CN111491645A - 包含鹿角卷柏提取物、其分馏物的用于预防或治疗代谢综合症的组合物 - Google Patents

包含鹿角卷柏提取物、其分馏物的用于预防或治疗代谢综合症的组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种包含鹿角卷柏(Selaginella rossii Warb.)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的用于预防、改善或治疗代谢综合症的组合物。本发明的组合物强力抑制二肽基肽酶‑4(DPP‑4)活性，诱导胰岛素在胰岛β细胞中的分泌增加，促进GLP‑1的分泌增加，在脂肪细胞中抑制脂肪的蓄积，有效抑制低密度脂蛋白(LDL)的氧化，改善由高脂肪饮食引起的体重增加、高血糖及耐糖能力，降低血液中的中性脂肪水平，而且还具有护肝效果，从而不仅可以有用地使用于代谢综合症的预防或治疗中，而且由于其抗氧化活性优秀，因此也可以有效作为抗氧化用组合物来利用。

Description

包含鹿角卷柏提取物、其分馏物的用于预防或治疗代谢综合 症的组合物
技术领域
本发明涉及一种包含鹿角卷柏(Selaginella rossii Warb.)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的用于预防、改善或治疗代谢综合症的组合物。
背景技术
从人体肠道L细胞分泌的作为肠促胰岛素(incretin)的胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1，GLP-1)在人体的很多组织中具有其受体。GLP-1公知为对摄取至小肠的营养物产生反应而对饭后血糖量调节的胰岛素作用产生较强的影响(DiabetesCare，19：580-586，1996)。并且，具有在胰脏组织中促进β细胞的胰岛素分泌及细胞生长、在α细胞中抑制胰高血糖素的分泌来调节体内血糖的作用。因此，GLP-1与血糖降低、胰岛β细胞的敏感性维持、食欲减少等相关，GLP-1受体激动剂(agonist)公知为到目前为止所开发的糖尿病治疗剂中唯一呈现出减少体重的效果(Diabetologia.55：1577-1596，2012)。
二肽基肽酶-4(Dipeptidyl peptidase-4；DPP-4；EC 3.4.14.5)按功能属于丝氨酸蛋白酶(Barrett A.J.等，Arch.Biochem.Biophys.，318：247-250，1995)，DPP-4在小肠中分解GLP-1来将活性状态的GLP-1转换为非活性状态的GLP-1(9-36)(Eur.J.Biochem.，214：829-835，1993)。因此，DPP-4抑制剂作为用于治疗2型糖尿病及被损伤的葡萄糖耐性等的非常有用的药剂来使用。并且，公知为1型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病)、关节炎、肥胖或骨质疏松症等由DPP-IV的活性介导，因此，具有抑制所述DPP-IV的作用效果的药物作为用于治疗如上所述的疾病的候选药物，可发挥非常重要的作用。
在生物体内或生物体外生成的由氧化应激(oxidative stress)引起的低密度脂蛋白(low-density lipoprotein：LDL)的氧化生成作为动脉硬化初期病变的脂纹(fattystreak)，从而引起包括动脉硬化在内的多种并发症(Circulation，91：2488-2496，1995；Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，17：3338-3346，1997)。
如上所述的GLP-1(glucagon-like peptide-1)分泌功能调节、DDP-4表达抑制、抗氧化作用、脂质蛋白质(low-density lipoprotein：LDL)的氧化抑制及脂肪蓄积抑制等是在代谢综合症的治疗中非常重要的因子。
代谢综合症是指糖尿病、肥胖、胰岛素抵抗、脂肪肝、高血脂症、动脉硬化或它们的并发症等死亡危险因子一起存在的状态。最近在韩国，这种代谢综合症的发病率处于剧增状态，已知其发病率大幅度增加至作为发达国家的美国和西欧国家的水平或超过其水平。
观察与上述因子间的相关性，例如，发现血液中的脂质成分为动脉硬化危险因素，从而已知总胆固醇(T-CHL)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)是与上述代谢综合症相关的主要因子。并且，掌握了代谢综合症的共同症状是与肥胖也密切相关的耐糖障碍，伴随着由此引起的高血压、高脂血、心血管系统疾病等。
到目前为止，尚未开发出用于治疗代谢综合症的药物，只是试图利用糖尿病、高血脂症及高血压的治疗药物来治疗代谢综合症。目前，作为可用作代谢综合症的治疗药物的药剂，用作糖尿病治疗剂的二甲双胍(metformin)、噻唑烷二酮(TZD，thiazolidinediones)类药物、葡萄糖苷酶(glucosidase)抑制剂、二肽基肽酶(DDP，dipeptidyl peptidase)-IV抑制剂备受期待，与此同时，血压治疗剂和高血脂症治疗剂等也备受关注。然而。用这些药物来改善代谢综合症是有限制的。
从已知的与代谢综合症的原因及治疗相关的因子来看，运动、饮食习惯、体重、血糖、中性脂肪、胆固醇、胰岛素抵抗性、脂联素(adiponectin)、瘦蛋白(leptin)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)活性、如雌性激素等性激素、遗传因子、丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)生物体内浓度等直接或间接地干预。
对此，为了具有复合性症状的代谢综合症的有效管理或治疗，开发用于维持正常血糖的血糖降低效果和可同时治疗高血脂症、高血压等的原料是理想的方法，但到目前为止，对这种治疗剂的研究开发还不够。
鹿角卷柏(Selaginella rossii Warb.)为卷柏科(Selaginellaceae)植物，被称为罗斯卷柏或地柏。鹿角卷柏具有茎匍匐丛生、多回分枝、生成有孢子囊的茎不垂直、侧叶的下部具有锯齿边的形态学特征，相比于其他卷柏属的品种，具有不同的形态学特征。这种对鹿角卷柏提取物、其分馏物或它们两者的效果及功能性的研究还尚未报道过。
发明内容
技术课题
本发明人为了解决在如上所述的现有技术中所存在的问题，利用鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者确认了预防、改善及治疗代谢综合症的效果。其结果确认了鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者显著抑制DPP-4活性，诱导胰岛素在胰岛β细胞中的分泌增加，调节GLP-1合成及分泌相关基因在内脏L细胞中的表达来促进GLP-1的分泌增加，在3T3-L1脂肪细胞中抑制脂肪的蓄积，有效抑制LDL的氧化,从而完成了本发明。
本发明的目的在于，提供一种包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物。
本发明的再一目的在于，提供一种包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的用于预防或改善代谢综合症的食品组合物。
本发明的另一目的在于，提供一种包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的抗氧化用组合物。
课题的解决手段
本发明的一方式提供一种用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物，其包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分。
根据本发明的一实施方式，上述代谢综合症可以选自糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血脂症、动脉硬化及它们的并发症。
根据本发明的一实施方式，上述鹿角卷柏(Selaginella rossii.)提取物可以为水、低级C1-C4醇、乙酸乙酯或它们的混合溶剂提取物。
根据本发明的一实施方式，上述鹿角卷柏(Selaginella rossii.)提取物可以为选自乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、甲醇提取物、甲醇水溶液提取物及乙酸乙酯提取物中的任一种提取物。
根据本发明的一实施方式，上述分馏物可以为乙酸乙酯分馏物或丁醇分馏物。
本发明的另一方式提供一种用于预防或改善代谢综合症的食品组合物，其包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者。
根据本发明的一实施方式，上述代谢综合症可以选自糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血脂症、动脉硬化及它们的并发症。
根据本发明的一实施方式，上述鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物可以为水、低级C1-C4低级醇、乙酸乙酯或它们的混合溶剂提取物。
根据本发明的一实施方式，上述鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物可以为选自乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、甲醇提取物、甲醇水溶液提取物及乙酸乙酯提取物中的任一种提取物。
根据本发明的一实施方式，上述分馏物可以为乙酸乙酯分馏物或丁醇分馏物。
本发明的又一方式提供一种抗氧化用药物组合物，其包含鹿角卷柏(Selaginellarossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分。
发明效果
本发明的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者较强地抑制二肽基肽酶-4(DPP-4)活性，诱导胰岛素在胰岛β细胞中的分泌增加，促进GLP-1的分泌增加，在脂肪细胞中抑制脂肪蓄积，有效抑制低密度脂蛋白(LDL)的氧化，改善由高脂肪饮食引起的体重增加、高血糖及耐糖能力，降低血液中的中性脂肪水平，从而不仅可以有用地使用于代谢综合症的预防或治疗，而且由于其抗氧化活性优秀，因此也可以有效作为抗氧化用组合物来利用。
附图说明
图1表示对在由高浓度葡萄糖(30mM)诱导的胰岛β细胞中胰岛素分泌量随着鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯分馏物的处理而增加进行确认的结果。
图2表示对在内脏L细胞中GLP-1分泌量随着鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯分馏物的处理而增加进行确认的结果。
图3表示对在内脏L细胞中作为GLP-1的合成相关基因的胰高血糖素原(proglucagon)、PCSK1/3、GPR119、PPARβ/δ的表达随着鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯分馏物的处理而增加进行确认的结果。
图4表示对在内脏L细胞中作为具有GLP-1的分泌调节作用的代谢时钟(metabolicclock)基因的ARNTL、PER2、NR1D1以及参与基于GLP-1的脂肪分解(lipolysis)过程的PLIN2的表达随着鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯分馏物的处理而增加进行确认的结果。
图5表示在3T3-L1分化的脂肪细胞中通过鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯分馏物的处理来抑制脂肪蓄积的显微镜观察照片。
图6表示对在3T3-L1分化的脂肪细胞中通过鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯分馏物的处理来抑制脂肪蓄积进行确认的结果。
图7是表示在由高脂肪饮食而体重增加的小鼠模型中通过鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯提取物的给药来抑制体重增加的图。
图8是表示在由高脂肪饮食诱导高血糖的小鼠模型中通过鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯提取物的给药来降低血糖的图。
图9表示在由高脂肪饮食诱导的小鼠模型中基于葡萄糖给药的耐糖能力在鹿角卷柏乙醇提取物组或乙酸乙酯提取物组中明显得到改善的结果。
图10表示通过鹿角卷柏乙醇提取物或乙酸乙酯提取物的给药来改善由高脂肪饮食诱导耐糖能力的小鼠模型的血糖浓度曲线下面积的结果。
图11是表示在由高脂肪饮食诱导耐糖能力的小鼠模型中在葡萄糖的给药前后血液中的胰岛素浓度变化的图。
具体实施方式
为了实现如上所述的目的，本发明提供一种包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物。
本发明中，可以无限制使用鹿角卷柏(Selaginella rossii)的茎、叶、根、孢子等。鹿角卷柏(Selaginella rossii)广泛分布在韩国整个地区、中国北方地区、俄罗斯的乌苏里等，从而容易以低费用确保原料，可以购买或直接采集使用。
本发明中，作为提取方法，可使用热水提取、浸渍提取、回流冷却提取及超声波提取等提取方法。优选地，提取次数为1次至5次。作为提取溶剂，使用水、醇类或它们的混合物，优选地，使用选自水、C1-C4的低级醇(例如，甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等)、乙酸乙酯或它们的混合溶剂中的溶剂，但并不限定于此。
所述提取溶剂的量为鹿角卷柏(Selaginella rossii)的重量的1倍至15倍。根据本发明的一实施方式，在室温下提取鹿角卷柏(Selaginella rossii)乙醇水溶液提取物24小时至72小时，优选地，提取约48小时。根据本发明的另一实施方式，在室温下提取鹿角卷柏(Selaginella rossii)甲醇水溶液提取物24小时至72小时，优选地，提取约48小时。
优选地，本发明的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物可以为选自乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、甲醇提取物、甲醇水溶液提取物及乙酸乙酯提取物中的任一种。
本发明还提供进一步分离所述鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物而获得的鹿角卷柏(Selaginella rossii)分馏物。通过本领域中公知的分离法进行鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物的分馏分离。优选地，将鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物悬浮于如甲醇、乙醇、丙醇等低级醇中后，利用己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇、水等溶剂来提取，由此可获得分馏物。根据本发明的实施方式，将鹿角卷柏(Selaginella rossii)乙醇水溶液提取物悬浮于甲醇中后，添加己烷来分离己烷分馏层，向分离出己烷后剩余的水层中依次添加三氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇来制备各个分馏物。
本发明中，优选地，所述分馏物可以为鹿角卷柏(Selaginella rossii)的乙酸乙酯分馏物或丁醇分馏物。
代谢综合症可以为选自糖尿病(例如，1型糖尿病、2型糖尿病)、肥胖、脂肪肝、高血脂症、动脉硬化及它们的并发症中的任一种。所述并发症可包括如冠心病、心绞痛、颈动脉疾病、脑中风、脑动脉硬化症、高胆固醇症、胆固醇结石、高中性脂肪血症、高血压、白内障、肾脏疾病等疾病。
本发明的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物或其分馏物显著抑制DPP-4活性、诱导胰岛素在胰岛β细胞中的分泌增加、调节GLP-1合成及分泌相关基因在内脏L细胞中的表达来促进GLP-1的分泌增加、在3T3-L1脂肪细胞中抑制脂肪蓄积、有效抑制LDL的氧化，从而在预防或治疗代谢综合症中具有显著优秀的效果。
优选地，相对于本发明的包含鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物或其分馏物作为有效成分的药物组合物的总重量，包含0.1重量百分比至95重量百分比的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物或其分馏物，但并不限定于此。
本发明的药物组合物可包含药剂学上可接受的载体，可根据常规的方法分别制剂化为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、乳剂、糖浆、喷剂等口服剂型、外用剂、栓剂及无菌注射液的形态。
所述药剂学上可接受的载体可包括如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等本领域通常使用的载体，但并不限定于此。并且，本发明的药物组合物包括填充剂、增量剂、结合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或赋形剂、其他药剂学上可接受的添加剂。
在本发明的药物组合物制剂化为口服用固体制剂的情况下，包括片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等，这种固体制剂可包括如淀粉、碳酸钙(calcium carbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖、明胶等至少一种赋形剂，且包括如硬脂酸镁、滑石等润滑剂等，但并不限定于此。
在本发明的药物组合物制剂化为口服用液体制剂的情况下，包括悬浮剂、内溶液剂、乳剂、糖浆剂等，且包括水、液体石蜡等稀释剂、湿润剂、甜味剂、芳香剂、保鲜剂等，但并不限定于此。
在本发明的药物组合物制剂化为非口服用的情况下，包括灭菌的水溶液、非水性溶剂、悬浮剂、乳剂、冻结干燥制剂、栓剂，作为非水性溶剂、悬浮剂，可包括如丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、橄榄油等植物油、如油酸乙酯等可注射的酯类等，但并不限定于此。作为栓剂的基剂，可使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明胶等，但并不限定于此。
本发明的药物组合物所包含的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物或其分馏物的给药量根据患者的状态及体重、年龄、疾病的程度、药物形态、给药途径及时期而不同，但可由本领域的普通技术人员适当选择。例如，鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物或其分馏物能够以一天0.0001mg/kg至100mg/kg的用量来给药，优选地，可以以一天0.001mg/kg至10mg/kg的用量来给药，所述给药一天可进行一次或者分几次来进行。
本发明的药物组合物可通过如口服、腹腔或静脉、肌肉、皮下、子宫内硬膜或脑血管内注射等方式给到大鼠、小鼠、家畜、人类等哺乳动物。
并且，为了实现如上所述的目的，本发明提供一种包含鹿角卷柏(Selaginellarossii)提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分的用于预防或改善代谢综合症的食品组合物。
本发明的食品组合物可用作健康功能食品。所述“健康功能食品”是指根据健康功能食品相关法律通过使用对人体有用的具有功能性的原料或成分来制备及加工的食品，“功能性”是指以对人体的结构及功能调节营养素或者对如生理学作用等保健用途产生有用的效果为目的来摄取。
本发明的食品组合物可包含常规的食品添加物，而对于是否适合用作所述“食品添加物”，除非另有其他规定，否则按照食品医药品安全厅许可的食品添加剂法典的总则及普通试验法等并根据该种类相关标准及基准来判定。
作为所述“食品添加剂法典”中所记载的种类，可列举如酮类、甘氨酸、柠檬酸钾、烟酸、肉桂酸等化学合成物；如柿子色素、甘草提取物、结晶纤维素、高粱色素、瓜尔胶等天然添加物；如L-谷氨酸钠制剂、面类添加碱剂、保鲜料制剂、焦油色素制剂等混合制剂类。
本发明的食品组合物相对于组合物总重量可包含0.01重量百分至95重量百分比的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者，优选地，可包含1重量百分比至80重量百分比。能够以与在所述药物组合物的制备中所提及到的提取方法相同的方法获得本发明的食品组合物所包含的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者。
并且，本发明的食品组合物以预防和/或改善代谢综合症为目的而可制备及加工成片剂、胶囊、粉末、颗粒、液体、丸等形态。
例如，所述片剂形态的健康功能食品能够以常规的方法将鹿角卷柏(Selaginellarossii)提取物、其分馏物或它们两者、赋形剂、结合剂、崩解剂及其他添加剂的混合物颗粒化后，放入润滑剂等来进行挤压成型，或者可直接对所述混合物进行挤压成型。并且，所述片剂形态的健康功能食品可根据需要包含矫味剂等，也可以根据需要利用适当的包衣剂来进行包衣。
胶囊形态的健康功能食品中的硬质胶囊剂可通过向通常的硬质胶囊中填充鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者及如赋形剂等添加剂的混合物或其粒状物或包衣的粒状物来制备，软质胶囊剂可通过向如明胶等胶囊基剂中填充鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者及如赋形剂等添加剂的混合物来制备。所述软质胶囊剂可根据需要包含丙三醇或山梨醇等增塑剂、着色剂、保鲜剂等。
能够以适当的方法对鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者、赋形剂、结合剂、崩解剂等混合物进行成型来制备丸形态的健康功能食品，可根据需要利用白糖或其他适当的包衣剂进行包衣或者利用淀粉、滑石或适当的物质包裹丸衣。
能够以适当的方法将鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者、赋形剂、结合剂、崩解剂等混合物制备成粒状物来获得颗粒形态的健康功能食品，可根据需要包含着香剂、矫味剂等。当使用12号(1680μm)筛、14号(1410μm)筛及45号(350μm)筛对颗粒形态的健康功能食品进行后续的粒度试验时，总量都通过12号筛，留在14号筛的为总量的5.0％以下，且通过45号筛的可以为总量的15.0％以下。
对于所述赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂、着香剂等的术语定义记载于本领域公知的文献中，可包括其功能等相同或类似的(大韩药典解析篇，文成司，韩国药学大学协会，第五修订版，p33-48，1989)。
所述食品的种类不受特别限制。作为可添加本发明的提取物的食品的例子，可列举饮料、口香糖、维生素复合剂、功能饮品等，包括通常意义上的所有健康功能食品。
并且，为了实现上述的目的，本发明提供一种包含鹿角卷柏(Selaginellarossii)提取物、其分馏物或它们两者的抗氧化用组合物。
“抗氧化”在狭义上是指抑制、减少或控制人体中生成的自由基、从所述自由基生成的过氧化氢或过氧化物、从所述过氧化氢生成的羟基的生成或反应的作用，在广义上是指抑制、减少或控制在自然界中产生的氧化反应的生成的作用。根据本发明的目的，所述抗氧化理解为狭义上的抗氧化，可理解为抑制、减少或控制主要在细胞水平上产生的自由基或过氧化氢的生成或反应的作用，但对此不特别限制。
本发明的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者可增加抗氧化酶的活性或抗氧化酶的蛋白质表达。尤其，在有效抑制LDL的氧化的方面具有优异的效果。可在药物组合物、食品组合物、化妆品组合物等中利用所述抗氧化用组合物。
本发明提供一种包括向对象给药鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者的步骤的代谢综合症的治疗方法。
本发明中的“鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者”、“代谢综合症”及“给药”等术语与如上所描述的相同。
所述对象是指动物，典型的可以为利用本发明的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者来治疗而可产生有益的效果的哺乳动物。作为这种对象的优选例，可包括如人类等灵长类。并且，这种对象可包括具有代谢综合症的症状或者会存在具有这种症状的危险的所有对象。
本发明还提供一种所述鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者在用于治疗代谢综合症的药剂的制备中的用途。
本发明还提供一种用于治疗代谢综合症的包含所述鹿角卷柏(Selaginellarossii)提取物、其分馏物或它们两者的组合物。
本发明还提供一种用于治疗代谢综合症的所述鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物、其分馏物或它们两者的用途。
实施发明的方式
本发明的优点、特征以及实现这些的方法通过参照详细后述的实施例而将明确。然而，本发明并不限定于以下所公开的实施例，而是以相互不同的多种形态来实现，本实施例仅为了使本发明的公开完整，为了使本发明所属技术领域的普通技术人员完整地理解发明的范畴而提供的，本发明仅由发明要求保护范围定义。
实施例1.鹿角卷柏提取物的制备
采集鹿角卷柏(Selaginella rossii Warb.)(原产地：中国，延边)并在常温下进行干燥。将干燥物以适当的大小切断并利用混料机(blender mixer)进行粉碎来确保粉碎物。
向每10g的鹿角卷柏粉碎物中分别加入100mL的70％(v/v)、95％(v/v)的甲醇、50％(v/v)、70％(v/v)、95％(v/v)的乙醇、乙酸乙酯后搅拌，并在室温下提取48小时后，使用滤纸(Whatman，No.2)仅回收溶剂可溶部分。在减压条件下浓缩提取液来获得鹿角卷柏甲醇水溶液提取物、鹿角卷柏乙醇水溶液提取物及鹿角卷柏乙酸乙酯提取物。
实施例2.鹿角卷柏分馏物的制备
将所述实施例1的鹿角卷柏95％乙醇提取物悬浮于10％的甲醇中后，添加相同量的正己烷并进行振荡后放置，若分离成由己烷形成的上层和其下的水层，则仅分离出上层液，通过反复进行这种分液过程3次来制备己烷分馏物。以相同的方法继续向水层中依次添加相同量的三氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇并进行振荡后，通过放置来制备三氯甲烷分馏物、乙酸乙酯分馏物、丁醇分馏物及水分馏物，在减压条件下浓缩这些分馏物来获得152mg的乙酸乙酯分馏物及190mg的丁醇分馏物。
实施例3.鹿角卷柏提取物及其分馏物的DPP-4抑制效果
为了评价实施例1及实施例2的鹿角卷柏提取物和它们的分馏物的DP P-4抑制活性，使用50mM的TrisHCl缓冲液(buffer)(pH 7.5)、重组人(human recombinant)DPP-4(ENZ375，Prospec公司)、H-丙氨酸-脯氨酸-7-氨基-4-三氟甲基香豆素(H-Ala-Pro-7-amino-4-rifluoromethylco umarin，AFC)(24126，AnaSpec公司)来测定DPP-4抑制活性。向96-黑色孔板(black well plate)中添加2μl的试样、50mM的Tris-HCl缓冲液78μl、10μl的1μg/ml的DPP-4，在常温下进行全反应10分钟。向所有孔中添加作为基质的10μl的0.4mM的H-Ala-Pro-AFC，在室温下反应1小时后，使用荧光计(Fluorometer)(Victor 2，PerkinElmer，发射355nm，发射510nm)对通过DPP-4从二肽(dipeptide)分解出的AFC的荧光值进行测定来计算DPP-4活性。对照组使用DMSO，阳性对照组使用作为DPP-4抑制剂的西他列汀(Sitagliptin，Sigma公司)。
表1
Figure BDA0002541426790000111
如所述表1所示，本发明的鹿角卷柏95％甲醇提取物、鹿角卷柏70％乙醇提取物、鹿角卷柏95％乙醇提取物、鹿角卷柏乙酸乙酯提取物及鹿角卷柏乙酸乙酯分馏物呈现出非常高的DPP-4抑制活性。并且，鹿角卷柏95％甲醇提取物、鹿角卷柏70％乙醇提取物、鹿角卷柏95％乙醇提取物、鹿角卷柏乙酸乙酯提取物的IC50浓度分别为18.0μg/ml、18.2μg/ml、18.8μg/ml、7.9μg/ml，尤其，鹿角卷柏乙酸乙酯分馏物的IC50浓度为4.6μg/ml，呈现出非常高的DPP-4抑制活性。通过这些结果确认到鹿角卷柏提取物及其分馏物的优秀的效果。
实施例4.鹿角卷柏提取物及分馏物的胰岛素分泌促进活性
(1)细胞培养
利用包含15％的胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，Gibco公司)、100units/ml的青霉素(penicillin)及100μg/ml的链霉素(streptomycin)的达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle's Medium，DMEM，Hyclone公司)，在温度为37℃的湿润的5％的CO2培养箱培养作为小鼠胰岛β细胞株的MIN6细胞。
(2)在MIN6β细胞中胰岛素分泌能力的测定
向24孔板的每个孔中放入1×105个细胞并在温度为37℃的湿润的5％的CO2培养箱进行培养。经过48小时之后，先更换为不包含葡萄糖(glucose)的DMEM培养基并放置60分钟后，用规定浓度的本发明的鹿角卷柏提取物及分馏物试样处理包含高浓度葡萄糖(30mM)的DMEM培养基来反应30分钟。作为对照组，使用在相同条件下未添加试样的培养基，使用ELISA胰岛素试剂盒(Alpco diagnostics公司)测定分泌至培养基的胰岛素。
如图1所示，相比于对照组，本发明的鹿角卷柏乙醇提取物在50μg/ml的浓度诱导55.8％的胰岛素分泌增加。并且。相比于对照组，在相同条件下，处理乙酸乙酯分馏物(50μg/ml)来诱导92.7％的优秀的胰岛素分泌增加(提取物的约1.7倍)。通过这些结果确认到鹿角卷柏提取物及其分馏物的优秀的效果。
实施例5.鹿角卷柏提取物及分馏物的GLP-1分泌促进活性
(1)细胞培养
利用包含10mM的羟乙基哌嗪乙烷磺酸(hydroxyethyl piperazine ethanesulfonic acid，HEPES，Hyclone公司)、100units/ml的青霉素(penicillin)及100μg/ml的链霉素(streptomycin)的罗斯威尔帕克纪念研究所培养基1640(RPMI 1640，Hyclone公司)，在温度为37℃的湿润的5％的CO2培养箱培养作为人肠内L细胞株的NCI-H716细胞。
(2)在NCI-H716细胞中GLP-1分泌能力的测定
向24孔板的每个孔中放入5×105个细胞并在温度为37℃的湿润的5％的CO2培养箱进行培养。经过48小时之后，先更换为不包含葡萄糖的克雷布斯-林格缓冲液(Krebs-Ringer Buffer，KRB)并放置60分钟后，用规定浓度的本发明的鹿角卷柏提取物及分馏物试样处理KRB来反应60分钟。作为对照组，使用在相同条件下未添加试样的缓冲液，使用GLP-1酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(Millipore公司)测定分泌至缓冲液(buffer)的GLP-1。
如图2所示，相比于对照组，本发明的鹿角卷柏乙醇提取物(50μg/ml)使GLP-1的分泌在NCI-H716 L细胞中增加37.9％。并且，相比于对照组，在相同条件下，处理乙酸乙酯分馏物(50μg/ml)来诱导114.4％(提取物的约3倍)的优秀的GLP-1分泌增加。通过这些结果确认到鹿角卷柏提取物及其分馏物的优秀的效果。
(3)在NCI-H716细胞中GLP-1相关基因的表达测定
利用TRI试剂(reagent)(Ambion公司)从处理本发明的鹿角卷柏试样24小时的细胞组中分离总RNA后，使用高容量cDNA逆转录试剂盒(High-capacity cDNA ReverseTranscription kit)(Applied Biosystems公司)合成cDNA。使用利用了与为了能够扩增每个基因而合成的寡核苷酸(oligo)一起嵌入双链脱氧核糖核酸(double stranddeoxyribonucleic acid，dsDNA)的SYBR Green的特性的SYBR Green Master(Roche公司)来在7500型实时PCR系统(7500-Real-Time PCR system，Applied Biosystems，FosterCity，CA)实时确认cDNA的扩增过程。通过GAPDH的表达进行定量化来显示结果。经确认，所使用的引物在PCR扩增过程中形成150～200bp左右的单扩增子(single amplicon)，它们的碱基序列如下列表2所示。
表2
Figure BDA0002541426790000141
如图3所示，相比于对照组，通过本发明的鹿角卷柏乙醇提取物及乙酸乙酯分馏物的处理，作为GLP-1的前体(precursor)的胰高血糖素原(proglucagon)及在GLP-1的生成过程中调节蛋白酶剪切(proteolytic cleavage)的1/3型前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin(proprotein convertase subtilisin/kexin type 1/3，PCSK1/3)的表达显著增加。并且，利用食物中脂质(lipid)的受体干涉用于介导GLP-1分泌的G蛋白耦联受体119(Gprotein-coupled receptor 119，GPR119)及β-连环素/T细胞因子4信号通路(β-catenin/TCF-4pathway)来表达胰高血糖素原(proglucagon)，从而通过鹿角卷柏提取物及分馏物的处理，公知为调节GLP-1的生成的过氧化物酶体增殖物激活受体β或δ(peroxisomeproliferator-activated receptor beta or delta，PPARβ/δ)的表达(Gastroenterology.2011；140：1564-1574)显著增加。
如图4所示，通过本发明的鹿角卷柏提取物或分馏物的处理，对GLP-1的分泌具有调节作用的代谢时钟基因(metabolic clock gene)中芳香烃受体核转位因子样蛋白(arylhydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein，ARNTL)基因及作为其下位基因的生物钟周期基因2(period circadian clock 2，PER2)和核受体亚家族1D组成员1(nuclear receptor subfamily 1group D member 1，NR1D1)的表达显著增加，通过本发明的鹿角卷柏提取物或分馏物的处理，在基于GLP-1的脂肪分解(lipolysis)过程中增加表达的脂滴包被蛋白2(perilipin 2，PLIN2)的表达也显著增加。
由此确认，本发明的鹿角卷柏提取物及其分馏物的优秀的GLP-1分泌增加诱导能力在L细胞中调节作为GLP-1合成及分泌相关基因的胰高血糖素原(proglucagon)、PCKS1/3，GPR119、PPARβ/δ、PER2、ARNTL、NR1D1、PLIN2的表达，确认了鹿角卷柏提取物及其分馏物的优秀的效果。
实施例6.鹿角卷柏提取物及分馏物的脂肪蓄积抑制活性
(1)细胞培养
利用包含10％的小牛血清(calf serum)(Gibco公司)、2mM的L-谷氨酰胺(L-glutamin)、100units/ml的青霉素(penicillin)及100μg/ml的链霉素(streptomycin)的DMEM(Hyclone公司)培养基来在温度为37℃的湿润的5％的CO2培养箱培养作为小鼠脂肪前体细胞的3T3-L1细胞。
(2)在3T3-L1细胞中脂肪蓄积抑制能力测定
向48孔板的每个孔中放入2×104个细胞并在温度为37℃的湿润的5％的CO2培养箱进行培养。培养两天后，若细胞成为100％汇合(confluent)的状态，向则用FBS(Hyclone公司)更换血清(serum)的DMEM培养基中添加0.25μm的地塞米松(dexamethasone，DEX)、5μg/ml的胰岛素(Insulin)、0.5mM的1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(1-methyl-3-isobutylxanthine，IBMX)，促进分化为脂肪细胞2天。之后，仅添加胰岛素(Insulin)而不添加IBMX和DEX，在与上述相同的培养基条件下，每隔两天更换培养基并继续培养8天至10天以能够使脂肪蓄积。之后，用油红O(Oil red O)染色并用显微镜观察细胞中生成的中性脂肪。然后，用100μl的异丙醇(isopropanol)提取细胞中的中性脂肪中染色的油红O(Oil red O)色素并使用酶标仪(Microplate Reader)(Bio-red公司)来在490nm下测量吸光度，由此对脂肪蓄积的程度进行定量化。
如图5和图6所示，本发明的鹿角卷柏乙醇提取物(80μg/ml)在分化的脂肪细胞中呈现出脂肪蓄积抑制效果。尤其，乙酸乙酯分馏物(20μg/ml、40μg/ml)在分化的脂肪细胞中分别呈现出44.8％、100.0％的显著的脂肪蓄积抑制效果。因此，确认到本发明的鹿角卷柏提取物及分馏物可呈现出优秀的抗肥胖活性。
实施例7.鹿角卷柏提取物及分馏物的LDL抗氧化活性
为了确认本发明的所述鹿角卷柏提取物及分馏物的LDL抗氧化活性，利用超离心分离机从人的血浆中分离LDL，利用Cu2+诱导LDL的氧化，使用用于对作为所生成的不饱和脂肪酸的氧化产物的二醛(dialdehyde)进行测定的TBARS(硫代巴比妥酸反应物质(thiobarbituric acid-reactive substances))法(Packer，L.Ed.(1994)Methods inEnzymology Vol.234，Oxygen radicals in biological systems Part D.Academicpress，San Diego)，利用标准曲线对所生成的丙二醛的量进行定量化(Jeong T.S.等，Bioorg.Med.Chem.Lett.14：2719-2723，2004)，使用普罗布考(probucol)作为阳性对照组。
其结果如表3所示。
表3
Figure BDA0002541426790000161
如所述表3所示，本发明的鹿角卷柏甲醇及乙醇提取物均呈现出优秀的LDL抗氧化活性，尤其，鹿角卷柏-95％乙醇提取物和鹿角卷柏-乙酸乙酯提取物在20μg/ml的浓度呈现出69.9％和73.3％的最优秀的LDL抗氧化活性，鹿角卷柏-乙酸乙酯分馏物和鹿角卷柏-丁醇分馏物分别在10μg/ml的浓度呈现出79.5％和72.0％的优秀的LDL氧化抑制活性。通过这些结果确认到鹿角卷柏提取物及其分馏物的优秀的效果。
实施例8.鹿角卷柏提取物的体内(in vivo)动物模型中的代谢综合症预防效果
为了本发明的所述鹿角卷柏提取物对代谢综合症，尤其糖尿病、2型糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血脂症产生的影响，通过如下的方法进行实验。
(1)动物的饲养
从韩国生命工学研究院的生命小鼠中心购买作为实验动物的雄性C57BL/6J小鼠来使用。向所分配到的实验动物自由地供给基本饲料(10kcal％fat，D12450B)和水3周使实验动物适应于实验室环境中后，将健康状态良好的7周龄小鼠使用在实验中，将实验组分为如下的几个组：
①摄取基本正常饮食(10kcal％fat，D12450B)的阴性对照组；
②摄取高脂肪饮食(60kcal％fat，D12492)的对照组；
③摄取高脂肪饮食并将本发明的鹿角卷柏乙醇提取物(100mg/kg.day)口服给药的试验组；
④摄取高脂肪饮食并将本发明的鹿角卷柏乙酸乙酯提取物(50mg/kg.day)口服给药的试验组。
在对所述实验组进行10周的实验的过程中，观察了对体重、血糖及耐糖能力的抗糖尿及抗肥胖效果。
将动物饲养室的环境以恒温(22±2℃)、恒湿(50±5％)及以12小时为间隔的光周期(开灯07:00～19:00)维持规定条件，对每次分离5只实验动物进行饲养，使实验动物自由摄取食物和水。在每周的规定时间测定饮食摄取量及体重，每隔两周绝食12小时后进行尾部采血后，使用血糖Accu检测试纸(Accu-check active test strips)(Roche)测定血糖。结束饲养后的实验动物在牺牲之前绝食12小时后，在使用毛细管(capillary tube)从眼眶后静脉丛采血时，利用肝素(heparin)防止凝固，为了进行血液生化检查，采血后在30分钟之内在800g、4℃的温度条件下离心分离15分钟来分离血浆(plasma)并在-70℃的温度下保管来分析。采血后立即取出各实验动物的脏器组织(胰脏、肝及脂肪组织)来进行称量。
(2)动物实验结果的统计处理及有效性评价
阴性对照组、对照组和试验组之间的结果用平均值±标准偏差来表示，对各组之间的差进行单因素方差分析(one-way ANOVA)之后实施事后多重比较(Turkey's post hoctest)(
Figure BDA0002541426790000171
software，SAS Institute Inc.，美国)，当显著性差异小于5％(P<0.05)时，判定为具有统计显著性。即，意味着在用上标表示的a、b、c不同的组之间具有统计显著性。
(3)体重及脏器重量变化测定
每隔一周测定所述实施例8-1的各实验动物的体重变化的结果如图7所示，相比于阴性对照组，摄取高脂肪饮食的对照组的体重从第一周开始呈现出显著的体重增加，与此相反，相比于对照组，摄取高脂肪饮食的同时摄取鹿角卷柏乙醇提取物和乙酸乙酯提取物的试验组的体重从第三周开始减少，到第十周分别减少4.1％、12.9％。
表4
区分 肝脏重量(g) 胰脏重量(g) 脂肪组织重量(g)
阴性对照组 0.83±0.05<sup>c</sup> 0.13±0.01<sup>b</sup> 1.22±0.17<sup>b</sup>
对照组 1.24±0.13<sup>a</sup> 0.18±0.01<sup>a</sup> 5.33±0.31<sup>a</sup>
乙醇提取物组 1.16±0.08<sup>ab</sup> 0.16±0.02<sup>ab</sup> 5.10±0.46<sup>a</sup>
乙酸乙酯提取物组 0.98±0.06<sup>bc</sup> 0.15±0.01<sup>ab</sup> 4.62±0.39<sup>ab</sup>
a、b、c：意味着用上标表示的a、b、c在不同的组之间具有统计显著性(P<0.05)。
并且，如表4所示，经过10周之后，阴性对照组的肝脏重量为0.83g，对照组的肝脏重量为1.24g，与此相反，乙醇提取物组和乙酸乙酯提取物组的肝脏重量分别为1.16g和0.98g，通过摄取鹿角卷柏提取物抑制了肝组织重量的增加。
经过10周之后，阴性对照组的胰脏重量为0.13g，对照组的胰脏重量增加为0.18g，与此相反，乙醇提取物组和乙酸乙酯提取物组的胰脏重量分别为0.16g、0.15g，其相比于对照组呈现出减少的趋势。
经过10周之后，对各实验组的腹部脂肪组织、副睾脂肪组织及胯部脂肪组织的总脂肪组织的重量进行测定的结果，阴性对照组的脂肪组织的重量为1.22g，对照组的脂肪组织的重量5.33g，与此相反，乙醇提取物组和乙酸乙酯提取物组的脂肪组织重量分别为5.10g、4.62g，抑制了由高脂肪饮食引起的体脂增加。
(4)血糖变化分析
如图8所示，相比于阴性对照组，摄取高脂肪饮食的对照组的空腹血糖从第六周开始呈现出显著的血糖增加，与此相反，鹿角卷柏提取物的给药抑制血糖的增加，尤其，相比于对照组，乙酸乙酯提取物组的第十周的空腹血糖显著减少26.8％。
在实验的第八周实行耐糖能力实验的结果如图9所示，相比于对照组，鹿角卷柏提取物的60分钟、90分钟、120分钟的血糖水平显著减少。相比于对照组，图10的血糖浓度曲线下面积(area under the curve，AUC)也呈现出减少的趋势。并且，如图11所示，在葡萄糖给药之前和在葡萄糖给药之后，相比于阴性对照组，对照组的血液中的胰岛素浓度均在30分钟显著增加，相比于此，乙醇提取物组的胰岛素浓度呈现出减少的趋势，乙酸乙酯提取物组的胰岛素浓度显著减少。这表示基于葡萄糖给药的胰岛素分泌的敏感性增加。通过以上的结果在体内(in vivo)动物实验中确认了鹿角卷柏提取物的优秀的血糖调节效果。
(5)血液生化指标分析
在所述实施例8-1的第十周绝食后，从各实验动物中测定血糖，利用采血后分离的血浆测定糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR index)，测定作为脂质含量的指标的总胆固醇(TC)及中性脂肪(triglyceride)的数值，测定作为肝功能的指标的AST及ALT。
使用EasyA1c糖化血红蛋白试剂盒[Infopia Co.,Ltd.]测定糖化血红蛋白，使用胰岛素ELISA试剂盒(Insulin ELISA kit)(Alpco diagnostics)测定胰岛素浓度，参考文献(Biochem.Biophys.Res.Commun.341：507-514，2006)中的计算式[胰岛素浓度(ng/mL)×24.8×葡萄糖浓度(mg/dL)÷来计算胰岛素抵抗指数。使用从韩国Asan制药购买的个别测定试剂盒(kit)对作为脂质组成指标的总胆固醇、作为中性脂肪浓度及肝功能的指标的AST和ALT浓度进行定量化。其结果如下列表5所示。
表5
Figure BDA0002541426790000201
a、b、c：意味着用上标表示的a、b、c在不同的组之间具有统计显著性(P<0.05)。
如所述表5所示，相比于阴性对照组，对照组呈现出显著高水平的空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素、胰岛素抵抗指数、总胆固醇、中性脂肪，与此相反，鹿角卷柏乙醇提取物和乙酸乙酯提取物的给药使由高脂肪饮食诱导的高血糖减少。除了血糖浓度之外，相比于对照组，乙醇提取物组、乙酸乙酯提取物组的糖化血红蛋白分别减少12.0％、14.7％，相比于对照组，胰岛素浓度在乙酸乙酯提取物组中显著减少51.1％。相比于对照组，胰岛素抵抗指数在乙醇提取物组、乙酸乙酯提取物组中分别显著减少21.3％、67.3％。相比于对照组，血液中的中性脂肪浓度在乙醇提取物组、乙酸乙酯提取物组中分别减少16.7％、17.9％。并且，作为肝功能指标的AST和ALT浓度在所有组中均为40IU/L以下，属于正常数值范围内，但是，相比于阴性对照组，在对照组中有所增加。与此相反，相比于对照组，乙酸乙酯提取物组的AST和ALT均显著减少。通过以上的结果在体内(in vivo)动物实验中不仅确认了鹿角卷柏提取物具有血糖调节效果，而且还确认了具有脂质下降及护肝效果。
制剂例1.片剂的制备
将在所述实施例1或实施例2中所制备的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物和/或其分馏物与结晶纤维素乳糖、淀粉等混合均匀后一起进行颗粒化，然后，与硬脂酸镁、蔗糖脂肪酸酯等混合后进行挤压来制备片剂。片剂中所使用的组成成分和其使用量如表6所示。
表6
实施例1或实施例2的鹿角卷柏(Selaginella rossii)和/或分馏物245mg
结晶纤维素(KP)225mg
乳糖(KP)12.5mg
淀粉(KP)12.5mg
硬脂酸镁(KP)10mg
蔗糖脂肪酸酯(KP)5mg
制剂例2.胶囊的制备
将根据所述实施例1或实施例2制备的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物和/或其分馏物与贝壳钙、结晶纤维素等混合均匀后填充至明胶胶囊来制备胶囊。
胶囊的制备中所使用的组成成分和其使用量如表7所示。
表7
实施例1或实施例2的鹿角卷柏(Selaginella rossii)和/或分馏物250mg
贝壳钙(KP)125mg
结晶纤维素(KP)65mg
制剂例3.液剂的制备
用0.15重量百分比的根据所述实施例1或实施例2制备的鹿角卷柏(Selaginellarossii)提取物和/或其分馏物、10重量百分比的液态果糖、2重量百分比的蜂蜜、2重量百分比的苹果浓缩果汁(60bx)、0.5重量百分比的瓜拉那提取物粉末、0.5重量百分比的含水柠檬酸、0.1重量百分比的柠檬酸钠、0.1重量百分比的牛黄酸制备组合物后添加纯化水来制备液剂。
制剂例4.健康饮料的制备
根据所述实施例1或实施例2制备的鹿角卷柏(Selaginella rossii)提取物和/或其分馏物与柠檬酸、低聚糖、木瓜浓缩液、青梅浓缩液、牛黄酸等混合均匀后，加入纯化水并在85℃的温度下搅拌加热约1小时后，将所制备的溶液过滤并收取至灭菌的容器中进行密封灭菌后，进行冷藏保管来制备饮料。
健康饮料的制备中所使用的组成成分和其使用量如表8所示。
表8
实施例1或实施例2的鹿角卷柏(Selaginella rossii)和/或分馏物1000mg
柠檬酸1000mg
低聚糖100g
木瓜浓缩液2g
青梅浓缩液2g
牛黄酸1g
纯化水900ml
<110> 韩国生命工学研究院
<120> 包含鹿角卷柏提取物、其分馏物的用于预防或治疗代谢综合症的组合物
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<213> 人工序列
<220>
<223> ARNTL_反向
<400> 4
gtcgtgctcc agaacataat cg 22
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GPR119_正向
<400> 5
ccatggctgg aggttatcga t 21
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GPR119_反向
<400> 6
agacacagta cggagagctt tgaa 24
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NR1D1_正向
<400> 7
cggagcatcc agcagaacat 20
<210> 8
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> NR1D1_反向
<400> 8
gcgattgatg cggacgat 18
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCSK1/3_正向
<400> 9
gagtgggtcc tagagattga aaaca 25
<210> 10
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PCSK1/3_反向
<400> 10
gccatagagt acgagggtga actt 24
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PER2_正向
<400> 11
agcgttacct ctgagcacat tg 22
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PER2_反向
<400> 12
catcgctgaa ggcatctctt t 21
<210> 13
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PLIN2_正向
<400> 13
cctcatgtcc tcagcctatc tca 23
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PLIN2_反向
<400> 14
accgttctct gccatctcac a 21
<210> 15
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 胰高血糖素原_正向
<400> 15
tgctgatggt tctttctctg atg 23
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 胰高血糖素原_反向
<400> 16
tccctggcgg caagatta 18
<210> 17
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PPAR β/δ_正向
<400> 17
attcagaaga agaaccgcaa caa 23
<210> 18
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PPAR β/δ_反向
<400> 18
ccggcatccg accaaaa 17

Claims (11)

1.一种用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物，其特征在于，包含鹿角卷柏提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物，其特征在于，所述代谢综合症选自糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血脂症、动脉硬化及它们的并发症。
3.根据权利要求1所述的用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物，其特征在于，所述鹿角卷柏提取物为水、低级C1-C4醇、乙酸乙酯或它们的混合溶剂提取物。
4.根据权利要求3所述的用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物，其特征在于，所述鹿角卷柏提取物为选自乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、甲醇提取物、甲醇水溶液提取物及乙酸乙酯提取物中的任一种提取物。
5.根据权利要求1所述的用于预防或治疗代谢综合症的药物组合物，其特征在于，所述分馏物为乙酸乙酯分馏物或丁醇分馏物。
6.一种用于预防或改善代谢综合症的食品组合物，其特征在于，包含鹿角卷柏提取物、其分馏物或它们两者。
7.根据权利要求6所述的用于预防或改善代谢综合症的食品组合物，其特征在于，所述代谢综合症选自糖尿病、肥胖、脂肪肝、高血脂症、动脉硬化及它们的并发症。
8.根据权利要求6所述的用于预防或改善代谢综合症的食品组合物，其特征在于，所述鹿角卷柏提取物为水、低级C1-C4低级醇、乙酸乙酯或它们的混合溶剂提取物。
9.根据权利要求8所述的用于预防或改善代谢综合症的食品组合物，其特征在于，所述鹿角卷柏提取物为选自乙醇提取物、乙醇水溶液提取物、甲醇提取物、甲醇水溶液提取物及乙酸乙酯提取物中的任一种提取物。
10.根据权利要求6所述的用于预防或改善代谢综合症的食品组合物，其特征在于，所述分馏物为乙酸乙酯分馏物或丁醇分馏物。
11.一种抗氧化用药物组合物，其特征在于，包含鹿角卷柏提取物、其分馏物或它们两者作为有效成分。
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