CN111500664A - 一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，包括以下步骤：取新鲜动物内脏洗净，沥干，切碎后再捣碎，加入去离子水，得到混合溶液；向混合溶液加入异硫氰酸胍的溶液，振动混匀后静置；向其中加入含有二氧化硅的载体，振动混匀后静置，异硫氰酸胍使细胞裂解，细胞中释放出的核苷酸结合在二氧化硅上；将含有二氧化硅的载体取出，余下溶液待用，对其使用洗脱液进行吸脱，分离后得到纯化的核苷酸；本发明的有益效果是：多肽可以和核苷酸先后进行提取，通过二氧化硅吸附的方式来对核苷酸进行提取，此种载体仅对核苷酸有较强的吸附力和亲和性，对其他生化成分如多糖等不吸附，同时也可以避免加入生化试剂提取时造成相互生化试剂之间产生反应的问题。
Description
技术领域
本发明涉及核苷酸和多肽提取技术领域，具体是一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法。
背景技术
核苷酸是一类由嘌呤碱或嘧啶碱、核糖或脱氧核糖以及磷酸三种物质组成的化合物，其广泛应用在医药、母婴制品、调味品和食品添加剂中。多肽是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物，肽涉及人体的激素、神经、细胞生长和生殖各领域，其重要性在于调节体内各个系统和细胞的生理功能，激活体内有关酶系，促进中间代谢膜的通透性，或通过控制DNA转录或影响特异的蛋白合成，最终产生特定的生理效应。
动物内脏中含有丰富的核苷酸和多肽，但是目前对核苷酸和多肽的提取大多是分开进行的，造成资源的浪费现象和工序的复杂，基于此，本申请提出了一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，包括以下步骤：
S1，取新鲜动物内脏洗净，沥干，切碎后再捣碎，加入去离子水，得到混合溶液；
S2，向混合溶液加入异硫氰酸胍的溶液，振动混匀后静置；
S3，向其中加入含有二氧化硅的载体，振动混匀后静置，异硫氰酸胍使细胞裂解，细胞中释放出的核苷酸结合在二氧化硅上；
S4，将含有二氧化硅的载体取出，余下溶液待用，对其使用洗脱液进行吸脱，分离后得到纯化的核苷酸；
S5，向余下溶液中加入NaCl溶液，将混合液浸提；
S6，向上述溶液加入复合蛋白酶，然后进行微波酶解；
S7，将酶解液水浴加热后，进行离心，取上层清液，冷冻干燥后即得多肽。
作为本发明进一步的方案：步骤S1中，去离子水的质量为新鲜动物内脏的12～15倍。
作为本发明再进一步的方案：步骤S2中，异硫氰酸胍溶液的浓度为4mol/L，与混合溶液的质量比为1：0.1～0.15，振动混匀后静置的时间为1h。
作为本发明再进一步的方案：步骤S3中，含有二氧化硅的载体与溶液质量比为0.1～0.15：1，载体中二氧化硅的质量比不小于7％，静置时间为0.5h。
作为本发明再进一步的方案：步骤S5中，NaCl溶液的浓度为0.4～0.5mol/L，与余下溶液的质量比为1：8～10混合，将混合液在10～15℃、搅拌速度为500～700r/min的条件下进行浸提，浸提时间为1～2h。
作为本发明再进一步的方案：步骤S6中，复合蛋白酶与溶液体积比为4.6～5.4％，酶解温度为45～55℃、微波功率为150～180W，酶解时间为1.5～2.5h。
作为本发明再进一步的方案：步骤S7中，酶解液水浴加热的温度为100℃，时间为15～20min离心转速为5000～6000r/min，离心时间为20～30min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：多肽可以和核苷酸先后进行提取，无需进行分开提取，效率高，并且，本发明通过二氧化硅吸附的方式来对核苷酸进行提取，此种载体仅对核苷酸有较强的吸附力和亲和性，对其他生化成分如多糖、蛋白质等不吸附，同时也可以避免加入生化试剂提取时造成相互生化试剂之间产生反应的问题。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，包括以下步骤：
S1，取新鲜动物内脏洗净，沥干，切碎后再捣碎，加入去离子水，得到混合溶液，其中，所述去离子水的质量为新鲜动物内脏的12倍；
S2，向混合溶液加入异硫氰酸胍的溶液，异硫氰酸胍溶液的浓度为4mol/L，与混合溶液的质量比为1：0.1，振动混匀后静置，静置时间为1小时；
S3，向其中加入含有二氧化硅的载体，含有二氧化硅的载体与溶液质量比为0.1：1，载体中二氧化硅的质量比不小于7％，振动混匀后静置，静置时间为0.5小时，异硫氰酸胍使细胞裂解，细胞中释放出的核苷酸结合在二氧化硅上；
S4，将含有二氧化硅的载体取出，余下溶液待用，对其使用洗脱液进行吸脱，分离后得到纯化的核苷酸；
S5，向余下溶液中加入浓度为0.4mol/L的NaCl溶液，NaCl溶液与与余下溶液的质量比为1：10混合，将混合液在10℃、搅拌速度为500r/min的条件下进行浸提，浸提时间为2小时；
S6，向上述溶液加入复合蛋白酶，复合蛋白酶与溶液体积比为4.6％，然后进行微波酶解，酶解温度为45℃、微波功率为150W，酶解时间为1.5小时；
S7，将酶解液水浴加热后，水浴加热的温度为100℃，水浴加热的时间为15分钟，然后在6000r/min的转速下进行离心，离心时间为20分钟，取上层清液，冷冻干燥后即得多肽。
实施例2
一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，包括以下步骤：
S1，取新鲜动物内脏洗净，沥干，切碎后再捣碎，加入去离子水，得到混合溶液，其中，所述去离子水的质量为新鲜动物内脏的15倍；
S2，向混合溶液加入异硫氰酸胍的溶液，异硫氰酸胍溶液的浓度为4mol/L，与混合溶液的质量比为1：0.15，振动混匀后静置，静置时间为1小时；
S3，向其中加入含有二氧化硅的载体，含有二氧化硅的载体与溶液质量比为0.15：1，载体中二氧化硅的质量比不小于7％，振动混匀后静置，静置时间为0.5小时，异硫氰酸胍使细胞裂解，细胞中释放出的核苷酸结合在二氧化硅上；
S4，将含有二氧化硅的载体取出，余下溶液待用，对其使用洗脱液进行吸脱，分离后得到纯化的核苷酸；
S5，向余下溶液中加入浓度为0.5mol/L的NaCl溶液，NaCl溶液与与余下溶液的质量比为8：10混合，将混合液在15℃、搅拌速度为700r/min的条件下进行浸提，浸提时间为1小时；
S6，向上述溶液加入复合蛋白酶，复合蛋白酶与溶液体积比为5.4％，然后进行微波酶解，酶解温度为55℃、微波功率为180W，酶解时间为2.5小时；
S7，将酶解液水浴加热后，水浴加热的温度为100℃，水浴加热的时间为20分钟，然后在6000r/min的转速下进行离心，离心时间为30分钟，取上层清液，冷冻干燥后即得多肽。
实施例3
一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，包括以下步骤：
S1，取新鲜动物内脏洗净，沥干，切碎后再捣碎，加入去离子水，得到混合溶液，其中，所述去离子水的质量为新鲜动物内脏的13倍；
S2，向混合溶液加入异硫氰酸胍的溶液，异硫氰酸胍溶液的浓度为4mol/L，与混合溶液的质量比为1：0.13，振动混匀后静置，静置时间为1小时；
S3，向其中加入含有二氧化硅的载体，含有二氧化硅的载体与溶液质量比为0.13：1，载体中二氧化硅的质量比不小于7％，振动混匀后静置，静置时间为0.5小时，异硫氰酸胍使细胞裂解，细胞中释放出的核苷酸结合在二氧化硅上；
S4，将含有二氧化硅的载体取出，余下溶液待用，对其使用洗脱液进行吸脱，分离后得到纯化的核苷酸；
S5，向余下溶液中加入浓度为0.45mol/L的NaCl溶液，NaCl溶液与与余下溶液的质量比为4：10混合，将混合液在13℃、搅拌速度为600r/min的条件下进行浸提，浸提时间为1.5小时；
S6，向上述溶液加入复合蛋白酶，复合蛋白酶与溶液体积比为5％，然后进行微波酶解，酶解温度为50℃、微波功率为165W，酶解时间为2小时；
S7，将酶解液水浴加热后，水浴加热的温度为100℃，水浴加热的时间为18分钟，然后在5500r/min的转速下进行离心，离心时间为25分钟，取上层清液，冷冻干燥后即得多肽。
本发明上述实施例提供了一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其多肽可以和核苷酸先后进行提取，无需进行分开提取，效率高，并且，本发明通过二氧化硅吸附的方式来对核苷酸进行提取，此种载体仅对核苷酸有较强的吸附力和亲和性，对其他生化成分如多糖、蛋白质等不吸附，同时也可以避免加入生化试剂提取时造成相互生化试剂之间产生反应的问题。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (7)
1.一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，取新鲜动物内脏洗净，沥干，切碎后再捣碎，加入去离子水，得到混合溶液；
S2，向混合溶液加入异硫氰酸胍的溶液，振动混匀后静置；
S3，向其中加入含有二氧化硅的载体，振动混匀后静置，异硫氰酸胍使细胞裂解，细胞中释放出的核苷酸结合在二氧化硅上；
S4，将含有二氧化硅的载体取出，余下溶液待用，对其使用洗脱液进行吸脱，分离后得到纯化的核苷酸；
S5，向余下溶液中加入NaCl溶液，将混合液浸提；
S6，向上述溶液加入复合蛋白酶，然后进行微波酶解；
S7，将酶解液水浴加热后，进行离心，取上层清液，冷冻干燥后即得多肽。
2.根据权利要求1所述的一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，步骤S1中，去离子水的质量为新鲜动物内脏的12～15倍。
3.根据权利要求1所述的一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，步骤S2中，异硫氰酸胍溶液的浓度为4mol/L，与混合溶液的质量比为1：0.1～0.15，振动混匀后静置的时间为1h。
4.根据权利要求1所述的一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，步骤S3中，含有二氧化硅的载体与溶液质量比为0.1～0.15：1，载体中二氧化硅的质量比不小于7％，静置时间为0.5h。
5.根据权利要求1所述的一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，步骤S5中，NaCl溶液的浓度为0.4～0.5mol/L，与余下溶液的质量比为1：8～10混合，将混合液在10～15℃、搅拌速度为500～700r/min的条件下进行浸提，浸提时间为1～2h。
6.根据权利要求1所述的一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，步骤S6中，复合蛋白酶与溶液体积比为4.6～5.4％，酶解温度为45～55℃、微波功率为150～180W，酶解时间为1.5～2.5h。
7.根据权利要求1所述的一种从动物内脏提取核苷酸和多肽的方法，其特征在于，步骤S7中，酶解液水浴加热的温度为100℃，时间为15～20min离心转速为5000～6000r/min，离心时间为20～30min。
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- 2020-05-28 CN CN202010465103.0A patent/CN111500664A/zh active Pending
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