CN111484975A - 一种人t细胞cd3/cd28激活磁珠的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，具体包括：将抗CD3和CD28抗体以2:1的比例混合在无菌管中，加入硼酸盐缓冲液至5毫升；将抗体硼酸混合液与磁珠混合，置于37℃培养箱的混匀转子上孵育过夜；吸去抗体硼酸混合液，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上孵育10分钟，并将该步骤重复3次；吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上洗涤30分钟；吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在4℃冰箱的混匀转子上洗涤过夜；在磁力架上吸去溶剂；以4.75ml的磁珠洗涤液重悬磁珠。本发明能有高效的制备人T细胞CD3/CD28激活磁珠，方法简单，制作周期短。
Description
技术领域
本发明涉及生命科学技术领域，具体为一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法。
背景技术
人T细胞CD3/CD28激活磁珠可用于在体外扩增人的T细胞，从而加强人体免疫力。人T细胞CD3/CD28激活磁珠为扩增T细胞提供了一种简单的方法。首先，将CD3+T细胞分离，之后CD3+T细胞与人T细胞CD3/CD28激活磁珠共培养。这些磁珠将提供激活和扩增T细胞所需的初级和共刺激信号。T细胞通过结合磁珠上的CD3和CD28抗体，激活T细胞产生IL2，GM-CSF，IFNγ和TNFα。然而现有的人T细胞CD3/CD28激活磁珠制备方法较为复杂，制作周期较长。
发明内容
本发明所解决的技术问题在于提供一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，以解决上述背景技术中的问题。
本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、在无菌操作台中，将抗CD3和CD28抗体以2:1的比例混合在无菌管中，加入硼酸盐缓冲液至5毫升；
步骤2、涡旋振荡磁珠1分钟，使磁珠充分悬浮，取6毫升磁珠混合液到15毫升无菌离心管中，放置1分钟后，在磁力架上吸去溶剂；
步骤3、将步骤1所得抗体硼酸混合液与磁珠混合，置于37℃培养箱的混匀转子上孵育过夜；
步骤4、第二天将步骤3所得溶液在磁力架上吸去抗体硼酸混合液，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上孵育10分钟，并将该步骤重复3次；
步骤5、将步骤4所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上洗涤30分钟；
步骤6、将步骤5所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在4℃冰箱的混匀转子上洗涤过夜；
步骤7、第三天将步骤6所得溶液在磁力架上吸去溶剂；
步骤8、以4.75ml的磁珠洗涤液重悬磁珠，该磁珠即人T细胞CD3/CD28激活磁珠；
步骤9、人T细胞CD3/CD28激活磁珠稀释通过显微镜或者流式细胞仪计数并储存。
优选的，所述步骤1-步骤9均在无菌环境下进行操作。
优选的，所述37℃培养箱为37℃恒温培养箱。
优选的，所述步骤9中的储存温度为4℃。
优选的，所述硼酸盐缓冲液配制方法为：0.1M硼酸用NaOH调节pH至8.5，所述硼酸为：MW 61.83，3.09g/500ml。
与已公开技术相比，本发明能有高效的制备人T细胞CD3/CD28激活磁珠，方法简单，制作周期短。
具体实施方式
为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、在无菌操作台中，将抗CD3和CD28抗体以2:1的比例混合在无菌管中，加入硼酸盐缓冲液至5毫升；
步骤2、涡旋振荡磁珠1分钟，使磁珠充分悬浮，取6毫升磁珠混合液到15毫升无菌离心管中，放置1分钟后，在磁力架上吸去溶剂；
步骤3、将步骤1所得抗体硼酸混合液与磁珠混合，置于37℃培养箱的混匀转子上孵育过夜；
步骤4、第二天将步骤3所得溶液在磁力架上吸去抗体硼酸混合液，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上孵育10分钟，并将该步骤重复3次；
步骤5、将步骤4所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上洗涤30分钟；
步骤6、将步骤5所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在4℃冰箱的混匀转子上洗涤过夜；
步骤7、第三天将步骤6所得溶液在磁力架上吸去溶剂；
步骤8、以4.75ml的磁珠洗涤液重悬磁珠，该磁珠即人T细胞CD3/CD28激活磁珠；
步骤9、人T细胞CD3/CD28激活磁珠稀释通过显微镜或者流式细胞仪计数并储存。
优选的，所述步骤1-步骤9均在无菌环境下进行操作。
实施例2
一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，具体包括以下步骤：
步骤1、在无菌操作台中，将抗CD3和CD28抗体以2:1的比例混合在无菌管中，加入硼酸盐缓冲液至5毫升；
步骤2、涡旋振荡磁珠1分钟，使磁珠充分悬浮，取6毫升磁珠混合液到15毫升无菌离心管中，放置1分钟后，在磁力架上吸去溶剂；
步骤3、将步骤1所得抗体硼酸混合液与磁珠混合，置于37℃培养箱的混匀转子上孵育过夜；
步骤4、第二天将步骤3所得溶液在磁力架上吸去抗体硼酸混合液，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上孵育10分钟，并将该步骤重复3次；
步骤5、将步骤4所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上洗涤30分钟；
步骤6、将步骤5所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在4℃冰箱的混匀转子上洗涤过夜；
步骤7、第三天将步骤6所得溶液在磁力架上吸去溶剂；
步骤8、以4.75ml的磁珠洗涤液重悬磁珠，该磁珠即人T细胞CD3/CD28激活磁珠；
步骤9、人T细胞CD3/CD28激活磁珠稀释通过显微镜或者流式细胞仪计数并储存在4℃的环境下。
优选的，所述步骤1-步骤9均在无菌环境下进行操作。
优选的，所述37℃培养箱为37℃恒温培养箱。
优选的，所述硼酸盐缓冲液配制方法为：0.1M硼酸用NaOH调节pH至8.5，所述硼酸为：MW 61.83，3.09g/500ml。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明的要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (5)
1.一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤，
步骤1、在无菌操作台中，将抗CD3和CD28抗体以2:1的比例混合在无菌管中，加入硼酸盐缓冲液至5毫升；
步骤2、涡旋振荡磁珠1分钟，使磁珠充分悬浮，取6毫升磁珠混合液到15毫升无菌离心管中，放置1分钟后，在磁力架上吸去溶剂；
步骤3、将步骤1所得抗体硼酸混合液与磁珠混合，置于37℃培养箱的混匀转子上孵育过夜；
步骤4、第二天将步骤3所得溶液在磁力架上吸去抗体硼酸混合液，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上孵育10分钟，并将该步骤重复3次；
步骤5、将步骤4所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在37℃培养箱的混匀转子上洗涤30分钟；
步骤6、将步骤5所得溶液在磁力架上吸去溶剂，加入等体积磁珠洗涤液，在4℃冰箱的混匀转子上洗涤过夜；
步骤7、第三天将步骤6所得溶液在磁力架上吸去溶剂；
步骤8、以4.75ml的磁珠洗涤液重悬磁珠，该磁珠即人T细胞CD3/CD28激活磁珠；
步骤9、人T细胞CD3/CD28激活磁珠稀释通过显微镜或者流式细胞仪计数并储存。
2.根据权利要求1所述的一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤1-步骤9均在无菌环境下进行操作。
3.根据权利要求1所述的一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，其特征在于：所述37℃培养箱为37℃恒温培养箱。
4.根据权利要求1所述的一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤9中的储存温度为4℃。
5.根据权利要求1所述的一种人T细胞CD3/CD28激活磁珠的制备方法，其特征在于：所述硼酸盐缓冲液配制方法为：0.1M硼酸用NaOH调节pH至8.5，所述硼酸为：MW 61.83，3.09g/500ml。
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