CN111426825A - 一种量子点微球标记抗体的制备方法 - Google Patents

一种量子点微球标记抗体的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111426825A
CN111426825A CN202010271750.8A CN202010271750A CN111426825A CN 111426825 A CN111426825 A CN 111426825A CN 202010271750 A CN202010271750 A CN 202010271750A CN 111426825 A CN111426825 A CN 111426825A
Authority
CN
China
Prior art keywords
quantum dot
microspheres
labeled antibody
dot microsphere
centrifuging
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010271750.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111426825B (zh
Inventor
王德建
王会勤
陈瑞
陈丽丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Sagene Biotech Corp
Original Assignee
Guangzhou Sagene Biotech Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Sagene Biotech Corp filed Critical Guangzhou Sagene Biotech Corp
Priority to CN202010271750.8A priority Critical patent/CN111426825B/zh
Publication of CN111426825A publication Critical patent/CN111426825A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111426825B publication Critical patent/CN111426825B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/02—Use of particular materials as binders, particle coatings or suspension media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/02—Use of particular materials as binders, particle coatings or suspension media therefor
    • C09K11/025—Use of particular materials as binders, particle coatings or suspension media therefor non-luminescent particle coatings or suspension media
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/08—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials
    • C09K11/88—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials containing selenium, tellurium or unspecified chalcogen elements
    • C09K11/881—Chalcogenides
    • C09K11/883—Chalcogenides with zinc or cadmium

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供一种量子点微球标记抗体的制备方法，包括如下步骤：(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯‑co‑马来酸酐微球的制备；(2)量子点微球的制备：取十八烷基胺修饰的聚苯乙烯‑co‑马来酸酐微球，加入油溶性量子点和二氯甲烷，超声分散，离心去上清，水洗，得量子点微球；(3)活化：取量子点微球，洗涤，离心去上清，加入PBS缓冲液后，加入EDC和NHS，搅拌；(4)偶联：加入PBS缓冲液及抗体偶联；(5)清洗：离心去上清，用PBS缓冲液清洗后，得量子点微球标记的抗体。本发明属于生物技术领域，本发明制得的标记有抗体的量子点微球粒径均一性好，抗体标记后的活性高。

Description

一种量子点微球标记抗体的制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种量子点微球标记抗体的制备方法。
背景技术
量子点又称为半导体荧光纳米晶，主要是由II-VI族元素(如CdS、CdSe、CdTe、ZnSe等)和III-V族元素(如InP、InAs等)组成的纳米颗粒，粒径一般小于20纳米。量子点由于电子-空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可以发射不同波长的荧光，并具有独特优异的发光特性，因而成为新一代荧光材料。但是由于壳核材料之间带宽差异较小，量子点稳定性不强，且配体容易被氧化，使量子点的荧光强度减弱或猝灭。因此，将量子点包裹于聚合物微球中，可进一步提高量子点的稳定性。量子点微球是通过将大量的量子点包裹于聚合物材料中，表现出更高的荧光强度,并且提高了量子点的光学稳定性。
目前，量子点微球作为一种新的荧光标记物，被广泛用于标记生物细胞、抗体等，从而进一步用于生物抗原或抗体的检测。中国专利申请CN 110618264A公开了一种基于量子点聚苯乙烯微球检测抗AQP4抗体的方法，其中的量子点微球使用聚苯乙烯材料制备得到，存在微球粒径的均一性差及标记后抗体的活性低等不足。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题(粒径均一性差、抗体标记后活性低)，本发明提供了一种量子点微球标记抗体的制备方法，采用溶胀法将油溶性量子点包裹于十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球中，并采用EDC和NHS偶联技术将免疫抗体标记于量子点微球上，改善了量子点微球的粒径均一性和抗体标记后活性。
本发明的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。
本发明提供一种量子点微球标记抗体的制备方法，包括以下步骤：
(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取聚苯乙烯-co-马来酸酐(PSMA)加入到二甲基亚砜(DMSO)中，并加入十八烷基胺(ODA)，于60℃-80℃下搅拌至原料溶解，恢复至室温后，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，搅拌16-24h，反应完成后，离心去上清，水洗后，超声分散溶于水中，得十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球；
(2)量子点微球的制备：取步骤(1)所得的十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球，加入水中第一次超声分散后，再加入油溶性量子点和二氯甲烷，搅拌，第二次超声分散，敞开反应瓶使二氯甲烷挥发，搅拌过夜，离心去上清，水洗后分散于pH7.0-7.5的硼酸缓冲液中，得量子点微球，2-8℃保存；
(3)活化：取步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.0-7.5的PBS缓冲液洗涤，离心去上清，加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，室温搅拌30-60min，得活化量子点微球溶液；
(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液及抗体，搅拌1-5h，发生偶联；
(5)清洗：偶联完成后，离心去上清，用PBS缓冲液清洗后，得量子点微球标记的抗体。
量子点微球标记的抗体可保存于含吐温-20的PBS缓冲液中，吐温-20的含量为0.05％-0.1％，优选地，吐温-20的含量为0.05％。
优选地，所述步骤(1)中，聚苯乙烯-co-马来酸酐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:6:6。
更优选地，所述聚苯乙烯-co-马来酸酐的平均分子量为1600。
优选地，所述步骤(2)中，油溶性量子点为核壳型量子点。更优选地，所述核壳型量子点为CdSe/ZnS核壳型量子点或CdSSe/ZnS核壳型量子点。
优选地，所述硼酸缓冲液的制备方法为：取0.286g硼砂、0.433g硼酸，溶于水，调pH并定容至1L。
优选地，所述步骤(2)中，二氯甲烷和水的体积比为1.5-5:47.5；第一次超声分散的条件：150W、超声5min-10min；第二次超声分散的条件：150W、超声5-10min。更优选地，超声时10s开，10s停。
优选地，所述步骤(3)中，量子点微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为200:9:12。
更优选地，所述步骤(3)中，N-羟基琥珀酰亚胺经PBS溶解后再加入。
优选地，所述步骤(1)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-8min；所述步骤(2)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-8min；所述步骤(3)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-10min；所述步骤(5)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-10min。
优选地，所述步骤(4)中，加入的抗体和量子点微球的质量比为3:100。更优选地，所述步骤(4)中，PBS缓冲液为pH7.4的PBS缓冲液。
优选地，所述抗体选自降钙素原抗体或羊抗兔IgG抗体。
此外，本发明还提供一种量子点微球标记抗体，采用上述量子点微球标记抗体的制备方法制得。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：本发明采用溶胀法将油溶性量子点包裹于ODA修饰的PSMA聚合物微球中，并采用EDC和NHS偶联技术将免疫抗体标记于量子点微球的上，通过离心分离纯化得到标记有抗体的量子点微球。本发明制得的量子点微球粒径均一性好，抗体标记后的活性高，操作简便，质量稳定性好。
附图说明
图1为实施例1制备的量子点微球的粒径分布图。
图2为实施例3制备的量子点微球的粒径分布图。
图3为实施例5制备量子点微球标记抗体在PCT抗原浓度60ng/ml时的测试荧光信号值。
图4为实施例5制备量子点微球标记抗体在PCT抗原浓度5ng/ml时的测试荧光信号值。
图5为实施例5制备量子点微球标记抗体在不同浓度PCT的检测结果与T线、C线荧光数值比值的关系曲线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步详细说明。
本发明中，所涉及的试剂均为常规市售产品，或可通过本领域的常规技术手段制备获得。本发明中，如未明确指出，PBS缓冲液指pH7.0-7.5的PBS缓冲液，制备方法：取磷酸氢二钠3.633g、磷酸二氢钾0.24g、氯化钠8.0g、氯化钾0.2g，溶于水，调pH并定容至1L；如未明确指出，百分比指质量百分比。
实施例一 量子点微球标记抗体的制备
量子点微球标记抗体的制备方法，包括如下步骤：
(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取50mg聚苯乙烯-co-马来酸酐(PSMA)加入到1.5mL DMSO中，并加入8.4mg ODA，于60℃下搅拌至原料完全溶解，恢复到室温下，加入18.0mg NHS和20.4mg EDC，室温搅拌16h，反应完成后，在8000r/min的条件离心6min去上清，水洗3次，超声分散溶于1mL水中，得十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球(ODA-修饰的PSMA)；
(2)量子点微球的制备：取50μL ODA-修饰的PSMA，加入950μL水，并加入20μLCdSSe/ZnS核壳型量子点(荧光波长为620nm)和30μL DCM，室温搅拌5min，超声5min(10s开，10s停，150W)，室温搅拌2h后，敞开反应瓶，使DCM挥发，搅拌过夜，反应完成后，8000r/min的条件下离心7min去上清，水洗3次，分散于250μLpH7.4的硼酸缓冲液中，得ODA-修饰的PSMA-QD微球，2-8℃保存；
使用Nano-sight仪器对所得微球进行粒径大小测量，用PBS缓冲液将微球100倍稀释，加入Nano-sight仪器进行测量，结果如图1所示，微球粒径主要分布在210-283nm的范围。
(3)活化：取100μL步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.2的PBS缓冲液洗2次，10000r/min的条件下离心5min去上清，加入240μL PBS缓冲液，一次性加入1.5μL EDC和2.0μL NHS(10mg/ml，PBS溶解)，室温搅拌30min，得活化量子点微球溶液；
(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入375μLpH7.2的PBS缓冲液及15μg降钙素原抗体，室温搅拌1h，发生偶联；
(5)清洗：偶联完成后，10000r/min的条件下离心5min去上清，pH7.2的PBS缓冲液洗3次，得量子点微球标记的抗体。所得的量子点微球标记的抗体于100μL含吐温-20的PBS缓冲液中保存，吐温-20的含量为0.05％。
实施例二 量子点微球标记抗体的制备
(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取50mg PSMA加入到3mL DMSO中，并加入16.8mg ODA，于80℃下搅拌至原料完全溶解，恢复到室温下，加入35.9mg NHS和40.7mg EDC，室温搅拌24h，反应完成后，在10000r/min的条件下离心5min去上清，水洗3次，超声分散溶于1mL水中，得ODA-修饰的PSMA；
(2)量子点微球的制备：取50μL ODA-修饰的PSMA，加入950μL水，并加入40μLCdSSe/ZnS核壳型量子点(荧光波长为620nm)和100μL DCM，室温搅拌5min，超声10min(10s开，10s停，150W)，室温搅拌2h后，敞开反应瓶，使DCM挥发，搅拌过夜，反应完成后，10000r/min的条件下离心5min去上清，水洗3次，分散于250μLpH7.4的硼酸缓冲液中，得ODA-修饰的PSMA-QD微球，2-8℃保存；
(3)活化：取100μL步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.4的PBS缓冲液洗2次，10000r/min的条件下离心5min去上清，加入240μL PBS缓冲液，一次性加入6.0μL EDC和8.0μL NHS(10mg/ml，PBS溶解)，室温搅拌60min，得活化量子点微球溶液；
(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入375μLpH7.4的PBS缓冲液及45μg降钙素原抗体，室温搅拌4h，发生偶联；
(5)清洗：偶联完成后，10000r/min的条件下离心5min去上清，pH7.4的PBS缓冲液洗3次，得量子点微球标记的抗体。所得的量子点微球标记的抗体于100μL含吐温-20的PBS缓冲液中保存，吐温-20的含量为0.1％。
实施例三 量子点微球标记抗体的制备
(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取50mg PSMA加入到1.5mL DMSO中，并加入16.8mg ODA，于60℃下搅拌至原料完全溶解，恢复到室温下，加入35.9mg NHS和40.7mg EDC，室温搅拌24h，反应完后，在8000r/min的条件下离心6min去上清，水洗5次，溶于1mL水中，得ODA-修饰的PSMA；
(2)量子点微球的制备：取50μL ODA-修饰的PSMA，加入950μL水，并加入40μLCdSSe/ZnS核壳型量子点(荧光波长为620nm)和60μL DCM，室温搅拌5min，超声8min(10s开，10s停，150W)，室温搅拌2h后，敞开反应瓶，使DCM挥发，搅拌过夜，反应完成后，10000r/min的条件下离心5min去上清，水洗3次，分散于250μLpH7.4的硼酸缓冲液中，得ODA-修饰的PSMA-QD微球，2-8℃保存；
使用Nano-sight仪器对所得微球进行粒径大小测量，用PBS将微球100倍稀释，加入Nano-sight仪器进行测量，结果如图2所示，微球粒径主要分布在145nm的范围，微球粒径大小更加均一。
(3)活化：取100μL步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.4的PBS缓冲液洗2次，10000r/min的条件下离心8min去上清，加入240μL PBS缓冲液，一次性加入4.5μL EDC和6.0μL NHS(10mg/ml，PBS溶解)，室温搅拌30min，得活化量子点微球溶液；
(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入375μLpH7.4的PBS缓冲液及30μg降钙素原抗体，室温搅拌4h，发生偶联；
(5)清洗：偶联完成后，10000r/min的条件下离心5min去上清，用pH7.4的PBS缓冲液洗3次，得量子点微球标记的抗体。所得的量子点微球标记的抗体于100μL含吐温-20的PBS缓冲液中保存，吐温-20的含量为0.05％。
实施例四 量子点微球标记抗体的制备
(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取50mg PSMA加入到1.5mL DMSO中，并加入16.8mg ODA，于60℃下搅拌至原料完全溶解，恢复到室温下，加入35.9mg NHS和40.7mg EDC，室温搅拌24h，反应完后，在8000r/min的条件下离心6min去上清，水洗6次，溶于1mL水中，得ODA-修饰的PSMA；
(2)量子点微球的制备：取50μL ODA-修饰的PSMA，加入950μL水，并加入40μLCdSSe/ZnS核壳型量子点(荧光波长为620nm)和60μL DCM，室温搅拌5min，超声8min(10s开，10s停，150W)，室温搅拌2h后，敞开反应瓶，使DCM挥发，搅拌过夜，反应完后，10000r/min的条件下离心5min去上清，水洗3次，分散于250μLpH7.4的硼酸缓冲液中，得ODA-修饰的PSMA-QD微球，2-8℃保存；
(3)活化：取100μL步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.4的PBS缓冲液洗2次，10000r/min的条件下离心5min去上清，加入240μL pH7.4的PBS缓冲液，一次性加入4.5μLEDC和6.0μL NHS(10mg/ml，PBS缓冲液溶解)，室温搅拌30min，得活化量子点微球溶液；
(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入375μLpH7.4的PBS缓冲液及30μg降钙素原抗体，室温搅拌4h，发生偶联；
(5)清洗：偶联完成后，10000r/min的条件下离心5min去上清，用pH7.4的PBS洗3次，得量子点微球标记的抗体。所得的量子点微球标记的抗体于100μL含吐温-20的PBS缓冲液中保存，吐温-20的含量为0.05％。
实施例五 量子点微球标记抗体的制备
本实施例量子点微球标记的抗体的制备方法，与实施例3的不同之处仅在于：步骤(2)中的量子点选用荧光波长为610nm的CdSe/ZnS核壳型量子点。
按照同样方法取制备好的活化量子点微球溶液100μL，标记50μg羊抗兔IgG抗体；
免疫层析试纸条制备：
样本垫制备：将玻璃纤维素膜，浸泡入样本垫处理液(Tris 0.25％，聚乙烯吡咯烷酮K30 1％，蔗糖2％，吐温20 1％，PH7.5)中2h，37℃干燥箱烘干过夜；取PCT抗体和羊抗兔IgG抗体标记好的量子点微球，各取8μL，加入300μL微球稀释液(Tris 0.6％，蔗糖15％，Bovine Serum Albumin 0.5％)，混匀，使用喷金仪喷于烘干好的纤维素膜，每条纤维素膜(30.0cm)喷120μL，置于37℃干燥箱烘干过夜；取兔IgG 75μg，PCT单克隆抗体2 37.5μg，分别加入包被缓冲液(磷酸氢二钠0.58％，磷酸二氢钠0.06％，海藻糖2％)，至体积达75μL，量取30.0cm硝酸纤维素膜，剪下后贴于检测板中间位置，置于喷金仪，进行检测线和质控线划线，每条板划30μL，置于37℃干燥箱烘干过夜；第二天将干燥好的样本垫贴于检测板下端，0.5cm重叠于硝酸纤维素膜之上，将吸水纸剪裁为宽度2.5cm，长度为30.0cm的条，贴于检测板上段，0.5cm重叠于硝酸纤维素膜之上。将组装好的检测板用切条机切为宽度为4.0mm的检测条。PCT检测：将PCT抗原稀释为不同浓度，0ng/ml，5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml，40ng/ml，60ng/ml，使用试纸条进行测试。
制备量子点微球标记抗体在PCT抗原浓度60ng/ml时的测试荧光信号值如图3所示，制备量子点微球标记抗体在PCT抗原浓度5ng/ml时的测试荧光信号值如图4所示，制备量子点微球标记抗体在不同浓度PCT的检测结果与T线、C线荧光数值比值的关系曲线如图5所示。可见，检测结果与不同浓度的PCT抗原呈良好的线性关系，且荧光强度足够高，背景低，说明量子点微球能够较好的满足检测需求。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球的制备：取聚苯乙烯-co-马来酸酐加入到二甲基亚砜中，并加入十八烷基胺，于60-80℃下搅拌至原料溶解，恢复至室温后，加入N-羟基琥珀酰亚胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌16-24h，反应完成后，离心去上清，水洗后，超声分散溶于水中，得十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球；
(2)量子点微球的制备：取步骤(1)所得的十八烷基胺修饰的聚苯乙烯-co-马来酸酐微球，加入水中第一次超声分散后，再加入油溶性量子点和二氯甲烷，搅拌，第二次超声分散，敞开反应瓶使二氯甲烷挥发，搅拌过夜，离心去上清，水洗后分散于pH7.0-7.5的硼酸缓冲液中，得量子点微球，2-8℃保存；
(3)活化：取步骤(2)所得的量子点微球，用pH7.0-7.5的PBS缓冲液洗涤，离心去上清，加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液后，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌30-60min，得活化量子点微球溶液；
(4)偶联：向步骤(3)所得的活化量子点微球溶液中加入pH7.0-7.5的PBS缓冲液及抗体，搅拌1-5h，发生偶联；
(5)清洗：偶联完成后，离心去上清，用PBS缓冲液清洗后，得量子点微球标记的抗体。
2.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，聚苯乙烯-co-马来酸酐、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:6:6。
3.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，油溶性量子点为核壳型量子点。
4.根据权利要求1或3所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述核壳型量子点为CdSe/ZnS核壳型量子点或CdSSe/ZnS核壳型量子点。
5.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，二氯甲烷和水的体积比为1.5-5:47.5；第一次超声分散的条件：150W、超声5-10min；第二次超声分散的条件：150W、超声5-10min。
6.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，量子点微球、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为200:9:12。
7.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-8min；所述步骤(2)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-8min；所述步骤(3)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-10min；所述步骤(5)中，离心的条件为：8000-10000r/min、离心5-10min。
8.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，加入的抗体和量子点微球的质量比为3:100。
9.根据权利要求1所述量子点微球标记抗体的制备方法，其特征在于，所述抗体选自降钙素原抗体或羊抗兔IgG抗体。
10.一种量子点微球标记抗体，其特征在于，采用权利要求1至9中任一项所述量子点微球标记抗体的制备方法制得。
CN202010271750.8A 2020-04-08 2020-04-08 一种量子点微球标记抗体的制备方法 Active CN111426825B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010271750.8A CN111426825B (zh) 2020-04-08 2020-04-08 一种量子点微球标记抗体的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010271750.8A CN111426825B (zh) 2020-04-08 2020-04-08 一种量子点微球标记抗体的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111426825A true CN111426825A (zh) 2020-07-17
CN111426825B CN111426825B (zh) 2022-09-13

Family

ID=71556012

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010271750.8A Active CN111426825B (zh) 2020-04-08 2020-04-08 一种量子点微球标记抗体的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111426825B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114835840A (zh) * 2022-05-13 2022-08-02 江南大学 一种抗氧化抗紫外微球、制备方法及应用

Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030148544A1 (en) * 2001-06-28 2003-08-07 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Methods of preparing multicolor quantum dot tagged beads and conjugates thereof
KR20120101242A (ko) * 2011-02-28 2012-09-13 고려대학교 산학협력단 양자점을 포함하는 폴리스틸렌-폴리(스틸렌-코-말레익 언하이드라이드) 나노섬유 복합물 및 그 응용
CN105080439A (zh) * 2015-06-26 2015-11-25 上海交通大学 一种高荧光强度微球及其制备方法
CN106680496A (zh) * 2016-12-21 2017-05-17 武汉大学 一种比色荧光双信号纳米球的制备及其在免疫层析定量检测中的应用
CN107219371A (zh) * 2017-08-07 2017-09-29 广州市微米生物科技有限公司 Pct荧光微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN107271692A (zh) * 2017-08-14 2017-10-20 浙江博华医药科技有限公司 一种标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球及其应用
CN107699230A (zh) * 2017-09-29 2018-02-16 纳晶科技股份有限公司 量子点微球的制备方法及量子点微球产品
CN107936944A (zh) * 2017-12-08 2018-04-20 韩雪 高性能量子点编码磁性微球的制备方法
CN108896755A (zh) * 2018-07-04 2018-11-27 浙江伊利康生物技术有限公司 一种降钙素原（pct）检测试剂盒及其制备方法
CN109575173A (zh) * 2018-12-12 2019-04-05 合众（佛山）化工有限公司 分散共聚法制备聚苯乙烯-马来酸酐微球
CN109781691A (zh) * 2019-02-28 2019-05-21 渤海大学 一种基于聚苯乙烯纳米荧光微球探针检测氯霉素的方法
CN110567928A (zh) * 2019-09-30 2019-12-13 上海交通大学 一种基于量子点荧光纳米球的多元检测方法
CN110791286A (zh) * 2019-11-08 2020-02-14 重庆大学 一种钙钛矿荧光微球及其制备方法和应用

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030148544A1 (en) * 2001-06-28 2003-08-07 Advanced Research And Technology Institute, Inc. Methods of preparing multicolor quantum dot tagged beads and conjugates thereof
KR20120101242A (ko) * 2011-02-28 2012-09-13 고려대학교 산학협력단 양자점을 포함하는 폴리스틸렌-폴리(스틸렌-코-말레익 언하이드라이드) 나노섬유 복합물 및 그 응용
CN105080439A (zh) * 2015-06-26 2015-11-25 上海交通大学 一种高荧光强度微球及其制备方法
CN106680496A (zh) * 2016-12-21 2017-05-17 武汉大学 一种比色荧光双信号纳米球的制备及其在免疫层析定量检测中的应用
CN107219371A (zh) * 2017-08-07 2017-09-29 广州市微米生物科技有限公司 Pct荧光微球免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN107271692A (zh) * 2017-08-14 2017-10-20 浙江博华医药科技有限公司 一种标记特异性高亲和力重组抗体的荧光微球及其应用
CN107699230A (zh) * 2017-09-29 2018-02-16 纳晶科技股份有限公司 量子点微球的制备方法及量子点微球产品
CN107936944A (zh) * 2017-12-08 2018-04-20 韩雪 高性能量子点编码磁性微球的制备方法
CN108896755A (zh) * 2018-07-04 2018-11-27 浙江伊利康生物技术有限公司 一种降钙素原（pct）检测试剂盒及其制备方法
CN109575173A (zh) * 2018-12-12 2019-04-05 合众（佛山）化工有限公司 分散共聚法制备聚苯乙烯-马来酸酐微球
CN109781691A (zh) * 2019-02-28 2019-05-21 渤海大学 一种基于聚苯乙烯纳米荧光微球探针检测氯霉素的方法
CN110567928A (zh) * 2019-09-30 2019-12-13 上海交通大学 一种基于量子点荧光纳米球的多元检测方法
CN110791286A (zh) * 2019-11-08 2020-02-14 重庆大学 一种钙钛矿荧光微球及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张兵波等: "复色量子点的制备与免疫分析应用", 《科学通报》 *
张巍等: "不同粒径聚合物纳米粒子的制备及其光谱特性研究", 《吉林大学学报(信息科学版)》 *
徐健等: "苯乙烯马来酸酐共聚物化学改性研究进展", 《化学研究》 *
江洋等: "多重量子点编码微球的高效制备与表征", 《上海交通大学学报》 *
王玉珍等: "PGMA-g-EDA梳状聚合物的制备及其对量子点修饰的研究", 《高分子学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114835840A (zh) * 2022-05-13 2022-08-02 江南大学 一种抗氧化抗紫外微球、制备方法及应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111426825B (zh) 2022-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7470379B2 (en) Inorganic particle conjugates
Yang et al. Nanometer fluorescent hybrid silica particle as ultrasensitive and photostable biological labels
CN111537747B (zh) 一种检测人新型冠状病毒IgG抗体的试纸条、试剂盒及其制备方法
CN108469524B (zh) 一种检测ca125的光电化学免疫传感器及其制备方法和应用
CN101526523A (zh) 锑化镉量子点免疫标记物的制备及电化学夹心免疫检测方法
US8993345B2 (en) Method of producing functional molecule-containing silica nanoparticles on which biomolecules are bonded
CN111426825B (zh) 一种量子点微球标记抗体的制备方法
Sahoo et al. Biocompatible quantum dot-antibody conjugate for cell imaging, targeting and fluorometric immunoassay: crosslinking, characterization and applications
CN116577319A (zh) 一种用于化学发光检测的微球组合物及其应用
JP2022501590A (ja) 発光マーカー粒子
Liu et al. Highly stable quantum dots with silica–poly (EGDMA-co-MAA) synergistic protection and the preliminary application in immunoassay
CN116087502A (zh) 微球保存液及其应用
WO2023116586A1 (zh) Si-FITC比率型荧光纳米探针的合成方法及其在新冠病毒抗原检测中的应用
Bruchez Jr Luminescent semiconductor nanocrystals: Intermittent behavior and use as fluorescent biological probes
CN114966016A (zh) 基于量子点荧光微球构建的新冠抗体检测试剂盒
CN114544532A (zh) 一种非洲猪瘟病毒荧光与比色多模态精准检测的试剂盒及其检测方法
Li et al. A sensitive photoelectrochemical immunoassay based on mesoporous carbon/core–shell quantum dots as donor–acceptor light-harvesting architectures
CN109682964B (zh) Au@Fe3O4MNPs-Ab2纳米酶检测探针的制备方法及检测多组分抗原的方法
CN114813696A (zh) 光致发光-多声子共振拉曼散射双模纳米探针及其应用
CN115791763B (zh) 均相发光检测装置及应用
Huang et al. Plate-based biochemical assay using quantum dots as a fluorescent labeling agent
Ko et al. Determination of total protein adsorbed on solid (membrane) surface by a hydrolysis technique: single protein adsorption
CN116183909B (zh) 基于聚集诱导发光微球及磁性分离技术的免疫检测方法
CN116577499B (zh) 一种均相催化化学发光试剂盒及其制备方法和使用方法
CN114167053B (zh) 一种碳荧光微球侧流层析高灵敏定量检测方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant