CN111432803B

CN111432803B - 包含血浆激肽释放酶抑制剂的剂型

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Publication number: CN111432803B
Application number: CN201880077253.5A
Authority: CN
Inventors: 约翰·赫尔曼·科利特; 加里·保罗·库克; 杰米·约瑟夫·法勒; 迈克尔·约翰·弗罗迪马; 迈克尔·布莱恩·罗伊; 里查德·西蒙·托德; 罗伯特·尼尔·沃德
Original assignee: Kalvista Pharmaceuticals Ltd
Current assignee: Kalvista Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2017-11-29
Filing date: 2018-11-28
Publication date: 2022-08-26
Anticipated expiration: 2038-11-28
Also published as: MA51204A; TW201924682A; MA51204B1; CN111432803A; CA3083856A1; KR20200093553A; WO2019106361A1; EP3716952B1; EP3716952A1; BR112020010154A2; GB201721515D0; AU2018376817A1; AU2018376817B2; TWI800567B

Abstract

本发明涉及包含血浆激肽释放酶抑制剂(特别是式A的化合物的固体形式(1型))的口服固体剂型。还提供了使用式A的化合物的1型制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法。

Description

包含血浆激肽释放酶抑制剂的剂型

本发明涉及包含血浆激肽释放酶抑制剂、特别是式A的化合物的固体形式(1型)的口服固体剂型。还提供了使用式A的化合物的1型制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法。

发明背景

血浆激肽释放酶的抑制剂具有多种治疗应用，特别是在与糖尿病性视网膜病(diabetic retinopathy)相关的视网膜血管通透性(retinal vascular permeability)、糖尿病性黄斑水肿(diabetic macular edema)和遗传性血管性水肿(hereditaryangioedema)的治疗中。

血浆激肽释放酶是一种可以从激肽原释放激肽的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶(参见K.D.Bhoola等人,“Kallikrein-Kinin Cascade(激肽释放酶-激肽级联)”,Encyclopediaof Respiratory Medicine,p483-493；J.W.Bryant等人,“Human plasma kallikrein-kinin system:physiological and biochemical parameters(人血浆激肽释放酶-激肽系统：生理和生化参数)”Cardiovascular and haematological agents in medicinalchemistry,7,p234-250,2009；K.D.Bhoola等人,Pharmacological Rev.,1992,44,1；和D.J.Campbell,“Towards understanding the kallikrein-kinin system:insights fromthe measurement of kinin peptides(对激肽释放酶-激肽系统的理解：来自激肽肽类测量的观察结果)”,Brazilian Journal of Medical and Biological Research 2000,33,665-677)。虽然它在内源性凝血级联中的作用不涉及缓激肽的释放或酶促裂解，但是它是该级联的必需成员。血浆前激肽释放酶由单一基因编码并且在肝脏中合成。其作为无活性的血浆前激肽释放酶由肝细胞分泌，该血浆前激肽释放酶作为与高分子量激肽原结合的异二聚体复合物在血浆中循环，其被活化而产生具有活性的血浆激肽释放酶。激肽是通过G蛋白偶联受体起作用的炎症的有效介质，并且先前已经研究激肽的拮抗剂(诸如缓激肽拮抗剂)作为用于治疗多种病症的潜在治疗剂(F.Marceau和D.Regoli,Nature Rev.,DrugDiscovery,2004,3,845-852)。

血浆激肽释放酶被认为在多种炎性病症中起作用。血浆激肽释放酶的主要抑制剂为丝氨酸蛋白酶抑制蛋白C1酯酶抑制剂(serpin C1 esterase inhibitor)。存在C1酯酶抑制剂遗传缺陷的患者发生遗传性血管性水肿(HAE)，其导致脸、手、咽喉、胃肠道和生殖器的间歇性肿胀。急性发作期间形成的水泡含有高水平的血浆激肽释放酶，其裂解高分子量激肽原释放缓激肽，导致血管通透性增加。使用大蛋白血浆激肽释放酶抑制剂的治疗已显示通过阻止引起血管通透性增加的缓激肽的释放而有效治疗HAE(A.Lehmann“Ecallantide(DX-88),a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditaryangioedema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery(艾卡拉肽(DX-88)，一种用于治疗遗传性血管性水肿和防止泵上心胸外科手术中失血的血浆激肽释放酶抑制剂)”Expert Opin.Biol.Ther.8,p1187-99)。

血浆激肽释放酶-激肽系统在患有晚期糖尿病性黄斑水肿的患者中异常地丰富。最近已公开，血浆激肽释放酶有助于糖尿病大鼠的视网膜血管功能障碍(A.Clermont等人“Plasma kallikrein mediates retinal vascular dysfunction and induces retinalthickening in diabetic rats(血浆激肽释放酶介导视网膜血管功能障碍并且诱导糖尿病大鼠中的视网膜增厚)”Diabetes,2011,60,p1590-98)。此外，施用血浆激肽释放酶抑制剂ASP-440改善糖尿病大鼠中的视网膜血管通透性和视网膜血液流动异常二者。因此，血浆激肽释放酶抑制剂应当具有作为减轻与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性和糖尿病性黄斑水肿的治疗的效用。

血浆激肽释放酶也在凝血中起作用。内源性凝血级联可以通过因子XII(FXII)活化。一旦FXII被活化(活化为FXIIa)，FXIIa通过因子XI(FXI)的活化而触发纤维蛋白形成，由此引起凝血。血浆激肽释放酶是内源性凝血级联中的关键组分，因为其将FXII活化为FXIIa，由此引起内源性凝血途径的活化。此外，FXIIa还进一步活化血浆前激肽释放酶，得到血浆激肽释放酶。这引起血浆激肽释放酶系统和内源性凝血途径的正反馈放大(Tanaka等人(Thrombosis Research 2004,113,333-339)；Bird等人(Thrombosis andHaemostasis,2012,107,1141-50)。

血液中的FXII与带负电表面(诸如在心肺转流手术期间的血液所经过的氧合器的外部管道或膜的表面)的接触引发酶原FXII的构象改变，得到少量的活性FXII(FXIIa)。如上所述，FXIIa的形成触发血浆激肽释放酶的形成，引起凝血。FXII活化为FXIIa也可以通过与在各种来源(例如败血症期间的细菌，来自降解细胞的RNA)上的带负电表面接触而在体内发生，由此引起弥漫性血管内凝血(Tanaka等人(Thrombosis Research 2004,113,333-339))。

因此，血浆激肽释放酶的抑制将抑制上述凝血级联，并且因此将可用于治疗其中不希望凝血的弥漫性血管内凝血和心肺转流手术期间的血液凝固。例如，Katsuura等人(Thrombosis Research,1996,82,361–368)显示，针对LPS诱导的弥漫性血管内凝血施用血浆激肽释放酶抑制剂PKSI-527显著地抑制了通常在弥漫性血管内凝血中发生的血小板计数和纤维蛋白原水平的降低以及FDP水平的增加。Bird等人(Thrombosis andHaemostasis,2012,107,1141-50)显示，在血浆激肽释放酶缺陷小鼠中，凝血时间增加，并且血栓显著减少。Revenko等人(Blood,2011,118,5302-5311)显示，在使用反义寡核苷酸治疗的小鼠中血浆前激肽释放酶水平的降低产生了抗血栓形成效果。Tanaka等人(Thrombosis Research 2004,113,333-339)显示，使血液与DX-88(一种血浆激肽释放酶抑制剂)接触导致活化凝血时间(ACT)增加。Lehmann等人(Expert Opin.Biol.Ther.2008,1187-99)显示，发现艾卡拉肽(Ecallantide)(一种血浆激肽释放酶抑制剂)使接触活化诱导凝血(contact activated induced coagulation)延缓。Lehmann等人得出结论，艾卡拉肽“因为其通过抑制血浆激肽释放酶来抑制内源性凝血途径而具有体外抗凝血效果”。

血浆激肽释放酶还在血小板活化的抑制中起作用，因此在止血中起作用。血小板活化是凝血中的最早步骤之一，其导致血管损害后的血小板栓子形成和快速止血。在血管损伤位置处，暴露的胶原蛋白和血小板之间的相互作用对于血小板的保留和活化以及随后的止血来说是至关重要的。

一旦活化，血浆激肽释放酶即与胶原蛋白结合，并且由此干扰由GPVI受体介导的胶原蛋白介导的血小板活化(Liu等人(Nat Med.,2011,17,206–210))。如以上所讨论的，血浆激肽释放酶抑制剂通过抑制血浆激肽释放酶介导的因子XII的活化来降低血浆前激肽释放酶活化并且由此通过接触活化系统来降低激肽释放酶系统的正反馈放大。

因此，血浆激肽释放酶的抑制减少了血浆激肽释放酶与胶原蛋白的结合，由此减少在止血中的血浆激肽释放酶的干扰。因此，血浆激肽释放酶抑制剂将可用于治疗脑出血和外科手术后出血。例如，Liu等人(Nat Med.,2011,17,206–210)证明，全身施用小分子PK抑制剂ASP-440减少了大鼠中的血肿扩大(hematoma expansion)。脑血肿可以在脑内出血之后发生并且由作为血管损伤结果的从血管向周围脑组织中的出血而引起。由Liu等人报道的在脑出血模型中的出血由涉及使血管受损的脑实质中的切口的外科手术引发。这些数据证明，血浆激肽释放酶抑制使来自外科手术后的出血和血肿体积减少。

等人(Thrombosis and Haemostasis,2013,110,399-407)证明，拟酶肽(一种抑制包括血浆激肽释放酶在内的丝氨酸蛋白酶的蛋白质)可以用于降低手术后出血。

糖尿病的其他并发症诸如脑出血、肾病、心肌病和神经病(其都与血浆激肽释放酶相关)也可以被认为是血浆激肽释放酶抑制剂的靶标。

先前已经描述了合成的和小分子的血浆激肽释放酶抑制剂，例如Garrett等人(“Peptide aldehyde…”J.Peptide Res.52,p62-71(1998))，T.Griesbacher等人(“Involvement of tissue kallikrein but not plasma kallikrein in thedevelopment of symptoms mediated by endogenous kinins in acute pancreatitisin rats(由大鼠急性胰腺炎中的内源性激肽介导的症状的发展中涉及组织激肽释放酶而不是血浆激肽释放酶)”British Journal of Pharmacology 137,p692-700(2002))，Evans(“Selective dipeptide inhibitors of kallikrein(激肽释放酶的选择性二肽抑制剂)”WO03/076458)，Szelke等人(“Kininogenase inhibitors(激肽原酶抑制剂)”WO92/04371)，D.M.Evans等人(Immunolpharmacology,32,p115-116(1996))，Szelke等人(“Kininogeninhibitors(激肽原抑制剂)”WO95/07921)，Antonsson等人(“New peptides derivatives(新型肽衍生物)”WO94/29335)，J.Corte等人(“Six membered heterocycles useful asserine protease inhibitors(可用作丝氨酸蛋白酶抑制剂的六元杂环)”WO2005/123680)，J.Stürzbecher等人(Brazilian J.Med.Biol.Res 27,p1929-34(1994))，Kettner等人(US 5,187,157)，N.Teno等人(Chem.Pharm.Bull.41,p1079-1090(1993))，W.B.Young等人(“Small molecule inhibitors of plasma kallikrein(血浆激肽释放酶的小分子抑制剂)”Bioorg.Med.Chem.Letts.16,p2034-2036(2006))，Okada等人(“Development ofpotent and selective plasmin and plasma kallikrein inhibitors and studies onthe structure-activity relationship(有效且选择性的纤溶酶和血浆激肽释放酶抑制剂的开发以及构效关系的研究)”Chem.Pharm.Bull.48,p1964-72(2000))，Steinmetzer等人(“Trypsin-like serine protease inhibitors and their preparation and use(胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶抑制剂及其制备和用途)”WO08/049595)，Zhang等人(“Discoveryof highly potent small molecule kallikrein inhibitors(高度有效的小分子激肽释放酶抑制剂的发现)”Medicinal Chemistry 2,p545-553(2006))，Sinha等人(“Inhibitorsof plasma kallikrein(血浆激肽释放酶抑制剂)”WO08/016883)，Shigenaga等人(“PlasmaKallikrein Inhibitors(血浆激肽释放酶抑制剂)”WO2011/118672)，和Kolte等人(“Biochemical characterization of a novel high-affinity and specifickallikrein inhibitor(新型高亲和性和特异性激肽释放酶抑制剂的生化表征)”,BritishJournal of Pharmacology(2011),162(7),1639-1649)。此外，Steinmetzer等人(“Serineprotease inhibitors(丝氨酸蛋白酶抑制剂)”WO2012/004678)描述了作为人纤溶酶和血浆激肽释放酶的抑制剂的环状肽类似物。

迄今为止，唯一的经批准用于医疗用途的选择性血浆激肽释放酶抑制剂是艾卡拉肽。艾卡拉肽被配制为注射用溶液。其是存在过敏性反应风险的大蛋白血浆激肽释放酶抑制剂。本领域已知的其他血浆激肽释放酶抑制剂通常是小分子，其中一些包括高度极性和可离子化的官能团，诸如胍或脒。最近，已经报导了不以胍或脒官能团为特征的血浆激肽释放酶抑制剂。

例如，Brandl等人(“N-((6-amino-pyridin-3-yl)methyl)-heteroaryl-carboxamides as inhibitors of plasma kallikrein(作为血浆激肽释放酶抑制剂的N-((6-氨基-吡啶-3-基)甲基)-杂芳基-甲酰胺)”WO2012/017020)，Evans等人(“Benzylaminederivatives as inhibitors of plasma kallikrein(作为血浆激肽释放酶抑制剂的苄胺衍生物)”WO2013/005045)，Allan等人(“Benzylamine derivatives(苄胺衍生物)”WO2014/108679)，Davie等人(“Heterocyclic derivates(杂环衍生物)”WO2014/188211)，以及Davie等人(“N-((het)arylmethyl)-heteroaryl-carboxamides compounds as plasmakallikrein inhibitors(作为血浆激肽释放酶抑制剂的N-((杂)芳基甲基)-杂芳基-甲酰胺化合物)”WO2016/083820)。

在药物制剂的制造中，重要的是活性化合物的形式可以方便地操作和处理从而得到商业可行的制造过程。因此，活性化合物的化学稳定性和物理稳定性是重要的因素。活性化合物和含有其的制剂必须能够在相当长的时间段内有效储存，而不展现出活性化合物的理化特征(例如，化学组成、密度、吸湿性和溶解性)的任何明显变化。

已知制造药物成分的特定固态形式可以影响其固态特性的许多方面并且提供在溶解性、溶解速率、化学稳定性、机械性能、技术可行性、可加工性、药代动力学和生物利用度方面的优点。在“Handbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selection and Use(药用盐手册；性能、选择和使用)”,P.Heinrich Stahl,Camille G.Wermuth(编辑)(VerlagHelvetica Chimica Acta,Zurich)中描述了这些中的一些。还在“Practical ProcessResearch and Development(实用过程研究和开发)”,Neal G.Anderson(Academic Press,San Diego)和“Polymorphism:In the Pharmaceutical Industry(多晶型：在制药行业中)”,Rolf Hilfiker(Ed)(Wiley VCH)中描述了制造固态形式的方法。在Byrn(Byrn,S.R.,Pfeiffer,R.R.,Stowell,J.G.,“Solid-State Chemistry of Drugs(药物的固态化学)”,SSCI Inc.,West Lafayette,Indiana,1999)、Brittain,H.G.,“Polymorphism inPharmaceutical Solids(药物固体中的多晶型)”,Marcel Dekker,Inc.,New York,Basel,1999)或Bernstein(Bernstein,J.,“Polymorphism in Molecular Crystals(分子晶体中的多晶型)”,Oxford University Press,2002)中描述了药物晶体中的多晶型。

申请人已经开发了作为血浆激肽释放酶的抑制剂的一系列新型化合物，其在WO2016/083820(PCT/GB2015/053615)中公开。这些化合物显示出对血浆激肽释放酶的良好选择性并且有潜力用于治疗糖尿病性视网膜病、黄斑水肿和遗传性血管性水肿。一种这样的化合物是N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺。名称N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺表示式A所示的结构。

制备式A的化合物的初次尝试通过以下方式进行：将在色谱期间使用的1％氨-甲醇/DCM溶剂蒸发以得到具有XRPD数据的泡沫，其主要显示出非晶形内容物。申请人开发了这种化合物的新型固体形式(在本文中被称为‘1型’)，其具有使其适用于开发的有利的理化性质。1型在PCT/GB2017/051579中公开(作为1型)。申请人还开发了这种化合物的新型固体形式(在本文中被称为‘3型’)，其具有使其适用于开发的有利的理化性质。3型在PCT/GB2017/051579中公开(作为3型)。

至今已经分离并且表征了式A的化合物的四种固体形式，其在PCT/GB2017/051579中公开。这些固体形式在PCT/GB2017/051579中被称为‘1型’、‘2型’、‘3型’和‘4型’。

本发明的一个目的是提供包含式A的化合物的1型的口服固体剂型。本发明还涉及提供使用式A的化合物的1型制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法。

本发明的又一个目的是提供包含式A的化合物的3型的口服固体剂型。本发明还涉及提供使用式A的化合物的3型制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法。

发明概述

因此，根据本发明的一个方面，提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5和16.3处的特征X射线粉末衍射峰(Cu Kα射线，以2θ度表示)。在本发明中，该固体形式可以被称为‘1型’。

式A的化合物的1型具有使其适用于开发的有利的理化性质。例如，式A的化合物的1型的重量法蒸气吸附(GVS)数据(图4)显示了在正常条件(例如，高达70％相对湿度)下，仅存在水含量的相对逐渐增加。这与不存在明显的吸湿性一致。相比之下，非晶形材料通常具有明显的吸湿性，或者甚至潮解性，通常使得材料成为难加工的胶。此外，在1型的样品熔化之前不存在重量损失(参见STA数据，图2)表明1型未被水合或溶剂化。稳定的水合物可能不适用于药物开发，因为在药物遇到人体的水性环境时它们可能引发施用的无水形式的药物的不希望的转化。式A的化合物的1型的另一个优点是其更容易处理。也就是说，其通过结晶的制备(参见实施例)是用于移除不希望的杂质的常用并且容易放大的程序。

通过在本文中公开的稳定性数据提供了式A的化合物的1型适用于药物开发的进一步证据。将式A的化合物的1型的两个样品储存在25℃/60％RH和40℃/75％RH，包装于两个聚乙烯袋中并且密封在HDPE瓶中。在初始时间点，XRPD显示出样品是晶体并且与1型一致。在25℃/60％RH和40℃/75％RH的储存条件下，XRPD显示出在1个月之后和在3个月之后没有变化(图7和8)。

在本说明书中，使用Cu Kα射线测量X射线粉末衍射峰(以2θ度表示)。

本发明提供了包含式A的化合物的固体形式(1型)的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式至少展现出在大约以下各项处的以下特征X射线粉末衍射峰(Cu Kα射线，以2θ度表示)：

(1)11.2、12.5、13.2、14.5和16.3；或

(2)11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4和17.9；或

(3)11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4、17.9、21.2和22.0。

在本文中术语“大约”意指存在±0.3(以2θ度表示)、优选±0.2(以2θ度表示)的2θ度的测量的不确定性。

本发明还提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式具有包含在大约4.4、11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4、17.9、21.2、22.0和22.6处的特征峰(以2θ度表示)的X射线粉末衍射图。

本发明还提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式具有与图1a所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图。

固体形式的X射线粉末衍射图可以在本文中被描述为与在附图中所描绘的“基本上”相同。应该理解的是，归因于对于技术人员来说已知的各种因素，在X射线粉末衍射图中的峰的位置和相对强度可以略微偏移。例如，归因于所使用的设备、样品制备的方法、优选的包装和朝向、射线来源和数据收集的方法和长度，可能发生图的峰位置或峰的相对强度的偏移。然而，技术人员将能够将在本文中的附图中显示的X射线粉末衍射图与未知的固体形式的那些进行比较以确认固体形式的身份。

技术人员熟知用于测量XRPD图的技术。特别地，可以使用Philips X-Pert MPD衍射仪使用以下实验条件记录化合物的样品的X射线粉末衍射图：

管阳极：Cu；

发电机压力：40kV；

管电流：40mA；

波长α1：

波长α2：

样品：将2mg的被分析的样品轻轻地压在XRPD零背景单斜切二氧化硅样品支架上。

本发明提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式展现出在其DSC热图像中在151±3℃、优选151±2℃、更优选151±1℃处的吸热峰。

本发明提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式具有与图3所示的DSC热图像基本上相同的DSC热图像。

技术人员熟知用于测量DSC热图像的技术。特别地，可以通过以下方式记录化合物的样品的DSC热图像：

(a)将5mg的样品称重至铝DSC盘中并且用铝盖非气密地密封；

(b)将样品加载至Perkin-Elmer Jade DSC并且使样品维持在30℃，直到在使用20cm³/min氦吹扫时得到稳定的热流响应；

(c)以10℃/分钟的扫描速率将样品加热至200至300℃的温度并且监测在使用20cm³/分钟氦吹扫时的所得的热流响应。

本发明提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式具有如上所述的X射线粉末衍射图和如上所述的DSC热图像。

本发明还提供了包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，其中式A的化合物的固体形式具有与图6a所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图。

提及的特定化合物也包括所有同位素变体。

本文中所述的术语“固体形式”包括晶体形式。任选地，本发明的固体形式是晶体形式。

在一个实施方案中，式A的化合物的固体形式在固体口服剂型中的量为约0.1mg至约1,000mg、任选约1mg至约1,000mg、约5mg至约500mg、约8mg至约200mg或约10mg至约100mg。

基于口服固体剂型的总重量，式A的化合物的固体形式可以以约1重量％至约70重量％、任选约5重量％至约60重量％或约5重量％至约50重量％的量存在。

口服固体剂型可以包含粘合剂。当存在时，粘合剂可以包括以下中的一种或多种：甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮、共聚维酮、明胶、阿拉伯树胶、乙基纤维素、聚乙烯醇、淀粉、预胶化淀粉、琼脂、黄蓍胶和海藻酸钠。优选地，粘合剂是聚维酮。任选地，粘合剂是Kollidon K25(可从BASF Corporation获得的聚维酮制剂)。

式A的化合物与粘合剂的重量比可以为约1:0.01至约1:1、任选约1:0.03至约1:0.5或约1:0.05至约1:0.3。

基于口服固体剂型的总重量，粘合剂可以以约0.1重量％至约30重量％、任选约0.5重量％至约10重量％或约1重量％至约5重量％的量存在。

备选地或另外地，口服固体剂型可以包含稀释剂。稀释剂可以包含以下中的一种或多种：碳酸钙、磷酸氢钙、磷酸三钙、硫酸钙、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖赋形剂、果糖、高岭土、乳糖醇、乳糖、一水合乳糖、甘露醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、淀粉、预胶化淀粉和蔗糖。优选地，稀释剂是微晶纤维素。任选地，稀释剂是Avicel PH101和/或Avicel PH 102(这二者都是可从FMC Corporation获得的微晶纤维素赋形剂)。

式A的化合物的固体形式与稀释剂的重量比可以为约1:0.1至约1:500、任选约1:0.2至约1:100、约1:0.5至约1:50、约1:0.75至约1:20或约1:1至约1:5。

基于口服固体剂型的总重量，稀释剂可以以约1重量％至约99重量％、任选约10重量％至约70重量％、或约20重量％至约60重量％、或约40重量％至约60重量％的量存在。

备选地或另外地，口服固体剂型可以包含崩解剂。崩解剂可以包含以下中的一种或多种：羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、淀粉羟乙酸钠、硅酸镁铝、粉末状纤维素、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、波拉克林钾、淀粉、预胶化淀粉、海藻酸和海藻酸钠。优选地，崩解剂是交联羧甲基纤维素钠。任选地，崩解剂是AcDiSol(可从FMC Corporation获得的交联羧甲基纤维素钠制剂)。

式A的化合物的固体形式与崩解剂的重量比可以为约1:0.01至约1:1、任选约1:0.03至约1:0.5、约1:0.05至约1:0.3或约1:0.08至约1:0.16。

基于口服固体剂型的总重量，崩解剂可以以约0.1重量％至约50重量％、任选约0.5重量％至约30重量％、或约1重量％至约20重量％、或约1重量％至约10重量％的量存在。

备选地或另外地，口服固体剂型可以包含润滑剂。润滑剂可以包含以下中的一种或多种：硬脂酸镁、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、棕榈酰硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、氢化植物油、矿物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、十二烷基硫酸钠、硬脂酰富马酸钠、硬脂酸、滑石和硬脂酸锌。优选地，润滑剂是硬脂酸镁。

式A的化合物的固体形式与润滑剂的重量比可以为约1:0.001至约1:1、任选约1:0.005至约1:0.5、约1:0.0075至约1:0.2或约1:0.01至约1:0.1。

基于口服固体剂型的总重量，润滑剂可以以约0.1重量％至约10重量％、任选约0.2重量％至约5重量％或约0.5重量％至约2重量％的量存在。

备选地或另外地，口服固体剂型可以包含助流剂。助流剂可以包含以下中的一种或多种：滑石、胶体二氧化硅、三硅酸镁、粉末状纤维素、淀粉和磷酸三钙。

式A的化合物的固体形式与助流剂的重量比可以为约1:0.01至约1:1。

基于口服固体剂型的总重量，助流剂可以以约0.1重量％至约10重量％、任选约0.2重量％至约5重量％或约0.5重量％至约2重量％的量存在。

备选地或另外地，口服固体剂型可以包含酸。酸可以包含以下中的一种或多种：酒石酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。优选地，酸是酒石酸。备选地，酸可以是马来酸。

式A的化合物的固体形式与酸的重量比可以为约1:0.1至约1:2、任选约1:0.2至约1:1。

基于口服固体剂型的总重量，酸可以以约1重量％至约40重量％、任选约2重量％至约30重量％或约5重量％至约20重量％的量存在。

备选地或另外地，口服固体剂型可以包含表面活性剂。表面活性剂可以是离子表面活性剂或非离子表面活性剂。表面活性剂可以包含以下中的一种或多种：十二烷基硫酸钠、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40和聚山梨醇酯80。任选地，表面活性剂选自十二烷基硫酸钠和聚山梨醇酯80。任选地，表面活性剂是十二烷基硫酸钠。备选地，表面活性剂可以是聚山梨醇酯80。

式A的化合物的固体形式与表面活性剂的重量比可以为约1:0.01至约1:1、任选约1:0.03至约1:0.5或约1:0.05至约1:0.3。

基于口服固体剂型的总重量，表面活性剂可以以约1重量％至约20重量％、任选约0.5重量％至约10重量％或约1重量％至约5重量％的量存在。

口服固体剂型可以包含脂质赋形剂。脂质赋形剂可以包含以下中的一种或多种：蔗糖脂肪酸酯，诸如蔗糖硬脂酸酯、蔗糖棕榈酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖山嵛酸酯、蔗糖油酸酯、蔗糖芥酸酯等及其混合物；磷脂衍生物、磷脂酰基衍生物、糖基神经酰胺衍生物、脂肪酸衍生物、非离子表面活性剂、维生素E生育酚琥珀酸酯聚乙二醇衍生物(包括D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS))、单油酸甘油酯、

系列表面活性剂(其包括例如Gelucire 44/14、Gelucire 33/01和Gelucire 50/13)和甘油酯衍生物。任选地，脂质赋形剂是Gelucire 44/14和/或D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)。优选地，脂质赋形剂是D-α-生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)。备选地，脂质赋形剂是Gelucire 44/14。

脂质赋形剂的熔点可以大于约25℃、大于约30℃、大于约35℃或大于约40℃。任选地，脂质赋形剂的熔点可以大于约35℃。

脂质赋形剂的熔点可以小于约100℃、小于约70℃、小于约60℃或小于约50℃。任选地，脂质赋形剂的熔点可以小于约50℃。

式A的化合物的固体形式与脂质赋形剂的重量比可以为约1:0.1至约1:100。任选约1:0.5至约1:50、约1:1至约1:50或约1:1至约1:20。

基于口服固体剂型的总重量，脂质赋形剂可以以约10重量％至约99重量％、任选约50重量％至约95重量％或约60重量％至约90重量％的量存在。

本发明的口服固体剂型可以是胶囊的形式。胶囊壳可以由明胶、羟丙基甲基纤维素或淀粉制成。任选地，胶囊壳由明胶制成。任选地，胶囊壳由羟丙基甲基纤维素制成。

备选地，本发明的口服固体剂型可以是片剂的形式。

本发明的口服固体剂型可以包含包衣，其可以是膜的形式。包衣可以是肠溶包衣。肠溶包衣在胃的强酸性pH下不溶，但是在小肠的较小酸性条件下可溶。包衣可以具有约1mg/cm²至约10mg/cm²、任选约2mg/cm²至约8mg/cm²或约3mg/cm²至约7mg/cm²的质量/面积。

包衣可以具有约10mg至约100mg、任选约20mg至约80mg或约30mg至约70mg的质量。

0号剂型(任选地以胶囊的形式)的每表面积的包衣质量可以为约10mg至约100mg、任选约20mg至约80mg或约30mg至约70mg。

肠溶包衣可以包含肠溶聚合物，其可以包括以下中的一种或多种：虫胶、乙酸纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、偏苯三酸酯、聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯或基于甲基丙烯酸酯的聚合物诸如Eudragit L、Eudragit L100、Eudragit S、Eudragit S100、Eudragit L30D和Eudragit L30-D55。优选地，肠溶包衣是Eudragit L30-D55。

肠溶包衣还可以包含增塑剂。增塑剂可以包含以下中的一种或多种：柠檬酸三乙酯、酞酸二丁酯、聚乙二醇、丙二醇、酞酸二乙酯、乙酰基柠檬酸三乙酯。优选地，增塑剂是柠檬酸三乙酯。

本发明的口服固体剂型可以包含包裹在剂型核心周围的膜。合适的膜材料的实例包括HPMC、明胶和Eudragit聚合物。优选地，膜材料是HPMC。

本发明的口服固体剂型可以包含一种或多种另外的活性成分。

本发明还提供了一种制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将式A的化合物的固体形式与包含粘合剂和任选地稀释剂、崩解剂和/或表面活性剂的造粒液混合，所述式A的化合物的固体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5和16.3处的特征X射线粉末衍射峰(Cu Kα射线，以2θ度表示)；

(b)将步骤(a)的分散体造粒以形成颗粒；

(c)干燥颗粒；

(d)任选地将步骤(b)或(c)的颗粒与稀释剂、酸、表面活性剂和/或润滑剂掺合以形成掺合颗粒；和

(e)将所述颗粒或掺合颗粒压制或填充为固体口服剂型。

造粒液还可以包含水。

步骤(c)中的干燥可以在大于约45℃、优选大于约55℃的温度下进行。步骤(c)中的干燥可以在约45℃至约90℃、优选约50℃至约80℃的温度下进行。

在步骤(e)中，将颗粒或掺合颗粒压制成片剂形式的固体口服剂型。

(a)将式A的化合物的晶体形式分散在熔融脂质赋形剂中，所述式A的化合物的晶体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5和16.3处的特征X射线粉末衍射峰(CuKα射线，以2θ度表示)；和

(b)将熔融分散体加载到胶囊中。

本发明还提供了一种制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法，所述方法包括将胶囊用式A的化合物的晶体形式加载，所述式A的化合物的晶体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5和16.3处的特征X射线粉末衍射峰(Cu Kα射线，以2θ度表示)。

应当理解，本发明的方法所使用的组分(例如，粘合剂、稀释剂、崩解剂、表面活性剂、酸和脂质赋形剂)是与针对本发明的口服固体剂型所描述的相同的组分，并且针对这些组分所描述的任何定义和/或限定可以同样地应用于本发明的方法所使用的组分。

本发明还提供了可通过本发明的方法中的任一种获得的口服固体剂型。

本发明的口服固体剂型具有多种治疗应用，特别是在由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况的治疗中。

因此，本发明提供了包含1型的式A的化合物的口服固体剂型，其用于治疗。

本发明还提供了如本文所述的口服固体剂型，其用于治疗由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况的方法。

本发明还提供了一种治疗由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的哺乳动物施用如本文所述的口服固体剂型。

本发明还提供了如本文所述的口服固体剂型在制备用于治疗由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况的药物中的用途。

在一个方面，由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况选自受损的视敏度(impairedvisual acuity)、糖尿病性视网膜病(diabetic retinopathy)、与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性(retinal vascular permeability associated with diabeticretinopathy)、糖尿病性黄斑水肿(diabetic macular edema)、遗传性血管性水肿(hereditary angioedema)、视网膜血管阻塞(retinal vein occlusion)、糖尿病(diabetes)、胰腺炎(pancreatitis)、脑出血(cerebral haemorrhage)、肾病(nephropathy)、心肌病(cardiomyopathy)、神经病(neuropathy)、炎性肠病(inflammatorybowel disease)、关节炎(arthritis)、炎症(inflammation)、败血性休克(septic shock)、低血压(hypotension)、癌症(cancer)、成人呼吸窘迫综合征(adult respiratorydistress syndrome)、弥漫性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation)、心肺转流手术期间的血液凝固(blood coagulation during cardiopulmonary bypasssurgery)和外科手术后出血(bleeding from post-operative surgery)。在一个优选实施方案中，由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况是糖尿病性黄斑水肿。在另一个优选实施方案中，由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况是遗传性血管性水肿。

备选地，由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况可以选自与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性、糖尿病性黄斑水肿和遗传性血管性水肿。备选地，由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况可以是与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性或糖尿病性黄斑水肿。

在本发明的上下文中，本文中提及的“治疗”包括对治愈性、缓解性(palliative)和预防性治疗的提及，除非相反地存在具体指示。术语“治疗”、“治疗的”和“治疗地”应当以相同的方式解释。

本发明的口服固体剂型可以单独施用或者与一种或多种其他药物活性剂组合施用。在这方面，口服固体剂型还可以包含另一种药物活性成分。备选地，本发明的口服剂型可以与一种或多种并有其他药物活性剂的其他分开的剂型(同时地、连续地或顺序地)共同施用。

在另一个方面，本发明的口服固体剂型可以与视网膜激光治疗组合施用。

对于人类患者的施用，式A的化合物的总日剂量典型地在约0.1mg至约10,000mg、或约1mg至约5000mg、或约10mg至约1000mg的范围中，这当然取决于施用模式。

总日剂量可以以单个或分开的剂量施用，并且根据医师判断可以落在本文给出的典型范围之外。这些剂量基于体重为约60kg至70kg的普通人类受试者。医师将能够容易地确定体重不在此范围内的受试者(诸如婴儿和老人)的剂量。

本发明的口服固体剂型旨在口服施用。口服施用可以包括吞咽，以使化合物进入肠胃道，和/或经颊、经舌或舌下施用，化合物由此从口腔直接进入血流。

现在将通过以下非限制性实施例来说明本发明。在实施例中，提供以下附图：

图1a：式A的化合物的1型的X射线粉末衍射图(实施例1)。

图1b：式A的化合物的1型的X射线粉末衍射图(实施例2)。

图1c：式A的化合物的1型的X射线粉末衍射图(实施例3)。

图2：式A的化合物的1型的STA(实施例1)。

图3：式A的化合物的1型的DSC热图像(实施例1)。

图4：式A的化合物的1型的重量法蒸气吸附等温线(吸附和解吸)(实施例1)。

图5：在1型与90:10IPA:水的浆液之后的式A的化合物的X射线粉末衍射图(上)。下面的X射线粉末衍射图是作为参考的1型的X射线粉末衍射图(实施例1)。

图6a：式A的化合物的3型的X射线粉末衍射图(实施例4a)。

图6b：式A的化合物的5型的X射线粉末衍射图(实施例4c)。

图6c：式A的化合物的5型的DSC热图像(实施例4c)。

图6d：式A的化合物的5型的粒度分布。

图6e：式A的化合物的5型的重量法蒸气吸附等温线(吸附和解吸)(实施例4c)。

图7：在25℃/60％RH稳定性研究期间，在第0天(上)、1个月(中)和3个月(下)时的式A的化合物的1型的X射线粉末衍射图。

图8：在40℃/75％RH稳定性研究期间，在第0天(上)、1个月(中)和3个月(下)时的式A的化合物的1型的X射线粉末衍射图。

图9：最初以及在25℃和40℃储存后，TPGS填充胶囊在0.1M HCl和pH 3缓冲剂中的溶出曲线。

图10：最初以及在25℃和40℃储存后，Gelucire 44/14填充胶囊在0.1M HCl和pH3缓冲剂中的溶出曲线。

一般实验细节

在以下实施例中，使用以下缩写和定义：

除非另外说明，所有反应都在氮气气氛下进行。

在Bruker(400MHz)或JEOL(400MHz)光谱仪上参照氘溶剂并且在室温记录¹H NMR谱。

使用LCMS(其使用Chromolith Speedrod RP-18e柱，50x 4.6mm进行，在13分钟内利用在0.1％HCO₂H/H₂O中的10％至90％0.1％HCO₂H/MeCN线性梯度，流速1.5mL/min)或使用Agilent，X-Select，酸性，5-95％MeCN/水(在4分钟内)获得分子离子。使用与Thermofinnigan Surveyor LC系统结合的具有电喷离子化的Thermofinnigan SurveyorMSQ质谱仪收集数据。

备选地，使用LCMS获得分子离子，所述LCMS使用Agilent Poroshell 120EC-C18(2.7μm，3.0x 50mm)柱，利用在水中的0.1％v/v甲酸[洗脱剂A]；MeCN[洗脱剂B]；流速0.8mL/min和1.5分钟的样品间平衡时间、以下所示的梯度进行。质量检测使用API 2000质谱仪(电喷雾)提供。

梯度：

时间(min)	洗脱剂A(％)	洗脱剂B(％)
			0.00	95	5
0.20	95	5
			2.00	5	95
3.00	5	95
			3.25	95	5
3.50	95	5

在产物通过快速色谱法纯化的情况下，“二氧化硅(silica)”是指用于色谱法的硅胶，0.035至0.070mm(220至440目)(例如Merck硅胶60)，并且施加的氮气压力直至10p.s.i加速柱洗脱。反相制备型HPLC纯化使用Waters 2525二元梯度泵送系统以典型地20mL/min流速利用Waters 2996光电二极管阵列检测器进行。

所有溶剂和商购试剂以原样使用。

使用自动化软件诸如作为来自MDL Information Systems的ISIS Draw软件包的一部分提供的Autonom软件或作为MarvinSketch的组件或作为IDBS E-WorkBook的组件提供的Chemaxon软件生成化学名称。

除非另外指定，X射线粉末衍射图在Philips X-Pert MPD衍射仪上收集并且使用以下实验条件分析(方法A)：

管阳极：Cu

发电机压力：40kV

管电流：40mA

波长α1：

波长α2：

开始角度[2θ]：4

结束角度[2θ]：40

连续扫描

将大约2mg的被分析的样品轻轻地压在XRPD零背景单斜切二氧化硅样品支架上。然后将样品加载至衍射仪中用于分析。

在指定的情况下，X射线粉末衍射图使用以下方法(方法B)收集：

使用以Bragg-Brentano配置的Bruker AXS D2 PHASER(D2-205355)(设备#2353)进行X射线粉末衍射研究。使用在30kV、10mA下的Cu阳极，具有光束截捕器的样品台标准旋转(5/min)，以及通过Kβ-滤波器(0.59％Ni)的单色化。所使用的狭缝是1.0mm(＝0.61°)固定发散狭缝，2.5°一级轴向Soller狭缝和2.5°二级轴向Soller狭缝。检测器是具有接收狭缝5°检测器开口的线性检测器LYNXEYE。标准样品支架(在(51O)硅晶片中的0.1mm空腔)对背景信号的贡献最小。测量条件：扫描范围5-45°2θ，样品旋转5rpm，0.5s/步，0.010°/步，3.0mm检测器狭缝；并且所有测量条件记录在仪器控制文件中。用于数据收集的软件是Diffrac.Commander v4.0。使用Diffrac.Eva V4.1评价软件进行数据分析。并未将背景校正或平滑化应用于图中。

DSC数据使用以下方法收集：将大约5mg的每种样品称重至铝DSC盘中并且用铝盖非气密地密封。然后将样品加载至Perkin-Elmer Jade DSC中并且保持于30℃。一旦获得稳定的热流响应，则以10℃/min的扫描速率将样品加热至200至300℃的温度并且监测所得的热流响应。使用20cm³/min氦气吹扫。在分析之前，使用铟标准品确认仪器的温度和热流。

重量法蒸气吸附(GVS)数据使用以下方法收集：将大约10mg的样品放入丝网蒸气吸附天平盘中并且加载至“IgaSorp”蒸气吸附天平(Hiden Analytical Instruments)中。然后通过维持0％湿度环境将样品干燥，直到没有记录到进一步重量变化。随后，以10％RH增量使样品经历0-90％RH的增长曲线(ramping profile)，在每一步下维持样品直到达到平衡(99％步骤完成)。在达到平衡时，装置内的％RH增长到下一步并且重复平衡程序。在吸附循环完成后，则使用相同的程序干燥样品。然后监测在吸附/解吸循环期间的重量变化，以允许确定样品的吸湿性质。

同步热分析(STA)数据使用以下方法收集：将大约5mg的样品准确地称重至陶瓷坩埚中并且在环境温度下将其放入Perkin-Elmer STA 600TGA/DTA分析仪的腔室中。然后以10℃/min的速率加热样品，通常从25℃加热至300℃，在此期间监测重量的变化以及DTA信号。所使用的吹扫气体是流速为20cm³/min的氮气。

I.式A的化合物的1型的制备

A.1-(4-羟基甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮

将4-(氯甲基)苄醇(5.0g，31.93mmol)溶解在丙酮(150mL)中。加入2-羟基吡啶(3.64g，38.3mmol)和碳酸钾(13.24g，95.78mmol)，并且将反应混合物在50℃搅拌3小时，之后将溶剂在真空中移除并且将残余物溶解在氯仿(100mL)中。将该溶液用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，并且在真空中蒸发。将残余物通过快速色谱法(二氧化硅)纯化，洗脱剂3％MeOH/97％CHCl₃，得到白色固体，其被鉴定为1-(4-羟基甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(5.30g，24.62mmol，77％收率)。

[M+Na]⁺＝238

B.1-(4-氯甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮

将1-(4-羟基甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(8.45g，39.3mmol)、无水DCM(80mL)和三乙胺(7.66ml，55.0mmol)在冰浴中冷却。加入甲磺酰氯(3.95ml，51.0mmol)，并且在冰浴中搅拌15分钟。移除冰浴并且在室温继续搅拌过夜。将反应混合物在DCM(100mL)和饱和NH₄Cl水溶液(100mL)之间分配。将水层进一步用DCM(2x 50mL)萃取，并且将合并的有机物用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并且浓缩，得到1-(4-氯甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(8.65g，36.6mmol，93％收率)，为淡黄色固体。

[MH]⁺＝234.1

C.3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯

将碳酸钾(519mg，3.76mmol)添加到3-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(320mg，1.88mmol；CAS编号318496-66-1(按照WO 2012/009009中描述的方法合成))和1-(4-(氯甲基)苄基)吡啶-2(1H)-酮(527mg，2.26mmol)在DMF(5mL)中的溶液中，并且在60℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并且用盐水(2x 100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并且在真空中还原。将粗产物通过快速色谱法(40g柱，异己烷中的0-100％EtOAc)，得到两种区域异构体。收集离开柱的第二种异构体，得到3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(378mg，1.01mmol，53.7％收率)，为无色胶状物。

[MH]⁺＝368.2

D.3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸

向在THF(5mL)和MeOH(5mL)中的3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(3.77g，10.26mmol)中加入2M NaOH溶液(15.39ml，30.8mmol)，并且在室温搅拌过夜。加入1M HCl(50mL)，并且用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并且在真空中还原，得到3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(1.22g，3.45mmol，33.6％收率)，为白色粉末。

[MH]⁺＝354.2

E.3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-甲腈

向大的微波小瓶中，将氰化铜(I)(1.304g，14.56mmol)添加到2-溴-3-氟-4-甲氧基吡啶(1g，4.85mmol)在DMF(5mL)中的溶液中。将反应小瓶密封并且加热至100℃达16小时。将反应混合物用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。对粘稠悬浮液进行超声处理并且需要额外的水(40mL)和EtOAc(2x 50mL)，利用超声处理破碎沉淀的固体。将合并的层通过硅藻土塞过滤并且将有机层分离，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并且将溶剂在减压下移除，得到淡绿色固体，其被鉴定为所需化合物3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-甲腈(100mg，0.578mmol，12％收率)。

F.(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯

将3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-甲腈(100mg，0.578mmol)溶解在无水甲醇(10ml，247mmol)中，并且加入六水合氯化镍(14mg，0.058mmol)，随后加入二碳酸二叔丁酯(255mg，1.157mmol)。将所得淡绿色溶液在冰盐浴中冷却至-5℃，然后逐份加入硼氢化钠(153mg，4.05mmol)，将反应温度保持在～0℃。将深褐色溶液在0℃搅拌，并且使其缓慢温热至室温，然后在室温搅拌3小时。将反应混合物在40℃蒸发至干燥，得到黑色残余物，将其用DCM(10mL)稀释并且用碳酸氢钠(10mL)洗涤。形成乳液，然后有机物经由相分离柱分离并且浓缩。将粗制液体通过色谱法纯化，用EtOAc/异己烷洗脱，得到标题化合物(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯，为澄清黄色油状物(108mg，62％收率)。

[MH]⁺＝257

G.C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐

将(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(108mg，0.358mmol)吸收在异丙醇(1mL)中，然后在室温加入HCl(6N，在异丙醇中)(1ml，0.578mmol)，并且在40℃搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，然后用醚研磨，进行超声处理，然后倾析，得到奶油色固体，其被鉴定为C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐(75mg，55％收率)。

[MH]⁺＝157

实施例1-N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(1型)

在冷却至0℃的同时将3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(825mg，2.34mmol)和C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐(450mg，2.34mmol)溶解在DCM中。在搅拌的同时加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(627.0mg，3.27mmol)、HOBt(378.8mg，2.80mmol)和三乙胺(1.63ml，1182mmol)，使混合物温热至室温并且继续搅拌20小时。加入氯仿(50mL)，将混合物用饱和NaHCO₃(aq)洗涤并且在真空中还原。将粗制物料通过色谱法纯化，用甲醇/DCM洗脱。将溶剂在真空中移除，并且将所得固体用二乙醚研磨。通过过滤收集所得固体，得到标题化合物。

[MH]⁺＝492.0

NMR(CD₃OD)δ:3.41(3H,s),4.03(3H,s),4.65(2H,s),4.72(2H,d,J＝2.3Hz),5.24(2H,s),5.37(2H,s),6.44(1H,td,J＝1.4,6.8Hz),6.62(1H,d,J＝9.0Hz),7.18-7.22(1H,m),7.31-7.38(4H,m),7.56-7.60(1H,m),7.75(1H,dd,J＝1.9,7.1Hz),8.18(1H,s),8.27(1H,d,J＝5.6Hz)ppm。

式A的化合物(1型)的XRPD衍射图在图1a中显示。

峰位置表：

同步热分析(STA)

1型的STA数据在图2中显示。

差示扫描量热法(DSC)

1型的DSC数据在图3中显示。

重量法蒸气吸附(GVS)

1型的GVS数据在下表中列出并且在图4中显示。

浆液研究

将1型(20mg)悬浮于90/10IPA/水(200μL或300μL)中并且在环境温度下振荡72小时。由于体积小，将上清液蒸发而不是过滤，并且通过XRPD检验所得固体(图5)。所得XRPD(图5)与图1a的XRPD不同，这表明游离碱可能具有形成一种或多种水合物的倾向。

可见水溶性

将1型(10mg)称重至玻璃小瓶中并且以100μL逐份加入水直至3mL，之后以1mL逐份加入。在短暂的平衡期后，对溶解性进行目视评估。

1型根本并未提供任何迹象表明其溶解于20mL水中(<<0.5mg/mL)。

实施例2-N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(1型)

在冷却至0℃的同时将3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(825mg，2.34mmol)和C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐(450mg，2.34mmol)溶解在DCM中。在搅拌的同时加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(627.0mg，3.27mmol)、HOBt(378.8mg，2.80mmol)和三乙胺(1.63ml，1182mmol)，使混合物温热至室温并且继续搅拌20小时。加入氯仿(50mL)，将混合物用饱和NaHCO₃(aq)洗涤并且在真空中还原。将粗制物料通过色谱法纯化，用甲醇/DCM洗脱。将所得固体溶解在热MeCN中，使其冷却并且沉淀，并且通过过滤收集所得固体，得到标题化合物，为白色固体(130mg，11％收率)。

式A的化合物(1型)的XRPD衍射图(使用方法B记录)在图1b中显示。分离的固体的XRPD衍射图(图1b)确认它们具有与1型(实施例1)(图1a)相同的固体形式。

峰位置表：

实施例3-N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(1型)

将3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(61g，0.173mol)溶解在DMF(400mL)中，并且逐份加入1,1’-羰二咪唑(27.99g，0.173mol)。一旦加入完成，则将反应加热至50℃达2小时。将C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺(26.95g，0.173mol)逐份添加到反应混合物中。将反应加热至50℃过夜。将反应冷却至室温并且逐滴添加到水和饱和NaHCO₃(aq)的3:1混合物(4000mL)中。将所得悬浮液搅拌30min，之后通过过滤分离固体。将固体用水(2x500 mL)洗涤，之后在真空烘箱中干燥，得到119g的粗产物。将粗产物与两个其他单独批次(分别以0.173mol和0.0874mol的酸起始材料开始)合并，并且在IPA(1400mL)中一起浆化，并且加热至回流。加入额外部分的IPA，直到全部材料在回流下溶解(总计加入2000mL IPA)。将溶液在回流下保持30min，之后将其冷却至室温。将混合物用冰/水浴进一步冷却30min，之后通过过滤收集产物。将固体用IPA洗涤并且干燥，得到167.2g的标题产物(78.5％收率)。

[MH]⁺＝491.9

NMR(CD₃OD)谱与A型的NMR谱相符合。

分离的固体的XRPD衍射图(使用方法B记录)(图1c)确认它们具有与1型(实施例1和实施例2)(图1a和1b)相同的固体形式。

峰位置表：

稳定性数据

将1型的样品包装于两个聚乙烯袋中并且密封在HDPE瓶中，并且在25℃/60％RH的条件下储存。在1个月和3个月之后通过XRPD(使用方法B)重新分析样品。数据在图7中显示。当将样品在25℃/60％RH下储存1个月或3个月时，没有观察到XRPD衍射图的变化。

如在表1中描述的，对在25℃/60％RH下储存的1型的样品进行进一步测试：

表1

将1型的第二个样品包装于两个聚乙烯袋中并且密封在HDPE瓶中，并且在40℃/75％RH的加速稳定性条件下储存。在1个月和3个月之后通过XRPD(使用方法B)重新分析样品。数据在图8中显示。当将样品在40℃/75％RH下储存1个月或3个月时，没有观察到XRPD衍射图的变化。

如在表2中描述的，对在40℃/75％RH下储存的1型的样品进行进一步测试：

表2

实施例4A-N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(3型)

通过2天的温度循环使N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(30mg)在50/50甲醇/水(100μL)中的悬浮液老化。将所得固体分离，得到N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(3型)。

N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(3型)的XRPD衍射图在图6a中显示。

峰位置表：

实施例4B-N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(5型)

通过24小时的从20℃到50℃的温度循环使N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(500mg)在50/50甲醇/水(2.5mL)中的悬浮液老化。将所得固体分离，得到N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(5型)。

实施例4C-N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(5型)

制备N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(500mg)在50/50甲醇/水(20mL)中的溶液。将溶液在真空下蒸发至干燥，得到N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(5型)。

由实施例4C获得的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺(5型)的XRPD衍射图在图6b中显示。该XRPD衍射图使用上述方法B获得。

最显著的峰的峰位置表：

编号	位置[°2θ]	相对强度[％]

1	8.53	11.56
			2	9.38	100
3	11.29	3.80
			4	12.19	10.37
5	12.81	16.63
			6	14.08	23.24
7	16.60	5.03
			8	16.98	5.91
9	18.27	5.82
			10	18.91	2.87
11	21.06	3.45
			12	21.25	5.03
13	22.25	2.80
			14	23.59	2.73
15	25.63	7.35
			16	27.58	3.03

5型比1型、2型或3型更不稳定，并且其随着时间推移转化为多晶型3型。在5型上进行XRPD测量得到3型。

差示扫描量热法(DSC)

利用配备有自动进样器的Mettler Toledo TGA/DSC1 Stare系统(设备#1547)使用40μl针孔式Al坩埚进行TGA/DSC研究。测量条件：5min30.0℃，30.0-350.0℃，10℃/min.，40ml/min的N2流量。用于仪器控制和数据分析的软件是STARe v12.10。5型的TGA/DSC数据在图6c中显示。

粒度分布

使用Malvern Instruments Mastersizer(设备#1712)进行粒度分布研究。Mastersizer使用0.05μm-900mm的300RF透镜范围。多分散用作分析模型。在每次样品测量之前进行背景测量，背景扫描时间为12秒(12000次快照)。将每个样品分散在Multipar G中，折射率为1.42。样品分散的模糊范围为10％至30％。在t＝0和t＝30分钟时对每个样品进行6次测量，并且测量扫描时间为10秒(10000次快照)。样品分散单元的目标搅拌速度为2000±10rpm。使用Mastersizer S 2.19版软件进行数据收集和评价。多晶型5型的所得粒度分布分析在图6d中显示。

重量法蒸气吸附

5型具有吸湿性，质量吸收率为23％，如通过重量法蒸气吸附(GVS)研究确定的。使用Surface Measurement Systems Ltd.DVS-1No Video(设备#2126)进行GVS研究。将样品加载到天平盘中，通常为20-30mg，并且在0％RH下平衡。材料干燥后，RH以10％/步递增，每个增量持续1小时，以95％RH结束。吸附循环完成后，使用相同的方法干燥样品。用于数据收集的软件是DVSWin v3.01 No Video。使用DVS标准分析套件v6.3.0(标准)进行数据分析。所得GVS在图6e中显示。

5型的数据总结在下表中。

II.来自式A的化合物的1型的口服固体剂型的制备

实施例5A(胶囊中的式A的化合物的1型)

使如在实施例3中制备的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺的1型通过1.0mm筛网。然后，将100mg的所得粉末称重至0号明胶胶囊中，并且将胶囊闭合。

如下测定粉末的流动和密度特性和粒度分布，所述粉末通过使如在实施例3中制备的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺的1型通过1.0mm筛网制备。表征期间的湿度范围为42-65％。

1型粉末的流动和密度表征

根据USP[616]2012使用振实密度装置一式两份地测定API的密度(振实密度和体积密度)。卡氏指数(Carr’s Index)和豪斯纳比(Hausner ratio)值由按照USP[1174]2010记录的振实密度和体积密度图计算。

由体积密度、振实密度、卡氏指数和豪斯纳比的一式两份测量和计算获得的平均结果总结在表3中。

表3

小于1.25的豪斯纳比和5至15％的卡氏指数值表明良好/优异的流动性质(M.E.Aulton,Aulton’s pharmaceutics the design and manufacture of medicines(Aulton药剂学，药物设计和制备)，第3版，Churchill Livingstone Elsevier,Hungary,2007,p356)。基于卡氏指数和豪斯纳比，表3中的1型的结果表明流动特性较差。

使用“通过孔装置的流动”(25mm和10mm，一式两份)，一式两份地进行粉末的粉末流动(克/秒)的测定，所述粉末通过使如在实施例3中制备的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺的1型通过1.0mm筛网来制备。首先在不进行流量计搅拌的情况下进行测量。如果没有出现流动，则在用钢刮刀轻轻地且反复地轻敲流量计(每次使用一致的强度)的情况下重复测试。对于通过25mm和10mm孔的粉末流动所获得的结果在表4中显示。

表4

*DNF＝不流动

式A的化合物的1型的粉末在不进行轻敲的情况下不会流过25mm或10mm孔，并且在进行轻敲的情况下仅流过前者，证实了针对卡氏指数和豪斯纳比所获得的结果(表3)。即使湿度相对较高，式A的化合物的1型的粉末也粘在刮刀和筛网上。该特性可以受到湿度条件影响。

针对式A的化合物的1型所测量的体积密度值较低，这意味着使用简单的粉末掺合物(直接囊封或压制为片剂)难以获得高剂量，因为确保充分流动所需要的赋形剂的可用体积将受到限制(在适合的剂量大小的约束内)。

粒度分布(PSD)

通过使用振幅设定为1mm的摇筛机进行筛析达5分钟，一式两份地测定粉末的粒度分布，所述粉末通过使如在实施例3中制备的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺的1型通过1.0mm筛网制备。所使用的筛网尺寸为1mm、710μm、500μm、355μm、250μm、125μm、63μm和盘。

粒度测定所获得的结果在表5中显示。

表5

截留于较大孔径的筛孔中的材料似乎为软的团聚物。在式A的化合物的1型的粉末已经通过1.0mm筛孔筛选后材料截留于1.0mm筛孔的事实支持该观察结果，并且暗示式A的化合物的1型的粉末自发地团聚。1型中的大多数截留在125和250μm筛网上。

实施例5B(胶囊中的式A的化合物的1型)

使如在实施例3中制备的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺的1型通过1.0mm筛网。然后，将10mg的所得粉末称重至0号明胶胶囊中，并且将胶囊闭合。

实施例6-式A的化合物的1型的TPGS制剂

使如在实施例3中制备的N-[(3-氟-4-甲氧基吡啶-2-基)甲基]-3-(甲氧基甲基)-1-({4-[(2-氧代吡啶-1-基)甲基]苯基}甲基)吡唑-4-甲酰胺的1型通过1.0mm筛网。

使用水浴将生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)(172g)加热至65℃，然后在使用Silverson混合器进行混合的情况下将式A的化合物的1型(28g)添加到熔融TPGS中(在26分钟内添加1型，再混合4分钟，Silverson混合器设定为5400RPM)。将混合物的温度调节至55℃以进行囊封。使用Gilson移液管(设定为710μL)吸取混合物的等分试样，将其分配到0号明胶胶囊中，并且使其冷却至室温。

TPGS中的式A的化合物的1型的药物载量为14.0％(w/w)，并且胶囊中的混合物的填充重量为719.0mg。胶囊中的式A的化合物的1型的剂量为100.7mg。

最初以及在25℃和40℃储存后，所得胶囊在0.1M HCl和pH 3缓冲剂中的溶解测试的结果在图9中显示。

根据Ph.Eur.2.9.3，利用Distek溶解装置，使用0.1M HCl或pH 3柠檬酸-磷酸盐缓冲剂的溶解介质进行溶解测试。在37℃以50rpm的桨速度进行溶解。样品(2mL)通过4μm套管过滤器收集，并且通过0.2μm PVDF注射器式滤器处理到UPLC小瓶中，以进行脱机分析。使用1.5μL样品注射液在Waters CSH C18，2.1x 75mm，1.7μm柱上利用UV检测和2.5分钟内的乙腈:水梯度进行UPLC分析。

实施例7-式A的化合物的1型的Gelucire 44/14制剂

使用水浴将Gelucire 44/14(172g)加热至65℃，然后在使用Silverson混合器进行混合的情况下将式A的化合物的1型(28g)添加到熔融Gelucire 44/14中(在17分钟内添加1型，再混合5分钟，Silverson混合器设定为5400RPM)。将混合物的温度调节至55℃以进行囊封。使用Gilson移液管(设定为710μL)吸取混合物的等分试样，将其分配到0号明胶胶囊中，并且使其冷却至室温。

Gelucire 44/14中的式A的化合物的1型的药物载量为14.0％(w/w)，并且胶囊中的混合物的填充重量为713.0mg。胶囊中的式A的化合物的1型的剂量为99.8mg。

最初以及在25℃和40℃储存后，所得胶囊在0.1M HCl和pH 3缓冲剂中的溶解测试的结果在图10中显示。

实施例8-式A的化合物的1型的TPGS制剂(HPMC胶囊)

使用水浴将生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)(172g)加热至78.4℃，然后将式A的化合物的1型(28g)添加到熔融TPGS中(在26分钟内添加1型，再混合4分钟，Silverson混合器设定为5400RPM)。将混合物的温度调节至55℃，然后经历高剪切均化(174min@1200RPM，然后230min@2600RPM)。使用Gilson移液管(设定为710μL)吸取混合物的等分试样，将其分配到0号HPMC胶囊中，并且使其冷却至室温。

TPGS中的式A的化合物的1型的药物载量为14.0％(w/w)，并且胶囊中的混合物的填充重量为717.8mg。胶囊中的式A的化合物的1型的剂量为100.5mg。

实施例9-式A的化合物的片剂制剂

使用表6和表7中描述的量，根据以下方法制备四种颗粒制剂(称为WG_A、WG_B、WG_C和WG_D)：

通过将根据表6的组分添加到混合容器(对于WG_A为250g，并且对于WG_B、WG_C和WG_D为200g)中来制备初级造粒液。使用磁性搅拌子或顶置式搅拌器搅拌初级造粒液直至均匀。

对于各子批次，将式A的化合物的1型、Avicel PH101和AcDiSol添加到Multipro高剪切掺合器中并且高速掺合5分钟。在继续高速掺合的同时，在另一个5分钟时程内将初级造粒液倒入混合物中。如果材料粘在Multipro高剪切掺合器的侧面，则中断进程，并且在重新开始混合和流体添加之前将材料从容器刮下。

在添加初级造粒液结束时，将湿颗粒再混合一分钟。然后在另一个5分钟时程内缓慢添加二级造粒液并且混合。

使所得湿颗粒通过4.0mm筛孔。然后将湿颗粒置于不锈钢托盘中，并且在规定温度下在烘箱中干燥过夜。然后使干燥颗粒通过1mm筛孔，并且在环境条件下静置2小时以平衡。分离颗粒制剂WG_A、WG_B、WG_C和WG_D。

表6–造粒液制剂

表7–颗粒制剂

对所得WG_A、WG_B、WG_C和WG_D颗粒进行表征，并且结果在表8中显示。下面描述用于测量每一个参数的方法。

利用Sartorius水分天平使用5g颗粒样品在105℃测定颗粒的LOD。

根据USP[616]2012使用振实密度装置一式两份地测定颗粒的密度(振实密度和体积密度)。卡氏指数和豪斯纳比值由按照USP[1174]2010记录的振实密度和体积密度图计算。

使用“通过孔装置的流动”(25mm和10mm，一式两份)，一式两份地进行颗粒的粉末流动(克/秒)的测定。首先在不进行流量计搅拌的情况下进行测量。如果没有出现流动，则在用钢刮刀轻轻地且反复地轻敲流量计(每次使用一致的强度)的情况下重复测试。

通过使用振幅设定为1mm的摇筛机进行筛析达5分钟，一式两份地测定颗粒的粒度分布。所使用的筛网尺寸为1mm、710μm、500μm、355μm、250μm、125μm、63μm和盘。

表8–颗粒表征数据

物理表征数据显示所有批次的颗粒都是干燥的(即<3.5％w/w)，具有良好的流动性质-卡氏指数和豪斯纳比的值二者都较低，并且即使在10mm下通过孔的质量流量相当大。与在40℃干燥的颗粒相比，在60℃的温度下干燥颗粒降低了颗粒的水含量。颗粒是致密的(体积密度>0.4g/mL)并且是粒状的(在筛析期间大部分材料截留在250和355μm筛孔上)，因此适合于压片。

使用表9中描述的量，根据以下方法制备八种压片制剂(称为T1至T5、T1A、T2A和T5A，每种为95g)：

将所需量的颗粒和颗粒外赋形剂中的每一种(除硬脂酸镁以外)分配到ErwekaAR401掺合器的掺合容器中。将混合物以15RPM掺合15分钟。将硬脂酸镁添加到掺合容器中，并且将混合物以15RPM再掺合5分钟。

表9–片剂制剂

然后根据以下方法将每种所得混合物压制成片剂：

使用Manesty F3压机压制片剂。在不具有加工工具的情况下将压机设定为60TPM，然后用直径为8.3mm的圆形正常凹面加工工具进行设定，并且过载设定为11kN。设定压机以产生目标重量为300mg的片剂，以避免弹簧过载。将凸轮设定值调整为表10中显示的设定值。

对于每种片剂制剂制备250片。在压片过程开始、中期和结束时，测量5个单位的厚度、重量及硬度。

片剂制剂T1-T5、T1A、T2A和T5A的物理表征数据在表10中显示。

表10中的数据使用以下标准程序生成：

硬度：Ph.Eur.2.9.8

脆度：Ph.Eur.2.9.7

崩解：Ph.Eur.2.9.1

在表11中将在25℃和40℃储存4周后的片剂制剂的物理稳定性与初始数据(表10)进行比较。制剂T1、T4和T5从初始很少或没有经历变化。

表11–4周储存之前和之后片剂批次的物理特性的比较

*指示第一个片剂和最后一个片剂从各时间点所测试的n＝3的崩解的时间。初始时间点的崩解时间取压片开始和压片结束时的片剂的平均值。

剂型的含量均匀性使用以下标准程序测定：Eur.Ph.2.9.40(计量单位的均匀性)。结果在表12中显示。

表12–含量均匀性

实施例10

选择片剂制剂T1A、T2A和T5A进行肠溶包衣。

T1A、T2A和T5A片剂的包衣和物理测试在受控温度范围和1.2克/分钟的平均喷洒速率下使用Aeromatic Strea-1流化床干燥器进行以实现大约50mg包衣的最终重量增加。

包衣材料是被Plasacryl HTP20塑化的Eudragit L30-D55的水性悬浮液(33％的含有柠檬酸三乙酯(TEC)的干燥聚合物物质作为增塑剂并且单硬脂酸甘油酯作为抗粘剂)。组分由Evonik制造。

使用表13中描述的量制备包衣制剂。在顶置式搅拌下将Eudragit L30-D55添加到去离子水中。在搅拌下缓慢添加Plasacryl HTP20，注意不要使液体充气。将混合物再搅拌至少10分钟，直到混合物是均匀的。使悬浮液通过500μm筛孔。

使用表14中描述的参数利用Aeromatic Strea-1流化床干燥器向T1A、T2A和T5A片剂喷涂包衣制剂以产生包衣片剂CT1A、CT2A和CT5A。

表13–包衣制剂

表14

在崩解/溶解测试的两个阶段中，肠溶包衣必须满足以下标准(基于Ph.Eur.2.9.1)：

1.pH 3柠檬酸盐缓冲剂：(a)在2小时内剂型不崩解，并且(b)在2小时内在溶剂测试期间的API释放<10％。

2.pH 6磷酸盐缓冲剂：剂型应在一小时内崩解。

根据Ph.Eur.2.9.3，利用Distek溶解装置，使用pH 3柠檬酸-磷酸盐缓冲剂的溶解介质进行溶解测试。在37℃以50rpm的桨速度进行溶解。样品(2mL)通过4μm套管过滤器收集，并且通过0.2μm PVDF注射器式滤器处理到UPLC小瓶中，以进行脱机分析。使用1.5μL样品注射液在Waters CSH C18，2.1x 75mm，1.7μm柱上利用UV检测和2.5分钟内的乙腈:水梯度进行UPLC分析。

表15

CT1A

所涂覆的包衣重量(48.6mg)接近目标值(49.5mg)，并且显而易见的是包衣中没有缺陷。这些片剂通过pH 3测试(在2小时内未破裂)和pH 6测试(其中在19分钟内完成崩解)。测试六个片剂在pH 3中的溶解，但是在六小时内未检测到溶解的API。因此，这些片剂通过2小时内溶解<10％的规定。

CT2A

所涂覆的包衣重量(47.1mg)接近目标值(49.5mg)，并且显而易见的是包衣中没有缺陷。这些片剂通过pH 3测试(在2小时内未破裂)。然而，六个片剂中的三个并未通过pH 6测试(即崩解时间>1小时)，其余三个片剂的崩解显著慢于CT1A。虽然功能性包衣在pH 6中在23-24分钟时已明显完全崩解，但是在测试1小时后仍存在核心的大碎片。应注意，预包衣核心的崩解在所有崩解介质中均是非常快的，因此包衣一定会导致核心在pH 6中的缓慢崩解。

对于片剂核心的过慢崩解的最可能的解释为肠溶聚合物在包衣期间或在崩解测试期间穿入核心，并且由于酒石酸的存在而被中和。在其中性形式下，聚合物是不可溶的并且可以充当粘合剂以防止核心崩解。

CT5A

所涂覆的包衣重量(49.0mg)接近目标值(49.5mg)，并且显而易见的是包衣中没有缺陷。这些片剂通过pH 3测试(在2小时内未破裂)和pH 6测试(其中在31-40分钟内完成崩解)。测试六个片剂在pH3中的溶解，但是在六小时内未检测到溶解的API。因此，这些片剂通过2小时内API溶解<10％的规定。

实施例11-包衣TPGS胶囊

使用HPMC 606乙醇/水溶液将实施例6的胶囊手动捆绑，随后在Caleva微型包衣机中用Eudragit L30-55的水性分散体进行包衣以实现5.5mg/cm²聚合物重量增加。将胶囊分两批进行包衣，每批14个胶囊。表16中提供了包衣溶液组成。

首先，将柠檬酸三乙酯与水以高剪切速度预混合10分钟，然后将Eudragit悬浮液添加到溶液中并且使用Heidolph混合器轻轻地混合。在使用之前使混合物通过0.5mm筛网并且在包衣期间继续搅拌。表17中提供了包衣参数。

表16-Eudragit L30-55包衣溶液的组成

表17–肠溶包衣参数

批次大小	14个0号胶囊
		搅拌器(Hz)	12.2
风扇转速(m/s)	16.0
		进气温度(℃)	33
包衣溶液的流速(mL/min)	0.1～0.2
		雾化空气压力(巴)	0.8～0.9
干燥	1h，于38℃

实施例12

使用表18和表19中描述的量，根据以下方法制备颗粒制剂WG_A’和WG_A”：

通过将根据表18的组分添加到混合容器中来制备初级造粒液(600g)。使用磁性搅拌子或顶置式搅拌器搅拌初级造粒液直至均匀。

使所得湿颗粒通过4.0mm筛孔。然后将湿颗粒置于不锈钢托盘中，并且在60℃在烘箱中干燥过夜。然后使干燥颗粒通过1mm筛孔，并且在环境条件下静置过夜以平衡。分离颗粒制剂WG_A’和WG_A”。

表18–造粒液制剂

表19–颗粒制剂

对WG_A’和WG_A”颗粒进行表征，并且结果在表20中显示。下面描述用于测量每一个参数的方法。

利用Sartorius水分天平使用5g颗粒样品在105℃测定颗粒的LOD。

表20

根据以下方法使用表21中描述的量，根据以下方法制备两种压片制剂(称为T1A’和T1A”，每种为150g)：

表21–片剂制剂

然后根据以下方法将每种所得混合物压制成片剂：

使用Manesty F3压机压制片剂。在不具有加工工具的情况下将压机设定为40TPM，然后用直径为8.3mm的圆形正常凹面加工工具进行设定，并且过载设定如表22所示。设定压机以产生目标重量为300mg的片剂，以避免弹簧过载。将凸轮设定值调整为表22中显示的设定值。

对于每种片剂制剂制备100片。在压片过程开始、中期和结束时，测量5个单位的厚度、重量及硬度。

表22中的数据使用以下标准程序生成：

硬度：Ph.Eur.2.9.8

脆度：Ph.Eur.2.9.7

崩解：Ph.Eur.2.9.1

利用Sartorius水分天平使用5g样品在105℃测定片剂的LOD。

T1A’片剂在77±15N(低硬度)和162±20N(高硬度)之间产生。所有片剂组都接近目标重量，具有良好的RSD、可接受的脆度(<0.5％)和在水中的良好崩解时间(<15分钟)。

在T1A”批次的压片期间，无法得到满足较低硬度目标的片剂，并且产生的片剂的硬度不超过40kN。片剂似乎是软的。T1A’(成功地用具有高细粒水平的颗粒压制)和T1A”(不由具有低细粒水平的颗粒压制)仅在AcDiSol的添加点方面存在差异。

III.生物学方法

式A的化合物抑制血浆激肽释放酶的能力可以使用以下生物学测定确定：

血浆激肽释放酶的IC₅₀的确定

血浆激肽释放酶体外抑制活性使用标准公开的方法确定(参见例如Johansen等人,Int.J.Tiss.Reac.1986,8,185；Shori等人,Biochem.Pharmacol.,1992,43,1209；Stürzebecher等人,Biol.Chem.Hoppe-Seyler,1992,373,1025)。将人血浆激肽释放酶(Protogen)与荧光底物H-DPro-Phe-Arg-AFC和各种浓度的测试化合物在25℃温育。残留的酶活性(初始反应速率)通过测量在410nm的光学吸光度的变化来确定，并且确定测试化合物的IC₅₀值。

当在该测定中进行测试时，式A的化合物显示出3.3nM的IC₅₀(人PKal)。

还使用以下生物学测定筛选了式A的化合物针对相关酶KLK1的抑制活性：

KLK1的IC₅₀的确定

KLK1体外抑制活性使用标准公开的方法确定(参见例如Johansen等人,Int.J.Tiss.Reac.1986,8,185；Shori等人,Biochem.Pharmacol.,1992,43,1209；Stürzebecher等人,Biol.Chem.Hoppe-Seyler,1992,373,1025)。将人KLK1(Callbiochem)与荧光底物H-DVal-Leu-Arg-AFC和各种浓度的测试化合物在25℃温育。残留的酶活性(初始反应速率)通过测量在410nm的光学吸光度的变化来确定，并且确定测试化合物的IC₅₀值。

当在该测定中进行测试时，式A的化合物显示出>40000nM的IC₅₀(人KLK1)。

还使用以下生物学测定筛选了式A的化合物针对相关酶FXIa的抑制活性：

FXIa的％抑制的确定

FXIa体外抑制活性使用标准公开的方法确定(参见例如Johansen等人,Int.J.Tiss.Reac.1986,8,185；Shori等人,Biochem.Pharmacol.,1992,43,1209；Stürzebecher等人,Biol.Chem.Hoppe-Seyler,1992,373,1025)。将人FXIa(Enzyme ResearchLaboratories)与荧光底物Z-Gly-Pro-Arg-AFC和40μM的测试化合物在25℃温育。残留酶活性(初始反应速率)通过测量在410nm的光学吸光度的变化来确定。

当在该测定中进行测试时，式A的化合物显示出@40μM的％抑制(人FXIa)为0％。

IV.药代动力学

在雄性Sprague-Dawley大鼠中单个口服剂量后，进行式A的化合物的药代动力学研究以评价药代动力学。向两只大鼠给予测试化合物在赋形剂中的标称2mg/mL组合物的5mL/kg单次口服剂量(10mg/kg)。给药后，在24小时的时间段内收集血液样品。取样时间为5、15和30分钟，然后是1、2、4、6、8和12小时。收集后，将血液样品离心并且通过LCMS分析血浆级分中的测试化合物浓度。

从本研究获得的式A的化合物的口服暴露数据在表23中显示：

表23–口服暴露数据

表24-本发明的口服固体剂型的体内药代动力学数据

生活研究

测试物种是食蟹猴(Cynomologous monkey)。口服固体剂型通过使用饲管和排气直接置于动物的胃中来施用。将标称1mL血样收集于含有3.2％柠檬酸三钠作为抗凝剂的血液试管中。通过离心处理血液样品以制备血浆样品。在分析之前，将血浆样品在低于-50℃下储存。

通过以下方法进行血浆分析：

通过使用乙腈中的4％乙酸进行蛋白质沉淀，对来自保留柠檬酸盐的血浆的式A的化合物进行定量。使用Biotage

PPT+蛋白质沉淀板来滤出沉淀的蛋白质。在校准范围为1至3,160ng/mL的情况下在Waters Quattro Micro API仪器上通过LC-MS对式A的化合物进行定量。在WinNonlin中使用非隔室模型进行血浆浓度数据分析。

Claims

1.一种包含式A的化合物的固体形式的口服固体剂型，

其中所述式A的化合物的固体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4、17.9、21.2和22.0处的特征X射线粉末衍射峰，Cu Kα射线，以2θ度表示。

2.根据权利要求1所述的口服固体剂型，其中所述剂型中的所述式A的化合物的固体形式的量为0.1mg至1,000mg。

3.根据权利要求1所述的口服固体剂型，其中基于所述口服固体剂型的总重量，所述式A的化合物的固体形式以1重量％至70重量％的量存在。

4.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含粘合剂。

5.根据权利要求4所述的口服固体剂型，其中所述粘合剂包括以下中的一种或多种：甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮、共聚维酮、明胶、阿拉伯树胶、乙基纤维素、聚乙烯醇、淀粉、预胶化淀粉、琼脂、黄蓍胶和海藻酸钠。

6.根据权利要求4所述的口服固体剂型，其中基于所述口服固体剂型的总重量，所述粘合剂以0.1重量％至30重量％的量存在。

7.根据权利要求4所述的口服固体剂型，其中所述式A的化合物与所述粘合剂的重量比为1:0.01至1:1。

8.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含稀释剂。

9.根据权利要求8所述的口服固体剂型，其中所述稀释剂包括以下中的一种或多种：碳酸钙、磷酸氢钙、磷酸三钙、硫酸钙、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖赋形剂、果糖、高岭土、乳糖醇、乳糖、一水合乳糖、甘露醇、山梨糖醇、麦芽糖醇、淀粉、预胶化淀粉和蔗糖。

10.根据权利要求8所述的口服固体剂型，其中基于所述口服固体剂型的总重量，所述稀释剂以1重量％至99重量％的量存在。

11.根据权利要求8所述的口服固体剂型，其中所述式A的化合物与所述稀释剂的重量比为1:0.1至1:500。

12.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含崩解剂。

13.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含润滑剂和/或助流剂。

14.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含酸。

15.根据权利要求14所述的口服固体剂型，其中所述酸包括以下中的一种或多种：马来酸、酒石酸、琥珀酸和柠檬酸。

16.根据权利要求14所述的口服固体剂型，其中基于所述口服固体剂型的总重量，所述酸以1重量％至40重量％的量存在。

17.根据权利要求14所述的口服固体剂型，其中所述式A的化合物与所述酸的重量比为1:0.1至1:2。

18.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含表面活性剂。

19.根据权利要求18所述的口服固体剂型，其中所述表面活性剂包括十二烷基硫酸钠和/或吐温80。

20.根据权利要求18所述的口服固体剂型，其中基于所述口服固体剂型的总重量，所述表面活性剂以1重量％至20重量％的量存在。

21.根据权利要求18所述的口服固体剂型，其中所述式A的化合物与所述表面活性剂的重量比为1:0.01至1:1。

22.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含脂质赋形剂。

23.根据权利要求22所述的口服固体剂型，其中所述脂质赋形剂包括以下中的一种或多种：蔗糖脂肪酸酯、磷脂衍生物、磷脂酰基衍生物、糖基神经酰胺衍生物、脂肪酸衍生物、非离子表面活性剂、维生素E生育酚琥珀酸酯聚乙二醇(TPGS)衍生物、单油酸甘油酯、

系列表面活性剂、甘油酯衍生物及其混合物。

24.根据权利要求23所述的口服固体剂型，其中所述蔗糖脂肪酸酯选自蔗糖硬脂酸酯、蔗糖棕榈酸酯、蔗糖月桂酸酯、蔗糖山嵛酸酯、蔗糖油酸酯、蔗糖芥酸酯及其混合物。

25.根据权利要求22所述的口服固体剂型，其中基于所述口服固体剂型的总重量，所述脂质赋形剂以10重量％至99％的量存在。

26.根据权利要求22所述的口服固体剂型，其中所述式A的化合物与所述脂质赋形剂的重量比为1:0.1至1:100。

27.根据权利要求1所述的口服固体剂型，其中所述口服固体剂型是胶囊的形式。

28.根据权利要求27所述的口服固体剂型，其中胶囊壳由明胶、羟丙基甲基纤维素或淀粉制成。

29.根据权利要求1所述的口服固体剂型，其中所述口服固体剂型是片剂的形式。

30.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型还包含包衣。

31.根据权利要求30所述的口服固体剂型，其中所述包衣是肠溶包衣。

32.根据权利要求1所述的口服固体剂型，所述口服固体剂型包含一种或多种另外的活性成分。

33.一种制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法，

包括以下步骤：

(a)将所述式A的化合物的固体形式与包含粘合剂的造粒液混合，所述式A的化合物的固体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4、17.9、21.2和22.0处的特征X射线粉末衍射峰，Cu Kα射线，以2θ度表示；

(b)将步骤(a)的分散体造粒以形成颗粒；

(c)干燥所述颗粒；

(d)任选地将步骤(b)或(c)的所述颗粒与稀释剂、酸、表面活性剂和/或润滑剂掺合以形成掺合颗粒；和

(e)将所述颗粒或掺合颗粒压制或填充为固体口服剂型。

34.根据权利要求33所述的方法，其中在步骤(a)中，将所述式A的化合物的固体形式与包含粘合剂和稀释剂、崩解剂和/或表面活性剂的造粒液混合。

35.根据权利要求33所述的方法，其中所述造粒液还包含水。

36.根据权利要求33所述的方法，其中步骤(c)中的所述干燥在大于45℃的温度下进行。

37.根据权利要求36所述的方法，其中步骤(c)中的所述干燥在大于55℃的温度下进行。

38.根据权利要求33所述的方法，其中在步骤(e)中，将所述颗粒或掺合颗粒压制成片剂形式的固体口服剂型。

39.一种制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法，

包括以下步骤：

(a)将所述式A的化合物的固体形式分散在熔融脂质赋形剂中，所述式A的化合物的固体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4、17.9、21.2和22.0处的特征X射线粉末衍射峰，Cu Kα射线，以2θ度表示；

(b)将熔融分散体加载到胶囊中。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述脂质赋形剂是TPGS或Gelucire 44/14。

41.根据权利要求40所述的方法，其中所述脂质赋形剂是TPGS。

42.根据权利要求39所述的方法，其中胶囊壳由明胶、羟丙基甲基纤维素或淀粉制成。

43.一种制备包含式A的化合物的口服固体剂型的方法，

所述方法包括将胶囊用所述式A的化合物的固体形式加载，所述式A的化合物的固体形式至少展现出以下在大约11.2、12.5、13.2、14.5、16.3、17.4、17.9、21.2和22.0处的特征X射线粉末衍射峰，Cu Kα射线，以2θ度表示。

44.可通过根据权利要求33-43中任一项所述的方法获得的口服固体剂型。

45.根据权利要求1-32中任一项所述的口服固体剂型或根据权利要求33-43中任一项所述的方法，其中所述式A的化合物的固体形式具有与图1a所示的X射线粉末衍射图基本上相同的X射线粉末衍射图。

46.根据权利要求1-32中任一项所述的口服固体剂型或根据权利要求33-43中任一项所述的方法，其中所述式A的化合物的固体形式展现出在其DSC热图像中在151±3℃处的吸热峰。

47.根据权利要求1-32中任一项所述的口服固体剂型或根据权利要求33-43中任一项所述的方法，其中所述式A的化合物的固体形式具有与图3所示的DSC热图像基本上相同的DSC热图像。

48.根据权利要求1至32和44中任一项所述的口服固体剂型在制备用于治疗由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况的药物中的用途，其中所述由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况选自受损的视敏度、糖尿病性视网膜病、与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性、糖尿病性黄斑水肿、遗传性血管性水肿、视网膜血管阻塞、糖尿病、胰腺炎、脑出血、肾病、心肌病、神经病、炎性肠病、炎症、败血性休克、低血压、癌症、成人呼吸窘迫综合征、弥漫性血管内凝血、心肺转流手术期间的血液凝固和外科手术后出血。

49.根据权利要求48所述的用途，其中所述由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况是关节炎。

50.根据权利要求48所述的用途，其中所述由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况选自与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性、糖尿病性黄斑水肿和遗传性血管性水肿。

51.根据权利要求48所述的用途，其中所述由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况选自与糖尿病性视网膜病相关的视网膜血管通透性和糖尿病性黄斑水肿。

52.根据权利要求48所述的用途，其中所述由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况是遗传性血管性水肿。

53.根据权利要求48所述的用途，其中所述由血浆激肽释放酶介导的疾病或病况是糖尿病性黄斑水肿。