CN111411058B - 一种具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

一种具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌及其应用，所述溶杆菌Lysobacter sp.菌株RS‑2已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.14802，保藏日期为2017年10月12日。本发明的溶杆菌RS‑2是一个从植物根际分离得到的细菌新物种。RS‑2对烟草白粉病和月季霜霉病有较显著的预防和治疗效果，提供了一种植物绿色防病和治病途径。

Description

一种具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌及其在预防和治疗多种植物病原菌引起的病害中的应用。

背景技术

白粉病和霜霉病都是世界性病害，寄主范围广泛，侵染植物种类繁多。其主要症状都是在被侵染的植物表面产生一层“白粉”，对粮食、蔬菜、果树、牧草和花卉等经济植物都会造成较大危害，导致经济植物植株受损、减产，食用和观赏价值降低，丧失经济价值，严重的甚至死亡。引起植物白粉病和霜霉病的病原菌都是植物专性寄生菌，分别统称为白粉菌和霜霉菌。白粉菌属于锤舌菌纲，白粉菌目(Erysiphales)，白粉菌科(Erysiphaccac)；而霜霉菌属于卵菌纲，霜霉目(Peronosporales)，霜霉科(Peronosporaceae)。

目前，白粉病和霜霉病控制以预防为主，例如通过培育抗病品种，疏剪过密枝条控制种植密度，合理控制温度、湿度等种植技术防治病害的发生。而当病害发生后，主要是在叶面喷施百菌清和弗硅唑等农药防止病害蔓延。但是，农药的使用存在缺陷，一方面，不断增强的病原菌抗药性和不断加大的农药使用量形成的恶性循环，持续推高生产成本；另一方面，大量农药的使用增加了农产品和土壤的农残含量，带来的环境污染问题对人类身体健康和生态保护造成威胁。

生物防治作为一种环境友好的技术对其理论和应用的研究正呈日趋上升的趋势，其中利用生防菌进行植物病害防治被公认为是一种有效并且环境友好的方法。生物防治白粉病的方法更是大量见诸文献报道。然而同时兼顾预防和治疗作用的生物防治白粉病和霜霉病的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足，筛选一株既能预防又能治疗植物病害的溶杆菌并进行实际应用，为植物提供一种绿色的防病方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌，所述溶杆菌Lysobacter sp.菌株RS-2已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.14802，保藏日期为 2017年10月12日，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

所述溶杆菌RS-2在R2A培养基培养72h，菌落浅黄色，透明，圆形，稍微凸起，边缘整齐；电镜下，细胞杆状，0.3-0.4μm x 1.8-13.8μm，单个或成对排列，革兰氏阴性。

本发明所述RS-2的16SrRNA基因核苷酸序列已上传GenBank，登陆号为MF952652。

本发明所述溶杆菌RS-2在预防和治疗植物病害中的应用。

进一步地，所述植物病害包括但不限于茄科植物白粉病。

进一步地，所述植物病害包括但不限于蔷薇科植物霜霉病。

本发明的溶杆菌RS-2是一个从植物根际分离得到的细菌新物种。RS-2对烟草白粉病和月季霜霉病有较显著的预防和治疗效果，提供了一种植物绿色防病和治病途径。

附图说明

图1为RS-2在R2A培养基上的菌落特征；

图2为RS-2的电镜扫描照片；

图3-1和图3-2为RS-2处理未被侵染白粉病的烤烟和接种白粉病的烤烟的病级-时间变化图；

图4-1和图4-2为RS-2处理未被浸染霜霉病的月季和接种霜霉病的月季的病级-时间变化图。

具体实施方式

一种具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌，所述溶杆菌Lysobacter sp.菌株RS-2已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.14802，保藏日期为 2017年10月12日。

所述溶杆菌RS-2在R2A培养基培养72h，菌落浅黄色，透明，圆形，稍微凸起，边缘整齐，见图1。电镜下，细胞杆状，0.3-0.4μm x 1.8-13.8μm，单个或成对排列，革兰氏阴性，见图2。

本发明所述RS-2的16SrRNA基因核苷酸序列已上传GenBank，登陆号为MF952652。核苷酸序列为N0.1。

本发明所述溶杆菌RS-2用于防治植物病害，具有广谱性，同时具有预防和治疗的效果。所述植物病害包括但不限于白粉病和霜霉病。引起白粉病的病原菌包括但不仅限于白粉菌、锤舌菌纲真菌(Leotiomycetes)等，可预防和治疗的白粉病植物宿主包括但不仅限于茄科植物，如烟草。引起霜霉病的病原菌包括但不仅限于霜霉菌和卵菌纲真菌(Oomycota)，可预防和治疗的霜霉病植物宿主包括但不仅限于蔷薇科植物，如月季(Rosachinensis Jacq.)。

本发明通过液体发酵，实验室盆栽方式评价RS-2对烤烟白粉病和月季霜霉病的防治效果。

1、RS-2的来源：分离自云南省昆明市石林县烟田土壤根际。

2、RS-2的制备：

(1)将保存于斜面上的RS-2于无菌条件下接种于高压灭菌(121℃，130kPa，20min)的固体培养基上(1L的培养基配方为：蛋白胨10g，酵母粉5g。固体培养基需加入18g琼脂)，于培养箱中25～30℃活化培养4～7天。

(2)将活化好的菌种于无菌条件下接种于50mL高压灭菌的上述液体培养基中。30℃下，摇床培养3～4天。摇床转速200rpm。

(3)取1mL种子液于无菌条件下接种于200mL高压灭菌的上述液体培养基中，摇床培养72～96h，转速200rpm，至对数生长期(OD450：0.92)，将菌悬液在室温下，8000rpm 离心10min，分离上清液和菌体。将上清液和重悬于等体积无菌水中的菌体用于生测实验。

3、RS-2对烤烟白粉病的生测实验：

称取1Kg土壤置于内径15cm，高10cm的盆钵中，移栽扦插生根烤烟苗，同时表施复合肥(N-P-K:12-10-24)4g/盆，置于人工气候箱内。培养条件为：光照时间12h，强度8000lux，温度：白天28±2℃，夜晚22±2℃。

移栽7天后用采自大田的白粉病病叶接种盆栽苗。

对未被侵染白粉病的烤烟进行如下处理：RS-2发酵液(RS-2)叶面灌根各50ml，清水 (CK)进行同等处理。在4天，8天，12天，16天，20天后调查白粉病的发病情况，并计算病情指数(调查及计算方法参见DB34T880-2009)。实验设置2个处理，每个处理20盆。实验结果如图3-1所示。

对成功接种白粉病的烤烟进行如下处理：RS-2发酵液(RS-2)叶面喷施各50ml，清水 (CK)进行同等处理。在4天，8天，12天，16天，20天后调查白粉病的发病情况，并计算病情指数(调查及计算方法参见DB34T880-2009)。实验设置2个处理，每个处理20盆。实验结果如图3-2所示。

试验结果表明：和CK相比较，RS-2发酵液对烟草白粉病有明显的预防和治疗效果。

4、RS-2对月季霜霉病的生测实验：

称取1Kg土壤置于内径15cm，高10cm的盆钵中，移栽扦插生根烤烟苗，同时表施复合肥(N-P-K:12-10-24)4g/盆，置于人工气候箱内。培养条件为：光照时间12h，强度8000lux，温度：白天28±2℃，夜晚22±2℃。

移栽7天后用采自大田的霜霉病病叶接种盆栽苗。

对未被侵染霜霉病的月季进行如下处理：RS-2发酵液(RS-2)叶面灌根各50ml，清水 (CK)进行同等处理。在7天，14天，21天，28天，35天后调查霜霉病的发病情况，并计算病情指数(调查及计算方法参见DB34T880-2009)。实验设置2个处理，每个处理20盆。实验结果如图4-1所示。

对成功接种霜霉病的月季进行如下处理：RS-2发酵液(RS-2)叶面喷施各50ml，清水 (CK)进行同等处理。在7天，14天，21天，28天，35天后调查霜霉病的发病情况，并计算病情指数(调查及计算方法参见DB34T880-2009)。实验设置2个处理，每个处理20盆。实验结果如图4-2所示。

试验结果表明：试验结果表明：和CK相比较，RS-2发酵液对月季霜霉病有明显的预防和治疗效果。

本发明的溶杆菌RS-2对于植物病害性同时具有预防和治疗的效果，具有较好的推广应用前景。

序列表

<110> 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司

<120> 一种具有植物病原菌广谱抗性的溶杆菌及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1506

<212> DNA

<213> 基因核苷酸(16SrRNA)

<400> 1

agagtttgat cctggctcag agtgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgaac 60

ggcagcacag gggagcttgc tccctgggtg gcgagtggcg gacgggtgag gaatacatgg 120

gaatctgccc agtcgtgggg gataacgtag ggaaacttac gctaataccg catacgacct 180

cagggtgaaa gcggcggacc gcaaggcgtc gcgcgattgg atgagcccat gtcggattag 240

ctagttggcg gggtaaaagc ccaccaaggc gacgatccgt agctggtctg agaggatgat 300

cagccacact ggaactgaga cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat 360

tggacaatgg gcgcaagcct gatccagcca tgccgcgtgg gtgaagaagg ccttcgggtt 420

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gcgttactcg gaattactgg gcgtaaagcg tgcgtaggtg gttcgttaag tctgatgtga 600

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atggcggaat tcccggtgta gcagtgaaat gcgtagagat cgggaggaac atccgtggcg 720

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ttagataccc tggtagtcca cgccctaaac gatgcgaact ggatgttggg agcaactagg 840

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aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gtatgtggtt taattcgatg 960

caacgcgcag aaccttacct ggccttgaca tccacggaac ccctgagaga tcggggggtg 1020

ccttcgggaa ccgtgagaca ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt 1080

gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt gtccttagtt gccagcacgt aatggtggga 1140

actctaagga gaccgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat 1200

ggcccttacg gccagggcta cacacgtact acaatggaag ggacagaggg ccgcgatccc 1260

gcgaggggga gccaatccca gaaacccttt ctcagtccgg attggagtct gcaactcgac 1320

tccatgaagt cggaatcgct agtaatcgca gatcagcatt gctgcggtga atacgttccc 1380

gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat gggagtttgt tgcaccagaa gcaggtagct 1440

taaccttcgg gagggcgctt gccacggtgt ggccgatgac tggggtgaag tcgtaacaag 1500

gtaacc 1506

Claims (2)

1.一株溶杆菌(Lysobacter sp.)RS-2，其特征在于，所述溶杆菌RS-2的保藏号为CGMCCNO.14802。

2.如权利要求1所述溶杆菌RS-2在预防和治疗烤烟白粉病和月季霜霉病中的应用。

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