CN111397999A - 一种增强显微ct植物样品对比度的简易方法 - Google Patents
一种增强显微ct植物样品对比度的简易方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111397999A CN111397999A CN202010385952.5A CN202010385952A CN111397999A CN 111397999 A CN111397999 A CN 111397999A CN 202010385952 A CN202010385952 A CN 202010385952A CN 111397999 A CN111397999 A CN 111397999A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phosphotungstic acid
- sample
- plant
- micro
- contrast
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000010603 microCT Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 64
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 3
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 85
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 21
- 241001300674 Plukenetia volubilis Species 0.000 description 11
- 241000576418 Jasminum nudiflorum Species 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 241000218378 Magnolia Species 0.000 description 5
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 4
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 3
- 241000722363 Piper Species 0.000 description 3
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 3
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 3
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 3
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000011547 Bouin solution Substances 0.000 description 1
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000189544 Spuriopimpinella brachycarpa Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000001390 capsicum minimum Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N sodium tungstate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][W]([O-])(=O)=O XMVONEAAOPAGAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L tungstic acid Chemical compound O[W](O)(=O)=O CMPGARWFYBADJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N23/00—Investigating or analysing materials by the use of wave or particle radiation, e.g. X-rays or neutrons, not covered by groups G01N3/00 – G01N17/00, G01N21/00 or G01N22/00
- G01N23/02—Investigating or analysing materials by the use of wave or particle radiation, e.g. X-rays or neutrons, not covered by groups G01N3/00 – G01N17/00, G01N21/00 or G01N22/00 by transmitting the radiation through the material
- G01N23/04—Investigating or analysing materials by the use of wave or particle radiation, e.g. X-rays or neutrons, not covered by groups G01N3/00 – G01N17/00, G01N21/00 or G01N22/00 by transmitting the radiation through the material and forming images of the material
