CN111419832B - 药物组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药领域，公开了药物组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的用途，该药物组合物为一组含化学药物和/或含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的组合物，其中：含化学药物的药物组合物包含(ⅰ)二氯乙酸钠或其类似物和(ⅱ)氯喹或其类似物，含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物包含a)整合素亚单位的siRNA和/或shRNA、或其抑制剂、或抗体，或b)基于所述整合素亚单位的siRNA或shRNA的靶标序列构建的表达载体。通过上述药物组合物抑制肿瘤细胞增殖、改善肿瘤细胞代谢、抑制自噬和肿瘤微环境中新生血管的生成等发挥抗癌症作用。

Description

药物组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的用途
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一组化学药物和/或含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。
背景技术
癌症，也称恶性肿瘤，严重威胁人类生命健康，其涉及异常细胞生长并能够侵袭或扩散至机体其他部分。癌症的发生和发展机制复杂，涉及基因突变、信号通路异常调控、代谢紊乱等多种方面，尽管各种治疗药物和手段不断涌现，但治疗敏感性、耐药性等问题促使不断研究和开发新的抗癌症药物和治疗手段。
二氯乙酸钠(dichloroacetate，DCA)临床用于治疗乳酸性酸中毒，近年研究发现在体外及体内试验中DCA对多种肿瘤细胞有抑制作用(Michelakis ED, Webster L,MackeyJR.2008.Dichloroacetate(DCA)as a potential metabolic-targeting therapy forcancer.Br J Cancer.99(7):989-94.)。随后发现该化合物单用或联合其它药物和治疗手段如放疗对一些固体肿瘤(乳腺癌、大肠癌、前列腺等)有一定作用，DCA作用于丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)，抑制PDK1 激酶活性；PDK1作为丙酮酸脱氢酶负调节者，促进细胞氧化磷酸化，加速丙酮酸氧化成乙酰辅酶A，从而使癌细胞恢复正常细胞代谢，从而起到抗肿瘤作用。
氯喹(chloroquine，CQ)临床用于治疗疟疾和自身免疫性疾病，近年研究也发现其具有抗肿瘤活性，对肿瘤有多种作用机制，如诱导肿瘤细胞凋亡，抑制自噬，抑制肿瘤干细胞生长，血管正常化以及对免疫反应的影响。
整合素是一个膜受体家族，有18个α亚单位和8个β亚单位组成至少24 个异二聚体。该家族参与细胞与细胞基质、细胞与细胞之间的粘附以及血管形成，对细胞的生长发育、增殖分化及细胞凋亡起重要作用。整合素还可通过非配体依赖的信号传导通路促进肿瘤细胞转移，是抗肿瘤研究的潜在靶点 (Barczyk M,Carracedo S,GullbergD.Integrins.Cell Tissue Res.,339(2010),pp. 269-280)。其中αvβ3和αvβ5在肿瘤血管生成中起重要作用，表皮生长因子促进肿瘤细胞迁移和转移需要αvβ5的参与(Desgrosellier JS,Cheresh DA. Integrins in cancer:biological implications andtherapeutic opportunities.Nat. Rev.Cancer,10(1)(2010),pp.9-22)，因此αvβ3和αvβ5成为抗肿瘤药物研究的热点。
尽管二氯乙酸钠和氯喹具有一定的抗恶性肿瘤作用，但单用效果有限，临床实验表明二氯乙酸钠对乳腺癌和非小细胞肺癌无效，单用氯喹在一些癌症治疗中也无效，目前两药只能作为辅助性药物在癌症治疗中试用，患者生存期并没有得到改善。而单纯阻断整合素的作用往往导致机体代偿而减弱抗癌作用，αvβ3和αvβ5抑制剂西仑吉肽(Cilengitide)单用在3期临床试验中失败，并且西仑吉肽联合放化疗的患者生存期也没有得到改善；整合素的单克隆抗体也面临同样问题，多个单抗因效果不佳而终止临床试验或研发。
发明内容
本发明的目的在于提供一组含化学药物和/或含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。
本发明中，所述肿瘤包括实体肿瘤和非实体肿瘤，其中所述实体肿瘤为癌症(即恶性肿瘤)，包括但不限于肝癌、肺癌、结直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、食管癌、宫颈癌、脑胶质细胞瘤、淋巴瘤或黑色素瘤；所述非实体肿瘤为白血病。本发明所述的药物组合物可以抑制肿瘤细胞增殖、改善肿瘤细胞代谢、抑制自噬和肿瘤微环境中新生血管的生成。
本发明中，上述含化学药物的组合物包含(ⅰ)二氯乙酸钠或其类似物和 (ⅱ)氯喹或其类似物。在优选的技术方案中，还包括药学上可接受的辅料或辅助性成分。在优选的实施方案中，所述氯喹类似物包含但不限于羟基氯喹。在优选的实施方案中，所述二氯乙酸钠或其类似物的每日使用剂量为 10mg/kg～100mg/kg，给药方式为口服；所述氯喹或其类似物的每日使用剂量为1mg/kg～50mg/kg，给药方式为口服，一天一次。
本发明中，上述含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物包含：
(a)整合素亚单位的siRNA和/或shRNA，或
(b)所述整合素的抑制剂，或
(c)所述整合素亚单位的抗体，或
(d)基于所述整合素亚单位的siRNA和/或shRNA的靶标序列构建的表达载体。
上述技术方案中，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料或辅助性成分。在优选的实施方案中，所述整合素亚单位的siRNA和/或shRNA包含但不限于整合素亚单位β5、β3、αv、α4、α5或β1的siRNA及shRNA，其中β5的靶标序列包含但不限于5’-GCAACTTCCGGTTGGGATT-3’(如SEQ ID NO:1所示)，β3的靶标序列包含但不限于 5’-TCCAGCTCATTGTTGATGCTTA-3’(如SEQ ID NO:2所示)，αv的靶标序列包含但不限于5’-GGTCTTGAAGTGTACCCTAGCA-3’(如SEQ ID NO:3所示)。
在优选的实施方案中，所述表达载体包含但不限于腺病毒、腺相关病毒、慢病毒或逆转录病毒，所述表达载体更优选为整合素亚单位β5和β3shRNA 腺病毒，其通过将整合素亚单位β5和β3双基因的shRNA整合连接构建于 miR30a框架结构中得到。在优选的实施方案中，所述整合素的抑制剂包含但不限于西仑吉肽(Cilengitide)；在优选的实施方案中，所述整合素亚单位的抗体包含但不限于Abituzumab、MEDI-522、Intetumumab、Volociximab或natalizumab。
在优选实施方案中，整合素腺病毒药物组合物或其制剂的给药方式为瘤内注射或静脉注射，瘤内注射时其使用剂量为按MOI 10～20给予，一周一次；静脉注射时其使用剂量为1ⅹ1010～1ⅹ1012vp，首剂可分多次给予，并按1～3 周一次维持；和/或整合素腺病毒药物组合物或其制剂的给药方式为瘤内注射或静脉注射，瘤内注射时其使用剂量为按MOI1000～2000给予，3～4周一次；静脉注射时其使用剂量为1ⅹ1013～2ⅹ1014vg，首剂可分多次给予，并按 3～4周一次维持。
本发明中，用于治疗癌症的药物组合物为上述含化学药物的药物组合物和上述含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物联合使用。在优选的实施方案中，该药物组合物用于治疗所述肿瘤疾病时，所述二氯乙酸钠或其类似物的每日使用剂量为10mg/kg～100mg/kg，给药方式为口服；所述氯喹或其类似物的每日使用剂量为1mg/kg～50mg/kg，给药方式为口服，一天一次；和整合素腺病毒药物组合物或其制剂的给药方式为瘤内注射或静脉注射，瘤内注射时其使用剂量为按MOI 10～20给予，一周一次；静脉注射时其使用剂量为1ⅹ1010～1ⅹ1012vp，首剂可分多次给予，并按1～3周一次维持；和/或腺相关病毒药物组合物或其制剂的给药方式为瘤内注射或静脉注射，瘤内注射时其使用剂量为按MOI 1000～2000给予，3～4周一次；静脉注射时其使用剂量为1ⅹ1013～2ⅹ1014vg，首剂可分多次给予，并按3～4周一次维持。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1.本发明的药物组合物充分利用各组分的不同抗癌靶点和机制，在抑制肿瘤细胞增殖、改善肿瘤细胞代谢、抑制自噬和肿瘤微环境中新生血管的生成等多方面发挥抗癌症作用。两个化学药物的体外抑癌实验表明两者合用可对多种肿瘤细胞产生显著的毒性作用，效果显著；在此基础上选择体外抑癌实验中效果相对较差、需要更大剂量才能产生良好作用的肝癌细胞株HepG2 进行后续研究，发现合用两个化学药物和整合素siRNA/shRNA产生显著的毒性作用，并显著抑制克隆形成；在HepG2产生的小鼠皮下移植瘤体内实验中可见单用两个化学药物或单用表达整合素shRNA腺病毒对肿瘤生长抑制作用弱，单独表达整合素shRNA的腺病毒的小鼠移植瘤在后期生长反而有所加快，而合用两个化学药物和表达整合素shRNA腺病毒的小鼠移植瘤生长被持续抑制，生长速度显著慢于单用两个化学药物或单用表达整合素shRNA腺病毒组。在本发明中我们主要针对恶性程度相对高、临床可用药物相对少的肝癌进行研究，结果表明组合物取得了良好的效果。
2.两个化学药物中的二氯乙酸钠为临床应用药物，已具备一定的安全性、经济性和适当性，另一药物氯喹也为临床应用药物，具备一定的经济性和适当性，但其不良反应较大，一般病人难以承受较大剂量治疗，常常因为毒性作用停用。在本发明中，两药联合使用时不仅在体外实验中对多种癌症细胞显现良好的协同毒性作用，在体内实验中对肝癌细胞株HepG2产生的小鼠皮下移植瘤也具备良好的抑制生长作用，并且使得小鼠能够很好地耐受氯喹，荷瘤所致的小鼠体重下降也得到缓解。
附图说明
图1是二氯乙酸钠和氯喹合用对HCT116的细胞毒性作用。
图2是二氯乙酸钠和氯喹合用对MCF7的细胞毒性作用。
图3是二氯乙酸钠和氯喹合用对HepG2的细胞毒性作用。
图4是二氯乙酸钠、氯喹与整合素siRNA合用对HepG2细胞毒性作用。
图5是二氯乙酸钠和氯喹合用抑制HepG2细胞克隆形成。
图6是二氯乙酸钠、氯喹与整合素shRNA合用抑制HepG2细胞克隆形成。
图7是二氯乙酸钠、氯喹与整合素shRNA合用促进细胞凋亡。
图8是对照组、二氯乙酸钠组、氯喹组和二氯乙酸钠/氯喹合用组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠的肿瘤生长曲线。
图9是对照组、二氯乙酸钠组、氯喹组和二氯乙酸钠/氯喹合用组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠治疗结束后肿瘤体积。
图10是对照组、二氯乙酸钠组、氯喹组和二氯乙酸钠/氯喹合用组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠治疗结束后肿瘤重量。
图11是对照组、二氯乙酸钠组、氯喹组和二氯乙酸钠/氯喹合用组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠治疗期间体重变化情况。
图12是对照组、对照病毒组、二氯乙酸钠/氯喹合用组、整合素β5和β3 shRNA腺病毒组、二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠的肿瘤生长曲线。
图13是对照组、对照病毒组、二氯乙酸钠/氯喹合用组、整合素β5和β3 shRNA腺病毒组、二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠治疗结束后肿瘤体积。
图14是对照组、对照病毒组、二氯乙酸钠/氯喹合用组、整合素β5和β3 shRNA腺病毒组、二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠治疗结束后肿瘤重量。
图15是对照组、对照病毒组、二氯乙酸钠/氯喹合用组、整合素β5和β3 shRNA腺病毒组、二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组人肝细胞癌HepG2荷瘤小鼠治疗结束后肿瘤H&E染色和免疫组化结果。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
