JP7106114B2 - 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 - Google Patents
生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7106114B2 JP7106114B2 JP2018158579A JP2018158579A JP7106114B2 JP 7106114 B2 JP7106114 B2 JP 7106114B2 JP 2018158579 A JP2018158579 A JP 2018158579A JP 2018158579 A JP2018158579 A JP 2018158579A JP 7106114 B2 JP7106114 B2 JP 7106114B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- biological sample
- phosphoric acid
- clearing
- aqueous solution
- pbs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Description
本発明は上記事情に鑑み、短時間で生体試料を透明化できる生体試料の透明化方法、及び短時間で生体試料を透明化できる生体試料透明化剤を提供することを課題とする。
<1>リン酸の水溶液を用いて生体試料を透明化する工程を備える、生体試料の透明化方法。
<2>前記水溶液における前記リン酸の濃度が4.0以上である、<1>に記載の生体試料の透明化方法。
<3>前記水溶液の屈折率が1.35以上である、<1>又は<2>に記載の生体試料の透明化方法。
<4>前記水溶液に前記生体試料を接触させる時間は5時間以下である、<1>~<3>のいずれか1項に記載の生体試料の透明化方法。
<5>リン酸の水溶液である、生体試料透明化剤。
<6>前記水溶液における前記リン酸の濃度(25℃)が4.0M以上である、<5>に記載の生体試料透明化剤。
<7>前記水溶液の屈折率が1.35以上である、<5>又は<6>に記載の生体試料透明化剤。
本明細書において「工程」との語には、他の工程から独立した工程に加え、他の工程と明確に区別できない場合であってもその工程の目的が達成されれば、当該工程も含まれる。
本開示の生体試料の透明化方法は、リン酸の水溶液を生体試料に接触させる工程(透明化工程)を備える。
透明化工程を実施する方法は特に制限されず、一般的な手法で行うことができる。例えば、リン酸の水溶液に試料を接触(浸漬等)させた状態で、所望の透明度が得られるまで放置することで行うことができる。
本開示において水溶液に含まれるリン酸の濃度は、25℃における濃度とする。
リン酸の水溶液の屈折率は特に制限されず、透明化処理の対象となる生体試料の状態、所望の透明度等に応じて選択できる。例えば、リン酸の水溶液の屈折率は、1.35(リン酸濃度4.0M程度での屈折率)以上であってもよく、1.40以上であってもよく、1.42以上であってもよい。
リン酸の水溶液の屈折率の上限は特に制限されないが、1.43程度が上限値(リン酸の飽和濃度で得られる値)である。
本開示においてリン酸の水溶液の屈折率は、20℃における波長589.29nmの光線(ナトリウムD線)に対する屈折率とする。
固定工程を実施する方法は特に制限されず、一般的な手法で行うことができる。生体試料を固定することで、生体試料の劣化を抑制でき、物理的強度や化学的安定性を向上することができる。
脱色工程を実施する方法は特に制限されず、一般的な手法で行うことができる。脱色工程を実施することで、透明化した生体試料の視認性をより高めることができる。
本開示の方法で処理される生体試料は特に制限されず、動物、植物、菌類等のあらゆる生物に由来する試料であってよい。生体試料は遺伝子組み換え、化学処理等の加工がなされたものであってもよい。
本開示の生体試料透明化剤(以下、透明化剤ともいう)は、リン酸の水溶液である。
本開示の透明化剤によれば、他の方法に比べて短時間で生体試料を透明化できる。また、有機溶媒等を用いて生体試料を透明化する方法に比べて試料を構成する細胞や蛍光タンパク質への影響が小さいため、処理後の試料を良好な状態に維持することができる。
マウス(ICR、10~30週齢)の肝臓を4質量%ホルムアルデヒドのPBS溶液に48時間浸漬(25℃)して固定し、PBSで洗浄した。
マウス(ICR、10~30週齢)の腎臓を4質量%ホルムアルデヒドのPBS溶液に48時間浸漬(25℃)して固定し、PBSで洗浄して試験片を作製した。
マウス(ICR、10~30週齢)の肺を4質量%ホルムアルデヒドのPBS溶液に48時間浸漬(25℃)して固定し、PBSで洗浄して試験片を作製した。
CellMask Orange(Thermo Fisher Scientific、登録商標)で染色したColon-26培養細胞を4質量%ホルムアルデヒドのPBS溶液に48時間浸漬(25℃)して固定し、PBSで洗浄して試験片を作製した。
Claims (3)
- リン酸濃度が8.5M以上14.2M以下であり、屈折率が1.40以上1.43以下であるリン酸の水溶液を用いて生体試料を透明化する工程を備える、生体試料の透明化方法。
- 前記水溶液に前記生体試料を接触させる時間は5時間以下である、請求項1に記載の生体試料の透明化方法。
- リン酸濃度が8.5M以上14.2M以下であり、屈折率が1.40以上1.43以下であるリン酸の水溶液である、生体試料透明化剤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018158579A JP7106114B2 (ja) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018158579A JP7106114B2 (ja) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020034297A JP2020034297A (ja) | 2020-03-05 |
JP7106114B2 true JP7106114B2 (ja) | 2022-07-26 |
Family
ID=69667662
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018158579A Active JP7106114B2 (ja) | 2018-08-27 | 2018-08-27 | 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7106114B2 (ja) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012161143A1 (ja) | 2011-05-20 | 2012-11-29 | 独立行政法人理化学研究所 | 生物材料用透明化試薬、及びその利用 |
WO2014115206A1 (ja) | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 |
WO2016147812A1 (ja) | 2015-03-18 | 2016-09-22 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 生物材料の観察方法および透明化方法 |
US20170307485A1 (en) | 2016-04-20 | 2017-10-26 | Logos Biosystems, Inc | Refractive index matching composition for biological tissue |
WO2017188264A1 (ja) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 光透過性に優れた生物材料を調製するための組成物およびその利用 |
-
2018
- 2018-08-27 JP JP2018158579A patent/JP7106114B2/ja active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012161143A1 (ja) | 2011-05-20 | 2012-11-29 | 独立行政法人理化学研究所 | 生物材料用透明化試薬、及びその利用 |
WO2014115206A1 (ja) | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 組織透明化方法、組織透明化試薬及び組織観察方法 |
WO2016147812A1 (ja) | 2015-03-18 | 2016-09-22 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 生物材料の観察方法および透明化方法 |
US20170307485A1 (en) | 2016-04-20 | 2017-10-26 | Logos Biosystems, Inc | Refractive index matching composition for biological tissue |
WO2017188264A1 (ja) | 2016-04-28 | 2017-11-02 | 国立研究開発法人理化学研究所 | 光透過性に優れた生物材料を調製するための組成物およびその利用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Kazuki Tainaka,Chemical Landscape for Tissue Clearing Based on Hydrophilic Reagents,Cell Reports,24,pp.2196-2210, e1-9 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2020034297A (ja) | 2020-03-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5967528B2 (ja) | 生物材料を透明化する方法および生物材料用透明化処理キット | |
JP5120998B2 (ja) | 組織、細胞又は臓器の保存液 | |
Wassersug | A procedure for differential staining of cartilage and bone in whole formalin-fixed vertebrates | |
JP5924624B2 (ja) | 生物材料を透明化する方法、及びその利用 | |
WO2016117614A1 (ja) | 生物材料用透明化試薬、システム及びその利用 | |
WO2012161143A1 (ja) | 生物材料用透明化試薬、及びその利用 | |
US11656159B2 (en) | Composition for preparing biological material having excellent light transmissivity and use of composition | |
Hahne et al. | Dimethyl sulfoxide can initiate cell divisions of arrested callus protoplasts by promoting cortical microtubule assembly | |
JPWO2014069519A1 (ja) | 透明化生物標本作製用キット及び透明化生物標本作製方法 | |
EP3075399B1 (en) | Tissue repair material derived from fish skin and manufacturing method thereof | |
CN111610078B (zh) | 生物组织透明化试剂及生物组织透明化方法 | |
CN105973663B (zh) | 一种炫彩骨骼标本的制备方法 | |
JP7106114B2 (ja) | 生体試料の透明化方法及び生体試料透明化剤 | |
WO2018051957A1 (ja) | 生物試料の透明化方法 | |
JP7168141B2 (ja) | 生体試料の透明化方法及び生体試料脱色剤 | |
Franklin | A quick method of demonstrating nematodes of the genus Aphelenchoides in leaves | |
Beck | Studying regeneration in Xenopus | |
Al Hazzaa et al. | Stickiness elimination of himri barbel (Barbus lutes, Heckel) eggs | |
KR20170119936A (ko) | 생체조직의 굴절률 균질화 조성물 | |
Millott et al. | Ubiquity of melanin and the effect of phenylthiourea | |
TWI712687B (zh) | 去細胞器官及其製備方法 | |
CN105738175A (zh) | 一种鱼类早期生活史耳石样品制备方法 | |
Fairchild et al. | An improved method for mounting small insects | |
US20130251663A1 (en) | Tissue Preservation Fluid | |
Calheiraa et al. | Production of gemmules and larvae at the same time by a neotropical freshwater demosponge (Porifera) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210317 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220120 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220201 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220225 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220607 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220706 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7106114 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |