CN111362972B - 一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类化合物及其应用 - Google Patents

一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类化合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种苯并咪唑并[2,1‑b]噻唑类化合物及其应用，属于医药技术领域。本发明中合成的苯并咪唑并[2,1‑b]噻唑类似物对FLT3的抑制活性达到90％以上，其中，化合物(化合物2、4、6、8和10)对FLT3‑ITD激酶的IC50值较低，特别是化合物2，其IC50值仅为5.60nM，因此，本发明的化合物可以被用作FLT3的抑制剂，或者用来制备药物，所述药物能够通过影响一种或多种酪氨酸激酶的酶活性并干扰由所述激酶转导的信号来调节或抑制与异常细胞增殖相关的疾病，具有广阔的应用前景。

Description

一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类化合物及其应用
技术领域
本发明涉及一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类化合物及其应用，属于医药技术领域。
背景技术
恶性肿瘤的发生、发展是一个复杂的过程，传统的治疗药物主要分烷化剂、抗代谢类药物、天然产物和抗生素等几类，这几类药物的缺点是疗效不明显，毒副作用大。目前小分子激酶抑制剂作为潜在的癌症疗法，是一个让人感兴趣的领域。蛋白激酶是一种催化剂，在细胞生物学和生物化学的几乎每个方面都发挥着关键作用。这些酶产生信号模块，调控细胞周期进展、增殖、程序性细胞死亡(凋亡)、细胞骨架功能、运动、分化、发育、转录和翻译。蛋白激酶的作用众多，对它们进行仔细的调控是至关重要的，因为异常的活动可能引发癌症、心血管疾病、炎症以及神经紊乱。蛋白激酶的失调、过表达和突变在人类疾病的发病机制中起着因果作用，因此这些酶是有吸引力的药物靶点。具有蛋白质酪氨酸激酶(PTKs)活性的生长因子受体被称为受体酪氨酸激酶。蛋白受体酪氨酸激酶是一类受到严格调控的酶，家族中不同成员的异常激活是癌症的标志之一。FLT3与KIT、FMS、血小板衍生生长因子受体(PDGFR)等受体同属于受体酪氨酸激酶家族，这些受体在造血调节中发挥着重要作用。
FLT3是表达在造血干细胞上的特异性细胞因子受体，具有调节造血干祖细胞生存及生长、树突状细胞成熟、维持调节性T细胞稳态等作用。大约30％的急性髓系白血病(AML)患者存在FLT3基因突变的现象，主要包括FLT3内部串联重复(FLT3-ITD)及FLT3酪氨酸激酶结构域点突变(FLT3-TKD)。FLT3-ITD突变导致酪氨酸激酶功能的本构性、配体无关的激活，已知对患者生存预后不良，在AML患者中约占25％，FLT3-TKD约占5％～10％。FLT3可在配体结合上进行二聚并经历自磷酸化，从而启动多个细胞内信号程序。体外实验发现FLT3突变可通过MAPK、PI3K/AKT/Mtor及STAT5下游传导通路起促细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用。FLT3突变的高发生率及不良预后提示其可作为AML治疗的重要靶点。
目前已上市的FLT3抑制剂有Quizartinib、Gilteritinib、Sorafenib,Sunitinib和Midostaurin等8个药物。Quizartinib和Gilteritinib属于第二代FLT3抑制剂，具有更高的选择性和单药活性。所有FLT3抑制剂与细胞内TKD的ATP结合位点相互作用，竞争性地抑制ATP结合，从而阻止受体的自磷酸化和下游信号的激活。然而，当受体激活时，I型抑制剂与ATP结合位点结合，而II型抑制剂则与紧挨着ATP结合位点的疏水区域相互作用，只有当受体处于非活性构象时才能进入疏水区域，它们阻止了受体的激活。
因此，我们仍然需要能够有效抑制激酶活性且靶向性更强的化合物。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物，其结构如式I或式II所示的化合物或其药学上可接受的盐，具有抑制Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)的生物学功能，从而为寻找新的治疗癌症、代谢与免疫疾病、心血管病以及神经性疾病等开辟新途径。
本发明所设计化合物为苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物，含有脲结构，特别是双芳基脲结构，其中一个芳基为异噁唑、苯基等。恶噁唑被认为是细胞因子产生的阻滞剂，且异噁唑的尿素衍生物被描述为RAF激酶的抑制剂，含有此类结构的化合物被称为p38激酶抑制剂。
本发明的第一个目的是提供一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物，所述类似物的结构式如通式I或通式II所示；
其中，通式I为：
Figure BDA0002470808370000021
通式II为：
Figure BDA0002470808370000022
其中：R1选自H、-X、未取代或卤素取代的C1-C8直链或支链烷基，或者未取代或卤素取代的C3-C6环烷基或杂环基，或者-OR2、-NR2R3、-SR2、-(CH2)mC(O)OR2、-OC(O)R2、-(CH2)mC(O)NR2R3、-NR2C(O)R3、-(CH2)mC(S)OR2、-OC(S)R2、-NO2、-CN、-(CH2)mCN；A1、A2分别独立地选自空键、-NR4A3-、-OA3-、-SA3-、-(CH2)nC(O)O(CH2)pA3-、-(CH2)nC(O)NR4(CH2)pA3-、-(CH2)nC(S)(CH2)pA3-、-(CH2)nC(N-OH)(CH2)pA3-；X1、X2分别独立地选自C、N、O、S原子；
L选自
Figure BDA0002470808370000023
其中：R2、R3和R4每一个都独立地选自H、或未取代或卤素取代的C1-C6直链或支链烷基、或者未取代或卤素取代的C3-C5环烷基、或1～4个杂原子取代的脂肪杂环、或-(CH2)qR5；A3选自未取代或1～4个基团取代的4～10个原子的芳基或杂环芳基，其中每一个取代基团独立地选自H、-X、未取代或卤素取代的C1-C8直链或支链烷基或者未取代或卤素取代的C3-C6环烷基或杂环烷基、-OR6、-NR6R7、-SR6、-(CH2)wC(O)OR6、-OC(O)R6、-(CH2)wC(O)NR6R7、-NR6C(O)R7、-(CH2)wC(S)OR6、-OC(S)R6、-(CH2)wC(N-OH)OR6、-OC(N-OH)R6、-NO2、-CN、-(CH2)wCN；X3、X4分别独立地选自-(CH2)z、-(CH2)zNR8-、-(CH2)zO(CH2)z-、-(CH2)zS(CH2)z-；
其中：R5选自未取代或卤素取代的C3-C5环烷基、或1～4个杂原子取代的脂肪杂环；R6、R7和R8独立地选自H、未取代或卤素取代的C1-C6直链或支链烷基，或者未取代或卤素取代的C3-C5环烷基，或者1～4个杂原子取代的脂肪杂环；m、n、p、q、w和z各自独立地选自0、1、2、3和4；X代表卤素，卤素包括氟、氯、溴或碘；
此外，所述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物还包括通式I或通式Ⅱ化合物的全部药学上可接受的同位素标记化合物，以及苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的盐。
在本发明的一种实施方式中，所述同位素包括氢的同位素，例如2H和3H；碳的同位素，例如11C、13C和14C；氮的同位素，例如13N和15N；氧的同位素，例如15O、17O和18O。用较重的同位素例如氘即2H取代可提供某些治疗优势，其有更好的代谢稳定性，例如，体内半衰期增加或降低了剂量需求。
在本发明的一种实施方式中，所述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的药学可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；有机盐包括甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。
在本发明的一种实施方式中，R1选自-OR2。
在本发明的一种实施方式中，R2选自-Me、-(CH2)qR5。
在本发明的一种实施方式中，q为2。
在本发明的一种实施方式中，R5选自吗啉、哌嗪、N-甲基哌嗪。
在本发明的一种实施方式中，A1选自空键、-NH2C(O)-p-(C6H4)-、-NH2C(O)-CH2-p-(C6H4)-。
在本发明的一种实施方式中，A2选自空键、3-甲基异噁唑、3-叔丁基异噁唑、5-甲基异噁唑、5-叔丁基异噁唑。
在本发明的一种实施方式中，X1选自C原子。
在本发明的一种实施方式中，X2选自C原子。
在本发明的一种实施方式中，L选自
Figure BDA0002470808370000041
Figure BDA0002470808370000042
在本发明的一种实施方式中，通式I或通式II的化合物可以为以下表1具体化合物：
表1
Figure BDA0002470808370000043
Figure BDA0002470808370000051
续表1
Figure BDA0002470808370000052
Figure BDA0002470808370000061
本发明的第二个目的是提供一种组合物，所述组合物中含有上述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物，还含有至少一种药学可接受的赋形剂、载体和/或稀释剂。
本发明的第三个目的是提供上述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物在配制制剂中的应用，所述制剂包括用于口服给药的固体制剂、用于口服给药的液体制剂、用于胃肠外注射的制剂、用于局部给药的制剂四类。
在本发明的一种实施方式中，所述制剂为一种用于口服给药的固体制剂，所述固体制剂的剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂；在固体制剂中，所述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物或其药学可接受的盐作为活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如与柠檬酸钠或磷酸二钙；混合物或与下述成分再进行混合：(1)填料或增溶剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶等；(3)保湿剂，例如，甘油等；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些符合硅酸盐和碳酸钠等；(5)缓溶剂，例如石蜡等；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物等；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(8)吸附剂，例如，高岭土等；(9)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等。
在本发明的一种实施方式中，所述固体制剂的剂型包括但不限于片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂，上述剂型通过采用包衣和壳材料进行包埋形成，例如采用肠溶衣和其他本领域公知的材料晶型包衣或微囊化，包衣和壳材料中可包含不透明剂；在这种固体制剂中，苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物或其药学可接受的盐作为活性成分的释放能够以延迟的方式在消化道的某一部分中释放，可采用的包衣和壳材料的为聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述惰性赋形剂中的一种或者多种形成微胶囊形式。
在本发明的一种实施方式中，所述制剂为一种用于口服给药的液体制剂，所述液体制剂的剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆、酊剂；除苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物或其药学可接受的盐外，液体制剂中还包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，例如水和其他溶剂，增溶剂和乳化剂、例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油类，特别是棉籽油、花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油等或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，所述液体制剂中也可包括常规助剂，如润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料等。
在本发明的一种实施方式中，所述悬浮剂包括乙氧基化十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇、和脱水山梨醇、微晶纤维素、琼脂，或上述这些物质的混合物。