- G01N23/046—Investigating or analysing materials by the use of wave or particle radiation, e.g. X-rays or neutrons, not covered by groups G01N3/00 – G01N17/00, G01N21/00 or G01N22/00 by transmitting the radiation through the material and forming images of the material using tomography, e.g. computed tomography [CT]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种增强显微CT植物样品对比度的简易方法。所述方法包括如下步骤：1)将磷钨酸溶于FAA固定液中得到磷钨酸溶液；2)采用所述磷钨酸溶液浸泡待测的植物部位进行固定和染色处理；3)采用乙醇洗涤经步骤2)固定和染色处理后的植物部位，然后加入至液态叔丁醇中并于‑20℃的条件下处理，然后进行冷冻干燥，即能增强植物样品的显微CT的对比度。经冷冻干燥后的样品进行显微CT扫描(Skyscan1172，布鲁克公司)，扫描电压可为43V～49V，分辨率可为0.56～0.68μm，样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，不同部位的植物样品都极大地提高了对比度。
Description
技术领域
本发明涉及一种增强显微CT植物样品对比度的简易方法，属于生物技术领域。
背景技术
显微CT技术诞生四十多年来，在医学方面发挥了巨大作用，在地质学和材料学等方面也有较多应用。20世纪90年代末，显微CT才开始应用于植物研究中，研究根的结构、形态发育和植物化石等，但总的来说在植物中的研究应用仍不广泛。
显微CT成像需要X射线，而X射线对比度成像依赖于样品的密度、厚度和原子序数(Lusic and Grinstaff，2013)。由于植物组织主要由轻元素构成，X射线吸收率较低(约为20-40％左右)，而吸收率在65-90％左右的样品成像效果最佳。此外，有些样品内部密度均一。这些导致射线透过率没有明显差别，区分密度相近的样品结构边缘非常困难，重构后的图片反差非常小，噪音高(Rousseau et al.,2015)。
在动物中，为了增强对比度或样本中的特定特征，可以将样品浸入造影剂中进行化学染色，该方法简单，已经证明对多种样品有效(Methcher，2009)。理想的造影剂应快速均匀地进入到样品内部而样品不变形，应该与感兴趣的特定特征结合，并且比周围组织具有更高的密度，以便增加X射线的衰减，从而增加样品中不同组织类型之间的对比度，最好安全无毒。Pauwels等(2013)发现在猪和小鼠的脂肪和肌肉组织中磷钨酸、磷钼酸、正钼酸盐铵的对比度最佳，而碘化钾和钨酸钠能最有效地穿透大样本。不同的固定方法效果也不一样，Sombke等(2015)发现Bouin固定液优于70％乙醇和2.5％戊二醛。
到目前为止，某些造影剂(例如碘和磷钨酸)已被广泛应用于动物，因为它们符合上述几个标准(Shearer et al.,2016)。临床医学上为减少毒性，一般使用硫酸钡和碘复合物，植物上用碘尝试的较多。因此需要一种有效增强显微CT植物样品对比度的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种增强显微CT植物样品对比度的方法，采用磷钨酸溶液浸泡植物不同部位，然后进行冷冻干燥，显微CT扫描结果显示极大地提高了植物样品的对比度。
本发明所提供的增强显微CT植物样品对比度的方法，包括如下步骤：
1)将磷钨酸溶于FAA固定液中得到磷钨酸溶液；
2)采用所述磷钨酸溶液浸泡待测的植物部位进行固定和染色处理；
3)采用乙醇洗涤经步骤2)固定和染色处理后的植物部位，然后加入至液态叔丁醇中并于-20℃条件下处理，然后进行冷冻干燥，即能增强植物样品的显微CT的对比度。
上述的方法中，所述磷钨酸溶液中磷钨酸的质量浓度可为1～20％，如1％、10％或20％。
上述的方法中，每100mL所述FAA固定液的组成如下：
50％乙醇水溶液90mL；
冰乙酸5mL；
甲醛5mL。
上述的方法中，步骤2)中，所述固定和染色处理的条件如下：
温度为4℃；
时间为2～9天。
上述的方法中，所述植物部位可为植物的花芽、花柄、茎、叶、根或种子等部位，大的样品切成几毫米长的小段，投入至所述磷钨酸溶液中后，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中。
上述的方法中，步骤3)中，于所述液态叔丁醇中处理10～12小时。
上述的方法中，步骤3)中，可采用2ml的体积分数为70％的乙醇溶液进行洗涤；
上述的方法中，所述冷冻干燥的条件如下：
温度为-20℃；
时间为3～5小时。
经冷冻干燥后的样品进行显微CT扫描(Skyscan1172，布鲁克公司)，扫描电压可为43V～49V，分辨率可为0.56～0.68μm，样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，不同部位的植物样品都极大地提高了对比度。其中，富含细胞质、富含蛋白的部位对比度提高更显著，对于该类样品，1％的磷钨酸溶液染色处理即可，磷钨酸溶液浓度再增加，对样品的对比度提高已无太大作用，如玉兰花芽、迎春花芽。而对于已形成细胞壁、细胞质和蛋白含量少的样品，如砖子苗叶鞘、南美油藤茎和藤，20％的磷钨酸溶液染色处理是必要的，并且需要处理的时间长一些。
附图说明
图1为分别经FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理的辣椒种子，并都经冷冻干燥后的样品的横切面(从左至右)。
图2为分别经FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理的砖子苗叶鞘，并都经冷冻干燥后的样品的横切面(从左至右)。
图3为分别经FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理的玉兰花芽，并都经冷冻干燥后的样品的横切面(从左至右)。
图4为分别经FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理的迎春花芽，并都经冷冻干燥后的样品的横切面(从左至右)。
图5为分别经FAA固定液和1％磷钨酸溶液处理的迎春花芽湿样(未经冷冻干燥)的横切面(从左至右)。
图6为分别经FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理的南美油藤茎，并都经冷冻干燥后的样品的横切面(从左至右)。
图7为分别经FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理的南美油藤藤，并都经冷冻干燥后的样品的横切面(从左至右)。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
将磷钨酸溶于FAA固定液中，得到质量浓度为1～20％的磷钨酸溶液，其中，FAA固定液的组成如下：FAA固定液(100ml)：50％乙醇水溶液90ml，冰乙酸5ml，甲醛5ml。
1、辣椒种子分别投入至FAA固定液、1％、10％和20％的磷钨酸溶液中，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中，于4℃染色固定8天，然后采用2ml 70％乙醇水溶液洗一次，投入离心管内的液态叔丁醇中，摇晃三下使叔丁醇充分接触样品，置于-20℃过夜(12小时)。之后放入冷冻干燥器中干燥(-20℃，约3小时)。
干燥后的样品进行显微CT扫描，扫描电压为43V，分辨率为0.68μm。
样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，如图1所示，其中，从左至右依次为FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理后的辣椒种子的横切面，对比各图可以看出，经磷钨酸溶液处理和冷冻干燥后的辣椒种子的显微CT对比度得到了显著的提高，细胞边界(特别是种皮)更清晰可辨，且高浓度的处理效果优于低浓度。
2、砖子苗叶鞘分别投入至FAA固定液、1％、10％和20％的磷钨酸溶液中，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中，于4℃染色固定9天，然后采用2ml 70％乙醇水溶液洗一次，投入离心管内的液态叔丁醇中，摇晃三下使叔丁醇充分接触样品，置于-20℃过夜(12小时)。之后放入冷冻干燥器中干燥(-20℃，约3小时)。
干燥后的样品进行显微CT扫描，扫描电压为44V，分辨率为0.68μm。
样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，如图2所示，其中，从左至右依次为FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理后的砖子苗叶鞘的横切面，对比各图可以看出，经磷钨酸处理和冷冻干燥后的砖子苗叶鞘的显微CT对比度得到了显著的提高，对比各浓度的处理效果可以看出，磷钨酸溶液的浓度越高，显微CT对比度越好，因此对于砖子苗叶鞘需要采用20％的磷钨酸溶液进行染色处理，并且染色处理时间适当延长。
3、玉兰花芽分别投入至FAA固定液、1％、10％和20％的磷钨酸溶液中，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中，于4℃染色固定2天，然后采用2ml 70％乙醇水溶液洗一次，投入离心管内的液态叔丁醇中，摇晃三下使叔丁醇充分接触样品，置于-20℃过夜(12小时)。之后放入冷冻干燥器中干燥(-20℃，约5小时)。
干燥后的样品进行显微CT扫描，扫描电压为49V，分辨率为0.68μm。
样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，如图3所示，其中，从左至右依次为FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理后的玉兰花芽的横切面，对比各图可以看出，经磷钨酸处理和冷冻干燥后的玉兰花芽的显微CT对比度得到了显著的提高，对比各浓度的处理效果可以看出，1％、10％和20％的磷钨酸溶液染色效果没有显著变化，所以采用1％的磷钨酸溶液染色即可，磷钨酸浓度再增加，对样品的对比度提高已无实质性作用。
4、迎春花芽分别投入至FAA固定液、1％、10％和20％的磷钨酸溶液中，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中，于4℃染色固定2天，然后采用2ml 70％乙醇水溶液洗一次，投入离心管内的液态叔丁醇中，摇晃三下使叔丁醇充分接触样品，置于-20℃过夜(12小时)。之后放入冷冻干燥器中干燥(-20℃，约3小时)。
干燥后的样品进行显微CT扫描，扫描电压为49V，分辨率为0.68μm。
样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，如图4所示，其中，从左至右依次为FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理后的迎春花芽的横切面，对比各图可以看出，经磷钨酸溶液处理和冷冻干燥后的迎春花芽的显微CT对比度得到了显著的提高，对比各浓度的处理效果可以看出，1％、10％和20％的磷钨酸溶液染色处理效果没有显著变化，所以采用1％的磷钨酸溶液处理即可，磷钨酸溶液浓度再增加，对样品的对比度提高已无实质性作用。
迎春花芽分别于FAA固定液和1％磷钨酸溶液中染色后，未经冷冻干燥的湿样直接扫描的结果如图5所示，从左至右依次为FAA固定液、1％钨酸溶液处理后的迎春花芽的横切面。
对比图4和图5可以看出，与经磷钨酸溶液染色处理的湿样直接进行扫描相比，经冷冻干燥后能够显著提高样品的显微CT对比度，细胞结构更清晰可辨，这是由于湿样中的FAA或磷钨酸溶液密度大于空气，具有较强的背景噪音干扰的原因。
5、南美油藤茎分别投入至FAA固定液、1％、10％和20％的磷钨酸溶液中，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中，于4℃染色固定9天，然后采用2ml 70％乙醇水溶液洗一次，投入离心管内的液态叔丁醇中，摇晃三下使叔丁醇充分接触样品，置于-20℃过夜(12小时)。之后放入冷冻干燥器中干燥(-20℃，约3小时)。
干燥后的样品进行显微CT扫描，扫描电压为44V，分辨率为0.68μm。
样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，如图6所示，其中，从左至右依次为FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理后的南美油藤茎的横切面，对比各图可以看出，经磷钨酸处理和冷冻干燥后的南美油藤茎的显微CT对比度得到了显著的提高，对比各浓度的处理效果可以看出，磷钨酸溶液的浓度越高，显微CT对比度越好，因此对于南美油藤茎需要采用20％的磷钨酸溶液进行染色处理，并且染色时间适当延长。
6、南美油藤藤分别投入至FAA固定液、1％、10％和20％的磷钨酸溶液中，上下颠倒几次去除气泡，至样品沉入溶液中，于4℃染色固定9天，然后采用2ml70％乙醇水溶液洗一次，投入离心管内的液态叔丁醇中，摇晃三下使叔丁醇充分接触样品，置于-20℃过夜(12小时)。之后放入冷冻干燥器中干燥(-20℃，约3小时)。
干燥后的样品进行显微CT扫描，扫描电压为43V，分辨率为0.56μm。
样品扫描后经NRecon软件重构，得到横切面图片，如图7所示，其中，从左至右依次为FAA固定液、1％、10％和20％磷钨酸溶液处理后的南美油藤藤的横切面，对比各图可以看出，经磷钨酸处理和冷冻干燥后的南美油藤藤的显微CT对比度得到了显著的提高，对比各浓度的处理效果可以看出，磷钨酸溶液的浓度越高，显微CT对比度越好，因此对于南美油藤藤需要采用20％的磷钨酸溶液进行染色处理，并且染色时间适当延长。
Claims (7)
1.一种增强显微CT植物样品对比度的方法，包括如下步骤：
1)将磷钨酸溶于FAA固定液中得到磷钨酸溶液；
2)采用所述磷钨酸溶液浸泡待测的植物部位进行固定和染色处理；
3)采用乙醇洗涤经步骤2)固定和染色处理后的植物部位，然后加入至液态叔丁醇中并于-20℃的条件下处理，然后进行冷冻干燥，即能增强植物样品的显微CT的对比度。
2.根据权利要求书1所述的方法，其特征在于：所述磷钨酸溶液中磷钨酸的质量浓度为1～20％。
3.根据权利要求书1或2所述的方法，其特征在于：每100mL所述FAA固定液的组成如下：
50％乙醇水溶液90mL；
冰乙酸5mL；
甲醛5mL。
4.根据权利要求书1-3中任一项所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述固定和染色处理的条件如下：
温度为4℃；
时间为2～8天。
5.根据权利要求书1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述植物部位为植物的花芽、花柄、茎、幼叶、根或种子。
6.根据权利要求书1-5中任一项所述的方法，其特征在于：步骤3)中，采用10～20倍的体积分数为70％乙醇水溶液进行洗涤。
7.根据权利要求书1-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述冷冻干燥的条件如下：
温度为-20℃；
时间为3～5小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010385952.5A CN111397999B (zh) | 2020-05-09 | 2020-05-09 | 一种增强显微ct植物样品对比度的简易方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010385952.5A CN111397999B (zh) | 2020-05-09 | 2020-05-09 | 一种增强显微ct植物样品对比度的简易方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111397999A true CN111397999A (zh) | 2020-07-10 |
| CN111397999B CN111397999B (zh) | 2021-12-03 |
Family
ID=71437463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010385952.5A Active CN111397999B (zh) | 2020-05-09 | 2020-05-09 | 一种增强显微ct植物样品对比度的简易方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111397999B (zh) |
Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6143512A (en) * | 1998-08-17 | 2000-11-07 | Markovic; Nenad | Cap-pap test |
| CN101560543A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 麦克奥迪实业集团有限公司 | 细胞染色试剂及其配制方法和在细胞染色中的应用 |
| CN101735318A (zh) * | 2008-11-05 | 2010-06-16 | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局 | 检测烟草脆裂病毒的细胞株、单克隆抗体和试剂盒 |
| CN103571909A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-02-12 | 温州市康泰生物科技有限公司 | 巴氏染色液及其使用方法 |
| CN103592169A (zh) * | 2013-07-29 | 2014-02-19 | 西北农林科技大学 | 包含滨麦1Ns、5Ns和6Ns染色体的小麦-滨麦多重异代换系的创制及原位杂交,SSR和PAGE鉴定 |
| CN104350372A (zh) * | 2012-08-09 | 2015-02-11 | 斯坦福大学托管董事会 | 用于制备供显微镜分析的生物样本的方法和组合物 |
| CN105136547A (zh) * | 2015-08-21 | 2015-12-09 | 新疆农业科学院园艺作物研究所 | 一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法 |
| CN105165176A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-12-23 | 中国科学院植物研究所 | 一种检测梭梭种子的生活力的方法 |
| CN106093092A (zh) * | 2016-06-07 | 2016-11-09 | 中国科学院植物研究所 | 一种叔丁醇一步法冷冻干燥扫描电镜用植物样品的方法 |
| CN109855936A (zh) * | 2016-06-29 | 2019-06-07 | 西南大学 | 一种组织完整、利于显微观察的植物组织切片的制备方法 |
| CN110455595A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-11-15 | 北京林业大学 | 一种用于超薄切片的植物组织整体染色法 |
| CN110779785A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-02-11 | 北京雷根生物技术有限公司 | 一种新型无甲醛组织固定液 |
-
2020
- 2020-05-09 CN CN202010385952.5A patent/CN111397999B/zh active Active
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6143512A (en) * | 1998-08-17 | 2000-11-07 | Markovic; Nenad | Cap-pap test |
| CN101560543A (zh) * | 2008-04-18 | 2009-10-21 | 麦克奥迪实业集团有限公司 | 细胞染色试剂及其配制方法和在细胞染色中的应用 |
| CN101735318A (zh) * | 2008-11-05 | 2010-06-16 | 中华人民共和国北京出入境检验检疫局 | 检测烟草脆裂病毒的细胞株、单克隆抗体和试剂盒 |
| CN104350372A (zh) * | 2012-08-09 | 2015-02-11 | 斯坦福大学托管董事会 | 用于制备供显微镜分析的生物样本的方法和组合物 |
| CN103592169A (zh) * | 2013-07-29 | 2014-02-19 | 西北农林科技大学 | 包含滨麦1Ns、5Ns和6Ns染色体的小麦-滨麦多重异代换系的创制及原位杂交,SSR和PAGE鉴定 |
| CN103571909A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-02-12 | 温州市康泰生物科技有限公司 | 巴氏染色液及其使用方法 |
| CN105136547A (zh) * | 2015-08-21 | 2015-12-09 | 新疆农业科学院园艺作物研究所 | 一种库尔勒香梨花丝细胞立体染色方法 |
| CN105165176A (zh) * | 2015-08-25 | 2015-12-23 | 中国科学院植物研究所 | 一种检测梭梭种子的生活力的方法 |
| CN106093092A (zh) * | 2016-06-07 | 2016-11-09 | 中国科学院植物研究所 | 一种叔丁醇一步法冷冻干燥扫描电镜用植物样品的方法 |
| CN109855936A (zh) * | 2016-06-29 | 2019-06-07 | 西南大学 | 一种组织完整、利于显微观察的植物组织切片的制备方法 |
| CN110455595A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-11-15 | 北京林业大学 | 一种用于超薄切片的植物组织整体染色法 |
| CN110779785A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-02-11 | 北京雷根生物技术有限公司 | 一种新型无甲醛组织固定液 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王声翔: "X射线相位衬度生物学成像研究", 《中国博士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
| 硬X射线显微和纳米CT技术在细胞成像中的应用: "硬X射线显微和纳米CT技术在细胞成像中的应用", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 信息科技辑》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111397999B (zh) | 2021-12-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nuzzo et al. | Berry size and yield paradigms on grapes and wines quality | |
| Guidoni et al. | The effect of grapevine leafroll and rugose wood sanitation on agronomic performance and berry and leaf phenolic content of a Nebbiolo clone (Vitis vinifera L.) | |
| Whitehill et al. | Histology and cell wall biochemistry of stone cells in the physical defence of conifers against insects | |
| Bawden et al. | Physiology of virus diseases | |
| CN111397999B (zh) | 一种增强显微ct植物样品对比度的简易方法 | |
| Radler | Reduction of loss of moisture by the cuticle wax components of grapes | |
| Kokubun | Occurrence of myo-inositol and alkyl-substituted polysaccharide in the prey-trapping mucilage of Drosera capensis | |
| Ma et al. | A new procedure to prepare slides of metaphase chromosomes of roses | |
| Kinden et al. | Technique for Scanning Electron Microscopy of Fungal | |
| CN111398000B (zh) | 一种增强显微ct植物样品对比度的方法 | |
| CN111393543A (zh) | 环糊精衍生物、环糊精衍生物包覆的除草剂及制备方法和应用 | |
| Jewell et al. | The ultrastructural demonstration of compounds containing 1, 2-glycol groups in plant cell walls | |
| JP7168141B2 (ja) | 生体試料の透明化方法及び生体試料脱色剤 | |
| JP2009219395A (ja) | 凍結保存液および凍結保存方法 | |
| Delgado et al. | Testing the optimal defense hypothesis in Stryphnodendron adstringens (F abaceae, M imosoideae) leaves: the role of structure, number, position and nectar composition of extrafloral nectaries | |
| Hofmann et al. | Preparation of bryophyte herbarium specimens for the SEM using Aerosol OT solution in combination with FDA rapid dehydration | |
| CN104620717B (zh) | 一种火力楠育苗种子的调制方法 | |
| JP7106114B2 (ja) | 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 | |
| Božović et al. | Hexose efflux from the peeled grape berry | |
| RU2797024C1 (ru) | Композиция для предпосевной обработки семян огурца | |
| Courtoy et al. | Cytochemistry of mouse mast cell reaction to polylysine | |
| Dute et al. | INTERVASCULAR PIT MEMBRANES IN ROOTS OF TWO SPECIES OF OSMANTHUS (OLEACEAE). | |
| JP2006006305A (ja) | 稲種子の洗種−乾燥処理法 | |
| Rajasekaran et al. | A dehydration method for immature or wet cotton fibers for light and electron microscopy | |
| Larkin et al. | Preparing serial sections of mature corn and wheat kernels |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |