CN111505311A - 一组胚胎反复种植失败的生物标志物、其筛选方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一组胚胎反复种植失败的生物标志物、其筛选方法及应用，属于医学和蛋白质组学技术领域。本发明的胚胎反复种植失败的生物标志物，鉴定5075个可信蛋白，与妊娠阳性组相比，胚胎反复种植失败组中鉴定到的1.3倍以上表达的差异蛋白共66个，其中上调蛋白14个，下调蛋白52个。本发明还公开了上述胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法及应用。本发明首次提供了一组胚胎反复种植失败的生物标志物，可以为胚胎反复种植失败患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植时机提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。

Description

一组胚胎反复种植失败的生物标志物、其筛选方法及应用
技术领域
本发明涉及一组胚胎反复种植失败的生物标志物、其筛选方法及应用，属于医学和蛋白质组学技术领域。
背景技术
不孕不育是继心脑血管疾病和肿瘤后的世界第三大疑难病种，严重影响人类健康与社会和谐。我国育龄人群中，不孕不育率已经高达12.5％，而在经济发达的地区，不孕不育率甚至已经超过15％。这不仅严重干扰患者身心健康和家庭幸福，同时也给社会稳定和全民医疗卫生等诸多方面带来严峻挑战。
胚胎种植过程中，良好种植潜能的胚胎及容受性良好的子宫内膜是胚胎种植成功不可或缺的因素。子宫内膜与胚胎的交互对话最终指引胚胎的接合、附着和侵袭，这是胚胎成功种植及随后形成正常胎盘所必需的。反复种植失败(Recurrent ImplantationFailure，RIF)是行辅助生殖后导致妊娠失败的最常见原因之一。关于RIF的明确定义目前仍存在争议，国内外尚未形成统一标准。我国国内较为公认的标准为：经历≥3个取卵周期，且每个周期均有优质胚胎移植；或经历2-6个取卵周期，移植的优质胚胎数目≥6个，着床失败或妊娠丢失的病理生理状态。鉴于RIF患者接受多个高质量优质胚胎但未成功妊娠，可见RIF患者妊娠失败主要在于患者的内膜微环境失衡所致。建立高效准确地评估RIF患者的内膜微环境的评价方法，将有助于大大提高RIF妊娠成功几率。
子宫内膜微环境中的多种蛋白质分子，包括细胞黏附分子(如整合素(intergrins)、选择素(selectins)、钙黏蛋白(cadherins)与细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1))，细胞因子(白血病抑制因子(leukemiainhibitory factor,LIF)、前列腺素(prostaglandins,PGs)、白细胞介素(interleukins,ILs))，激素及其受体(雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesteronereceptor,PR)，降钙素(calcitonin)、瘦素(leptin)及其受体)以及其它生长因子等均参与内膜蜕膜化、胚胎黏附、侵袭、植入和免疫耐受等各个妊娠相关分子事件。除此之外，其它某些尚未鉴定的内膜蛋白分子同样在胚胎种植，螺旋动脉重铸、胎盘形成等过程中发挥重要作用。这些蛋白分子的表达和功能异常均有可能诱导RIF的发生和发展。全面评估RIF患者内膜蛋白表达水平，有利于寻找更加精准的靶向诊疗分子。
蛋白质组学是近年来兴起的热门学科，已逐渐成为研究细胞、组织或体液中的所有蛋白质组成及其功能重要手段，具备大规模、高通量、系统化等特点，不仅可以用于定量反应蛋白质组的表达谱，同时可以定性揭示蛋白定位、功能和修饰如酰基化、泛素化、磷酸化或糖基化等信息。同位素标记相对和绝对定量技术(isobaric Tags for Relative andAbsolute Quantification，简称iTRAQ)是一种基于体外同种同位素的标记技术，对样本蛋白进行定性和定量分析的方法。该技术常被用于寻找和筛选不同样本间的差异表达蛋白，结合差异蛋白生物通路分析、蛋白功能注释等生物信息学分析揭示机体组织、细胞生理功能。虽然目前有过子宫内膜容受性的生物标志物的相关报道，但都属于单一的容受性标志物，检测准确率有限、特异性不高。
近年来，一些内膜容受性相关标志物也被发现，并且有一些也已经被应用于临床探索阶段，但是单一的容受性标志物检测准确率有限、特异性不高。这些容受性相关分子大致可分为细胞黏附分子(细胞外基质受体如整合素(intergrins)、选择素(selectins)、钙黏蛋白(cadherins)与细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1))、细胞因子(白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、前列腺素(prostaglandins,PGs)、白细胞介素(interleukins,ILs))、激素及其受体(雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)，降钙素(calcitonin)、瘦素(leptin)及其受体等，参与内膜准备、胚胎黏附、侵袭、植入和免疫耐受等各个妊娠相关分子事件。这些分子指标常被用作单一指标或者简单组合，在一定程度上解决了部分患者的临床问题。但由于疾病发展的个体化差异，这些单指标检测的特异性和灵敏性也受到质疑，因为并不是所有的不孕患者都存在这些功能相关分子异常，许多未知的尚未被关注的功能分子有待进一步挖掘与开发。
鉴于此，有必要研发一组子宫内膜容受性的生物标志物，以解决现有技术的不足，以期提高胚胎反复种植失败患者的早期发现和诊断，并提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
发明内容
本发明的目的之一，是提供一组胚胎反复种植失败的生物标志物。本发明首次提供了一组胚胎反复种植失败的生物标志物，可以为不孕症患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植时机提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一组胚胎反复种植失败的生物标志物，鉴定5075个可信蛋白，与妊娠阳性组相比，妊娠阴性组中鉴定到的1.3倍以上表达的差异蛋白共66个，其中上调蛋白14个，下调蛋白52个，上调蛋白如下：
S1、检索号Q9Y3Z3，蛋白注释为Deoxynucleoside triphosphatetriphosphohydrolase SAMHD1，中文名称为脱氧核苷三磷酸三磷酸水解酶SAMHD1；
S2、检索号Q8TD06，蛋白注释为Anterior gradient protein 3，中文名称为前梯度蛋白3；
S3、检索号为P04275，蛋白注释为von Willebrand factor，中文名称为血管假性血友病因子；
S4、检索号为P31939，蛋白注释为Bifunctional purine biosynthesis proteinPURH，中文名称为双功能嘌呤生物合成蛋白PURH；
S5、检索号为Q14194，蛋白注释为Dihydropyrimidinase-related protein 1，中文名称为二氢嘧啶酶相关蛋白-1；
S6、检索号为P35580，蛋白注释为Myosin-10，中文名称为肌球蛋白-10；
S7、检索号为P27348，蛋白注释为14-3-3 protein theta，中文名称为15-3-3蛋白θ；
S8、检索号为Q9BRX8，蛋白注释为Peroxiredoxin-like 2A，中文名称为过氧化物酶类蛋白2A；
S9、检索号为Q9Y2T3，蛋白注释为Guanine deaminase，中文名称为鸟嘌呤脱氨酶；
S10、检索号为P24821，蛋白注释为Tenascin，中文名称为细胞粘合素/肌腱蛋白；
S11、检索号为P08473，蛋白注释为Neprilysin，中文名称为脑啡肽酶；
S12、检索号为O43175，蛋白注释为D-3-phosphoglycerate dehydrogenase，中文名称为D-3-磷酸甘油酸脱氢酶；
S13、检索号为P23219，蛋白注释为Prostaglandin G/H synthase 1，中文名称为前列腺素G/H合成酶1；
S14、检索号为P21266，蛋白注释为GlutathioneS-transferase Mu 3，中文名称为谷胱甘肽S-转移酶μ3；
下调蛋白如下：
X1、检索号为Q9NZ08，蛋白注释为Endoplasmic reticulum aminopeptidase 1，中文名称为内质网氨肽酶1；
X2、检索号为Q9BQE3，蛋白注释为Tubulin alpha-1C chain，中文名称为微管蛋白α-1C链；
X3、检索号为Q9Y2J2，蛋白注释为Band 4.1-like protein 3，中文名称为带4.1样蛋白3；
X4、检索号为Q53FZ2，蛋白注释为Acyl-coenzyme A synthetase ACSM3,mitochondrial，中文名称为酯酰辅酶A合成酶3，线粒体；
X5、检索号为Q14894，蛋白注释为Ketimine reductase mu-crystallin，中文名称为酮亚胺还原酶粘蛋白；
X6、检索号为Q9NYL4，蛋白注释为Peptidyl-prolyl cis-trans isomeraseFKBP11，中文名称为肽基脯氨酰顺反异构酶FKBP11；
X7、检索号为P33121，蛋白注释为Long-chain-fatty-acid--CoA ligase 1，中文名称为长链脂肪酸辅酶A连接酶-1；
X8、检索号为Q08257，蛋白注释为Quinone oxidoreductase，中文名称为醌氧化还原酶；
X9、检索号为P13591，蛋白注释为Neural cell adhesion molecule 1，中文名称为神经细胞黏附分子-1；
X10、检索号为P02765，蛋白注释为Alpha-2-HS-glycoprotein，中文名称为热稳定性糖蛋白；
X11、检索号为Q14624，蛋白注释为Inter-alpha-trypsin inhibitor heavychain H4，中文名称为间α胰蛋白酶抑制剂重链H4；
X12、检索号为P08575，蛋白注释为Receptor-typetyrosine-proteinphosphatase C，中文名称为受体型酪氨酸酶蛋白磷酸酶C；
X13、检索号为O14558，蛋白注释为Heat shock protein beta-6，中文名称为热休克蛋白β-6；
X14、检索号为P08253，蛋白注释为72kDa type IV collagenase，中文名称为72kDa Ⅳ型胶原酶；
X15、检索号为P06310，蛋白注释为Immunoglobulin kappa variable 2-30，中文名称为免疫球蛋白kappa变量2-30；
X16、检索号为O76021，蛋白注释为Ribosomal L1 domain-containing protein1，中文名称为含有核糖体L1结构域的蛋白1；
X17、检索号为Q9Y3U8，蛋白注释为60S ribosomal protein L36，中文名称为60S核糖体蛋白L36；
X18、检索号为P19827，蛋白注释为Inter-alpha-trypsin inhibitor heavychain H1，中文名称为间α胰蛋白酶抑制剂重链H1；
X19、检索号为P02774，蛋白注释为Vitamin D-binding protein，中文名称为维生素D结合蛋白；
X20、检索号为P05141，蛋白注释为ADP/ATP translocase 2，中文名称为ADP/ATP转位酶2；
X21、检索号为P50542，蛋白注释为Peroxisomal targeting signal 1receptor，中文名称为过氧化物酶体靶向信号1受体；
X22、检索号为Q9Y490，蛋白注释为Talin-1，中文名称为踝蛋白-1；
X23、检索号为O15382，蛋白注释为Branched-chain-amino-acidaminotransferase,mitochondrial，中文名称为支链氨基酸转氨酶，线粒体；
X24、检索号为Q9HBL0，蛋白注释为Tensin-1，中文名称为张力蛋白1；
X25、检索号为P55008，蛋白注释为Allograft inflammatory factor 1，中文名称为同种异体移植物炎症因子-1；
X26、检索号为Q5JRX3，蛋白注释为Presequence protease,mitochondrial，中文名称为前序列蛋白酶，线粒体；
X27、检索号为O00483，蛋白注释为Cytochrome c oxidase subunit NDUFA4，中文名称为细胞色素c氧化酶亚基NDUFA4；
X28、检索号为P08195，蛋白注释为4F2 cell-surface antigen heavy chain，中文名称为细胞表面抗原4F2重链；
X29、检索号为O15085，蛋白注释为Rho guanine nucleotide exchange factor11，中文名称为ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子11；
X30、检索号为P25311，蛋白注释为Zinc-alpha-2-glycoprotein，中文名称为锌-α2-糖蛋白；
X31、检索号为P37059，蛋白注释为Estradiol 17-beta-dehydrogenase 2，中文名称为雌二醇17β-脱氢酶；
X32、检索号为P82930，蛋白注释为28S ribosomal protein S34,mitochondrial，中文名称为28S核糖体蛋白S34，线粒体；
X33、检索号为O95870，蛋白注释为Protein ABHD16A，中文名称为ABHD16A蛋白；
X34、检索号为P02766，蛋白注释为Transthyretin，中文名称为甲状腺素运载蛋白；
X35、检索号为P62753，蛋白注释为40S ribosomal protein S6，中文名称为40S核糖体蛋白S6；
X36、检索号为P62266，蛋白注释为40S ribosomal protein S23，中文名称为40S核糖体蛋白S23；
X37、检索号为P50914，蛋白注释为60S ribosomal protein L14，中文名称为60S核糖体蛋白L14；
X38、检索号为P27169，蛋白注释为Serum paraoxonase/arylesterase 1，中文名称为血清对氧磷酶/芳香酯酶-1；
X39、检索号为Q08426，蛋白注释为Peroxisomal bifunctional enzyme，中文名称为过氧化物酶体双功能酶；
X40、检索号为P35542，蛋白注释为Serum amyloid A-4 protein，中文名称为血清淀粉样蛋白A-4；
X41、检索号为P05090，蛋白注释为Apolipoprotein D，中文名称为载脂蛋白D；
X42、检索号为Q16363，蛋白注释为Laminin subunit alpha-4，中文名称为层黏蛋白亚基α-4；
X43、检索号为P19652，蛋白注释为Alpha-1-acid glycoprotein 2，中文名称为α酸性糖蛋白-2；
X44、检索号为Q9UI08，蛋白注释为Ena/VASP-like protein，中文名称为Ena/VASP样蛋白；
X45、检索号为P17931，蛋白注释为Galectin-3，中文名称为半乳糖凝集素-3；
X46、检索号为Q9NX58，蛋白注释为Cell growth-regulating nucleolarprotein，中文名称为细胞生长调节核仁蛋白；
X47、检索号为P48444，蛋白注释为Coatomer subunit delta，中文名称为套体素亚基ε；
X48、检索号为P10809，蛋白注释为60kDa heat shock protein,mitochondrial，中文名称为60kDa热休克蛋白线粒体；
X49、检索号为P53396，蛋白注释为ATP-citrate synthase，中文名称为ATP-柠檬酸合酶；
X50、检索号为Q14978，蛋白注释为Nucleolar and coiled-body phosphoprotein1，中文名称为核仁螺旋体磷酸化蛋白1；
X51、检索号为Q9Y6Q2，蛋白注释为Stonin-1，中文名称为石蛋白-1；
X52、检索号为Q8TB45，蛋白注释为DEP domain-containing mTOR-interactingprotein，中文名称为含有DEP结构域的mTOR相互作用蛋白。
本发明的胚胎反复种植失败的生物标志物的有益效果是：
本发明首次提供了一组胚胎反复种植失败的生物标志物，可以为不孕症患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植时机提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
本发明的目的之二，是提供上述胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法。本发明首次通过同位素标记相对和绝对定量(isobaric Tags for Relative and AbsoluteQuantification，简称iTRAQ)蛋白质组学技术筛选在胚胎反复种植失败中差异表达的蛋白质，为胎反复种植失败生物标志物的筛选开辟了一条新的途径，为不孕症患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植时机提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：上述胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，包括如下步骤：
步骤1：蛋白质提取；
步骤2：对步骤1提取后的蛋白质进行蛋白质定量、FASP酶解、iTRAQ试剂标记、第一维高pH反向色谱分离、第二维反相液质联用质谱分析；
步骤3：对步骤2得到的数据进行进行检索和分析，筛选出差异大于1.3倍的差异蛋白，即得到胚胎反复种植失败的生物标志物。
本发明的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法的有益效果：
本发明首次通过同位素标记相对和绝对定量(isobaric Tags for Relative andAbsolute Quantification，简称iTRAQ)蛋白质组学技术筛选在胚胎反复种植失败中差异表达的蛋白质，为胎反复种植失败生物标志物的筛选开辟了一条新的途径，为不孕症患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植时机提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤1中，所述蛋白质提取的具体方法为：取300mg子宫内膜的组织样本，用液氮研磨成粉末，加入500μL的L3裂解液和5μL苯甲基磺酰氟溶液，溶解后，超声处理，离心，收集上清液；取250μL上清液，加入1mL丙酮，-20℃沉淀过夜，再离心，倒去上清液，干燥，即得到提取后的蛋白质样品。
采用上述进一步的有益效果是：采用上述方法，可以将子宫内膜的组织样本中的蛋白质提取出来。
更进一步，所述L3裂解液由如下方法配制得到：取尿素210g、硫脲76g、三羟甲基氨基甲烷1.2g和十二烷基硫酸钠1g，调节pH值为8.4，纯水定容到500ml；所述苯甲基磺酰氟溶液的浓度为1.32mol/L；所述超声处理的功率为300w，开1s，停1s，共10min；所述离心的转速均为12000r/min，时间均为20min；所述干燥的温度为25℃，时间为20s。
进一步，步骤2中，所述蛋白质定量的具体方法为：在步骤1提取后的蛋白质中，按质量体积比为10mg:1ml，加入L3裂解液，溶解后，超声处理，吸出上清液；分别取5μg、10μg、15μg、20μg、25μg、30μg和35μg的牛血清白蛋白制作标准曲线；取2μL步骤1提取后的蛋白质样品，加入1mL考马斯亮蓝G-250染色剂进行染色，涡旋振荡20s，充分混匀后测定595nm下的吸光值，根据标准曲线计算各样品的蛋白质浓度。
更进一步，所述L3裂解液由如下方法配制得到：取尿素210g、硫脲76g、三羟甲基氨基甲烷1.2g和十二烷基硫酸钠1g，调节pH值为8.4，纯水定容到500ml；所述超声处理的功率为100w，开0.8s，关0.8s，共4个循环。
进一步，步骤2中，所述FASP酶解具体为：
取200μg定量后的蛋白质样品，加入4μl三羧乙基膦还原剂，于60℃反应1h；
加入2μl甲基甲烷巯基磺酸阻断剂，室温反应30min；
离心，弃掉底部溶液后，加入pH值为8.5、100μl 8mol/L的尿素溶液，弃掉底部溶液，再重复本操作1次；
加入100μl 0.25mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，弃掉底部溶液后，再重复本操作2次；
加入50μl 0.5mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，加入2μg胰蛋白酶，37℃反应过夜；
加入2μg胰蛋白酶，37℃反应4h，离心，得沉淀物和上清液；
将沉淀物加入50μl 0.5mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，离心，与前一步离心后的上清液合并，得到酶解后的样品。
采用上述进一步的有益效果是：FASP酶解，即滤器辅助样品制备(Filter aidedproteome preparation,简称FASP)酶解。FASP酶解是最近几年发展起来的一种对质谱样品前期处理的方法。该方法首先通过SDS完全溶解蛋白质组样品，然后通过超滤装置用8mol/L尿素缓冲液将SDS缓冲液替换出来，避免SDS对蛋白质消化和质谱分析的干扰。超滤装置被认为是一个“蛋白质组反应器”，可除去去污剂，实现缓冲液的替换，减少化学修饰。随后通过两步酶切，从而实现蛋白的完全溶液酶切。
更进一步，所述离心的转速均为12000r/min，时间均为20min，温度均为4℃。
采用上述更进一步的有益效果是：采用上述参数，离心的效果更好。
进一步，步骤2中，所述第一维高pH反向色谱分离具体为：流动相A为ddH2O，pH值为10，色谱纯氨水调节pH值；流动相B为80％乙腈，20％ddH2O，pH值为10，色谱纯氨水调节pH值；先用95％体积的A相和5％体积的B相平衡柱子30min，然后将标记后抽干的混合多肽用100μl的A相复溶；进样，以0.2ml/min的流速进行梯度洗脱；梯度洗脱条件如下，其中流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min，5％B；5min-10min，5％-10％B；10min-60min，10％-40％B；60min-65min，40％-95％B；65min-75min，保持95％B；75min-85min，95％-5％B；整个洗脱过程在214nm吸光度下进行监测，从线性梯度开始根据峰型收取20个组分，每1管每60s接1次，梯度为85min，反复循环接样；根据峰型和时间共收取20个组分，真空干燥后，进行第二维反相液质联用质谱分析。
采用上述更进一步的有益效果是：采用上述参数，将iTRAQ标记处理后的肽段分离更加充分。
进一步，步骤2中，步骤2中，所述第二维反相液质联用质谱分析具体为：流动相A为0.1％体积甲酸，流动相B为0.1％体积甲酸，80％体积乙腈；肽段用样品溶解液溶解，所述样品溶解液为0.1％体积甲酸和5％体积乙腈，充分振荡涡旋，13500rpm，4℃离心20min，每个组分取3μg上清液进行第二维反相液质联用质谱分析；每个组分分析时间为65min，流速为300nL/min；梯度洗脱条件如下，其中流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min，5％B；5min-8min，5％-10％B；8min-40min，10％-30％B；40min-45min，30％-35％B；45min-50min，35％-90％B；50min-55min，保持90％B；55min-56min，90％-5％B；56min-65min，保持5％B；质谱参数：分离后的肽段直接进入质谱仪Thermo Scientific Q Exactive进行在线检测，具体参数如下：
一级质谱参数：分辨率70,000atm/z，最大离子强度：3e6，最大注入时间：100ms，扫描范围：350m/z-1800m/z；
二级质谱参数：分辨率：17,500atm/z，最大离子强度：5e4，最大注入时间：120ms，母离子选择20个，碰撞能量：30ev。
采用上述更进一步的有益效果是：采用上述方法，可以将肽段进行快速鉴定。
本发明的目的之三，是提供一种用于检测胚胎反复种植失败的试剂盒。本发明的用于检测胚胎反复种植失败的试剂盒中含有上述胚胎反复种植失败的生物标志物，可以为胚胎反复种植失败患者的早期发现和诊断提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种用于检测胚胎反复种植失败的试剂盒，包括上述的胚胎反复种植失败的生物标志物。
本发明的用于检测胚胎反复种植失败的试剂盒的有益效果：
本发明的用于检测胚胎反复种植失败的试剂盒中含有上述胚胎反复种植失败的生物标志物，可以为胚胎反复种植失败患者的早期发现和诊断提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
附图说明
图1为本发明的实施例中，牛血清白蛋白的标准曲线。
图2为本发明的实施例中，胚胎反复种植失败的生物标志物的差异蛋白表达的热图。
具体实施方式
以下结合具体附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
一、入排标准
入组标准：女方年龄小于等于40岁、月经周期规律(25-31天)、自然周期、月经周期19-21天时取样、内膜腺体与间质发育同步、取样时内膜厚度大于等于7毫米、内膜取样与胚胎移植间隔小于等于3个月。
排除标准：患者患有亲本染色体异常、地中海贫血、子宫病变(疤痕子宫、子宫肌瘤、子宫内膜异位症)、盆腔黏连、复发性流产、胚胎反复种植失败任一疾病。
定义：妊娠阳性组，胚胎移植3-4周后，B超下有可见孕囊及胎心，妊娠满三个月未流产；胚胎反复种植失败组：经历3个及以上取卵周期，且每个周期均有优质胚胎移植，均未获得临床妊娠的病理状态。
二、依据上述入组标准，本实验共招募妊娠阳性组9例、胚胎反复种植失败组8例。患者基本信息如表1所示：
表1患者基本信息
组别 年龄(岁) 内膜厚度(毫米) 既往取卵周期数 既往移植胚胎数
妊娠阳性组(9例) 32.6±4.5 10.0±0.7 0 0
妊娠阴性组(8例) 33.6±5.3 9.0±1.3 3.8±1.5 7.4±2.4
三、胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选
上述样本进行胚胎反复种植失败的内膜生物标志物的筛选方法，包括如下步骤：
步骤1：蛋白质提取，具体方法为：取300mg子宫内膜的组织样本，用液氮研磨成粉末，加入500μL的L3裂解液和5μL苯甲基磺酰氟溶液，溶解后，超声处理，离心，收集上清液；取250μL上清液，加入1mL丙酮，-20℃沉淀过夜，再离心，倒去上清液，干燥，即得到提取后的蛋白质样品。其中，所述L3裂解液由如下方法配制得到：取尿素210g、硫脲76g、三羟甲基氨基甲烷1.2g和十二烷基硫酸钠1g，调节pH值为8.4，纯水定容到500ml；所述苯甲基磺酰氟溶液的浓度为1.32mol/L；所述超声处理的功率为300w，开1s，停1s，共10min；所述离心的转速均为12000r/min，时间均为20min；所述干燥的温度为25℃，时间为20s。
随机从两组标本中各抽取6例标本，进行以下实验。
步骤2：对步骤1提取后的蛋白质进行蛋白质定量、FASP酶解、iTRAQ试剂标记、第一维高pH反向色谱分离、第二维反相液质联用质谱分析。
其中，所述蛋白质定量的具体方法为：在步骤1提取后的蛋白质样品中，按质量体积比为10mg:1ml，加入L3裂解液，溶解后，超声处理，吸出上清液；分别取5μg、10μg、15μg、20μg、25μg、30μg和35μg的牛血清白蛋白制作标准曲线；取2μL步骤1提取后的蛋白质样品，加入1mL考马斯亮蓝G-250染色剂进行染色，涡旋振荡20s，充分混匀后测定595nm下的吸光值，根据图1的标准曲线，计算各样品的蛋白浓度。所述L3裂解液由如下方法配制得到：取尿素210g、硫脲76g、三羟甲基氨基甲烷1.2g和十二烷基硫酸钠1g，调节pH值为8.4，纯水定容到500ml；所述超声处理的功率为100w，开0.8s，关0.8s，共4个循环。
所述FASP酶解具体为：
取200μg定量后的蛋白质样品，加入4μl三羧乙基膦还原剂，于60℃反应1h；
加入2μl甲基甲烷巯基磺酸阻断剂，室温反应30min；
离心，弃掉底部溶液后，加入pH值为8.5、100μl 8mol/L的尿素溶液，弃掉底部溶液，再重复本操作1次；
加入100μl 0.25mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，弃掉底部溶液后，再重复本操作2次；
加入50μl 0.5mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，加入2μg胰蛋白酶，37℃反应过夜；
加入2μg胰蛋白酶，37℃反应4h，离心，得沉淀物和上清液；
将沉淀物加入50μl 0.5mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，离心，与前一步离心后的上清液合并，得到酶解后的样品。
所述第一维高pH反向色谱分离具体为：流动相A为ddH2O，pH值为10，色谱纯氨水调节pH值；流动相B为80％乙腈，20％ddH2O，pH值为10，色谱纯氨水调节pH值；先用95％体积的A相和5％体积的B相平衡柱子30min，然后将标记后抽干的混合多肽用100μl的A相复溶；进样，以0.2ml/min的流速进行梯度洗脱；梯度洗脱条件如下，其中流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min，5％B；5min-10min，5％-10％B；10min-60min，10％-40％B；60min-65min，40％-95％B；65min-75min，保持95％B；75min-85min，95％-5％B；整个洗脱过程在214nm吸光度下进行监测，从线性梯度开始根据峰型收取20个组分，每1管每60s接1次，梯度为85min，反复循环接样；根据峰型和时间共收取20个组分，真空干燥后，进行第二维反相液质联用质谱分析。
所述第二维反相液质联用质谱分析具体为：流动相A为0.1％体积甲酸，流动相B为0.1％体积甲酸，80％体积乙腈；肽段用样品溶解液溶解，所述样品溶解液为0.1％体积甲酸和5％体积乙腈，充分振荡涡旋，13500rpm，4℃离心20min，每个组分取3μg上清液进行第二维反相液质联用质谱分析；梯度洗脱条件如下，其中流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min，5％B；5min-8min，5％-10％B；8min-40min，10％-30％B；40min-45min，30％-35％B；45min-50min，35％-90％B；50min-55min，保持90％B；55min-56min，90％-5％B；56min-65min，保持5％B；每个组分分析时间为65min，流速为300nL/min；质谱参数：分离后的肽段直接进入质谱仪Thermo Scientific Q Exactive进行在线检测，具体参数如下：
一级质谱参数：分辨率70,000atm/z，最大离子强度：3e6，最大注入时间：100ms，扫描范围：350m/z-1800m/z；
二级质谱参数：分辨率：17,500atm/z，最大离子强度：5e4，最大注入时间：120ms，母离子选择20个，碰撞能量：30ev。
步骤3：对步骤2得到的数据进行进行检索和分析，最终共鉴定5075个可信蛋白，与妊娠阳性组相比，胚胎反复种植失败组中鉴定到的1.3倍以上表达的差异蛋白共66个，其中上调蛋白14个，下调蛋白52个。
表2胚胎反复种植失败组与妊娠阳性组差异蛋白汇总
Figure BDA0002475651060000171
Figure BDA0002475651060000181
由此可见，本发明首次通过同位素标记相对和绝对定量(isobaric Tags forRelative and Absolute Quantification，简称iTRAQ)蛋白质组学技术筛选在胚胎反复种植失败中差异表达的蛋白质，为胎反复种植失败生物标志物的筛选开辟了一条新的途径，为不孕症患者的早期发现和诊断、靶向干预及指导胚胎移植时机提供一种高效、快捷、特异性强、敏感性高的检测评估手段。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一组胚胎反复种植失败的生物标志物，其特征在于，鉴定5075个可信蛋白，与妊娠阳性组相比，妊娠阴性组中鉴定到的1.3倍以上表达的差异蛋白共66个，其中上调蛋白14个，下调蛋白52个，上调蛋白如下：
S1、脱氧核苷三磷酸三磷酸水解酶SAMHD1；S2、前梯度蛋白3；S3、血管假性血友病因子；S4、检索号为P31939，蛋白注释为Bifunctional purine biosynthesis protein PURH，中文名称为双功能嘌呤生物合成蛋白PURH；S5、二氢嘧啶酶相关蛋白-1；S6、肌球蛋白-10；S7、15-3-3蛋白θ；S8、过氧化物酶类蛋白2A；S9、鸟嘌呤脱氨酶；S10、细胞粘合素/肌腱蛋白；S11、脑啡肽酶；S12、D-3-磷酸甘油酸脱氢酶；S13、前列腺素G/H合成酶1；S14、谷胱甘肽S-转移酶μ3；
下调蛋白如下：
X1、内质网氨肽酶1；X2、微管蛋白α-1C链；X3、带4.1样蛋白3；X4、酯酰辅酶A合成酶3，线粒体；X5、酮亚胺还原酶粘蛋白；X6、肽基脯氨酰顺反异构酶FKBP11；X7、长链脂肪酸辅酶A连接酶-1；X8、醌氧化还原酶；X9、神经细胞黏附分子-1；X10、热稳定性糖蛋白；X11、间α胰蛋白酶抑制剂重链H4；X12、受体型酪氨酸酶蛋白磷酸酶C；X13、热休克蛋白β-6；X14、72kDaⅣ型胶原酶；X15、免疫球蛋白kappa变量2-30；X16、含有核糖体L1结构域的蛋白1；X17、60S核糖体蛋白L36；X18、间α胰蛋白酶抑制剂重链H1；X19、维生素D结合蛋白；X20、ADP/ATP转位酶2；X21、过氧化物酶体靶向信号1受体；X22、踝蛋白-1；X23、支链氨基酸转氨酶，线粒体；X24、张力蛋白1；X25、同种异体移植物炎症因子-1；X26、前序列蛋白酶，线粒体；X27、细胞色素c氧化酶亚基NDUFA4；X28、细胞表面抗原4F2重链；X29、ρ鸟嘌呤核苷酸交换因子11；X30、锌-α2-糖蛋白；X31、雌二醇17β-脱氢酶；X32、28S核糖体蛋白S34，线粒体；X33、ABHD16A蛋白；X34、甲状腺素运载蛋白；X35、40S核糖体蛋白S6；X36、40S核糖体蛋白S23；X37、60S核糖体蛋白L14；X38、血清对氧磷酶/芳香酯酶-1；X39、过氧化物酶体双功能酶；X40、血清淀粉样蛋白A-4；X41、载脂蛋白D；X42、层黏蛋白亚基α-4；X43、α酸性糖蛋白-2；X44、Ena/VASP样蛋白；X45、半乳糖凝集素-3；X46、细胞生长调节核仁蛋白；X47、套体素亚基ε；X48、60kDa热休克蛋白线粒体；X49、ATP-柠檬酸合酶；X50、核仁螺旋体磷酸化蛋白1；X51、石蛋白-1；X52、含有DEP结构域的mTOR相互作用蛋白。
2.一组胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：蛋白质提取；
步骤2：对步骤1提取后的蛋白质进行蛋白质定量、FASP酶解、iTRAQ试剂标记、第一维高pH反向色谱分离、第二维反相液质联用质谱分析；
步骤3：对步骤2得到的数据进行进行检索和分析，筛选出差异大于1.3倍的差异蛋白，即得到胚胎反复种植失败的生物标志物。
3.根据权利要求2所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，步骤1中，所述蛋白质提取的具体方法为：取300mg子宫内膜的组织样本，用液氮研磨成粉末，加入500μL的L3裂解液和5μL苯甲基磺酰氟溶液，溶解后，超声处理，离心，收集上清液；取250μL上清液，加入1mL丙酮，-20℃沉淀过夜，再离心，倒去上清液，干燥，即得到提取后的蛋白质样品。
4.根据权利要求3所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，所述L3裂解液由如下方法配制得到：取尿素210g、硫脲76g、三羟甲基氨基甲烷1.2g和十二烷基硫酸钠1g，调节pH值为8.4，纯水定容到500ml；所述苯甲基磺酰氟溶液的浓度为1.32mol/L；所述超声处理的功率为300w，开1s，停1s，共10min；所述离心的转速均为12000r/min，时间均为20min；所述干燥的温度为25℃，时间为20s。
5.根据权利要求2所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述蛋白质定量的具体方法为：在步骤1提取后的蛋白质中，按质量体积比为10mg:1ml，加入L3裂解液，溶解后，超声处理，吸出上清液；分别取5μg、10μg、15μg、20μg、25μg、30μg和35μg的牛血清白蛋白制作标准曲线；取2μL步骤1提取后的蛋白质样品，加入1mL考马斯亮蓝G-250染色剂进行染色，涡旋振荡20s，充分混匀后测定595nm下的吸光值，根据标准曲线计算各样品的蛋白质浓度。
6.根据权利要求5所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，所述L3裂解液由如下方法配制得到：取尿素210g、硫脲76g、三羟甲基氨基甲烷1.2g和十二烷基硫酸钠1g，调节pH值为8.4，纯水定容到500ml；所述超声处理的功率为100w，开0.8s，关0.8s，共4个循环。
7.根据权利要求2所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述FASP酶解具体为：
取200μg定量后的蛋白质样品，加入4μl三羧乙基膦还原剂，于60℃反应1h；
加入2μl甲基甲烷巯基磺酸阻断剂，室温反应30min；
离心，弃掉底部溶液后，加入pH值为8.5、100μl 8mol/L的尿素溶液，弃掉底部溶液，再重复本操作1次；
加入100μl 0.25mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，弃掉底部溶液后，再重复本操作2次；
加入50μl 0.5mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，加入2μg胰蛋白酶，37℃反应过夜；
加入2μg胰蛋白酶，37℃反应4h，离心，得沉淀物和上清液；
将沉淀物加入50μl 0.5mol/L的四乙基溴化铵缓冲溶液，离心，与前一步离心后的上清液合并，得到酶解后的样品。
8.根据权利要求2所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述第一维高pH反向色谱分离具体为：流动相A为ddH2O，pH值为10，色谱纯氨水调节pH值；流动相B为80％乙腈，20％ddH2O，pH值为10，色谱纯氨水调节pH值；先用95％体积的A相和5％体积的B相平衡柱子30min，然后将标记后抽干的混合多肽用100μl的A相复溶；进样，以0.2ml/min的流速进行梯度洗脱；梯度洗脱条件如下，其中流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min，5％B；5min-10min，5％-10％B；10min-60min，10％-40％B；60min-65min，40％-95％B；65min-75min，保持95％B；75min-85min，95％-5％B；整个洗脱过程在214nm吸光度下进行监测，从线性梯度开始根据峰型收取20个组分，每1管每60s接1次，梯度为85min，反复循环接样；根据峰型和时间共收取20个组分，真空干燥后，进行第二维反相液质联用质谱分析。
9.根据权利要求2所述的胚胎反复种植失败的生物标志物的筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述第二维反相液质联用质谱分析具体为：流动相A为0.1％体积甲酸，流动相B为0.1％体积甲酸，80％体积乙腈；肽段用样品溶解液溶解，所述样品溶解液为0.1％体积甲酸和5％体积乙腈，充分振荡涡旋，13500rpm，4℃离心20min，每个组分取3μg上清液进行第二维反相液质联用质谱分析；每个组分分析时间为65min，流速为300nL/min；梯度洗脱条件如下，其中流动相B的比例均为体积百分比：0min-5min，5％B；5min-8min，5％-10％B；8min-40min，10％-30％B；40min-45min，30％-35％B；45min-50min，35％-90％B；50min-55min，保持90％B；55min-56min，90％-5％B；56min-65min，保持5％B；质谱参数：分离后的肽段直接进入质谱仪Thermo Scientific Q Exactive进行在线检测，具体参数如下：
一级质谱参数：分辨率70,000at m/z，最大离子强度：3e6，最大注入时间：100ms，扫描范围：350m/z-1800m/z；
二级质谱参数：分辨率：17,500at m/z，最大离子强度：5e4，最大注入时间：120ms，母离子选择20个，碰撞能量：30ev。
10.一种用于检测胚胎反复种植失败的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的胚胎反复种植失败的生物标志物。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113804884A (zh) * 2021-09-30 2021-12-17 南通大学 Cox6c蛋白在制备早期妊娠丢失诊断的试剂盒中的应用
CN114107480A (zh) * 2021-11-22 2022-03-01 中国人民解放军总医院第六医学中心 用于反复植入失败的生物标志物和药剂

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130144114A1 (en) * 2010-01-21 2013-06-06 Equipo Ivi Investigación S.L. Diagnostic method for endometrial receptivity
RU2580629C1 (ru) * 2015-05-15 2016-04-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии и внутриклеточной локализации эзрина в эндометрии женщин с бесплодием и повторными неудачами программы эко
CN105628913A (zh) * 2016-01-13 2016-06-01 深圳中山生殖与遗传研究所 一种用于评估子宫内膜容受性的试剂盒及其使用方法
CN108132350A (zh) * 2017-11-30 2018-06-08 深圳市老年医学研究所 基于唾液蛋白质组学的肝癌生物标志物检测的方法
CN108287242A (zh) * 2017-11-30 2018-07-17 深圳市老年医学研究所 基于唾液蛋白质组学的肝癌肝郁证生物标志物检测的方法
CN109030834A (zh) * 2018-08-11 2018-12-18 南京市儿童医院 一种基于蛋白质组学的主动脉缩窄标志物检测的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130144114A1 (en) * 2010-01-21 2013-06-06 Equipo Ivi Investigación S.L. Diagnostic method for endometrial receptivity
RU2580629C1 (ru) * 2015-05-15 2016-04-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ прогнозирования рецептивности эндометрия на основании оценки экспрессии и внутриклеточной локализации эзрина в эндометрии женщин с бесплодием и повторными неудачами программы эко
CN105628913A (zh) * 2016-01-13 2016-06-01 深圳中山生殖与遗传研究所 一种用于评估子宫内膜容受性的试剂盒及其使用方法
CN108132350A (zh) * 2017-11-30 2018-06-08 深圳市老年医学研究所 基于唾液蛋白质组学的肝癌生物标志物检测的方法
CN108287242A (zh) * 2017-11-30 2018-07-17 深圳市老年医学研究所 基于唾液蛋白质组学的肝癌肝郁证生物标志物检测的方法
CN109030834A (zh) * 2018-08-11 2018-12-18 南京市儿童医院 一种基于蛋白质组学的主动脉缩窄标志物检测的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALEXANDRA P. BIELFELD, ET AL.: "A Proteome Approach Reveals Differences between Fertile Women and Patients with Repeated Implantation Failure on Endometrial Level—Does hCG Render the Endometrium of RIF Patients?", 《INT. J. MOL. SCI.》 *
IREM DEMIRAL KELE, ET AL.: "Comparison of endometrial prostanoid profiles in three infertile subgroups: the missing part of receptivity?", 《FERTILITY AND STERILITY》 *
LIEN DHAENENS, ET AL.: "Endometrial stromal cell proteome mapping in repeated implantation failure and recurrent pregnancy loss cases and fertile women.", 《RBMO》 *
SILVIA PÉREZ-DEBÉN, ET AL.: "iTRAQ comparison of proteomic profiles of endometrial receptivity.", 《JOURNAL OF PROTEOMICS》 *
李倍余，等: "反复种植失败妇女"种植窗"时期子宫内膜组织的细胞骨架蛋白质的差异表达", 《生殖医学杂志》 *
王静等: "基于蛋白组学的子宫内膜容受性研究进展", 《生殖与避孕》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113804884A (zh) * 2021-09-30 2021-12-17 南通大学 Cox6c蛋白在制备早期妊娠丢失诊断的试剂盒中的应用
CN114107480A (zh) * 2021-11-22 2022-03-01 中国人民解放军总医院第六医学中心 用于反复植入失败的生物标志物和药剂

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