CN111448907A - 一种白木香树的生物结香方法 - Google Patents

一种白木香树的生物结香方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香。本发明对结香诱导剂进行改良，在诱导结香分子中添加甲酸，同时减少了氯化铁和氯化亚铁的用量，保证沉香产品含铁符合相关标准，同时添加了香型促进剂，大大的提高了白木香的结香率，从而解决了沉香产品含铁超标、品质差、结香率低等技术问题。

Description

一种白木香树的生物结香方法
技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，尤其涉及一种白木香树的生物结香方法。
背景技术
白木香[Aquilariasinensis(Lour.)Spreng.]是瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属(AquilariaLam.)植物，为中国特有植物。白木香等沉香属植物在受到外界损伤(雷劈、风折、虫蛀、人为因素等)后所产生的含有树脂的木材被称为沉香。从20世纪80年代开始，国内多地相继开展白木香的规模种植，目前已形成产业化发展格局。结香(Edgeworthiachrysantha.)是瑞香科、结香属植物，灌木，高约0.7- 1.5米，小枝粗壮，褐色，常作三叉分枝，幼枝常被短柔毛，韧皮极坚韧，叶痕大，直径约5毫米。叶在花前凋落，长圆形，披针形至倒披针形，先端短尖，基部楔形或渐狭。产河南、陕西及长江流域以南诸省区。野生或栽培。茎皮纤维可做高级纸及人造棉原料，全株入药能舒筋活络，消炎止痛，可治跌打损伤，风湿痛；也可作兽药，治牛跌打。
沉香是中国等许多国家或地区的传统珍贵药材、天然香料、香道产品、日化用品等产品的重要源泉，应用领域广、覆盖面大，现已被用于第一产业、第二产业和第三产业的各细分产品的开发中，发展前景广阔。在我国，其主要盛产于北回归线以南的山区或丘陵，尤以广东、海南、云南、广西、中国台湾等地的野生沉香盛名。健康的白木香不能产生沉香类物质，白木香的木质组织必须受到物理伤害、化学伤害及真菌侵染等外界的伤害后才能诱导凝结逐渐形成沉香。为此，近年来发展了各种人工结香技术。从理论上讲，在生长环境、树龄、结香部位和结香方法都相同的条件下，不同树体表现出的差异，包括结香产量和沉香质量上的差异，在一定程度上能反映其产香性状的差异。沉香的化学成分主要是倍半萜和2-(2- 苯乙基)色酮类化合物，通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析其相对含量，可以比较不同来源的沉香质量，从而对不同的白木香品系或个树所产沉香的质量进行评价。
诱导白木香树结香的方法主要有：砍伤法、半断干法、凿洞法、化学结香法、人工接菌结香法等等，用这些方法结香所得到的沉香品质低，结香时间长、结香率低等缺点。目前，诱导香树结香的文献有一些，例如：
1、专利申请CN201610373562.X，公开了一种天然沉香诱导剂以及生产沉香的方法，天然沉香诱导剂的药效成分由植物内源伤害信号分子、天然诱导结香分子、植物营养剂和植物免疫剂组成。本发明先在沉香属植物的树干上钻孔，然后利用植物蒸腾拉力将天然沉香诱导剂注入沉香树体中，然后封住孔洞，处理3～ 24个月后割取树干中棕褐色油状物以及黄棕色变色木质部，晒干后即为沉香。本发明的天然沉香诱导剂的药效成分安全，为天然植物成分，不添加任何激素、化学药物、人工香料等成分；采用本发明沉香诱导剂能高效、优质、高产的生产出沉香，结香3个月可以达到国家药典2015年版的标准；且显著提高醇溶性浸出物、沉香四醇、挥发油及倍半萜的含量。但是，该专利申请生产的沉香因采用诱导结香分子的主要成分是氯化铁和氯化亚铁，而所用诱导结香分子难以把控，如果加入的诱导结香分子偏少，结香率较低；如果加入的诱导结香分子偏多，则沉香产品含铁超标，所得沉香达不到《中华人民共和国药典》(2015版)对铁元素的含量要求，从而降低了沉香的结香率及品质。
2、专利申请CN201510630841.5，公开了一种基于微生物输液法的沉香诱导方法及应用，包括：采用输液法将微生物促香剂输入产沉香植物，至获得沉香；其中，所述微生物促香剂中含有微生物和/或微生物发酵液过滤菌体后的滤液，所述微生物包含真菌、细菌和放线菌等，真菌优选为硬孔菌属、拟层孔菌属、可可毛色二孢属、镰刀菌属、拟盘多毛孢属、头孢菌属、霉属、腐木菌属或小球壳菌属中的一种或多种。本发明提供的技术方案处理简单，利用微生物促香剂结合通体香结香技术诱导产沉香植物生产沉香，结香快，结香效率高，能充分利用白木且中间不腐朽，本发明还提供了一种利用所述基于微生物输液法的沉香诱导方法所获得的沉香、点状香、点线状香制备的沉香珠子。但是，该专利申请仅对固体诱导结香菌的结香法进行了一定的改进，结香机理与固体诱导结香菌的传统结香方法一样，存在结香慢，沉香产量低的缺陷。
3、专利申请CN201510629795.7，公开了一种适用于微生物促进沉香属或拟沉香属植物产生沉香的方法及应用，该方法的步骤包括：在木质部表面先设置面状分布的凹沟或粗糙面，植入微生物促香剂后包覆木质部至结香或者直接在木质部植入微生物促香剂后包覆木质部至结香。本方法通过面式接菌的方法来提高菌株与树干的接触面，利用菌株本身的生物学浸染能力，使形成的沉香具有结香快，结香面宽，结香量大及味道接近自然香等特点。此外，本发明采用“面式”接菌的方法，无须开凿深入树干的孔洞，对白木部分的破坏较小，大大提高了白木的利用率。另外，本发明提供的结香方法剖香容易，如不需要把整棵树砍下则把结香部位的沉香剖下即可。但是，该专利申请的结香机理与固体诱导结香菌的传统结香方法一样，解决不了结香慢，沉香产量低的缺点。
4、专利申请CN201010104119.5，公开了一种输液法在白木香树上生产沉香的方法，是在白木香树的树干上钻孔，用输液法将沉香促香剂缓缓滴入白木香树体中；间隔2～3个月施加一次，处理6～12个月后，割取树干中形成的棕褐色油状物及黄棕色变色木质部，经晒干即为沉香；所述沉香促香剂是将植物激素溶液与化学试剂溶液混合而成；所述化学试剂是铁盐或钠盐。本发明工艺简单，操作方便，利用诱导的方式极大地提高了沉香的产量，缩短沉香的生产周期，结香效果显著，适用于大规模标准化商品化生产，能有效地缓解了沉香的供需矛盾，对白木香资源的保护、开发和循环利用提供有效的途径，具有重要的经济、社会和生态效益。但是，该专利申请结香方法由于加入了激素与化学试剂，影响了沉香的品质，沉香的品质较差，难以达到药用沉香的标准。
因此，研制出一种能够提升香树结香率和沉香品质尤为重要。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供了一种白木香树的生物结香方法。本发明对结香诱导剂进行改良，在诱导结香分子中添加甲酸，同时减少了氯化铁和氯化亚铁的用量，保证沉香产品含铁符合相关标准，同时添加了香型促进剂，从而大大的提高了白木香的结香率，由于甲酸对白木香树机体产生较强的刺激作用，继而使其产生应急防御反应，白木香树机体产生出大量次生代谢产物，达到诱导其快速结香的作用，甲酸经长时间自然分解后没有残留，对提升沉香的品质有很好的帮助，从而解决了沉香产品含铁超标、品质差、结香率低等技术问题；控制结香12个月以上，该结香时间不仅能够提高结香率，而且使得沉香品质较佳，产量较高；为进一步提高沉香的结香率及提高沉香的品质，在滴注完结香诱导剂3～4周后，人工接种培育出来的天然固体诱导结香菌种，在固体诱导结香菌种的诱导下，结出的沉香品质大大提高，使得到的沉香达到天然沉香的品质，通体结香率达到90％以上。
为了能够达到上述所述目的，本发明采用以下技术方案：
一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香。
进一步地，所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝5.8-6.2:9.5-10.5:0.4-0.6:0.4-0.6组成。改良结香诱导剂保存在植物输液袋中，每袋体积为1000mL。
进一步地，所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾1～3 份、80mg/L的磷酸二氢钾3～5份、32mg/L的抗坏血酸1～3份。
进一步地，所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁0.5～1.5份、80mg/L的氯化铁1～3份、240mg/L的甲酸5～7份。
进一步地，所述内源伤害分子是浓度为1×10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为9～11mg/L的天然野生蜂蜜。
进一步地，所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌。
进一步地，所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡55～65s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡55s～65s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于24℃～27℃的恒温箱中培养5-7天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在24℃～27℃恒温箱中继续培养5-7天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在24℃～27℃下恒温箱培养13d～15d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
进一步地，一种白木香树的生物结香方法，具体包括以下步骤：
(1)取树径10cm～25cm的白木香树，在距地面27cm～35cm且与树径成 45°角处，用5mm～7mm电钻钻两个深6cm～8cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为0.1cm～3cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
进一步地，在步骤(2)，所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径。
本申请所用改良结香诱导剂中各组分的作用如下：营养剂能够补充白木香树所需的各种营养成分，改善树势，抵抗结香过程树体所受的外部伤害，加速伤口愈合，防止树木枯死；结香诱导分子能够刺激白木香树产生应激防御反应，诱导白木香树快速结香；内源伤害分子为系统素，系统素是植物受到外部伤害时在细胞质中产生的具有信号传导作用的内源多肽物质，启动植物的防御反应并产生大量的次生代谢产物，与结香诱导分子一起诱导白木香树快速结香；香型促进剂能够利用蜂蜜中的酶类、芳香类物质，在固体诱导结香菌种的作用下，可得到某种特定香型的沉香。
由于本发明采用了以上技术方案，具有以下有益效果：
(1)本发明对结香诱导剂进行改良，在诱导结香分子中添加甲酸，同时减少了氯化铁和氯化亚铁的用量，保证沉香产品含铁符合相关标准，同时添加了香型促进剂，从而大大的提高了白木香的结香率，由于甲酸对白木香树机体产生较强的刺激作用，继而使其产生应急防御反应，白木香树机体产生出大量次生代谢产物，达到诱导其快速结香的作用，甲酸经长时间自然分解后没有残留，对提升沉香的品质有很好的帮助，从而解决了沉香产品含铁超标、品质差、结香率低等技术问题。
(2)本发明创新了改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合的生物结香方法，改良结香诱导剂结香具有结香快、产量高的优点，在结合接种固体诱导结香菌进行结香的方式提高了沉香品质较好；针对本申请提出的缺陷，该结香方法既利用了改良结香诱导剂结香快、产量高的特点，并对结香诱导剂进行了改进，又利用了固体诱导结香菌结香品质高的优点，将两者进行结合，开辟了一种使沉香结香率高、沉香品质优的结香方法，所得沉香品质有了很大的提升。
(3)本发明采用蜂蜜作为香型促进剂，由于蜂蜜中含有特殊的酶类、芳香类物质，使得到的沉香具有特定的香型。
(4)本申请控制结香12个月以上，该结香时间不仅能够提高结香率，而且使得沉香品质较佳，产量较高。
(5)本发明为进一步提高沉香的结香率及提高沉香的品质，在滴注完结香诱导剂3～4周后，人工接种培育出来的天然固体诱导结香菌种，在固体诱导结香菌种的诱导下，结出的沉香品质大大提高，使得到的沉香达到天然沉香的品质，通体结香率达到90％以上。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实施例1
一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香；具体包括以下步骤：
(1)取树径10cm的白木香树，在距地面27cm且与树径成45°角处，用 5mm电钻钻两个深6cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为 15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为0.1cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
进一步地，所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝5.8:9.5:0.4:0.4组成；所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾1份、80mg/L的磷酸二氢钾3份、32mg/L的抗坏血酸1 份；所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁0.5份、 80mg/L的氯化铁1份、240mg/L的甲酸5份；所述内源伤害分子是浓度为1× 10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为9mg/L的天然野生蜂蜜。改良结香诱导剂保存在植物输液袋中，每袋体积为1000mL。
进一步地，所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌；所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡55s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡55s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于24℃的恒温箱中培养6天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在24℃恒温箱中继续培养6天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在24℃下恒温箱培养13d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
实施例2
一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香；具体包括以下步骤：
(1)取树径25cm的白木香树，在距地面35cm且与树径成45°角处，用 7mm电钻钻两个深8cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为 15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为3cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
进一步地，所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝6.2:10.5:0.6:0.6组成；所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾3份、80mg/L的磷酸二氢钾5份、32mg/L的抗坏血酸 3份；所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁1.5 份、80mg/L的氯化铁3份、240mg/L的甲酸7份；所述内源伤害分子是浓度为 1×10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为11mg/L的天然野生蜂蜜。改良结香诱导剂保存在植物输液袋中，每袋体积为1000mL。
进一步地，所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌；所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡65s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡65s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于27℃的恒温箱中培养5天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在27℃恒温箱中继续培养6天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在27℃下恒温箱培养15d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
实施例3
一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香；具体包括以下步骤：
(1)取树径15cm的白木香树，在距地面30cm且与树径成45°角处，用 5.5mm电钻钻两个深6.5cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为 15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为0.5cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
进一步地，所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝6.0:10.5:0.4:0.5组成；所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾1.5份、80mg/L的磷酸二氢钾3.5份、32mg/L的抗坏血酸1.5份；所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁0.8份、80mg/L的氯化铁1.5份、240mg/L的甲酸5.5份；所述内源伤害分子是浓度为1×10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为9.5mg/L的天然野生蜂蜜。改良结香诱导剂保存在植物输液袋中，每袋体积为1000mL。
进一步地，所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌；所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡58s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡58s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于25℃的恒温箱中培养6天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在25℃恒温箱中继续培养7天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在25℃下恒温箱培养13.5d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
实施例4
一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香；具体包括以下步骤：
(1)取树径20cm的白木香树，在距地面33cm且与树径成45°角处，用 6.5mm电钻钻两个深7.5cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为 15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为2.5cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
进一步地，所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝6.2:10:0.6:0.4组成；所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾2.5份、80mg/L的磷酸二氢钾4.5份、32mg/L的抗坏血酸2.5份；所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁 1.3份、80mg/L的氯化铁2.5份、240mg/L的甲酸6.5份；所述内源伤害分子是浓度为1×10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为10.5mg/L的天然野生蜂蜜。改良结香诱导剂保存在植物输液袋中，每袋体积为1000mL。
进一步地，所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌；所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡55～ 65s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡62s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于26℃的恒温箱中培养7天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在26℃恒温箱中继续培养7天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在26℃下恒温箱培养14.5d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
实施例5
一种白木香树的生物结香方法，采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香；具体包括以下步骤：
(1)取树径18cm的白木香树，在距地面32cm且与树径成45°角处，用 6mm电钻钻两个深7cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为 15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为2cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
进一步地，所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝5.9:10.1:0.6:0.4组成；所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾2份、80mg/L的磷酸二氢钾4份、32mg/L的抗坏血酸 2份；所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁1.0 份、80mg/L的氯化铁2份、240mg/L的甲酸6份；所述内源伤害分子是浓度为 1×10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为10mg/L的天然野生蜂蜜。改良结香诱导剂保存在植物输液袋中，每袋体积为1000mL。
进一步地，所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌；所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡60s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡60s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于25.5℃的恒温箱中培养7天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在25.5℃恒温箱中继续培养6天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在25.5℃下恒温箱培养14d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
对比例1
一种白木香树的生物结香方法，包括以下步骤：取树径约15cm的白木香树距地面约30cm处，与树径成45℃用6mm电钻钻两个深约7cm的孔，将配好的沉香结香诱导剂500ml用植物输液袋进行输液，输液完后用橡胶塞把输液孔塞住，结香12个月，割取创伤部位的褐色木质，晒干得到沉香。
进一步地，所述沉香结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子和氨基寡糖素按照质量比＝5.9:10.1:0.6:0.4制成，其中，所述营养剂由100mg/L的硝酸钾、60mg/L的磷酸二氢钾、8mg/L的抗坏血酸、80mg/L的硝酸铵、48mg/L 的硫酸铵、20mg/L的硫酸镁按照质量比＝1:1:1:1:1:1制成；所述结香诱导分子由 40mg/L的氯化亚铁、40mg/L的氯化铁按照质量比＝1:1制成；所述内源伤害分子是1×10-12mol/L的系统素。
对比例2
按照专利申请CN201610373562.X中的实施例进行白木香树的结香。
对比例3
按照专利申请CN201010104119.5中的实施例进行白木香树的结香。
选取同样树龄的白木香树，在树径相同的白木香树用本申请实施例1～5和对比例1～3方法进行结香，结香12个月后分别割取实施例1～5和对比例1～3 方法获得的结香创伤部位的木质，晒干，分别检测所得沉香四醇、挥发油中总的倍半萜、沉香挥发油、醇溶性浸出物的含量进行对比，并检测沉香通体结香率，实验结果如下表1所示。
表1
Figure BDA0002433969950000141
Figure BDA0002433969950000151
由表1实验数据可知，本申请生物结香方法所得的沉香四醇、倍半萜、沉香挥发油、醇溶性浸出物等含量都得到了提高，且体结香率也得到了提高。
综上所述，本发明对结香诱导剂进行改良，在诱导结香分子中添加甲酸，同时减少了氯化铁和氯化亚铁的用量，保证沉香产品含铁符合相关标准，同时添加了香型促进剂，从而大大的提高了白木香的结香率，由于甲酸对白木香树机体产生较强的刺激作用，继而使其产生应急防御反应，白木香树机体产生出大量次生代谢产物，达到诱导其快速结香的作用，甲酸经长时间自然分解后没有残留，对提升沉香的品质有很好的帮助，从而解决了沉香产品含铁超标、品质差、结香率低等技术问题；控制结香12个月以上，该结香时间不仅能够提高结香率，而且使得沉香品质较佳，产量较高；为进一步提高沉香的结香率及提高沉香的品质，在滴注完结香诱导剂3～4周后，人工接种培育出来的天然固体诱导结香菌种，在固体诱导结香菌种的诱导下，结出的沉香品质大大提高，使得到的沉香达到天然沉香的品质，通体结香率达到90％以上。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在没有背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同含义和范围内的所有变化囊括在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：采用改良结香诱导剂与固体诱导结香菌相结合进行诱导结香，具体生物结香方法包括以下步骤：在白木香树树径钻输液孔，用植物输液袋将改良结香诱导剂通过输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，在滴注完改良结香诱导剂3～4周后，将培育出来的固体诱导结香菌种填入输液孔中，再把橡胶塞塞好，诱导结香，得到沉香。
2.根据权利要求1所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：所述改良结香诱导剂由营养剂、结香诱导分子、内源伤害分子、香型促进剂按照质量比＝5.8-6.2:9.5-10.5:0.4-0.6:0.4-0.6组成。
3.根据权利要求2所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：所述营养剂由以下重量份的原料制成：300mg/L的硝酸钾1～3份、80mg/L的磷酸二氢钾3～5份、32mg/L的抗坏血酸1～3份。
4.根据权利要求2所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：所述结香诱导分子由以下重量份的原料制成：80mg/L的氯四水化亚铁0.5～1.5份、80mg/L的氯化铁1～3份、240mg/L的甲酸5～7份。
5.根据权利要求2所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：所述内源伤害分子是浓度为1×10-12mol/L的系统素；所述香型促进剂是浓度为9～11mg/L的天然野生蜂蜜。
6.根据权利要求1所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：所述固体诱导结香菌是采用优质的天然沉香树经提取、消毒、提纯、多次培养得到的可可球二饱菌或者镰刀菌。
7.根据权利要求1或6所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：所述固体诱导结香菌的培养方法为：从天然结香的沉香树中割取沉香样品，先置于0.1％的氯化汞溶液中浸泡55～65s，取出用无菌水冲洗干净，然后置于75％酒精溶液浸泡55s～65s，取出用无菌水冲洗干净，再放入高温消毒好的培养皿，置于24℃～27℃的恒温箱中培养5-7天，形成菌落后，挑取可可球二饱菌或者镰刀菌菌落的菌丝转接至新培养皿，在24℃～27℃恒温箱中继续培养5-7天，如多此次分离纯化后获得初级菌株，将所得初级菌株接种到高温消毒好的固体培养基上，在24℃～27℃下恒温箱培养13d～15d，当菌丝布满瓶内时，制得所述固体诱导结香菌。
8.根据权利要求1所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)取树径为10cm～25cm的白木香树，在距地面27cm～35cm且与树径成45°角处，用5mm～7mm电钻钻两个深6cm～8cm的输液孔；
(2)通过步骤(1)的输液孔给白木香树滴注改良结香诱导剂，滴注完后用橡胶塞把输液孔塞住，防止改良结香诱导剂流出或雨水冲刷；
(3)从滴注完改良结香诱导剂起3～4周后，取出橡胶塞，将固体诱导结香菌填入输液孔中，填充量为0.1cm～3cm，再把橡胶塞塞好，让固体诱导结香菌诱导结香，结香12个月以上，割取创伤部位的褐色木质并晒干，获得沉香。
9.根据权利要求8所述的一种白木香树的生物结香方法，其特征在于：在步骤(2)，所述改良结香诱导剂用量与白木香树树径大小有关，当白木香树树径为15cm时改良结香诱导剂用量为1000mL，其他树径改良结香诱导剂的用量按以下公式计算：V＝d2/152×1000mL，式中，d是待结香白木香树的树径。
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