CN111449088A - 一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法 - Google Patents

一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,按照100重量份计包括如下质量份的组分:5‑10份丝光绿蝇肠道细菌菌体、1‑5份大豆粉、1‑5份鱼粉、1.0‑1.5份琼脂粉、0.5‑1份氯化钾、1‑3份甘油、0.1‑0.5份尿素和余量的水;本发明还提供了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,制备方法简单、原料成本低,并且制备得到的引诱剂具有长效性,且对降雨、刮风等恶劣气候条件不敏感,本发明的丝光绿蝇特异性引诱剂既可用于丝光绿蝇的密度监测,还可用于丝光绿蝇的诱杀,有良好的功能扩展性。

Description

一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及蝇类的防治技术领域,更具体的说是涉及一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法。
背景技术
丝光绿蝇(Lucilia sericata)属于双翅目丽蝇科丽蝇亚科丽蝇属,是世界分布性的一种医学媒介昆虫,能机械性传播多种病原微生物,导致传染病,幼虫具有尸食性,可在人体腐臭的伤口、疮疖内产卵或寄生在人消化道、伤口、五官等部位,引起人的消化道蝇蛆病、鼻蝇蛆病等,威胁人类健康;丝光绿蝇还可引起家畜以及家禽的蝇蛆病,对畜牧业有较大的危害。
同时,丝光绿蝇还是火腿和咸鲞制品的重要害虫。在火腿、咸鲞加工过程中需要进行必要的露天晾晒,该过程中蝇类很容易在火腿、咸鲞中产卵,孳生蝇蛆,因此防蝇一直是制约火腿和咸鲞质量提高的难题,其中最主要的就是丝光绿蝇。2003-2004年,一些不法商贩在加工火腿、咸鲞时违法施用敌百虫、敌敌畏来防蝇生蛆,“毒火腿”、“毒咸鲞”事件相继被新闻媒体披露,引起了社会的广泛关注。
目前,由于缺乏其他有效的防治技术,丝光绿蝇的防治还主要依赖于化学防治。但是,随着化学防治的不断推广,造成杀虫剂滥用和不合理使用,使丝光绿蝇对很多种杀虫剂均产生抗性,造成“越杀越多,越杀越难杀”的恶性循环,同时由于杀虫剂的不合理使用带来了诸多负面影响,如食品安全(农药残留超标)、杀伤天敌和人畜中毒事件发生等。
因此,探索新的丝光绿蝇新型引诱方法、提供一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法,是本领技术人员亟需解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法,制备方法简单、原料成本低,并且制备得到的引诱剂具有长效性,且对降雨、刮风等恶劣气候条件不敏感,本发明的丝光绿蝇特异性引诱剂既可用于丝光绿蝇的密度监测,还可用于丝光绿蝇的诱杀,有良好的功能扩展性。
为了实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,其特征在于,按照100重量份计包括如下质量份的组分:5-10份丝光绿蝇肠道细菌菌体、1-5份大豆粉、1-5 份鱼粉、1.0-1.5份琼脂粉、0.5-1份氯化钾、1-3份甘油、0.1-0.5份尿素和余量的水。
上述优选技术方案的有益效果是:本发明公开的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂利用细菌为引诱物质,以琼脂为载体,以山梨糖醇为保湿剂,可使引诱剂长期保持含水量适中状态,保持引诱剂物理性状的长效性;同时引诱剂中有适于细菌生长的营养和水分条件,细菌可在其中持续繁殖,对丝光绿蝇产生持续吸引作用,保持引诱效果的长效性,与传统引诱剂相比,本发明的引诱剂持续效果可达1-2个月,且对降雨、刮风等恶劣气候条件不敏感。
优选的,所述丝光绿蝇肠道细菌菌体由丝光绿蝇肠道中分离的产酸克雷伯菌(保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏编号:CGMCC No.15976,保藏时间:2018年06月20日,分类命名:产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca)经过培养得到。
优选的,所述产酸克雷伯菌的保藏号CGMCC No.15976。
上述优选技术方案的有益效果是:本发明采用的丝光绿蝇肠道细菌菌体由丝光绿蝇肠道中分离的产酸克雷伯菌经过培养得到,对丝光绿蝇有引诱作用。
本发明还提供了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:将从丝光绿蝇肠道中分离的细菌依次经过培养、离心分离得到细菌菌体;
(2)根据如上所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、甘油、尿素和水混合均匀,经过高压灭菌和冷却,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入过夜培养的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
上述优选技术方案的有益效果是:本发明公开的制备方法简单,将丝光绿蝇肠道中分离的细菌进行培养得到细菌菌体,再将细菌菌体与细菌生长基质混合,制备得到特异性长效细菌引诱剂。
优选的,所述步骤(1)具体包括:
在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的细菌,然后在37℃、100rpm 条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体。
优选的,所述从丝光绿蝇肠道中分离的细菌包括产酸克雷伯菌。
优选的,所述步骤(3)中冷却至55℃,
优选的,所述步骤(4)中经过倒板后的凝胶厚度为1~2cm。
经由上述的技术方案可知,与现有技术相比,本发明公开提供了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂及其制备方法,具有如下有益效果:
(1)通过多种因子对丝光绿蝇产生特异性长效引诱,其中以细菌为主、外加鱼粉,相互配合,提高引诱效果;
(2)以琼脂作为引诱剂载体,以甘油和尿素作为保湿剂,可使引诱剂长期保持含水量适中状态,保持引诱剂物理性状的长效性;
(3)引诱剂中有适于细菌生长的营养和水分条件,细菌可在载体中持续繁殖,对丝光绿蝇产生持续吸引作用,保持引诱效果的长效性;
(4)与传统引诱剂相比,本发明的引诱剂持续效果可达1-2个月,且对降雨、刮风等恶劣气候条件不敏感。
(5)本发明的丝光绿蝇特异性引诱剂既可用于丝光绿蝇的密度监测,还可用于丝光绿蝇的诱杀,有良好的功能扩展性,另外本发明的特异性引诱剂还具有长效性,且成本低廉,是一种有广泛应用前景的丝光绿蝇特异性长效引诱剂。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的小型诱蝇笼;
图2附图为本发明提供的产酸克雷伯菌对丝光绿蝇成虫的引诱效果;
图3附图为本发明提供的野外放置不同时间引诱剂的重量变化情况;
图4附图为本发明提供的野外放置不同时间引诱剂中细菌数量变化情况;
图5附图为本发明提供的不同养殖场内3种引诱剂诱到的蝇类(A)和丝光绿蝇(B)比例。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,按照100 重量份计包括如下质量份的组分:5-10份丝光绿蝇肠道细菌菌体、1-5份大豆粉、1-5份鱼粉、1.0-1.5份琼脂粉、0.5-1份氯化钾、1-3份甘油、0.1-0.5 份尿素和余量的水。
本发明实施例还公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的细菌,然后在37℃、100rpm条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml 离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体;
(2)根据如上所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、甘油、尿素和水混合均匀,然后进行高压灭菌,接着冷却至55℃,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入过夜培养的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,使凝胶厚度为1~2cm,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
为了进一步的优化技术方案,从丝光绿蝇肠道中分离的细菌包括产酸克雷伯菌。
实施例1
本发明实施例1公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,100g 中包括:5g丝光绿蝇肠道细菌菌体、1g大豆粉、1g鱼粉、1.0g琼脂粉、0.5g 氯化钾、1g甘油、0.1g尿素和余量的水。
本发明实施例1还公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的产酸克雷伯菌,然后在37℃、100rpm条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体;
(2)根据如上所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、甘油、尿素和水混合均匀,然后进行高压灭菌,接着冷却至55℃,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入过夜培养的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,使凝胶厚度为1~2cm,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
实施例2
本发明实施例2公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,100g 中包括组分:10g丝光绿蝇肠道细菌菌体、5g大豆粉、5g鱼粉、1.5g琼脂粉、 1g氯化钾、3g甘油、0.5g尿素和余量的水。
本发明实施例2还公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的细菌,然后在37℃、100rpm条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml 离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体;
(2)根据如上所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、甘油、尿素和水混合均匀,然后进行高压灭菌,接着冷却至55℃,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入过夜培养的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,使凝胶厚度为1~2cm,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
实施例3
本发明实施例3公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,100g 包括如下质量的组分:7g丝光绿蝇肠道细菌菌体、3g大豆粉、3g鱼粉、1.3g 份琼脂粉、0.7g氯化钾、2g甘油、0.4g尿素和余量的水。
本发明实施例还公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的产酸克雷伯菌,然后在37℃、100rpm条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体;
(2)根据如上所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、甘油、尿素和水混合均匀,然后进行高压灭菌,接着冷却至55℃,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入过夜培养的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,使凝胶厚度为1~2cm,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
实施例4
本发明实施例4公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,按照 100g包括如下质量的组分:9g丝光绿蝇肠道细菌菌体、4g大豆粉、4g鱼粉、 1.2g琼脂粉、0.6g氯化钾、2.5g甘油、0.4g尿素和余量的水。
本发明实施例4还公开了一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的产酸克雷伯菌,然后在37℃、100rpm条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体;
(2)根据如上所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、甘油、尿素和水混合均匀,然后进行高压灭菌,接着冷却至55℃,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入过夜培养的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,使凝胶厚度为1~2cm,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
一、细菌对丝光绿蝇成虫的实验室引诱效果
设计的小型诱蝇笼如图1所示,诱蝇笼的长宽高均为10cm,同时在顶端设计一漏斗型引诱口,与诱蝇笼相连接,在漏斗的顶部设计一圆形开口,供丝光绿蝇进入。整体诱蝇笼外表覆以纱网,顶端开口处开放,但在开口的内部有硬尼龙丝防止进入的丝光绿蝇飞出(图1)。在诱蝇笼内放置不同的诱饵,本实验中的诱饵分别为分离的细菌、LB培养液和水分别与麦麸混合后使含水量为40-50%,将盛有3种诱饵的小型诱蝇笼置于长宽高均为40cm的养虫笼内,外罩纱网。在养虫笼内放入丝光绿蝇40头,4h后计数各小型诱蝇笼内丝光绿蝇的数量,实验设3组重复。结果如图2所示,仅在丝光绿蝇肠道中分离到的产酸克雷伯菌对丝光绿蝇成虫有显著引诱作用,与LB和水相比,产酸克雷伯菌可引诱到77.22±3.51%的丝光绿蝇成虫。
二、野外放置不同时间引诱剂中细菌数量与载体重量的变化情况
分别取引诱剂1g,在50ml无菌水中进行研磨,然后再取0.5ml进行涂板检测,12h后计数平板上细菌菌落的数量。分别取引诱剂100g,放在培养皿内,在野外环境中放置不同时间的引诱剂进行细菌菌落计数,引诱剂放置环境为阳光直射环境,树荫环境,同时模拟降雨环境(在外界环境中加水浸泡),分别于放置后3d,7d,10d,14d和21d将放置的引诱剂拿回实验室,先称量重量,再进行菌落计数。
结果表明,放置42d后,在无降水的情况下引诱剂的重量下降20g左右,重量丧失率约20%左右,在有降水的情况下,引诱剂重量下降10g左右,重量丧失率约10%(图3)。以上实验表明,本发明的引诱剂在野外具有较好的保持水分能力,可长久保持其物理性状,有利于发挥引诱作用。
同时,检查引诱剂中细菌的数量表明,在野外放置环境中引诱剂中的细菌数量最高可增加至初始的6倍,特别是在降雨环境中,其增长效率更高,最高可达8.78×108cfu/g,而引诱剂中细菌的原始数量仅为1.25×108cfu/g,因此可保证引诱剂保持长期的引诱效果(图4)。
实施例1野外应用实例(一):
分别采用腐鱼内脏、糖醋液(红糖25g+陈醋25g+水25ml)和本发明实施例1制备得到的细菌引诱剂为诱饵,采用笼诱法进行野外丝光绿蝇的诱集。诱集地点分别选择农贸市场、垃圾中转站、养殖场、绿化带和居民小区5 个监测点,每个监测点分别放置3个采用国家标准指定规格的诱蝇笼,诱蝇笼内分别放置3种诱饵,共布放15个诱蝇笼。诱蝇笼放置时间为上午9:00-10: 00,下午15:00-16:00间收回,成蝇采用乙酸乙酯杀死后进行分类统计。结果表明,在3个养殖场内通过不同引诱剂诱到的蝇类中,本发明的细菌引诱剂引诱到的数量最多,可占诱到蝇类总数的近49%。通过对所诱到的蝇类进行分类统计表明,细菌引诱剂诱到的丝光绿蝇占所有引诱到丝光绿蝇总数的近61%,进一步说明本发明引诱剂对丝光绿蝇成虫的引诱特异性更强(图5)。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述,每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处,各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对于实施例公开的装置而言,由于其与实施例公开的方法相对应,所以描述的比较简单,相关之处参见方法部分说明即可。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (7)

1.一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,其特征在于,按照100重量份计包括如下质量份的组分:5-10份丝光绿蝇肠道细菌菌体、1-5份大豆粉、1-5份鱼粉、1.0-1.5份琼脂粉、0.5-1份氯化钾、1-3份甘油、0.1-0.5份尿素和余量的水。
2.根据权利要求1所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,其特征在于,所述丝光绿蝇肠道细菌菌体由丝光绿蝇肠道中分离的产酸克雷伯菌经过培养得到。
3.一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
(1)细菌菌体的制备:将从丝光绿蝇肠道中分离的细菌依次经过培养、离心分离得到细菌菌体;
(2)根据权利要求1或2所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂,称取原料备用;
(3)制备细菌生长基质:将大豆粉、鱼粉、琼脂粉、氯化钾、份甘油、尿素和水混合均匀,经过高压灭菌和冷却,制成细菌生长基质;
(4)制备丝光绿蝇引诱剂:向上述细菌生长基质中加入经过步骤(1)培养得到的细菌菌体混合均匀得到凝胶;然后在无菌操作台内、按无菌操作进行倒板,待凝胶冷却凝固后制成丝光绿蝇引诱剂。
4.根据权利要求3所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)具体包括:
在LB培养基中加入从丝光绿蝇肠道中分离的细菌,然后在37℃、100rpm条件下摇菌培养至对数期;取出培养基加入至10ml离心管内、离心10min,收取沉淀物即为细菌菌体。
5.根据权利要求4所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,其特征在于,所述从丝光绿蝇肠道中分离的细菌包括产酸克雷伯菌。
6.根据权利要求3所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中冷却至55℃。
7.根据权利要求3所述的一种新型丝光绿蝇特异性长效细菌引诱剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)中经过倒板后的凝胶厚度为1~2cm。
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