CN111417647A - 新型senolytic肽 - Google Patents

新型senolytic肽 Download PDF

Info

Publication number
CN111417647A
CN111417647A CN201880077189.0A CN201880077189A CN111417647A CN 111417647 A CN111417647 A CN 111417647A CN 201880077189 A CN201880077189 A CN 201880077189A CN 111417647 A CN111417647 A CN 111417647A
Authority
CN
China
Prior art keywords
arg
arg arg
lys
seq
senolytic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880077189.0A
Other languages
English (en)
Inventor
E·蒂姆辛
Y·阿希斯卡
U·塞泽曼
G·巴伊拉姆阿克皮纳
S·西纳罗古鲁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Etnans Ltd
Original Assignee
Etnans Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Etnans Ltd filed Critical Etnans Ltd
Publication of CN111417647A publication Critical patent/CN111417647A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation

Abstract

间歇性施用时选择性地杀死哺乳动物中衰老细胞的人工senolytic肽，一种以安全方式刺激复壮的方法。此外，使用所述人工senolytic肽通过选择性杀死衰老细胞来治疗衰老相关疾病和病症的方法。杀死衰老细胞减少炎性衰老相关分泌表型，从而显著减少代谢中的慢性炎症。可以用所述senolytic肽治疗的疾病和病症包括所有炎性起源的疾病，包括但不限于糖尿病，心血管疾病，肺部疾病，包括COPD；哮喘，肺气肿，呼吸困难；肾或肝功能不全，肝硬化，骨关节炎；衰老相关的眼科疾病和病症；和衰老相关的皮肤疾病和病症，糖尿病性溃疡；脊柱后凸；脊柱侧凸；体重减轻；毛发脱落；肌肉损失；骨密度损失；虚弱和/或健康度降低；听力损失诸如耳聋。

Description

新型senolytic肽
序列表引用
名称为“5442.15 Sequences File-247_ST25.txt”的序列表的ASCII文本文件(其大小为104KB，并于2018年9月30日创建且随附在此)的内容通过引用整体并入本文。
相关申请的交叉引用
本申请要求于2017年10月2日提交的名称为“A NOVEL EFFICACIOUS SENOLYTICAGENT”的美国申请序列号62/567,046，以及于2017年10月2日提交的名称为“METHOD FORUSING A NOVEL SENOLYTIC PEPTIDE FOR TREATMENT OF SENESCENCE RELATED DISEASESAND DISORDERS”的美国申请序列号62/567,076，于2017年10月3日提交的名称为“METHODFOR USING A NOVEL SENOLYTIC PEPTIDE FOR TREATMENT OF SENESCENCE-RELATEDDISEASES AND DISORDERS”的美国申请序列号62/567,617，以及于2018年7月30日提交的名称为“REPURPOSING CELL PENETRATING PEPTIDES AND THEIR NOVEL DERIVATIVES ANDIOPROMIDE AND IODO-ARYL CARBONATES FOR TREATMENT OF SENESCENCE-RELATEDDISEASES AND DISORDERS”的美国申请序列号US 62/712,031的优先权，其每一件均通过引用整体并入本文。
背景技术
衰老和细胞凋亡是一活化就限制肿瘤生长的机制。通过细胞凋亡，受损的细胞从生物体中清除，而衰老细胞虽然永久性地被限制进入细胞周期，但仍在生物体中存活。衰老可能与代谢活性的增加相关。在大多数情况下，衰老细胞会形成明确但异质性的分泌谱(secretory profile)，称为衰老相关分泌表型(SASP)。SASP需要释放促炎性细胞因子和趋化因子、破坏组织蛋白酶、可以影响干细胞和祖细胞功能的因子、止血因子和生长因子等。表达SASP的衰老细胞可以具有显著的局部和全身性致病作用。
SASP分泌包含一系列不同的蛋白质，包括几种已知在老化和年龄相关疾病中起作用的蛋白质，包括基质金属蛋白酶(诸如MMP3)、生长因子、趋化因子(诸如CCL2和CLL11)以及主要的白介素(IL)(诸如IL1、IL6和IL8)。超过某个阈值，这些因素可以显著地损害组织功能。衰老细胞的慢性SASP分泌可能损害邻近细胞的功能。因此，衰老细胞被认为是炎症的主要原因。从理论上讲，低而慢性的炎症水平是年龄相关的功能下降的驱动因素。与这一理论相一致，在许多快速老化的小鼠模型中衰老和SASP升高，并且经过测试，衰老清除会延缓其健康状态的下降。
另外，在衰老细胞中发生的突变可能导致改变，这些改变使那些衰老细胞逃脱细胞周期停滞并最终转化为致瘤细胞。因此，展示针对细胞凋亡的抗性并随着年龄增长而积累的衰老细胞成为抗老化研究的目标。此类研究的主要目的是发现可引导细胞衰老但不细胞凋亡的分子途径，并最终开发出干扰这些途径的物质(agent)，以使此类物质的施用将以安全且可预测的方式诱导衰老细胞的细胞凋亡。
叉头框(forkhead box，FOX)蛋白家族包含FOX O类亚家族(FoxO)，其具有4个哺乳动物成员：叉头框蛋白O1(FoxO1)(FKHR，FoxO1A)，叉头框蛋白O3(FoxO3)(FKHRL1，FoxO3A)，叉头框蛋白O4(FoxO4)(AFX，AFX1，MLLT7)和叉头框蛋白O6(FoxO6)。FoxO是在肿瘤抑制中起重要作用的转录因子。尽管事实上FoxO在衰老中的确切作用还未阐明，但对于FoxO4而言，已经公认其mRNA和蛋白质水平已响应衰老的遗传毒性活化而特别增加。与该观察结果一致，FoxO4功能对于遗传毒性损害的衰老活化至关重要，而FoxO4功能的丧失与衰老细胞的细胞凋亡相关。因此，FoxO4在细胞走向衰老或细胞凋亡方面具有关键作用。干扰这一关键分子FoxO4代表了阻断衰老和操纵细胞走向细胞凋亡的命运的有效途径。
衰老已被表征为一种复杂的现象，其可以被不同的信号活化。特别是，衰老的遗传毒性活化被表征为DNA-SCARS(具有增强衰老的染色质改变的DNA节段)的形成。当存在遗传毒性损伤时，FoxO4被募集到DNA-SCARS中，DNA-SCARS也包括肿瘤蛋白53(p53)作为主要成分。在所有人类肿瘤中～7％遇到V600E处的致癌性BRAF突变，而在黑素瘤中发生率特别高(～70％)。另外，发现黑素瘤细胞通常具有数量增加的含FOXO4的DNA-SCARS。已显示，BRAF突变促进FoxO4导致衰老，而同时其也引起p53的丝氨酸46(S46)的磷酸化，这种情况被认为非常有利于细胞凋亡而非衰老。对于DNA损伤的黑素瘤细胞，已表明干扰其FoxO4表达可导致细胞凋亡的显著增加。总的来说，这些发现指出FoxO4的存在抑制了通过S46磷酸化的p53的细胞凋亡。此外，已表明，即使缺乏FoxO4，抑制将p53的S46磷酸化的激酶也导致衰老细胞的细胞凋亡受损。这些特定的观察结果表明，FoxO4在抑制S46磷酸化的p53介导的细胞凋亡中起着关键作用。因此，如本文所讨论的，通过阻断FoxO4对p53的作用来消除衰老并诱导细胞凋亡是引人关注的。
FoxO4对使用天然存在的肽序列的senolytic疗法的抑制干扰p53的转录活性，从而导致不尽人意的副作用(包括肿瘤生长)。另外，完全衍生自人FoxO4蛋白的肽序列将保持与内源性FoxO4非常相似的特性(如DNA结合)，因此这些肽也将干扰FoxO的功能。
熟知的是，慢性炎症是许多疾病的起因。如上所述，SASP可能导致老年慢性炎症。但是，目前尚无通用的senolytic物质，但许多药物具有单独的衰老细胞抗凋亡途径(Senescent Cell Anti-apoptotic Pathway,SCAP)和细胞类型，其中一些药物是Dasatinib(其作用于依赖性受体/Src激酶/酪氨酸激酶并靶向原代人和小鼠前脂肪细胞(脂肪衍生的干细胞))，槲皮素(其作用于Bcl-2家族、p53/p21/丝氨酸和PI3K/AKT并靶向HUVEC、小鼠骨髓衍生的间充质干细胞)，Navitoclax(其作用于ABT263并靶向MR-90细胞、HUVEC)，Piperlongumin(其作用于A1331852/A1155463并靶向IMR-90细胞、HUVEC)和Fisetin(其作用于PI3K/AKT并靶向HUVEC)。本文所公开的Senolytic肽的分子途径与本段中提到的那些不同，因此将这些(一种或多种)Senolytic肽用于所述疾病和病症的方法是不同的。
发明内容
本文公开了合理设计的肽，称为“Senolytic肽”，其包括作为本申请的一部分包括在序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245的那些肽，其通过抑制FoxO4对p53的作用，有效诱导对象(诸如哺乳动物)的衰老细胞的细胞凋亡。在一些实施方案中，本文公开的Senolytic肽是(一种或多种)非天然肽，其被优化以将其对FoxO4(在衰老细胞中被上调)的干扰最大化。另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽可被设计以有效地阻断FoxO4的CR3结构域对在丝氨酸46处磷酸化的p53的DNA结合功能的干扰，特别是阻断对FoxO4的庞大的FH结构域的干扰。另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽可被合理设计以使其与p53的DBD、其他FoxO以及包含FoxO共有结合的DNA双链体的相互作用最小化。与现有技术相比，Senolytic肽展现了一种更安全的FoxO4抑制剂，其具有最小的由p53DBD、其他FoxO和DNA的干扰所产生的副作用。
在一些实施方案中，一种用于选择性地诱导衰老细胞的细胞凋亡和/或用于治疗衰老相关疾病或病症的方法，包含施用一种或多种Senolytic肽，该Senolytic肽使FoxO4与p53之间的相互作用最小化。在各种实施方案中，该方法可包含通过本文公开的治疗方案或其某种变型施用一种或多种Senolytic肽。在各种实施方案中，治疗方案可根据施用频率和/或剂量(例如，根据将在治疗上有效的剂量)而变化。可具体开发特定的治疗方案以治疗不同类型的衰老相关疾病或病症。衰老细胞中细胞凋亡的诱导(即，杀死衰老细胞)减少了炎性衰老相关分泌表型，并因此显著减少了代谢中的慢性炎症。此外，所述治疗可以安全的方式刺激整体的复壮(rejuvenation)。因此，可通过Senolytic肽治疗的疾病和病症可包括，但不限于，所有具有炎性起源的疾病，包括糖尿病，心血管疾病，肺部疾病，骨关节炎；衰老相关的眼科疾病和病症；以及衰老相关的皮肤疾病和病症。在本申请的相应标题下介绍了对所述疾病适用的治疗方案和个体化治疗。
在一些实施方案中，Senolytic肽不一定要持续存在才能发挥作用。例如，促存活途径的短暂中断，例如通过施用Senolytic肽，足以杀死衰老细胞。因此，在一些实施方案中，Senolytic肽适于间断性施用。
应当理解，前面的概述和下面的详细描述都仅仅是示例性和解释性的，而并不如权利要求那样限制本发明。
附图说明
图1A示出了由SWISS-MODEL预测的FoxO4的FH的同源性模型。
图1B示出了由SWISS-MODEL预测的FoxO4的CR3结构域的同源性模型。
图2示出了由HADDOCK预测的FoxH4的FH和CR3结构域形成的复合体。
图3A示出了由HADDOCK预测的p53DBD和FoxO4的FH结构域形成的复合体。
图3B示出了由HADDOCK预测的p53DBD和FoxO4的CR3结构域形成的复合体。
图4A示出了p53DBD和FoxO4的对接复合体的结合界面。为了进行比较，将图4A和4B所示的p53DBD重叠。
图4B示出了p53DBD及其共有DNA(PDB ID：3kmd)的复合体结构。如图4A和4B所示的p53的复合体结构证实了FoxO4的CR3结构域和DNA与p53DBD中的同一表面结合。为了进行比较，将图4A和4B所示的p53DBD重叠。
图5A示出了由HADDOCK预测的FoxO4的FH结构域与FoxO1的CR3结构域所形成的复合体。使用SWISS-MODEL对FoxO4的FH结构域(图2)和FoxO1的CR3结构域进行建模。为了进行比较，将此处和图2中所示的复合体的FH结构域重叠。
图5B示出了由HADDOCK预测的FoxO4的FH结构域与FoxO3的CR3结构域(图2)所形成的复合体。FoxO4的FH结构域是通过SWISS-MODEL获得的，而FoxO3的CR2C-CR3结构域是通过晶体结构获得的(PFB ID：2lqh)。为了进行比较，将此处和图2中所示的复合体的FH结构域重叠。
图6A示出了由FoxO4的FH结构域和其共有DNA所形成的复合体，其是从晶体结构获得的(PDB ID：3l2c)。将此处和图6B中所示的FH结构域重叠以进行比较。FoxO4的CR3结构域和FoxO共有DNA与FoxO4的FH结构域中的同一表面结合。
图6B示出了由HADDOCK预测的FoxO4的界面FH 602和CR3 601结构域所形成的复合体(图2所示的相同复合体)。将此处和图6B中所示的FH结构域重叠以进行比较。FoxO4的CR3结构域和FoxO共有DNA与FoxO4的FH结构域中的同一表面结合。
图7A示出了NMR研究(Wang et al.,2008)的关键发现，揭示了FoxO4的CR3结构域分别与FoxO4的FH结构域和p53的分子内和分子间相互作用。FH代表叉头(Forkhead)，其为FoxO4的N端的DNA结合结构域。CR3代表保守区3，其被发现位于FoxO4的C端。p53DBD表示p53的DNA结合结构域。
图7B示出了所公开主题的原理。(A)T.FH代表叉头，其为FoxO4的N端的DNA结合结构域。CR3代表保守区3，其被发现位于FoxO4的C端。p53DBD表示p53的DNA结合结构域。根据如图7A所示的NMR研究的结果，在p53介导的细胞凋亡上进行切换的基本原理取决于设计的肽对FoxO4的CR3的饱和(抑制作用)，该肽具有与FH结构域相似的结合表面。
图8A示出了FoxO4的FH结构域的可能的相互作用配偶体。FoxO4的FH结构域可以与FoxO共有DNA相互作用。FH代表叉头，其为FoxO4的N端的DNA结合结构域。CR3代表保守区3，其被发现位于FoxO4的C端。p53DBD表示p53的DNA结合结构域。针对图8A-D中所示的多靶点对这些肽进行了优化，从而使这些肽增加了对FoxO4的CR3结构域的亲和力(图8D)，但减少了对FoxO4的CR3结构域(图8B)、对共有FoxO4 DNA(图8A)和p53DBD(图8C)的亲和力。将所设计的肽对FoxO4的特异性最大化，其以肽表示的阴影标记，而对任何其他相互作用配偶体的特异性则以叉号表示保持在最低水平。
图8B示出了FoxO4的FH结构域的可能的相互作用配偶体。FoxO4的FH结构域可以与其他由星号表示的FoxO的CR3结构域相互作用。FH代表叉头，其为FoxO4的N端的DNA结合结构域。CR3代表保守区3，其被发现位于FoxO4的C端。p53DBD表示p53的DNA结合结构域。针对图8中所示的多靶点对这些肽进行了优化，从而使这些肽增加了对FoxO4的CR3结构域的亲和力(图8D)，但减少了对FoxO4的CR3结构域(图8B)、对共有FoxO4 DNA(图8A)和p53DBD(图8C)的亲和力。将所设计的肽对FoxO4的特异性最大化，其以肽表示的阴影标记，而对任何其他相互作用配偶体的特异性则以叉号表示保持在最低水平。
图8C示出了FoxO4的FH结构域的可能的相互作用配偶体。FoxO4的FH结构域可以与p53的DBD相互作用。FH代表叉头，其为FoxO4的N端的DNA结合结构域。CR3代表保守区3，其被发现位于FoxO4的C端。p53DBD表示p53的DNA结合结构域。针对图8中所示的多靶点对这些肽进行了优化，从而使这些肽增加了对FoxO4的CR3结构域的亲和力(图8D)，但减少了对FoxO4的CR3结构域(图8B)、对共有FoxO4 DNA(图8A)和p53DBD(图8C)的亲和力。将所设计的肽对FoxO4的特异性最大化，其以肽表示的阴影标记，而对任何其他相互作用配偶体的特异性则以叉号表示保持在最低水平。
图8D示出了FoxO4的FH结构域的可能的相互作用配偶体。FoxO4的FH结构域可以与FoxO4的CR3结构域相互作用。FH代表叉头，其为FoxO4的N端的DNA结合结构域。CR3代表保守区3，其被发现位于FoxO4的C端。p53DBD表示p53的DNA结合结构域。针对图8中所示的多靶点对这些肽进行了优化，从而使这些肽增加了对FoxO4的CR3结构域的亲和力(图8D)，但减少了对FoxO4的CR3结构域(图8B)、对共有FoxO4 DNA(图8A)和p53DBD(图8C)的亲和力。将所设计的肽对FoxO4的特异性最大化，其以肽表示的阴影标记，而对任何其他相互作用配偶体的特异性则以叉号表示保持在最低水平。
图9示出了来自ProteomicsDB数据库的热图，其显示了基于z评分的mRNA表达谱在各种组织中FoxO1、3和4的表达水平的差异。
图10A示出了如HADDOCK所预测的，包含1至35位的残基的FH的N端(FH-Nter1-35)与FoxO DNA的对接。将图10A、B、C、D和E所示的FH-Nter1-35的骨架重叠。
图10B示出了如HADDOCK所预测的，包含1至35位的残基的FH的N端(FH-Nter1-35)与FoxO1的CR2C-CR3的对接。将图10A、B、C、D和E所示的FH-Nter1-35的骨架重叠。
图10C示出了如HADDOCK所预测的，包含1至35位的残基的FH的N端(FH-Nter1-35)与FoxO3的CR3的对接。将图10A、B、C、D和E所示的FH-Nter1-35的骨架重叠。
图10D示出了如HADDOCK所预测的，包含1至35位的残基的FH的N端(FH-Nter1-35)与p53DBD的对接。将图10A、B、C、D和E所示的FH-Nter1-35的骨架重叠。
图10E示出了如HADDOCK所预测的，包含1至35位的残基的FH的N端(FH-Nter1-35)与FoxO4的CR3的对接。将图10A、B、C、D和E所示的FH-Nter1-35的骨架重叠。
图11A示出了肽从天然FoxO4突变的位置。序列表中显示为SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245的肽中存在的突变由与FoxO4的CR3结合的FH-Nter1-35骨架中的球表示。
图11B示出了肽从天然FoxO4突变的位置。序列表中显示为SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245的肽中存在的突变由与DNA结合的FH-Nter1-35骨架中的球表示。
图11C示出了肽从天然FoxO4突变的位置。序列表中显示为SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245的肽中存在的突变由与FoxO1的CR3结合的FH-Nter1-35骨架中的球表示。
图11D示出了肽从天然FoxO4突变的位置。序列表中显示为SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245的肽中存在的突变由与FoxO3的CR2C-CR3结合的FH-Nter1-35骨架中的球表示。
图11E示出了肽从天然FoxO4突变的位置。序列表中显示为SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245的肽中存在的突变由与p53DBD结合的FH-Nter1-35骨架中的球表示。
图12A示出了由FH-Nter1-35与FoxO4的CR3所形成的复合体的结合界面处的分子相互作用。
图12B示出了由FH-Nter1-35与FoxO DNA所形成的复合体的结合界面处的分子相互作用。
图12C示出了由FH-Nter1-35与FoxO1的CR3所形成的复合体的结合界面处的分子相互作用。
图12D示出了由FH-Nter1-35与FoxO3的CR2C-CR3所形成的复合体的结合界面处的分子相互作用。
图12E示出了由FH-Nter1-35与p53DBD所形成的复合体的结合界面处的分子相互作用。
图13A示出了p53 TAD(PDB ID:2b3g)与FoxO4的FH结构域的复合体相互作用。将S46突变为天冬氨酸(D)，作为磷酸盐模拟物(phosphate mimic)。
图13B示出了p53 TAD(PDB ID:2b3g)与FH-Nter1-35的复合体相互作用。将S46突变为天冬氨酸(D)，作为磷酸盐模拟物。序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245所示的肽可有效地减弱这些相互作用以增强S46磷酸化的p53的细胞凋亡功能。
图14A示出了应按照脉冲方案(Impulse Regime)中所提供的指导施用Senolytic肽的剂量。在该方案中，治疗有效剂量和施用频率可有所不同。该脉冲方案提供了任选的后续治疗过程，其中可增加或减少治疗有效剂量。图14A描述了至少六项不同的考虑事项：(1)治疗周期(由对象的初步评估、治疗有效剂量的施用和最终评估组成)；(2)在1、2或3天内递送的治疗有效剂量；(3)如果衰老细胞减少不满意，可能需要任选的进一步的(一个或多个)治疗周期；(4)衰老清除间隔2-4周；(5)通过活检样品进行的初步衰老评估；以及(6)通过活检样品进行的最终衰老评估。
图14B示出了应按照持续方案(Sustained Regime)中所提供的指导施用Senolytic肽的剂量。在该方案中，治疗有效剂量和施用频率可有所不同。该持续方案提供了任选的后续治疗过程，其中可增加或减少治疗有效剂量。图14B描述了：(1)治疗周期(由对象的初步评估、治疗有效剂量的施用和最终评估组成)；(2)在1、2或3周内递送的治疗有效剂量；(3)如果衰老细胞减少不满意，可能需要任选的进一步的(一个或多个)治疗周期；治疗有效剂量可重新调整；(4)衰老清除间隔2-4周；(5)通过活检样品进行的初步衰老评估；以及(6)通过活检样品进行的最终衰老评估。
图14C示出了应按照温和方案(Gentle Regime)中所提供的指导施用Senolytic肽的剂量。在该方案中，治疗有效剂量和施用频率可有所不同。该温和方案提供了任选的后续治疗过程，其中可增加或减少治疗有效剂量。图14C描述了：(1)治疗周期(由对象的初步评估、治疗有效剂量的施用和最终评估组成)；(2)在3或3周内递送的治疗有效剂量；(3)如果衰老细胞减少不满意，可能需要任选的进一步的(一个或多个)治疗周期。治疗有效剂量可重新调整；(4)衰老清除间隔2-4周；(5)通过活检样品进行的初步衰老评估；以及(6)通过活检样品进行的最终衰老评估。
图15A示出了通过用100nM Doxorubicin处理产生的SA-B-Gal阳性的衰老IMR90细胞。
图15B示出了在序列表中以SEQ ID NO：11所列出的肽对Doxorubicin诱导的衰老和非衰老IMR90细胞的Senolytic作用。
图15C示出了FoxO4 DRI对Doxorubicin诱导的衰老和非衰老IMR90细胞的Senolytic作用。
图16A示出了通过用100nM Doxorubicin处理产生的SA-B-Gal阳性的衰老WI-38细胞。
图16B示出了在序列表中以SEQ ID NO：11所列出的肽对Doxorubicin诱导的衰老和非衰老WI-38细胞的Senolytic作用。
图16C示出了FoxO4 DRI对Doxorubicin诱导的衰老和非衰老WI-38细胞的Senolytic作用。
图17A示出了实验设置。
图17B示出了在Senolytic肽处理之前和之后施用的Doxorubicin和序列表中SEQID NO：11所列出的肽所处理的小鼠，分别显示了脱毛和脱毛的逆转。
图17C示出了盐水处理、Doxorubicin+PBS处理以及Doxorubicin+序列表中SEQ IDNO：11所列出的肽处理的小鼠肾脏样品的SA-B-Gal染色。将每个肾脏在液氮中速冻，立即切片(10μm)并通过SA-β-GAL染色进行染色。取中央矢状切片，并从相似的深度拍摄了多个图像。
图18示出了本文公开的肽包含至少一个突变的位置。
图19示出了根据急性全身毒性试验(Acute Systemic Toxicity Test)(ISO10993-＝11)从血液样品测得的血液学参数，这些血液样品从以1mg/kg、10mg/kg、50mg/kg和100mg/kg体重的剂量施用SEQ DI NO：11的BALB/c小鼠采集。显示了统计学上的显著变化(P<0.05)。
图20A示出了肽(SEQ ID NO：12)对Doxorubicin诱导的衰老和非衰老WI-38细胞的Senolytic作用。
图20B示出了肽(SEQ ID NO：12)对Doxorubicin诱导的衰老和非衰老IMR90细胞的Senolytic作用。
具体实施方式
关于以下公开，适用以下定义：
如本文所用，“施用(administration)”或“施用(administering)”是指一种通过合适的施用方式(例如，呼吸道内，表面，口服，静脉内，腹腔内，肌内，含服，直肠，舌下)给与对象(诸如脊椎动物或无脊椎动物，包括哺乳动物、鸟类、鱼类或两栖动物)一定剂量的化合物或组合物的方法。在本文将公开的各种实施方案中，优选的施用方式可以根据各种因素(诸如所施用的组分，靶向的组织部位(例如，疾病或病症所在、存在或表现出来的组织)，所涉及的特定疾病或病症，以及疾病或病症的严重程度)而变化。
如本文所用，“衰老相关疾病或病症”是指，但不限于，以下任何疾病或病症：肾功能障碍，脊柱后凸，椎间盘突出，虚弱，毛发脱落，听力损失，视力损失(失明或视力损伤)，肌肉疲劳，皮肤病症，皮肤痣，糖尿病，代谢综合征和少肌症。老化的一个突出特征是在分子、细胞、组织和机体水平上发生的逐渐的功能丧失或变性。年龄相关性变性引起公认的病理，诸如少肌症，动脉粥样硬化和心力衰竭，骨质疏松症，肺功能不全，肾衰竭，包括黄斑变性在内的神经变性，阿尔茨海默氏病和帕金森氏病等。尽管差异很大，但从大约人类的50岁和哺乳动物的中年开始，年龄相关病理通常以近似指数的动力学变得更为普遍。
如本文所用，“自身免疫性疾病或病症”是指自身免疫性疾病或病症，诸如，但不限于，骨质疏松症，银屑病，口腔粘膜炎，类风湿性关节炎，炎性肠病，湿疹，脊柱后凸，椎间盘突出，肺部疾病，COPD和特发性肺纤维化。
如本文所用，“生物样品”或“活检样品”是指通过侵入性、非侵入性或微创方法从对象获得的生物样品，例如，血液样品，血清样品，血浆样品，活检样品，体液(例如，肺灌洗液，腹水，粘膜洗涤液，滑液，玻璃体液或脊髓液)，骨髓，淋巴结，组织外植体，皮肤组织样品，阴道组织，器官培养物或来自对象的任何其他组织或细胞制备物。
如本文所用，“癌症”是指，但不限于，是实体瘤或液体瘤的癌症。实体瘤可包括，例如，前列腺癌，睾丸癌，乳腺癌，脑癌，胰腺癌，结肠癌，甲状腺癌，胃癌，肺癌，卵巢癌，卡波济氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)，皮肤癌(包括鳞状细胞皮肤癌)，肾癌，头颈癌，咽喉癌，鳞癌(例如，在鼻、口、咽喉等潮湿的黏膜内层形成的鳞癌)，膀胱癌，骨肉瘤(骨癌)，宫颈癌，子宫内膜癌，食道癌，肝癌，以及肾癌，且还包括黑素瘤细胞、前列腺癌细胞、睾丸癌细胞、乳腺癌细胞、脑癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、甲状腺癌细胞、胃癌细胞、肺癌细胞、卵巢癌细胞、卡波济氏肉瘤细胞、皮肤癌细胞、肾癌细胞、头或颈癌细胞、咽喉癌细胞、鳞癌细胞、膀胱癌细胞、骨肉瘤细胞、宫颈癌细胞、子宫内膜癌细胞、食道癌细胞、肝癌细胞或肾癌细胞的转移。液体瘤可包括，例如，发生在血液、骨髓和淋巴结中的癌症，且通常包括白血病(髓系和淋巴细胞)，包括急性淋巴母细胞白血病(ALL)，急性髓系白血病(AML)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，慢性髓细胞性白血病(CML)和毛细胞白血病淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma))和黑素瘤，包括多发性骨髓瘤)。
如本文所用，“心血管疾病”是指，但不限于，心绞痛，心律不齐，动脉粥样硬化，心肌病，充血性心力衰竭，冠状动脉疾病(CAD)，颈动脉疾病，心内膜炎，心脏病发作(冠状动脉血栓形成，心肌梗塞[MI])，高血压/高血压(high blood pressure/hypertension)，主动脉瘤，脑动脉瘤，心脏纤维化，心脏舒张功能障碍，高胆固醇血症/高脂血症，二尖瓣脱垂，周围性血管疾病(例如，外周动脉疾病(PAD))，心脏应激抵抗(cardiac stress resistance)，以及中风。
如本文所用，“炎性或自身免疫性疾病或病症”是指，但不限于，炎性疾病或病症，诸如以非限制性实例的方式，骨关节炎或自身免疫性疾病或病症，诸如以非限制性实例的方式，骨质疏松症，银屑病，口腔粘膜炎，类风湿性关节炎，炎性肠病，湿疹，脊柱后凸，椎间盘突出，和肺部疾病，COPD和特发性肺纤维化。
如本文所用，“拟肽(Peptidomimetic)”是指模拟天然肽并具有与靶标相互作用并发挥相同生物学作用的能力的某些化学化合物。拟肽经常被用来克服与天然肽的内在特性有关的问题，诸如抗蛋白水解降解的稳定性。在拟肽的实例中包括肽键替代物和β-转角二肽模拟物。
如本文所用，“肺部疾病和病症”是指，但不限于，特发性肺纤维化(IPF)，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，哮喘，囊性纤维化，支气管扩张和肺气肿。
如本文所用，“衰老相关的皮肤疾病和病症”是指，但不限于，银屑病，白癜风和湿疹，其也是炎性疾病并将更详细地介绍。其他可能与衰老有关的皮肤疾病和病症包括：松弛症(rhytides)(由于老化引起的皱纹)；瘙痒(与糖尿病和老化有关)；感觉迟钝(dysesthesia)(与糖尿病和多发性硬化症有关的化疗副作用)；银屑病(如前所述)及其他丘疹鳞屑性疾患(papulosquamous disorder)，例如红皮病，扁平苔癣和苔藓样皮肤病；特应性皮炎(湿疹的一种形式，并与炎症有关)；湿疹发作(eczematous eruption)(经常在老化的对象中观察到，并与某些药物的副作用有关)。其他与衰老相关的皮肤疾病和病症包括皮肤淋巴瘤，嗜酸性皮肤病(与某些种类的血液学癌症有关)；反应性嗜中性皮肤病；天疱疮，皮肤狼疮，类天疱疮以及皮肤的其他免疫大疱性皮肤病纤维组织细胞增生(fibrohistocytic proliferation)。
如本文所用，“Senolytic”是指一种或多种Senolytic肽或Senolytic物质。
如本文所用，“衰老相关疾病和病症”是指，但不限于，衰老有关疾病或病症，炎性疾病或病症，自身免疫性疾病或病症，心血管疾病或病症，肺部疾病或病症，眼科疾病或病症，代谢疾病或病症，神经疾病或病症，衰老相关的皮肤疾病或病症，肾脏疾病或病症。
如本文所用，“Senolytic物质”是指，但不限于：Dasatinib，槲皮素，Navitoclax，Piperlongumin，Fisetin，BCL-XL抑制剂A1331852和A1155463，FoxO4有关的肽。
如本文所用，“Senolytic肽”是指本文所公开的新型人工肽序列，包括序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245所示的肽，更具体地，SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12所示的肽，更具体地，SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：5，SEQID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9，或SEQ ID NO：10，或SEQ ID NO：11，或SEQ ID NO：12所示的肽，及其衍生物。
如本文所用，“对象”是指治疗或疗法的靶标，包括但不限于，人类或非人类哺乳动物，狗，猫，小鼠，大鼠，牛，绵羊，猪，山羊，非人灵长类动物或鸟类(例如，鸡)，以及任何其他脊椎动物或无脊椎动物。
如本文所用，“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指出于治疗目的施用组合物。
本文公开了一种在原子分辨率下FoxO4和p53的结构域之间相互作用网络的成功模型，通过该模型实现了选择性抑制FoxO4对p53作用。
FoxO4和p53均具有多个功能不同的结构域。关于FoxO4与p53的可能的相互作用的现有技术研究表示，FoxO4可以通过多个结构域与p53相互作用。不受理论的束缚，FoxO4与p53之间的这些潜在相互作用可解释FoxO4对p53细胞凋亡功能产生抑制的原因。因此，在合理的设计中，从原子分辨率上阐明了FoxO4和p53的可能复合体。
FoxO蛋白家族表达相似的结构域组成，因此它们包含名为叉头(FH)结构域的DNA结合结构域以及名为CR1、CR2和CR3用于反式激活的C端结构域。FH和CR3结构域彼此相互作用，并且这些相互作用的结合表面已在使用FoxO3的基于NMR的研究中解析。FH包括有助于这种分子内相互作用的碱性(带正电荷)和疏水性氨基酸(R153，R154，W157和G158)，而包括酸性(带负电荷)和疏水性氨基酸(从D623到M633的氨基酸)的CR3的中央部分与FH相互作用。
这项NMR研究还清楚显示了FoxO3对p53的作用。基本上，体外拉下(pull down)试验用于鉴定p53和FoxO3的分子间相互作用的(一个或多个)关键结构域。根据这些结果，发现p53的DNA结合结构域(p53DBD)对于与FoxO3的结合是必需的，而包括CR3结构域的FoxO3的C端部分被发现是对于p53相互作用最关键的结构域。进一步的实验表明，添加p53DBD破坏了FoxO3的FH与CR3结构域之间的分子内相互作用，因为FH-CR3和p53DBD-CR3复合体的结合亲和力彼此相当。如通过NMR转移实验所解析的，FoxO3的CR3结构域的结合界面在由FoxO3的FH结构域和p53DBD形成的两种复合体中均重叠。这一特殊发现暗示FoxO3的FH结构域与p53DBD竞争结合至FoxO3的CR3结构域的同一表面。隔离CR3结构域，特别是从其与p53DBD结合的表面隔离，将规避其与p53DBD的相互作用，释放p53DBD及其转录活性以启动细胞凋亡。
FoxO蛋白是非常相似的蛋白，其具有高度的序列相似性和结构域组成。通过在小鼠中的体内实验，在功能水平上进一步观察蛋白质序列中的这种相似性。所产生的功能性丰余将表明FoxO3上的发现对于FoxO4的有效性。因此，结合从NMR发现获得的见解，阻断FoxO4的CR3结构域具有抑制FoxO4与p53之间的相互作用并因此在衰老细胞中释放p53的潜能。
p53结构或途径的干扰可能对细胞造成有害的后果，因此应通过任何方式避免。然而，结构上的发现表明FoxO4的CR3结构域与p53DBD结合并可能抑制其功能。阻断CR3结构域将抑制“对p53DBD的抑制”，并将促进p53DBD的功能。相反，实验表明，通过名为gankryin的癌蛋白促进对p53的抑制，增强了肿瘤的生长。gankyrin作为MDM2的启动子，而MDM2是熟知的p53抑制剂。因此，在没有任何直接干扰p53蛋白的情况下，对FoxO4的CR3结构域的干扰将具有消除所述的FoxO4对p53介导的细胞凋亡的抑制，从而根除衰老。
在一些实施方案中，FH-CR3复合体模型在原子分辨率下解析了对CR3结构域的抑制。使用SWISS-MODEL生成此复合体的亚基。使用晶体结构(PDB ID:3l2c)作为模板对FoxO4的全长FH结构域(PRKGGSRRNAWGNQSYAELISQAIESAPEKRLTLAQIYEWMVRTVPYFKDKGDSNSSAGWKNSIR HNLSLHSKFIKVHNEATGKSSWWMLNPE，作为SEQ ID NO：246包括在序列表中)的结构进行建模。尽管FoxO的C端在溶液中被识别为非结构化的，但通过二级结构预测算法和圆二色性光谱法预测FoxO4的CR3的中央核心区域为螺旋形式。
此外，一项解析FoxO3(PDB ID:2lqh)的C端CR2和CR3(CR2C-CR3)结构域的结晶研究表明与这些预测平行的结果，并显示CR3区域形成螺旋结构。因此，当对CR3结构域(QDLDLDMYMENLECDMDNIISDLMDEGEGLDFNFEPDP，作为SEQ ID NO：247包括在序列表中)进行建模时，此结构(PDB ID:2lqh)被用作模板。FoxO4的FH结构域和CR3结构域的这些模型分别如图1A和1B所示。通过使用HADDOCK，将这些模型用于分子对接模拟。从NMR研究中检索了包括在HADDOCK计算中的活性残基。所得复合体示于图2中，其示出了CR3结构域201和FH结构域202。
在一些实施方案中，揭示了FoxO4的FH结构域与p53的DBD的相互作用。由
(i)FoxO4的FH
(ii)FoxO4的CR3
形成的p53的DBD的复合体通过FH(图1A)、FoxO4的CR3(图1B)和晶体结构(PDB ID:3kmd)的同源性模型构建。FH和CR3的活性残基取自NMR研究，而p53DBD的活性残基被预测为表面上带正电荷的残基。尽管FH-p53DBD复合体的结合界面未被解析，但由于FH结构域中带正电荷的残基数目高，在p53上带负电荷的相互作用表面被标记为针对FH相互作用具有活性。明确地，选择R273作为针对CR3相互作用的p53DBD的活性残基，而选择E221和E224针对FH相互作用。图3A和3B分别给出了复合体FH-p53和CR3-p53的HADDOCK计算结果。当在两个模型中p53DBD303重叠时，表明FH 302和CR3 301与不同的p53DBD 303表面结合(图3A和3B)。该观察结果揭示了全长FoxO4与p53DBD 403相互作用的模型(图4A)。CR3结构域401与p53 403的DBD相互作用(图4A)的表面与p53 403(PDB ID:3kmd)的DNA 405相互作用(图4B)的表面相同。该特定观察结果表明，FoxO4 402的CR3 401与p53 403的DBD的相互作用使p53403隔离了转录活性，突出了阻断CR3 401以释放p53 403活性的重要性。这些结构模型阐明了FoxO4引起细胞凋亡抑制的分子机制，突出了阻断FoxO4的CR3结构域401在促进p53 403的DNA结合功能中的重要性。
在一些实施方案中，揭示了FoxO4的FH结构域与其他FoxO成员的CR3结构域之间的可能相互作用。由于FoxO成员的功能性丰余，与其他FoxO和DNA的相互作用也规避了对FoxO4的CR3结构域的抑制。因此，为了增强设计仅针对FoxO4的特异性，还对
(i)FoxO4的FH与另一个FoxO成员：FoxO1的CR3之间的相互作用，
(ii)FoxO4的FH与另一个FoxO成员：FoxO3的CR3之间的相互作用，
(iii)FoxO4的FH与DNA之间的相互作用
进行了建模。第一复合体是由HADDOCK使用SWISS-MODEL生成的FH(图1A)和FoxO1的CR3结构域501(图5A)的同源性模型生成的。第二复合体是由HADDOCK使用FH(图1A)和FoxO3的CR3的晶体结构(PDB ID：2lqh)的同源性模型生成的。从NMR转移实验获得活性残基。由FoxO4的FH 502与FoxO1和FoxO3的CR3 501形成的FoxO1-FoxO4和FoxO3-FoxO4复合体在图5A中得到证实。FoxO1的CR3 501(图5A)和FoxO3的CR2C-CR3 511(图5B)结合的表面与FoxO4的FH 202和CR3 201(图2)结合的表面相同。不同FoxO蛋白的结合表面的这种相似性暗示其他FoxO成员可能会干扰对FoxO4的CR3的抑制。第三复合体由晶体结构(PDB ID:3l2c)获得，并在图6A中显示(FoxO4的FH 602，DNA 605)。
所用复合体列于表1。
表1.复合体结构
Figure BDA0002513558240000131
[1]Wang,F.,et al.,Biochemical and structural characterization of anintramolecular interaction in FOXO3a and its binding with p53.J Mol Biol,2008.384(3):p.590-603
这些模型使得能够在原子分辨率下进行结构研究，并优化了Senolytic肽的选择性。由于发现FH结构域的N端在所有复合体中都相互作用，因此在合理设计CR3抑制中选择FH结构域的N端。根据全长FH结构域结构的目测确定长度。FH结构域的N端具有包含S15和S26之间的残基的单个α螺旋。进行中的二级结构是与第二α螺旋连接的β桥，该第二α螺旋由A35和V45之间的残基形成。在设计CR3抑制肽时，考虑到较长的肽可能引起的溶解性问题，选择FoxO4的FH结构域的前35个氨基酸，并因此选择了第一螺旋。
NMR研究结果汇总于图7A中，其表明FoxO4的FH结构域与FoxO4的CR3在同一带负电荷的表面相互作用，该表面以相当的亲和力用于CR3与p53DBD的相互作用。在肽抑制剂的设计中，选择FoxO4的FH结构域作为模板结构，以阻断FoxO4的CR3结构域(图7B)。基于FoxO4的FH结构域所设计的肽可能仍具有天然FH结构域所发挥的功能作用中的一些。由于与FoxO4的FH结构域形成的其他复合体的干扰，这种情况将导致副作用。
在一些实施方案中，本发明人提出通过设计的肽选择性抑制FoxO4，所设计的肽由于减少了其他相互作用配偶体的干扰而显示出最大的FoxO4抑制水平并且还具有最小的副作用。为此，分析了所设计的肽的所有可能的相互作用配偶体(图8)。
FoxO参与许多重要的细胞功能。DNA结合，作为FoxO蛋白的重要功能之一，由FH结构域调节。因此，任何模拟FoxO4的FH结构域的化合物也将与FoxO共有DNA结合，导致对FoxO的DNA结合的干扰(图8A)。
所述FoxO成员中的功能性丰余将导致在FoxO4的FH结构域与其他FoxO的CR3结构域之间形成异结构域相互作用(图8B)，并因此也将导致对其他FoxO的抑制。来自Proteomicdb的热图比较了各种组织中FoxO1、3和4表达的差异。根据这些表达谱，非衰老细胞中FoxO4仅在全身略微表达，而在非衰老细胞(尤其是在诸如肝脏，胰腺，结肠，卵巢，淋巴结和膀胱的组织中发现的非衰老细胞)中，FoxO1和FoxO3的表达更高(图9)。该分析谱表明，非特异性抑制除FoxO4之外的其他FoxO的CR3结构域将在正常细胞中导致不良副作用。本质上，使用FoxO基因敲除小鼠的体内实验表明，这些蛋白质的缺失会导致肿瘤生长。如果删除更多FoxO(将FoxO1/FoxO3/FoxO4突变小鼠与FoxO3-/-小鼠进行比较)，则观察到更频繁、更快(早期)的癌症生长。根据关于FoxO3的另一最新发现，对其的抑制作用可促进黑素瘤细胞的存活途径和转移。与干扰p53导致不良后果的范例类似，对其他FoxO的任何干扰都将导致不良后果，例如皮肤肿瘤。因此，为消除这种后果的风险，将Senolytic肽(例如，序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245所示的肽)进一步优化，以使其与其他FoxO(即FoxO1和FoxO3)的相互作用最小化(图8B)。
还发现FH结构域与p53DBD相互作用，尽管与CR3结构域结合相比，这种相互作用相对较弱。因此，所设计的肽也可能干扰p53(图8D)。因此，旨在将所设计的肽的这些潜在的相互作用最小化以避免不良后果。在设计过程中，所选择的肽与DNA、其他FoxO成员以及p53DBD的相互作用最小，而其与FoxO4的CR3的相互作用则被最大化(图8E)。在一些实施方案中，选择Senolytic肽(例如，序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245所示的肽)仅对FoxO4的CR3具有特异性，而对其他配偶体(包括p53DBD，DNA，FoxO1和FoxO3)无特异性。
从图1A中解析的模型中获得了包含1至35残基的FoxO4的FH结构域的N端(FH-Nter1-35)。使用HADDOCK，将FH-Nter1-35重新对接至DNA(图10A)，FoxO1的CR3(图10B)，FoxO3的CR3(图10C)，p53DBD(图10D)和FoxO4的CR3结构域(图10E)。分析了所有这些复合体的结合界面，并确定了FH-CR3 FoxO4复合体的稳定突变预测(图10E)。对于其余的复合体，选择去稳定或中性突变。
在一些实施方案中，为了增强所公开的(一种或多种)肽对FoxO4的CR3结构域的选择性，选择FoxO4的FH结构域和FoxO4的CR3结构域之间的相互作用的稳定突变(图10E)。从这个角度来看，FoxO4的FH和CR之间的相互作用网络如图12A所示。根据该网络，通过将S6、N9、N13、S15、A17、E18和/或S21突变为带正电荷的氨基酸(例如K或R)，增强所设计的肽对FoxO4的CR3的结合亲和力。图12A的左图显示，如果在S6、N9和N13位置取代了带正电荷的氨基酸，则天冬氨酸D4或D25中的任一个与在S6、N9和N13位置的带正电荷的突变之间的潜在静电相互作用会使复合体稳定。类似地，图12A的右图显示，CR3结构域的带负电荷的氨基酸(D22和D35)与在位置S15、A17、E18和/或S21处带正电荷的突变之间可能的静电相互作用将增强结合。在一些实施方案中，本文所公开的Senolytic肽(例如，序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245所示的肽)中存在的突变可有效地使这些肽对FoxO4的特异性最大化。
在肽可以与其他配偶体(如DNA 1105，其他FoxO的CR3结构域1101(1104和1105)以及p53DBD1103)形成的所有其他复合体中，也研究了这些位置(图11A-E)。结构研究表明，由于N13和Q14位于FH-Nter1-35与DNA的结合界面上，将其突变为较大的氨基酸(如K或R)会破坏肽与DNA 1205的结合(图12B)。在所选择的进行突变的氨基酸中；A17、E18和S21位于FH-Nter1-35和FoxO1的结合界面上(图12C)；在由FoxO3形成的复合体的界面处发现N13和S21(图12D)；而Y16和Q22位于由p53DBD形成的复合体的界面上(图12E)。与突变对DNA与FH-Nter1-35相互作用的影响得出的结论相似(图12B)，将这些氨基酸突变为带正电荷的氨基酸，如在(一种或多种)Senolytic肽中，将破坏由DNA、其他FoxO(FoxO1和FoxO3)的CR3结构域和p53DBD形成的复合体相互作用，而其将增强由FoxO4形成的相互作用。
p53在衰老中的作用已被很好地表征。尽管p53被认为是衰老的典型诱因，但还发现p53可以通过将其转化为静止(quiescence)(一种衰老的可逆形式)来抑制衰老。本质上，结果表明，MDM2抑制剂nutlin 3对p53的反式激活抑制了衰老。作为衰老诱导剂和抑制剂的p53这种双重作用，突显了p53的反式激活功能在阻断细胞衰老中的重要性。
反式激活结构域(TAD)在其N端，并且对于与转录共活化剂和共阻遏物的相互作用很重要。TAD由两个同源亚结构域组成，TAD1(残基1–40)和TAD2(残基41–61)，其均含有对于许多调节转录的蛋白质普遍的保守的Φ-X-X-Φ-Φ序列基序(Φ＝疏水性氨基酸，以及X＝任何氨基酸)。TAD之后是富含脯氨酸的区域(残基63-97)，然后是表现出序列特异性DNA结合的高度保守的DNA结合结构域(残基102-292)。在其活化状态下，p53在蛋白质的N端和C端区域均被广泛修饰。这些修饰，特别是N端反式激活结构域中丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化，通过调节蛋白质-蛋白质相互作用的亲和力来影响p53的稳定性和活性。这些修饰可以对p53产生正面或负面影响，并为p53反式激活结构域的不同相互作用增加第二层复杂调控。
p53的磷酸化会影响其在细胞核中的保留，转录活性，DNA结合，降解以及与共活化剂的相互作用。本质上，p53在丝氨酸46上的磷酸化决定了启动子选择以及细胞凋亡是减弱还是放大。丝氨酸46的磷酸化对p53与MDM2的相互作用没有影响，该观察结果也可以从显示MDM2与p53的TAD1相互作用而S46位于TAD2中的结构发现中推断出来。这种磷酸化消除了自动调节反馈回路(通过该回路MDM2抑制p53的细胞凋亡功能并诱导PTEN)，其有利于细胞凋亡。此外，分析了p53TAD的全基因组水平的磷酸化，特别是在两个位置，位于TAD2的丝氨酸46(pS46)和位于TAD1的丝氨酸15(pS15)。相应地，这些发现表明，p53的磷酸化S46与DNA结合的程度在走向细胞凋亡的细胞中显著更高，而S15处的磷酸化程度却保持不变。总的来说，这些结果强调了p53TAD中磷酸化的S46对于细胞凋亡的重要性。
鉴于表明FoxO4抑制衰老细胞中S46处磷酸化的p53介导的细胞凋亡的发现，FoxO4与S46处磷酸化的p53TAD的结合将是FoxO4对p53的抑制作用之一。因此，FoxO4的释放，特别是从在S46处磷酸化的p53TAD的表面上的释放，将规避FoxO4对p53的这种抑制作用，从而释放p53的细胞凋亡功能。
为了模拟这种相互作用，分析了p53和FoxO4的原子结构。p53TAD在溶液中是非结构化的。然而，对于含有S46的TAD2，可以使用高分辨率X射线结构。该结构是一种复合体结构，其显示了TAD2与另一种参与DNA修复的蛋白质配偶体之间的相互作用。特别是，该结构域TAD2通过许多带负电荷的氨基酸(诸如天冬氨酸和谷氨酸)脱颖而出。丝氨酸46处的进一步磷酸化是p53TAD上负电荷的补充。因此，在这种高度带负电荷的状态下，S46磷酸化的p53将与FoxO4的FH结构域相互作用，该结构域主要含有带正电荷的氨基酸。
在该模型中，FH和FH-Nter1-35肽与从2b3g检索到的p53TAD结构对接(见图13A)。结构中的S46突变为D(天冬氨酸)作为磷酸盐模拟物。对接结果表明，FH与包括S46D作为磷酸盐模拟物的p53TAD2的表面相互作用。同样，FH-Nter1-35肽在同一表面与p53TAD2相互作用。已阐明，当在S46处磷酸化时，FoxO4的FH结构域将占据p53的反式激活结构域。正如通过FoxO4的CR3结构域干扰p53DBD所解释的那样，FoxO4 1302的FH与S46磷酸化的p53TAD 1303的可能相互作用(图13A)将与p53介导的细胞凋亡的抑制相关。为了干扰这种结合，分析了FH-Nter1-35肽与S46磷酸化的p53TAD2的相互作用(图13B)。已显示FH-Nter1-35从也包括S46D的较小表面与S46磷酸化的p53TAD相互作用。由于FH-Nter1-35的尺寸小于FoxO4的FH结构域，因此(一种或多种)Senolytic肽可减少FoxO4的FH对p53TAD的空间阻断作用。这种空间阻断作用可能发生在p53TAD2亚结构域中，也可能发生在其他亚结构域p53TAD1中。FoxO4对p53介导的细胞凋亡的抑制作用可通过对通过FH结构域对活化剂和调节蛋白必不可少的p53TAD区域的所述阻断来解释。因此，FoxO4对p53介导的细胞凋亡的抑制作用(该抑制作用将由于FoxO4的FH与S46磷酸化的p53TAD之间可能的相互作用而引起)将被(一种或多种)Senolytic肽消除。从这个角度来看，(一种或多种)Senolytic肽(例如，序列表中SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：245所示)也适用于抑制FH和p53TAD之间的似乎可能的(plausible)相互作用。通过替换FH，(一种或多种)Senolytic肽可能与p53TAD相互作用。将(一种或多种)Senolytic肽优化，使其对S46磷酸化的p53TAD具有相当的或增强的结合亲和力。在一些实施方案中，与FoxO4的FH结构域相比，Senolytic肽可能对在丝氨酸46区域磷酸化的p53TAD表现出增加的干扰或不变的干扰。
在一些实施方案中，提出了FoxO4和p53从多个结构域相互作用。所述NMR研究表明FoxO4将通过CR3结构域与p53DBD结合。而表明FoxO4抑制了S46磷酸化的p53介导的细胞凋亡，以及FoxO4的FH结构域(含有带正电荷的氨基酸)和p53TAD(含有带负电荷的氨基酸)之间具有强静电相互作用的可能性的体内发现，暗示FoxO4也将与在S46处磷酸化的p53TAD结合并抑制其细胞凋亡活性。描绘了FoxO4和p53之间可能的相互作用，导致FoxO4抑制衰老细胞中由S46磷酸化的p53介导的细胞凋亡，其中衰老细胞表达衰老相关分泌表型(SASP)。这些相互作用形成于
(i)FoxO4的CR3和p53DBD之间，以及
(ii)FoxO4的FH和S46磷酸化的p53TAD之间。
在一些实施方案中，Senolytic肽(例如，序列表中SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245所示的肽)被设计以优化这些相互作用，例如以从p53中释放FoxO4蛋白。通过分析图11中复合体的结合界面可以看出，存在于(一种或多种)Senolytic肽(例如，作为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245包括在序列表中)中的FH-Nter1-35的特定突变可能有效地使FoxO4的CR3相互作用最大化(图11A)，而相同的突变将对其余复合体之间的相互作用产生去稳定(或中性)影响(图11B-E)。伴随地，选择突变以对FH-Nter1-35与在S46处磷酸化的p53TAD的结合具有稳定或中性影响。
在一些实施方案中，Senolytic肽是指合理设计的FoxO4与p53相互作用的选择性抑制剂。在一些实施方案中，肽通常可表示为：
PRKGGRRRRAWGXRRXRXXXRRRRRRRPRKRLRLR
其中“X”是氨基酸：R、H或K中的一种，并且其中任何衍生的L-肽都不是天然人类蛋白质的片段。在一些实施方案中，Senolytic肽是包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个的任何氨基酸序列，其在本文中重现于表2中。
表2.(一种或多种)Senolytic肽
Figure BDA0002513558240000171
Figure BDA0002513558240000181
Figure BDA0002513558240000191
Figure BDA0002513558240000201
Figure BDA0002513558240000211
Figure BDA0002513558240000221
Figure BDA0002513558240000231
Figure BDA0002513558240000241
Figure BDA0002513558240000251
另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽是包含任何肽的任何氨基酸序列，该任何肽与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少70％的相同性，或与SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少75％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少80％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少85％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少90％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少95％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少96％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少97％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一具有至少98％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245之一具有至少99％的相同性。
另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽是包含任何肽的任何氨基酸序列，该任何肽与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过10个氨基酸，或与SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过9个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过8个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过7个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过6个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：245之一偏离不超过5个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过4个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过3个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过2个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245之一偏离不超过1个氨基酸。
在一些实施方案中，Senolytic肽是包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一的任何肽的任何氨基酸序列。另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽是包含任何肽的任何氨基酸序列，该任何肽与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少70％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少75％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：12之一具有至少80％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少85％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少90％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少95％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少96％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少97％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少98％的相同性，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一具有至少99％的相同性。
另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽是包含任何肽的任何氨基酸序列，该任何肽与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过10个氨基酸，或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过9个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过8个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过7个氨基酸。或与SEQID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过6个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过5个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过4个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过3个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：12之一偏离不超过2个氨基酸。或与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12之一偏离不超过1个氨基酸。
在一些实施方案中，Senolytic肽是包含SEQ ID NO：1之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：2之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：3之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：4之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：5之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：6之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：7之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：8之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：9之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：10之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ ID NO：11之一的任何肽的任何氨基酸序列，可选地，包含SEQ IDNO：12之一的任何肽的任何氨基酸序列。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可以相对于天然FoxO4序列的突变来表征，如图18所示(N.S.，图18中)。例如，(一种或多种)Senolytic肽可表示为P-R-K-G-G-1-R-R-2-A-W-G-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-P-18-K-R-L-19-L-20(SP，图18中)，其中数字表示与FoxO4的CR3结构域(图12A)表现显著相互作用的关键位置。因此，不希望受到理论的束缚，这些编号位置的某些突变可能会增强该肽与FoxO4的结合。在一些实施方案中，存在于这些位置的突变包括以下氨基酸之一：A、D、E、F、H、I、K、L、N、R、Q、S、T或Y，例如，以增强该肽与FoxO4的结合亲和力。另外地或可选地，在一些实施方案中，Senolytic肽包括在编号位置上向非天然氨基酸的改变(例如，突变)，或拟肽可用于模拟编号位置的带电荷氨基酸。
在一些实施方案中，Senolytic肽是包含所有或基本上所有D-氨基酸或D-氨基酸和L-氨基酸的混合物的独特人工肽，并且含有相对于天然FoxO4的至少11个突变。另外地或可选地，在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽通过将单个或多个D-氨基酸添加至N端和/或C端来表达，例如，以增加该肽的生物利用度。例如，在一些实施方案中，具有D-氨基酸的肽可以模拟L-肽，并且对D-反转体(D-retroinverso，DRI)形式的修饰经常在体外和体内将该肽改变为更有效的形式。这些DRI肽形式也已在临床试验中显示是治疗有效的。如本领域技术人员将认识到的，序列表中显示为SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245的一种或多种肽可以通过使用D-氨基酸并以反向序列(retroreversed sequence)来表达。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽通过使用D-氨基酸并以反向序列来表达。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽被施用以用于针对衰老相关病理的治疗、症状减轻或至少部分预防用途。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽适当地通过融合至促进从N端或C端的细胞进入的肽来施用。例如，当用作senolytic物质时，需要使(一种或多种)Senolytic肽能够进入哺乳动物细胞。通常称为细胞穿透肽(CPP)或蛋白质转导结构域(PTD)的肽是可以有效在细胞内转运各种生物活性分子的非侵入性载体。这些肽可以通过共价键或非共价键将从肽至纳米颗粒范围的货物转运。在体外和体内从最小的货物到大的120kDa蛋白的转运均显示成功。此外，最近报道了可活化的CPP(ACPP)对过表达金属蛋白酶2的癌细胞进行靶向递送。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽使用拟肽来表达。例如，拟肽是可有效模仿天然肽并与靶标相互作用以发挥相同生物学作用的化合物。通常招募拟肽来克服与天然肽的内在特性有关的问题，诸如抗蛋白水解降解的稳定性。在拟肽的实例中，肽键替代物和β-转角二肽模拟物。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可以以环状形式表达。例如，在一些应用中，例如，由于构象刚性，环肽可能比其线性对应物更有效。此外，由于其末端，具有环状结构的肽对外肽酶的蛋白水解切割具有相对抗性，且由于其结构比线性肽更刚性，其对内肽酶的蛋白水解切割具有相对抗性。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可被表达为多核苷酸的产物。例如，在一些实施方例中，与编码(一种或多种)Senolytic肽的核苷酸序列的至少一部分互补的多核苷酸(例如，短干扰核酸、反义多核苷酸或肽核酸)可使用本领域可得到的肽序列制备，以改变基因和/或蛋白质表达。这些多核苷酸可与某些核酸分子特异性结合或杂交。
在一些实施方案中，该多核苷酸可通过重组载体递送，该重组载体中已掺入了感兴趣的多核苷酸。另外地或可选地，在一些实施方案中，重组病毒载体可为重组表达载体，其中已经掺入了编码所设计的肽的多核苷酸序列。重组载体或重组表达载体可以是病毒重组载体或病毒重组表达载体。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以通过载体来表达。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可包含一种或多种非天然或非常见氨基酸，例如，非天然编码的氨基酸。这些可以是非蛋白原氨基酸，其可以翻译后天然存在于植物或细菌中，或化学合成为药理学基序。非天然氨基酸广泛用于组合文库或用作手性构建单元。这些修饰的氨基酸通常有助于特殊的生物活性，并经常掺入治疗性拟肽配体中以增强肽的药理活性和效力。非常见或非天然氨基酸修饰的肽可改善选择性，受体结合，修饰活性(激动剂和拮抗剂)，增加体内半衰期，增强跨细胞膜的转运。如本领域技术人员将认识到的，所公开的CPP通过各种各样的非天然、非标准氨基酸肽修饰来表达。在一些实施方案中，对CPP的修饰包括使用D-氨基酸，L-氨基酸，N-甲基氨基酸，高氨基酸(homo aminoacid)，α-甲基氨基酸，β(高)氨基酸，γ氨基酸，螺旋/转角稳定化合物或骨架修饰肽将非天然/非常见氨基酸掺入序列中。另外地或可选地，在一些实施方案中，(一种或多种)CPP序列可通过插入以下天然存在的非常见氨基酸来修饰，诸如瓜氨酸(Cit)，羟脯氨酸(Hyp)，β-丙氨酸，鸟氨酸(Orn)，正亮氨酸(Nle)，3-硝基酪氨酸，焦谷氨酸(Pyr)，硝基精氨酸，丙氨酸修饰的氨基酸类似物，脂环族氨基酸类似物，芳香族氨基酸类似物，天冬氨酸类似物，β-氨基酸类似物，半胱氨酸氨基酸类似物，DAB(2,4-二氨基丁酸)类似物，DAP(2,3-二氨基丙酸)类似物，缩酚酸肽(depsipeptide)，谷氨酸氨基酸类似物，谷氨酰胺氨基酸类似物，甘氨酸氨基酸类似物，杂环氨基酸类似物，组氨酸氨基酸类似物，高氨基酸类似物，异亮氨酸氨基酸类似物，亮氨酸氨基酸类似物，线性核心氨基酸类似物，赖氨酸氨基酸类似物，甲硫氨酸氨基酸类似物，N-甲基氨基酸类似物，正亮氨酸氨基酸类似物，正缬氨酸氨基酸类似物，鸟氨酸氨基酸类似物，Statine氨基酸类似物，青霉胺氨基酸类似物，聚乙二醇化氨基酸，苯丙氨酸氨基酸类似物，苯甘氨酸氨基酸类似物，脯氨酸氨基酸类似物，焦谷氨酸氨基酸类似物，丝氨酸氨基酸类似物，苏氨酸氨基酸类似物，色氨酸氨基酸类似物，酪氨酸氨基酸类似物，缬氨酸氨基酸类似物，翻译后修饰(PTM)修饰的氨基酸，脱亚胺基的(deiminated)精氨酸(瓜氨酸)，DL-瓜氨酸，L-瓜氨酸，甲基化氨基酸，赖氨酸(Me)，赖氨酸(Me2)，赖氨酸(Me3)，精氨酸(Me)，精氨酸(Me)2不对称，精氨酸(Me)2对称，磷酸化的氨基酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸，磷酸酪氨酸。
在各种实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽，例如，如序列表中所示的SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：245中的一种或多种或其衍生物，例如，相对于这些序列包含不超过30％突变的肽，也可能干扰FoxO4的CR3结构域，从而干扰SCAP。此外，通过组合或改组长度至少为6个氨基酸的一种或多种肽序列的某些部分而形成的(一种或多种)Senolytic肽应具有CR3结构域结合亲和力，从而干扰FoxO4。
在一些实施方案中，用于在患有衰老相关疾病或病症的对象中在衰老细胞中选择性地诱导细胞凋亡(例如，杀死衰老细胞)的方法通常可包含向需要其的对象施用一种或多种Senolytic肽，例如根据本文所述的一种或多种施用方法。例如，在一些实施方案中，该方法可包含使包含与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少90％相同性的氨基酸序列的人工肽来干扰衰老细胞的叉头框蛋白O4(FoxO4)的CR3结构域。
哺乳动物组织中衰老细胞的比例随着生物学年龄的变化而变化，并且可以根据哺乳动物对象所属的队列(cohort)而显著变化。此外，存在的衰老细胞的比例可随给定对象的组织类型而进一步变化。这些变化可给指定用于复壮疗法(rejuvenation therapy)的senolytic物质的剂量带来挑战。当所述衰老细胞比例高于某个阈值时，在指定剂量时会出现其他复杂性，因此加速的细胞凋亡可导致虚弱。幸运的是，与癌症干预不同，完全消除衰老细胞对于获得有益效果可能不是必需的。
在各种实施方案中，Senolytic肽可通过任何合适的方法学来施用。例如，本文公开了三种不同的治疗方案，即脉冲方案、持续方案和温和方案(图14A、14B和14C中示意性地显示)，(一种或多种)Senolytic肽可通过它们来施用。
在一些实施方案中，提供了一种用于治疗衰老相关疾病或病症的方法，该方法包含向有此需要的对象施用治疗有效剂量的(一种或多种)Senolytic肽，例如，(一种或多种)Senolytic肽可以一个或多个治疗周期间歇施用。每个治疗周期可持续1或2或3天。每次施用可包括调整的等价剂量，以便在每个治疗周期结束时累积达到治疗有效剂量。在一些实施方案中，治疗有效剂量在单日内等价施用，或者在连续两天或连续三天中间歇施用，或者在隔天施用2或3次。这种Senolytic肽的施用方案在本文中称为脉冲方案(图14A)。在脉冲方案中，治疗有效剂量通过一次或两次后续施用来达到。在一些实施方案中，在第一周期之后，可能存在两周-四周的衰老清除间隔，例如，从而允许一段有效地减少衰老细胞的时间。在一些实施方案中，本领域技术人员在脉冲冲击方案(Impulse Shock Regime)之前和衰老清除间隔期之后对对象进行评估，以确定各种SASP标志物的水平，分别用于确定治疗有效剂量和后续治疗。
另外地或可选地，在一些实施方案中，治疗有效剂量通过在1-3周的时间内单次或多次施用来达到。每次施用的Senolytic肽的数量是等价的，并经调整以在治疗结束时累积达到治疗有效剂量。这种Senolytic肽的施用方案称为“持续方案”(图14B)。持续方案中施用的治疗有效剂量可高于脉冲方案中施用的治疗有效剂量。
另外地或可选地，在一些实施方案中，治疗有效剂量在一个或多个治疗周期中间歇施用，其中每个治疗周期由在1-3周内均匀分布的1或2或3或4或5或6个施用日组成，其中每次施用的等价剂量经调整在每个治疗周期结束时累积达到治疗有效剂量。
在一些实施方案中，在第一周期之后，存在两周或三周的衰老清除间隔，从而允许一段有效减少衰老细胞的时间。在一些实施方案中，本领域技术人员可在持续方案之前和衰老清除间隔期之后，基于各种SASP标志物的水平评估对象，以分别确定治疗有效剂量和后续治疗。
在一些实施方案中，治疗有效剂量通过在3-4周的时间内单个或多个施用周期来达到。这种Senolytic肽的施用方案在本文中称为温和方案(图14C)。在温和方案中，单次施用Senolytic肽的治疗有效剂量和数量均可低于脉冲方案和持续方案中的治疗有效剂量和数量。治疗有效剂量可以一个或多个治疗周期间歇施用。每个治疗周期可由在3-4周内均匀分布的1或2或3或4或5或6或7或8或9个施用日组成。每次施用可被调整为等价剂量，以便在每个治疗周期结束时累积达到治疗有效剂量。
在一些实施方案中，在第一个治疗周期之后，存在两周或三周的衰老清除间隔，从而允许治疗随着衰老细胞的逐渐减少而变得有效的一段时间。在一些实施方案中，本领域技术人员可以在温和方案之前和衰老清除间隔期之后，基于各种SASP标志物的水平对对象进行评估，以分别确定治疗有效剂量和后续治疗。
在一些实施方案中，治疗有效剂量通过腹腔内注射(IP)或静脉注射(IV)来递送。在一些实施方案中，根据其是通过IP还是通过IV递送，进一步调整治疗有效剂量。
在各种实施方案中，就所施用的数量和足以达到所需治疗效果的频率(即，治疗有效剂量)而言，在Senolytic肽的量的方面来限定治疗方案。在某种程度上，治疗效果需要对一种或多种疾病症状的某种效果，且包括治愈一种疾病。“治愈(curing)”是指消除活动性疾病的症状。但是，即使获得治愈之后，该疾病也可能存在某些长期或永久的影响(诸如其中存在广泛的组织损伤)。治疗有效剂量通常是足以达到所需效果的剂量，并且可根据疾病状况的性质和严重程度以及所施用的特定Senolytic肽的效力、其纯度及其组成(例如，90％或95％或98％等)而变化。在一些实施方案中，对于预防性用途而非用于治疗活动性疾病而施用(一种或多种)Senolytic肽的实施方案，可采用不同的剂量。在一些实施方案中，用于Senolytic肽的治疗有效剂量如安排(Schedule)1中所描述。
如本文下面所讨论的，实施例1-5表明可以以5mg/Kg、10mg/Kg和15mg/Kg的剂量安全地施用(一种或多种)Senolytic肽。更具体地，实施例4表明，(一种或多种)Senolytic肽在高达100mg/kg的水平是无毒的。由于各种Senolytic肽(特别是SEQ ID NO：1至SEQ IDNO：11及与其具有至少90％相同性的肽)的分子相似性，原子结构是相似的，因此它们以相似的方式发挥其senolytic作用。在一些实施方案中，治疗有效剂量的量可以进一步取决于患者的身高、体重、性别、年龄和病史。
在一些实施方案中，诸如根据脉冲方案、持续方案或温和方案的治疗方法可包括在治疗开始时和治疗后2周或4周监测从对象获取的便利的生物学样品中的衰老细胞群，以确定疗法的有效性和/或是否需要第二或第三治疗过程。在一些实施方案中，可实施个性化的治疗过程，并且可包括在疗法开始时和每个治疗过程之后的一定时期内监测衰老细胞群，并调整治疗过程或剂量或治疗方案。另外地或可选地，在一些实施方案中，治疗有效剂量的施用可取决于对象的健康状态以及对象在整个疗法期间对治疗的反应。在一些实施方案中，生物学样品应是用微创方法收集的从对象皮肤组织获得的皮肤活检样品。在一些实施方案中，可使用与衰老相关标志物来实现对衰老细胞的检测。
尽管衰老细胞与其他静止和终末分化的细胞不同，但它们并不显示独特的表型，而是表现出定义衰老状态的多种表型。在这种状态下，衰老细胞的特征包括永久的和不可逆的生长停滞；细胞尺寸增加；衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)酶的表达导致溶酶体含量增加；肿瘤抑制因子p16INK4a的表达。两种生物标志物已广泛用于鉴定衰老细胞：
SA-β-Gal：使用X-Gal作为底物在pH 6测定的酶活性。
p16INK4a：监测作为CDK4/6抑制剂并参与维持生长停滞的p16INK4a蛋白的表达水平。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽不一定要持续存在才能发挥预期作用。例如，促存活途径的短暂中断足以杀死衰老细胞。因此，当间歇施用时，该(一种或多种)Senolytic肽可以作为Senolytic肽起作用。
已报道了其他已知的senolytic物质，诸如酪氨酸激酶抑制剂(D)和类黄酮、槲皮素(Q)，已显示出在衰老细胞中诱导细胞凋亡。D+Q的间歇施用减轻与加速衰老样状态下糖胺聚糖损失相关的虚弱、神经功能紊乱、骨质疏松症和椎间盘变性。此外，在3个月前因腿之一的辐射导致行动不便的小鼠中，在完成D+Q的一个疗程后4天内，踏旋器耐力(tread-millendurance)得到改善。所述改善持续至少7个月。D+Q的消除半衰期为若干小时。与如果必须连续存在D+Q以通过占据受体或作用于酶来抑制或活化细胞过程所预期的相反，具有短消除半衰期的物质的间歇或单一疗程后的这些结果与由降低衰老细胞丰度所预期的长效型的作用相一致。
因此，用senolytic进行间歇性治疗而非连续性治疗可有效地缓解衰老相关疾病或病症，从而可以在良好健康期间施用这些物质，并潜在地降低副作用的风险。在所有冲击剂量方案(shock dose regime)中，将存在任选的后续治疗，其中治疗有效剂量可以增加或减少。在初始治疗和后续治疗之间，将存在非治疗间隔，其中非治疗过程的持续时间可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应而变化，这可以通过在整个疗法期间对对象中的衰老细胞的所述检测来监测。
在一些实施方案中，至少一种Senolytic肽可以以治疗有效剂量与至少一种或多种其他可用的senolytic物质一起施用，二者一起加和地或协同地作用以选择性地杀死衰老细胞。例如，在一些实施方案中，senolytic药施用方法用于任何种类的senolytic物质的剂量优化，该senolytic物质包括但不限于Dasatinib、槲皮素、Navitoclax、Piperlongumin、Fisetin、BCL-XL抑制剂A1331852和A1155463、FOXO4-相关的肽或这些的组合。
除了本文描述的治疗方案的衰老细胞监测之外，Senolytic肽治疗的有效性可以由医学和临床领域的技术人员通过采用诊断方法的组合(包括体格检查、临床症状的评估和监测、以及进行本文所述的分析测试和方法)来确定，可用于监测对象的健康状态。例如，在一个实施方案中，当治疗对象的肺部疾病和病症时，对于Senolytic肽的有效性，可以进行肺部功能测试(https://www.nhlbi.nih.gov/health/health-topics/topics/lft)。肺部功能测试或PFT可测量对象肺部运作情况如何。它们包括测量肺尺寸和气流的测试，例如肺活量测定法和肺容量测试。其他测试测量气体如氧气进出对象血液的状况如何。这些测试包括脉搏血氧测定法和动脉血气测试。另一种肺部功能测试，称为呼出气一氧化氮(FeNO)，测量一氧化氮(其为肺部炎症的标志物)。对象可进行一项或多项这些测试，以诊断肺和气道疾病，将对象的肺功能与预期功能水平进行比较，监测疾病是否稳定或恶化，并观察所述的senolytic治疗是否有益。
应注意，FoxO4在快速生长或再生期间在组织中表达。这样，在一些实施方案中，使用(一种或多种)Senolytic肽的senolytic疗法可排除这种队列。
在一些实施方案中，在对象上使用(一种或多种)Senolytic肽，在治疗过程之前和之后，将对接受治疗的对象的生物皮肤样品中的衰老细胞群进行监测。在一些实施方案中，在治疗过程期间和/或在治疗过程或周期之间进行监测。
使用Senolytic肽的方法-安排1
在一些实施方案中，senolytic物质包含任何一种Senolytic肽，并且在一些实施方案中，senolytic物质在包含11至28天的治疗窗内施用。
例如，在一些实施方案中，每天或隔天施用Senolytic物质，持续14天，然后停止最少14天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续13天，然后停止最少14天。
在一些实施方案中，每天或隔天施用senolytic物质，持续12天，然后停止最少14天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续11天，然后停止最少14天。
在一些实施方案中，每天或隔天施用senolytic物质，持续10天，然后停止最少14天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续9天，然后停止最少14天。
在一些实施方案中，每天或隔天施用senolytic物质，持续8天，然后停止最少12天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续7天，然后停止最少12天。
在一些实施方案中，每天或隔天施用senolytic物质，持续6天，然后停止最少12天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续5天，然后停止最少12天。
在一些实施方案中，每天或隔天施用senolytic物质，持续4天，然后停止最少12天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续3天，然后停止最少10天。
在一些实施方案中，每天施用senolytic物质，持续2天，然后停止最少10天。
在一些实施方案中，将senolytic物质施用1天，然后停止最少10天。
在一些实施方案中，每天以约0.5mg/kg至20mg/kg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约0.5mg/kg至15mg/kg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约0.5mg/kg至10mg/kg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约0.5mg/kg至5mg/kg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约0.5mg/kg至3mg/kg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约1400mg/天的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约1000mg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约700mg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约200mg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约35mg的剂量施用senolytic物质，持续14天。
在一些实施方案中，每天以约35mg至1400mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约35mg至1000mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约35mg至700mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约35mg至200mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约1400mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约1000mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约700mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约200mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以约35mg的剂量施用senolytic物质，持续7天。
在一些实施方案中，每天以上述剂量之一施用senolytic物质，持续1、2、3、4、5或6天或8、9、10、11、12、13天。另外地或可选地，在一些实施方案中，以上述剂量之一隔天(alternative daily)施用senolytic物质，持续2、4或6天或8、10、12、14天。
在一些实施方案中，该安排1中描述的剂量应是施用任一种senolytic物质的治疗充足剂量。
在一些实施方案中，该安排1中的施用方案应为施用任一种senolytic物质的方法。
在一些实施方案中，如该安排1中所述与另外的senolytic物质一起施用(一种或多种)Senolytic肽，该senolytic物质包括但不限于Navitoclax(ABT-263)，Fisetin，A133185240，A115546340，槲皮素，Dasatinib，Piperlongumine，17-AAG(tanespimycin)，Geldanamycin 17-DMAG(alvespimycin)，Famotidine，去铁胺，Mitoxantrane，Lapatinib，Neratinib，对于每种这些senolytic物质均以治疗充足剂量，但严格按照该安排1所述的方案。
除了本文描述的治疗方案的衰老细胞监测之外，Senolytic肽治疗的有效性可以由医学和临床领域的技术人员通过采用诊断方法的组合(包括体格检查、临床症状的评估和监测，以及进行本文所述的分析测试和方法)来确定，可用于监测对象的健康状态。
使用Senolytic肽的药物疗法
医学和临床领域的技术人员可以容易地确定(一种或多种)Senolytic肽在治疗本文所述的衰老相关疾病或病症方面的有效性。适用于特定疾病或病症的诊断方法的一种或任意组合，该方法是本领域技术人员所熟知，包括体格检查，对象自我评估，临床症状的评估和监测，进行分析测试和方法(包括临床实验室测试，体格测试和探查手术)，例如，可用于监测对象的健康状态和Senolytic肽的有效性。可以使用本领域已知的技术来分析本文所述的治疗方法的效果，例如，将已接受包含Senolytic肽的组合物的患有或处于特定疾病或病症的风险中的对象的症状与未接受Senolytic肽治疗或接受安慰剂治疗的对象的症状进行比较。
需要用本文所述的(一种或多种)Senolytic肽治疗的对象可为人类，或者可为非人类的灵长类动物或其他动物(即，兽用用途)，其已出现衰老细胞相关疾病或病症的症状，或其处于出现衰老细胞相关疾病或病症的风险中。可治疗的非人类动物包括哺乳动物，例如，非人类灵长类动物(例如，猴子，黑猩猩，大猩猩等)，啮齿类动物(例如，大鼠，小鼠，沙鼠，仓鼠，雪貂，兔子)，兔形目动物，猪(swine)(例如猪(pig)，小型猪(miniature pig))，马，犬，猫，牛，大象，熊和其他家养、农场和动物园的动物。
在一些实施方案中，与如果对象未接受治疗的预期存活期相比，施用本文所述的Senolytic肽可以延长存活期。需要治疗的对象包括已患有疾病或病症的那些，以及易于罹患疾病或病症的或处于发展疾病或病症的风险中的对象，以及其中疾病、状况或病症将被预防性治疗的那些。对象可具有发展疾病或病症的遗传易感性，其将从衰老细胞的清除中受益，或者可处于一定年龄，其中接受Senolytic肽将提供临床益处以延迟疾病的发展或降低疾病的严重程度，该疾病包括年龄相关疾病或病症。
在一些实施方案中，在伤口愈合期间(包括手术前或手术后)可限制使用Senolytic肽。当存在伤口时，可以在伤口周围诱导衰老细胞。衰老细胞产生伤口愈合所需的生长因子。然而，除非在伤口愈合时施用了(一种或多种)Senolytic肽，否则这种先天机制不会受到干扰。
在衰老相关疾病和病症中使用Senolytic肽的方法
细胞衰老是一种细胞命运，其本质上涉及不可逆的复制停滞，细胞凋亡抗性，并且经常增加蛋白质合成，伴随糖酵解增加的代谢转变，减少的脂肪酸氧化，增加的活性氧生成以及获得衰老相关分泌表型(SASP)。
本文提供了用于在有此需要的对象中治疗与细胞衰老有关、相关联或由其引起的状况、疾病或病症的方法。在一些实施方案中，用于治疗上述衰老相关疾病和病症的方法包含，例如在三种不同的治疗方案(即脉冲方案、持续方案、温和方案)之一中，施用治疗有效剂量的Senolytic肽。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，应根据监督治疗的医生的决定来应用剂量方案的个性化治疗过程。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗一般年龄有关疾病和病症的方法
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽抑制成体干细胞的衰老或抑制积累，杀死或以其他方式促进已变得衰老的成体干细胞的去除。因此，Senolytic肽也可用于治疗或预防年龄相关疾病或病症，该疾病或病症作为自然老化过程的一部分发生，或者是当对象暴露于衰老诱导剂或衰老诱导因子(例如，辐射，化疗，吸烟，高脂/高糖饮食，其他环境因素)时发生。
在一些实施方案中，可以通过施用Senolytic肽来治疗或预防(即，降低其发生的可能性)作为老化相关衰退的虚弱。可以通过监测患者的身体虚弱指数来测量senolytic疗法的有效性。
在一些实施方案中，年龄相关疾病或病症为脊柱侧凸。通过尤其是对脊椎、肋骨、臀部和肩部的体格检查和/或X-RAY、CT和/或MRI来确定骨曲率，来测量senolytic疗法的有效性。
在一些涉及年龄相关疾病和病症的治疗的实施方案中，持续方案是最合适的(图14B)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从受试者对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测受试者对象的进展。在各种实施方案中，当受试者对象患有其他疾病或障碍病症时，根据监督疗法的医生的决定，应用脉冲方案或温和方案的个体化治疗过程(图14A-C)或安排1中所述的施用方法。
本文描述的治疗方法的有效性可通过减少与衰老诱导刺激相关的年龄相关病症或年龄敏感性性状的症状数量，降低一种或多种症状的严重程度，或延缓与衰老诱导刺激相关的年龄相关病症或年龄敏感性性状的进展来证明。在一些实施方案中，预防与衰老诱导刺激相关的年龄相关病症或年龄敏感性性状是指预防(即，降低发生的可能性)或延缓与衰老诱导刺激相关的年龄相关病症或年龄敏感性性状的发作或与衰老诱导刺激相关的一种或多种年龄相关病症或年龄敏感性性状的复发。
(一种或多种)Senolytic肽在组织复壮中的使用方法
在参考文献中已报道了senolytic物质可以影响衰老的小鼠的健康寿命，其中衰老和伴随的组织稳态的丧失作为老化的结果自然而然地发展。体内小鼠实验的结果表明，senolytic物质可以减少小鼠的细胞衰老并消除毛发脱落(客观地以毛密度来测定)和总体的虚弱(客观地通过增加的转轮活动来测定)。
组织中含有高水平的衰老细胞，其由于慢性的SASP分泌，会对其临近的细胞施加永久性的重编程。最近显示衰老会触发体内组织重编程，从而导致衰老区域附近的Nanog阳性细胞。衰老细胞可因此触发邻近细胞重编程为更多能的细胞。然而，由于SASP因子(如IL6)的释放是连续的，它们将有效地使这种改变永久化，并使相邻的受体细胞锁定在这种干样状态(stem like state)。如果衰老细胞的数量减少到衰老细胞很少的相对年轻组织的数量，那么导致暂时的细胞重编程和随后的增殖/分化反应的瞬时SASP反应，将能够补充受损和损失的细胞。在一些实施方案中，将(一种或多种)Senolytic肽应用于头皮组织或骨关节炎关节或肺组织或肾组织的组织复壮疗法。在一些实施方案中，通过在外部施加senolytic组织，将senolytic肽用于头皮治疗和头发再生。在一些实施方案中，本文中详细描述了用于治疗衰老相关疾病和病症的senolytic肽的递送方法。
在一些治疗目的在于组织复壮的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗衰老相关皮肤疾病和病症的方法
通过施用本文所述的Senolytic肽可治疗的衰老相关疾病或病症包括皮肤疾病或病症。几种皮肤疾病或病症与衰老细胞的积累相关。在一些实施方案中，所述皮肤疾病和病症为银屑病、白癜风和湿疹。其中，白癜风是一种以色素脱失为特征的获得性病症。除了遗传易感性和自身免疫性之外，氧化应激和潜在的黑素细胞早衰也被认为是白癜风进展的关键因素。来自非病灶性白癜风病灶的黑素细胞在体外表现出衰老前表型。
因此，在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽适于通过杀死衰老细胞来治愈或治疗皮肤疾病和病症。
在一些涉及皮肤疾病和病症的治疗的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据可监测的对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在治疗开始时和整个治疗期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)。在某些适当的衰老相关的皮肤疾病和病症中，senolytic肽的应用方法可以在身体表面的外部，从而实现所述肽的皮肤细胞渗透，如本文件在此详述的。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗炎性和自身免疫性疾病和病症的方法
慢性炎症是与老年有关的多种疾病的主要因素。最近，一项10000名先前患有心脏病发作的对象的抗炎药(其靶向炎症途径的一部分-专门针对白介素IL-1β(IL-1β)，一种细胞信号转导蛋白)的全球临床试验，表明该抗炎药降低了对象进一步心脏病发作或中风的风险。该药物防止这些细胞进入过度运转(overdrive)，但可能会使其余的免疫系统保持完整。
衰老相关分泌表型(SASP)包含一系列不同的蛋白质，包括几种已知在老化和年龄相关疾病中起作用的蛋白质，包括趋化因子(诸如CCL2和CLL11)和主要的白介素(诸如IL-1、IL-6和IL-12)。当超过某个阈值时，这些因素可以显著损害组织功能并损害邻近细胞的功能。因此，衰老细胞被认为是炎症的主要诱因；一种理论指出低水平但慢性的炎症是年龄相关衰退的驱动因素。
在一些实施方案中，慢性炎性疾病涉及靶向关节的类风湿性关节炎。患有类风湿性关节炎的个体表现出加速的免疫衰老，这可能是炎性机制的结果。
在一些实施方案中，慢性炎性疾病涉及骨关节炎，其特征在于进行性的组织重塑和关节功能的丧失，并且与年龄的增加并行。这是滑膜关节最普遍的疾病。在骨关节炎期间，软骨细胞中各种衰老标志物的水平增加，其具有类似于经典衰老细胞的SASP谱，这反过来支持了这样的假说：关节组织内细胞的衰老可在骨关节炎的病因中起病理作用。因此，(一种或多种)Senolytic肽适于通过杀死衰老细胞而基本上停止SASP来治愈或控制慢性炎症。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在骨关节炎的治疗中是有效的。在senolytic治疗期间，所测量的骨关节炎疾病参数尤其包括关节疼痛，发红，僵硬和/或肿胀和关节运动范围，对于骨刺的X-RAY和/或MRI，血液检查以及关节液分析，以排除其他原因。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在脊柱后凸的治疗中是有效的。在senolytic治疗期间，所测量的脊柱后凸疾病参数尤其包括通过X-RAY、CT和/或MRI测量脊柱曲率。
在一些涉及炎性或自身免疫性疾病和病症的治疗的实施方案中，温和方案是最合适的(图14C)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用脉冲方案或持续方案的个体化治疗过程(图14A-C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗心血管疾病和病症的方法
在一个实施方案中，通过本文描述的方法治疗的衰老相关疾病或病症是心血管疾病。在一些实施方案中，心血管疾病是由动脉粥样硬化引起的，并且是发达国家中死亡率的主要原因。
越来越多的证据表明炎症是动脉粥样硬化进入临床和公共卫生实践的关键过程。动脉粥样硬化是一种主要动脉疾病，其中高水平的带有氧化修饰的低密度脂蛋白在血管壁中积累，吸引吞噬免疫细胞形成斑块。斑块形成和扩张过程中，由平滑肌增殖和内皮型一氧化氮合酶水平下降引起的端粒缩短和氧化应激导致衰老诱导。据报道，人和小鼠粥样斑表现出衰老的血管平滑肌和内皮细胞。基础科学和流行病学研究已经得出了令人印象深刻的案例，即动脉粥样硬化本质上是对多种危险因素的炎性反应，且这种反应的后果导致发展急性冠状动脉综合征。这些发现提高了衰老细胞多步参与动脉粥样硬化的可能性。因此，在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽适于通过基本上通过停止SASP来减少体内的慢性炎症来减缓心血管疾病的进展。
在(心)血管疾病的Senolytic肽治疗期间，所测量的(心)血管疾病参数尤其包括心脏射血分数、血管僵硬度和血压。
Senolytic疗法对动脉粥样硬化的治疗是有效的。在Senolytic肽治疗期间，所测量的动脉粥样硬化疾病参数包括血液测试，包括胆固醇、葡萄糖的测量，心电图，血管造影术，计算机化断层扫描和/或眼底镜检查。
医学和临床领域的技术人员可以容易地确定一种或多种Senolytic肽用于治疗或预防(即，减少或降低发展或发生心血管疾病(例如，动脉粥样硬化)的可能性)的有效性。可通过一种或任意组合的诊断方法，包括但不限于体格检查，临床症状的评估和监测，以及进行本文所述和本领域实践的分析测试和方法(例如，血管造影术，心电图，压力测试，非压力测试)，来监测对象的健康状态。可以使用本领域已知的技术来分析Senolytic肽的治疗效果，例如将已接受治疗的患有心血管疾病或处于心血管疾病风险中的对象的症状与未接受这种治疗或接受安慰剂治疗的对象的症状进行比较。
在一些涉及心血管疾病和病症的治疗的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗肺部疾病和病症的方法
在一个实施方案中，通过本文描述的方法治疗的衰老相关疾病或病症是肺部疾病和病症。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法治疗的肺部疾病和病症包括慢性阻塞性肺病(COPD)/肺气肿，其特征在于由加速的肺老化诱导的肺部炎症，其涉及炎症介质，诸如肿瘤坏死因子α，白介素-1，白介素-6，活性氧和蛋白酶。COPD涉及的机制包括端粒缩短，细胞衰老，PI3激酶-mTOR信号转导的活化，自噬受损，线粒体功能紊乱，干细胞耗竭，表观遗传变化，异常微小RNA谱，免疫衰老和低度慢性炎症。
在一些实施方案中，通过本文所述的方法治疗的肺部疾病和病症包括特发性肺纤维化(IPF)。IPF是最常见和最严重的特发性间质性肺炎。在家族性间质性肺炎中，端粒酶复合体受存在的遗传损伤的影响，最终导致白细胞和肺组织中的端粒缩短，这在散发性IPF中也有观察到。IPF的病理学指出了细胞衰老参与疾病进展的机制。
在COPD和IPF中，早衰细胞可能影响不同的祖细胞(COPD中的间充质干细胞，IPF中的肺泡上皮前体)，导致干细胞耗竭。
因此，通过以受控和安全的方式去除衰老细胞，(一种或多种)Senolytic肽适于治疗涉及肺部疾病或病症的早衰。
在一个实施方案中，提供了施用Senolytic肽，在对象中通过杀死衰老细胞来治疗或预防(即，降低其发生的可能性)衰老相关疾病或病症的方法，该衰老相关疾病或病症为肺部疾病或病症，该衰老细胞与该疾病或病症相关，尤其是肺动脉平滑肌细胞的衰老，该对象患有该疾病或病症。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在肺气肿的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的肺气肿疾病参数尤其包括呼吸困难，胸部尺寸，通过听诊器的呼吸音降低，指尖形状，呼吸方式，低氧血症，hypercaria，紫绀，营养不良。肺活量，肺射血能力，肺中死体积，支气管扩张剂用药后的气流变化，胸部X-RAY和胸部的CT扫描以及红细胞计数。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在COPD的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的COPD疾病参数尤其包括对肺气肿的呼吸测定法和肺功能测试，包括呼吸困难，胸部尺寸，通过听诊器呼吸音降低，指尖形状，呼吸方式，低氧血症，hypercaria，紫绀，营养不良，肺活量，肺射血能力，肺中死体积，支气管扩张剂用药后的气流变化，胸部X-RAY和胸部的CT扫描和红细胞计数。
在一些涉及肺部疾病和病症的治疗的实施方案中，通过雾化器进行senolytic肽递送。当与雾化器一起使用时，可将Senolytic肽(例如，可溶的)与盐水溶液混合，剂量规格和施用时间表如安排1所述。在其他实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗神经疾病和病症的方法
慢性炎症是导致一系列神经变性和中枢神经系统中的进行性功能紊乱和神经元丧失的主要原因，而神经变性是认知和运动功能紊乱的主要原因。尽管神经元变性在阿尔茨海默氏病和帕金森氏病中是熟知的，但在神经营养感染，脑损伤和脊髓损伤，中风，肿瘤性病症，朊病毒病，多发性硬化症和肌萎缩性脊髓侧索硬化症中也可以观察到。适应性免疫反应与引起组织损伤的神经退行性疾病有关，但在解决炎症及介导神经保护和修复方面也起着重要作用。因此，(一种或多种)Senolytic肽适于通过基本上通过停止SASP来减轻体内的慢性炎症来减缓神经变性的进展。
通过施用本文所述的Senolytic肽可治疗的衰老相关疾病或病症包括神经疾病或病症。这种衰老相关疾病和病症包括帕金森氏病，阿尔茨海默氏病(和其他痴呆症)，运动神经元功能紊乱(MND)，轻度认知损害(MCI)，亨廷顿氏病以及眼睛疾病和病症，如年龄相关的黄斑变性。
医学和临床领域的技术人员可以容易地确定本文所述的一种或多种Senolytic肽的有效性并监测接受一种或多种Senolytic肽的对象。一种或任意组合的诊断方法，包括体格检查，临床症状的评估和监测，以及进行本文所述的分析测试和方法，可用于监测对象的健康状态。可以使用本领域已知的技术来分析施用一种或多种Senolytic肽的效果，例如将已接受治疗的患有阿尔茨海默氏病或处于阿尔茨海默氏病风险中的对象的症状与未接受这种治疗或接受安慰剂治疗的对象的症状进行比较。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在阿尔茨海默氏病的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的阿尔茨海默氏病参数尤其包括进行日常活动的能力的变化，行为和个性的变化，记忆力、问题解决、注意力、计数和语言的测试，血液和尿液测试，脑部扫描，诸如计算机断层扫描(CT)，磁共振成像(MRI)或正电子发射断层扫描(PET)和/或生物标志物分析。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在帕金森氏病的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的帕金森氏病参数尤其包括震颤、四肢或颈部僵硬、总体健康和平衡和/或运动功能的分析。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在抑郁症的治疗中是有效的。要测量的抑郁症参数尤其是，体格检查，全天大部分时间的悲伤或沮丧情绪，体重的重大变化，失眠或过度睡眠，全天大部分时间的疲劳或能量丧失，感到绝望或无价值或过度内疚，集中注意力或决策的问题，反复出现的死亡或自杀念头。
在一些涉及神经疾病和病症的治疗的实施方案中，温和方案是最合适的(图14C)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用脉冲方案或持续方案的个体化治疗过程(图14A-B)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗眼科疾病和病症的方法
通过施用本文所述的Senolytic肽可治疗的衰老相关疾病或病症包括眼科疾病或病症。这种眼科疾病和病症包括但不限于年龄相关的黄斑变性，白内障，青光眼，视力丧失，老视眼。在一些实施方案中，眼科疾病或病症涉及年龄相关的黄斑变性(AMD)，其导致与视网膜色素上皮(RPE)细胞、光感受器和脉络膜毛细血管的退化相关的不可逆失明。已知氧化应激、炎症(IL-17参与)和一些遗传因素涉及AMD发病机理。氧化应激可诱导DNA损伤反应(DDR)、自噬和细胞衰老。
因此，在一些实施方案中，通过以受控和安全的方式去除衰老细胞，(一种或多种)Senolytic肽适于治疗涉及眼科疾病和病症的早衰。
在一些实施方案中，本文提供了通过施用至少一种Senolytic肽(可与至少一种治疗上可接受的赋形剂组合以形成组合物)，用于治疗或预防(即，降低其发生的可能性；延缓其发作或发展，或抑制、延迟、减慢或阻碍其进展或严重程度)眼科疾病、病症或状况(例如，老视眼，白内障，黄斑变性)；用于选择性地杀死对象的眼睛中的衰老细胞，和/或在有此需要的对象的眼睛中诱导胶原蛋白的产生的方法，其包含将(一种或多种)Senolytic肽直接施用于眼睛。
在一些涉及眼科疾病和病症的治疗的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗代谢疾病或病症的方法
通过施用本文所述的Senolytic肽可治疗的衰老相关疾病或病症包括代谢疾病或病症。这种衰老相关疾病和病症包括糖尿病、代谢综合征、糖尿病性溃疡和肥胖症。
在过去的几十年中，研究已表明，影响全身的慢性炎症与2型糖尿病等疾病有关。糖尿病被认为是慢性低度炎症的结果，其似乎改变了葡萄糖被细胞吸收的方式。已发现，Anakinra(一种生物抗炎药)通过阻断细胞因子蛋白IL-1(如上所述，是免疫和炎症反应的关键激发剂(instigator))来改善某些糖尿病症状。因此，(一种或多种)Senolytic肽适于基本上通过停止SASP来减轻体内的慢性炎症，以减缓糖尿病的进展。
可以使用本领域已知的用于2型糖尿病的标准诊断方法来鉴定患有2型糖尿病的对象。通常，2型糖尿病的诊断基于对象的症状(例如，口渴感增加和尿频，饥饿感增加，体重减轻，疲劳，视力模糊，愈合缓慢疮或频繁感染和/或皮肤发暗的区域)、病史和/或体格检查。有罹患2型糖尿病的风险的对象包括具有2型糖尿病家族史的对象和具有其他风险因素(诸如超重，脂肪分布，不活动，种族，年龄，前驱糖尿病和/或妊娠糖尿病)的对象。
医学和临床领域的技术人员可以容易地确定Senolytic肽的有效性。一种或任意组合的诊断方法，包括体格检查，临床症状的评估和监测，以及进行本文所述的分析测试和方法，可用于监测对象的健康状态。可以例如通过测定葡萄糖和胰岛素耐受性，能量消耗，身体组成，脂肪组织，骨骼肌和肝脏炎症，和/或脂毒性(通过体内成像测定肌肉和肝脏脂质，通过组织学测定肌肉、肝脏、骨髓和胰腺β细胞脂质的积累和炎症)来监测接受本文所述用于治疗或预防糖尿病的一种或多种Senolytic肽的对象。2型糖尿病的其他特征性特点或表型是已知的，并且可以如本文所述的以及通过使用本领域已知的和常规实施的其他方法和技术进行测定。
肥胖症和肥胖症相关病症用于指身体质量在其身高和体型上以可测量的程度大于理想水平的对象的状况。身体质量指数(BMI)是一种用于确定超重的测量工具，并且是根据对象的身高和体重计算得出的。如果一个人的BMI为25-29，则认为该人超重；如果一个人的BMI为30-39，则认为该人肥胖；而如果一个人的BMI为40，则该人为严重肥胖。因此，术语肥胖症和肥胖症相关是指身体质量指数值大于30，大于35或大于40的人类对象。未被BMI捕获的一类肥胖症在本领域中称为“腹部肥胖症”，其与对象中部周围发现的多余脂肪有关，这是健康的重要因素，甚至与BMI无关。腹部肥胖症最简单和最常用的量度是腰部尺寸。通常，在女性中将腹部肥胖症定义为腰部尺寸为35英寸或更高，而在男性中将其定义为腰部尺寸为40英寸或更高。确定肥胖症的更复杂方法需要专用设备，诸如磁共振成像或双能X射线吸收测量机。
与糖尿病和衰老相关的病症或病症是糖尿病性溃疡(即，糖尿病伤口)。溃疡是皮肤的破裂，其可累及皮下组织甚至肌肉或骨骼。这些病变尤其发生在下肢。患有糖尿病静脉性溃疡的患者在慢性伤口部位表现出细胞衰老存在的增加。在诸如糖尿病性溃疡的慢性伤口部位也观察到了慢性炎症，表明衰老细胞的促炎细胞因子表型在病理中起作用。
患有2型糖尿病或处于发展2型糖尿病风险中的对象可能患有代谢综合征。人类的代谢综合征通常与肥胖症相关，且其特征为心血管疾病、肝脏脂肪变性、高脂血症、糖尿病和胰岛素抵抗中的一种或多种。患有代谢综合症的对象可能会出现一系列代谢病症或异常，其可包括，例如，高血压，2型糖尿病，高脂血症，血脂异常(例如，高甘油三酯血症，高胆固醇血症)，胰岛素抵抗，肝脏脂肪变性(脂肪性肝炎)，高血压，动脉粥样硬化和其他代谢病症中的一种或多种。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在II型糖尿病的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的II型糖尿病疾病参数尤其包括基础血糖水平，一段时间(2-3个月；A1C测试)中的平均血糖水平，空腹血浆葡萄糖，口服葡萄糖耐量测试，血浆葡萄糖测试N.B.。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在肥胖症的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的肥胖症参数尤其包括体重，身体质量指数(BMI)，腰围，腰臀比，皮褶厚度以及生物电阻抗，磁共振成像和/或双能X射线吸收测量法。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在代谢综合征的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的代谢综合征疾病参数尤其包括肥胖症(参见上文，例如腰围)，甘油三酯、HDL胆固醇的血液水平，血压，空腹血糖的测量。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在肝功能不全的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的肝功能不全疾病参数尤其包括血液AST和ALT值。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在肝硬化的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的肝硬化疾病参数尤其包括凝血因子和国际标准化凝血比的测量，通过磁共振弹性成像的肝脏硬度，CT和/或MRI的肝脏成像，体格检查，胆红素和肌酐的血液测试，和/或肝脏损伤的肝活检分析。
在一些涉及代谢疾病和病症的治疗的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗肾功能紊乱的方法
肾病病理，例如肾小球疾病，发生在老年人中。肾小球性肾炎的特征为肾脏炎症以及两种蛋白IL1α和IL1β的表达。IL1α和IL1β被认为是SASP的主要调节剂。肾小球疾病与衰老细胞的存在增加有关，特别是在纤维化肾脏中。因此，通过杀死衰老细胞来基本上停止SASP，(一种或多种)Senolytic肽适于肾功能紊乱。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在肾功能不全的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的肾功能不全疾病参数尤其包括血压，心/肺音分析，神经系统检查，对蛋白质含量的尿液分析，肌酐清除率和血尿素氮水平的分析，腹部和肾脏的CT、MRI和/或超声检查，用于损伤分析的肾脏活检。
肾小球硬化症是另一种与肾脏老化有关的病理，其由衰老细胞的积累所支持，如老化引起的衰老标志物(如p16和SA-β-Gal)水平升高所表明的。
在一些实施方案中，肾功能紊乱是肾病病理(诸如肾小球硬化症)的结果。(一种或多种)Senolytic肽在肾小球硬化症的治疗中是有效的。在senolytic疗法期间，所测量的肾小球硬化症疾病参数尤其包括，肢体肿胀，体重增加，由于蛋白尿引起的尿液变化，肾小球中小毛细血管的扭曲或压缩(其在活检过滤血液)，和血浆尿素或蛋白质浓度，血压，肾小球滤过率和/或肾脏超声。
在一些涉及肾功能病症和病症的治疗的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽作为癌症治疗的佐剂以及用于预防转移的方法
应激诱导的早衰(SIPS)响应各种应激(诸如化疗药物和电离辐射)而迅速发生。两种应激都会对非肿瘤细胞造成实质性的附加大分子损害，并负责在癌症存活者中经常观察到的早期老化表型。与正常老化机制和大分子修复机制下降引起的慢性衰老相反，治疗诱导的衰老是由癌症治疗期间施加在组织上的突然的外源性应激引起的。使用本文所述的方法，可将(一种或多种)Senolytic肽施用给也可能患有癌症的对象，不是作为主要治疗而是作为佐剂，以防止转移。当癌细胞(例如，肿瘤细胞)扩散到起源的解剖部位之外并且最初定植到对象全身的其他区域时，发生癌症的转移。
在一些实施方案中，可认为对象处于部分或完全的癌症缓解中，其中本文所述的杀死衰老细胞的方法并不旨在作为癌症的主要治疗方法。在一些实施方案中，所述对象表现出可能最终导致癌症的一定水平的细胞变性。
在一个实施方案中，提供了通过施用如本文所述的Senolytic肽在患有癌症的对象中预防(即，降低其发生的可能性)、抑制或延迟转移的方法。在一些实施方案中，如温和方案中所述在治疗窗口(即，治疗过程)中施用Senolytic肽。
当按照本文所述的方法以治疗有效剂量向患有癌症的对象施用时，这样的Senolytic肽可抑制肿瘤增殖。
本文所述的方法还可用于抑制、延迟或减慢医学领域中所述的任何一种类型的肿瘤的转移性癌症的进展。
本文所述的方法还可用于抑制、延迟或减慢医学领域中所述的任何一种类型的肿瘤的转移性癌症的进展。
在一些实施方案中，癌症类型为但不限于转移性黑素瘤、耐药性乳腺癌或耐放疗成胶质母细胞瘤。
(一种或多种)Senolytic肽在转移性黑素瘤的治疗中是有效的或作为辅助药物。在senolytic疗法期间，所测量的转移性黑素瘤疾病参数尤其包括肿瘤尺寸和/或转移的减少。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在耐药性乳腺癌的治疗中是有效的或作为辅助药物。在senolytic疗法期间，所测量的耐药性乳腺癌疾病参数包括肿瘤尺寸和/或转移的减少。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽在耐药性胶质母细胞瘤的治疗中是有效的或作为辅助药物。在senolytic疗法期间，所测量的耐药性胶质母细胞瘤疾病参数尤其包括肿瘤尺寸和/或转移的减少。
在一些实施方案中，其中用(一种或多种)Senolytic肽进行的治疗旨在抑制患有癌症的对象的转移，持续方案(图14B)是最合适的。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用脉冲方案或温和方案的个体化治疗过程(图14A、C)或安排1中所述的施用方法。
使用(一种或多种)Senolytic肽治疗早老性综合征(Progeroid Syndrome)的方法
早老性综合症(PS)是一组致命的、严重和罕见的遗传病症，其模仿过早老化，同时表现出各种临床特征和表型。PS模仿人类老化的许多特征，例如毛发脱落，身材矮小，皮肤紧致度，心血管疾病和骨质疏松症。因此，Senolytic肽也可用于治疗或减轻由于个体中先天性遗传突变引起的过早老化过程而导致的早老性综合症的影响。尽管所有早老性综合症的特征在于相似的临床特征，但其潜在机制可以根据突变的基因和因此改变的途径而变化。由于突变的基因导致的基因组不稳定，早衰成为这些病症的关键因素。
在一些实施方案中，这些综合征包括临床和遗传上的异质性疾病，诸如共济失调-毛细血管扩张症，Bloom综合征，Cockayne综合征，Fanconi贫血，Hutchinson-Gilford早老综合征，Rothmund-Thomson综合征，毛发硫性营养不良，着色性干皮病和Werner综合征(又名成年早老症)。
在一些实施方案中，早老性综合征包括Hutchinson-Gilford早老综合征(HGPS)，其为一种儿童时期的罕见的、致命的和遗传状况，其特征在于生长减弱，发育停滞，典型的面部外观(前额突出，眼睛凸出，钩状鼻尖的薄鼻子，薄嘴唇，小颌畸形和耳朵凸出)和明显的皮肤病学特征(泛发性脱发，皮肤老化，腹部和四肢硬化和皮肤凹陷，明显的皮肤血管系，色素沉着异常，指甲发育不良和皮下脂肪减少)。患有HGPS的个体在青春期出现动脉粥样硬化，脂肪营养不良，心脏梗塞和死亡。
在senolytic治疗期间，HGPS疾病参数通过(尤其是)加速衰老，毛发脱落(脱发)，皮肤老化，关节异常以及皮肤下脂肪损失等特征进行测量。
在一些实施方案中，早老性综合征包括毛发硫性营养不良，其特征在于引起脱发的头发脆弱，神经缺损，骨骼异常和身体素质下降。
在其他实施方案中，PS包括Werner综合征，其特征在于患病个体中与正常老化相关的特征的急剧、快速出现。患病个体通常会在生命的早期发展出伴发性老化病症，诸如白内障，皮肤溃疡，2型糖尿病，生育力下降，动脉粥样硬化，骨质疏松症和某些类型的癌症。
在一些实施方案中，可通过施用Senolytic肽来治疗或预防(即，降低其发生的可能性)过早老化相关的衰退和症状。
在一些涉及早老性综合征的治疗或减轻的实施方案中，脉冲方案是最合适的(图14A)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)或安排1中所述的施用方法。
本文描述的治疗方法的有效性可通过减少与衰老诱导刺激相关的过早老化疾病或早老性性状的症状数量，降低一种或多种症状的严重程度，或延缓与衰老诱导刺激相关的过早老化疾病或早老性性状的进展来证明。在一些实施方案中，预防与衰老诱导刺激相关的过早老化疾病或早老性性状是指预防(即，降低其发生的可能性)或延缓与衰老诱导刺激相关的过早老化疾病或早老性性状的发作或与衰老诱导刺激相关的一种或多种过早老化疾病或早老性性状的复发。
使用(一种或多种)Senolytic肽减少化疗和放疗的副作用的方法
肿瘤增殖可通过肿瘤尺寸来确定，其可以以本领域技术人员熟悉的各种方式来测量，例如通过PET扫描，MRI，CAT扫描，活检。还可通过检查肿瘤细胞的分化来评估治疗剂对肿瘤增殖的作用。已证明，senolytic物质降低了DNA损伤后衰老细胞进入细胞凋亡的阈值。在一些实施方案中，通过以受控和安全的方式去除衰老细胞，将(一种或多种)Senolytic肽用作抗化学毒性或放射损伤的senolytic物质。
因为可通过诸如放射和某些化疗药物(例如，阿霉素；紫杉醇；吉西他滨(gemcitabine)；泊马度胺(pomalidomide)；来那度胺(lenalidomide))来诱导细胞衰老，可以在化疗或放疗之后施用本文所述的(一种或多种)Senolytic肽，以杀死(或促进杀死)这些衰老细胞。
如本文所讨论和本领域所理解的，衰老的建立(诸如通过衰老相关分泌表型(SASP)的存在所显示的)在几天内发生；因此，当衰老已建立时，施用Senolytic肽来杀死衰老细胞，从而降低其发生的可能性或降低转移的程度。如本文所讨论的，以下用于施用Senolytic肽的治疗过程可用于本文所述的用于治疗或预防(即，降低其发生的可能性或降低严重程度)化疗或放疗副作用的方法中。去除或破坏衰老细胞可改善化疗或放疗的急性毒性，包括包含能量失衡的急性毒性。急性毒性副作用包括但不限于胃肠道毒性(例如，恶心，呕吐，便秘，厌食，腹泻)，周围神经病变，疲劳，不适，身体活动低下，血液学毒性(例如，贫血)，肝脏毒性，脱发(毛发损失)，疼痛，感染，粘膜炎，液体潴留，皮肤毒性(例如皮疹，皮炎，色素沉着，荨麻疹，光敏性，指甲改变)，口腔(例如，口腔粘膜炎)，牙龈或咽喉问题，或由化疗或放疗引起的任何毒副作用。
因此，在一些实施方案中，本文提供了用于在接受治疗的对象中减轻(减少、抑制或预防发生(即，减少其发生的可能性))化疗或放疗或两者的急性毒性或降低其毒副作用(即，有害副作用)的严重程度的方法，其中该方法包含向该对象施用选择性杀死、去除或破坏或促进选择性破坏衰老细胞的物质。可通过与上述用于治疗/预防转移的相同的治疗过程来完成用于治疗化疗或放疗副作用或减少化疗或放疗副作用的发生可能性或减少化疗或放疗副作用的严重程度的Senolytic肽的施用。如所述的用于治疗或预防(即，减少其发生的可能性)转移的方法，在非化疗或非放疗时间间隔内或在已完成化疗或放疗治疗方案后，以治疗有效剂量施用Senolytic肽。
在其中治疗目的在于减少化疗和放疗的副作用的一些实施方案中，持续方案是最合适的(图14B)。在各种实施方案中，可以根据对象的健康状态和/或对象对治疗的反应来改变上述方案的治疗有效剂量和/或治疗持续时间。在疗法期间，可以通过适当的测量(包括本文提供的那些)或通过在疗法开始时和整个疗法期间从对象获取的活检样品中检测衰老细胞群从而监测衰老细胞群的减少来监测对象的进展。在各种实施方案中，当对象患有其他疾病或病症时，根据监督治疗的医生的决定，应用持续方案或温和方案的个体化治疗过程(图14B-C)。
化疗或放疗的周期数目或化疗或放疗剂量方案的总时间长度可以根据对象对癌症疗法的反应而变化。在一些实施方案中，肿瘤学领域的技术人员将调整senolytic治疗计划时间表，并使其与所述化疗或放疗相一致。
递送Senolytic肽的组合物和方法
在一些实施方案中，可以通过使用本领域常规实践的技术以适于递送方法的方式配制包含Senolytic肽的组合物。该组合物可为固体(例如，片剂，胶囊剂)，半固体(例如，凝胶剂)，液体或气体(气雾剂)的形式。在一些实施方案中，以治疗有效剂量，以推注(bolusinfusion)形式施用Senolytic肽(或包含其的组合物)。在一些实施方案中，当通过输注以治疗有效剂量递送Senolytic肽时，其中，根据医学领域技术人员常规执行的技术，将Senolytic肽通过血管递送至包含要被杀死的衰老细胞的器官或组织。
药学上可接受的赋形剂在药学领域是熟知的。药学上可接受的赋形剂的实例包括在生理pH的无菌盐水和磷酸盐缓冲盐水。可在组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料、缓冲剂等。通常，赋形剂的类型基于施用方式以及(一种或多种)活性成分的化学组成来选择。可选地，可将Senolytic肽配制成冻干物。可以使用一种或多种合适的赋形剂溶液将本文所述的组合物冻干或另外配制成冻干产品，以在施用时溶解和/或稀释该组合物的物质。在一些实施方案中，可使用本领域已知的和实践的技术将Senolytic肽包封在脂质体内。包含Senolytic肽的组合物可配制用于本文中和本领域中描述的任何合适的施用方式。
可以通过本领域技术人员已知的几种途径中的任一种，将包含(一种或多种)Senolytic肽的组合物递送至需要其的对象。作为非限制性实例，该组合物可通过口服，静脉内，腹腔内，通过输注(例如，推注)，皮下，肠内，直肠，鼻内，通过吸入，口腔，舌下，肌内，透皮，真皮内，表面，眼内，阴道，直肠，或颅内注射或其某个组合来施用。在一些实施方案中，如上所述，剂量是通过静脉、腹腔施用，直接进入靶组织或器官，或通过皮下途径施用。在一些实施方案中，递送方法包括药物涂覆的或渗透的支架，对于该支架，该药物是Senolytic肽。本文更详细地描述了适于这种递送方法的制剂。
在一些实施方案中，将Senolytic肽(其可与至少一种治疗上可接受的赋形剂组合以形成包含该(一种或多种)Senolytic肽的组合物)以治疗有效剂量直接施用于包含导致疾病或病症的表现的衰老细胞的靶组织或器官。在一些实施方案中，当治疗骨关节炎时，将至少一种Senolytic肽以治疗有效剂量直接施用于需要其的对象的骨关节炎关节(即，关节内)。在一些实施方案中，可通过表面、透皮、真皮内或皮下途径以治疗有效剂量向关节施用Senolytic肽。在一些实施方案中，本文提供了通过直接施用于动脉来治疗与动脉硬化相关的心血管疾病或病症(诸如动脉粥样硬化)的方法。在一些实施方案中，可通过吸入、鼻内、通过插管或鞘内以治疗有效剂量施用用于治疗衰老相关的肺部疾病或病症的Senolytic肽(其可与至少一种药学上可接受的赋形剂组合以形成包含(一种或多种)Senolytic肽的组合物)，例如，以更直接地将Senolytic肽提供给患病的肺组织。作为另一非限制性实例，可通过注射(例如，眼内或玻璃体内)或以乳膏剂、软膏剂、凝胶剂或滴眼液通过眼睑下结膜施用，将Senolytic肽(或包含Senolytic肽的组合物)直接递送至眼睛。在一些实施方案中，可将Senolytic肽或包含Senolytic肽的组合物配制成定时释放(也称为缓释、控释)组合物，或者可通过推注以治疗有效剂量施用。
包含(一种或多种)Senolytic肽的组合物(例如，用于口服施用或用于注射，输注，皮下递送，肌内递送，腹腔内递送或其他方法)可为液体形式。包含(一种或多种)Senolytic肽的液体组合物可包括，例如，以下的一种或多种：无菌稀释剂，诸如水，盐水溶液，优选生理盐水，Ringer's溶液，等渗氯化钠，可用作溶剂或悬浮介质的不挥发性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他溶剂；抗菌剂；抗氧化剂；螯合剂；用于调节张力的缓冲剂和物质，诸如氯化钠或右旋糖。肠胃外组合物可以封装在玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量小瓶中。优选使用生理盐水，并且包含(一种或多种)Senolytic肽的可注射组合物优选是无菌的。在另一实施方案中，为了治疗眼科病症或疾病，可以滴眼剂的形式将包含(一种或多种)Senolytic肽的液体组合物施用于眼睛。可将包含(一种或多种)Senolytic肽的液体组合物口服递送。
对于口服制剂，本文所述的至少一种Senolytic肽可以单独使用或与适当的添加剂组合使用以制成片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂，并且如果需要，还可以与稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂、着色剂和调味剂一起使用。化合物可与缓冲剂(以保护该化合物免受胃环境的低pH的影响)和/或肠溶衣一起配制。包括在组合物(其包含(一种或多种)Senolytic肽)中的Senolytic肽可与调味剂(例如，以液体、固体或半固体制剂)和/或肠溶衣一起配制用于口服递送。
包含本文所述的任何一种Senolytic肽的组合物可被配制以持续或缓慢释放(也称为定时释放或控释)。这种包含Senolytic肽的组合物通常可使用熟知的技术来制备，并以治疗有效剂量通过例如口服、直肠、真皮内或皮下植入或通过在期望的靶部位植入来施用。缓释制剂可含有分散在载体基质中和/或包含在由速率控制膜包围的储器中的化合物。在此类制剂中使用的赋形剂是生物相容性的，并且也可以是可生物降解的；优选地，该制剂提供相对恒定水平的活性组分释放。持续释放制剂中所含活性剂的量取决于植入部位、释放速率和预期释放持续时间，以及要治疗或预防的状况、疾病或病症的性质。
在一些实施方案中，将包含Senolytic肽的组合物配制用于透皮、真皮内或表面施用。所述组合物可以使用注射器、绷带、透皮贴剂、插入物或注射器样施药器，作为粉末/滑石粉或其他固体、液体、喷雾剂、气溶胶、软膏剂、泡沫剂、霜剂、凝胶剂、糊剂，以治疗有效剂量施用。其优选为控释制剂或持续释放制剂的形式，其以治疗有效剂量表面施用或直接注射到与待治疗区域相邻的皮肤中或待治疗区域的皮肤中(皮内或皮下)。包含Senolytic肽的活性组合物也可以通过离子电渗疗法递送。防腐剂可用于防止真菌和其他微生物的生长。合适的防腐剂包括，但不限于，苯甲酸，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸丙酯，苯甲酸钠，丙酸钠，苯扎氯铵，苄索氯铵，苄醇，氯化十六烷基吡啶(cetypyridinium chloride)，氯丁醇，苯酚，苯乙醇，硫柳汞及其组合。
可以将包含Senolytic肽的组合物配制成用于表面施用的乳剂。乳剂含有一种分布在第二液体体内的液体。该乳剂可为水包油乳剂或油包水乳剂。油相和水相中的一者或两者均可含有一种或多种表面活性剂、乳化剂、乳化稳定剂、缓冲剂和其他赋形剂。油相可包含其他油性药学上批准的赋形剂。合适的表面活性剂包括，但不限于，阴离子表面活性剂，非离子表面活性剂，阳离子表面活性剂和两性表面活性剂。用于表面施用的包含Senolytic肽的组合物还可包括至少一种合适的悬浮剂、抗氧化剂、螯合剂、软化剂(emollient)或湿润剂。
例如，软膏剂和霜剂可与水性或油性基质并添加合适的增稠剂和/或胶凝剂一起配制。洗剂可用水性或油性基质配制，并且通常还将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。液体喷雾剂可例如通过特殊形状的封闭件从加压包装中递送。水包油乳剂也可以用于包含Senolytic肽的组合物、贴剂、绷带和制品中。这些体系是半固体乳剂、微乳剂或泡沫乳剂体系。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可以与油质基质或软膏一起配制，以形成具有所需形状的半固体组合物。除了Senolytic肽，这些包含Senolytic肽的半固体组合物可以包含溶解的和/或悬浮的杀菌剂、防腐剂和/或缓冲体系。可被包括在内的凡士林组分可为粘度范围从掺入异丁烯、胶体二氧化硅或硬脂酸盐的矿物油到固体石蜡的任何石蜡。吸收基质可与油质体系一起使用。添加剂可单独地或组合地包括胆固醇，羊毛脂(羊毛脂衍生物，蜂蜡，脂肪醇，羊毛蜡醇，低HLB(亲水-亲油平衡)乳化剂以及各种离子型和非离子型表面活性剂。
在一些实施方案中，可将包含本文所述的任何一种Senolytic肽的组合物配制成持续释放或缓释(其也可称为定时释放或控释)。控制或持续释放透皮或表面制剂可以通过添加本领域可用的延时释放添加剂(诸如聚合物结构，基质(matrice))来实现。例如，可通过使用热熔挤出制品(诸如生物粘附性热熔挤出膜)，以治疗有效剂量施用包含Senolytic肽的组合物。该制剂可以包含交联的聚羧酸聚合物制剂。交联剂可以提供足够的粘附力的量存在，以使体系保持附着在靶上皮或内皮细胞表面足够长的时间，以得到所需的化合物释放。
插入物、透皮贴剂、绷带或制品可以包含聚合物的混合物或涂层，该聚合物的混合物或涂层在延长的时间段内以恒定的速率释放活性剂。在一些实施方案中，该制品、透皮贴剂或插入物包含水溶性成孔剂，诸如聚乙二醇(PEG)，其可以与水不溶性聚合物混合以增加插入物的耐久性并延长活性成分的释放。
透皮装置(插入物、贴剂、绷带)也可包含水不溶性聚合物。速率控制聚合物可用于施用至其中pH变化可用于实现释放的部位。这些速率控制聚合物可以在用活性化合物喷雾和干燥的过程中使用连续的涂膜施加。在一个实施方案中，包衣制剂用于将包含活性成分的小丸包衣，该活性成分被压制成固体的、可生物降解的插入物。
聚合物制剂也可以用于提供控释或持续释放。可使用本领域中描述的生物粘附性聚合物。举例来说，可将持续释放凝胶和化合物掺入聚合物基质(诸如疏水性聚合物基质)中。聚合物基质的实例包括微粒。该微粒可以是微球，并且核可为与聚合物壳不同的材料。可选地，聚合物可浇铸成薄板或薄膜、可为通过研磨或其他标准技术生产的粉末，或凝胶(诸如水凝胶)。聚合物也可以是绷带、支架、导管、人工血管或其他装置的涂层或一部分的形式，以促进Senolytic肽的递送。基质可以通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取和本领域技术人员已知的其他方法形成。
在本文所述的用于治疗与动脉硬化相关或由动脉硬化引起的心血管疾病的方法的一些实施方案中，一种或多种Senolytic肽可通过支架直接递送至血管(例如，动脉)中。在一些实施方案中，使用支架将Senolytic肽递送至动脉粥样硬化血管(动脉)。在本领域中描述了几种用于制备药物包衣的支架和药物包埋的支架的方法。在一些实施方案中，也可将Senolytic肽掺入支架中(例如作为金属支架本身的涂层或孔)。在一些实施方案中，可将Senolytic肽配制在脂质体内并应用于支架。支架在动脉粥样硬化动脉中的放置是由医学领域的技术人员进行的。
在一些实施方案中，将Senolytic肽以治疗有效剂量施用于患有眼科衰老相关疾病或病症的对象，其可通过眼内或玻璃体内递送。在其他一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可通过结膜途径以治疗有效剂量施用于眼睛，将Senolytic肽应用于粘膜和眼睑的组织，上、下或两者。这些施用中的任一种可为推注。
在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽以PEG化肽的形式以治疗有效剂量施用。PEG化是一些非环状肽的替代途径。PEG的两亲性增加了所述肽在有机溶剂和水中的溶解度。肽的直接PEG化增加了所述肽的吸收和全身稳定性。另外，PEG及其代谢产物在用于肽递送的浓度下是无毒的。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以是PEG化的。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽是PEG化的。
在一些实施方案中，以治疗有效剂量施用脂肪酸缀合的(一种或多种)Senolytic肽。脂质化已被用于增加口服施用期间的蛋白质生物利用度。多肽与脂肪酸的缀合改善跨膜转运，并赋予肽更高的稳定性和半衰期。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以通过脂质化与脂肪酸缀合。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽通过脂质化与脂肪酸缀合。
在一些实施方案中，以治疗有效剂量施用维生素B12缀合的(一种或多种)Senolytic肽。肽与维生素B12及其衍生物的缀合是一种通过利用与内在因子结合的维生素B12的受体介导的吸收来增加所述肽的口服吸收的方法。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以与维生素B12或其衍生物缀合。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽与维生素B12或其衍生物缀合。
在一些实施方案中，以治疗有效剂量施用钉合(stapled)(一种或多种)Synthetic肽。钉合肽具有α螺旋结构，其中各种残基通过合成烃骨架连接。它们已用于药物递送中，以通过锁定肽构象，增加所述肽的螺旋度和溶液稳定性来改善所递送肽的生化特性。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以被合成为钉合肽。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽被合成为钉合肽。
在一些实施方案中，以治疗有效剂量施用N端或C端修饰的(一种或多种)合成肽。肽的N端和/或C端修饰可以通过增加对蛋白水解的抗性来赋予稳定性。已显示出N-乙酰化和C-酰胺化可提高对蛋白水解降解的抗性。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以是N-乙酰化或C-酰胺化的。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽是N-乙酰化或C-酰胺化的。
在一些实施方案中，以治疗有效剂量施用作为前药的(一种或多种)Senolytic肽。前药衍生自药物分子。它们是可生物逆转的化合物，其可以通过酶促或化学转化在体内释放活性母体药物。如本领域技术人员将认识到的，(一种或多种)Senolytic肽可以被合成为前药肽。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽被合成为前药肽。
如本领域技术人员将认识到的，在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可以与酶抑制剂共同施用以减轻蛋白水解降解，从而增加生物利用度。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽与酶抑制剂共同施用。
如本领域技术人员将认识到的，在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽可以与吸收增强剂(诸如壳多糖及其衍生物(诸如壳聚糖))共同施用以增强亲水性药物分子的吸收。在一些实施方案中，(一种或多种)Senolytic肽与吸收增强剂(诸如壳多糖及其衍生物(即壳聚糖))共同施用。
实施例
实施例1
(一种或多种)Senolytic肽选择性清除衰老细胞
每隔一天用100nM阿霉素处理IMR-90细胞(ATCC#CCL-186，一种衍生自胎儿肺组织的二倍体原代人成纤维细胞粘附细胞系)两次以进行衰老诱导。5天后，测定细胞的衰老相关B-半乳糖苷酶(SA-B-Gal)活性(Senescence Detection Kit，Abcam)，并确认具有SA-B-Gal活性。稍后将这些细胞用于将其与未经阿霉素(非衰老)处理的对应物进行比较的实验。将衰老和非衰老的IMR90成纤维细胞铺板用于XTT生存力测定。将7000个衰老的(如上所述获得的)和2000个非衰老的IMR90成纤维细胞铺板在96孔板中孵育。将该细胞用模拟物(PBS)或(一种或多种)Senolytic肽处理，总剂量范围为0至100μM。铺板后连续3天(24、48和72小时)进行模拟物和肽处理。根据制造商的说明，处理期后，将细胞孵育7天，直到分析基于XTT的生存力。与非衰老细胞相比，衰老细胞的生存力下降更急剧。(一种或多种)Senolytic肽从Chinese Peptide Company订购，并去除了TFA。Senolytic肽(SEQ ID NO：11)由L-氨基酸形成，其中单个D氨基酸插入到N端以提高生物利用度。Senolytic肽SEQ IDNO：12由所有L氨基酸组成，并在N端添加了HIV-TAT序列以进行细胞内递送。通过计算设计了(一种或多种)Senolytic肽，以干扰FoxO4 CR3结构域以从FoxO4-p53复合体中释放p53。Senolytic肽(SEQ ID NO：11)选择性地降低了衰老细胞的生存力，但没有降低非衰老细胞的生存力(图15A)。如衰老的IMR90细胞的生存力曲线的急剧下降(图15B)所显示的，Senolytic肽(SEQ ID NO：11)的senolytic效果优于FoxO4-DRI。
实施例2
化疗(阿霉素)在体外诱导衰老，其被(一种或多种)Senolytic肽所抵消。
每隔一天用化疗药物(100nM阿霉素)处理WI-38细胞(ATCC#CCL-75，一种衍生自胎儿肺组织的二倍体原代人成纤维细胞粘附细胞系)两次以进行衰老诱导。5天后，测定细胞的衰老相关B-半乳糖苷酶(SA-B-Gal)活性(Senescence Detection Kit，Abcam)，并确认具有SA-B-Gal活性。稍后将这些细胞用于将其与未经阿霉素(非衰老)处理的对应物进行比较的实验。将衰老和非衰老的WI-38成纤维细胞铺板用于XTT生存力测定。将7000个衰老的(如上所述获得的)和2000个非衰老的WI-38成纤维细胞铺板在96孔板中孵育。将该细胞用模拟物(PBS)或Senolytic肽(SEQ ID NO：11)处理，总剂量范围为0至100μM。铺板后连续3天(24、48和72小时)进行模拟物和肽处理。根据制造商的说明，处理期后，将细胞孵育7天，直到分析基于XTT的生存力。与非衰老细胞相比，衰老细胞的生存力下降更急剧。Senolytic肽(SEQID NO：11)从Chinese Peptide Company订购，并去除了TFA。Senolytic肽(SEQ ID NO：11)选择性地降低了衰老细胞的生存力，但没有降低非衰老细胞的生存力(图16A)。如通过这些生存力曲线的SI50值所反映的衰老的WI-38细胞的生存力曲线(图16B-C)的急剧下降所显示的，Senolytic肽(SEQ ID NO：11)的senolytic效果优于FoxO4-DRI。发现该Senolytic肽(SEQ ID NO：11)和FoxO4-DRI的SI50值分别为4.9和29.5。
实施例3
化疗诱导的肾脏衰老的治疗/衰老相关的肾脏疾病的治疗
本研究严格按照TUBITAK-MAM Animal Ethics Committee批准的方案进行。本研究中使用的所有小鼠均为8-12周龄的BALB/c背景。将所有小鼠保持在集体房间中直到实验开始，之后将它们置于单独的笼子中(每个笼子4只小鼠)。在整个研究中仅使用雄性小鼠。在可行的情况下，使用同窝出生仔畜。将所有小鼠随机分配到实验组。小鼠随意进食。记录小鼠的初始体重。将小鼠分为三组(A-不处理，B-阿霉素处理+模拟物处理，C-阿霉素处理+Senolytic肽处理)。阿霉素诱导的化学毒性被用于诱导小鼠的肾脏衰老。B组和C组的小鼠腹腔内施用阿霉素(8mg/kg)两次(第0天和第10天)。每周记录三次小鼠的体重。第2次阿霉素处理后24天，在三天(每隔一天)中向B组静脉内施用PBS(模拟物治疗)，并向C组施用Senolytic肽(SEQ ID NO：12)(3x10mg/kg)(图17A)。监测小鼠的健康、活动和外观，并在14天后处死小鼠。分析小鼠的宏观病理学和病理学。将小鼠器官和组织在液氮中速冻并包埋在OCT中，并保持在-80C。取10微米厚的肾脏的中央矢状冷冻切片，并按实施例1-3中的方法测定SA-B-Gal活性。在小鼠中阿霉素诱导了脱毛并造成体重减轻，并且两种状况在经Senolytic肽(SEQ ID NO：12)处理后逆转(图17B)。由SA-B-Gal活性所证实的，阿霉素在BALB/c中诱导肾脏衰老，并且使用Senolytic肽的处理清除了经阿霉素处理的小鼠肾脏中的衰老细胞(图17C)。
实施例4
(一种或多种)Senolytic肽以治疗有效剂量是无毒的
根据急性系统毒性试验(ISO 10993-11)评估Senolytic肽的毒性。本研究严格按照TUBITAK-MAM Animal Ethics Committee批准的方案进行。本研究中使用的所有小鼠均为8-12周龄的BALB/c背景。将所有小鼠保持在集体房间中直到实验开始，之后将它们置于单独的笼子中(每个笼子5只小鼠)。使用小鼠模型(BALB/c)使用单次注射(每组n＝5)以1、10、50和100mg/kg的剂量静脉施用Senolytic肽(SEQ ID NO：11)，还单独给与媒剂。24小时后，将注射对照和Senolytic肽(SEQ ID NO：11)的小鼠处死以进行病理检查。注射后24小时内未观察到对小鼠身体外观的毒性。随后收集血液样品用于血液学和生化参数的测定和分析。测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性和血液尿素、葡萄糖、甘油三酸酯水平，尤其是完整的血液学参数。结果表明，即使以比实施例3中所用的剂量更高的剂量(100mg/kg)，血液学参数、AST、ALT、ALP水平和宏观病理学结果也表明对所述小鼠模型没有毒性(图19)。
实施例5
体外化疗诱导的衰老被筛选的(一种或多种)Senolytic肽消除
将WI-38细胞(ATCC#CCL-75，一种衍生自胎儿肺组织的二倍体原代人成纤维细胞粘附细胞系)和IMR90细胞(ATCC#CCL-186，一种衍生自胎儿肺组织的二倍体原代人成纤维细胞粘附细胞系)每隔一天用化疗药物(100nM阿霉素)处理两次，以诱导衰老。5天后，测定细胞的衰老相关B-半乳糖苷酶(SA-B-Gal)活性(Senescence Detection Kit，Abcam)，并确认具有SA-B-Gal活性。稍后将这些细胞用于将其与未经阿霉素(非衰老)处理的对应物进行比较的实验。将衰老和非衰老的WI-38/IMR90成纤维细胞铺板用于XTT生存力测定。将7000个衰老的(如上所述获得的)和2000个非衰老的WI-38/IMR90成纤维细胞铺板在96孔板中孵育。将该细胞用模拟物(PBS)或Senolytic肽(SEQ ID NO：12)处理，总剂量范围为0至100μM。铺板后连续3天(24、48和72小时)进行模拟物和肽处理。根据制造商的说明，处理期后，将细胞孵育7天，直到分析基于XTT的生存力。与非衰老细胞相比，衰老细胞的生存力下降更急剧。Senolytic肽(SEQ ID NO：12)从Chinese Peptide Company订购，并去除了TFA。Senolytic肽(SEQ ID NO：12)选择性地降低了衰老的WI-38(图20A)和IMR-90(图20B)细胞的生存力，但没有降低非衰老细胞对应物的生存力。
以下实施方案说明了所公开主题的其他方面。
第一实施方案是一种人工肽，其包含与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少90％相同性的氨基酸序列。
第二实施方案是根据第一实施方案所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少95％的相同性。
第三实施方案是根据第一至第二实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少98％的相同性。
第四实施方案是根据第一至第三实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个。
第五实施方案是根据第一至第四实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少90％的相同性。
第六实施方案是根据第一至第五实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少95％的相同性。
第七实施方案是根据第一至第六实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个。
第八实施方案是根据第一至第七实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述人工肽还包含促进细胞摄取的N端氨基酸序列或促进细胞摄取的C端氨基酸序列。
第九实施方案是根据第一至第八实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述人工肽还包含N端氨基酸序列，所述N端氨基酸序列包含单个D-氨基酸。
第十实施方案是根据第一至第九实施方案中任一项所述的人工肽，其中所述人工肽表现出环状结构。
第十一实施方案是一种包含根据第一至第十实施方案中任一项所述的人工肽的组合物。
第十二实施方案是一种在对象中诱导衰老细胞的细胞凋亡的方法，所述方法包含使人工肽干扰衰老细胞的叉头框蛋白O4(FoxO4)的CR3结构域，所述人工肽包含与SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少90％相同性的氨基酸序列。
第十三实施方案是根据第十二实施方案所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少95％的相同性。
第十四实施方案是根据第十二至第十三实施方案中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少95％的相同性。
第十五实施方案是根据第十二至第十四实施方案中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个。
第十六实施方案是根据第十二至第十五实施方案中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少90％的相同性。
第十七实施方案是根据第十二至第十六实施方案中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少95％的相同性。
第十八实施方案是根据第十二至第十七实施方案中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个。
第十九实施方案是根据第十二至第十八实施方案中任一项所述的方法，其中所述人工肽还包含促进细胞摄取的N端氨基酸序列或促进细胞摄取的C端氨基酸序列。
第二十实施方案是根据第十二至第十九实施方案中任一项所述的方法，其中所述人工肽还包含N端氨基酸序列，所述N端氨基酸序列包含单个D-aa。
第二十一实施方案是根据第十二至第二十实施方案中任一项所述的方法，其中所述人工肽表现出环状结构。
第二十二实施方案是根据第十二至第二十一实施方案中任一项所述的方法，其中使所述人工肽干扰衰老细胞的FoxO4的CR3结构域包含向对象施用药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求12至21中任一项所述的人工肽。
第二十三实施方案是根据第十二至第二十二实施方案中任一项所述的方法，其中所述人工肽对FoxO4的CR3结构域表现出最大的干扰。
第二十四实施方案是根据第十二至第二十三实施方案中任一项所述的方法，其中与内源FoxO4相比，所述人工肽表现出与p53DBD降低的直接相互作用。
第二十五实施方案是根据第十二至第二十四实施方案中任一项所述的方法，其中与所述FoxO4相比，所述人工肽优选对FoxO1或FoxO3的CR3结构域表现出降低的干扰。
第二十六实施方案是根据第十二至第二十五实施方案中任一项所述的方法，其中与所述FoxO4相比，所述人工肽对DNA表现出降低的干扰。
第二十七实施方案是根据第十二至第二十六实施方案中任一项所述的方法，其中所述衰老细胞的特征在于表达衰老相关分泌表型(SASP)。
第二十八实施方案是根据第十二至第二十七实施方案中任一项所述的方法，其中所述方法包含治疗衰老相关疾病或病症。
第二十九实施方案是根据第二十八实施方案所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症，并且其中所述对象是哺乳动物，优选是人类，并且其中在对所述对象进行放疗之前、期间和/或之后，和/或在对所述对象施用至少一种化疗剂之前、期间或之后，施用所述人工肽。
第三十实施方案是根据第二十八至第二十九实施方案中任一项所述的方法，其中所述癌症的特征在于对疗法有抗性。
第三十一实施方案是根据第二十八至第三十实施方案中任一项所述的方法，其中所述疗法抗性癌症包含转移性黑素瘤、乳腺癌或胶质母细胞瘤，并且其中癌症对其有抗性的疗法是放疗或化疗。
第三十二实施方案是根据第十二至第三十一实施方案中任一项所述的方法，其中所述对象包含特征在于患有或预期患有慢性炎性疾病或衰老相关疾病或病症的人。
第三十三实施方案是根据第十二至第三十二实施方案中任一项所述的方法，其中所述方法有效地从所述对象中去除表达p16INK4a的细胞，其中所述对象的特征在于患有或预期患有衰老相关疾病或病症。
第三十四实施方案是根据第十二至第三十三实施方案中任一项所述的方法，其中所述方法有效改变所述对象中丝氨酸-46磷酸化的p53灶的水平，其中所述对象的特征在于患有或预期患有衰老相关疾病或病症。
第三十五实施方案是根据第十二至第三十四实施方案中任一项所述的方法，其中所述方法包含根据脉冲方案、持续方案、温和冲击方案或其组合来施用所述人工肽。
如本领域技术人员将认识到的，可以在广泛的应用范围内修改和改变本申请中描述的(一种或多种)Senolytic肽和所公开的方法，以产生广泛的Senolytic肽，这些Senolytic肽可针对靶向那些衰老细胞亚群的特异性治疗，且因此，专利主题的范围不受所给出的任何具体示例性教导的限制。旨在涵盖落入所附权利要求书的精神和广泛范围内的所有此类替代、修改和变化。
本申请中的任何描述均不应解读为暗示任何特定要素、步骤或功能是必须包括在权利要求范围内的必要要素：专利主题的范围仅由允许的权利要求来限定。此外，这些权利要求均无一意图援引35USC第112条，除非确切的措词“意味着(means for)”后面跟有分词。
序列表
<110> 艾特南斯有限公司
<120> 新型 senolytic 肽
<130> 5442.15
<150> US 62/567,046
<151> 2017-10-02
<150> US 62/567,076
<151> 2017-10-02
<150> US 62/567,617
<151> 2017-10-03
<160> 247
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 1
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 2
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 2
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 3
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 3
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 4
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 4
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 5
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 5
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 6
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 6
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 7
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 7
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 8
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 8
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 9
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 9
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 10
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 10
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 11
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa is D-Arginine
<400> 11
Xaa Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Ala Pro Arg Lys Arg
20 25 30
Leu Thr Leu
35
<210> 12
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 12
Pro Arg Lys Gly Gly Ser Arg Arg Arg Ala Trp Gly Asn Gln Arg Tyr
1 5 10 15
Ala Arg Leu Ile Arg Gln Ala Ile Glu Ser Ala Pro Glu Lys Arg Leu
20 25 30
Thr Leu Ala
35
<210> 13
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 13
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 14
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 14
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 15
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 15
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 16
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 16
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 17
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 17
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 18
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 18
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 19
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 19
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 20
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 20
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 21
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 21
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 22
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 22
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 23
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 23
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 24
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 24
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 25
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 25
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 26
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 26
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 27
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 27
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 28
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 28
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 29
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 29
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 30
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 30
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 31
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 31
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 32
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 32
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 33
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 33
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 34
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 34
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 35
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 35
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 36
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 36
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 37
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 37
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 38
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 38
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 39
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 39
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 40
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 40
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 41
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 41
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 42
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 42
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 43
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 43
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 44
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 44
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 45
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 45
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 46
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 46
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 47
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 47
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 48
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 48
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 49
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 49
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 50
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 50
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 51
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 51
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 52
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 52
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 53
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 53
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 54
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 54
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 55
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 55
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 56
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 56
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 57
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 57
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 58
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 58
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 59
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 59
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 60
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 60
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 61
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 61
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 62
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 62
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 63
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 63
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 64
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 64
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 65
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 65
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 66
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 66
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 67
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 67
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 68
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 68
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 69
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 69
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 70
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 70
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 71
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 71
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 72
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 72
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 73
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 73
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 74
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 74
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 75
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 75
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 76
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 76
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 77
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 77
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 78
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 78
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 79
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 79
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 80
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 80
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 81
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 81
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 82
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 82
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 83
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 83
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 84
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 84
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 85
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 85
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 86
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 86
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 87
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 87
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 88
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 88
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 89
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 89
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 90
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 90
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 91
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 91
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 92
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 92
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly His Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 93
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 93
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 94
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 94
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 95
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 95
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 96
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 96
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 97
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 97
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 98
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 98
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 99
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 99
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 100
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 100
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 101
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 101
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 102
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 102
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 103
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 103
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 104
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 104
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 105
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 105
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 106
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 106
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 107
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 107
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 108
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 108
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 109
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 109
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 110
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 110
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 111
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 111
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 112
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 112
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 113
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 113
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 114
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 114
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 115
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 115
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 116
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 116
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 117
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 117
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 118
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 118
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 119
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 119
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 120
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 120
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 121
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 121
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 122
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 122
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 123
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 123
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 124
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 124
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 125
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 125
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 126
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 126
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 127
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 127
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 128
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 128
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 129
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 129
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 130
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 130
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 131
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 131
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 132
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 132
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 133
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 133
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 134
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 134
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 135
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 135
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 136
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 136
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 137
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 137
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 138
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 138
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 139
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 139
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 140
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 140
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 141
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 141
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 142
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 142
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 143
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 143
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 144
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 144
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 145
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 145
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 146
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 146
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 147
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 147
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 148
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 148
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 149
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 149
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 150
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 150
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 151
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 151
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 152
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 152
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 153
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 153
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 154
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 154
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 155
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 155
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 156
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 156
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 157
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 157
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 158
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 158
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 159
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 159
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 160
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 160
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 161
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 161
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 162
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 162
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 163
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 163
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 164
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 164
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 165
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 165
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 166
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 166
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 167
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 167
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 168
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 168
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 169
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 169
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 170
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 170
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 171
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 171
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 172
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 172
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Lys Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 173
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 173
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 174
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 174
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 175
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 175
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 176
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 176
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 177
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 177
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 178
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 178
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 179
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 179
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 180
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 180
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 181
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 181
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 182
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 182
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 183
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 183
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 184
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 184
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 185
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 185
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 186
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 186
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 187
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 187
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 188
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 188
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 189
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 189
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 190
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 190
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 191
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 191
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 192
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 192
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 193
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 193
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 194
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 194
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 195
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 195
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 196
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 196
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 197
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 197
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg His
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 198
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 198
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 199
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 199
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 200
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 200
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 201
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 201
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 202
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 202
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 203
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 203
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 204
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 204
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 205
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 205
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 206
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 206
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 207
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 207
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 208
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 208
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 209
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 209
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 210
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 210
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 211
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 211
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 212
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 212
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 213
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 213
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 214
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 214
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 215
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 215
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 216
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 216
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 217
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 217
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 218
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 218
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 219
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 219
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 220
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 220
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 221
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 221
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Lys
1 5 10 15
Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 222
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 222
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 223
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 223
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 224
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 224
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 225
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 225
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 226
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 226
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 227
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 227
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 228
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 228
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 229
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 229
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 230
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 230
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 231
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 231
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 232
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 232
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 233
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 233
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 234
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 234
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 235
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 235
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 236
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 236
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 237
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 237
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 238
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 238
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 239
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 239
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 240
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 240
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 241
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 241
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 242
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 242
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 243
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 243
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 244
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 244
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Lys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 245
<211> 35
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Based on Homo sapiens sequence
<400> 245
Pro Arg Lys Gly Gly Arg Arg Arg Arg Ala Trp Gly Arg Arg Arg Arg
1 5 10 15
Arg Arg Arg His Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Pro Arg Lys Arg Leu
20 25 30
Arg Leu Arg
35
<210> 246
<211> 93
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 246
Pro Arg Lys Gly Gly Ser Arg Arg Asn Ala Trp Gly Asn Gln Ser Tyr
1 5 10 15
Ala Glu Leu Ile Ser Gln Ala Ile Glu Ser Ala Pro Glu Lys Arg Leu
20 25 30
Thr Leu Ala Gln Ile Tyr Glu Trp Met Val Arg Thr Val Pro Tyr Phe
35 40 45
Lys Asp Lys Gly Asp Ser Asn Ser Ser Ala Gly Trp Lys Asn Ser Ile
50 55 60
Arg His Asn Leu Ser Leu His Ser Lys Phe Ile Lys Val His Asn Glu
65 70 75 80
Ala Thr Gly Lys Ser Ser Trp Trp Met Leu Asn Pro Glu
85 90
<210> 247
<211> 38
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 247
Gln Asp Leu Asp Leu Asp Met Tyr Met Glu Asn Leu Glu Cys Asp Met
1 5 10 15
Asp Asn Ile Ile Ser Asp Leu Met Asp Glu Gly Glu Gly Leu Asp Phe
20 25 30
Asn Phe Glu Pro Asp Pro
35

Claims (35)

1.一种人工肽，其包含与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少90％相同性的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少95％的相同性。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少98％的相同性。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少90％的相同性。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少95％的相同性。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的人工肽，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的人工肽，其中所述人工肽还包含促进细胞摄取的N端氨基酸序列或促进细胞摄取的C端氨基酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的人工肽，其中所述人工肽还包含N端氨基酸序列，所述N端氨基酸序列包含单个D-氨基酸。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的人工肽，其中所述人工肽表现出环状结构。
11.一种组合物，其包含根据权利要求1-10中任一项所述的人工肽。
12.一种在对象中诱导衰老细胞的细胞凋亡的方法，所述方法包含使人工肽干扰衰老细胞的叉头框蛋白O4(FoxO4)的CR3结构域，所述人工肽包含与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少90％相同性的氨基酸序列。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少95％的相同性。
14.根据权利要求12-13中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个具有至少95％的相同性。
15.根据权利要求12-14中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：245中的任一个。
16.根据权利要求12-15中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少90％的相同性。
17.根据权利要求12-16中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个具有至少95％的相同性。
18.根据权利要求12-17中任一项所述的方法，其中所述氨基酸序列包含SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：12中的任一个。
19.根据权利要求12-18中任一项所述的方法，其中所述人工肽还包含促进细胞摄取的N端氨基酸序列或促进细胞摄取的C端氨基酸序列。
20.根据权利要求12-19中任一项所述的方法，其中所述人工肽还包含N端氨基酸序列，所述N端氨基酸序列包含单个D-aa。
21.根据权利要求12-20中任一项所述的方法，其中所述人工肽表现出环状结构。
22.根据权利要求12-21中任一项所述的方法，其中使所述人工肽干扰衰老细胞的FoxO4的CR3结构域包含向对象施用药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求12至21中任一项所述的人工肽。
23.根据权利要求12-22中任一项所述的方法，其中所述人工肽对FoxO4的CR3结构域表现出最大的干扰。
24.根据权利要求12-23中任一项所述的方法，其中与内源FoxO4相比，所述人工肽表现出与p53DBD降低的直接相互作用。
25.根据权利要求12-24中任一项所述的方法，其中与所述FoxO4相比，所述人工肽优选对FoxO1或FoxO3的CR3结构域表现出降低的干扰。
26.根据权利要求12-25中任一项所述的方法，其中与所述FoxO4相比，所述人工肽对DNA表现出降低的干扰。
27.根据权利要求12-26中任一项所述的方法，其中所述衰老细胞的特征在于表达衰老相关分泌表型(SASP)。
28.根据权利要求12-27中任一项所述的方法，其中所述方法包含治疗衰老相关疾病或病症。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症，并且其中所述对象是哺乳动物，优选人类，并且其中在对所述对象进行放疗之前、期间和/或之后，和/或在对所述对象施用至少一种化疗剂之前、期间或之后，施用所述人工肽。
30.根据权利要求28-29中任一项所述的方法，其中所述癌症的特征在于对疗法有抗性。
31.根据权利要求28-30中任一项所述的方法，其中所述疗法抗性癌症包含转移性黑素瘤、乳腺癌或胶质母细胞瘤，并且其中癌症对其有抗性的疗法是放疗或化疗。
32.根据权利要求12-31中任一项所述的方法，其中所述对象包含特征在于患有或预期患有慢性炎性疾病或衰老相关疾病或病症的人。
33.根据权利要求12-32中任一项所述的方法，其中所述方法有效地从所述对象中去除表达p16INK4a的细胞，其中所述对象的特征在于患有或预期患有衰老相关疾病或病症。
34.根据权利要求12-33中任一项所述的方法，其中所述方法有效地改变所述对象中丝氨酸-46磷酸化的p53灶的水平，其中所述对象的特征在于患有或预期患有衰老相关疾病或病症。
35.根据权利要求12-34中任一项所述的方法，其中所述方法包含根据脉冲方案、持续方案、温和冲击方案或其组合来施用所述人工肽。
CN201880077189.0A 2017-10-02 2018-10-02 新型senolytic肽 Pending CN111417647A (zh)

Applications Claiming Priority (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762567046P 2017-10-02 2017-10-02
US201762567076P 2017-10-02 2017-10-02
US62/567,046 2017-10-02
US62/567,076 2017-10-02
US201762567617P 2017-10-03 2017-10-03
US62/567,617 2017-10-03
US201862622819P 2018-01-26 2018-01-26
US62/622,819 2018-01-26
US201862712031P 2018-07-30 2018-07-30
US62/712,031 2018-07-30
PCT/GB2018/052812 WO2019069070A1 (en) 2017-10-02 2018-10-02 NEW SENOLYTIC PEPTIDES

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111417647A true CN111417647A (zh) 2020-07-14

Family

ID=65994493

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880077189.0A Pending CN111417647A (zh) 2017-10-02 2018-10-02 新型senolytic肽

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20200255489A1 (zh)
CN (1) CN111417647A (zh)
WO (1) WO2019069070A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102282348B1 (ko) * 2018-12-04 2021-07-27 주식회사 하이로닉 피부 미용 시술을 위한 시술 정보 제공장치, 시스템 및 방법
GB201913338D0 (en) * 2019-09-16 2019-10-30 Inst De Medicina Molecular Joaeo Lobo Antunes Treatment of spinal cord injury
EP4249912A1 (en) 2022-03-24 2023-09-27 Cleara Biotech B.V. Phosphorylation of p53 as a prognostic or diagnostic marker for the treatment of senescent cells in a mammal

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130288980A1 (en) * 2012-04-02 2013-10-31 Buck Institute For Research On Aging Targeting senescent and cancer cells for selective killing by interference with foxo4
US20130288981A1 (en) * 2012-04-02 2013-10-31 Buck Institute For Research On Aging Targeting senescent cells and cancer cells by interference with jnk and/or foxo4
CN107531768A (zh) * 2015-01-23 2018-01-02 鹿特丹伊拉斯谟大学医疗中心 抗衰老化合物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
US20200255489A1 (en) 2020-08-13
WO2019069070A1 (en) 2019-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6823167B2 (ja) ミオスタチン阻害剤の使用および併用療法
EP2351575B1 (en) Grs for use in treating a cancer
US20090038022A1 (en) IGF-1 Novel peptides
CN109310740B (zh) 使用slit－robo系统的预防或治疗肌肉减少症的组合物
EP2707014B1 (en) High-affinity, dimeric inhibitors of psd-95 and their use for treating ischemic brain damage and pain
CN111417647A (zh) 新型senolytic肽
CN107375910B (zh) PTHrP在制备治疗男性性腺功能低下综合征中的应用
JP2023022318A (ja) ペプチドｗｋｄｅａｇｋｐｌｖｋを含む組成物
KR20190138874A (ko) 높은 안정성을 가진 망가니즈 수퍼옥시드 디스뮤타제의 용도
KR101661332B1 (ko) 글루카곤 유사 펩타이드-1 수용체 항진제를 포함하는 근감소증 치료용 약학 조성물
AU2016366635A1 (en) VAP-1 inhibitors for treating pain
US20220249346A1 (en) Stabilized polyribonucleotide coding for an elastic fibrous protein
JP2024518374A (ja) トランスサイレチン（ｔｔｒ）媒介性アミロイドーシスを治療するための組成物および方法
KR101514320B1 (ko) 신규한 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US20200031873A1 (en) Repurposing cell penetrating peptides and their novel derivatives and iopromide and iodo-aryl carbonates for treatment of senescence-related diseases and disorders
EP3870588A1 (en) Next generation synthetic transcription factors
JP2018537404A (ja) 腫瘍細胞を非腫瘍細胞に変換するための医薬的連合体及びその使用
WO2020201444A1 (en) Repurposing small molecules for senescence-related diseases and disorders
JP6262661B2 (ja) 筋萎縮性側索硬化症治療剤
CN111423502A (zh) 多肽、其衍生物及其在制备抗肺纤维化的药物中的应用
WO2015070076A2 (en) Methods and compositions for rejuvenating neuromuscular junctions
JP2016535080A (ja) 療法における使用のためのインスリン様成長因子模倣物
KR20190018339A (ko) 세레브론 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자를 포함하는 근육 손상으로 유도된 근육 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20170011382A (ko) 근육 소모성 질환과 관련된 Prmt7 유전자 및 이의 용도
EP2862577B1 (en) Use of obestatin for muscle regeneration

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20200714

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication