CN111440150B - 一种一氧化氮供体型法舒地尔衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种一氧化氮供体型法舒地尔衍生物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体涉及一种一氧化氮（NO）供体型法舒地尔衍生物及其制备方法和用途。该类化合物既可有效地保持ROCK抑制活性，又能在体内产生具有ROCK抑制活性的片段分子及NO，通过抑制血管重构和舒张血管双重作用协同抗PAH。本发明涉及这类NO供体型法舒地尔衍生物，或其药学上可接受的盐，它们的制备方法，含有它们的药物组合以及医药用途，特别是在制备预防和/或治疗PAH等肺血管疾病药物中的应用。

Description

一种一氧化氮供体型法舒地尔衍生物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种一氧化氮(NO)供体型法舒地尔衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension，PAH)是以远端肺小动脉内膜增生、中膜肥厚、外膜纤维化为主要病理特征的进行性血管性疾病，PAH病因复杂，血管收缩、平滑肌细胞过度增殖和抗凋亡表型的出现、内皮细胞功能障碍、炎症反应和原位血栓形成等均能促进其发生发展。进一步会引起血管弹性降低、内径变窄和血管阻力增加。这些变化使得静息时的平均肺动脉压(mPAP)升高(>20mmHg)，进而导致呼吸困难、疲劳、咳嗽、胸痛、心悸、周围水肿、晕厥、右心衰竭甚至死亡。
发明内容
目的：本发明提供一种NO供体型法舒地尔衍生物及其制备方法和用途，整体分子保持ROCK抑制活性，又能在体内产生具有ROCK抑制活性的片段分子(抑制血管重构)及NO(舒张血管)，即可通过舒张血管和抑制血管重构双重作用协同抗PAH。
技术方案：为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
PAH发生的最重要机制是内皮功能障碍和/或损伤，导致内源性血管舒张剂如前列环素、NO及血管收缩剂如内皮素和5-羟色胺的生成失衡。因此，NO、内皮素和前列环素是研究PAH的三个主要途径。针对以上3种主要的靶点，相继有多种药物进入临床并上市，如前列环素途径：epoprostenol、iloprost、treprostinil、selexipag；内皮素途径：bosentan、ambrisentan、macitentan；sGC激动剂：riociguat；磷酸二酯酶抑制剂：sildenafil、tadalafil、vardenafil。
尽管在抗PAH方面取得的巨大的发展，但目前针对上述通路的抗PAH药物均以内皮细胞功能恢复、肺血管张力和结构的控制为主。总体来说，现有药物及单药治疗的临床疗效欠佳。新型药物、联合不同作用机制药物的研发势在必行。理论上，联合作用靶点和作用机制不同的药物治疗PAH是合理的。同样的理论基础在心力衰竭、肿瘤及艾滋病病毒感染等药物治疗中均曾得到广泛的应用。因此，针对PAH患者肺动脉血管重构的特性，采用抑制血管增殖重构的类抗癌药物、局部给药、并针对不同的病理信号通路使用两种或两种以上具有不同作用机制的药物以产生协同效应，可达到增效减毒的目的。
ROCK是RhoA下游效应因子，是含有N-末端催化剂激酶结构域的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。ROCK有2种不同的亚型，ROCK-I主要存在于肺、肝、脾、肾中,而ROCK-II主要分布于心、脑、血管平滑肌和骨骼肌中。RhoA/ROCK通路已被证实在PAH的发病机制中发挥重要作用。该通路的激活，上调了平滑肌细胞对钙离子的敏感性，而血管平滑肌细胞的收缩主要依赖钙离子依赖的肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase，MLCK)调控的肌球蛋白轻链(myosin light chain，MLC)磷酸化。ROCK的激活可抑制肌球蛋白磷酸酶活性，增加磷酸化肌球蛋白轻链水平，最终导致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)收缩。此外，ROCK活性的增加降低了内皮一氧化氮合酶(eNOS)，从而增加了VSMC的增殖和迁移。而ROCK抑制剂法舒地尔(fasudil，又名HA1077)可以阻断这一过程，使平滑肌细胞舒张、血管扩张、缓解高血压，并且长时间应用能够缓解动脉中膜增厚和减轻肺动脉血管的重构。
多项研究表明，激活RhoA/ROCK通路可导致与肺动脉高压密切相关的血管收缩和血管重构。经证实，长期抑制ROCK可显著提高PAH患者的生存率。自1995年以来，日本就开始使用ROCK抑制剂法舒地尔治疗脑血管痉挛，同时临床试验已经显示法舒地尔在治疗PAH上的有效性，且在抗PAH方面法舒地尔正在进行II期临床实验。法舒地尔通过抑制肌球蛋白轻链磷酸化直接影响过度血管收缩，抑制肺血管平滑肌增殖，发挥急性肺血管扩张作用，改善肺血管重构和炎症。
第一方面，本发明公开了一种化合物，为通式I所示的化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002487679300000021
其中：
R1选自亚甲基，C2-C9直链、支链或包含有环状结构的亚烷基、亚烯基、亚炔基，杂环基，其中环状结构为饱和或不饱和碳环基、杂环基。
在一些实施例中，式I所示的化合物中，R1代表亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基，或，
-O-R1-O-为
Figure BDA0002487679300000031
在一些实施例中，所述化合物选自下列化合物：
4-(硝基氧)丁基-4-(异喹啉-5-磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(化合物编号：I1)及其盐酸盐(I1·HCl)
Figure BDA0002487679300000032
2-(硝基氧)乙基-4-(异喹啉-5-磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(化合物编号：I2)
Figure BDA0002487679300000033
3-(硝基氧)丙基-4-(异喹啉-5-磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(化合物编号：I3)
Figure BDA0002487679300000034
5-(硝基氧)戊基-4-(异喹啉-5-磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(化合物编号：I4)
Figure BDA0002487679300000035
1-单硝酸异山梨酯-4-(异喹啉-5-磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(化合物编号：I5)
Figure BDA0002487679300000041
下面药理实验中化合物的代号等同于此处代号所对应的化合物。
第二方面，提供本发明所述化合物的制备方法，包括：
化合物II与化合物III反应得到化合物IV，化合物IV与游离的法舒地尔V反应得到目标化合物I；合成路线如下：
Figure BDA0002487679300000042
在一些实施例中，所述化合物的制备方法，
从化合物II制备化合物IV的反应中，溶剂选自无水乙腈，无水二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，重蒸丙酮，无水四氢呋喃，无水N,N′-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或二氧六环中的一种或多种；碱选自碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，氢氧化钠，氢氧化钾，吡啶，4-甲氨基吡啶，三乙胺，N,N′-二异丙基甲胺；反应温度为-20℃至加热回流；
从化合物IV制备化合物I的反应中，溶剂选自无水乙腈，无水二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，重蒸丙酮，无水四氢呋喃，无水N,N′-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或二氧六环中的一种或多种；碱选自碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，氢氧化钠，氢氧化钾，吡啶，4-甲氨基吡啶，三乙胺，N,N′-二异丙基甲胺；反应温度为-20℃至加热回流。
作为更优选，所述化合物的制备方法，从化合物II制备化合物IV的反应中，溶剂选择无水四氢呋喃，反应温度为室温；从化合物IV制备化合物I的反应中，溶剂选择无水四氢呋喃，反应温度为室温。这些化合物可按照常规分离技术加以纯化。
第三方面，一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的通式I所示的NO供体型法舒地尔衍生物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐及可药用的载体、佐剂或媒剂。
第四方面，提供本发明的化合物在制备预防和/或治疗与肺动脉高压有关的疾病的药物中的应用。
有益效果：本发明设计、合成了NO供体型法舒地尔衍生物，一种新一代的NO供体型化合物，被证明可在肺部分别法舒地尔和NO，产生抑制血管重构和舒张血管作用，协同发挥抗PAH活性。含有目标化合物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是预防和/或治疗肺动脉高压等疾病中，具有良好的应用前景。
附图说明
图1：化合物对PASMCs中的TNF-α和IL-6的表达影响；
图2：化合物对PASMCs中的TNF-α和IL-6的表达影响；
图3：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对MCT引起的PAH模型大鼠的血流动力学影响；
图4：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对MCT引起的PAH模型大鼠的肺动脉平均厚度的影响；
图5：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对MCT引起的PAH模型大鼠的Masson染色阳性区域的影响；
图6：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对MCT引起的PAH模型大鼠肺部RhoAmRNA,ROCKI mRNA,MLC mRNA表达的影响；
图7：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对MCT引起的PAH模型大鼠肺部RhoAandROCK1蛋白表达的而影响；
图8：治疗给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠的血流动力学影响；
图9：治疗给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠的肺动脉平均厚度的影响；
图10：治疗给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠的Masson染色阳性区域的影响；
图11：治疗给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠肺动脉肌化程度的影响；
图12：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠的血流动力学影响；
图13：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠的肺动脉平均厚度的影响；
图14：预防给予I1·HCl(即FNH4)等化合物对低氧引起的PAH模型大鼠的Masson染色阳性区域的影响。
具体实施方式
为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
本发明化合物I预防和/或治疗肺动脉高压的药理实验方法与结果如下：
一、NO供体型法舒地尔化合物对ROCK-I或ROCK-II具有明显抑制作用
研究了化合物对ROCK-I和ROCK-II的抑制作用，发现化合物I1-I5对ROCK-I和ROCK-II均具有较强的抑制作用，具体结果如下表所示(表1)。这些数据提示，在对法舒地尔仲胺部分进行结构修饰后，不影响其对ROCK的结合。
表1化合物对ROCK-1及ROCK-II抑制作用
Figure BDA0002487679300000061
二、NO供体型法舒地尔化合物对PASMCs中TNF-α和IL-6表达的影响
PDGF-BB(血小板衍生生长因子)是一种强烈的有丝分裂原，能促进肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)异常增殖与迁移，被证实参与PAH进展的重要介质之一。另外，低氧造成血管内皮修复机制受损，引起平滑肌细胞的过度增殖，最终造成血管重构的发生。PDGF-BB和低氧均能够使炎症因子大IL-6和TNF-α表达升高。因此，我们模拟PAH疾病肺动脉血管的环境，考察了I1-I4(图1，其中I1为FN4，I2为FN2，I3为FN3，I4为FN5)对由PDGF-BB和低氧诱导的PASMCs中TNF-α和IL–6表达的影响。如图1所示，与空白对照相比，PASMCs中加入PDGF-BB或低氧条件培养时，TNF-α和IL-6的表达均显著提高。但当加入I1-I4(50nM)后，TNF-α和IL-6的表达均会降低，且I1(即FN4)对由PDGF-BB和低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞TNF-α和IL-6的表达的降低幅度最为显著。该结果提示FN4可有效的抑制PAH大鼠平滑肌细胞中炎症因子的水平，可进一步抑制平滑肌细胞的增殖和重构。因此，我们选择I1(即FN4)进一步考察了I1中NO片段部分(4-羟丁基硝酸酯，NO4)对PASMCs中TNF-α和IL-6的表达的影响。如图2所示，I1(即FN4)，法舒地尔(F)，NO4，以及F+NO4均能降低缺氧或PDGF-BB诱导的PASMCs中TNF-α和IL-6的升高，其中I1(即FN4)活性最佳，且优于F+NO4的联合给药。
三、I1·HCl(即FNH4，5mg/kg)对MCT诱导的大鼠PAH的预防作用研究
为了进一步研究I1·HCl(即FNH4)对MCT诱导的PAH的预防作用，一次性在大鼠皮下注射50mg/kg的MCT的同时立即雾化吸入I1·HCl(5mg/kg)。在给药3周后，考察FNH4对MCT诱导的大鼠PAH的预防作用。分别考察了PAH大鼠的血流动力学，右心室肥厚指数，PAMT％和肺小动脉外膜纤维化程度及对大鼠肺组织中相关mRNA和蛋白表达的影响。
3.1 PAH大鼠的血流动力学与RVH研究
如图3所示，在血流动力学方面，与空白对照相比，MCT明显增加mPAP(35.03±3.36mmHg vs 14.72±0.63mmHg)，RVSP(53.03±4.21mmHg vs 27.225±0.69mmHg)和RV/LV+S(0.44±0.064vs 0.32±0.05)。值得注意的是，吸入I1·HCl(即FNH4)(5mg/kg)可显著降低平均肺动脉压mPAP(21.47±3.89mmHg)，RVSP(37.75±4.53mmHg)，RV/LV+S(0.385±0.04)，效果优于NO4(mPAP＝37.58±4.21mmHg,RVSP＝56.48±4.58mmHg和RV/LV+S＝0.34±0.04)和NO4与F的联合给药(mPAP＝27.62±5.64mmHg,RVSP＝44.24±5.08mmHg,RV/LV+S＝0.34±0.03)。且与F(3.72mg/kg,mPAP＝21.34±6.43mmHg,RVSP＝33.88±10.28mmHg，RV/LV+S＝0.34±0.08)效果相当。
3.2 I1·HCl(即FNH4)预防性给药对PAH大鼠肺小动脉形态的影响
PAH疾病的一大特征是细胞外基质蛋白(包括胶原纤维、纤维连接蛋白和弹性蛋白)的沉积，PAH大鼠肺动脉血管胶原的量大于健康动物，提示血管周围纤维化程度。我们利用HE染色、Masson染色(检测胶原纤维蛋白沉积)等方法评估肺动脉中膜厚度、肺小动脉外膜纤维化程度等来考察I1·HCl(即FNH4)对肺小动脉形态的影响。
如图4所示，与空白对照组相比，MCT会显著增加PAMT％(57.0±0.078vs 26.0±0.065)，而I1·HCl(即FNH4)显著降低PAMT％(43.5±0.02)，效果优于F(PAMT％＝47.0±0.079)，NO4(PAMT％＝62.0±0.096)及二者的联合给药(PAMT％＝60±0.032)。数据显示，所有给药组均能降低PAMT％，且I1·HCl(即FNH4)(5mg/kg)效果优于其他各组。
如图5所示，与空白对照组CON组相比，MCT组Masson染色阳性区域比例显著增加(11.18％±2.06vs 5.19±0.725)，而I1·HCl(即FNH4)(7.47％±1.44)可降低Masson染色阳性区域比例，优于F(7.61％±0.68)，NO4(9.50％±0.49)及二者的联合给药(9.05％±1.24)。结果表明，给予MCT造模后，肺小动脉中胶原纤维增生，而I1·HCl(即FNH4)和F预防性给药均能有效抑制肺小动脉胶原纤维增生，即能够有效的抑肺小动脉纤维化程度。
3.3 I1·HCl(即FNH4)预防性给药对大鼠肺组织Rho/ROCK相关mRNA及蛋白表达的影响
由于ROCK抑制肌凝蛋白磷酸酶活性，增加磷酸化肌球蛋白轻链水平，最后导致PAH大鼠肺动脉血管平滑肌细胞收缩,为此我们进一步考察了I1·HCl(即FNH4)及相关化合物对MCT诱导的大鼠PAH预防实验中，用Q-PCR和WB分分别测定了对RhomRNA,ROCK1mRNA,MLCmRNA和RhoA,ROCKI蛋白的表达的影响。
如图6和图7所示，MCT可以明显增加Rho mRNA、ROCKI mRNA、MLC mRNA、RhoA和ROCKI蛋白的表达。I1·HCl(即FNH4)可抑制相关mRNA和蛋白的表达，且抑制活性高于F，NO4及二者的联合给药。
综上所述，实验证明I1·HCl(即FNH4)可发挥舒张血管和抑制血管重构额双重作用有效的治疗并预防由MCT诱导的大鼠PAH，且治疗作用优于阳性对照F，NO4及F+NO4，而预防作用与F相当。
四、I1·HCl(即FNH4)对低氧诱导的大鼠PAH的治疗和预防
动物暴露于慢性缺氧(Chronic Hypoxia,CH)导致慢性低氧肺动脉高压(CH-PAH)的发生。为进一步验证I1·HCl(即FNH4)对肺动脉高压的有效性，进一步研究I1·HCl(即FNH4)对低氧诱导肺动脉高压的预防和治疗作用。与MCT诱导的大鼠PAH模型类似，分别考察了化合物对CH-PAH大鼠的血流动力学，右心室肥厚指数，PAMT％,肺小动脉纤维化程度(检测胶原纤维蛋白沉积，MASSON染色)，RhoA/RCOK相关mRNA及蛋白的表达水平等。
4.1 FNH4对低氧诱导的大鼠PAH的治疗效果考察
大鼠在缺氧箱中喂养14天后，再每日吸入5mg/kg的I1·HCl(即FNH4)，给药治疗14天，观察I1·HCl(即FNH4)的治疗作用。
4.2血流动力学与右心室肥厚指数
如图8所示，与空白对照相比，低氧诱导的PAH大鼠的mPAP,RVSP和RV/LV+S均显著升高(mPAP,34.18±5.91vs 14.07±1.99mmHg；RVSP,41.7±2.65vs 25.03±4.14mmHg；RV/LV+S,0.40±0.08vs 0.27±0.02)。但是所有的给药组均能够在一定程度上使低氧诱导的PAH大鼠的mPAP,RVSP和RV/LV+S降低，其中I1·HCl(即FNH4)(mPAP＝21.1±3.81mmHg,RVSP＝25.17±2.32mmHg,RV/LV+S＝0.32±0.08)的作用最为明显。
4.3肺小动脉中膜厚度及肺小动脉外膜纤维化程度
如图9和图10所示，与空白对照相比，低氧诱导的PAH大鼠的血管厚度占血管直径的百分比PAMT％(51.0％±0.056vs 25.7％±0.055)及Masson染色阳性区域比例(12.78％±2.17vs 5.676％±0.52)均明显增加。然而，I1·HCl(即FNH4)会大幅度的降低PAMT％(42.4％±0.019)和Masson染色阳性区域比例(8.30％±1.07)，效果优于F(PAMT％＝48.96％±3.59；Masson染色阳性区域比例8.35％±1.57)，NO4(PAMT％＝51.61％±4.93；Masson染色阳性区域比例10.13％±1.08)及二者的联合给药(PAMT％＝55.97％±4.52；Masson染色阳性区域比例10.19％±1.82)。
4.5 I1·HCl(即FNH4)对低氧诱导的PAH大鼠α-SMA的影响
如图11所示，与CON组相比，缺氧造模组肺动脉壁肌化明显，50.07％的肺小动脉出现全部肌化。与缺氧造模组相比，各给药组(I1·HCl(即FNH4),F,NO4,F+NO4)均能有效抑制肺小动脉肌化(肌化血管比例分别为26.05％、31.16％、44.45％和47.38％)。数据表明I1·HCl(即FNH4)可有效抑制低氧引起的肺小动脉肌化。
五、I1·HCl(即FNH4)(5mg/kg)对低氧诱导的大鼠PAH的预防作用
大鼠在缺氧箱中喂养的同时，每日雾化吸入5mg/kg的I1·HCl(即FNH4)，给药4周。考察FNH4的对低氧诱导的大鼠肺动脉高压的预防作用。
5.1血流动力学及右心室肥厚指数
如图12所示，与空白对照相比，低氧诱导的PAH大鼠的mPAP，RVSP和RV/LV+S均显著升高(mPAP,33.5±5.12vs 17.63±2.59mmHg；RVSP,52.22±8.15vs 26.42±4.46mmHg；RV/LV+S,0.42±0.048vs 0.29±0.013)。但是所有的给药组(I1·HCl(即FNH4),mPAP＝20.89±2.31mmHg,RVSP＝32.34±2.92mmHg,RV/LV+S＝0.44±0.037；F,mPAP＝29.7±5.49,RVSP＝44.34±7.35mmHg,RV/LV+S＝0.4±0.06；NO4,mPAP＝29.02±4.0mmHg,RVSP＝44.47±6.01mmHg,RV/LV+S＝0.392±0.069；F+NO4,mPAP＝24.42±0.824mmHg,RVSP＝36.8±1.48mmHg,RV/LV+S＝0.422±0.084)均能够在一定程度上使低氧诱导的PAH大鼠的mPAP,RVSP和RV/LV+S降低,其中I1·HCl(即FNH4)的效果最为明显。
5.2肺动脉中膜厚度及肺小动脉纤维化程度
与空白对照相比，低氧诱导的PAH大鼠的血管厚度占血管直径的百分比PAMT％(55.03％±7.76vs 26.62％±5.98)及Masson染色阳性区域比例(11.72％±1.50vs5.49％±0.73)均明显增加。然而，I1·HCl(即FNH4)会大幅度的降低PAMT％(33.79％±3.36)和Masson染色阳性区域比例(8.52％±1.43)，效果优于F(PAMT％＝37.18％±5.33,Masson染色阳性区域比例8.94％±0.75)，NO4(PAMT％＝38.87％±5.16,Masson染色阳性区域比例10.46％±1.2)及二者的联合给药(PAMT％＝55.51±3.94,Masson染色阳性区域比例9.47％±1.48)(图13和图14)。
通过考察I1·HCl(即FNH4)(5mg/kg)对低氧诱导的大鼠PAH的治疗和预防作用发现，I1·HCl(即FNH4)同样可发挥舒张血管和抑制血管重构的双重作用，且活性优于F，NO4及二者的联合给药。
综上所述，基于ROCK抑制剂与NO在抗PAH方面的临床有效性，将ROCK抑制剂F和硝酸酯类NO供体片段相结合，得到整体分子I1-I5。研究发现I1-I5均保持较强的ROCK抑制活性，且可降低由PDGF-BB和低氧诱导的平滑肌细胞中TNF-α和IL-6的表达，其中I1(即FN4)效果最佳。进一步研究表明，I1·HCl(即FNH4)在雾化吸入给药后，通过NO发挥舒张血管和ROCK抑制发挥抑制血管重构的双重作用，可预防和逆转由MCT或低氧诱导的大鼠PAH。有趣的是，I1·HCl(即FNH4)的抗PAH疗效优于F、NO供体片段NO4单独给药及二者的联合给药，这也体现出I1·HCl(即FNH4)可发挥ROCK抑制和NO的双重作用，因而活性优于单一药物。
实施例1
4-(硝基氧)丁基-4-((异喹啉-5基)磺酰基)-1,4-氮杂环庚烷-1-碳酸酯盐酸盐(I1/FN4)
Figure BDA0002487679300000111
将4-羟丁基硝酸酯(53mg,0.39mmol)溶解于5ml的无水THF中，加入双(五氟苯基)碳酸(200mg,0.51mmol)，四丁基氟化铵(117μl,0.117mmol)室温搅拌2h，加入TEA(113μl,0.78mmol)游离的化合物V法舒地尔(113.5mg,0.39mmol)室温搅拌过夜，反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩后经快速硅胶柱层析制得I1(142.8mg,81％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.32(s,1H),8.66(d,J＝6.0Hz,1H),8.28-8.37(m,2H),8.18(d,J＝8.1Hz,1H),7.67(t,J＝7.8Hz,1H),4.42-4.46(m,2H),4.05-4.08(m,2H),3.50-3.58(m,4H),3.37-3.42(m,2H),1.88-2.02(m,2H),1.73-1.75(m,4H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.27,145.19,134.29,133.55,132.95,131.51,129.20,125.83,117.35,72.58,64.55,49.50,49.12,47.40,45.73,28.67,25.37,23.59.
将化合物I1(100mg)加入到两颈反应瓶中，加入无水THF(20mL)溶解，置于冰浴条件下搅拌，向反应瓶中通入由浓硫酸和氯化钠制备得到干燥的氯化氢气体，继续搅拌2min后停止通气。通过减压浓缩除去溶剂，得到无色粘状固体，用异丙醇(5mL)重结晶得到白色固体59mg，即得I1·HCl(FNH4)，收率为54.63％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.82(s,1H),8.77(d,J＝6.4Hz,1H),8.62-8.68(m,2H),8.51(d,J＝7.0Hz,1H),8.0(t,J＝7.8Hz,1H),4.53(t,J＝6.0Hz,2H),3.97(t,J＝6.0Hz,2H),3.39-3.46(m,8H),1.72-1.75(m,4H),1.70-1.67(m,2H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.27,145.19,134.29,133.55,132.95,131.51,129.20,125.83,117.35,72.58,64.55,49.50,49.12,47.40,45.73,28.67,25.37,23.59.HRMS(ESI)calcd for C19H24N4O7S[M+H]+:453.1438,found:453.1436,ppm error-0.44.
实施例2
2-(硝基氧)乙基-4-((异喹啉-5基)磺酰基)-1,4-氮杂环庚烷-1-碳酸酯(I2/FN2)
Figure BDA0002487679300000121
将2-羟乙基硝酸酯(42mg,0.39mmol)溶解于5ml的无水THF中，加入双(五氟苯基)碳酸(200mg,0.51mmol)，四丁基氟化铵(117μl,0.117mmol)室温搅拌2h，加入TEA(113μl,0.78mmol)游离的化合物V法舒地尔(113.5mg,0.39mmol)室温搅拌过夜，反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得白色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体I2(119.0mg,72％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.32(s,1H),8.66(d,J＝6.0Hz,1H),8.27-8.34(m,2H),8.17(d,J＝8.1Hz,1H),7.66(t,J＝7.8Hz,1H),4.61-4.64(m,2H),4.25-4.33(m,2H),3.47-3.59(m,4H),3.36-3.45(m,4H),1.87-1.98(m,2H).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ152.82,144.70,133.65,133.14,132.51,130.95,128.68,125.39,116.81,70.37,60.96,48.77,48.22,46.93,45.34,27.97.HRMS(ESI)calcd for C17H20N4O7S[M+H]+:424.1125,found:424.1124,ppm error-0.23.
实施例3
3-(硝基氧)丙基-4-((异喹啉-5基)磺酰基)-1,4-氮杂环庚烷-1-碳酸酯(I3/FN3)
Figure BDA0002487679300000122
将3-羟丙基硝酸酯(47mg,0.39mmol)溶解于5ml的无水THF中，加入双(五氟苯基)碳酸(200mg,0.51mmol)，四丁基氟化铵(117μl,0.117mmol)室温搅拌2h，加入TEA(113μl,0.78mmol)游离的化合物V法舒地尔(113.5mg,0.39mmol)室温搅拌过夜，反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得白色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体I3(135.0mg,79％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.32(s,1H),8.67(d,J＝5.7Hz,1H),8.28-8.35(m,2H),8.18(d,J＝8.1Hz,1H),7.67(t,J＝7.8Hz,1H),4.50-4.52(m,2H),4.11-4.17(m,2H),3.48-3.60(m,4H),3.35-3.45(m,4H),1.89-2.07(m,4H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ153.27,145.16,134.22,133.55,132.93,131.45,129.17,125.84,117.31,70.18,61.69,49.37,49.03,47.37,45.74,28.62,26.82.HRMS(ESI)calcd for C17H22N4O7S[M+H]+:439.1282,found:439.1282.
实施例4
5-(硝基氧)戊基-1-((异喹啉-5基)磺酰基)-1,4-氮杂环庚烷-1-碳酸酯(I4/FN5)
Figure BDA0002487679300000131
将5-羟戊基硝酸酯(47mg,0.39mmol)溶解于5ml的无水THF中，加入双(五氟苯基)碳酸(200mg,0.51mmol)，四丁基氟化铵(117μl,0.117mmol)室温搅拌2h，加入TEA(113μl,0.78mmol)游离的化合物V法舒地尔(113.5mg,0.39mmol)室温搅拌过夜，反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得白色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体I4(156.4mg,86％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ9.31(s,1H),8.65(d,J＝6.0Hz,1H),8.27-8.37(m,2H),8.17(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(t,J＝7.8Hz,1H),4.40(t,J＝6.4Hz,2H),4.01(t,J＝6.2Hz,2H),3.46-3.58(m,4H),3.33-3.43(m,4H),1.87-1.96(m,2H),1.56-1.76(m,4H),1.35-1.46(m,2H).13C NMR(75MHz,CDCl3)δ153.25,145.17,134.32,133.52,132.91,131.50,129.20,125.83,117.37,72.94,64.94,49.57,49.12,47.44,45.71,28.66,28.49,26.40,22.18.HRMS(ESI)calcd for C20H26N4O7S[M+H]+:467.1595,found:467.1589,ppm error-1.28.
实施例5
1-单硝酸异山梨酯-1-((异喹啉-5基)磺酰基)-1,4-氮杂环庚烷-1-碳酸酯(I5)
Figure BDA0002487679300000141
将单硝酸异山梨酯(74.5mg,0.39mmol)溶解于5ml的无水THF中，加入双(五氟苯基)碳酸(200mg,0.51mmol)，四丁基氟化铵(117μl,0.117mmol)室温搅拌2h，加入TEA(113μl,0.78mmol)游离的化合物V法舒地尔(113.5mg,0.39mmol)室温搅拌过夜，反应液加入适量二氯甲烷(50mL)稀释，饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水各洗涤3次。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩得白色固体，经快速硅胶柱层析制得白色固体I5(63.4mg,32％)。
1H NMR(CDCl3,300MHz)δ9.36(s,1H),8.69(s,1H),8.39-8.31(m,2H),8.23-8.20(m,1H),7.70(t,J＝7.2Hz,1H),5.34-5.29(m,2H),5.17-5.12(m,1H),4.94(s,1H),4.48(m,1H),4.04-3.89(m,4H),3.61-3.51(m,5H),3.31-3.27(m,2H),2.05-1.92(m,2H).
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种化合物，为通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002842409000000011
其中：
R1选自亚甲基，C2-C9直链、支链或包含有环状结构的亚烷基，
Figure FDA0002842409000000012
其中环状结构为饱和或不饱和碳环基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，式I所示的化合物中，R1代表亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基，或，
-O-R1-O-为
Figure FDA0002842409000000013
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自：
Figure FDA0002842409000000014
Figure FDA0002842409000000021
4.权利要求1所述化合物的制备方法，包括：
化合物II与化合物III反应得到化合物IV，化合物IV与游离的法舒地尔V反应得到目标化合物I；合成路线如下：
Figure FDA0002842409000000022
5.根据权利要求4所述化合物的制备方法，其特征在于，
从化合物II制备化合物IV的反应中，溶剂选自无水乙腈，无水二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，重蒸丙酮，无水四氢呋喃，无水N,N′-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或二氧六环中的一种或多种；碱选自碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，氢氧化钠，氢氧化钾，吡啶，4-甲氨基吡啶，三乙胺，N,N′-二异丙基甲胺；反应温度为-20℃至加热回流；和/或，
从化合物IV制备化合物I的反应中，溶剂选自无水乙腈，无水二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，重蒸丙酮，无水四氢呋喃，无水N,N′-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或二氧六环中的一种或多种；碱选自碳酸钾，碳酸钠，碳酸氢钠，氢氧化钠，氢氧化钾，吡啶，4-甲氨基吡啶，三乙胺，N,N′-二异丙基甲胺；反应温度为-20℃至加热回流。
6.根据权利要求5所述化合物的制备方法，其特征在于，从化合物II制备化合物IV的反应中，溶剂选择无水四氢呋喃，反应温度为室温；从化合物IV制备化合物I的反应中，溶剂选择无水四氢呋喃，反应温度为室温。
7.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐及可药用的载体、佐剂或媒剂。
8.权利要求1-3任一项所述的化合物在制备预防和/或治疗与肺动脉高压有关的疾病的药物中的应用。
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