CN111474282B - 对待测化合物进行定性/定量检测的方法和试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了对待测化合物进行定性/定量检测的方法和试剂盒，其中，对待测化合物进行定性/定量检测的方法包括：利用化合物提取微粒与待测溶液接触，以便得到富集所述待测化合物的化合物提取微粒；对所述富集所述待测化合物的化合物提取微粒进行洗脱处理，以便得到待测液；以及对所述待测液进行分析处理，以便对待测化合物进行定性/定量检测。该方法利用化合物提取微粒进行提取富集，对待提取化合物及其结构类似物特异性吸附和富集，并且，该化合物提取微粒负载两种待提取化合物模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种结构相似化合物。

Description

对待测化合物进行定性/定量检测的方法和试剂盒
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体地，涉及对待测化合物进行定性/定量检测的方法和试剂盒，更具体地，涉及对待测化合物进行定性/定量检测的方法和对目标化合物进行定性/定量检测的试剂盒。
背景技术
有机磷农药主要作为杀虫剂来防治危害农林牧业生产的有害生物，但是它们对于人、畜的毒性比较高，经常会因为在使用或保管过程中不慎而发生中毒现象，这是因为有机磷农药对生物体内胆碱酯酶有抑制作用且其抑制作用是不可逆的，从而使胆碱酯酶失去了原有的催化乙酰胆碱水解的功能，造成乙酰胆碱的积累，使神经过分刺激，冲动不能休止，引起机体痉挛、瘫痪等一系列神经中毒症状，甚至死亡。
由于有机磷农药的高毒性，它们的残留对人体健康和生物环境有着显著危害。而农药残留分析往往是需要从复杂混合物中分析痕量组分，这就要求分析人员既配备高灵敏度的痕量检测设备，又具备精细的微量操作手段。传统前处理方法技术成熟，但由于吸附剂与分析物之间是非特异性吸附常存在选择性差、基质效应大等问题，且常需要离心分离等使操作复杂。
因此，检测有机磷农药方法有待改进。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种对待测化合物进行定性/定量检测的方法，利用化合物提取微粒对待测进行提取富集，对待提取化合物及其结构类似物特异性吸附和富集，并且，该化合物提取微粒负载两种待提取化合物模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种结构相似化合物。
因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种对待测化合物进行定性/定量检测的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：利用化合物提取微粒与待测溶液接触，以便得到富集所述待测化合物的化合物提取微粒；对所述富集所述待测化合物的化合物提取微粒进行洗脱处理，以便得到待测液；以及对所述待测液进行分析处理，以便对待测化合物进行定性/定量检测，其中，所述化合物提取微粒包括：磁性内核，所述磁性内核为四氧化三铁纳米粒；中间层，所述中间层形成在所述磁性内核的至少部分表面；以及吸附层，所述吸附层形成在所述磁性内核和所述中间层的至少部分表面，所述吸附层是由交联多聚物形成的，呈多孔状，且具有待提取化合物嵌合空间。
根据本发明实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的方法，利用化合物提取微粒进行提取富集，对待提取化合物及其结构类似物特异性吸附和富集，并且，该化合物提取微粒负载两种待提取化合物模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种结构相似化合物，并且提取化合物的容量更大，能充分降低基质效应，检测的准确性高。并且，该化合物提取微粒含有磁性载体纳米粒，不仅可以利用外加磁性达到与溶液的快速分离还使化合物提取速度增加，而且达到快速选择、分离的效果。
另外，根据本发明上述实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的方法还可以具有如下附加的技术特征：
