CN111455091B - 与油茶种仁油中亚麻酸含量相关的snp分子标记及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供与油茶种仁油中亚麻酸含量相关的SNP分子标记及其应用。所述分子标记是与油茶油脂中亚麻酸含量显著关联的47个SNP标记，这些标记位于油茶的30个转录本内。本发明提供的SNP标记位置明确，检测方法方便快速，不受环境影响，目的性更强，工作量小，效率更高，成本低。通过检测这些SNP位点，可在苗期进行鉴定和辅助筛选，大大节约生产成本和提高选择效率。利用本发明的分子标记进行高亚麻酸含量油茶育种，可提高油茶育种的选择效率，加快育种进程。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学及遗传育种技术领域，具体地说，涉及与油茶种仁油中亚麻酸含量相关的SNP分子标记及其应用。
背景技术
近年来产业的迅速发展使得油茶(Camellia oleifera)作为唯一的木本油料，成为我国四大油料(油菜、花生、大豆和油茶)之一。油茶油不饱和脂肪酸含量高，且以性质稳定的油酸为主要成分，是营养价值可与橄榄油媲美，又适应中国民众高温烹饪习惯的高档保健食用油。大力发展油茶产业，既可以有效缓解耕地压力，增加我国食用油供给能力，又可有效改善我国居民的膳食结构。油茶产业健康、持续发展，高产、高油、质优的新品种是基础和关键。
目前，油茶育种以选择和杂交育种为主要手段、以产果量为主要育种目的，并已取得了重要进展，以改良含油率和油脂品质为目的的育种研究开展较少。项目组的前期研究表明，以已收集的大量优良种质为基础，选育高产、高含油率和高油脂品质的“三高”新品种是可行及必要的。但是，由于童期长，采用选择和杂交等传统育种技术选育油茶新品种的周期长达12～20年，缓慢的良种选育速度严重阻滞了油茶产业的发展。分子标记辅助选择(MAS)育种可大幅缩短育种的进程，将其应用于童期长的果用经济林的育种，优势尤其明显。因此，发掘油茶含油率、脂肪酸组分等性状的等位基因变异，解析其油脂性状调控机制，是推动油茶经济性状分子辅助育种的关键，这将有效缩短育种周期，加快油茶育种的进程。
油茶分子标记辅助育种研究起步较晚，主要集中在品种鉴别、自然群体或杂交群体遗传多样性研究等方面，与性状，尤其是经济性状相关的分子标记辅助育种研究较少涉及。同时，由于生产上广泛种植的普通油茶为6倍体，高度复杂的遗传背景为油茶经济性状相关标记开发及关键调控基因挖掘带来巨大阻碍。
发明内容
本发明的目的是提供与油茶种仁油中亚麻酸含量相关的SNP分子标记及其应用。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供与油茶种仁油中亚麻酸含量相关的SNP分子标记，所述分子标记选自PB.102493.1-527、PB.103936.1-364、PB.10862.1-1402、PB.14705.1-426、PB.18953.1-793、PB.22228.2-2299、PB.24874.2-147、PB.26169.1-190、PB.28575.1-517、PB.34783.2-2214、PB.35363.2-2268、PB.3873.1-32、PB.46307.1-770、PB.47164.1-980、PB.50731.1-672、PB.50731.1-680、PB.5358.1-2661、PB.54042.1-2426、PB.54042.1-2477、PB.57367.1-207、PB.63477.1-1109、PB.63477.1-1163、PB.63477.1-1166、PB.67182.2-1418、PB.67876.1-630、PB.70158.1-1025、PB.70158.1-187、PB.70158.1-306、PB.70158.1-314、PB.70158.1-408、PB.70158.1-413、PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704、PB.70158.1-707、PB.70158.1-778、PB.70158.1-854、PB.70158.1-930、PB.70158.1-935、PB.73485.1-510、PB.76712.1-959、PB.78861.1-470、PB.80962.1-1163、PB.8223.1-569、PB.8694.1-1090、PB.96124.1-1263和PB.9959.4-583中的任一个。
其中，标记PB.102493.1-527含有油茶如SEQ ID NO:61所示序列第527bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.103936.1-364含有油茶如SEQ ID NO:62所示序列第364bp处的多态性为G/T的核苷酸序列；
标记PB.10862.1-1402含有油茶如SEQ ID NO:63所示序列第1402bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.14705.1-426含有油茶如SEQ ID NO:64所示序列第426bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.18953.1-793含有油茶如SEQ ID NO:65所示序列第793bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.22228.2-2299含有油茶如SEQ ID NO:66所示序列第2299bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.24874.2-147含有油茶如SEQ ID NO:67所示序列第147bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.26169.1-190含有油茶如SEQ ID NO:68所示序列第190bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.28575.1-517含有油茶如SEQ ID NO:69所示序列第517bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.34783.2-2214含有油茶如SEQ ID NO:70所示序列第2214bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.35363.2-2268含有油茶如SEQ ID NO:71所示序列第2268bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.3873.1-32含有油茶如SEQ ID NO:72所示序列第32bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.46307.1-770含有油茶如SEQ ID NO:73所示序列第770bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.47164.1-980含有油茶如SEQ ID NO:74所示序列第980bp处的多态性为G/T的核苷酸序列；
标记PB.50731.1-672含有油茶如SEQ ID NO:75所示序列第672bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.50731.1-680含有油茶如SEQ ID NO:75所示序列第680bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.5358.1-2661含有油茶如SEQ ID NO:76所示序列第2661bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.54042.1-2426含有油茶如SEQ ID NO:77所示序列第2426bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.54042.1-2477含有油茶如SEQ ID NO:77所示序列第2477bp处的多态性为G/T的核苷酸序列；
标记PB.57367.1-207含有油茶如SEQ ID NO:78所示序列第207bp处的多态性为G/C的核苷酸序列；
标记PB.63477.1-1109含有油茶如SEQ ID NO:79所示序列第1109bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.63477.1-1163含有油茶如SEQ ID NO:79所示序列第1163bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.63477.1-1166含有油茶如SEQ ID NO:79所示序列第1166bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.67182.2-1418含有油茶如SEQ ID NO:80所示序列第1418bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.67876.1-630含有油茶如SEQ ID NO:81所示序列第630bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-1025含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第1025bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-187含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第187bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-306含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第306bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-314含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第314bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-408含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第408bp处的多态性为T/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-413含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第413bp处的多态性为T/A的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-473含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第473bp处的多态性为C/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-649含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第649bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-704含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第704bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-707含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第707bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-778含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第778bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-854含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第854bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-930含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第930bp处的多态性为C/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-935含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第935bp处的多态性为T/G的核苷酸序列；
标记PB.73485.1-510含有油茶如SEQ ID NO:83所示序列第510bp处的多态性为C/G的核苷酸序列；
标记PB.76712.1-959含有油茶如SEQ ID NO:84所示序列第959bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.78861.1-470含有油茶如SEQ ID NO:85所示序列第470bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.80962.1-1163含有油茶如SEQ ID NO:86所示序列第1163bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.8223.1-569含有油茶如SEQ ID NO:87所示序列第569bp处的多态性为T/A的核苷酸序列；
标记PB.8694.1-1090含有油茶如SEQ ID NO:88所示序列第1090bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.96124.1-1263含有油茶如SEQ ID NO:89所示序列第1263bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.9959.4-583含有油茶如SEQ ID NO:90所示序列第583bp处的多态性为T/C的核苷酸序列。
其中，标记PB.102493.1-527所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.103936.1-364所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.10862.1-1402所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.14705.1-426所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.18953.1-793所含多态性位点的基因型为TC或TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.22228.2-2299所含多态性位点的基因型为CT或TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.24874.2-147所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.26169.1-190所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.28575.1-517所含多态性位点的基因型为AA或GA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.34783.2-2214所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.35363.2-2268所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.3873.1-32所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.46307.1-770所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.47164.1-980所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.50731.1-672所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CT或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.50731.1-680所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AG或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.5358.1-2661所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.54042.1-2426所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.54042.1-2477所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.57367.1-207所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GC或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1109所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1163所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1166所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.67182.2-1418所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.67876.1-630所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-1025所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-187所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-306所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-314所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-408所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-413所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-473所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-649所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-704所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-707所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-778所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-854所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-930所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-935所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.73485.1-510所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.76712.1-959所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.78861.1-470所含多态性位点的基因型为CC或TC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.80962.1-1163所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.8223.1-569所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.8694.1-1090所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.96124.1-1263所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.9959.4-583所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量。
第二方面，本发明提供与油茶种子亚麻酸含量相关的SNP分子标记组合，所述分子标记组合包括标记PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704和PB.70158.1-707(四个关键SNP位点)，以及标记PB.102493.1-527、PB.103936.1-364、PB.10862.1-1402、PB.14705.1-426、PB.18953.1-793、PB.22228.2-2299、PB.24874.2-147、PB.26169.1-190、PB.28575.1-517、PB.34783.2-2214、PB.35363.2-2268、PB.3873.1-32、PB.46307.1-770、PB.47164.1-980、PB.50731.1-672、PB.50731.1-680、PB.5358.1-2661、PB.54042.1-2426、PB.54042.1-2477、PB.57367.1-207、PB.63477.1-1109、PB.63477.1-1163、PB.63477.1-1166、PB.67182.2-1418、PB.67876.1-630、PB.70158.1-1025、PB.70158.1-187、PB.70158.1-306、PB.70158.1-314、PB.70158.1-408、PB.70158.1-413、PB.70158.1-778、PB.70158.1-854、PB.70158.1-930、PB.70158.1-935、PB.73485.1-510、PB.76712.1-959、PB.78861.1-470、PB.80962.1-1163、PB.8223.1-569、PB.8694.1-1090、PB.96124.1-1263和PB.9959.4-583中的至少一个。
优选地，该分子标记组合包括上述全部47个SNP分子标记。
第三方面，本发明提供用于扩增所述分子标记的引物，用于扩增标记PB.102493.1-527的引物如SEQ ID NO:1-2所示，用于扩增标记PB.103936.1-364的引物如SEQ ID NO:3-4所示，用于扩增标记PB.10862.1-1402的引物如SEQ ID NO:5-6所示，用于扩增标记PB.14705.1-426的引物如SEQ ID NO:7-8所示，用于扩增标记PB.18953.1-793的引物如SEQ ID NO:9-10所示，用于扩增标记PB.22228.2-2299的引物如SEQ ID NO:11-12所示，用于扩增标记PB.24874.2-147的引物如SEQ ID NO:13-14所示，用于扩增标记PB.26169.1-190的引物如SEQ ID NO:15-16所示，用于扩增标记PB.28575.1-517的引物如SEQ ID NO:17-18所示，用于扩增标记PB.34783.2-2214的引物如SEQ ID NO:19-20所示，用于扩增标记PB.35363.2-2268的引物如SEQ ID NO:21-22所示，用于扩增标记PB.3873.1-32的引物如SEQ ID NO:23-24所示，用于扩增标记PB.46307.1-770的引物如SEQ ID NO:25-26所示，用于扩增标记PB.47164.1-980的引物如SEQ ID NO:27-28所示，用于扩增标记PB.50731.1-672和PB.50731.1-680的引物如SEQ ID NO:29-30所示，用于扩增标记PB.5358.1-2661的引物如SEQ ID NO:31-32所示，用于扩增标记PB.54042.1-2426和PB.54042.1-2477的引物如SEQ ID NO:33-34所示，用于扩增标记PB.57367.1-207的引物如SEQ ID NO:35-36所示，用于扩增标记PB.63477.1-1109、PB.63477.1-1163和PB.63477.1-1166的引物如SEQ ID NO:37-38所示，用于扩增标记PB.67182.2-1418的引物如SEQ ID NO:39-40所示，用于扩增标记PB.67876.1-630的引物如SEQ ID NO:41-42所示，用于扩增标记PB.70158.1-1025、PB.70158.1-187、PB.70158.1-306、PB.70158.1-314、PB.70158.1-408、PB.70158.1-413、PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704、PB.70158.1-707、PB.70158.1-778、PB.70158.1-854、PB.70158.1-930和PB.70158.1-935的引物如SEQ IDNO:43-44所示，用于扩增标记PB.73485.1-510的引物如SEQ ID NO:45-46所示，用于扩增标记PB.76712.1-959的引物如SEQ ID NO:47-48所示，用于扩增标记PB.78861.1-470的引物如SEQ ID NO:49-50所示，用于扩增标记PB.80962.1-1163的引物如SEQ ID NO:51-52所示，用于扩增标记PB.8223.1-569的引物如SEQ ID NO:53-54所示，用于扩增标记PB.8694.1-1090的引物如SEQ ID NO:55-56所示，用于扩增标记PB.96124.1-1263的引物如SEQ ID NO:57-58所示，用于扩增标记PB.9959.4-583的引物如SEQ ID NO:59-60所示。
第四方面，本发明提供含有上述引物的检测试剂或试剂盒。
第五方面，本发明提供高亚麻酸含量油茶品种的鉴定及选育方法，包括：
1)提取待测油茶总RNA，反转录合成cDNA；
2)以cDNA为模板，利用SEQ ID NO:1-2、SEQ ID NO:3-4、SEQ ID NO:5-6、SEQ IDNO:7-8、SEQ ID NO:9-10、SEQ ID NO:11-12、SEQ ID NO:13-14、SEQ ID NO:15-16、SEQ IDNO:17-18、SEQ ID NO:19-20、SEQ ID NO:21-22、SEQ ID NO:23-24、SEQ ID NO:25-26、SEQID NO:27-28、SEQ ID NO:29-30、SEQ ID NO:31-32、SEQ ID NO:33-34、SEQ ID NO:35-36、SEQ ID NO:37-38、SEQ ID NO:39-40、SEQ ID NO:41-42、SEQ ID NO:43-44、SEQ ID NO:45-46、SEQ ID NO:47-48、SEQ ID NO:49-50、SEQ ID NO:51-52、SEQ ID NO:53-54、SEQ ID NO:55-56、SEQ ID NO:57-58或SEQ ID NO:59-60所示引物进行PCR扩增；
3)分析PCR扩增产物。
优选地，PCR反应程序为：95℃3min；95℃15s，68℃45s，共40个循环；68℃5min。
步骤3)包括：对扩增产物进行测序，根据测序结果判定如下：
若标记PB.102493.1-527对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.103936.1-364对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.10862.1-1402对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.14705.1-426对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.18953.1-793对应的多态性位点的基因型为TC或TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.22228.2-2299对应的多态性位点的基因型为CT或TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.24874.2-147对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.26169.1-190对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.28575.1-517对应的多态性位点的基因型为AA或GA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.34783.2-2214对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.35363.2-2268对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.3873.1-32对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.46307.1-770对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.47164.1-980对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.50731.1-672对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CT或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.50731.1-680对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AG或GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.5358.1-2661对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.54042.1-2426对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.54042.1-2477对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.57367.1-207对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GC或GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.63477.1-1109对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.63477.1-1163对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.63477.1-1166对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.67182.2-1418对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.67876.1-630对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-1025对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-187对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-306对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-314对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-408对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-413对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-473对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-649对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-704对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-707对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-778对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-854对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-930对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.70158.1-935对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.73485.1-510对应的多态性位点的基因型为GG，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.76712.1-959对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.78861.1-470对应的多态性位点的基因型为CC或TC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.80962.1-1163对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.8223.1-569对应的多态性位点的基因型为AA，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.8694.1-1090对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.96124.1-1263对应的多态性位点的基因型为TT，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，则待测油茶为低亚麻酸含量；和/或
若标记PB.9959.4-583对应的多态性位点的基因型为CC，判定待测油茶为高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，则待测油茶为低亚麻酸含量。
第六方面，本发明提供所述分子标记、所述分子标记组合、所述引物或所述检测试剂或试剂盒的以下任一应用：
(1)用于油茶种质资源亚麻酸含量的鉴定及改良；
(2)用于油茶亚麻酸含量早期预测；
(3)用于油茶亚麻酸含量性状的分子标记辅助育种；
(4)用于制备油茶育种芯片。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
1、在油茶全分布区内广泛收集油茶种质资源，建立油脂中亚麻酸含量发生广泛分离的油茶自然群体。
2、采集自然群体500份油茶种质的完全成熟种子，用气象色谱法测定成熟种子油脂的5种脂肪酸成分含量，包括硬脂酸、软脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸，具体方法按照GB/T17376《动植物油脂脂肪酸甲酯制备》和GB/T 17377《动植物油脂脂肪酸甲脂的气相色谱分析》执行。
3、采集自然群体500个油茶单株的油脂高速合成期的种仁，采用RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(离心柱型，TIANGEN试剂盒Code No.DP441)提取总RNA，每样本分别构建cDNA文库，利用Illumina HiSeqTM 4000平台进行二代转录组测序。
4、采集油茶“长林4号”的根、嫩叶、成熟叶片、花瓣和未成熟种子，采用RNAprepPure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(离心柱型，TIANGEN试剂盒Code No.DP441)分别提取RNA，各组织RNA等比例混合，构建PacBio SMRTbell文库，在PacBio Sequel平台进行三代转录组测序。测序结果过滤掉低质量数据和冗余序列后，对所有转录本进行注释分析。分析过程中使用的软件包括：LoRDEC(http://www.atgc-montpellier.fr/lordec/)、CD-HIT v4.6(Fu L,Niu B,Zhu Z,Wu S,Li W,2012.CD-HIT:accelerated for clustering the next-generation sequencing data.Bioinformatics 28,3150-2.)、Coding PotentialCalculator(CPC)(Kong L,Zhang Y,Ye Z-Q,et al.,2007.CPC:assess the protein-coding potential of transcripts using sequence features and support vectormachine.Nucleic Acids Research 35,W345.)和Coding-Non-Coding Index(CNCI)(https://github.com/www-bioinfo-org/CNCI)。
5、以步骤4中获得的全长转录组序列为参考序列，采用多序列比对法，分析步骤3中获得的500个样本转录组序列的SNP位点。SNP数据根据以下原则严格过滤：每个位点只有2个等位基因；基因型缺失率≤20％；最小等位基因频率≥5％；SNP质量值≥100；纯合基因型样本数超过10个；杂合基因型率≤70％。分析过程中使用的软件为bcftools v1.9software(http://www.htslib.org/doc/bcftools.html)。
6、将群体的基因型数据输入GCTA v1.25.2(Jian Y,S Hong L,Goddard ME,Visscher PM,2011.GCTA:a tool for genome-wide complex trait analysis.AmericanJournal of Human Genetics 88,76-82.)软件，进行主成分分析(PCA)。
7、将群体的基因型数据、前10个主成分数据、油脂中亚麻酸含量的表型数据以及Kinship矩阵数据输入TASSEL5.0(http://www.maizegenetics.net/tassel)软件中，采用统一混合模型方法(MLM)分析SNPs标记和油茶油脂中亚麻酸含量性状的连锁不平衡性，检测到47个位点与亚麻酸含量显著关联(P<10-5)，对表型变异的贡献率为10.49％～28.62％(R2，见表1)。
采用上述方法，本发明最终获得了与油茶油脂中亚麻酸含量显著关联的47个SNP标记，这些标记位于油茶的30个转录本内(表1)。
表1
进一步地，本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记可以分别由核苷酸序列如SEQ ID NO:1-2、SEQ ID NO:3-4、SEQ ID NO:5-6、SEQ ID NO:7-8、SEQ ID NO:9-10、SEQ ID NO:11-12、SEQ ID NO:13-14、SEQ ID NO:15-16、SEQ ID NO:17-18、SEQ IDNO:19-20、SEQ ID NO:21-22、SEQ ID NO:23-24、SEQ ID NO:25-26、SEQ ID NO:27-28、SEQID NO:29-30、SEQ ID NO:31-32、SEQ ID NO:33-34、SEQ ID NO:35-36、SEQ ID NO:37-38、SEQ ID NO:39-40、SEQ ID NO:41-42、SEQ ID NO:43-44、SEQ ID NO:45-46、SEQ ID NO:47-48、SEQ ID NO:49-50、SEQ ID NO:51-52、SEQ ID NO:53-54、SEQ ID NO:55-56、SEQ ID NO:57-58、SEQ ID NO:59-60所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得。
转录本PB.102493.1、PB.103936.1、PB.10862.1、PB.14705.1、PB.18953.1、PB.22228.2、PB.24874.2、PB.26169.1、PB.28575.1、PB.34783.2、PB.35363.2、PB.3873.1、PB.46307.1、PB.47164.1、PB.50731.1、PB.5358.1、PB.54042.1、PB.57367.1、PB.63477.1、PB.67182.2、PB.67876.1、PB.70158.1、PB.73485.1、PB.76712.1、PB.78861.1、PB.80962.1、PB.8223.1、PB.8694.1、PB.96124.1、PB.9959.4的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:61-90所示。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.102493.1-527通过核苷酸序列如SEQ ID NO:1-2所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.102493.1转录本的527bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.103936.1-364通过核苷酸序列如SEQ ID NO:3-4所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.103936.1转录本的364bp处的碱基，其多态性分别为G/T。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.10862.1-1402通过核苷酸序列如SEQ ID NO:5-6所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.10862.1转录本的1402bp处的碱基，其多态性分别为C/T。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.14705.1-426通过核苷酸序列如SEQ ID NO:7-8所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.14705.1转录本的426bp处的碱基，其多态性分别为A/G。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.18953.1-793通过核苷酸序列如SEQ ID NO:9-10所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.18953.1转录本的793bp处的碱基，其多态性分别为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.22228.2-2299通过核苷酸序列如SEQ ID NO:11-12所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.22228.2转录本的2299bp处的碱基，其多态性为C/T。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.24874.2-147通过核苷酸序列如SEQ ID NO:13-14所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.24874.2转录本的147bp处的碱基，其多态性为G/A。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.26169.1-190通过核苷酸序列如SEQ ID NO:15-16所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.26169.1转录本的190bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.28575.1-517通过核苷酸序列如SEQ ID NO:17-18所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.28575.1转录本的517bp处的碱基，其多态性为G/A。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.34783.2-2214通过核苷酸序列如SEQ ID NO:19-20所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.34783.2转录本的2214bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.35363.2-2268通过核苷酸序列如SEQ ID NO:21-22所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.35363.2转录本的2268bp处的碱基，其多态性为A/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.3873.1-32通过核苷酸序列如SEQ ID NO:23-24所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.3873.1转录本的32bp处的碱基，其多态性为G/A。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.46307.1-770通过核苷酸序列如SEQ ID NO:25-26所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.46307.1转录本的770bp处的碱基，其多态性为A/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.47164.1-980通过核苷酸序列如SEQ ID NO:27-28所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.47164.1转录本的980bp处的碱基，其多态性为G/T。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.50731.1-672、PB.50731.1-680通过核苷酸序列如SEQ ID NO:29-30所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.50731.1转录本的672bp、680bp处的碱基，其多态性分别为C/T、A/G。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.5358.1-2661通过核苷酸序列如SEQ ID NO:31-32所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.5358.1转录本的2661bp处的碱基，其多态性为A/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.54042.1-2426、PB.54042.1-2477通过核苷酸序列如SEQ ID NO:33-34所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.54042.1转录本的2426bp、2477bp处的碱基，其多态性为T/C、G/T。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.57367.1-207通过核苷酸序列如SEQ ID NO:35-36所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.57367.1转录本的207bp处的碱基，其多态性为G/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.63477.1-1109、PB.63477.1-1163、PB.63477.1-1166通过核苷酸序列如SEQ ID NO:.37-38所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.63477.1转录本的1109bp、1163bp、1166bp处的碱基，其多态性分别为A/G、G/A、A/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.67182.2-1418通过核苷酸序列如SEQ ID NO:39-40所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.67182.2转录本的1418bp处的碱基，其多态性为A/G。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.67876.1-630通过核苷酸序列如SEQ ID NO:41-42所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.67876.1转录本的630bp处的碱基，其多态性为C/T。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.70158.1-1025、PB.70158.1-187、PB.70158.1-306、PB.70158.1-314、PB.70158.1-408、PB.70158.1-413、PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704、PB.70158.1-707、PB.70158.1-778、PB.70158.1-854、PB.70158.1-930、PB.70158.1-935通过核苷酸序列如SEQ ID NO:43-44所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.70158.1转录本的1025bp、187bp、306bp、314bp、408bp、413bp、473bp、649bp、704bp、707bp、778bp、854bp、930bp、935bp处的碱基，其多态性分别为C/T、A/G、C/T、A/G、T/G、T/A、C/G、A/G、G/A、A/C、C/T、A/C、C/G、T/G。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.73485.1-510通过核苷酸序列如SEQ ID NO:45-46所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.73485.1转录本的510bp处的碱基，其多态性为C/G。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.76712.1-959通过核苷酸序列如SEQ ID NO:47-48所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.76712.1转录本的959bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.78861.1-470通过核苷酸序列如SEQ ID NO:49-50所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.78861.1转录本的470bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.80962.1-1163通过核苷酸序列如SEQ ID NO:51-52所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.80962.1转录本的1163bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.8223.1-569通过核苷酸序列如SEQ ID NO:53-54所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.8223.1转录本的569bp处的碱基，其多态性为T/A。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.8694.1-1090通过核苷酸序列如SEQ ID NO:55-56所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.8694.1转录本的1090bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.96124.1-1263通过核苷酸序列如SEQ ID NO:57-58所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.96124.1转录本的1263bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明的与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP分子标记PB.9959.4-583通过核苷酸序列如SEQ ID NO:59-60所示的引物对以油茶cDNA为模板经PCR扩增获得，扩增产物含有位于油茶PB.9959.4转录本的583bp处的碱基，其多态性为T/C。
本发明提供上述47个SNP分子标记在鉴定油茶油脂亚麻酸含量表型中的应用，各位点的基因型及其对应的亚麻酸含量表型见表2。
表2
具体方法为：(1)将待鉴定油茶材料嫩叶提取总RNA，反转录生成单链cDNA后，分别采用30组引物对(SEQ ID NO:1-2、SEQ ID NO:3-4、SEQ ID NO:5-6、SEQ ID NO:7-8、SEQ IDNO:9-10、SEQ ID NO:11-12、SEQ ID NO:13-14、SEQ ID NO:15-16、SEQ ID NO:17-18、SEQID NO:19-20、SEQ ID NO:21-22、SEQ ID NO:23-24、SEQ ID NO:25-26、SEQ ID NO:27-28、SEQ ID NO:29-30、SEQ ID NO:31-32、SEQ ID NO:33-34、SEQ ID NO:35-36、SEQ ID NO:37-38、SEQ ID NO:39-40、SEQ ID NO:41-42、SEQ ID NO:43-44、SEQ ID NO:45-46、SEQ ID NO:47-48、SEQ ID NO:49-50、SEQ ID NO:51-52、SEQ ID NO:53-54、SEQ ID NO:55-56、SEQ IDNO:57-58、SEQ ID NO:59-60)进行PCR扩增，通过琼脂糖凝胶电泳检测并回收所得到的PCR产物；
(2)测定PCR产物的碱基序列，并鉴定47个位点的基因型，对照表3中各位点的基因型与亚麻酸含量高低的关系，确定待鉴定油茶为高亚麻酸含量油茶或低亚麻酸含量油茶。
所述待鉴定油茶可以为任何育种材料，包括自然群体个体和有性群体个体。
上述方法中，提取油茶总RNA采用RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(离心柱型，TIANGEN试剂盒Code No.DP441)。反转录合成单链cDNA采用PrimeScript RTMaster Mix试剂盒(TaKaRa)。
上述方法中，PCR反应程序为：95℃预变性3min，1个循环；95℃变性15s，68℃退火及延伸45s，40个循环；68℃5min，1个循环彻底延伸。
琼脂糖凝胶电泳所使用的琼脂糖凝胶浓度为1.2％。胶回收使用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒(AxyGEN,Code No.AP-GX-50)。上述方法测定PCR产物的碱基序列，分别采用对应的扩增引物为测序引物，采用一代测序技术。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
本发明提供47个与油茶油亚麻酸含量高度关联的SNP位点，可以解释10.49％～28.62％的亚麻酸含量表型方差。利用这47个标记对有性油茶群体进行了辅助选择，结果表明，在47个位点中超过6个位点为高亚麻酸含量基因型的单株中，73.58％的个体其种子油脂中亚麻酸含量高于群体亚麻酸含量平均值；在47个位点中高亚麻酸含量基因型大于等于8个位点的个体中，82.05％的个体其种子油脂中亚麻酸含量高于群体平均值；当高亚麻酸含量基因型数量大于等于15个时，94.74％的个体其种子油脂中亚麻酸含量高于群体平均值；当高亚麻酸含量基因型数量少于等于4个时，71.43％的个体其种子油脂中亚麻酸含量低于群体平均值。这表明该标记用于辅助选择是切实有效的。
本发明提供的油茶种子油脂中亚麻酸含量关联位点的开发方法，其原理是油茶是典型的异交物种，连锁不平衡(LD)通常在较小的范围内迅速消减，因此可以开展重要性状的LD作图。油茶的种仁全部转录本作为本发明标记开发的区域。在具备产生了大量明显的遗传变异的油茶自然群体的前提下，可有效开展与油茶亚麻酸含量变异显著相关的标记开发。
在油茶常规选择育种中，油脂中亚麻酸含量性状的鉴定需要幼苗造林5-6年才能测定，费时费力。本发明提供的SNP位点位置明确，检测方法方便快速，不受环境影响，目的性更强，工作量小，效率更高，成本低。因此，通过检测该批SNP位点，可在苗期进行鉴定和辅助筛选，大大节约生产成本和提高选择效率。利用本发明的分子标记进行高亚麻酸含量油茶育种，可提高油茶育种的选择效率，加快育种进程。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:aLaboratory Manual,2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
本发明中所用的自然群体材料500份油茶单株，均由中国林业科学研究院亚热带林业研究所木本油料研究组收集、评价，并保存于浙江金华婺城区东方红林场种质资源圃。
实施例1油茶油脂中亚麻酸含量分离群体的构建及性状测定
本实施例中使用普通油茶资源收集圃内500份种质资源的自然群体，其起源地涵盖我国油茶主产区的大部分，包括浙江省、湖南省、江西省、广西区、福建省、广东省等。500个体待果实完全成熟后(5％果实开裂)，分别采集种子，提取油脂测定脂肪酸成分及含量。其操作步骤如下：
(1)适量油茶种子用烤箱80℃烘烤过夜至恒重，剥去硬种皮。
(2)种仁用粉碎机粉碎后，用中速滤纸包好，加入适量石油醚浸泡抽提过夜。
(3)待石油醚完全挥发后，利用Agilent6890N气相色谱仪按照GB/T17376-2008、GB/T17377-2008方法测定脂肪酸成分及含量。
脂肪酸成分含量测定结果表明，自然群体种子油中亚麻酸含量均呈正态分布，说明该性状具有数量性状特点。
实施例2油茶三代转录组测序及注释分析
1、三代测序样本RNA的提取
采集油茶“长林4号”的根、嫩叶、成熟叶片、花瓣和未成熟种子，采用RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(离心柱型，TIANGEN试剂盒Code No.DP441)分别提取RNA，具体步骤如下：
(1)首先在1.5ml离心管中加入500μl的裂解液SL(预先加入β-巯基乙醇)。取0.1g样本材料加入液氮充分研磨，迅速将研磨好的粉末加入到离心管中，立即旋涡剧烈震荡混匀。
(2)12000rpm离心2分钟。
(3)将上清液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中)，12000rpm离心2分钟，小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
(4)缓慢加入0.4倍上清体积的无水乙醇，混匀(此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
注意，若果上清液体积有损失，请相应调整乙醇的加量。
(5)向吸附柱CR3中加入350μl去蛋白液RW1，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
(6)DNase I工作液的配制：取10μl DNase I储存液放入新的RNase-Free的离心管中，加入70μlRDD缓冲液，轻柔混匀。
(7)向吸附柱CR3中央加入80μl的DNase I工作液，室温放置15分钟。
(8)向吸附柱CR3中加入350μl去蛋白液RW1，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
(9)向吸附柱CR3中加入500μl漂洗液RW(使用前请先检查是否已加入乙醇)，12000rpm离心15秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
(10)重复步骤9。
(11)12000rpm离心2分钟，将吸附柱CR3放入一个新的RNase-Free的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50μl RNase-Free ddH2O，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟，得到RNA溶液。
2、三代转录组测序与注释分析
通过纯度和浓度检测的五个组织样品总RNA，等比例混合，利用Clontech
PCRcDNA合成试剂盒进行反转录合成单链cDNA。利用KAPA HiFi PCR试剂盒以单链cDNA为模板进行第一轮PCR扩增，生成双链cDNA。生成的双链cDNA利用Blue Pippin分成0.5-2kb，2-3kb，3-6kb三个长度片段库。然后进行第二轮PCR扩增产生充足的cDNA，构建PacBio SMRTbell文库，在PacBio Sequel平台进行三代转录组测序。利用SMRTlink 5.0软件处理测序数据。测序结果过滤掉低质量数据和冗余序列后，生成CCS。根据序列是否含有5’primer，3’primer和polyA尾巴，将所有的CCS分为全长和非全长序列两大类。全长的CCS采用ICE算法在缺省参数条件下进行聚类分析产生CS。利用Arrow和LoRDEC(http://www.atgc-montpellier.fr/lordec/)软件进一步过滤CS，利用CD-HIT v4.6(Fu L,Niu B,Zhu Z,Wu S,Li W,2012.CD-HIT:accelerated for clustering the next-generationsequencing data.Bioinformatics 28,3150-2.)软件去除冗余序列。
利用Coding Potential Calculator(CPC)(Kong L,Zhang Y,Ye Z-Q,et al.,2007.CPC:assess the protein-coding potential of transcripts using sequencefeatures and support vector machine.Nucleic Acids Research 35,W345)和Coding-Non-Coding Index(CNCI)(https://github.com/www-bioinfo-org/CNCI)软件在参数缺省条件下进行转录本的蛋白编码潜能预测。未通过蛋白编码潜能检测的转录本进一步在Swiss-Prot数据库中比对，若在Swiss-Prot数据库中仍无注释，则认为该转录本为长链非编码RNA。其它的转录本进一步在NR、Swiss-Prot、COG、KEGG和GO等数据库中比对，注释转录本。
实施例3油脂高速合成期种仁转录组测序及多态位点识别
1、500个油茶无性系油脂高速合成期种仁总RNA提取
利用RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(离心柱型，TIANGEN试剂盒CodeNo.DP441)分别提取各无性系未成熟种仁的总RNA(参见实施例2)。
2、二代转录组测序
通过纯度和浓度检测的各样品总RNA，去除其中的核糖体RNA，以最大限度地保留所有codingRNA和ncRNA。得到的RNA随机打断成短片段，再以片断化后的RNA为模板，用六碱基随机引物(random hexamers)合成cDNA第一链；接着加入缓冲液、dNTPs(dUTP代替dTTP)、RNase H和DNA polymerase I合成cDNA第二链，经过QiaQuick PCR试剂盒纯化并加EB缓冲液洗脱，经末端修复、加碱基A，加测序接头，然后通过UNG(Uracil-N-Glycosylase)酶降解第二条链。用琼脂糖凝胶电泳进行片段大小选择，进行PCR扩增。最后建好的测序文库用Illumina HiSeqTM 4000平台进行二代转录组测序。
3、多态位点识别
为了保证数据质量，对下机后经过初步过滤得到的clean reads进行进一步更严格的过滤，得到高质量的clean reads，用于后续的信息分析。过滤的步骤如下：
(1)去除含有接头的reads；
(2)去除全部都是A碱基的reads；
(3)去除含N比例大于10％的reads；
(4)去除低质量的reads(质量值Q≤20的碱基数占整条reads的50％以上)。
采用Tophat v2.1.1(Trapnell C,Roberts A,Goff L,et al.,2012.Differential gene and transcript expression analysis of RNA-seqexperiments with TopHat and Cufflinks.Nature protocols 7,562-78.)软件将每个样本的高质量的reads比对到参考转录组序列上(参见实施例2)。剔除没有比对上的序列，其余序列利用bcftools v1.9软件(http://www.htslib.org/doc/bcftools.html)识别SNP位点。识别的SNP位点经过严格过滤，获得高质量的SNPs数据。过滤标准如下：
(1)位点上只有2个等位基因；
(2)基因型缺失率≤20％；
(3)最小等位基因频率(MAF)≥5％；
(4)SNP质量值≥100；
(5)纯合子基因型的样本数大于10个；
(6)杂合基因型样本率≤70％。
实施例4与油茶油脂中亚麻酸含量相关的SNP位点的筛选
1、利用GCTA v1.25.2(Jian Y,S Hong L,Goddard ME,Visscher PM,2011.GCTA:atool for genome-wide complex trait analysis.American Journal of HumanGenetics 88,76-82.)软件对油茶自然群体进行主成分分析(PCA)，利用前10个主成分(PC)作为固定效应用于后续的关联分析(表3)。
表3自然群体部分个体的前10个PC值
2、将所有样本的SNPs位点数据、前10个PC值数据、表型数据(参见实施例1)及Kinship矩阵数据导入TASSEL5.0软件中，采用MLM法分析SNPs与亚麻酸含量性状的连锁不平衡性，筛选与油脂中亚麻酸含量显著关联的分子标记，经多重检验校正，检测到47个跟亚麻酸含量存在显著关联的位点，这些位点位于30个转录本内，24个位于非编码区，23个位于编码区，引起13个非同义突变，9个同义突变和1个终止子，对亚麻酸含量差异的贡献率为10.49％～28.62％(表1)。
实施例5 47个分子标记在高亚麻酸油茶育种中的应用
1、选择一个油茶杂交F1代家系群体为材料(母本为长林53号，父本为长林40号，均为国家审定良种，良种号分别为“国S-SC-CO-012-2008”和“国S-SC-CO-011-2008”)，采集嫩叶提取总RNA(参见实施例2)。以RNA为模板，采用Clontech cDNA合成试剂盒反转录生成单链cDNA，并稀释100倍，作为工作液。
2、利用SEQ ID NO:1-2、SEQ ID NO:3-4、SEQ ID NO:5-6、SEQ ID NO:7-8、SEQ IDNO:9-10、SEQ ID NO:11-12、SEQ ID NO:13-14、SEQ ID NO:15-16、SEQ ID NO:17-18、SEQID NO:19-20、SEQ ID NO:21-22、SEQ ID NO:23-24、SEQ ID NO:25-26、SEQ ID NO:27-28、SEQ ID NO:29-30、SEQ ID NO:31-32、SEQ ID NO:33-34、SEQ ID NO:35-36、SEQ ID NO:37-38、SEQ ID NO:39-40、SEQ ID NO:41-42、SEQ ID NO:43-44、SEQ ID NO:45-46、SEQ ID NO:47-48、SEQ ID NO:49-50、SEQ ID NO:51-52、SEQ ID NO:53-54、SEQ ID NO:55-56、SEQ IDNO:57-58、SEQ ID NO:59-60所示的引物对对单链cDNA工作液分别进行PCR扩增，反应体系如下：
PCR反应程序为：95℃预变性3min，1个循环；95℃变性15s，68℃退火及延伸45s，40个循环；68℃5min，1个循环彻底延伸。
3、PCR扩增产物进行凝胶检测和纯化回收并测序、基因分型。凝胶检测和纯化回收按照AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒(AxyGEN,Code No.AP-GX-50)说明书进行，其流程如下：
①配制1.2％的琼脂糖凝胶，将50μl扩增产物全部上样，电泳电压为5V/cm，电泳约20分钟至上样缓冲液中二甲苯青达到距离凝胶前端1cm处时停止电泳。
②在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体并切碎。计算凝胶重量，该重量作为一个凝胶体积(例如100mg＝100μl体积)。
③加入3个凝胶体积的Buffer DE-A，混合均匀后于75℃加热，每2～3分钟间断混合，直至凝胶块完全熔化。
④加入0.5个Buffer DE-A体积的Buffer DE-B，混合均匀。
⑤将上述溶液转移到DNA制备管中，12000rpm离心1分钟，弃滤液。
⑥加入500μl Buffer W1，12000rpm离心30秒，弃滤液。
⑦加入700μl Buffer W2，12000rpm离心30秒，弃滤液。以同样的方法再用700μlBuffer W2洗涤一次，12000rpm离心1分钟，弃滤液。
⑧将制备管放回离心管中，12000rpm离心1分钟。
⑨将制备管置于洁净的1.5ml离心管中，在制备膜中央加25～30μl去离子水，室温静置1分钟。12000rpm离心1分钟洗脱DNA。
⑩凝胶回收DNA，以对应的扩增引物为测序引物，采用一代测序测定扩增产物核苷酸序列，用Chromas软件判读测序峰图上每个SNP位点的基因型。
4、分别鉴定所有个体的47个位点的基因型。对照表2中各位点的基因型与亚麻酸含量高低的关系，若某油茶单株在47个位点中有超过6个位点为高亚麻酸含量基因型，则该油茶个体为高亚麻酸含量候选油茶；若某油茶单株在47个位点中为高亚麻酸含量基因型的位点不足4个时，则该油茶个体为低亚麻酸含量油茶；若高含油率基因型位点数大于15个时，则该油茶个体基本可认定为高亚麻酸含量油茶。
5、采集所有F1代个体完全成熟种子，测定其种子油脂中亚麻酸含量(参见实施例1)。结果表明，在47个位点中超过6个位点为高亚麻酸含量基因型的单株中，73.58％的个体其种子含油脂亚麻酸含量高于群体亚麻酸含量平均值(0.2858％)；在47个位点中高亚麻酸含量基因型少于等于4个位点的个体中，71.43％的个体其油脂中亚麻酸含量低于群体平均值(0.2858％)；在47个位点中高亚麻酸含量基因型大于等于15个位点的个体中，94.74％的个体其油脂中亚麻酸含量高于群体平均值(0.2858％)(表4)。这表明该标记用于辅助选择是切实有效的，可用于早期鉴别或辅助鉴别，可大大节约生产成本，提高选择效率，加快油茶高油育种进程。
表4 F1单株的种子油脂中亚麻酸含量及基因型数据
注：表中“..”表示基因型缺失。
与仅用四个关键SNP位点(PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704和PB.70158.1-707)进行辅助选择相比，在选择效率均达到90％以上的情况下，本发明选择位点范围更大(47个位点)，筛选出的高亚麻酸油茶个体更多，且选择结果更可靠。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 中国林业科学研究院亚热带林业研究所
<120> 与油茶种仁油中亚麻酸含量相关的SNP分子标记及其应用
<130> KHP201112300.0
<160> 90
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
actgtatctc tgctctctat 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aattctatga actgccttag t 21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cttctgcgag agaacaaagt 20
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
atcacaattg acacattcaa c 21
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gccccaattg attcctcaga 20
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
aagttattcg aacattcatt t 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
tgggagagaa aaaattaaca a 21
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
accaattgag gcatatgata 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
actccgactc tcgactctcg 20
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
agatcccacc actagtttgc a 21
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
cggggaaaaa cgatttttca 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tcaactctca gaaccacgca 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
actcctcttt gcttcagccc 20
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ctccatttcc acctctcgat a 21
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
aagatgaagc tgttaaactc c 21
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
atgatttgaa tgatgtcctc 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gcgcctaaat tcaatctggg 20
<210> 18
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
aatcaataga cattcatcat t 21
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
agatccgtct aaactagatg 20
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ccataaaact tccctccaca ttc 23
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ttggatgatt aaagagctga 20
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
ctcgctaaca aaaacagtaa c 21
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
gttctctctc aatccaactg 20
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
gacccatatg tctcgctgca 20
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
gaattcaaat ggggggtatt 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
tcacataaca tcaatcttat 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
tacattttgt atgtacaagg 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
gtatgtgttg tctgctctat 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
agagaagagg cggtctttcc 20
<210> 30
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
gacccatatg tctcgctgca 20
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
gtaaagagta gtgtcctcta 20
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
aagcattgga attgggaagc ct 22
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 33
atgtcttaat gcaaattaga 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
ggacagctat cttcacaatc 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 35
tgcgtgaatt gatgtcaatt 20
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
ccttttggcc ctgtggtcct t 21
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
acacacacac agcagaggaa 20
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
tccacttagt atggtacagc c 21
<210> 39
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
atacatcact atgattggtg 20
<210> 40
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
aagaaacatc agtatattct 20
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
gtgtataacc cgtgagaaag 20
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
atcttgcgcg caagtggcca 20
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
acacacacac acagcagagg a 21
<210> 44
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
agcagcacca accaagcaat gac 23
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
agttggaaat gcctctgtat 20
<210> 46
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
agcaaattca gaattaaaag atg 23
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
caaagactac aaatttcccg 20
<210> 48
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
gtttgccaac gcaacgtaat c 21
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
ggttggtggg ttggcttcgg 20
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
ttagctggtg gaattaataa c 21
<210> 51
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
atgaagcaaa gttcatccga 20
<210> 52
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
gtggtggatc ccatagttga 20
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
gctatctcaa tctgtccgtc 20
<210> 54
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
ggtgctcact actcatacat 20
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
aatgtgatcg gggttgatcc 20
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
cactatatga gtagtgtcta 20
<210> 57
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
tgagatgggt gatcatatct 20
<210> 58
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
cacagcaacg catactaaga 20
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
atcgacgaag gagagggcca 20
<210> 60
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
atatgcaggc tctacaggac 20
<210> 61
<211> 1244
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 61
actgtatctc tgctctctat ctcttacaaa ccctatttct cttttctctc tctggcttcg 60
aattggagac cgaatggggg tagagtttgg gggtttcaga gaggcgtttg gagatgagag 120
agagggagcg attgaaggaa ggagagggag cgagtgagat caccaccaga tcaacgatcg 180
ccgattcatc aggagataga cgatcgaaga gactcctgtc tctcactctt ttccgactct 240
ctcttctctg tatattcgaa ttggagaccg aatggcggta gagtttgggg gttcggagca 300
tcatttttca acacagctgc tatattatag caatggcagc tccaatagca aaccattgga 360
gatgctctaa aaatcacctt catgtatcat agaaaaatcc agctcagata ggtacagcag 420
agagagatag gaaaagcctg aaagcctgaa gctcagatag gtacagcaga ccaatactca 480
agcctgaaag cctgtgtgtc tttctttata ctttgtccgt ctctcttgct cgctatgtgt 540
acatctcatc cttatcttgg ccgatggatc gattcgattt gctttcttca atcatagagc 600
tatgcaaagg aatattgtca gacccatcac agaaggtcta ctatccagag gtgttcagct 660
acatcaaaca cgcaagacga agacgaagag gcatcttcgt ccaaggcaag aaaatagtag 720
aagctttgaa ctgaacagga agacgaagca agcgacgacg agagtccgcc aagcccaacg 780
gaaaagcagt tcctcctccg acgatcgccc caaccgcagt aaatttctcg aagactcttg 840
tagaaaaaag aagtatgaag tgttgaagcc tctggtgttg ttcttgttga aatcccacta 900
gtacacagca gagaaagaaa tttaacaaga ttgtgagaga atgactacaa attatgagaa 960
agttttttta ttgggtaatg tataatttca tttttttctt ccaattatat tcttgtatgt 1020
ttctttatta tatttatgta tttattatga ttatgatttt attttattta ttttaaaaag 1080
atgttgcaaa gagtttaacc atgagatata atctcgcggg gagacttgac taccggacat 1140
ttcatgcttc gacaacttgg tctaacttga caaacgaaga tcaatttcta gtgactgtac 1200
aattttataa aatgcaagca gaaactaagg cagttcatag aatt 1244
<210> 62
<211> 489
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 62
cttctgcgag agaacaaagt gaatcacttc atactcttct cgacccaggc gcagcagcta 60
tggtgaagta ctcaaaagag cctgacaatc ccaccaagtc ctgcaaagcc aggggctcag 120
atctcagagt ccatttcaag aacacaaggg agacagcaca tgccatcagg aagctgcctt 180
tggccaaggc taagaggtat ttagaagatg ttctgttaaa aaagagcccg agtctcagtt 240
ggcagctagc aaatccagga agtctcaagc tctgcgaagt ggtgcatcct cttgaacaac 300
tttgatacag cccgtagctt aagaagtttt cgtgtcttct cactcttatc ctgcatttct 360
ttggagactc tgttctatct cttttttccc ccgttaaata ctcgagaaaa tgcatggctt 420
ggctattttg tcaaaatgct tttatttgga aacattgttg atttctttgt tgaatgtgtc 480
aattgtgat 489
<210> 63
<211> 1445
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 63
gccccaattg attcctcaga ctcaccaaat caaccccaat ggaccactac aaggtcttgg 60
gtctgactcg aaacgctacc aaagacgaaa tcaaagaatc atttcgaaaa ttagcaatgc 120
aattccaccc agacaagcac tctcactctc ccaactctgt caaggacggt gcgactcttc 180
gattcaagca ggtttcagag gcctacgagg tcctcatgga cgatcgcaag cgcgctcact 240
tcaatctccg atattccaac aacagcaatg gaagaacagc aagtgggttc aattcttatg 300
gttatgggta tggctataat tctggcagta aacccaattc tagttatggg ttttatagca 360
gaggtgttaa tggagatggg ttcgtttcta agttggagat cgcttgtcgg tttcttacaa 420
cacgttcggg tcttctcaac cttgcctttg ctggtgctct attaggtgga acgcttattg 480
ttgacacgag tggggataca ttgtggaaga tgcacaatcc tggggtatgt agtttggttt 540
tgttcttgtg catccataga cttcaacttt cctgtcgttt tttcttatta taattgctgt 600
gtgatatcat ggttacttga tgacttattg tcttgcattt gcacattatg tcatggaaat 660
tctgtctccg gagcttaatt aactctccag aagtggacaa tggatccagt gtgatatgcc 720
tgcaatgttc atcttcgccc cctactaaat ttcatgttct ggtcaatgta tttgttggca 780
catacaaaca cacatgtaac actgataagg ggggatacac tatatgcctg ttccttgctg 840
tatttcactt attttccttt ctcacctgtt acttctcgtt ttattttatt ttattttatt 900
ttatttttaa ctctctcatt tcccaaccaa acgcaaaggt attttacttg tgtttaattt 960
tgcttaggga aaattttaag ttcatttagg gccactggaa tcaattaaat ttcaaaaccc 1020
atcatacgag gtttatgtga gtaattatga ttttcttaat accttgatga atgtgtaagg 1080
catatgagaa ccttctctgt tggtaaatca ttaaaaataa taatactaat aataattcta 1140
gtagctagag ttcgaggatt ttggaaggaa agtgagaaat ttcgaggtaa aatgtttata 1200
tatagtcatt tcaaaaaatt tatatgattt ctcgaggttc taattgtttt gacagccttt 1260
gaatttcaaa gactacaaga acgaacttct caactgcaaa acactttaac acaatcatct 1320
acctatccac ttgtagcaaa agagaataga cttgaaggga ggtaagttga ataaattagc 1380
aacgaatacc tgaaaggaag ccagactact tcagatggag gttgaaatga atgttcgaat 1440
aactt 1445
<210> 64
<211> 1474
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 64
tgggagagaa aaaattaaca aagaggatcc taatccattt ataataaaat gtttgaccaa 60
aaaaatataa attatccgca attcttcttt aaaagaggtg tattttgttt aatctcaaaa 120
ccttttaggt agactcaaaa gtcttacacg cctttctttt tatttttatt attattatta 180
ttattattat tattatttat ccttctcttt ctgatatccg gcgaccggcg actgcacatt 240
tcttcctctc tttcactttt taatatacgc tcactgacga ttggtgacca ccatcgattg 300
ggatttcatc gacaacaacc gatcaccgac tccttacttc gatccgctca gatctaagtt 360
tccggtgaat gggataaata gatgagtttc caacaaatga catagactag atatactcag 420
attcaaccat atctaaacta aaaatagttg tcggagtaca ctcctctctt tatatctact 480
cctctccttc aatctatcaa tttttctact ttttttacta cgcacttctc ttttcctgtt 540
ttaatagaga aaattttcaa attctaaaca aaattttttt ttcccgagtt ttagttacag 600
gcggtgaaaa ctataaaatt tttcaatttt agttcttttt tgtgctgaaa tgaattatgt 660
tttaaaactg taaaatttgt gcaatttcat aacatgcttt tattgcaaaa ttttgcagtt 720
tcataacatt ttttcaattt gattaataaa gagaaatgtt taatagaatc ataatttaaa 780
attgtaacaa ttttacaatt tcaaaacatg cttttcaaat taatcaatat aggatattat 840
ttgcttaaat tctacaaaaa ttgaaaaata acttatatat tttttttcat tattgttgtt 900
tcttcttgtt atatattttt ttcttttcaa tatctaacac atttcactat atttgtttgc 960
tctacttccc ccttttcccc ccctagtaat attttgggca ttccaatgag tttcagcgat 1020
gttcttgatg ttcagtgaca ttgtggacat tctagtgact tgcagtgacg ttcaaaatac 1080
tccggcgact tcctggtgat gttgaacatt ttggcaagcc ttcgatgacc gtatgacgaa 1140
agtctgatgg tgctgggata taacatcttt aaaaaaattt aaaaaagatt tttttgataa 1200
taattaaaat atgtacaact aattggtgca agtattttgt tttgagagca gatgtatttt 1260
gaactttgta agtatcccca acaaaaaact attcatgtga tgtgatgtaa tgtgcaggcc 1320
tatactgaga tccgtgaagc tgatcactac aaggagtcta acaaccgttg gggtacagta 1380
tctgataaaa tgggaaatgc tggtttaact cacgaggata attggtatca gtgtgtatca 1440
tatgcctcaa ttggtaacaa cacttcgccc atgt 1474
<210> 65
<211> 1031
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 65
actccgactc tcgactctcg attctcgact ccacgacttc ttgcaacaat ggtgggttga 60
ttgatgaaaa tcacgtagtc gcgtaactct ctctatcccc aattcgagca gaaaatttcg 120
atcgattcac gatcgtttat agagagaatt ggtgcccttg attgcttgag ctaatcacga 180
tgtcattgct ttatatgaag ttgaatttat caacgggcaa ggtcgtttca acagggagtc 240
tgtgggtagt gaagaggagt tgttgcatgc gacacaggtt gacgaggaga tggttcatct 300
tacgaagagg atgcaaggtt gtcaccccat aaaatcgaaa aaaaaaaaca ggaaagtaga 360
ggttcaacaa ccctaccagg gatcataaag gatgaaagtt ttggtgtgca aaaaatcatt 420
cactttaatg agttgggtca actaataggg gacgtacaat acccgagcta tcttggagtt 480
ttggctcgaa caatggtccc aatagtctat aaagattggc ataaggttcc aaaagaattg 540
aaagacaaat tgaggagttg tgtggagtca gcatacaatg tggatccaaa tagaaaaaag 600
aagactttgt cttcaattgg agagaaatgg aggacattca aaaaatacct tagcaagcac 660
atccgtcaat acaagtcaaa tcctaagttc ctttcaaaac cactagaaat ttatcctttt 720
attgaacaaa gacattggaa ttcatttatg agggatagac tgacagaaaa atttgaggta 780
caaagtaata tttagagagc gaggcaaagc aaaagtatat ataaccatag gcttggtcaa 840
aagggctatg ctcggtttca agaacttaaa cagaagactg gatcaagtga gaattatgca 900
acaagttgcg aaaattgatg agttgaccaa acaaacaatg gatgggagtt tgtccaccca 960
aggaagcacc gacttcctta ccatggcatt ggagcaaacc atgcaaacta gtggtgggat 1020
ctcttgaaaa c 1031
<210> 66
<211> 2375
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 66
cggggaaaaa cgatttttca atgataatgt catttaaacg catgtttccg gagctaaggg 60
agatgcgaga gggttctaag aataagttga gaaggacatc tgagaagaag tgtttgcatt 120
gtcatggaag atcacatata gcccctgaaa tttcatcatc tccacttgaa ttggttgaag 180
ggaacagttg ggagaatttt ccttctgagt tgctccttga tataattcag cggctagaat 240
ctacccagac cttgtggccc gccaggagag atgtggttgc ttgcgcttca gtttgcaggt 300
cttggaggga gacaacaaaa gaggttgtaa gaactccgga gcaatgtggg ttgattactt 360
tccccatctc actgaagcag ccaggaccaa gagattctct aatccaatgc tatataaaaa 420
gggatagggt cacgtcaacg tatagtttgt acctcggctt gagtccagca ctatcagagg 480
atgtcagcaa actgttgttg gcagcaaaaa agatcagaaa ggcaacaagt acagattttc 540
ggatatccct ggcaacaaat gatttctctc aatctaatca tgcatatatt gggaaattga 600
ggtcgaactt tcttggttcc aagttctcta tttatgatag ccagcgtccg tgtgaccatg 660
caatccgatc caatggtcgg tcacatagaa aacgcaacta caacgtggct accatatctt 720
atgagctcaa tgttcttcga accaaaggac caaggagaat gttgtgcacc atgaactcaa 780
tccccacctc tgcagttcag ggagggggca ttgccccaac tgtagcaaca tttgggaatt 840
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<210> 67
<211> 2416
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 67
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 68
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<210> 69
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 69
gcgcctaaat tcaatctggg ttcatcacta aacacaaact cttcattgac gccactgatt 60
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<210> 70
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 70
gtatcttctt cactgtgtta ttctttgtgg gaatagacga gaaacaacaa tgaacaggtc 60
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<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 71
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<211> 1585
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 73
gaattcaaat ggggggtatt tctttattta tatcgtaaat ttaaataaat gaaatataaa 60
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 74
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 75
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
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caatgagaat gtgtatgtat atatatcctg caatatctat ctttgaagag gtgcgatgat 1020
gaggtatgtt ataatctcgt taatctgaca atttatgagg agaattttta taatccattc 1080
tcaacatact gagcaccttc taatttcttc cgttctgacc tcttggagct tattttttat 1140
ttctggtttt tgttggaatt gattcagcac catttgcaaa gagcttgact tgatgtctga 1200
tctaatactg actgttcgtg tggttggttt tagttttcat cataatttgg gtcattgaaa 1260
actgttggat ctgatggccc aaaatgaatg tacatttcaa tacttttttc cttgtttgtt 1320
tctttgataa gataaagtaa agattcattc aaattaagga ccacagggcc aaaaggtaaa 1380
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acctatacgc gcctgtttcc atgtcaatca acaggttatc ccaagagttg tcccttcaac 1560
agtactgtat ggtaatagca tgcattgatt tttgtcactt tttgagtttg atagagaatc 1620
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<210> 79
<211> 1302
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 79
acacacacac agcagaggaa aaatgaaaag cattccagag atgttactgt gttgtagttc 60
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tacgtaaaaa aaataaacga aaatttaaac ataatgatca aattgaaacg gacgtaaagt 600
gcaaggattt aaggacaaaa ataaaaggaa gaattacact gacatgatat caataaaaaa 660
atattatgaa tgttaataat taatgttata aacttttttt tattaattta taattttttt 720
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tttttaatta ttatttattt atagaaatct tggattggaa taccttgatc tgtatctcat 840
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<210> 80
<211> 1950
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 80
atacatcact atgattggtg attgattgat gaaaaacaag aagaacaacc tcaaacccta 60
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<210> 81
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<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 81
gtgtataacc cgtgagaaag agccgagaga aagagaggga acctctgttt tgtgagctgg 60
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<210> 82
<211> 1193
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 82
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<210> 83
<211> 1630
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 83
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atgaatcaat tgggcttcta gataaacttg ttcagttgaa tttgaaagaa tgcatgaacc 1560
tcaggtatct tccaggcatt atctgcaagt taaagtctgt tagacatcta aatctcattg 1620
gttgtgcaaa actagaggag tttccagagc acttgggaca tatggaaagc ttaatagagc 1680
tttttgcaga tggaacagcc attaaacaac tacctttctc tattggacta ctgaagaatc 1740
ttaggaactt atcgttgaat ggatgtaata ggcaattgac aactaaatcc tggttgtcta 1800
gcttttcatc ctgggtttta ccaagaaaaa atcccgactc aataagattg ttaccatcct 1860
ctgtttcagg tttatgttcc ttgacaaagc tatttctcag tgattgcaat ctgtctgaag 1920
gaaattttcc agctaatatt tggagtttat cctcattgcg aaccttggat ttaggaggaa 1980
acaattttcg tatcctacca tatggcttca atcatctatc caagctagaa gaccttgtgt 2040
tggataactg cactagtctt caatctatct cggatcttcc tcctaattta tctagaataa 2100
aaattagttg ttgtgtatca cttgaaaaaa tatccgatct atcaaaactg aagactctac 2160
atgtgacgtt cagtgtccct ggatctggat ttcagcatta tctctcaaat ggtaataatg 2220
atggaatgga agatcctcat agttttcaag gtgcacgaat cattcccttg gatgggcaca 2280
ggctcaaatc tatcaatggg aagggacggg aacgggaacg ggatcgggaa cgggaaccgg 2340
atcgagaacg ggaaccggaa tgggaacggg aacgggcact ggcaaggtca atgcatcccg 2400
gttgtctggt ttgcttttct ctctctctct tcggtttttt tttttttttt gctctctctc 2460
tatctctcta cttcaggttc aacaatttag caaaaaaaaa tctctctgaa aattaagtga 2520
tgtgtgtgag accaaattta ttttagatgc gacctatata atattgaagg aggattccat 2580
ctcgtcccaa attatatgga ttggaggata ctgtttaggt ctatggaatc aactatggga 2640
tccaccac 2648
<210> 87
<211> 2967
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 87
gctatctcaa tctgtccgtc tccctttctc tgtctctcat ggcgatttca agatcgttac 60
ccccctttct ctctctaaaa aaaacactct ctctctctct cggcaaatcg ttgaagaaga 120
aaacatgact gcattgagtg tagccaccag acactgcatg aaagtaatga aattggaaat 180
ctctcttacg caaaggcttc aactcctcta gatgcaagac aatgacgaag aggccaggat 240
aaagttgctg aggaacaagg gagaggcagt gatgaagcag atgaggcatg acatcgctgt 300
acttcttcgg tctggttaag atgccactgc tcgcatttgg ttggcaggtt atcagccctg 360
ttgaagctat tgggtatgtt gttgttgtgg ataagttgtt tactgtttag aataaatctt 420
atggatagcc aacaaatttg gtggcaaaat ttgtgaaagg agaggaaagt tgttgtgctg 480
acacctaaca tgccagatgt cctatctcat gtttctgtgt gagaaagaaa tagcaaggta 540
aaattcacta tcattctgta aaaaaaaatt tttgtttgtt tttcttgttt tctcaatggg 600
caactgttga aatgagtgac actgatgtgt gacagatgtg atttatgtgg atttcgattc 660
ttctacaatt tttttactca tttttctgca tttattttac caacaatatt agcaatagac 720
cgttgagcca taacatgact caatcccact aaaaacaagt cagttagcac ttggtacttc 780
tcaatcaaat gaaccatttc tcatagaatt ttgatcagaa acaagaagat gaagcaacaa 840
acaaacaaaa aaaaatccat gatctaaaac cacccttctt tacattttat caatacgttg 900
acgccaaaac tctgcaattt gcaaagtagg ttggtctttg tttccaaatt ccaaaaagtt 960
gttatcaata ggcttcatct tttgtcctgt cctttgtaat ccctattttg tggttataga 1020
gatctatttg agtggattga gcttgaacaa ctgcagttct agcattcgtt tctttttatg 1080
gatcaggtca gcacattgtg gtttctcctc tattatctac tttgtttatt tgtacttttt 1140
ctacttcatt tattatgtat ctatgttagt caaaatttct ctttccaatt tgaattgaac 1200
ctcaagataa tggaattaat tttaatgtat gagtagtgag caccatgaca agtacatcaa 1260
acttctagtt gcccttgtac tactatccag atctctgtta agagaaattc taaattctat 1320
ttgatgactc aaaataagtg aaggctagag aaatttgaac tcaaaggcta gaaaaattct 1380
aatccttagg cagttttgat gtttaaaatt ggtttatcaa actatatgtt taaactacat 1440
ttgttaggca ttctaataac tcaaccatag actccttcta gttttttggc aaaagttcca 1500
aattttgtgt cagatattat acaaagaata tatagtgcat taaagccatg gagtgtatca 1560
attggttcca gattacggtg cagtagtaaa atacgttcta ttttgattcc atgttctaat 1620
aaatttttgt tccaattttt ctacaatagt gcaattatgg tggtatccta actagaatca 1680
atagtgaaac attagaaggt atttctaaac cagaaaatgg aattgtgcat gatgaatctc 1740
aagtggatat tgtttcaagc tggaatgttg ctgaaaactt acccaaggca actcaggtag 1800
tcacccaact attgtttttc tatgttacta gtacttttaa gatataagtg atattgaaac 1860
aatactttat gcaatttaat atgacatagt taaattgaat catttagtta caagcttcat 1920
cagctaccat gtattatttt atatgatctt ctttcttcat attctgactg atatcactat 1980
cttttggtct gttatacagg atcacttcat tttgattgtc tctcatttac ataaatacct 2040
aaccctattg ggttatcata tatatagaaa ataagaattt attctttgtt atgtctaatt 2100
atatctggtt gttgacttta taaatcaaac ttttggtggt gtttgggaag cttggccaca 2160
ggctatttta gcctcaatta taaaaaaaag ccttttagcc cctaaaaccc attgatttaa 2220
aataaataaa taaatatata tagggcgcag cctacactgt caacgtgaca gtgtaggcac 2280
aaggattgac agcccaatca tttcaaagag taaatgacaa ttttgcccct tcaaacttat 2340
tttgaaaaaa atgaggttag ggacaaattt gtcattttag cttcaaacat catttcaaat 2400
gcatttttta atacacaacc caaataaaaa ttcatgctat attcccaaac acaaaaacta 2460
aaatagctta ctaaaacagc caaaaagcct aaaaaatagc cacttcccaa acacccactt 2520
tatctgcaca tgtaattaag tacttaatta acttcattta tacaggtggg ttagcaactg 2580
tggttgacat gcctcttaac agtttttcat ctattgtttc taaagaaact tttgaactca 2640
agatcaaggc tgcagcaaag aggctctatg ttgacgttgg tttgaagcaa tgtggtaaga 2700
gtcgcaagct tagatgggca cctttgtcac tgtgatagga gcaagtgggt ttgctgtagc 2760
tgcaactgtt ataggaattg ttgcctataa ttttcaataa tctcttaata attttggaga 2820
tgtttagaaa cttagatacg catagttttg gatggtttaa acttttttgg acagtttaga 2880
acttaaggat atagttttcg aatgtttgaa atgtatagac aattgttgaa tgtttatgat 2940
tcatggatat agtttatttt gatgttt 2967
<210> 88
<211> 1320
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 88
ttttttttat ttttgttttt tttttttggt gttaaaaatg tgatcggggt tgatccccgc 60
gatgaaaaat gacaagtttg gaaataagtg ttgttggtgg tattactgca attgctctct 120
ttttggctga cccttttgtt tgtctggtag tttcttgtct aaagctttag tcggtgactt 180
ccttccattg ttgctaacaa gagattctaa agttgctgga cgcataacca cctcatttgg 240
tttgacagat gcagcaacat taaatttgac atcggcatcc tttccctgct catcttggtt 300
aattggatct tctaggtctc caagggctaa ataatcaaag cattcctctg atgtcaaggt 360
cagacaactc gaattgtctg aaaaggaaga ccttgattct ggatctccaa gatcgtccaa 420
ctccaagaag tcaccactta aaatataatc catgtcaggt atgttttcga caggaatatt 480
cagaagtccc gcagctgcag ccaatggtat tgtattgtca tccctgttcc ttcttgcctc 540
ggactcgggc atgcgacctg gtccagtggt actgccagta tctggaacaa ctggtcggtt 600
tggatgaaaa ttgttgccac cagcaatttc tgcaccacct agtttttgtt tcatttctcg 660
gtttggactt gctccactgc taaagactct acatagtaaa ccggattcct ttggattgct 720
gttactgtgc agttgtttct gggtaatgct gtactcttgc atcagccaat tagttcttcg 780
ttcatgaggg gctcggcctt cataaaattc gagtgtagtt ctccagccaa tgatgttgga 840
gtttgtaaat atctcacagg cctcccctct ggccttccag aatccatgtt ctgaagcttt 900
tttctgctct gagcgtataa agcaccaaat atcaggtaaa tttgagggca agtgctcata 960
aggattaata tctccagtca catttccgtt ctgaagggta aagaatccca gtattatttg 1020
ctccaaatgc agaacgatct gctcatcagt ccaatataaa ccaatctcag caggaggaag 1080
gacagatact gcagaacgca tggtgatcta gtttcaaggg agccaagact aaatagcagc 1140
aaaacacctg tatcagtgca caaggacccc cctcacagca agatctgaga gaggtacaag 1200
gcaggcagcc ttaccccact acttgtggag aggctgatcc tgtgacttga agctttgtat 1260
attctgtgtc tgagcttcaa atgctccact agcatttact tagacactac tcatatagtg 1320
<210> 89
<211> 2247
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 89
acctttggtt tttgagatgg gtgatcatat ctttctaaag atatcaccta ggcggggttt 60
gatgaggttt gggaagcgtg ggaagttatc ccctcggttt attggtcctt ttgagatcct 120
tgagaggatt ggggatgttg cttatcgttt ggctttgccg ccgcagttgt ccggagttca 180
tgacgtgttt catgtgagta tgcttcggaa gtatgagccg gatccatcac atgtattgga 240
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ggataggcgg gttcaagtcc tgcgtggcaa gaccattccc ttggtaaagg ttttgtggaa 360
acatcacgga gtggaggaag ccacttggga acgtgagttg gaggtccgag agaaatatcc 420
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agatcattaa gtatgtctta agttgtaaaa catggtatat gttttggttt aatgggagta 540
ttttaaaact tgcctcaaaa tggaagttta atgtaacatt gtatatgttg gttatattgt 600
agaactggag atatatcatg aagttggaat atgatataaa ttgtgaacca tatatgttgg 660
aaatggttga aatggaaagg gaatgcatgt taaaatgtat ttgttataaa gtgcctcagg 720
acaagagatg gaatgaccgg taatgggtcg cgttattaca tgttgatatt taacattgtt 780
taaaaacgga gaaaaacttg tttttcaaaa acttgtactc aatttcggag acgaaattcc 840
taaggtgggg aggttgtagc acttgtgcct tttaaagctt ttggtaaatg tatttggacc 900
cttcattcta ttttgggaac ctttggtgtg tttgttggaa gtcccacatc ggttacaaga 960
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ttctatggtt ctttcttggt ttaatgagcc attacgagcc gagcttgagt tataaatttt 1080
agttgtgcca agctggattt tggtcatagt tccattggga ttttggccat agttccttcg 1140
ccaaagttgt gtgatttctc gagggctttg tggtgtgtgg tggagatcga gtttcaactc 1200
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agttttgtct ttaaatttta gtatcatgat atgttggggg ttgttgggta attttgagaa 1320
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atactttact ttctgttgta tgttttccat cttattttaa attagatgta tactttctcg 1560
agtagttgag attttctttg ccttttttat tttattttaa agtctttctt tatatgtaca 1620
cttgagattt ttttttcaag gattttagaa taagacttgt cattttataa tgtctattgc 1680
attaagtttt ccccatttgt cataatatct tgaagagaat gtacaaaatg gatttcaata 1740
gttttacttc caagtgttgt caatttctat ctaacttttg tttttggtag ctttcaaggc 1800
tttgcaaata tgatttgcca tctagattta tttttatctt tgctgatttt gttttggcat 1860
ctcaaattag ctacttgtga atccaaatat agagactttt taacagtaat attaaaggta 1920
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gatgtagtat ttaaatttca ttctaaggtg gtgtgaaggg taattcatgt ttattactga 2040
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<210> 90
<211> 1804
<212> DNA
<213> 油茶(Camellia oleifera)
<400> 90
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ctactgggcc atcagaatcg cacaatccag ctatctcggt ctcagatggc agagcggggg 120
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cgtttatgaa gttgaacaag ttttgtagtt acgatgcttg ttgtgctgtt gtcggatcca 480
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atactacaac cggtgaatgg aatcctttgc ctgatccccc gccttctctt cttccgcctg 780
cttctcttgc atctctggat ttctttgctg cccctcttgc aggcgaatat tctgacaaaa 840
tccttgtttg ttctaaactt aaaaatgcct tgtgtctcta tgacgttgaa aaaaatattt 900
gggaatgttt gggtcctcta aaatgtggtc gcttccttag cacacctatt gtcgttctta 960
ccactatcta ctggattaat tttcagtcac tgtttgctta tgattttgtt cagaaaactt 1020
tgatcaatat gccccataac agattttcaa atctgttggc ttttggattc agacaaaggg 1080
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tggattggca ctgattcctc cagtcttcat tgcaccaaga ttcgagtttc taccgagctt 1200
atggttgcct ttgtcttatc ttgccattct tatgtttttg atcataaaat acggctcatg 1260
gattgcctac cttggtagct cattgccttg taagtgctca tcatctactt cctgtccatg 1320
tccttcgttc ttgaacttta tttgtttctc tgtttatttg ttgttgggtt ttgtttaaaa 1380
aaaaaaaatg gtgataaaag tgatttgttt aaaaactgaa aaggagagtt ttttttaaca 1440
gaattttgtt acccacataa acaacatagt acactgtctc aaacactaat ataaatgaaa 1500
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aattttgttt atacttccat atttttataa tatatgttct ttgcagccgt cttttttttg 1740
ttacgtcaca gggtaattgg tagtgatatt gaggacgtcc tgtagagcct gcatattcga 1800
tgat 1804
Claims (8)
1.与油茶种子亚麻酸含量相关的SNP分子标记组合，其特征在于，所述分子标记组合由标记PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704和PB.70158.1-707以及标记PB.102493.1-527、PB.103936.1-364、PB.10862.1-1402、PB.14705.1-426、PB.18953.1-793、PB.22228.2-2299、PB.24874.2-147、PB.26169.1-190、PB.28575.1-517、PB.34783.2-2214、PB.35363.2-2268、PB.3873.1-32、PB.46307.1-770、PB.47164.1-980、PB.50731.1-672、PB.50731.1-680、PB.5358.1-2661、PB.54042.1-2426、PB.54042.1-2477、PB.57367.1-207、PB.63477.1-1109、PB.63477.1-1163、PB.63477.1-1166、PB.67182.2-1418、PB.67876.1-630、PB.70158.1-1025、PB.70158.1-187、PB.70158.1-306、PB.70158.1-314、PB.70158.1-408、PB.70158.1-413、PB.70158.1-778、PB.70158.1-854、PB.70158.1-930、PB.70158.1-935、PB.73485.1-510、PB.76712.1-959、PB.78861.1-470、PB.80962.1-1163、PB.8223.1-569、PB.8694.1-1090、PB.96124.1-1263和PB.9959.4-583组成；
其中，标记PB.102493.1-527含有油茶如SEQ ID NO:61所示序列第527bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.103936.1-364含有油茶如SEQ ID NO:62所示序列第364bp处的多态性为G/T的核苷酸序列；
标记PB.10862.1-1402含有油茶如SEQ ID NO:63所示序列第1402bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.14705.1-426含有油茶如SEQ ID NO:64所示序列第426bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.18953.1-793含有油茶如SEQ ID NO:65所示序列第793bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.22228.2-2299含有油茶如SEQ ID NO:66所示序列第2299bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.24874.2-147含有油茶如SEQ ID NO:67所示序列第147bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.26169.1-190含有油茶如SEQ ID NO:68所示序列第190bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.28575.1-517含有油茶如SEQ ID NO:69所示序列第517bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.34783.2-2214含有油茶如SEQ ID NO:70所示序列第2214bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.35363.2-2268含有油茶如SEQ ID NO:71所示序列第2268bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.3873.1-32含有油茶如SEQ ID NO:72所示序列第32bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.46307.1-770含有油茶如SEQ ID NO:73所示序列第770bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.47164.1-980含有油茶如SEQ ID NO:74所示序列第980bp处的多态性为G/T的核苷酸序列；
标记PB.50731.1-672含有油茶如SEQ ID NO:75所示序列第672bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.50731.1-680含有油茶如SEQ ID NO:75所示序列第680bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.5358.1-2661含有油茶如SEQ ID NO:76所示序列第2661bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.54042.1-2426含有油茶如SEQ ID NO:77所示序列第2426bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.54042.1-2477含有油茶如SEQ ID NO:77所示序列第2477bp处的多态性为G/T的核苷酸序列；
标记PB.57367.1-207含有油茶如SEQ ID NO:78所示序列第207bp处的多态性为G/C的核苷酸序列；
标记PB.63477.1-1109含有油茶如SEQ ID NO:79所示序列第1109bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.63477.1-1163含有油茶如SEQ ID NO:79所示序列第1163bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.63477.1-1166含有油茶如SEQ ID NO:79所示序列第1166bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.67182.2-1418含有油茶如SEQ ID NO:80所示序列第1418bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.67876.1-630含有油茶如SEQ ID NO:81所示序列第630bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-1025含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第1025bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-187含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第187bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-306含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第306bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-314含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第314bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-408含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第408bp处的多态性为T/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-413含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第413bp处的多态性为T/A的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-473含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第473bp处的多态性为C/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-649含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第649bp处的多态性为A/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-704含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第704bp处的多态性为G/A的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-707含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第707bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-778含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第778bp处的多态性为C/T的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-854含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第854bp处的多态性为A/C的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-930含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第930bp处的多态性为C/G的核苷酸序列；
标记PB.70158.1-935含有油茶如SEQ ID NO:82所示序列第935bp处的多态性为T/G的核苷酸序列；
标记PB.73485.1-510含有油茶如SEQ ID NO:83所示序列第510bp处的多态性为C/G的核苷酸序列；
标记PB.76712.1-959含有油茶如SEQ ID NO:84所示序列第959bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.78861.1-470含有油茶如SEQ ID NO:85所示序列第470bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.80962.1-1163含有油茶如SEQ ID NO:86所示序列第1163bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.8223.1-569含有油茶如SEQ ID NO:87所示序列第569bp处的多态性为T/A的核苷酸序列；
标记PB.8694.1-1090含有油茶如SEQ ID NO:88所示序列第1090bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.96124.1-1263含有油茶如SEQ ID NO:89所示序列第1263bp处的多态性为T/C的核苷酸序列；
标记PB.9959.4-583含有油茶如SEQ ID NO:90所示序列第583bp处的多态性为T/C的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的分子标记组合，其特征在于，标记PB.102493.1-527所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.103936.1-364所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.10862.1-1402所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.14705.1-426所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.18953.1-793所含多态性位点的基因型为TC或TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.22228.2-2299所含多态性位点的基因型为CT或TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.24874.2-147所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.26169.1-190所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.28575.1-517所含多态性位点的基因型为AA或GA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.34783.2-2214所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.35363.2-2268所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.3873.1-32所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.46307.1-770所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.47164.1-980所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.50731.1-672所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CT或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.50731.1-680所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AG或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.5358.1-2661所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.54042.1-2426所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.54042.1-2477所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.57367.1-207所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GC或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1109所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1163所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1166所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.67182.2-1418所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.67876.1-630所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-1025所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-187所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-306所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-314所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-408所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-413所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-473所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-649所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-704所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-707所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-778所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-854所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-930所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-935所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.73485.1-510所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.76712.1-959所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.78861.1-470所含多态性位点的基因型为CC或TC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.80962.1-1163所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.8223.1-569所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.8694.1-1090所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.96124.1-1263所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.9959.4-583所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量。
3.用于扩增权利要求1或2所述分子标记组合的引物组，其特征在于，用于扩增标记PB.102493.1-527的引物如SEQ ID NO:1-2所示，用于扩增标记PB.103936.1-364的引物如SEQ ID NO:3-4所示，用于扩增标记PB.10862.1-1402的引物如SEQ ID NO:5-6所示，用于扩增标记PB.14705.1-426的引物如SEQ ID NO:7-8所示，用于扩增标记PB.18953.1-793的引物如SEQ ID NO:9-10所示，用于扩增标记PB.22228.2-2299的引物如SEQ ID NO:11-12所示，用于扩增标记PB.24874.2-147的引物如SEQ ID NO:13-14所示，用于扩增标记PB.26169.1-190的引物如SEQ ID NO:15-16所示，用于扩增标记PB.28575.1-517的引物如SEQ ID NO:17-18所示，用于扩增标记PB.34783.2-2214的引物如SEQ ID NO:19-20所示，用于扩增标记PB.35363.2-2268的引物如SEQ ID NO:21-22所示，用于扩增标记PB.3873.1-32的引物如SEQ ID NO:23-24所示，用于扩增标记PB.46307.1-770的引物如SEQ ID NO:25-26所示，用于扩增标记PB.47164.1-980的引物如SEQ ID NO:27-28所示，用于扩增标记PB.50731.1-672和PB.50731.1-680的引物如SEQ ID NO:29-30所示，用于扩增标记PB.5358.1-2661的引物如SEQ ID NO:31-32所示，用于扩增标记PB.54042.1-2426和PB.54042.1-2477的引物如SEQ ID NO:33-34所示，用于扩增标记PB.57367.1-207的引物如SEQ ID NO:35-36所示，用于扩增标记PB.63477.1-1109、PB.63477.1-1163和PB.63477.1-1166的引物如SEQ ID NO:37-38所示，用于扩增标记PB.67182.2-1418的引物如SEQ ID NO:39-40所示，用于扩增标记PB.67876.1-630的引物如SEQ ID NO:41-42所示，用于扩增标记PB.70158.1-1025、PB.70158.1-187、PB.70158.1-306、PB.70158.1-314、PB.70158.1-408、PB.70158.1-413、PB.70158.1-473、PB.70158.1-649、PB.70158.1-704、PB.70158.1-707、PB.70158.1-778、PB.70158.1-854、PB.70158.1-930和PB.70158.1-935的引物如SEQ IDNO:43-44所示，用于扩增标记PB.73485.1-510的引物如SEQ ID NO:45-46所示，用于扩增标记PB.76712.1-959的引物如SEQ ID NO:47-48所示，用于扩增标记PB.78861.1-470的引物如SEQ ID NO:49-50所示，用于扩增标记PB.80962.1-1163的引物如SEQ ID NO:51-52所示，用于扩增标记PB.8223.1-569的引物如SEQ ID NO:53-54所示，用于扩增标记PB.8694.1-1090的引物如SEQ ID NO:55-56所示，用于扩增标记PB.96124.1-1263的引物如SEQ ID NO:57-58所示，用于扩增标记PB.9959.4-583的引物如SEQ ID NO:59-60所示。
4.含有权利要求3所述的引物组的检测试剂或试剂盒。
5.高亚麻酸含量油茶品种的鉴定及选育方法，其特征在于，包括：
1）提取待测油茶总RNA，反转录合成cDNA；
2）以cDNA为模板，利用SEQ ID NO:1-2、SEQ ID NO:3-4、SEQ ID NO:5-6、SEQ ID NO:7-8、SEQ ID NO:9-10、SEQ ID NO:11-12、SEQ ID NO:13-14、SEQ ID NO:15-16、SEQ ID NO:17-18、SEQ ID NO:19-20、SEQ ID NO:21-22、SEQ ID NO:23-24、SEQ ID NO:25-26、SEQ IDNO:27-28、SEQ ID NO:29-30、SEQ ID NO:31-32、SEQ ID NO:33-34、SEQ ID NO:35-36、SEQID NO:37-38、SEQ ID NO:39-40、SEQ ID NO:41-42、SEQ ID NO:43-44、SEQ ID NO:45-46、SEQ ID NO:47-48、SEQ ID NO:49-50、SEQ ID NO:51-52、SEQ ID NO:53-54、SEQ ID NO:55-56、SEQ ID NO:57-58和SEQ ID NO:59-60所示引物进行PCR扩增；
3）分析PCR扩增产物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反应程序为：95℃ 3min；95℃15s，68℃45s，共40个循环；68℃ 5 min。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，步骤3）包括：对扩增产物进行测序，根据测序结果判定如下：
若待测油茶在47个位点中有超过6个位点为高亚麻酸含量基因型，则该待测油茶为高亚麻酸含量；若待测油茶在47个位点中为高亚麻酸含量基因型的位点不足4个时，则该待测油茶为低亚麻酸含量；
标记PB.102493.1-527所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.103936.1-364所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.10862.1-1402所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.14705.1-426所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.18953.1-793所含多态性位点的基因型为TC或TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.22228.2-2299所含多态性位点的基因型为CT或TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.24874.2-147所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.26169.1-190所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.28575.1-517所含多态性位点的基因型为AA或GA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.34783.2-2214所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.35363.2-2268所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.3873.1-32所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.46307.1-770所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.47164.1-980所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.50731.1-672所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CT或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.50731.1-680所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AG或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.5358.1-2661所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.54042.1-2426所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.54042.1-2477所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GG或GT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.57367.1-207所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GC或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1109所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1163所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.63477.1-1166所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.67182.2-1418所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.67876.1-630所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-1025所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-187所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-306所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-314所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-408所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-413所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-473所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-649所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-704所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为GA或GG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-707所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-778所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-854所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为AA或AC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-930所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.70158.1-935所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TG或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.73485.1-510所含多态性位点的基因型为GG，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或CG，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.76712.1-959所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.78861.1-470所含多态性位点的基因型为CC或TC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.80962.1-1163所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.8223.1-569所含多态性位点的基因型为AA，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TA或TT，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.8694.1-1090所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.96124.1-1263所含多态性位点的基因型为TT，对应于高亚麻酸含量，若基因型为CC或TC，对应于低亚麻酸含量；
标记PB.9959.4-583所含多态性位点的基因型为CC，对应于高亚麻酸含量，若基因型为TC或TT，对应于低亚麻酸含量。
8.权利要求1或2所述分子标记组合、权利要求3所述引物组或权利要求4所述检测试剂或试剂盒的以下任一应用：
（1）用于油茶种质资源亚麻酸含量的鉴定及改良；
（2）用于油茶亚麻酸含量早期预测；
（3）用于油茶亚麻酸含量性状的分子标记辅助育种；
（4）用于制备油茶育种芯片。
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