可以抑制LLC肿瘤细胞系的肺转移，而且可以增强PD-1轴结合拮抗剂的对LLC皮下移植瘤肺转移的抑制作用。

Claims (4)

1.一种活性成分的组合：
1）质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐或同位素标记物；和
2）PD-1轴结合拮抗剂；
所述质子泵抑制剂为奥美拉唑；
所述PD-1轴结合拮抗剂为atezolizumab。
2.根据权利要求1所述的活性成分的组合，其特征在于：
所述质子泵抑制剂或其药学上可接受的盐或同位素标记物与所述PD-1轴结合拮抗剂的重量比为0.05~350:1。
3.一种药物制剂，其包含根据权利要求1或2所述的活性成分的组合，以及药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求1或2所述的活性成分的组合或根据权利要求3所述的药物制剂在制备用于预防、控制和/或治疗肿瘤的药物中的用途；
所述肿瘤为非小细胞肺癌。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090227633A1 (en) * 2008-03-04 2009-09-10 Bassam Damaj Methods to inhibit tumor cell growth by using proton pump inhibitors
CN109260475A (zh) * 2018-10-24 2019-01-25 朱峰 一种抗非小细胞肺癌的药物组合物

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6693125B2 (en) * 2001-01-24 2004-02-17 Combinatorx Incorporated Combinations of drugs (e.g., a benzimidazole and pentamidine) for the treatment of neoplastic disorders
US7419996B2 (en) * 2003-08-13 2008-09-02 The University Of Houston Parenteral and oral formulations of benzimidazoles
DE102005047616A1 (de) * 2005-10-05 2007-05-31 Bayer Healthcare Ag Kombination
CN104546845A (zh) * 2015-02-09 2015-04-29 南京格耀生物科技有限公司 雷贝拉唑钠在制备抑制肿瘤细胞转移和扩散的药物中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090227633A1 (en) * 2008-03-04 2009-09-10 Bassam Damaj Methods to inhibit tumor cell growth by using proton pump inhibitors
CN109260475A (zh) * 2018-10-24 2019-01-25 朱峰 一种抗非小细胞肺癌的药物组合物

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Combination of esomeprazole with chemotherapeutics results in more pronounced cytotoxic effect via apoptosis on A549 nonsmall-cell lung cancer cell line";Yilmaztepe Oral等;《TURKISH JOURNAL OF BIOLOGY》;20160922;第41卷(第1期);第231-241页 *
"Omeprazole, a Gastric Proton Pump Inhibitor, Inhibits Melanogenesis by Blocking ATP7A Trafficking";Mary S. Matsui等;《Journal of Investigative Dermatology》;20141113;第135卷(第3期);第834-841页 *
"PD-1/PD-L1在结直肠癌中的研究进展";任中华等;《中国肿瘤生物治疗杂志》;20171031;第24卷(第10期);第1134-1138页 *
"PD-1/PD-L1通路相关药物在恶性黑色素瘤治疗中的研究进展";路宜玮等;《转化医学电子杂志》;20180830;第5卷(第8期);第44-48页 *
"Proton pump inhibitor ilaprazole suppresses cancer growth by targeting T-cell-originated protein kinase";Zheng MZ等;《ONCOTARGET》;20170327;第8卷(第24期);第39143-39153页 *
"The apoptosis-inducing effect of gastrin on colorectal cancer cells relates to an increased IEX-1 expression mediating NF-kappa B inhibition";Sebens Müerköster S等;《Oncogene》;20070820;第27卷(第8期);第1122-1134页 *

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