根据本发明的实施例，制备所述化合物提取微粒的方法包括：提供磁性载体纳米粒；将第一待提取化合物和第二待提取化合物与第一单体化合物和第二单体化合物接触，形成预聚液；将所述预聚液与交联剂和所述磁性载体纳米粒进行交联反应，在所述磁性载体纳米粒的至少部分表面形成嵌合所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物的交联多聚物，以便得到微粒中间体；以及将所述微粒中间体进行洗脱处理，去除所述微粒中间体上的所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物，以便获得所述化合物提取微粒。
根据本发明的实施例，所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物均为含磷化合物。
根据本发明的实施例，所述第一待提取化合物为喹硫磷，所述第二待提取化合物为甲基对硫磷。
根据本发明的实施例，所述交联反应进一步包括：交联剂，所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)；以及引发剂，所述引发剂为2,2-偶氮双(异丁腈)(AIBN)。
根据本发明的实施例，1ml所述待测溶液与5-15mg所述化合物提取微粒进行所述接触，所述接触的时间为5-15分钟。
根据本发明的实施例，利用色谱-质谱联用技术进行所述分析处理。
根据本发明的实施例，所述色谱条件为：色谱柱：DB-5MS色谱柱，规格为30m×0.25mm I.D.，0.25μm；载气：N2；进样量：1.0μL。
根据本发明的实施例，所述色谱的程序升温条件为从70℃，20℃/min升温至150℃，15℃/min升温至250℃，保持1min，再以30℃/min到280℃。
根据本发明的实施例，所述质谱条件为：进样口温度：200℃；离子源温度:150℃；四极温度；300℃；检测方式：离子监测(SIM)模式和全扫描模式；溶剂延迟时间：5min。
根据本发明的实施例，所述待测化合物为有机磷农药化合物。
根据本发明的实施例，所述有机磷农药化合物为选自甲基对硫磷、对硫磷、乙基对硫磷、杀螟硫磷、喹硫磷、甲基毒死蜱、毒死蜱、杀扑磷、倍硫磷、氯唑磷、三唑磷和丙溴磷的至少一种。
根据本发明的实施例，所述有机磷农药化合物的离子监测检测条件为：甲基对硫磷：定量离子为263m/z，定性离子为109/125m/z；对硫磷：定量离子为291m/z，定性离子为155/235m/z；乙基对硫磷：定量离子为109m/z，定性离子为81/149m/z；杀螟硫磷：定量离子为277m/z，定性离子为109/260m/z；喹硫磷：定量离子为146m/z，定性离子为157/298m/z；甲基毒死蜱：定量离子为286m/z，定性离子为109/125m/z；毒死蜱：定量离子为97m/z，定性离子为286/314m/z；杀扑磷：定量离子为145m/z，定性离子为85/58m/z；倍硫磷：定量离子为278m/z，定性离子为169/153m/z；氯唑磷：定量离子为161m/z，定性离子为313/257m/z；三唑磷：定量离子为161m/z，定性离子为257/285m/z；丙溴磷：定量离子为208m/z，定性离子为339/374m/z。
根据本发明的另一方面，本发明提供了一种对目标化合物进行定性/定量检测的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：化合物提取微粒，所述化合物提取微粒是利用前述的方法制备的，所述化合物提取微粒包括：磁性内核，所述磁性内核为四氧化三铁纳米粒；中间层，所述中间层形成在所述磁性内核的至少部分表面；以及吸附层，所述吸附层形成在所述磁性内核和所述中间层的至少部分表面，所述吸附层是由交联多聚物形成的，呈多孔状，且具有待提取化合物嵌合空间；前述的对待测化合物进行定性/定量检测的方法所使用的试剂和检测耗材。
根据本发明实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的试剂盒，利用化合物提取微粒进行提取富集，对待提取化合物及其结构类似物特异性吸附和富集，并且，该化合物提取微粒负载两种待提取化合物模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种结构相似化合物，并且提取化合物的容量更大，简化了化合物提取的流程。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的空白样的总离子流示意图；
图2显示了根据本发明一个实施例的加标样的总离子流示意图；
图3显示了根据本发明一个实施例的提取化合物后的化合物提取微粒的总离子流示意图；
图4显示了根据本发明一个实施例的提取化合物后的QuEChERS的总离子流示意图；
图5显示了根据本发明一个实施例的化合物提取微粒重复使用率结果示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，术语“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明而不是要求本发明必须以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种对待测化合物进行定性/定量检测的方法。
根据本发明实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的方法，利用化合物提取微粒进行提取富集，对待提取化合物及其结构类似物特异性吸附和富集，并且，该化合物提取微粒负载两种待提取化合物模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种结构相似化合物，并且提取化合物的容量更大，能充分降低基质效应，检测的准确性高。并且，该化合物提取微粒含有磁性载体纳米粒，不仅可以利用外加磁性达到与溶液的快速分离，而且还使化合物提取速度增加，达到快速选择、分离的效果。
根据本发明实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的方法，采用的化合物提取微粒具有可循环使用、对待提取化合物特异性强、选择性高、稳定性好等优点，并且，样品的前处理过程简单易操作，尤其适用于复杂基质样品，例如食品的提取富集。
为了便于理解本发明实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的方法，根据本发明的实施例，对该方法进行解释说明，该方法包括：
S100提取富集
根据本发明的实施例，利用化合物提取微粒与待测溶液接触，得到富集待测化合物的化合物提取微粒。由此，采用的化合物提取微粒对待提取化合物进行提取富集，具有特异性强、选择性高、稳定性好等优点，并且，样品的前处理过程简单易操作，尤其适用于复杂基质样品，例如食品的提取富集，并且该化合物提取微粒可循环使用，降低提取富集的成本。
根据本发明的实施例，该化合物提取微粒包括：磁性内核、中间层和吸附层，其中，该磁性内核为四氧化三铁纳米粒；该中间层形成在磁性内核的至少部分表面；该吸附层形成在磁性内核和中间层的至少部分表面，该吸附层是由交联多聚物形成的，呈多孔状，且具有待提取化合物嵌合空间。由此，该化合物提取微粒以第一待提取化合物和第二待提取化合物两种化合物为模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种化合物，并且提取化合物的容量更大，简化了化合物提取的流程，降低了提取成本。
根据本发明的实施例，制备所述化合物提取微粒的方法包括：提供磁性载体纳米粒；将第一待提取化合物和第二待提取化合物与第一单体化合物和第二单体化合物接触，形成预聚液；将所述预聚液与交联剂和所述磁性载体纳米粒进行交联反应，在所述磁性载体纳米粒的至少部分表面形成嵌合所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物的交联多聚物，以便得到微粒中间体；以及将所述微粒中间体进行洗脱处理，去除所述微粒中间体上的所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物，以便获得所述化合物提取微粒。由此，该方法以第一待提取化合物和第二待提取化合物两种化合物为模板，制备的化合物提取微粒提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种化合物，并且提取化合物的容量更大，简化了化合物提取的流程，降低了提取成本。
根据本发明的实施例，该第一待提取化合物和第二待提取化合物均为含磷化合物。由此，适于有机磷农药等含磷化合物的提取，简化了提取流程，降低了提取成本。
进一步地，根据本发明的实施例，第一待提取化合物为喹硫磷，第二待提取化合物为甲基对硫磷。由此，甲基对硫磷含有的硝基和喹硫磷含有的N基均活泼，较容易与功能单体化合物反应以非共价键结合成预聚物，有利于增加预聚物的作用力的种类和数量。提高聚合物选择性和吸附容量；甲基对硫磷和喹硫磷性质稳定，容易在GC-MS检测且对同类型物质具有代表性；甲基对硫磷和喹硫磷在应用上十分广泛，且毒性大，这两类化合物的准确检测对食品安全有重要意义。
根据本发明的实施例，第一待提取化合物与所述第二待提取化合物的摩尔比为1:0.5-2。由此，第一待提取化合物和第二待提取化合物的摩尔比使其与功能单体化合物结合的几率相同，形成的多类型结合位点均匀，因此得到的提取微粒的选择性优异。
根据本发明的实施例，该第一单体化合物和该第二单体化合物的摩尔比为1:1-3。由此，第一单体化合物与第二单体化合物的摩尔比使其能充分发挥MAA的氢键结合和作用和4-VP的酸基作用，有利于提供更多种类和数量的作用力从而与待提取化合物更易结合形成预聚物。
根据本发明的实施例，该交联反应进一步包括：交联剂和引发剂，其中，该交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，该引发剂为2,2-偶氮双(异丁腈)(AIBN)。由此，EGDMA作为交联剂交联度高，使获得的聚合物有一定硬度，选择性高且非特异性吸附低，而AIBN作为引发剂促进交联剂发生聚合反应，交联反应的效率高。
根据本发明的实施例，该第一待提取化合物与第二待提取化合物的摩尔数之和与第一单体化合物和第二单体化合物的摩尔数之和及交联剂的摩尔数的比例为1:3-5:17-23。由此，该投料摩尔比获得的分子印迹聚合物具有合适的硬度和形态，对两个待提取化合物的选择性优异。
根据本发明的实施例，该第一待提取化合物与第二待提取化合物的摩尔数之和与磁性载体纳米粒的质量的比例为1摩尔：80-120mg。由此，该比例能使聚合物充分印迹在磁性载体纳米粒上且不剩余过多磁性载体纳米粒。
根据本发明的实施例，该交联反应的条件是在50-70℃的搅拌条件下，处理18-30小时。由此，该反应条件下，反应的效率高，速度快。
根据本发明的实施例，1ml待测溶液与5-15mg化合物提取微粒进行接触，该接触的时间为5-15分钟。由于本发明实施例的化合物提取微粒对含磷化合物的平衡吸附时间为8-12分钟，因此，接触的时间为5-15分钟，在控制合理的提取时间的前提下，有利于充分提取待测溶液中的待提取化合物。
S200洗脱处理
根据本发明的实施例，对富集待测化合物的化合物提取微粒进行洗脱处理，得到待测液。由此，通过洗脱处理，将嵌合在化合物提取微粒孔穴中的待测化合物分离处理，便于后续的分析处理。
S300分析处理
根据本发明的实施例，对该待测液进行分析处理，从而，对待测化合物进行定性/定量检测。分析处理的手段可以根据待测化合物的结构性质进行具体选择，在此不受特别的限制。
根据本发明的优选实施例，可以利用色谱-质谱联用技术进行所述分析处理。由此，检测的准确度和灵敏度高。
根据本发明的实施例，该色谱条件为：色谱柱：DB-5MS色谱柱，规格为30m×0.25mmI.D.，0.25μm；载气：N2；进样量：1.0μL。由此，该色谱柱对目标分析物均有良好保留且峰干扰小。
根据本发明的实施例，该色谱的程序升温条件为从70℃，20℃/min升温至150℃，15℃/min升温至250℃，保持1min，再以30℃/min到280℃。由此，该程序升温条件使目标分析物分离度好且在色谱上保留时间短。
根据本发明的实施例，所述质谱条件为：进样口温度：200℃；离子源温度:150℃；四极温度；300℃；检测方式：离子监测(SIM)模式和全扫描模式；溶剂延迟时间：5min。由此，该质谱条件使目标分析物充分离子化便于检测，SIM模式确认的离子对便于定性和定量分析。
根据本发明的实施例，待测化合物为有机磷农药化合物。有机磷农药多存在于食品中，以食品为待测为，基质复杂，并且有机磷农药化合物的种类繁多，检测困难，利用本发明实施例的化合物提取微粒，以两种不同有机磷农药化合物为提取模板，能快速简便地提取多种有机磷化合物，简化了提取流程，降低了提取成本。具体地，根据本发明的实施例，该有机磷农药化合物为选自甲基对硫磷、对硫磷、乙基对硫磷、杀螟硫磷、喹硫磷、甲基毒死蜱、毒死蜱、杀扑磷、倍硫磷、氯唑磷、三唑磷和丙溴磷的至少一种。
进一步地，根据本发明的实施例，该有机磷农药化合物的离子监测检测条件为：甲基对硫磷：定量离子为263m/z，定性离子为109/125m/z；对硫磷：定量离子为291m/z，定性离子为155/235m/z；乙基对硫磷：定量离子为109m/z，定性离子为81/149m/z；杀螟硫磷：定量离子为277m/z，定性离子为109/260m/z；喹硫磷：定量离子为146m/z，定性离子为157/298m/z；甲基毒死蜱：定量离子为286m/z，定性离子为109/125m/z；毒死蜱：定量离子为97m/z，定性离子为286/314m/z；杀扑磷：定量离子为145m/z，定性离子为85/58m/z；倍硫磷：定量离子为278m/z，定性离子为169/153m/z；氯唑磷：定量离子为161m/z，定性离子为313/257m/z；三唑磷：定量离子为161m/z，定性离子为257/285m/z；丙溴磷：定量离子为208m/z，定性离子为339/374m/z。由此，根据上述定量离子和定性离子能够准确地对有机磷农药化合物进行定性和定量检测。
根据本发明的另一方面，本发明提供了一种对目标化合物进行定性/定量检测的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包括：化合物提取微粒，所述化合物提取微粒是利用前述的方法制备的，所述化合物提取微粒包括：磁性内核，所述磁性内核为四氧化三铁纳米粒；中间层，所述中间层形成在所述磁性内核的至少部分表面；以及吸附层，所述吸附层形成在所述磁性内核和所述中间层的至少部分表面，所述吸附层是由交联多聚物形成的，呈多孔状，且具有待提取化合物嵌合空间；前述的对待测化合物进行定性/定量检测的方法所使用的试剂和检测耗材。
根据本发明实施例的对待测化合物进行定性/定量检测的试剂盒，利用化合物提取微粒进行提取富集，对待提取化合物及其结构类似物特异性吸附和富集，并且，该化合物提取微粒负载两种待提取化合物模板，提取的化合物的范围更广，适于同时提取多种结构相似化合物，并且提取化合物的容量更大，简化了化合物提取的流程。
根据本发明的实施例，待测化合物为有机磷农药化合物。有机磷农药多存在于食品中，以食品为待测为，基质复杂，并且有机磷农药化合物的种类繁多，检测困难，利用本发明实施例的化合物提取微粒，以两种不同有机磷农药化合物为提取模板，能快速简便地提取多种有机磷化合物，简化了提取流程，降低了提取成本。具体地，根据本发明的实施例，该有机磷农药化合物为选自甲基对硫磷、对硫磷、乙基对硫磷、杀螟硫磷、喹硫磷、甲基毒死蜱、毒死蜱、杀扑磷、倍硫磷、氯唑磷、三唑磷和丙溴磷的至少一种。
下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。
实施例1
本实施例中，以喹硫磷和甲基对硫磷为待提取化合物，制备化合物提取微粒，并对其进行表征，其方法如下：
1、制备方法：
(1)用FeCl3和FeSO4·7H2O合成Fe3O4，再用原硅酸四乙酯(TEOS)水解制备Fe3O4@SiO2，然后用3-甲基丙烯酰氧基丙三甲氧基硅烷(MPS)为Fe3O4@SiO2修饰上碳碳双键，得到磁性载体纳米粒Fe3O4@SiO2；
(2)以喹硫磷和甲基对硫磷为双待提取化合物，以甲基丙烯酸(MAA)和4-乙烯基吡啶(4-VP)为两个单体化合物，待提取化合物与单体化合物的摩尔比为1:4，两个单体化合物摩尔比MAA:4-VP为1:2，溶解于4mL氯仿中，4℃静置2h，形成预聚溶液。
(3)将磁性载体Fe3O4@SiO2，交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，引发剂2,2-偶氮双(异丁腈)(AIBN)分散溶解于2mL氯仿中，超声处理15min，待提取化合物与单体化合物的摩尔比为1:20，引发剂为25mg。
(4)将预聚液加入上述处理的溶液中，然后用氮气(N2)吹扫15min后密封。
(5)交联反应在60℃，500r/min搅拌条件下反应24h，得到交联产物。
(6)用研钵将交联产物磨碎过70μm筛后，用250mL甲醇：乙酸(9:1，v/v)作为洗脱液在索式提取装置中洗脱48h以除去待提取化合物，用250mL甲醇洗脱12h洗去多余酸，干燥后即得到化合物提取微粒。
实施例2
以实施例1制备的结合化合物提取微粒GC-MS对北京市场购买的结球甘蓝的12种有机磷农残进行检测分析，其方法如下：
1、标准溶液制备：
分别称取甲基对硫磷、对硫磷、乙基对硫磷、杀螟硫磷、喹硫磷、甲基毒死蜱、毒死蜱、杀扑磷、倍硫磷、氯唑磷、三唑磷和丙溴磷标准品10mg，分别加入10mL丙酮溶解，配制成质量浓度为1000mg/L标准溶液，混合标准溶液质量浓度按照比例稀释成50μg/L和100μg/L。
