CN111358847A - 一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素（aabndl）及其制备方法与应用 - Google Patents

一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素（aabndl）及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111358847A
CN111358847A CN202010169565.8A CN202010169565A CN111358847A CN 111358847 A CN111358847 A CN 111358847A CN 202010169565 A CN202010169565 A CN 202010169565A CN 111358847 A CN111358847 A CN 111358847A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chinese medicine
traditional chinese
micron
lactein
lactobacillus salivarius
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010169565.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111358847B (zh
Inventor
孙筱霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Baifang Yisheng Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
Beijing Anjieyou Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Anjieyou Technology Co ltd filed Critical Beijing Anjieyou Technology Co ltd
Priority to CN202010169565.8A priority Critical patent/CN111358847B/zh
Publication of CN111358847A publication Critical patent/CN111358847A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111358847B publication Critical patent/CN111358847B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A61K36/234—Cnidium (snowparsley)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/27—Asclepiadaceae (Milkweed family), e.g. hoya
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/489—Sophora, e.g. necklacepod or mamani
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/75—Rutaceae (Rue family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/005—Antimicrobial preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/17—Preparation or pretreatment of starting material involving drying, e.g. sun-drying or wilting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/75—Anti-irritant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(AABNDL)及其制备方法与应用。所述AABNDL的制备方法包括下述步骤：1)在真空干燥的条件下，将中药组合物于120‑180℃加热，使其脱水并碳化；所述中药组合物由下述质量份的药材组成：蛇床子1份、地肤子1份、苦参1份、白鲜皮1份和徐长卿1份；2)将碳化后的中药组合物先进行粗粉碎，再进行超微粉碎至10μm以下，得到微米中药；3)将所述纳米中药分散于水中形成分散液，然后向所述分散液中接种唾液乳杆菌进行发酵，收集发酵液，所述发酵液即纳米中药乳酸菌素。药效试验表明，本发明提供的液态或固态的AABNDL均具有优异抗菌和抗过敏的功效。

Description

一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(AABNDL)及其制备方法与 应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(AABNDL)及其制备方法与应用。
背景技术
微米中药是指能保持中药固有药效学物质基础的、粒度为微米级的新型中药。微米中药包括微米中药材、中药微米提取物和微米中药制剂。将微米技术引入中药制造领域，可改变传统中药“粗、黑、大”的面貌，使之成为质量温度可控、疗效可靠、制剂精良的现代化中药。
微米中药最大的优势是大大地提高了药物的吸收和生物利用度。从药物学来说，药物的溶出速度与药物的颗粒比表面积成正相关，而比表面积与粒径成反比。因此药物的粒径越细，则其比表面积越大，越有助于药物有效成分的溶出。微米中药藉其颗粒达到超细粉末的水平，其比表面积显著增加，药物有效成分在胃肠道的溶解度明显增加，从而增加药物的生物利用度，并加快药物起效时间。
微生物发酵法的生产工艺技术主要是通过对微生物进行大规模的生长培养，使底物发生物转化和化学变化，从而产生和积累大量人们发酵所需要的代谢产物的过程。中药经过发酵后，可以提高中药药效、消除中药毒副作用、改变中药药性。
因此，将两种技术结合对促进中医药发展具有里程碑的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(AABNDL)。
本发明所提供的抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素是按照包括下述步骤的方法制备得到的：
一、中药微米化
1)在真空干燥的条件下，将中药组合物于120-180℃加热，使其脱水并碳化；
所述中药组合物由下述质量份的药材组成：蛇床子1份、地肤子1份、苦参1份、白鲜皮1份和徐长卿1份；
2)将碳化后的中药组合物先进行粗粉碎，再进行超微粉碎至10μm以下，得到微米中药；
二、发酵
3)将所述微米中药分散于水中形成分散液，然后向所述分散液中接种唾液乳杆菌进行发酵，收集发酵液。所述发酵液即为纳米中药乳酸菌素。
上述方法步骤1)中，所述加热过程可在电阻加热真空干燥设备中进行。所述加热的温度优选130℃-140℃。
上述方法步骤2)中，所述的超微粉碎的条件为：粉碎温度20-40℃，粉碎压力10-15Mpa，气流速度300-400m/s，粉碎的时间1-2h；具体的粉碎条件为：粉碎温度25℃，粉碎压力12Mpa，气流速度350m/s，粉碎的时间1.5h。
上述方法步骤3)中，所述微米中药与水的质量比为1:4-5，具体质量比可为1:4。
上述方法步骤3)中，所述唾液乳杆菌是唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)LJ，该菌株已于2016年08月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.12857。
本发明中所述的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)LJ CGMCC No.12857简称唾液乳杆菌LJ。
所述唾液乳杆菌以唾液乳杆菌菌液的形式接种；所述唾液乳杆菌菌液中唾液乳杆菌的浓度为1.6×109cfu/mL。
所述发酵培养的条件：42℃培养24h。
所述唾液乳杆菌菌液的接种量为所述分散液体积分数的5-10％。
所述唾液乳杆菌菌液的制备方法如下：将唾液乳杆菌接种至乳酸菌培养基中进行培养，获得菌液；
其中，所述乳酸菌培养基可为MRS液体培养基。所述MRS液体培养基的制备方法具体可如下：将蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、柠檬酸氢二铵2.00g、乙酸钠5.00g、葡萄糖20.00g、吐温-80 1mL、磷酸氢二钾2.00g、硫酸镁0.58g和硫酸锰0.28g溶于1L蒸馏水，调节pH值至6.4；然后121℃灭菌15min。所述培养可置于二氧化碳培养箱进行，培养条件为可为：42℃静置培养24h。
本发明还提供了上述微米中药乳酸菌素的应用。
本发明所提供的微米中药乳酸菌素的应用包括下述至少一方面：
1)在制备抑菌产品中的应用；
2)在制备抗皮肤过敏产品中的应用；
所述皮肤过敏可由下述至少一种疾病引起：湿疹、皮肤过敏、皮肤瘙痒、口唇炎等。
所述产品可为药物和/或保健品和/或化妆品。
本发明还保护一种具有抑菌和/或抗过敏的产品。
所述产品的活性成分包括本发明所提供的微米中药乳酸菌素或含所述微米中药乳酸菌素的发酵液。
所述产品可为药物和/或保健品和/或化妆品。
本发明所述药物包括口服和体外应用。
需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
所述药物可以制成悬浮剂、粉剂、片剂、颗粒剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
本发明所述化妆品还包含化妆品中常用的成分，其包括但不限于活性成分、稀释剂、载体、表面活性剂和辅料等本领域已知的任何成分，这些是本领域技术人员已知的，且可根据需要具体选择其类型和用量。
所述活性成分还可包括除了本发明所述微米中药乳酸菌素外的，其它本领域已知和常用的任何活性物质，其中包括例如润肤剂、保湿剂、皮肤调理剂等。
所述化妆品不限定形态，例如，可以制成霜剂、乳剂、精华水、凝胶剂以及面膜、眼膜等的形式。上述各种形式的化妆品可通过本领域已知的任何合适的方法进行制备。
药效试验表明，本发明提供的液态或固态的微米中药乳酸菌素(AABNDL)均具有优异抗菌和抗过敏的功效。
本发明具有如下有益效果：
本发明将中药成分破碎混合后，再经过唾液乳杆菌LJ发酵，使得中药有效成分进行体外转化，其化学成分在组成和含量上发生了变化。与现有纯中药组分相比，采用本发明方法制备的产品其从抗菌和抗过敏的活性均有显著的提高。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中所用的蛇床子、地肤子、苦参、白鲜皮和徐长卿均符合《中国药典》(2015年版)一部正文各药材项下的有关规定。投料前，通过鉴定，各味药材实物与名称相符，质量符合标准。
下述实施例中所使用的药材均为净制后的药材。
MRS液体培养基：将蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、柠檬酸氢二铵2.00g、乙酸钠5.00g、葡萄糖20.00g、吐温-80 1mL、磷酸氢二钾2.00g、硫酸镁0.58g和硫酸锰0.28g溶于1L蒸馏水，调节pH值至6.4；然后121℃灭菌15min。
MRS固体培养基：将蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、柠檬酸氢二铵2.00g、乙酸钠5.00g、葡萄糖20.00g、吐温-80 1mL、磷酸氢二钾2.00g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.28g和琼脂15.00g溶于1L蒸馏水，调节pH值至6.4；然后121℃灭菌15min。
下述实施例中所使用的唾液乳杆菌是唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)LJ，该菌株已于2016年08月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.12857。
对比例1中使用的植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228，该菌株已于2016年08月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.12881。
对比例2中使用的唾液乳杆菌是唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)JCM 1231，其保藏编号为CGMCC1.1881。
实施例1、制备抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素
一、中药微米化
1)取净制后的蛇床子、地肤子、苦参、白鲜皮和徐长卿各100g，混合均匀。采用电阻加热真空干燥设备在150℃加热上述中药组合物使其脱水并全部碳化；
2)将碳化后的中药组合物用球磨机粉碎成粗粉，通过气流式超微粉碎机将粗粉粉碎至10μm以下，得到微米中药；其中，超微粉碎的条件为：粉碎温度25℃，粉碎压力12Mpa，气流速度350m/s，粉碎的时间1.5h。
二、发酵
3)将唾液乳杆菌LJ的单菌落接种于装有10mL MRS液体培养基的试管中，然后置于二氧化碳培养箱。42℃静置培养24h后，得到唾液乳杆菌LJ的菌液(唾液乳杆菌的浓度为1.6×109cfu/mL)。
将步骤2)得到的纳米中药以质量比20％的比例分散于水中形成分散液，然后向分散液中接入体积分数10％的唾液乳杆菌LJ的菌液，42℃静置培养24h后，获得发酵液，所述发酵液即为含微米中药乳酸菌素的发酵液。
对比例1、采用植物乳杆菌作为发酵菌制备纳米中药乳酸菌素
基本方法同实施例1，区别在于将其中的唾液乳杆菌LJ替换成植物乳杆菌Rs0228。
对比例2、采用其它唾液乳杆菌作为发酵菌制备纳米中药乳酸菌素
基本方法同实施例1，区别在于将其中的唾液乳杆菌LJ替换成唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)JCM 1231，其保藏编号为CGMCC1.1881。
实施例2、体外抑菌试验
体外抑菌试验所应用的方法为药敏纸片琼脂扩散法。取0.5麦氏浊度的大肠杆菌通过无菌接种环均匀涂抹在M-H平板上，在平板上用无菌镊子放置4片无菌小纸片，使其保持10min静置。利用加样枪对左边3个无菌小纸片实行微米中药乳酸素10μL加注，1片加蒸馏水。在培养箱中对其进行培养，培养时间为24h，培养箱的温度为37℃。培养完成后利用游标卡尺将抑菌圈的直径测量出来并计算平均值。
观察指标：
抑菌圈在10mm以下的判定为不敏感；抑菌圈在10～19mm之间的判定为中度敏感；抑菌圈在20mm以上的判定为高度敏感。
本次研究数据借助于SPSS 19.0进行总汇处理，用(平均值±标准差)来代表计量资料，行t检验；P<0.05为差异有统计学意义。
结果表明，实施例1制备的微米中药乳酸素的平均抑菌圈为15.4，为中等抑菌作用；对比例1制备的微米中药乳酸素的平均抑菌圈为12.5，为中等抑菌作用。对比例2制备的微米中药乳酸素的平均抑菌圈为13.1，为中等抑菌作用。
实施例3、抗过敏效果评价
1、肥大细胞脱颗粒抑制实验
肥大细胞受到抗原刺激后脱颗粒是过敏反应的重要过程,对脱颗粒的抑制能力是评价抗过敏药物的重要因素。
用实施例1制备的含微米中药乳酸菌素的发酵液进行体外对肥大细胞脱颗检测，中药发酵液对肥大细胞脱颗粒具有明显的抑制作用。
具体试验方法如下：
1.肥大细胞培养：细胞培养用含10％FBS的DMEM培养基，于37℃，5％CO2，饱和湿度培养箱中对RBL-2H3细胞进行传代培养。当细胞长满约80％培养瓶底面积时可进行传代，传代比例为1:3，2～3d传代1次。
2.甲苯胺蓝染色法测定脱颗粒率：将细胞接种至预置有盖玻片的6孔培养板制备细胞爬片。过夜，待细胞贴壁后弃去培养液。试验分空白对照组(纯水)、阳性对照组(0.5mol/L佛波酯PMA)、实验组1(PMA+1mol/L实施例1微米中药乳酸素)、实验组2(PMA+10mol/L实施例1微米中药乳酸素)，共4组。分组换液后，继续培养1h。弃上清，盖玻片用台氏液(135mmol/LNaCl，5mmol/L KCl，5.6mmol/L葡萄糖，1.8mmol/L CaCl2，1mmol/L，MgCl2，20mmol/L HEPES，0.1％BSA)冲洗2～3次。每孔里入500μl甲苯胺蓝染液，染色3min，PBS洗3遍。待玻片干燥后，用中性树胶封片，于Olympus正置导RBL-2H3细胞脱颗粒。显微镜油镜下观察细胞内颗粒并拍照。100个细胞中胞质脱颗粒细胞数被作为脱颗粒率。
表1、不同组别细胞脱颗粒率
组别 脱颗粒率
空白对照 16.12±1.50
阳性对照 41.35±4.16
实验组1 32.46±2.13
实验组2 27.72±3.59
注：与阳性对照P<0.01。
由表1可知，微米中药乳酸素实验组与阳性对照组(PMA)显示其对肥大细胞脱颗粒有极显著的抑制作用(P＜0.01)。综上所述，微米中药乳酸素从药效学实验证明其具有良好的抗敏功效。
2、小鼠刺激性皮炎模型实验
应用二甲苯涂小鼠耳部建立刺激性皮炎模型，对制备的含微米中药乳酸菌素的发酵液进行抗皮炎评价。
取40只小鼠，随机分纳米中药乳酸菌素组、对比例1组、对比例2组、空白对照组和氢化可的松阳性对照组，每组8只。游标卡尺测量各组小鼠耳廓厚度，作为致炎前的耳厚度。给3组小鼠分别取0.1ml二甲苯涂于各鼠右耳前后两面致炎。致炎0.5小时、1小时、2小时后分别用相同体积药物(2ml)(微米中药乳酸素浓度为30％、对比例1的浓度为30％、对比例2的浓度为30％)在右耳均匀涂抹，对照组同时用蒸馏水涂抹，氢化可的松阳性组涂抹量为与微米中药乳酸素相同，4小时后用游标卡尺测量致炎耳廓厚度，计算炎症肿胀度和肿胀抑制率。
炎症肿胀度＝致炎4小时耳厚度-致炎前耳厚度。
肿胀抑制度＝(空白对照组肿胀度-给药组肿胀度)/空白对照组肿胀度*100％。
表2、含微米中药乳酸菌素的发酵液对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n＝8)
组别 小鼠(只) 耳廓肿胀度(mm) 肿胀抑制率(％)
空白对照 8 0.043±0.013 ——
阳性对照 8 0.023±0.005 46.51
实施例1组 8 0.024±0.006 44.19
对比例1组 8 0.033±0.011 23.25
对比例2组 8 0.030±0.008 30.23
3、自愿者人体实验
通过对40名自愿者(15位皮肤湿疹、20位面部过敏、5位口唇炎患者)进行1个星期的试用效果观察，纳米中药乳酸菌素组的总体有效率达100％，全愈率达62.5％。
皮肤湿疹的测试方法：
选取患有皮肤湿疹的志愿者15人，年龄在15-40岁之间，男性7人，女8人。参照《现代皮肤病性病学》的标准，入选志愿者的皮肤湿疹符合急性、亚急性或慢性湿疹的诊断：
(1)急性湿疹：瘙痒显著，有渗出倾向，易复发；皮损以红斑、丘疮疹、水疤、糜烂为主；
(2)亚急性湿疹：以小丘疹、鳞屑、结痂为主，仅有少数丘疱疹、水疤、轻度浸润；
(3)慢性湿疹：以皮肤增厚、粗糙、苔鲜样变为主。
将20％的微米中药乳酸素，加入保湿剂等制备成乳膏，志愿者每天早中晚各涂抹患处一次，并轻轻揉搓几分钟，连续不间断使用1周，根据治疗效果判定疗效并进行比较。
判定的疗效标准按4级疗效标准评定，分别是痊愈、显效、有效和无效，具体标准如下：
(1)痊愈：皮损全部消退，瘙痒症状消失，总疗效率≥90％；
(2)显效：皮损大部分消退，瘙痒明显减轻，60％≤总疗效率＜90％；
(3)有效：皮损部分消退，瘙痒症状有所改善，20％≤总疗效率＜60％；
(4)无效：皮损消退不明显，瘙痒未见减轻，或临床症状反见恶化，总疗效率＜20％。
面部过敏的测试方法：
选取患有皮肤湿疹的志愿者20人，年龄在20-55岁之间，男性8人，女12人。参照《现代皮肤病性病学》的标准，对治疗前后皮肤红肿、发痒、风团、脱皮等症状进行观察。
志愿者每天早中晚各用含有20％微米中药乳酸素的乳膏涂抹患处一次，并轻轻揉搓几分钟，连续不间断使用1周，根据治疗效果判定疗效并进行比较。
判定的疗效标准按4级疗效标准评定，分别是痊愈、显效、有效和无效，具体标准如下：
(1)痊愈：临床症状全部消失，且停药观察一周未见复发。
(2)显效：临床症状明显减轻。
(3)有效：临床症状减轻。
(4)无效：临床症状无明显好转或加重。
口唇炎患者的测试方法：
选取患有口唇炎的志愿者5人，年龄在20-40岁之间，男性1人，女4人。参照《现代皮肤病性病学》的标准，对治疗前后嘴唇干燥、皲裂、脱屑、糜烂等症状进行观察。
志愿者每天早中晚各用含有20％微米中药乳酸素的乳膏涂抹患处一次，并轻轻揉搓几分钟，连续不间断使用1周，根据治疗效果判定疗效并进行比较。
判定的疗效标准按4级疗效标准评定，分别是痊愈、显效、有效和无效，具体标准如下：
(1)痊愈：临床症状全部消失，且停药观察一周未见复发。
(2)显效：临床症状明显减轻。
(3)有效：临床症状减轻。
(4)无效：临床症状无明显好转或加重。
表3自愿者测试结果
过敏种类 有效 全愈
皮肤湿疹 15/15(100％) 8/15(53.3％)
面部过敏 20/20(100％) 12/20(60％)
口唇炎 5/5(100％) 5/5(100％)
合计 40/40(100％) 25/40(62.5％)

Claims (10)

1.一种制备微米中药乳酸菌素的方法，包括下述步骤：
1)在真空干燥的条件下，将中药组合物于120-180℃加热，使其脱水并碳化；
所述中药组合物由下述质量份的药材组成：蛇床子1份、地肤子1份、苦参1份、白鲜皮1份和徐长卿1份；
2)将碳化后的中药组合物先进行粗粉碎，再进行超微粉碎至10μm以下，得到微米中药；
3)将所述微米中药分散于水中形成分散液，然后向所述分散液中接种唾液乳杆菌进行发酵，收集发酵液，所述发酵液即微米中药乳酸菌素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述加热的温度为130℃-140℃。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述加热过程在电阻加热真空干燥设备中进行。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述的超微粉碎的条件为：粉碎温度20-40℃，粉碎压力10-15Mpa，气流速度300-400m/s，粉碎的时间1-2h。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述微米中药与水的质量为1:4-5；
所述唾液乳杆菌是唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)LJ，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12857。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述唾液乳杆菌以唾液乳杆菌菌液的形式接种；所述唾液乳杆菌菌液中唾液乳杆菌的浓度为1.6×109cfu/mL；
所述唾液乳杆菌菌液的接种量为所述分散液体积分数的5-10％；
所述发酵培养的条件：42℃培养24h。
7.权利要求1-6中任一项所述方法制备得到微米中药乳酸菌素。
8.权利要求7所述微米中药乳酸菌素在下述至少一方面的应用：
1)在制备抑菌产品中的应用；
2)在制备抗皮肤过敏产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述皮肤过敏包括湿疹、面部过敏、口唇炎；
所述产品为药物和/或保健品和/或化妆品。
10.一种具有抑菌和/或抗皮肤过敏的产品，其活性成分包括权利要求7所述的微米中药乳酸菌素。
CN202010169565.8A 2020-03-12 2020-03-12 一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(aabndl)及其制备方法与应用 Active CN111358847B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010169565.8A CN111358847B (zh) 2020-03-12 2020-03-12 一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(aabndl)及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010169565.8A CN111358847B (zh) 2020-03-12 2020-03-12 一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(aabndl)及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111358847A true CN111358847A (zh) 2020-07-03
CN111358847B CN111358847B (zh) 2022-04-08

Family

ID=71198496

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010169565.8A Active CN111358847B (zh) 2020-03-12 2020-03-12 一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(aabndl)及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111358847B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116747251A (zh) * 2023-05-11 2023-09-15 遵义医科大学 一种治疗湿疹的中药复方巴布剂及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101015672A (zh) * 2006-08-18 2007-08-15 陈培生 治疗艾滋病中药生物制剂的制作方法
CN106399197A (zh) * 2016-10-28 2017-02-15 中国人民解放军疾病预防控制所 一株唾液乳杆菌及其用途
CN108451889A (zh) * 2018-06-21 2018-08-28 佛山汇沐化学科技有限公司 一种益生菌抗过敏修复霜

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101015672A (zh) * 2006-08-18 2007-08-15 陈培生 治疗艾滋病中药生物制剂的制作方法
CN106399197A (zh) * 2016-10-28 2017-02-15 中国人民解放军疾病预防控制所 一株唾液乳杆菌及其用途
CN108451889A (zh) * 2018-06-21 2018-08-28 佛山汇沐化学科技有限公司 一种益生菌抗过敏修复霜

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何辉余: "徐长卿的临床运用", 《中国民族民间医药》 *
张超云等: "《药剂学》", 30 November 2013, 辽宁大学出版社 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116747251A (zh) * 2023-05-11 2023-09-15 遵义医科大学 一种治疗湿疹的中药复方巴布剂及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111358847B (zh) 2022-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111727235B (zh) 赤红球菌产品及其制药用途
CN112920983B (zh) 一株具有改善面部敏感性皮肤以及修复皮肤屏障的植物乳杆菌
WO2019223699A1 (zh) 预防和治疗痤疮和激素依赖性皮炎的生物多糖及其应用
CN104688786B (zh) 一种外用药物组合物及其制备方法和用途
CN111358831A (zh) 一种具有缓解视疲劳作用的中药发酵液及其制备方法与应用
CN110680855B (zh) 一种含有益生菌和中药组合物的阴道膨胀栓及其制备方法
CN111407817A (zh) 一种预防呼吸道感染病原微生物的中药组合物及其制备方法
CN111358847B (zh) 一种抑菌抗过敏微米中药乳酸菌素(aabndl)及其制备方法与应用
CN104173789A (zh) 一种发酵型中药清瘟败毒散的制备方法
CN1299753C (zh) 一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法
CN114224952B (zh) 一种舒缓婴幼儿皮肤的中药洗消制剂及其制备方法
CN115337233A (zh) 一种具有温和祛痘功效的凝胶面膜及其制备方法
CN107412647B (zh) 一种灭菌止痒留香的外用制剂
CN112472772A (zh) 一种抑菌凝胶及其制备方法
CN112546202A (zh) 一种具有抑制hpv病毒功能的复合剂及其制备方法
CN115044520B (zh) 一株交替单胞菌及使用其生产单葡萄糖醛酸甘草次酸的方法
CN115300576B (zh) 一种治疗脚气脚癣的复方中药纳米凝胶及其制备方法
WO2005023277A1 (fr) Composition a la base de squelettes de parois de cellules de nocardia rouge procede de preparation et son utilisation therapeutique pour traiter l&#39;erosion cervicale
CN114668697B (zh) 一种具有抗氧化和抗炎功效的精华水
CN103505476A (zh) 多种免疫增强剂的无细胞制剂、其制备方法及用途
CN117752604A (zh) 用于治疗寻常型痤疮的复方微乳凝胶制剂及制备方法
CN111700983A (zh) 一种用于泌尿系统感染的中药及其制备方法
CN115873777A (zh) 定向驯化改造的益生菌、含有该益生菌的微生态制剂及其在妇科炎症中的应用
CN117860859A (zh) 一种预防及治疗中风的中药组合物及制备方法和应用
CN115887243A (zh) 一种水凝胶美容液及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220704

Address after: 102445 1st floor, unit 101, building 4, zone 2, yard 6, Shagang street, Fangshan District, Beijing

Patentee after: Beijing Baifang Yisheng Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: B-2-1, Hongzhuang international, No.1, baijialou, Chaoyang North Road, Chaoyang District, Beijing 100024

Patentee before: BEIJING ANJIEYOU TECHNOLOGY Co.,Ltd.