在本发明的一种实施方式中，所述制剂为一种用于胃肠外注射的制剂，所述用于胃肠外注射的制剂的剂型包括但不限于生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液和分散液的无菌粉末；除苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物或其药学可接受的盐外，所述的用于胃肠外注射的制剂中还包括适宜的载体、稀释剂、溶剂、赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
在本发明的一种实施方式中，所述制剂为一种用于局部给药的制剂，所述用于局部给药的制剂的剂型包括但不限于软膏剂、散剂、栓剂、滴剂、喷射剂和吸入剂；所述用于局部给药的制剂中包括作为活性成分的苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物或其药学可接受的盐，以及在无菌条件下和生理上可接受的载体及任选的防腐剂、缓冲剂，必要时还包括推进剂。
在本发明的一种实施方式中，所述制剂中苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的剂量范围为0.01-2000mg/kg，优选的剂量范围为2.5-1000mg/kg、更优选的剂量范围为5-500mg/kg；然而，给药的剂量将必然取决于被治疗宿主、具体的给药途径、以及正在被治疗的疾病的严重性而变化。
本发明的第四个目的是提供一种制备上述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的方法，所述方法通过以下反应式进行：
Figure BDA0002470808370000081
其中，R1、A1、A2、X1、X2和L与上述苯并咪唑并[2，1-b]噻唑类似物中的定义相同，R′为烃基或H，当R′为烃基时，i的条件为以下两种中的任意一种：(1)加入4-二甲氨基吡啶、三乙胺和三氯甲烷，控制反应温度为50～65℃，回流反应12～20h；(2)加入异丙醇，控制反应温度为80～85℃，微波反应6～12h；
当R′为H时，i的条件为：加入二异丙基乙胺、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二甲基甲酰胺，在室温下搅拌过夜。
本发明的第五个目的是提供一种用作FLT3抑制剂的药物，所述药物包含苯并咪唑并[2，1-b]噻唑类似物。
本发明的第六个目的是提供一种由上述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物所制备得到的药物，所述药物能够通过影响一种或多种酪氨酸激酶(如FLT3激酶)的酶活性并干扰由所述激酶转导的信号来调节、调节和/或抑制与异常细胞增殖相关的疾病，所述疾病为白血病和实体瘤。
在本发明的一种实施方式中，所述实体瘤包括但不限于：癌、肉瘤、成红细胞瘤、成胶质细胞瘤、脑膜瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤和成肌细胞瘤。
在本发明中的一种实施方式中，所述疾病的适应症包括但不限于：卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤以及间皮瘤；其中所述的白血病包括急性骨髓性白血病(AML)、B前体细胞急性淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常白血病、T细胞急性淋巴细胞性白血病和慢性粒细胞性白血病(CML)。
在本发明中的一种实施方式中，可单独应用上述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物或其药学可接受的盐制备药物对FLT3激酶，特别是激活型突变体形式的FLT3、耐药型突变体形式的FLT3进行活性治疗，除此之外，还可以联合常规的同种异基因造血干细胞移植、化学疗法或放射疗法进行治疗；或与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，与其他抗肿瘤药物组合，此联合治疗可通过同时、顺序或分开使用治疗的各组分来实现。
在本发明中的一种实施方式中，所述治疗剂和其他抗肿瘤药物包括但不限于：作用于DNA化学结构的抗肿瘤药物：如阿糖胞苷、阿扎胞苷、地西他宾、依托泊苷和；蛋白酶体抑制剂：如伏立诺他、硼替佐米和panobinostat；影响核酸转录的抗肿瘤药物：如伊达比星、柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素；细胞信号通路抑制剂：如FMS样受体酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼、索拉非尼、吉利替尼、奎扎替尼、来他替尼、米哚妥林、Crenolanib；血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂：如西地尼布和塞马西尼；抗肿瘤单抗：如抗GentuzumabOzogamicine抗体、免疫抑制剂PD-1、PD-L1、OX40激动剂抗体；待组合的各成分可同时或顺序的给予，以单一制剂形式或者以不同制剂的形式给予；所述组合不仅包括本发明苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的一种及其他活性剂的组合，而且也包括本发明苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的两种或更多种与其他活性剂的组合。
本发明的第七个目的是提供所述通式I的化合物在制备食品、保健品方面的应用。
有益效果：
本发明中的苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物对FLT3的抑制活性达到90％以上。其中，化合物(化合物2、4、6、8和10)对FLT3-ITD激酶的IC50值较低，特别是化合物2的IC50值仅为5.60nM，且上述5个化合物在MV4-11细胞的IC50值均小于2nM，特别是化合物2对MV4-11细胞的IC50值仅为0.176nM。因此，本发明的化合物呈现很好的FLT3的抑制活性，可以被用作FLT3的抑制剂。本发明要求保护的化合物具有很强的药效和对FLT3的选择性。这在开发适于用作FLT3抑制剂的药物方面是有利的。
此外，本发明中制备的化合物还表现出优异的代谢稳定性，所述实施例2表现出大于35小时的代谢半衰期，实施例4和6表现出介于26-35小时的代谢半衰期，相对较长的代谢半衰期使得它们具有降低医疗剂量和扩大给药时间间隔的潜能。
具体实施方式
以下实施例中所用的“烷基”是指直链或支链饱和烃基基团。烷基基团可具有1至10个碳原子(例如1至8个碳原子)，烷基基团包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如，正丙基和异丙基)、丁基(例如，正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基基团(例如，正戊基、异戊基、新戊基)、己基(例如，正己基及其异构体)等。其中，低级烷基基团一般最多有4个碳原子。低级烷基基团包括甲基、乙基、丙基(例如正丙基和异丙基)和丁基基团(例如正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基)。在一个实施例中一个烷基基团或两个或多个烷基基团可形成桥连的烷基基团，即其中烷基基团经另一个基团连接(特别显示于环状基团)，通过烷基链桥连形成环，即形成桥连的稠合环。
以下实施例中所用的“环烷基”是指非芳香碳环基团，包括环状烷基、链烯基和炔基基团。环烷基基团可以是单环(例如环己基)或多环(例如，包含稠合、桥连和/或螺环体系)，其中碳原子位于环体系内部或外部。环烷基基团作为整体可具有3至14个环原子(例如，3至8个碳原子用于单环环烷基基团和7至14个碳原子用于多环环烷基基团)。环烷基基团包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、冰片基、norpinyl、norcaryl、金刚烷基和螺[4.5]癸基，及其同系物、异构体等。
以下将通过实施例详细描述化合物1-40的合成方法。
中间体2a 2-氨基-6-羟基苯并噻唑
Figure BDA0002470808370000101
将2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑(18.02g，100mmol)混悬于40％溴化氢水溶液(140ml)中，120℃下搅拌反应4h。将体系降温至0℃，过滤，滤饼用饱和NaHCO3水溶液调pH至8～9，过滤，40℃真空干燥8h，得白色固体2a(14.46g，87.1％)。MS-ESI(m/z):167.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.12(d,1H),7.06(s,2H),7.01(d,1H),6.64(dd,1H)。
中间体3a 2-(4-硝基苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-醇
Figure BDA0002470808370000102
将中间体2a(14.13g，85.0mmol)、2-溴-4'-硝基苯乙酮(22.82g，93.5mmol)和NaHCO3(7.85g，93.4mmol)混悬于正丁醇(n-BuOH,280mL)中，回流反应3h。反应结束后冷却至室温，加入丙酮-水(150mL，丙酮：水＝1：3(v/v))的混合溶剂，并于0℃搅拌1h，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得黄色固体3a(22.83g，86.3％)。MS-ESI(m/z):312.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),8.93(s,1H),8.27(d,2H),7.78(d,1H),7.38(d,1H),6.97(dd,1H)。
中间体3b 4-(7-硝基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯酚
Figure BDA0002470808370000111
将2-氨基-6-硝基苯并噻唑(6.84g，35.0mmol)、2-溴-4'-羟基苯乙酮(8.28g，38.5mmol)和NaHCO3(3.23g，38.4mmol)混悬于n-BuOH(140mL)中，回流反应3h。反应结束后冷却至室温，加入丙酮-水(75mL，丙酮：水＝1：3(v/v))的混合溶剂，并于0℃搅拌1h，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得黄色固体3b(3.53g，32.4％)。MS-ESI(m/z):312.0[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.59(s,1H),9.10(d,J＝2.4Hz,1H),8.45(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),8.10(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),7.74–7.66(m,2H),7.42(d,J＝8.9Hz,1H),6.89–6.80(m,2H)。
中间体3c 7-甲氧基-2-(4-硝基苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑
Figure BDA0002470808370000112
将2-氨基-6-甲氧基苯并噻唑(3.60g，20.0mmol)、2-溴-4'-硝基苯乙酮(5.37g，22.0mmol)和NaHCO3(1.85g，22.0mmol)混悬于n-BuOH(72mL)中，回流反应3h。反应结束后冷却至室温，加入丙酮-水(80mL，丙酮：水＝1：3(v/v))的混合溶剂，并于0℃搅拌1h，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得黄色固体3c(4.38g，67.3％)。MS-ESI(m/z):326.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(s,1H),8.27(d,J＝8.4Hz,2H),8.04(d,J＝8.5Hz,2H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.67(d,J＝2.5Hz,1H),7.16(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),3.83(s,3H)。
中间体4a 4-(2-((2-(4-硝基苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)氧基)乙基)吗啉
Figure BDA0002470808370000113
将中间体3a(21.79g，70.0mmol)、N-2-氯乙基吗啉盐酸盐(32.56g，104.6mmol)、碳酸铯(57.02g，175.0mmol)和四丁基碘化铵(5.17g，14.0mmol)混悬于二甲基亚砜(DMSO,425mL)中，90±5℃搅拌1h，然后将体系115℃搅拌反应6h。将体系降温至室温，量取水(153mL)和丙酮(305mL)加入到体系中，并于室温搅拌2h。过滤，滤饼用水和丙酮洗涤，50℃真空干燥得黄色固体4a(26.83g,收率90.3％)。ESI-MS(m/z):425.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.00(s,1H),8.30(d,J＝8.8Hz,2H),8.08(d,J＝8.8Hz,2H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.72(d,J＝2.4Hz,1H),7.20(dd,J＝2.8、9.2Hz,2H),4.17(t,J＝5.6Hz,2H),3.59(t,J＝4.8Hz,4H),2.73(t,J＝6.0Hz,2H)。
中间体4b 4-(2-(4-(7-硝基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯氧基)乙基)吗啉
Figure BDA0002470808370000121
将中间体3b(3.11g，10.00mmol)、N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(4.66g，25.03mmol)、碳酸铯(9.79g，30.05mmol)和四丁基碘化铵(0.74g，3.00mmol)混悬于DMSO(30mL)中，90±5℃搅拌1h，然后将体系115℃搅拌反应h。将体系降温至室温，量取21mL水和42mL丙酮加入到体系中，并于室温搅拌2h。过滤，滤饼用水和丙酮洗涤，50℃真空干燥得浅橙黄色固体4b(3.96g,93.3％)。MS-ESI(m/z):425.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ8.64(d,J＝2.2Hz,1H),8.37(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),7.91(s,1H),7.83–7.73(m,2H),7.68(d,J＝8.9Hz,1H),6.99–6.94(m,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.77–3.73(m,4H),2.84(t,J＝5.7Hz,2H),2.61(dd,J＝5.6,3.5Hz,4H)。
中间体5a 4-[7-[2-(4-吗啉基)乙氧基]咪唑并[2,1-b][1,3]苯并噻唑-2-基]苯胺
Figure BDA0002470808370000122
将中间体4a(26.32g，62.0mmol)、铁粉(17.36g，310.0mmol)和NH4Cl(23.22g，434.0mmol)混悬于乙醇和水的混合溶剂中(210mL，EtOH：H2O＝3：1(v/v))，于90℃反应2.5h。用饱和Na2CO3水溶液调pH至8左右，并加入EtOAc(160mL)稀释，过滤，滤液于50℃减压浓缩除去有机溶剂，残留物加入90mL EtOAc(80mL×3)萃取三次，有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，于50℃减压浓缩得黄色固体5a(22.26g，91.0％)。ESI-MS m/z::395.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,1H),7.66(d,J＝2.5Hz,1H),7.55–7.44(m,2H),7.14(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.65–6.55(m,2H),5.17(s,2H),4.15(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.72(t,J＝5.7Hz,2H)。
中间体5b 2-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-胺
Figure BDA0002470808370000131
将中间体4a(1.18g，2.8mmol)、铁粉(0.78g，13.9mmol)和NH4Cl(1.04g，19.4mmol)混悬于乙醇和水的混合溶剂中(8mL，EtOH：H2O＝3：1(v/v))，于90℃反应2.5h。用饱和Na2CO3水溶液调pH至8左右，并加入EtOAc(8mL)稀释，过滤，滤液于50℃减压浓缩除去有机溶剂，残留物加入90mL EtOAc(4mL×3)萃取三次，有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，于50℃减压浓缩得黄色固体5b(923.1mg，83.6％)。MS-ESI(m/z):395.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(s,1H),7.76–7.71(m,2H),7.59(d,J＝8.6Hz,1H),7.04(d,J＝2.1Hz,1H),6.98(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),5.39(s,2H),4.11(t,J＝5.8Hz,2H),3.58(t,J＝4.6Hz,4H),2.70(t,J＝5.7Hz,2H)。
中间体5c 4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯胺
Figure BDA0002470808370000132
将中间体3c(3.90g，12.0mmol)、铁粉(3.36g，60.0mmol)和NH4Cl(4.49g，83.9mmol)混悬于乙醇和水的混合溶剂中(28mL，EtOH：H2O＝3：1(v/v))，于90℃反应2.5h。用饱和Na2CO3水溶液调pH至8左右，并加入EtOAc(25mL)稀释，过滤，滤液于50℃减压浓缩除去有机溶剂，残留物加入90mL EtOAc(12.5mL×3)萃取三次，有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，于50℃减压浓缩得黄色固体5b(3.00g，84.7％)。MS-ESI(m/z):296.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38(s,1H),7.84(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝2.5Hz,1H),7.55–7.47(m,2H),7.13(dd,J＝8.8,2.6Hz,1H),6.64–6.57(m,2H),5.19(s,2H),3.83(s,3H)。
中间体6a 苯基[5-(叔丁基)异噁唑-3-基]氨基甲酸酯
Figure BDA0002470808370000133
将3-氨基-5-叔丁基异唑(2.80g，20mmol)溶于无水四氢呋喃(28ml)中，加入碳酸钾(3.59g，26mmol)，搅拌下加入氯甲酸苯酯(3.44g，22.0mmol)，室温搅拌反应4h。过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤，滤液于40℃减压浓缩，残留物加入水(35ml)和乙醇(9ml)打浆，室温搅拌3h，过滤，滤饼35℃减压干燥12h，得白色固体6a(5.02g，96.5％)。ESI-MS(m/z):261.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.17(s,1H),7.44(t,J＝7.6Hz,2H),7.28(t,J＝7.6Hz,1H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),6.44(s,1H),1.29(s,9H)。
中间体6b 苯基(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)氨基甲酸酯
Figure BDA0002470808370000141
化合物6b的合成方法参照化合物6a，区别在于将3-氨基-5-叔丁基异唑替换为3-氨基-5-甲基异唑。得白色固体8.10g，收率82.6％。ESI-MS(m/z):219.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.10(s,1H),7.47–7.40(m,2H),7.30–7.25(m,1H),7.24–7.19(m,2H),6.47(s,1H),2.37(s,3H)。
中间体6c 苯基(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)氨基甲酸酯
Figure BDA0002470808370000142
将5-氨基-3-叔丁基异唑(2.10g，15mmol)溶于无水四氢呋喃(28ml)中，加入碳酸钾(2.70g，19.5mmol)，搅拌下加入氯甲酸苯酯(2.58g，16.5mmol)，室温搅拌反应12h。过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤，滤液于40℃减压浓缩，加入硅胶拌样，柱层析(洗脱剂：PE：EtOAc＝20：1～5：1)得浅橙色固体6c(3.40g，87.2％)。ESI-MS(m/z):261.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.17(s,1H),7.69(t,J＝7.6Hz,2H),7.31(t,J＝7.2Hz,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,2H),6.44(s,1H),1.30(s,9H)。
中间体6d(3-甲基异噁唑-5-基)氨基甲酸苯酯
Figure BDA0002470808370000143
化合物6d的合成方法参照化合物6c，区别在于将5-氨基-3-叔丁基异唑替换为5-氨基-3-甲基异唑。色固体1.04g，收率23.9％。ESI-MS(m/z):219.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.84(s,1H),7.47–7.41(m,2H),7.29(t,J＝7.3Hz,1H),7.27–7.22(m,2H),5.95(s,1H),2.18(s,3H)。
中间体7a(4-硝基苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002470808370000144
将对硝基苯乙酸(5.43g，30.00mmol)混悬于60mL EtOH中，量取6.60mL(10.76g，90.42mmol)二氯亚砜于冰水浴下滴加到反应体系中，滴加完毕，于室温搅拌反应1.5h。将体系中溶剂于50℃减压浓缩除去，残余物经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝10：1～5：1(v/v)]纯化，得略带黄色固体7a(6.19g,收率98.6％)。MS-ESI(m/z):210.1[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.20(d,J＝8.7Hz,2H),7.57(d,J＝8.7Hz,2H),4.10(q,J＝7.1Hz,2H),3.88(s,2H),1.19(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体7b 4-硝基苯甲酸乙酯
Figure BDA0002470808370000151
中间体7b的合成参照中间体7a，区别在于将对硝基苯乙酸替换为对硝基苯甲酸。得淡黄色固体5.62g，收率72％。MS-ESI(m/z):196.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.38–8.32(m,2H),8.23–8.16(m,2H),4.38(q,J＝7.1Hz,2H),1.35(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体8a(4-氨基苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002470808370000152
将中间体7a(6.00g，28.68mmol)溶于MeOH(60mL)中，再加入Pd/C(0.96g，9.02mmol)，氢气氛围下于室温搅拌过夜。硅藻土助滤，于50℃减压浓缩，得米色固体8a(5.03g，98％)。MS-ESI(m/z):180.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.94–6.85(m,2H),6.53–6.46(m,2H),4.95(s,2H),4.04(q,J＝7.1Hz,2H),3.41(s,2H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体8b 4-氨基苯甲酸乙酯
Figure BDA0002470808370000153
中间体8b的合成参照中间体8a，区别在于将中间体7a替换为中间体7b。得浅橙色固体4.32g，收率93％。MS-ESI(m/z):166.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝8.7Hz,2H),6.56(d,J＝8.7Hz,2H),5.95(s,2H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).
中间体9a 2-(4-(3-(5-叔丁基异噁唑-3-基)脲基)苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002470808370000154
将化合物8a(358.2mg，2.0mmol)溶于5mL三氯甲烷中，再加入4-二甲氨基吡啶(14.7mg，0.1mmol)和6a(572.6mg，2.2mmol)，于搅拌下滴加3滴三乙胺到反应体系中，滴加完毕将体系50℃搅拌反应过夜。将体系中溶剂于50℃减压浓缩除去，残余物经硅胶柱层析[洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝10：1～5：1(v/v)]纯化，得白色固体9a(575.0mg,83.2％)。MS-ESI(m/z):346.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.51(s,1H),8.82(s,1H),7.46–7.38(m,2H),7.21(d,J＝8.6Hz,2H),6.52(s,1H),4.10(q,J＝7.1Hz,2H),3.62(s,2H),1.32(s,9H),1.21(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体9b 2-(4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002470808370000161
中间体9b合成参照中间体9a，区别在于将中间体6a替换为中间体6b。得白色固体9b(506.3mg,55.7％)。MS-ESI(m/z):304.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.42(s,1H),8.79(s,1H),7.38(d,J＝8.5Hz,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,2H),6.53(s,1H),4.07(q,J＝7.1Hz,2H),3.59(s,2H),2.36(s,3H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体9c 2-(4-(3-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002470808370000162
中间体9c合成参照中间体9a，区别在于将中间体6a替换为中间体6c。得白色固体9c(643.5mg,74.5％)。MS-ESI(m/z):346.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.04(s,1H),8.79(s,1H),7.40(d,J＝8.5Hz,2H),7.23–7.16(m,2H),6.05(s,1H),4.07(q,J＝7.1Hz,2H),3.60(s,2H),1.25(s,9H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体9d 2-(4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯基)乙酸乙酯
Figure BDA0002470808370000163
中间体9d合成参照中间体9a，区别在于将中间体6a替换为中间体6d。得白色固体9d(258.9mg,85.3％)。MS-ESI(m/z):304.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),8.85(s,1H),7.43–7.36(m,2H),7.22–7.17(m,2H),5.95(s,1H),4.07(q,J＝7.1Hz,2H),3.60(s,2H),2.16(s,3H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体9e 4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)苯甲酸乙酯
Figure BDA0002470808370000171
中间体9e合成参照中间体9a，区别在于将中间体8a替换为中间体8b。得白色固体9e(506.3mg,83.2％)。MS-ESI(m/z):332.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),9.17(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.61–7.56(m,2H),6.53(s,1H),4.28(q,J＝7.1Hz,2H),1.32(t,J＝7.1Hz,2H),1.30(s,9H)。
中间体9f 4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯甲酸乙酯
Figure BDA0002470808370000172
中间体9f合成参照中间体9a，区别在于将中间体8a替换为中间体8b，将中间体6a替换为中间体6b。得白色固体9f(956.5mg,82.7％)。MS-ESI(m/z):290.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.57(s,1H),9.18(s,1H),7.94–7.86(m,2H),7.58(d,J＝8.8Hz,2H),6.56(d,J＝1.0Hz,1H),4.28(q,J＝7.1Hz,2H),2.37(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体9g 4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯甲酸乙酯
Figure BDA0002470808370000173
中间体9g合成参照中间体9a区别在于将中间体8a替换为中间体8b，将中间体6a替换为中间体6c。得白色固体9g(441.5mg,44.4％)。MS-ESI(m/z):332.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),9.26(s,1H),8.09–7.83(m,2H),7.76–7.55(m,2H),6.13(s,1H),4.31(q,J＝7.1Hz,2H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H),1.29(s,9H)。
中间体9h 4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯甲酸乙酯
Figure BDA0002470808370000174
中间体9h合成参照中间体9a，区别在于将中间体8a替换为中间体8b，将中间体6a替换为中间体6d。得白色固体9h(460.1mg,63.6％)。MS-ESI(m/z):290.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.27(s,1H),7.94–7.88(m,2H),7.62–7.58(m,2H),5.99(s,1H),4.29(q,J＝7.1Hz,2H),2.18(s,3H),1.31(t,J＝7.1Hz,3H)。
中间体10a 2-(4-(3-(5-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002470808370000181
将9a(475.0mg，1.4mmol)溶于THF(8.5mL)中，然后加入8.5mL 0.5N NaOH水溶液，反应体系于室温搅拌反应2h。将体系中有机溶剂于40℃减压浓缩除去，加入8.5mL水稀释残余物，向体系中滴加1mmol/L HCl水溶液调pH至3左右，过滤，滤饼于40℃真空干燥4h，得白色固体10a(418.3mg,收率95.6％)。MS-ESI(m/z):318.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.27(s,1H),9.46(s,1H),8.78(s,1H),7.40–7.36(m,2H),7.20–7.16(m,2H),6.50(s,1H),3.50(s,2H),1.29(s,9H)。
中间体10b 2-(4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002470808370000182
中间体10b合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9b。得白色固体10b(348.2mg,95.8％)。MS-ESI(m/z):276.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.52(s,1H),8.89(s,1H),7.45–7.33(m,2H),7.24–7.12(m,2H),6.55(s,1H),3.51(s,2H),2.38(s,3H)。
中间体10c 2-(4-(3-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002470808370000183
中间体10c合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9c。得白色固体10c(569.3mg,76.2％)。MS-ESI(m/z):318.2[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),10.07(s,1H),8.81(s,1H),7.47–7.37(m,2H),7.30–7.13(m,2H),6.07(s,1H),3.53(s,2H),1.27(s,9H)。
中间体10d 2-(4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯基)乙酸
Figure BDA0002470808370000184
中间体10d合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9d。得白色固体10d(222.3mg,94.1％)。MS-ESI(m/z):276.2(M+H)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.31(s,1H),10.75(s,1H),9.85(s,1H),7.51–7.34(m,2H),7.30–7.10(m,2H),5.95(s,1H),3.52(s,2H),2.18(s,3H)。
中间体10e 4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)苯甲酸
Figure BDA0002470808370000191
中间体10e合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9e。得白色固体10e(302.2mg,82.4％)。MS-ESI(m/z):304.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.72(s,1H),9.65(s,1H),9.18(s,1H),7.98–7.83(m,2H),7.67–7.53(m,2H),6.55(s,1H),1.32(s,9H)。
中间体10f 4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯甲酸
Figure BDA0002470808370000192
中间体10f合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9f。得白色固体10f(256.2mg,70.8％)。MS-ESI(m/z):262.1(M+H)+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),9.60(s,1H),9.18(s,1H),7.96–7.86(m,2H),7.64–7.54(m,2H),6.58(d,J＝1.0Hz,1H),2.40(s,3H)。
中间体10g 4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯甲酸
Figure BDA0002470808370000193
中间体10g合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9g。得白色固体10g(213.6mg,76.8％)。MS-ESI(m/z):304.1[M+H]+。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ12.64(s,1H),10.85–10.76(m,1H),10.21(s,1H),7.95–7.88(m,2H),7.64–7.57(m,2H),6.09(s,1H),1.28(s,9H)。
中间体10h 4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯甲酸
Figure BDA0002470808370000194
中间体10h合成参照中间体10a，区别在于将中间体9a替换为中间体9h。得白色固体10h(260.2mg,72.0％)。MS-ESI(m/z):262.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),10.27(s,1H),9.28(s,1H),7.89(d,J＝8.4Hz,2H),7.57(d,J＝8.4Hz,2H),5.99(s,1H),2.18(s,3H)。
中间体11 1-((4-(7-(2-吗啉基乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸甲酯
Figure BDA0002470808370000201
将中间体5a(1.18g，3.0mmol)和1，1-环丙基二羧酸单甲酯(432.4mg，3.0mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF，10mL)中，再加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，1.31g，3.45mmol)，将体系于0℃搅拌10min，加入N，N-二乙基丙胺(DIPEA，829.7mg，6.42mmol)，将体系于室温搅拌过夜。将反应液滴加到水(50mL)中，过滤，滤饼用水洗涤，滤饼于40℃真空干燥得橙色固体中间体11(1.38g,88.6％)。MS-ESI(m/z):521.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.02(s,1H),8.80(s,1H),7.87(d,J＝2.4Hz,2H),7.80(d,J＝3.6Hz,2H),7.66(d,J＝3.2Hz,1H),7.53(s,1H),7.00(d,J＝5.2Hz,1H),4.07(t,J＝4.4Hz,2H),3.66(s,3H),3.57(t,J＝4.8Hz,4H),2.69(t,J＝3.2Hz,2H),1.68(t,J＝2.8Hz,2H),1.43(t,J＝3.2Hz,2H)。
中间体12 1-((4-(7-(2-吗啉基乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸
Figure BDA0002470808370000202
将中间体11(1.30g，2.50mmol)溶于THF(15mL)中，然后加入0.5mmol/L NaOH水溶液(15mL)，反应体系于室温搅拌反应2h。将体系中有机溶剂于40℃减压浓缩除去，向体系中滴加1mmol/L HCl水溶液调pH至3左右，过滤，滤饼于40℃真空干燥8h，得白色固体中间体12(1.18g,93.4％)。MS-ESI(m/z):507.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.82(s,1H),10.02(s,1H),8.80(s,1H),7.87(d,J＝2.4Hz,2H),7.80(d,J＝3.6Hz,2H),7.66(d,J＝3.2Hz,1H),7.53(s,1H),7.00(d,J＝5.2Hz,1H),4.07(t,J＝4.4Hz,2H),3.57(t,J＝4.8Hz,4H),2.69(t,J＝3.2Hz,2H),1.74(t,J＝2.8Hz,2H),1.49(t,J＝3.2Hz,2H)。
实施例1 1-(5-甲基异噁唑-3-基)-3-[4-(7-(2-吗啉基)乙氧基]苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲(化合物1)
Figure BDA0002470808370000211
将中间体5a(79.1mg，0.20mmol)、6b(48.1mg，0.22mmol)、4-二甲氨基吡啶(DMAP，1.5mg，0.01mmol)依次加入到三氯甲烷(2mL)中，搅拌下加入三乙胺(TEA，3.0mg，0.03mmol)，回流反应20h。反应完毕后，冷却至0℃，析出白色固体，继续搅拌2h。抽滤，滤饼用冷的三氯甲烷洗涤，干燥，得白色固体1(84.0mg，80.8％)MS-ESI(m/z):519.3[M+H]+。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),9.34(s,1H),8.66(s,1H),7.95(d,J＝8.9Hz,1H),7.80(d,J＝9.6Hz,3H),7.55(d,J＝8.2Hz,2H),7.26(d,J＝8.9Hz,1H),6.59(s,1H),4.47(s,2H),3.87(s,4H),2.40(s,3H)。
实施例2 1-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-3-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)尿素(化合物2)
Figure BDA0002470808370000212
化合物2合成参照化合物1，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体6b替换为中间体6c。得白色固体60.8mg，收率54.2％。MS-ESI(m/z):561.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.61(s,1H),8.15–8.08(m,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.3Hz,2H),7.68(d,J＝2.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,2H),7.16(dd,J＝8.9、2.5Hz,1H),6.08(s,1H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.97(s,2H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),1.27(s,9H)。
实施例2A 1-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-3-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)尿素盐酸盐(化合物2A)
Figure BDA0002470808370000213
将实例2(56.1mg)溶解于乙腈(1mL)，搅拌下缓慢加入1mol/L HCl(1.5mL)，搅拌片刻后冷冻干燥除去溶剂，得淡黄色固体实例2A(58.5mg)。1H NMR(400MHz,D2O)δ9.16(s,1H),8.71(s,1H),8.27–8.20(m,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.84(d,J＝8.3Hz,2H),7.78(d,J＝2.4Hz,1H),7.65(d,J＝7.6Hz,2H),7.26(dd,J＝7.7、2.5Hz,1H),6.20(s,1H),4.31(t,J＝5.4Hz,2H),3.69(t,J＝4.4Hz,4H),2.97(s,2H),2.79(t,J＝5.4Hz,2H),1.31(s,9H)。
实施例3 1-(3-甲基异噁唑-5-基)-3-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲(化合物3)
Figure BDA0002470808370000221
化合物3合成参照化合物1，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体6b替换为中间体6d。得淡黄色固体49.40mg，收率75％。MS-ESI(m/z):519.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.15(s,1H),8.97(s,1H),8.61(s,1H),7.87(d,J＝8.8Hz,1H),7.81–7.75(m,2H),7.68(d,J＝2.5Hz,1H),7.55–7.49(m,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),5.97(s,1H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),2.18(s,3H)。
实施例4 1-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-3-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)尿(化合物4)
Figure BDA0002470808370000222
化合物4合成参照化合物1，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，将中间体6b替换为中间体6a。得淡黄色固体40.2mg，收率40.0％。MS-ESI(m/z):561.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),9.65(s,1H),9.19(s,1H),8.60(s,1H),8.46(d,J＝1.9Hz,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,2H),7.93(d,J＝8.7Hz,1H),7.88–7.82(m,1H),7.79(d,J＝8.3Hz,2H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.02(d,J＝8.2Hz,2H),6.54(s,1H),4.14(s,2H),3.60(s,4H),2.72(s,2H),1.31(s,9H)。
实施例5 1-(5-甲基异噁唑-3-基)-3-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)脲(化合物5)
Figure BDA0002470808370000231
化合物5合成参照化合物1，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b。得黄色固体45.0mg，收率48.0％。MS-ESI(m/z):519.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.39(s,1H),9.58(s,1H),9.16(s,1H),8.59(s,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),8.02–7.95(m,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.82–7.73(m,2H),7.65–7.57(m,2H),7.02(d,J＝8.7Hz,2H),6.57(d,J＝1.1Hz,1H),4.14(t,J＝5.6Hz,2H),3.60(d,J＝4.8Hz,4H),2.73(s,2H),2.38(d,J＝0.9Hz,3H),1.23(s,6H)。
实施例6 1-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-3-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)尿(化合物6)
Figure BDA0002470808370000232
化合物6合成参照化合物1，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，将中间体6b替换为中间体6c。得黄色固体20.2mg，收率36.3％。MS-ESI(m/z):561.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),10.22(s,1H),9.18(s,1H),8.59(s,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.6Hz,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.84(dd,J＝8.9,2.0Hz,1H),7.78(d,J＝8.6Hz,2H),7.64(d,J＝8.6Hz,2H),7.02(d,J＝8.6Hz,2H),6.11(s,1H),4.13(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.71(s,2H),1.27(s,9H)。
实施例7 1-(3-甲基异噁唑-5-基)-3-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)脲(化合物7)
Figure BDA0002470808370000233
化合物7合成参照化合物1，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，将中间体6b替换为中间体6d。得卡其色固体20.3mg，收率25.5％。MS-ESI(m/z):519.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),10.22(s,1H),9.23(s,1H),8.59(s,1H),8.45(d,J＝2.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.7Hz,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.84(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.81–7.75(m,2H),7.63(d,J＝8.7Hz,2H),7.02(d,J＝8.7Hz,2H),6.01(s,1H),4.13(t,J＝5.7Hz,2H),3.60(t,J＝4.6Hz,4H),2.73(s,2H),2.18(s,3H)。
实施例8 1-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-3-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲(化合物8)
Figure BDA0002470808370000241
将中间体5c(5.92g，15mol)、中间体6a(29g，16.5mol)、DMAP(110.0mg，0.9mmol)依次加入到三氯甲烷(60mL)中，搅拌下加入TEA·(227.7mg，2.25mmol)，回流反应20h。反应完毕后，冷却至0℃，析出白色固体，继续搅拌2h。抽滤，滤饼用冷的DCM洗涤，干燥，得白色固体化合物8(51.60mg，收率55.8％)。MS-ESI(m/z):462.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.88(s,1H),8.61(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.1Hz,2H),7.67(s,1H),7.52(d,J＝8.2Hz,2H),7.15(d,J＝8.9Hz,1H),6.53(s,1H),3.84(s,3H),1.31(s,9H)。
实施例9 1-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)-3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲(化合物9)
Figure BDA0002470808370000242
化合物9合成参照化合物8，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c c，将中间体6a替换为中间体6b。得白色固体42.30mg，收率50.2％。MS-ESI(m/z):420.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.89(s,1H),8.60(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.78(d,J＝8.2Hz,2H),7.67(s,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(d,J＝8.9Hz,1H),6.56(s,1H),3.84(s,3H),2.38(s,3H)。
实施例10 1-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)-3-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)脲(化合物10)
Figure BDA0002470808370000251
化合物10合成参照化合物8，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，将中间体6a替换为中间体6c。得白色固体79.40mg，收率85.4％。MS-ESI(m/z):462.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.89(s,1H),8.62(s,1H),7.88(d,J＝8.9Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.53(d,J＝8.2Hz,2H),7.15(d,J＝8.1Hz,2H),6.75(d,J＝7.8Hz,1H),6.08(s,1H),3.84(s,3H),1.27(s,8H)。
实施例11 1-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)-3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲(化合物11)
Figure BDA0002470808370000252
化合物11合成参照化合物8，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，将中间体6a替换为中间体6d。得白色固体68.20mg，收率80.7％。MS-ESI(m/z):420.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.10(s,1H),8.91(s,1H),8.61(s,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.67(s,1H),7.52(d,J＝8.3Hz,2H),7.15(d,J＝8.8Hz,1H),5.98(s,1H),3.84(s,3H),2.18(s,3H).
实施例12 2-(4-(3-(5-(叔丁基)异恶唑-3-基)脲基)苯基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)乙酰胺(化合物12)
Figure BDA0002470808370000253
将中间体5a(30.8mg，0.08mmol)和中间体10a(24.8mg，0.08mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF，1.5mL)中，再加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，34.1mg，0.09mmol)，将体系于0℃搅拌10min，加入N，N-丙基乙胺(DIPEA，21.6mg，0.17mmol)，将体系于室温搅拌过夜。反应完成后，将反应液滴加到0.25mmol/L的NaOH(15mL)水溶液中，EtOAc(15mL×3)萃取三次，水相用饱和NaCl水溶液(10mL×5)洗涤五次，有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，减压浓缩。残余物柱层析(洗脱剂：DCM：MeOH＝100：1～20：1)得固体化合物12(42.8mg,79.0％)。MS-ESI(m/z):694.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.56(s,1H),8.90(s,1H),8.60(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.76(s,2H),7.70–7.62(m,3H),7.45–7.38(m,2H),7.31–7.24(m,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.50(s,1H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.61–3.56(m,6H),2.72(t,J＝5.7Hz,2H),1.29(s,9H)。
实施例13 2-(4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)乙酰胺(化合物13)
Figure BDA0002470808370000261
化合物13合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10b。得浅橙色固体37.8mg，收率76.0％。MS-ESI(m/z):652.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.41(s,1H),8.79(s,1H),8.60(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.77(d,J＝8.7Hz,2H),7.70–7.62(m,3H),7.40(d,J＝8.6Hz,2H),7.28(d,J＝8.4Hz,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.53(d,J＝1.0Hz,1H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.63–3.56(m,6H),2.73(d,J＝6.4Hz,2H),2.36(d,J＝0.9Hz,3H)。
实施例14 2-(4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)乙酰胺(化合物14)
Figure BDA0002470808370000262
化合物14合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10c。得白色固体41.4mg，收率60.0％。MS-ESI(m/z):694.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),10.04(s,1H),8.80(s,1H),8.60(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.81–7.73(m,2H),7.71–7.61(m,3H),7.46–7.39(m,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.05(s,1H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(dd,J＝8.4,3.7Hz,6H),2.72(t,J＝5.7Hz,2H),1.25(s,9H)。
实施例15 2-(4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)乙酰胺(化合物15)
Figure BDA0002470808370000271
化合物15合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10d。得白色固体39.1mg，收率54.0％。MS-ESI(m/z):652.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),10.03(s,1H),8.82(s,1H),8.60(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.77(d,J＝8.7Hz,2H),7.70–7.63(m,3H),7.44–7.39(m,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),5.95(s,1H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.63–3.55(m,6H),2.72(s,2H),2.16(s,3H)。
实施例16 4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)苯甲酰胺(化合物16)
Figure BDA0002470808370000272
化合物16合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10e。得白色固体28.0mg，收率55.2％。MS-ESI(m/z):680.5[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.64(s,1H),9.13(s,1H),8.64(s,1H),7.97(d,J＝8.7Hz,2H),7.90–7.82(m,5H),7.69(d,J＝2.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.17(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.55(s,1H),4.17(t,J＝5.7Hz,2H),3.60(t,J＝4.6Hz,4H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),1.31(s,9H)。
实施例17 4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)苯甲酰胺(化合物17)
Figure BDA0002470808370000281
化合物17合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10f。得浅橙色固体58.4mg，收率72.1％。MS-ESI(m/z):638.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.60(s,1H),9.20(s,1H),8.64(s,1H),7.96(d,J＝8.6Hz,2H),7.91–7.79(m,5H),7.69(d,J＝2.5Hz,1H),7.60(d,J＝8.6Hz,2H),7.17(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.58(s,1H),4.17(t,J＝5.6Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),2.38(s,3H)。
实例18 4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)苯甲酰胺(化合物18)
Figure BDA0002470808370000282
化合物18合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10g。得浅灰色固体39.6mg，收率57.7％。MS-ESI(m/z):680.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),10.20(s,1H),9.17(s,1H),8.64(s,1H),7.97(d,J＝8.8Hz,2H),7.89–7.80(m,5H),7.69(d,J＝2.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.7Hz,2H),7.17(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.11(s,1H),4.17(t,J＝5.7Hz,2H),3.60(t,J＝4.6Hz,4H),2.74(s,2H),1.27(s,9H)。
实施例19 4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)苯甲酰胺(化合物19)
Figure BDA0002470808370000283
化合物19合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体10a替换为中间体10h。得浅灰色固体41.3mg，收率55.3％。MS-ESI(m/z):638.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.29(s,1H),10.20(s,1H),9.34(s,1H),8.64(s,1H),7.97(d,J＝8.8Hz,2H),7.92–7.79(m,5H),7.69(d,J＝2.5Hz,1H),7.65–7.58(m,2H),7.23–7.10(m,1H),6.00(s,1H),4.19(d,J＝10.7Hz,2H),3.60(s,4H),2.74(s,2H),2.18(s,3H)。
实施例20 2-(4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)苯基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑[2,1-b]噻唑-7-基)乙酰胺(化合物20)
Figure BDA0002470808370000291
化合物20合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b。得浅黄色固体29.0mg,收率51.7％。MS-ESI(m/z):694.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.63(s,1H),9.06(s,1H),8.58(s,1H),8.15(d,J＝2.1Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.83–7.71(m,2H),7.57(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.05–6.96(m,2H),6.52(s,1H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.71(t,J＝5.7Hz,2H),1.30(s,9H)。
实施例21 2-(4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)乙酰胺(化合物21)
Figure BDA0002470808370000292
化合物21合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10b。得浅黄色固体45.5mg，收率70.4％。MS-ESI(m/z):652.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.58(s,1H),9.07(s,1H),8.58(s,1H),8.14(d,J＝2.1Hz,1H),7.87(d,J＝8.7Hz,1H),7.81–7.72(m,2H),7.57(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.06–6.96(m,2H),6.55(s,1H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.71(t,J＝5.7Hz,2H),2.38(s,3H)。
实施例22 2-(4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑[2,1-b]噻唑-7-基)乙酰胺(化合物22)
Figure BDA0002470808370000301
化合物22合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10c。得白色固体36.4mg，收率52.1％。MS-ESI(m/z):694.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.23(s,1H),9.10(s,1H),8.58(s,1H),8.15(d,J＝2.1Hz,1H),7.89(d,J＝8.8Hz,1H),7.80–7.74(m,2H),7.60(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.04–6.98(m,2H),6.08(s,1H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.71(t,J＝5.7Hz,2H),1.27(s,9H)。
实施例23 2-(4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯基)-N-(2-(4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)乙酰胺(化合物23)
Figure BDA0002470808370000302
化合物23合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10d。得淡黄色固体41.2mg，收率61.4％。MS-ESI(m/z):652.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.11(s,1H),8.58(s,1H),8.14(d,J＝2.1Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.83–7.69(m,2H),7.58(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),7.08–6.95(m,2H),5.98(s,1H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.59(t,J＝4.6Hz,4H),2.70(t,J＝5.7Hz,2H),2.18(s,3H)。
实施例24 4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)苯甲酰胺(化合物24)
Figure BDA0002470808370000303
化合物24合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10e。得淡黄色固体28.0mg，收率41.0％。MS-ESI(m/z):680.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),9.53(s,1H),8.92(s,1H),8.56(s,1H),8.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.80–7.73(m,2H),7.66(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.44–7.40(m,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.03–6.98(m,2H),6.50(s,1H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.63(s,2H),3.60–3.57(m,4H),2.70(t,J＝5.8Hz,2H),1.29(s,9H)。
实施例25 4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)苯甲酰胺(化合物25)
Figure BDA0002470808370000311
化合物25合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10f。得淡黄色固体46.3mg，收率56.5％。MS-ESI(m/z):638.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.44(s,1H),8.86(s,1H),8.56(s,1H),8.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.80–7.72(m,2H),7.66(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.41(d,J＝8.6Hz,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),6.53(d,J＝1.0Hz,1H),4.12(t,J＝5.8Hz,2H),3.63(s,2H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.71(s,2H),2.36(d,J＝0.9Hz,3H)。
实施例26 4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)苯甲酰胺(化合物26)
Figure BDA0002470808370000312
化合物26合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10g。得淡黄色固体38.8mg，收率56.9％。MS-ESI(m/z):680.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),10.04(s,1H),8.80(s,1H),8.56(s,1H),8.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.8Hz,1H),7.80–7.73(m,2H),7.66(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),7.45–7.41(m,2H),7.29(d,J＝8.3Hz,2H),7.03–6.98(m,2H),6.05(s,1H),4.12(t,J＝5.7Hz,2H),3.63(s,2H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.71(s,2H),1.25(s,9H)。
实施例27 4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)-N-(2-(4-(2-吗啉代乙氧基)苯基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-7-基)苯甲酰胺(化合物27)
Figure BDA0002470808370000321
化合物27合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5b，中间体10a替换为中间体10h。得淡黄色固体43.4mg，收率53.0％。MS-ESI(m/z):638.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),10.02(s,1H),8.81(s,1H),8.56(s,1H),8.30(d,J＝2.0Hz,1H),7.88(d,J＝8.7Hz,1H),7.80–7.73(m,2H),7.66(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.45–7.39(m,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),5.95(s,1H),4.12(d,J＝6.5Hz,2H),3.63(s,2H),3.59(s,4H),2.71(s,2H),2.16(s,3H)。
实施例28 2-(4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)苯基)-N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)乙酰胺(化合物28)
Figure BDA0002470808370000322
化合物28合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c。得白色固45.6mg,收率53.4％。MS-ESI(m/z):595.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.46(s,1H),8.78(s,1H),8.60(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.77(d,J＝8.4Hz,2H),7.66(dd,J＝9.6,2.3Hz,3H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.28(d,J＝8.3Hz,2H),7.15(dd,J＝8.9、2.5Hz,1H),6.50(s,1H),3.84(s,3H),3.60(s,2H),1.29(s,9H)。
实施例29 N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)-2-(4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯基)乙酰胺(化合物29)
Figure BDA0002470808370000331
化合物29合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10b。得白色固体58.7mg，收率81.9％。MS-ESI(m/z):553.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.42(s,1H),8.82(s,1H),8.60(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.79–7.75(m,2H),7.69–7.63(m,3H),7.43–7.38(m,2H),7.28(d,J＝8.5Hz,2H),7.15(dd,J＝8.9、2.5Hz,1H),6.53(d,J＝1.0Hz,1H),3.84(s,3H),3.60(s,2H),2.36(d,J＝0.9Hz,3H)。
实施例30 2-(4-(3-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)苯基)-N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)乙酰胺(化合物30)
Figure BDA0002470808370000332
化合物30合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10c。得白色固体61.6mg，收率81.8％。MS-ESI(m/z):595.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),10.04(s,1H),8.80(s,1H),8.60(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.80–7.74(m,2H),7.68–7.63(m,3H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),7.15(dd,J＝8.9、2.5Hz,1H),6.05(s,1H),3.84(s,3H),3.61(s,2H),1.25(s,9H)。
实施例31 N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)-2-(4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯基)乙酰胺(化合物31)
Figure BDA0002470808370000333
化合物31合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10d。得略带红色固体55.7g，收率77.5％。MS-ESI(m/z):553.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),10.03(s,1H),8.82(s,1H),8.60(s,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.80–7.75(m,2H),7.69–7.63(m,3H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),7.29(d,J＝8.5Hz,2H),7.15(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),5.95(s,1H),3.84(s,3H),3.60(s,2H),2.16(s,3H)。
实施例32 4-(3-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)脲基)-N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)苯甲酰胺(化合物32)
Figure BDA0002470808370000341
化合物32合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10e。得白色固体32.6mg，收率41.9％。MS-ESI(m/z):581.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.63(s,1H),9.12(s,1H),8.64(s,1H),8.01–7.94(m,2H),7.92–7.76(m,5H),7.68(d,J＝2.5Hz,1H),7.65–7.57(m,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),6.54(s,1H),3.84(s,3H),1.31(s,9H)。
实施例33 N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)-4-(3-(5-甲基异噁唑-3-基)脲基)苯甲酰胺(化合物33)
Figure BDA0002470808370000342
化合物33合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10f。得略带红色固体14.0g，收率19.6％。MS-ESI(m/z):539.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.19(s,1H),9.61(s,1H),9.22(s,1H),8.64(s,1H),7.99–7.94(m,2H),7.91–7.79(m,5H),7.68(d,J＝2.5Hz,1H),7.64–7.58(m,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),6.58(d,J＝1.1Hz,1H),3.84(s,3H),2.38(d,J＝0.9Hz,3H)。
实施例34 4-(3-(3-(叔丁基)异噁唑-5-基)脲基)-N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)苯甲酰胺(化合物34)
Figure BDA0002470808370000351
化合物34合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10g。得浅橙色色固体23.1mg，收率31.2％。MS-ESI(m/z):581.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(d,J＝8.1Hz,2H),9.16(s,1H),8.64(s,1H),8.00–7.94(m,2H),7.89(d,J＝8.9Hz,1H),7.87–7.80(m,4H),7.68(d,J＝2.5Hz,1H),7.65–7.60(m,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.11(s,1H),3.84(s,3H),1.27(s,9H)。
实施例35 N-(4-(7-甲氧基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)-4-(3-(3-甲基异噁唑-5-基)脲基)苯甲酰胺(化合物35)
Figure BDA0002470808370000352
化合物35合成参照化合物12，原料用量的摩尔数相同，区别在于将中间体5a替换为中间体5c，中间体10a替换为中间体10h。得浅橙色色固体44.6g，收率51.5％。MS-ESI(m/z):539.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(d,J＝2.4Hz,2H),9.19(s,1H),8.64(s,1H),7.97(d,J＝8.5Hz,2H),7.89(d,J＝8.9Hz,1H),7.83(d,J＝2.2Hz,4H),7.68(d,J＝2.5Hz,1H),7.62(d,J＝8.7Hz,2H),7.16(dd,J＝8.9,2.6Hz,1H),6.01(s,1H),3.84(s,3H),2.18(s,3H)。
实施例36 3-((5-(叔丁基)异噁唑-3-基)氨基)-4-((4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮(化合物36)
Figure BDA0002470808370000353
将3-氨基-5-叔丁基异唑(70.1mg，0.50mmol)溶于无水四氢呋喃(3ml)中，加入碳酸钾(89.8mg，0.65mmol)，搅拌下加入方酸二乙酯(93.6mg，0.55mmol)，室温搅拌反应12h。过滤，滤饼用无水四氢呋喃洗涤，滤饼35℃真空干燥4h，得白色固体中间体13(65.2mg，49.3％)。将5a(78.9mg，0.20mmol)和中间体11(58.1mg，0.22mmol)混悬于异丙醇(i-PrOH，2mL)中，将体系于85℃微波反应搅拌6h。过滤，滤饼于40℃真空干燥3h，得黄色固体化合物36(23.5mg，19.2％)。MS-ESI(m/z):613.4[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.98(s,1H),10.06(s,1H),8.66(s,1H),7.86(dd,J＝11.9,8.5Hz,3H),7.70(d,J＝2.1Hz,1H),7.52(d,J＝8.3Hz,2H),7.17(d,J＝7.9Hz,1H),6.64(s,1H),4.17(t,J＝5.6Hz,2H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.74(t,J＝5.8Hz,2H),1.32(s,9H)。
实施例37 N-环丙基-N-(4-(7-(2-吗啉基)乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物37)
Figure BDA0002470808370000361
将中间体12(50.5mg，0.10mmol)和对甲氧基苯胺(12.3mg，0.10mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF，1.5mL)中，再加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU，43.6mg，0.11mmol)，将体系于0℃搅拌10min，加入N，N-二乙基丙胺(DIPEA，27.6mg，0.21mmol)，将体系于室温搅拌过夜。将反应液滴加到0.25mmol/L的NaOH(15mL)水溶液中，EtOAc(15mL×3)萃取三次，水相用饱和NaCl水溶液(10mL×5)洗涤五次，有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，减压浓缩。残余物DCM：MeOH＝10：1混合溶剂复溶，爬大板(展开剂：DCM：MeOH＝10：1)得淡黄色固体化合物37(33.5mg,54.76％)。MS-ESI(m/z):612.3[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.22(s,1H),9.84(s,1H),8.63(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.82–7.76(m,2H),7.69(dd,J＝5.7,3.0Hz,3H),7.55–7.49(m,2H),7.16(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.92–6.86(m,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.73(s,3H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),1.48(s,4H).
实施例38 N-(4-氟苯基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物38)
Figure BDA0002470808370000362
化合物38合成参照化合物37，原料用量的摩尔数相同，区别在于将对甲氧基苯胺替换为对氟苯胺。得淡黄色固体62.4mg，收率69.1％。MS-ESI(m/z):600.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.21(s,1H),9.88(s,1H),8.63(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.81–7.75(m,2H),7.68(dd,J＝5.7,3.0Hz,3H),7.60–7.53(m,2H),7.23(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.94–6.87(m,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),1.82(t,J＝4.7Hz,2H),1.51(t,J＝5.7Hz,2H)。
实施例39 1-(吗啉-4-羰基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)环丙烷-1-甲酰胺(化合物39)
Figure BDA0002470808370000371
化合物39合成参照化合物37，原料用量的摩尔数相同，区别在于将对甲氧基苯胺替换为吗啉。得淡黄色色固体40.2mg，收率46.9％。MS-ESI(m/z):576.3[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.69(s,1H),8.63(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(d,J＝8.5Hz,2H),7.59–7.50(m,3H),7.18(dd,J＝8.9,2.5Hz,1H),4.21(t,J＝5.7Hz,2H),3.67–3.44(m,12H),2.80–2.70(m,2H),1.39(q,J＝4.1Hz,2H),1.24(d,J＝3.2Hz,2H)。
实施例40 N-(4-(叔丁基)苯基)-N-(4-(7-(2-吗啉代乙氧基)苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-基)苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺(化合物40)
Figure BDA0002470808370000372
化合物40合成参照化合物37，原料用量的摩尔数相同，区别在于将对甲氧基苯胺替换为4-叔丁基苯胺。得淡黄色色固体44.5mg，收率45.1％。MS-ESI(m/z):638.3[M+H]+。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),9.94(s,1H),8.63(s,1H),7.86(d,J＝8.9Hz,1H),7.78–7.74(m,2H),7.69(dd,J＝5.7,3.0Hz,3H),7.56–7.50(m,2H),7.16(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.95–6.88(m,2H),4.19(t,J＝5.7Hz,2H),3.59(t,J＝4.7Hz,4H),2.73(t,J＝5.7Hz,2H),1.76(t,J＝4.7Hz,2H),1.43(t,J＝5.7Hz,2H),1.33(s,9H)。
实施例41 化合物活性的验证
1.激酶反应
(1)配制1×Kinase buffer。
(2)化合物的配制：配制受试化合物测试浓度为500nM，复孔检测。在384孔板中稀释成100倍终浓度的100％DMSO溶液。使用分液器Echo 550向目的板OptiPlate-384F转移250nL 100倍终浓度的化合物。阴性对照孔和阳性对照孔中分别加250nl的100％DMSO。
(3)用1×Kinase buffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μL的1×Kinase buffer。
(5)对384孔板进行离心，离心条件为1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)用1×Kinase buffer配制25倍终浓度的ATP和15倍终浓度的ATP和Kinasesubstrate 2，混合得到混合溶液。
(7)加入15μL的25/15倍(问题同上)终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)对384孔板进行离心，离心条件为1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育40min。
(9)加入30μL终止检测液停止激酶反应，对384孔板进行离心，离心条件为1000rpm离心30秒，振荡混匀。
(10)用Caliper EZ Reader读取转化率。
计算公式：
Inhibition％＝(Conversion％max-Conversion％sample)/(Conversion％max-Conversion％min)×100，其中Conversion％max表示阳性对照孔转化率读数，Conversion％sample表示样品转化率读数，Conversion％min表示阴性对照孔转化率读数。
(11)拟合量效曲线
以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC 50值。
拟合公式为：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
2.MV4-11细胞增殖抑制活性评价
(1)实验仪器：
电热恒温水浴锅(精宏设备，型号：DK-8D)、灭菌锅(ZEALWAY，型号：GI54DWS)、显微镜(Nikon，型号：ECLIPSE TS100-F)、酶标仪(Bio Tek Epoch，型号：VT05404-0998)、离心机(卢湘仪，型号：TDZ4-WS)、CO2培养箱(Thermo Fisher Scientific，型号：3111)、移液枪(Eppendorf)、电子天平、超净工作台、超低温电冰箱。
(2)实验材料：
①细胞株：人髓性单核白血病细胞MV4-11(目录号：SCSP-5031)购自中国科学院上海干细胞库。
②试剂及耗材：IMDM培养基(with L-glutamine)
Figure BDA0002470808370000391
胎牛血清(四季青)、青霉素与链霉素溶液(Solarbio)、0.25％胰蛋白酶(含EDTA,Solarbio)、磷酸盐缓冲液(PBS，Solarbio)、DMSO(Sigma)、Cell Counting Kit-8
Figure BDA0002470808370000392
细胞培养瓶、离心管、吸管、枪头、96孔板等实验耗材购自NEST生物。
③MV4-11细胞培养基(以100mL为例)：IMDM基础培养基89mL+胎牛血清10mL+青霉素链霉素溶液1mL。
(3)实验步骤：
①细胞复苏：从液氮中取出细胞冻存管，迅速放入37℃恒温水浴锅中，不断摇晃使其快速解冻。将细胞悬液加入含5倍体积细胞培养基的离心管中，混匀，转速800rpm离心5min。小心弃去上清，加入5mL配制的完全培养基，轻轻吹匀后加至无菌T25培养瓶中，在37℃，5％CO2条件下培养。
②细胞传代：在显微镜下观察细胞生长情况，当培养72h后使用半换液法进行传代培养。向细胞悬浮液中加入5mL新鲜培养基，混匀后，取5mL加入新的T25培养瓶中，在培养箱中培养。
③接种细胞：取对数生长期的细胞，计数。调整细胞悬液的密度为3×105个/mL，取每孔50μL细胞悬液接种到96孔板中，并设置空白对照孔。
④加药：加入稀释成不同浓度的含药培养基，每孔50μL，并设置阴性对照孔，在37℃，5％CO2条件下培养72小时。
⑤细胞显色：每孔加入10μL CCK-8溶液，在培养箱中孵育4小时。
⑥吸光值读取：充分振荡后用酶标仪在450nM波长下读取吸光值。
⑦抑制率计算：利用GraphPad Prism 5软件计算抑制率，计算公式：细胞生长抑制率％＝(1-(实验孔吸光值-空白孔吸光值)/(阴性对照孔吸光值-空白孔吸光值))×100％。
表2化合物激酶和细胞活性数据
化合物 FLT3-ITD的IC<sub>50</sub>(nM) MV4-11的IC<sub>50</sub>(nM)
Quizartinib 6.51 0.836
1 94.67 50.81
2 5.60 0.176
3 157.05 33.09
4 8.25 0.782
5 82.56 39.94
6 6.83 0.614
续表2
化合物 FLT3-ITD的IC50(nM) MV4-11的IC50(nM)
Quizartinib 6.51 0.836
7 109.21 88.72
8 18.31 1.632
9 154.02 110.5
10 20.52 1.967
11 223.06 280.3
12 360.46 243.2
13 356.83 232.8
14 362.88 169.2
15 442.29 >500
16 305.43 300.2
17 427.76 350.9
18 319.96 192.8
19 403.53 138.6
20 256.90 400.1
21 306.56 >500
22 298.08 193.6
23 308.38 199.5
24 338.66 203.9
25 326.54 225.7
26 342.29 260.2
27 404.14 318.2
28 486.50 400.8
29 473.18 299.8
30 459.86 143.5
31 458.64 300.1
32 377.49 310.5
33 432.60 186.2
34 435.03 268.7
35 429.58 333.2
36 239.93 145.3
37 283.12 150.4
38 300.04 119.3
39 298.36 120.3
40 278.52 105.1
Quizartinib自Selleckchem公司购得(货号：S1526，批号：S152601)目前FLT3抑制剂主要用于白血病等血液疾病，尤其是急性髓细胞性白血病等恶性肿瘤的治疗，本发明化合物已显示出较强的体外活性。从以上表2可以看出，本发明的化合物(化合物2、4、6、8和10)对FLT3-ITD激酶的IC50值较低，特别是化合物2的IC50值为5.60nM，略优于阳性对照Quizartinib，Quizartinib对FLT3-ITD激酶的IC50值为6.51nM。且上述5个化合物在MV4-11细胞的IC50值均小于2nM，特别是化合物2对MV4-11细胞的IC50值仅为0.176nM，明显优于阳性对照Quizartinib，Quizartinib为0.836nM。因此，本发明的化合物呈现很好的FLT3的抑制活性，可以被用作FLT3的抑制剂。
实施例42 使用人体肝脏微粒体进行化合物稳定性的评价
将实施例1～40中的化合物的肝微粒体酶稳定性与Quizartinib进行比较。
测定系统：实施例1～40中的化合物的代谢稳定性利用由男女混合的肝脏微粒体用1mM NADPH进行试验。样品使用质谱仪进行分析。将HRMS用于确定峰面积响应比率(对应于试验化合物或对照物的峰面积除以分析内标的峰面积)而不运行标准曲线。为了检测到所有的可能代谢物，在适当的m/z范围内进行HRMS扫描。
测定条件：该测定用一次孵育(N＝1)进行。将试验化合物在37℃下在含有0.5毫克/毫升肝脏微粒体蛋白的缓冲液中孵育。通过加入辅因子引发反应，并于0、2、4、8、16、24、36、48小时取样，平行孵育阳性对照物(5μM睾丸素)并于0、2、4、8、16、24、36、48小时取样。
测定质量控制：平行进行对照化合物睾丸素以证实(肝脏)微粒体的酶活性。最终时间点后，利用荧光测定法来确认NADPH添加到反应混合物中。对照物的T1/2满足可接受的内标。
分析方法：
液相色谱柱：Thermo BDS Hypersil C18 30X2.0mm，3μm，具有保护柱M.P.，缓冲液：25mM甲酸接缓冲液，pH 3.5；
水相(A)：90％水，10％缓冲液；
有机相(B)：90％乙腈，10％缓冲液；
流速：300微升/分钟
自动进样器：注射体积10微升
梯度程序参见表3。
表3梯度程序
时间(分钟) ％A ％B
0.0 100 0
续表3
1.5 0 100
2.0 0 100
2.1 100 0
3.5 100 0
通过使用人体肝微粒体，如本发明中所述实施例2表现出大于35小时的代谢半衰期，实施例4和6表现出介于26-35小时的代谢半衰期，显著大于Quizartinib的18小时的代谢半衰期。结果显示，本实例化合物的代谢稳定性比Quizartinib有所提高，相对较长的代谢半衰期使得它们具有降低医疗剂量和扩大给药时间间隔的潜能。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (6)

1.一种苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物及其药学可接受的盐，其特征在于，所述类似物的结构式如下所示；
Figure FDA0003115391730000011
2.根据权利要求1所述的苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物及其药学可接受的盐，其特征在于，所述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物的药学可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；有机盐为甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。
3.一种组合物，其特征在于，含有权利要求1～2任一项所述的苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物及其药学可接受的盐，还含有至少一种药学可接受的赋形剂、载体和/或稀释剂。
4.权利要求1～2任一项所述的苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物及其药学可接受的盐在配制制剂中的应用，其特征在于，所述制剂包括用于口服给药的固体制剂、用于口服给药的液体制剂、用于胃肠外注射的制剂、用于局部给药的制剂这四类。
5.一种用作FLT3抑制剂的药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1～2任一项所述中所述的苯并咪唑并[2，1-b]噻唑类似物及其药学可接受的盐。
6.权利要求1～2任一项所述苯并咪唑并[2,1-b]噻唑类似物及其药学可接受的盐在制备用于治疗白血病或实体瘤的药物中应用。
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