2、结球甘蓝样品准备：
样品提取过程如下：
(1)称绞碎菜样5g，先加入20mL乙腈进行均质提取，离心后分出上清液。
(2)再加20mL乙腈对残渣二次提取，合并提取液向其中加入3g氯化钠充分震荡后离心，取上清液并利用旋转蒸发器干燥后，用2mL丙酮复溶后，为空白样备用。
(3)分别将50μg/L和100μg/L的12种混合标准品加入5g样品中，再以相同的步骤提取，最后各用2mL丙酮复溶即制得加标样品1和加标样品2。
3、比较化合物提取微粒与传统QuEChERS技术的回收率：
(1)提取处理
化合物提取微粒提取条件为分别将1mL加标样1和加标样2与10mg化合物提取微粒混合，吸附10min后，用磁铁分离溶液和聚合物，上清液通过0.25μm过滤器过滤到色谱小瓶中，用GC-MS测定吸附后的残留浓度。
传统QuEChERS技术条件为分别将1mL加标样1和加标样2直接加入商品化QuEChERS材料包中，充分混合后离心，收集上清过0.25μm滤膜后，用GC-MS测定提取浓度。
(2)GC-MS定性和定量分析：
确定质谱条件如下：
Agilent 7890气相色谱仪配备有一个DB-5MS(30m×0.25mm I.D.，0.25μm)色谱柱和5975C质谱仪以及7683型自动采样器。气相色谱的操作条件如下：提供1.0mL/min的恒定N2流作为载气，进样量为1.0μL，程序升温为从70℃，20℃/min升温至150℃，15℃/min升温至250℃，保持1min，最后以30℃/min到280℃。选择不分流进样模式，进样口温度为200℃。质谱条件：离子源温度为150℃，四极温度为300℃；选择离子监测(SIM)模式和全扫描模式同时使用；溶剂延迟时间设为5min。
表1有机磷类质谱分析条件
化合物名称 化学式 分子量 保留时间(min) 定量离子(m/z) 定性离子(m/z)
三唑磷 C<sub>9</sub>H<sub>17</sub>ClN<sub>3</sub>O<sub>3</sub>PS 313.47 7.242 161 313,257
甲基毒死蜱 C<sub>7</sub>H<sub>7</sub>Cl<sub>3</sub>NO<sub>3</sub>PS 322.53 7.631 286 109,125
甲基对硫磷 C<sub>8</sub>H<sub>10</sub>NO<sub>5</sub>PS 263.21 7.701 263 109,125
乙基对硫磷 C<sub>10</sub>H<sub>14</sub>NO<sub>6</sub>P 275.20 7.799 109 81,149
杀螟硫磷 C<sub>9</sub>H<sub>12</sub>NO<sub>5</sub>PS 277.23 7.939 277 109,260
毒死蜱 C<sub>9</sub>H<sub>11</sub>Cl<sub>3</sub>NO<sub>3</sub>PS 350.59 8.096 97 286,314
倍硫磷 C<sub>10</sub>H<sub>15</sub>O<sub>3</sub>PS<sub>2</sub> 278.33 8.155 278 169,153
对硫磷 C<sub>10</sub>H<sub>14</sub>NO<sub>5</sub>PS 291.26 8.193 291 155,235
喹硫磷 C<sub>12</sub>H<sub>15</sub>N<sub>2</sub>O<sub>3</sub>PS 298.30 8.685 146 157,298
杀扑磷 C<sub>6</sub>H<sub>11</sub>N<sub>2</sub>O<sub>4</sub>PS<sub>3</sub> 302.33 8.874 145 85,58
丙溴磷 C<sub>11</sub>H<sub>15</sub>BrClO<sub>3</sub>PS 373.63 9.203 208 339,374
三唑磷 C<sub>12</sub>H<sub>16</sub>N<sub>3</sub>O<sub>3</sub>PS 313.31 9.824 161 257,285
本实验采用外标法对实际样品进行定量测定，即配制一系列不同梯度的标准品混合液，测定不同浓度下每种有机磷化合物的峰面积并绘制浓度-峰面积标准曲线，通过标准曲线来对实际样品中有机磷化合物进行定量分析。
4、试剂盒重复使用性
将步骤“3.(1)”提取后的提取微粒用2mL甲醇：乙酸(9:1，v/v)超声5min，重复3次并干燥后再次用于结球甘蓝加标样的样品前处理，并重复整个操作5次，以评价提取微粒的重复使用性。
5、检测结果
采用GC-MS系统，SIM模式扫描得到空白样品(图1)和加标样品(图2)总离子流图，其中，空白样品中不含有所检测的目标物，因此不会对检测结果造成影响。
(1)GC-MS测定12种有机磷农残的试剂盒应用于结球甘蓝农残的分析结果如下：
GC-MS检测结果详见图3和4和表2，结果表明，本发明实施例的化合物提取微粒对12种化合物在线性范围内线性关系良好，相关系数均大于0.99，检出限和定量限均在国家农残标准限以下，回收率在65.62-147.63％，RSD为0.18-4.82％。本方法能够有效的检测不同基质中有机磷类农残，为有机磷农残的监控提供一种快速、高效、简便和同时检测的新方法。
表2加标样中12种有机磷农残的含量及回收率
Figure BDA0002505573300000101
(2)方法学考察
对线性关系及检出限、定量限进行检测，分别稀释混合标准溶液质量浓度至0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.08μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、0.8μg/mL、1μg/mL，进样1μL，检测所得数据导入GC-MS数据分析软件计算回归方程，并以信噪比(S/N)等于3和10为准，测得各组分的检出限和定量限，具体见表3。
表3线性范围及检出限、定量限
化合物名称 线性范围(μg/mL) 相关系数 检出限(μg/mL) 定量限(μg/mL)
三唑磷 0.01-0.5 0.999 1.02 3.41
甲基毒死蜱 0.05-1 0.995 9.68 32.26
甲基对硫磷 0.05-1 0.997 15.31 51.02
乙基对硫磷 0.05-0.8 0.992 11.28 37.59
杀螟硫磷 0.05-0.8 0.992 7.39 24.63
毒死蜱 0.05-1 0.996 1.62 5.41
倍硫磷 0.05-1 0.999 4.71 15.69
对硫磷 0.01-0.5 0.995 9.68 32.26
喹硫磷 0.05-0.8 0.996 2.59 8.62
杀扑磷 0.05-1 0.997 5.93 19.76
丙溴磷 0.05-1 0.997 3.23 10.75
三唑磷 0.05-1 0.996 4.75 15.82
从上述结果可以看出，各个化合物的响应值与浓度均呈现出良好的线性关系。
(3)试剂盒重复使用性
5次试剂盒重复使用结果详见图5，结果表明该化合物提取微粒在5次适用范围内没有明显的特异性降低现象，表明该化合物提取微粒可多次重复使用。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (11)

1.一种对待测化合物进行定性/定量检测的方法，其特征在于，包括：
利用化合物提取微粒与待测溶液接触，以便得到富集所述待测化合物的化合物提取微粒；
对所述富集所述待测化合物的化合物提取微粒进行洗脱处理，以便得到待测液；以及
对所述待测液进行分析处理，以便对待测化合物进行定性/定量检测，
其中，所述化合物提取微粒包括：
磁性内核，所述磁性内核为四氧化三铁纳米粒；
中间层，所述中间层形成在所述磁性内核的至少部分表面；以及
吸附层，所述吸附层形成在所述磁性内核和所述中间层的至少部分表面，所述吸附层是由交联多聚物形成的，呈多孔状，且具有待提取化合物嵌合空间，
其中，制备所述化合物提取微粒的方法包括：
提供磁性载体纳米粒；
将第一待提取化合物和第二待提取化合物与第一单体化合物和第二单体化合物接触，形成预聚液，所述第一单体化合物为甲基丙烯酸，所述第二单体化合物为4-乙烯基吡啶，所述第一待提取化合物为喹硫磷，所述第二待提取化合物为甲基对硫磷，其中，所述第一待提取化合物与所述第二待提取化合物的摩尔比为1:0.5-2，所述第一单体化合物和所述第二单体化合物的摩尔比为1:1-3；
将所述预聚液与交联剂和所述磁性载体纳米粒进行交联反应，在所述磁性载体纳米粒的至少部分表面形成嵌合所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物的交联多聚物，以便得到微粒中间体；以及
将所述微粒中间体进行洗脱处理，去除所述微粒中间体上的所述第一待提取化合物和所述第二待提取化合物，以便获得所述化合物提取微粒，
其中，所述待测化合物为有机磷农药化合物，所述有机磷农药化合物为选自甲基对硫磷、对硫磷、乙基对硫磷、杀螟硫磷、喹硫磷、甲基毒死蜱、毒死蜱、杀扑磷、倍硫磷、氯唑磷、三唑磷和丙溴磷的至少一种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述交联反应进一步包括：
交联剂，所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯；以及
引发剂，所述引发剂为2,2-偶氮双（异丁腈）。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，1ml所述待测溶液与5-15mg所述化合物提取微粒进行所述接触，所述接触的时间为5-15分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用色谱-质谱联用技术进行所述分析处理。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述色谱条件为：
色谱柱：DB-5 MS色谱柱，规格为30 m×0.25 mm I.D.，0.25μm；
载气：N2；
载气流速：0.8-1.2 mL/min；
进样量：1.0 µL。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述色谱的程序升温条件为从70 ℃，20℃/min升温至150 ℃，15 ℃/min升温至250 ℃，保持1 min，再以30 ℃/min到280 ℃。
7.根据权利要求 5所述的方法，其特征在于，所述质谱条件为：
进样口温度：200 ℃；
离子源温度:150 ℃；
四极温度；300 ℃；
检测方式：离子监测SIM模式和全扫描模式；
溶剂延迟时间：5 min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机磷农药化合物的离子监测检测条件为：
甲基对硫磷：定量离子为263 m/z，定性离子为109/125 m/z；
对硫磷：定量离子为291 m/z，定性离子为155/235 m/z；
乙基对硫磷：定量离子为109 m/z，定性离子为81/149 m/z；
杀螟硫磷：定量离子为277 m/z，定性离子为109/260 m/z；
喹硫磷：定量离子为146 m/z，定性离子为157/298 m/z；
甲基毒死蜱：定量离子为286 m/z，定性离子为109/125 m/z；
毒死蜱：定量离子为97 m/z，定性离子为286/314 m/z；
杀扑磷：定量离子为145 m/z，定性离子为85/58 m/z；
倍硫磷：定量离子为278 m/z，定性离子为169/153 m/z；
氯唑磷：定量离子为161 m/z，定性离子为313/257 m/z；
三唑磷：定量离子为161 m/z，定性离子为257/285 m/z；
丙溴磷：定量离子为208 m/z，定性离子为339/374 m/z。
9.一种对目标化合物进行定性/定量检测的试剂盒，其特征在于，包括：
化合物提取微粒，所述化合物提取微粒是利用权利要求1-8任一项所述的方法制备的，所述化合物提取微粒包括：
磁性内核，所述磁性内核为四氧化三铁纳米粒；
中间层，所述中间层形成在所述磁性内核的至少部分表面；以及
吸附层，所述吸附层形成在所述磁性内核和所述中间层的至少部分表面，所述吸附层是由交联多聚物形成的，呈多孔状，且具有待提取化合物嵌合空间;
权利要求1-8任一项所述的对待测化合物进行定性/定量检测的方法所使用的试剂和检测耗材。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述待测化合物为有机磷农药化合物。
11.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述有机磷农药化合物为选自甲基对硫磷、对硫磷、乙基对硫磷、杀螟硫磷、喹硫磷、甲基毒死蜱、毒死蜱、杀扑磷、倍硫磷、氯唑磷、三唑磷和丙溴磷的至少一种。
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