验证二氯乙酸钠和氯喹合用对肿瘤细胞的毒性作用试验如下：来源于美国ATCC的人结肠癌HCT116、人乳腺癌MCF7、人肝癌HepG2细胞用含10％胎牛血清的DMEM培养，至90％融合时用0.25％胰蛋白酶消化传代，每3-5 天传代一次。以20000个种植于96孔细胞培养板孔中，37℃培养过夜。加入不同浓度二氯乙酸钠、氯喹培养5天(每天更新一次)。第6天，按MTS试剂盒(Promega公司)检测细胞活性。结果可见随着浓度的增加，二氯乙酸钠和氯喹合用对HCT116(图1)、MCF7(图2)和HepG2(图3)产生显著的毒性作用，两药协同作用显著，其中对HepG2的毒性作用需要较高的二氯乙酸钠和氯喹浓度，因此后续用HepG2继续研究。
实施例2
验证二氯乙酸钠、氯喹与整合素siRNA合用对HepG2细胞产生显著的细胞毒性作用试验如下：人肝癌HepG2细胞以40000个种植于96孔细胞培养板孔中，37℃培养过夜。然后用Lipofectamine RNAiMAX转染整合素β5(ITGB5) 和β3(ITGB3)siRNA(0.3nmol/孔)处理48小时后，加入不同浓度二氯乙酸钠、氯喹培养3天(每天更新一次)。第6天，按MTS试剂盒(Promega公司)检测细胞活性。在此实施例中，细胞接种密度比实施例1增加一倍，结果可见三者合用HepG2细胞(图4)产生显著的毒性作用，并随着二氯乙酸钠和氯喹浓度的增加，细胞毒性作用加强。
实施例3
二氯乙酸钠、氯喹合用抑制HepG2细胞克隆形成试验，方法如下：将处于对数生长期的HepG2细胞消化并计数，汲取2500个细胞/孔接种至6孔细胞培养板中。培养24小时后，加入10mM二氯乙酸钠，10μM氯喹或10mM 二氯乙酸钠/10μM氯喹处理24小时，然后更换新的无药物培养基继续培养7～ 10天。用PBS液洗涤细胞二次后，用冷的100％甲醇固定15分钟，0.5％结晶紫室温孵育1小时。结果可见二氯乙酸钠、氯喹合用明显减少HepG2细胞的克隆形成(图5)。
实施例4
二氯乙酸钠、氯喹与整合素shRNA合用抑制HepG2细胞克隆形成试验，方法如下：将处于对数生长期的HepG2细胞消化并计数，汲取2500个细胞/ 孔接种至6孔细胞培养板中培养过夜，加入阴性对照腺病毒或表达整合素β5 (ITGB5)和β3(ITGB3)shRNA的腺病毒(20PFU/细胞)，同时加入2.5mM 二氯乙酸钠，10μM氯喹或2.5mM二氯乙酸钠/10μM氯喹处理24小时，然后更换新的无药物培养基继续培养7～10天。用PBS液洗涤细胞二次后，用冷的100％甲醇固定15分钟，0.5％结晶紫室温孵育1小时。结果可见在现有浓度下，二氯乙酸钠、氯喹合用抑制克隆形成作用较弱，而与整合素β5和β3 shRNA合用后明显减少HepG2细胞的克隆形成(图6)。
实施例5
验证二氯乙酸钠、氯喹合用或与整合素shRNA合用促进细胞凋亡试验，具体如下：汲取200000HepG2细胞/孔至6孔细胞培养板C培养过夜。加入阴性对照腺病毒或表达整合素β5(ITGB5)和β3(ITGB3)shRNA的腺病毒(20PFU/细胞)，同时加入2.5mM二氯乙酸钠，10μM氯喹或2.5mM二氯乙酸钠/10μM氯喹培养72小时。收集并保存上清，PBS洗涤细胞二次后，用胰酶-EDTA处理5分钟，再加入相对应的培养上清中和胰酶并计数细胞总数。从每个样本中汲取100000个细胞，然后按FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I(BD公司)试剂盒说明书进行操作，处理后的细胞经流式细胞分检仪分检分类。结果可见在现有浓度下，二氯乙酸钠、氯喹合用促进细胞凋亡作用不明显(Annexin+PI-和Annexin+PI+细胞合计)，单用表达整合素β5和β3shRNA 的腺病毒明显促进细胞凋亡，而与二氯乙酸钠、氯喹合用后促进细胞凋亡的作用更加显著(图7)。
实施例6
二氯乙酸钠、氯喹合用显著抑制HepG2细胞小鼠皮下移植瘤的生长试验，具体如下：选取雌性3～4周龄(20～25g/只)裸鼠(购买于上海斯莱克实验动物中心，SPF级)采用皮下注射方式在每只腋下接种3×106个人肝细胞癌HepG2 细胞，观察成瘤情况，计算肿瘤体积(肿瘤体积＝肿瘤长径×肿瘤短径2×0.52)，当肿瘤长至约100mm3时随即将它们分为对照组、二氯乙酸钠组、氯喹组和二氯乙酸钠/氯喹合用组，每组5只。分组后，对照组给予PBS灌胃；二氯乙酸钠组给予二氯乙酸钠(溶于PBS)1000mg/Kg，每天一次，灌胃；氯喹组给予氯喹(溶于PBS)50mg/Kg，每天一次，给药第一天尾静脉，后面灌胃；二氯乙酸钠/氯喹合用组给予二氯乙酸钠和氯喹，给药方法和剂量同上。在给药过程中，观察到单用氯喹组小鼠出现颤抖现象，而二氯乙酸钠和氯喹合用组无此表现。给药后每2-3天测量各组小鼠皮下肿瘤大小，至肿瘤大小至约1000mm3终止，处死各组小鼠，剥下皮下肿瘤并绘制肿瘤生长曲线。如图8所示，对照组小鼠皮下肿瘤生长较迅速，体积明显增大；给予二氯乙酸钠或氯喹组，小鼠皮下肿瘤生长速度减慢，体积缩小；二氯乙酸钠/氯喹合用组小鼠皮下肿瘤生长速度减慢，体积缩小，但与二氯乙酸钠组差别不大。如图9所示，四组小鼠被处死后剥出皮下种植肿瘤，给药组肿瘤体积较对照组明显减小。如图10所示，四组小鼠剥下皮下种植肿瘤测量重量，给药组小鼠肿瘤重量明显减轻，其中二氯乙酸钠组与二氯乙酸钠/氯喹合用组抑制肿瘤生长效果更显著。如图 11所示，二氯乙酸钠/氯喹合用组小鼠治疗期间体重下降相较于其他三组更慢，说明合用组毒副反应更小。
实施例7
二氯乙酸钠、氯喹与整合素shRNA合用显著抑制HepG2细胞小鼠皮下移植瘤的生长试验，具体如下：选取雌性3～4周龄(20～25g/只)裸鼠在SPF级动物采用皮下注射方式在每只腋下接种3×106个人肝细胞癌HepG2细胞，观察成瘤情况，计算肿瘤体积(肿瘤体积＝肿瘤长径×肿瘤短径2×0.52)，当肿瘤长至约100mm3时随即将它们分为对照组、对照病毒组、二氯乙酸钠/氯喹合用组、整合素β5(ITGB5)和β3(ITGB3)shRNA腺病毒组、二氯乙酸钠/ 氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组，每组5只。分组后，对照组给予PBS 灌胃；对照病毒组给予3.5×108PFU对照病毒，瘤内注射，每周一次；二氯乙酸钠/氯喹合用组给予二氯乙酸钠(溶于PBS)1000mg/Kg，每天一次，灌胃，氯喹(溶于PBS)50mg/Kg，每天一次，给药第一天尾静脉，后面灌胃；整合素β5和β3shRNA腺病毒组给予3.5×108PFU整合素β5和β3shRNA病毒，瘤内注射，每周一次；二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组给予二氯乙酸钠、氯喹和整合素β5和β3shRNA病毒，给药方法和剂量同上。给药后每2天测量各组小鼠皮下肿瘤大小，至肿瘤大小至约1000mm3终止，处死各组小鼠，剥下皮下肿瘤并绘制肿瘤生长曲线。如图12所示，对照组小鼠皮下肿瘤生长较迅速，体积明显增大；给予二氯乙酸钠或氯喹组，小鼠皮下肿瘤生长速度减慢，体积缩小；整合素β5和β3shRNA腺病毒组在治疗前10天肿瘤生长速度减慢，但后期肿瘤生长速度加快，至治疗终止时与肿瘤生长对照病毒组相似；二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组小鼠皮下肿瘤生长速度显著减慢，体积显著小于其他各组。如图13所示，治疗结束小鼠被处死后剥出皮下种植肿瘤，二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组。如图14所示，五组小鼠剥下皮下种植肿瘤测量重量，二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组小鼠肿瘤重量明显减轻。
实施例8
治疗结束后，于实施例7中每组分别选取3只小鼠用4％多聚甲醛灌流，取出肿瘤组织，继续用4％多聚甲醛固定数小时，然后用由低浓度到高浓度的乙醇逐级脱水，再用二甲苯透明。用石蜡浸润组织块，切片和烤片。用二甲苯和梯度酒精将石蜡切片脱蜡，然后用蒸馏水冲洗一次并浸泡于蒸馏水中。高温高压修复后用3％H2O2阻断内源性过氧化物酶室温20min，PBS冲洗3次。 10％山羊血清孵育封闭，然后加一抗工作液，4℃过夜。再用PBS冲洗3次，加二抗孵育，室温孵育30min，PBS冲洗3次，滴加新鲜配置的DAB。自来水冲洗，再进行脱水干燥，中性树胶封片镜检。如图15为肿瘤的病理学特征及抗CD31、抗Ki67和抗TUNEL的代表性组化图片，免疫组化CD31反映肿瘤血管生成情况，Ki67反映肿瘤细胞增殖，TUNEL反映肿瘤细胞凋亡。HE 染色显示，用药各组细胞出现了细胞结果破坏，其中二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5(ITGB5)和β3(ITGB3)shRNA腺病毒组最明显。CD31和Ki67染色显示用药各组同步减少，其中二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组最明显，TUNEL染色显示用药各组细胞凋亡增加，其中二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5和β3shRNA腺病毒组最明显，该实验表明二氯乙酸钠/氯喹/整合素β5 和β3shRNA腺病毒联用具有显著的抗肿瘤生长作用，并且其机制是降低肿瘤的微血管密度、抑制肿瘤细胞的增殖和增加肿瘤细胞凋亡。
上述对实施例的描述是为了便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用本发明。熟悉本领域技术人员显然可以容易的对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中，而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例。本领域技术人员根据本发明的原理，不脱离本发明的范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 上海交通大学医学院
<120> 药物组合物及其在制备治疗肿瘤药物中的用途
<141> 2020-04-14
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA/RNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
gcaacttccg gttgggatt 19
<210> 2
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 2
tccagctcat tgttgatgct ta 22
<210> 3
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 3
ggtcttgaag tgtaccctag ca 22

Claims (4)

1.药物组合物在制备治疗肝癌药物中的用途，所述药物组合物包含：
⑴含化学药物的药物组合物；
⑵含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物；
所述含化学药物的药物组合物包含二氯乙酸钠和氯喹；
所述含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物为整合素亚单位β5和β3 shRNA腺病毒，其通过整合素亚单位β5和β3双基因的shRNA整合连接构建于miR30a框架结构中得到，其中：
β5的靶标序列如SEQ ID NO:1所示；
β3的靶标序列如SEQ ID NO:2所示。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述二氯乙酸钠的每日使用剂量为10mg/kg～100mg/kg，给药方式为口服；
所述氯喹的每日使用剂量为1mg/kg～50mg/kg，给药方式为口服，一天一次。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物为瘤内注射或静脉注射，瘤内注射时其使用剂量为按MOI 10～20给予，一周一次；静脉注射时其使用剂量为1ⅹ1010~1ⅹ1012vp，首剂可分多次给予，并按1~3周一次维持。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述含有siRNA或表达shRNA的重组病毒的药物组合物的给药方式为瘤内注射或静脉注射，瘤内注射时其使用剂量为按MOI 1000～2000给予，3～4周一次；静脉注射时其使用剂量为1ⅹ1013~2ⅹ1014vg，首剂可分多次给予，并按3~4周一次维持。
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整合素β3通过增强TGF-β1信号促进TGF-β1/H2O2/HOCl诱导非侵袭性肝癌细胞产生转移潜能;冯歆夏;《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》;20150715;摘要 *
氯喹对肝癌细胞体内外生长的影响及其与自噬的关系;胡若冰 等;《中国普通外科杂志》;20200125;第29卷(第1期);摘要、第66页 *

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