CN111471628A - 一株新的链球菌及其制剂在抑制口腔致病菌中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一株链球菌(Streptococcus imauus sp.nov.)IMAU99161，保藏编号为：CGMCC 18474，属于微生物制剂技术领域。本发明的链球菌IMAU99161分离自母乳，食用安全，发酵牛乳能力良好，而且该株链球菌具有良好的产酸、产黏能力。本发明的链球菌IMAU99161对伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌都有明显的抑菌作用，在对伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌引起的疾病(口腔疾病)的防治中具有广阔的发展空间，在抗菌制剂研究开发方面具有很好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生物制剂技术领域，尤其涉及一株链球菌、包括链球菌的菌剂及应用。
背景技术
口腔感染属于临床较为普遍的一种感染，主要因为致病微生物进入到患者的口腔颌面部，最终导致出现了系列的病理活动。在人体口腔中，厌氧菌数量高于需氧菌数量极为明显，对于口腔感染诸多表现为多种病原菌共同作用最终导致患病。伴随着医药技术的快速发展，抗菌药物的使用种类呈现为逐渐增多的现象，在此种形势下，抗菌药物滥用现象以及药物应用不严格的现象逐渐出现，最终导致细菌耐药性呈现为一定程度的严重。目前，需要一种口腔致病菌的生物防治途径。
发明内容
本发明的目的在于提供一株新的链球菌、包括链球菌的菌剂及应用，该链球菌对口腔致病菌中的伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌都有明显的抑菌作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一株链球菌(Streptococcus imauus sp.nov.)IMAU99161，保藏编号为：CGMCC 18474。
本发明提供了一种包括上述方案所述链球菌的菌剂。
优选的，所述菌剂中链球菌的有效活菌浓度为1×106～1×108CFU/mL。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备发酵乳中的应用。
优选的，所述发酵乳包括发酵牛乳。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备抑制口腔致病菌的药物中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在抑制伴放线放线杆菌中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备防治伴放线放线杆菌引起的疾病的药物中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在抑制牙龈卟啉单胞杆菌中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备防治牙龈卟啉单胞杆菌引起的疾病的药物中的应用。
本发明的有益效果：本发明提供了一株链球菌(Streptococcus imauus sp.nov.)IMAU99161，保藏编号为：CGMCC 18474。本发明的链球菌IMAU99161发酵牛乳能力良好，而且该株链球菌具有良好的产酸、产黏能力。本发明的链球菌IMAU99161对伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌都有明显的抑菌作用，在对伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌引起的疾病(口腔疾病)的防治中具有广阔的发展空间，在抗菌药物方面具有很好的开发应用前景。
生物保藏说明
链球菌(Streptococcus imauus sp.nov.)IMAU99161，于2019年9月9日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC18474。
附图说明
图1为链球菌IMAU99161血清型实验结果；
图2为链球菌IMAU99161显微镜照片(革兰氏染色，放大倍数100×40)；
图3为链球菌IMAU99161扫描电镜照片；
图4为链球菌IMAU9916116S rRNA基因系统发育树；
图5为不同浓度IMAU99161活菌对伴放线杆菌的牛津杯抑菌效果图，其中A为106CFU/ml活菌数对伴放线杆菌的牛津杯抑菌效果图；B为108CFU/ml活菌数对伴放线杆菌的牛津杯抑菌效果图；
图6为不同浓度IMAU99161活菌对牙龈卟啉单胞杆菌的牛津杯抑菌效果，其中A为106CFU/ml活菌数对牙龈卟啉单胞杆菌的牛津杯抑菌效果；B为108CFU/ml活菌数对牙龈卟啉单胞杆菌的牛津杯抑菌效果。
具体实施方式
本发明提供了一株链球菌(Streptococcus imauus sp.nov.)IMAU99161，保藏编号为：CGMCC 18474。本发明的链球菌IMAU99161分离、筛选自内蒙古健康妇女母乳。
本发明的链球菌IMAU99161为革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，排列成链状的球形菌。根据16S rRNA基因序列分析比对和系统发育树的构建研究，发现IMAU 99161菌株与模式菌株Streptococcus parasanguinis DSM6778和Streptococcus lactarius DSM 23027的同源性最高，与其它菌株的同源性较低。IMAU 99161菌株的平均核苷酸同一性值的距离与类型菌株相比，证实了与近缘种的分离物种状态链球菌属，均低于界定一个物种的阈值，分别为81.16％。DNA G+C含量为41.6mol％。在这项研究中获得的差异系统发育独特性和表型特性表明，IMAU 99161菌株可以与密切相关的物种区分开。
本发明提供了一种包括上述方案所述链球菌的菌剂；所述菌剂中链球菌的有效活菌浓度优选为1×106～1×108CFU/mL，更优选为1×107CFU/mL。本发明所述菌剂优选的采用以下方法得到：将链球菌IMAU 99161接种于M17培养基，进行培养，得到菌剂；本发明对所述接种量，培养条件没有特殊限制，采用本领域常规链球菌培养方法即可。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备发酵乳中的应用；所述发酵乳优选的包括发酵牛乳。
本发明中，所述发酵牛乳优选的采用以下方法制备得到：将链球菌M17培养液按照0.03wt‰的比例混合后接种到100g的牛乳中，在37℃条件下进行发酵，至发酵牛乳的pH小于4.5时即到发酵终点；所述链球菌M17培养液中链球菌的有效活菌浓度优选为1×108CFU/mL。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备抑制口腔致病菌的药物中的应用；所述抑制口腔致病菌通过抑制伴放线放线杆菌和/或抑制牙龈卟啉单胞杆菌实现。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在抑制伴放线放线杆菌中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备防治伴放线放线杆菌引起的疾病的药物中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在抑制牙龈卟啉单胞杆菌中的应用。
本发明提供了上述方案所述链球菌或者所述菌剂在制备防治牙龈卟啉单胞杆菌引起的疾病的药物中的应用。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1链球菌新种形态学观察
1.菌株来源
Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161分离自内蒙古健康妇女母乳，通过M17选择性固体培养基划线分离得到。挑单菌接入到M17液体培养基，37℃培养24h，培养3代，保存分离株。
2.形态学特性
将经分离纯化的链球菌新种转接到哥伦比亚血平板上，置5％CO2培养箱37℃培养24～48h。Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161在哥伦比亚血琼脂培养基上37℃培养24h后形成直径0.5～1.0mm，灰白色、圆形隆起、湿润、边缘整齐的针尖状细小菌落(图1)，持续培养48h后，在其菌落周围出现0.9mm左右的草绿色溶血环。光学显微镜下观察该菌革兰阳性，单个菌体呈球形，成对或数个短链状排列(图2)。电镜下观察该菌呈链球菌典型特征：单个菌体呈现球形或卵圆形，直径约0.5～0.9μm，菌体成对或数个短链状排列，无芽胞、无鞭毛(图3)。
3.Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161氯化钠耐受情况参见表1
表1 Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161氯化钠耐受
由表1可以看出，Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161在含20g/LNaCl的M17培养基上生长，在超过20g/LNaCl的M17培养基上不生长。
4.Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161温度耐受情况参见表2
表2.Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161温度耐受性情况
由表2可知：Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161在15℃、30℃、37℃、45℃、55℃培养时生长，4℃、60℃时不生长。
实施例2IMAU 99161菌株生化实验鉴定
IMAU 99161菌株在BHI平板上生长过夜，以制备具有该过程所需适当光密度的原料药悬浮液中的细胞接种物。在API50 CH试剂盒中孵育24h和48h后读取读数。阳性和阴性测试根据原料药系统指示的颜色代码进行评估。生化反应结果见表3。
表3 Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161与其他近源链球菌API50生化反应结果
注：1.“-”为阴性，“+”为阳性。2.DSM6778：Streptococcus parasanguinis；DSM12493：Streptococcus peroris；DSM20617：Streptococcus salivariussubsp.thermophilus；ATCC33478：Streptococcus sobrinus；JCM19861：Streptococcuspseudopneumoniae。
由表3可以看出，新种IMAU99161与其16S序列同源性最高的模式菌DSM6778株相比，IMAU99161不能利用D-棉子糖和D-蜜二糖。
实施例3链球菌IMAU99161的16SrRNA分类鉴定
基因组DNA提取，16SrRNA序列PCR扩增，PCR扩增产物直接送上海美吉生物医药科技有限公司，经公司纯化后进行序列测定。测定完进行数据统计分析：首先采用SeqMan软件、DNAstar软件对所得序列进行拼接，正反向检测，并去除载体和引物序列。之后使用MAGA6.0软件，采用邻近-连接法和最大似然法构建系统进化发生树，最后对所生成的进化树运用Bootstrap进行检验。以肠球菌属E.coli ATCC 11775T作为外群。结果如图4所示，可以看出Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161在聚类树上处在一个独立的进化分支上，与S.lactarius,S.parasanguinis的亲缘关系相对较近。Streptococcus imauussp.nov.IMAU99161与链球菌属其它已知种Blast比对的identity值均低于97％，亲缘关系较远。表明从16SrRNA分类水平支持Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161属于链球菌属里一个新种。
实施例4链球菌IMAU99161基因组学分析
本发明在获得Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161的纯培养后，进行了全基因组测序，对其基因组基本特征进行了预测分析，并对模式株与链球菌属其他已知种进行了遗传进化分析。全基因组测序工作由上海美吉生物医药科技有限公司完成。采用三代测序平台PacBio的单分子实时测序技术对Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161全基因组进行测定，SMRTAnalysis2.3.0软件包对测序数据进行质控过滤，拼接组装成完整的环状基因组序列。运用GeneMarkS软件进行编码基因CDS预测，运用tRNAscan-SE和rRNAmmer软件预测基因组中tRNAs和rRNA。运用IslandPath-DIOMB软件进行基因岛预测。结果测得Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161基因组全长2,062,482bp，G+C含量为41.6mol％，编码1,225个基因。
实施例5IMAU99161发酵牛乳产酸能力测定
将Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161在M17培养基中活化24h后，进行菌株活菌计数。用活化第二代的链球菌M17培养液(1×108CFU/mL)按照0.03wt‰的比例混合后接种到100g的牛乳中，在37℃条件下进行发酵实验，对发酵牛乳的pH和滴定酸度进行测定。当发酵牛乳的pH小于4.5时即到发酵终点。
pH测定的具体方法为：使用pH计测定液相体系的pH。
酸度滴定的具体方法为：按照国家标准GB5009.239—2016中规定的“酚酞指示剂法”进行检测。
Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161发酵牛乳pH和滴定酸度测定结果如表4所示。
表4 Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161牛乳发酵过程中的pH和滴定酸度变化
其中，数字肩英文小写字母表示随着时间增加，pH值及酸度变化差异性，差异性水平设定为0.05。
由表4可知，发酵牛乳的pH值和滴定酸度随发酵时间的增加产生明显差异。
实施例6 IMAU99161发酵牛乳黏度和持水能力测定
黏度测定的具体方法为：发酵牛乳样品放至室温后，黏度仪设为测量黏度程序，并使用该黏度仪测定样品黏度。
持水能力测定的具体方法为：准确称取发酵牛乳样品20.00g，置于有滤纸的漏斗中，室温放置90min后收集滤液并称重，并按照以下计算公式计算持水能力：
持水性(％)＝1-(滤液质量g/样品质量g)×100％。
Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161发酵牛乳黏度和持水能力测定结果如表5所示。
表5 Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161发酵的黏度和持水性测定结果
其中，数字上表英文小写字母表示随着时间增加，黏度及持水力变化差异性，差异性水平设定为0.05。
由表5可知，发酵牛乳的黏度及持水力随发酵时间的增加产生明显差异。
实施例7 Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161抑菌活性
采用M17培养基对Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161进行培养，以滤纸片琼脂扩散法测定Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161的抑菌作用，具体操作步骤如下，结果见图5和图6，其中图5为IMAU99161不同活菌数浓度下对伴放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌的抑菌效果，其中A为106CFU/ml IMAU99161活菌数对伴放线杆菌的抑菌效果图；B为108CFU/ml IMAU99161活菌数对伴放线杆菌的抑菌效果图；图6为不同浓度下IMAU99161对牙龈卟啉单胞杆菌的抑菌效果图，其中A为106CFU/ml IMAU99161活菌数对牙龈卟啉单胞杆菌的抑菌效果；B为106CFU/ml IMAU99161活菌数对牙龈卟啉单胞杆菌的抑菌效果；具体分析结果见表6。
实验方法为稀释涂布法，具体操作如下。首先，Streptococcus imauussp.nov.IMAU99161菌液的制备。然后，将病原菌液通过无菌水稀释，具体稀释倍数视不同病原菌的活菌数目而定，原则上是避免涂布平板后长出明显的单菌落，将病原菌液涂布至干。接下来在平板中央放置一个外径8.05mm,内径6.00mm的牛津杯，在杯内加入一定量的Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161菌液，37℃培养箱中置培养24h后，用游标卡尺测量抑菌圈的直径。
表6 Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161的抑菌结果
从表6的抑菌结果可以看出，本发明的Streptococcus imauus sp.nov.IMAU99161菌株对伴放线杆菌和牙龈卟啉单胞杆菌都有较明显的抑菌作用。因此，本发明的菌株在抗菌药物方面具有潜在的应用前景。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一株链球菌(Streptococcus imauus sp.nov.)IMAU99161，保藏编号为：CGMCC18474。
2.一种包括权利要求1所述链球菌的菌剂。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中链球菌的有效活菌浓度为1×106～1×108CFU/mL。
4.权利要求1所述链球菌或者权利要求2或3所述菌剂在制备发酵乳中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述发酵乳包括发酵牛乳。
6.权利要求1所述链球菌或者权利要求2所述菌剂在制备抑制口腔致病菌的微生态制剂中的应用。
7.权利要求1所述链球菌或者权利要求2所述菌剂在抑制伴放线放线杆菌中的应用。
8.权利要求1所述链球菌或者权利要求2所述菌剂在制备防治伴放线放线杆菌引起的疾病的微生态制剂中的应用。
9.权利要求1所述链球菌或者权利要求2所述菌剂在抑制牙龈卟啉单胞杆菌中的应用。
10.权利要求1所述链球菌或者权利要求2所述菌剂在制备防治牙龈卟啉单胞杆菌引起的疾病的微生态制剂中的应用。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102057036A (zh) * | 2008-06-11 | 2011-05-11 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于预防和/或治疗口腔恶臭的用途和方法 |
| CN105326656A (zh) * | 2015-10-29 | 2016-02-17 | 山东省药学科学院 | 一种含有乳酸链球菌素、聚赖氨酸的口腔抑菌组合物及其制备方法 |
| CN106434461A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-02-22 | 内蒙古农业大学 | 一株嗜热链球菌菌株及其用途 |
| KR101711603B1 (ko) * | 2015-11-03 | 2017-03-03 | 윤철식 | 스티피탈리드를 유효성분으로 포함하는 조성물 |
| CN108410762A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-08-17 | 海南医学院 | 一种链球菌新种hts20及其应用 |
| CN108485999A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-09-04 | 海南医学院 | 一种链球菌新种hts25及其应用 |
| CN109266581A (zh) * | 2018-10-10 | 2019-01-25 | 北京科拓恒通生物技术股份有限公司 | 一株嗜热链球菌及其应用 |
-
2020
- 2020-06-04 CN CN202010500826.XA patent/CN111471628B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102057036A (zh) * | 2008-06-11 | 2011-05-11 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于预防和/或治疗口腔恶臭的用途和方法 |
| CN105326656A (zh) * | 2015-10-29 | 2016-02-17 | 山东省药学科学院 | 一种含有乳酸链球菌素、聚赖氨酸的口腔抑菌组合物及其制备方法 |
| KR101711603B1 (ko) * | 2015-11-03 | 2017-03-03 | 윤철식 | 스티피탈리드를 유효성분으로 포함하는 조성물 |
| CN106434461A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-02-22 | 内蒙古农业大学 | 一株嗜热链球菌菌株及其用途 |
| CN108410762A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-08-17 | 海南医学院 | 一种链球菌新种hts20及其应用 |
| CN108485999A (zh) * | 2018-03-07 | 2018-09-04 | 海南医学院 | 一种链球菌新种hts25及其应用 |
| CN109266581A (zh) * | 2018-10-10 | 2019-01-25 | 北京科拓恒通生物技术股份有限公司 | 一株嗜热链球菌及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 韩晗: "《微生物资源开发学》", 31 March 2018 * |
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| Publication number | Publication date |
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