CN111481540A

CN111481540A - Pf429242用于保护脑缺血再灌注损伤的医药用途

Info

Publication number: CN111481540A
Application number: CN202010314456.0A
Authority: CN
Inventors: 徐洲; 翟荣良; 吴楠; 温相如; 李闯; 郑岩
Original assignee: Xuzhou Medical University
Current assignee: Xuzhou Medical University
Priority date: 2020-04-20
Filing date: 2020-04-20
Publication date: 2020-08-04
Anticipated expiration: 2040-04-20
Also published as: CN111481540B

Abstract

本发明公开了PF429242用于保护缺血再灌注损伤的医药用途。具体而言，本发明提供了PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐在筛选、制备用于预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途。本发明通过大量实验证明，PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐可以有效减少由大鼠脑缺血再灌注所带来的脑细胞损伤和功能障碍，对神经脑细胞具有明显的保护作用。

Description

PF429242用于保护脑缺血再灌注损伤的医药用途

技术领域

本发明涉及一种PF429242的医药用途，具体涉及PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐用于保护脑缺血再灌注损伤的医药用途，属于医学技术领域。

背景技术

脑血管疾病以其发病率、致残率、死亡率高成为导致人类死亡的三大疾病之一，严重危害人类健康。迄今为止，临床上对于脑血管疾病首要治疗原则是尽早恢复或重建血液的再灌注，使缺血脑组织重新获得氧的供应并提供代谢所需的营养物质及清除代谢产物。一方面，这些治疗措施可使闭塞的脑血管、缺血的脑组织及时得到再灌注，挽救了大批濒临死亡的脑细胞，有利于神经元功能恢复；而另一方面，缺血组织再灌注后往往使其病理损害进一步加重甚至不可逆，临床症状恶化，这种恢复血流灌注后造成进一步的脑细胞损伤和功能障碍现象被称为脑缺血再灌注损伤，减弱或消除再灌注损伤是治疗脑缺血疾病的关键。

迄今，众多研究人员对如何预防和治疗脑缺血导致的相关疾病做了大量工作，但能达到预期治疗效果的药物并不多。

发明内容

本发明的主要目的在于提供PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐用于保护脑缺血再灌注损伤的医药用途，以克服现有技术的不足。

本发明通过大量实验证明，在大鼠脑缺血再灌注时，PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐能有效减少由此所带来的脑细胞损伤和功能障碍，对神经脑细胞具有明显的保护作用，由此完成了本发明。

本发明实施例的一个方面提供了PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途。

本发明实施例的另一个方面还提供了PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐用于筛选预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途。

进一步的，所述预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤是指抑制或减缓脑缺血再灌注的发生和/或进展和/或逆转其病理改变。

进一步的，所述药物为组合物，所述组合物包括PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐与任选的药学上可接受的载体或赋形剂。

所述组合物可以呈现为多种制剂形式，例如注射剂、片剂、粉剂等等，且不限于此。

本发明实施例的再一个方面还提供了一种具有预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤功能的药物组合物，其包括：

PF429242及其对映异构体中的至少一者和/或至少一者的药学上可接受的盐；以及

任选的药学上可接受的载体或赋形剂。

进一步的，所述药物组合物包括PF429242与其对映异构体的等摩尔混合物，即PF429242的消旋体(亦称消旋组合物)。

本说明书中述及的PF429242亦称PF-429242，其结构式如下：

。

在现有技术中，PF429242主要是作为固醇调节元件结合蛋白(SREBP)位点1蛋白酶的可逆竞争性抑制剂，即S1P抑制剂，其对胰蛋白酶、弹性蛋白酶、蛋白酶K、胞浆素、激肽释放酶、factor XIa、凝血酶或弗林蛋白酶没有显著抑制作用，而对尿激酶和factor Xa仅具有中等抑制作用。但迄今未见有关PF429242与脑缺血再灌注损伤关系的报道。

进一步的，所述PF429242的对映异构体为PF429242的左旋手性异构体，其结构式如下：

进一步的，所述PF429242的消旋体如下：

本发明所述的“药学上可接受的盐”具体地可列举为PF429242或其对映异构体与盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸形成的盐，或与甲酸、乙酸，甲磺酸、乙磺酸等有机酸形成的盐，但不限于此。进一步的，所述PF429242及其对映异构体中的至少一者的药学上可接受的盐优选为其水溶性盐，尤其优选为其盐酸盐。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1A-图1D分别是本发明一实施例中假手术组、对照组、模型组、实验组的尼氏染色照片。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

本实施例采用四血管法全脑缺血再灌模型，采用海马CA1区尼氏染色进行神经脑细胞病理形态学分析，旷场试验对大鼠自主行为和运动能力评分评价其行为学，Lemay法神经功能评分(见表1)，尼莫地平为标准对照药。

表1神经功能评分标准

1、实验动物及分组

清洁级健康雄性SD成年大鼠48只(由徐州医科大学实验动物中心提供)，于SPF环境中自由摄食饮水，进行48小时适应性饲养。将实验大鼠随机分为4组(每组12只)：假手术组、模型组、对照组和实验组。

2、全脑缺血再灌注大鼠模型建立

(1)大鼠模型建立

GCIR是研究缺血损伤后恢复相对理想的模型，本实施例中采用Pulsinelli四血管法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。四血管阻断法主要是在颈前正中切口，分离双侧颈总动脉，分离暴露第一颈椎横突翼并找左右横突孔，电凝双侧椎动脉，造成永久性闭塞。于24小时后做给药预处理，打开颈前正中切口，动脉夹结扎双侧颈总动脉，阻断血液15min。模型成功参考标准：(1)双侧颈动脉夹闭后1min内动物意识丧失；(2)眼球变大，双侧瞳孔散大，对光反射消失；(3)翻正反射消失。凡不符以上标准或再灌注期间出现全身强直、抽搐等异常反应或死亡都视为模型建立不成功

(2)给药预处理

本实施例采用尾静脉注射给药(0.1ml/只)，以生物级DMSO：生理盐水＝1∶1溶解药物，超声5min以使药物均匀溶解。假手术组不做缺血、给药处理，模型组(缺血15min再灌注)，不做给药预处理；对照组(尼莫地平，0.51mg/kg)；实验组(PF429242，0.5mg/kg)。

3、神经功能缺损评分

手术结束动物完全清醒后立即进行第1次行为学评分，48小时后再评分1次。参照lemay法分级标准对全脑缺血大鼠进行评分。

大鼠于再灌注后48h神经功能缺损评分，模型组大鼠全脑缺血模型神经行为学有明显改变，与假手术组比较，差异有统计学意义(Z＝37.50，P＜0.05)，提示造模成功；模型组与实验组比较，差异有统计学意义(Z＝11.81，P＜0.05)，表明PF429242给药处理对大鼠再灌注损伤神经功能产生积极影响；尼莫地平组与给药组比较，差异无统计学意义(Z＝-1.09，P＞0.05)，表明两组分别对大鼠神经行为改善作用无明显差异。(见表2)

4、大鼠存活率

于5天后，计算各组大鼠存活率。根据以上标准，假手术组存活12只(100％)，模型组8只(66％)，实验组为10只(83％)，对照组造模成功9只(75％)，四组比较差异无统计学意义(χ2＝6.79，P＞0.05)，提示该方法造模大鼠成活率稳定性较好。具体可以参见下表2。

表2 PF429242对GCIR大鼠各组指标的影响

注：P＜0.05为差异有统计学意义；^aP＜0.05；χ²＝6.79，P＞0.05；^bP＞0.05；与假手术组相比¹P＜0.05；与模型组相比²P＜0.05；与对照组相比³P＞0.05；模型组与假手术组相比⁴⁾P＜0.05.

5、旷场试验检测大鼠自主行为、探究行为与焦虑行为

该实验于安静的环境下进行，将动物放入箱内底面中心，同时进行摄像和计时(3min)。用沾湿有醋酸稀释液的抹布擦拭方箱内壁及底面，以免上次动物余留的信息(如动物的大、小便、气味)影响下次测试结果。更换动物，继续实验。观察指标：根据计算机软件设计观察的参数(1)单位时间内动物在中央格穿过次数、距离；(2)尿便次数；(3)运动总距离。

对穿过中央格次数结果分析：四组比较差异有统计学意义(F＝12.44，P＜0.05)；模型组大鼠对周围环境自主探索意识有明显减弱，与假手术组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示模型建立成功；与实验组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示PF429242能改善大鼠自主探索行为和焦虑度；对照组与实验组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。对在中央格走过的平均速度结果分析：四组比较差异与统计学意义(F＝6.56，P＜0.05)；模型组与假手术组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；模型组与实验组比较，差异无统计学意义(P＜0.05)；对照组与实验组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。表明实验组和对照组处理能改善大鼠自主探索和运动能力，具体也可参见表2。

6、大鼠海马组织病理形态学评价——尼氏染色

尼氏体(Nissl body)：是胞质内的一种嗜碱性物质，广泛见于各种神经元。在生理情况下，尼氏体大而数量多，反映神经细胞合成蛋白质的功能较强，在神经元受损时，尼氏体的数量可减少甚至消失。取脑后用4％多聚甲醛溶液固定，30％蔗糖溶液脱水后，经OCT包埋做冰冻切片，切片10μm，做尼氏染色。

整个手术过程中保持大鼠的体温在37℃左右，术后饲养保证房间无菌、适宜温度和湿度，详细记录大鼠饮食和精神状态以及活动状态。假手术组游离双侧颈总动脉但不阻断血流。对四组大鼠存活5天后的海马CA1区Nissl染色结果分析：四组细胞存活个数比较，差异有统计学意义(F＝87.35，P＜0.05)；缺血模型组大鼠神经元个数有明显减少，与假手术组相比，差异有显著统计学意义(P＜0.05)；与实验组相比较，差异有显著统计学意义(P＜0.05)，表明给药PF429242预处理对大鼠神经细胞损伤有明显保护作用；实验组与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)，表明两药处理对大鼠神经元保护作用相当。以上结果表明PF429242对大鼠全脑缺血再灌注损伤神经细胞有明显保护作用。

假手术组海马CA1区神经元细胞结构完整，层次清晰，未见明显核固缩，神经元蓝染；实验组和对照组神经细胞排列稍有离散，核固缩出现不明显，细胞数量较空白组有所减少(P＜0.05)；缺血再灌注模型组神经元细胞染色浅，神经细胞排列紊乱，出现明显核固缩，细胞数量减少。假手术组、对照组、模型组、实验组分别如图1A、图1B、图1C、图1D所示。

本发明人还依照前述实验过程，将PF429242的对映异构体、其消旋体、其盐酸盐应用于全脑缺血再灌注大鼠模型，实验结果与以上PF429242实验组的结果基本一致。

尽管已参考说明性实施例描述了本发明，但所属领域的技术人员将理解，在不背离本发明的精神及范围的情况下可做出各种其它改变、省略及/或添加且可用实质等效物替代所述实施例的元件。另外，可在不背离本发明的范围的情况下做出许多修改以使特定情形或材料适应本发明的教示。因此，本文并不打算将本发明限制于用于执行本发明的所揭示特定实施例，而是打算使本发明将包含归属于所附权利要求书的范围内的所有实施例。

Claims

1.PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤是指抑制或减缓脑缺血再灌注的发生和/或进展和/或逆转其病理改变。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物为组合物，所述组合物包括：PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐；以及，任选的药学上可接受的载体或赋形剂。

4.PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐用于筛选预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤的药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述预防和/或治疗脑缺血再灌注损伤是指抑制或减缓脑缺血再灌注的发生和/或进展和/或逆转其病理改变。

6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述药物为组合物，所述组合物包括：PF429242、其对映异构体、其消旋体或其药学上可接受的盐；以及，任选的药学上可接受的载体或赋形剂。