CN111356361A - 抗cgmmv西瓜属植物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及栽培的西瓜植物，其由于来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体的QTL的渗入而具有对CGMMV的抗性。
Description
技术领域
本发明涉及对CGMMV(黄瓜绿斑驳花叶病毒，Cucumber Green Mottle MosaicVirus)具 有抗性的西瓜属(Citrullus)植物细胞和西瓜属植物，药西瓜(Citrulluscolocynthis)植物细胞和药 西瓜植物，包含对CGMMV有抗性的西瓜属接穗或砧木的嫁接植物，以及所述植物的生产方 法以及所述植物细胞和植物的用途。还包括对抗CGMMV引起的产量损失的方法和产生 CGMMV抗性种子的方法。
背景技术
1953年，Ainswoth在英国的黄瓜(Cucumis sativus)中首次报道了CGMMV(黄瓜绿斑 驳花叶病毒)。随后，亚洲和欧洲的几个国家也报告了该病毒，例如中国，以色列，希腊，日本，印度，韩国，荷兰，巴基斯坦，波兰，俄罗斯，沙特阿拉伯，西班牙，中国台湾和乌 克兰。CGMMV是南极洲已报道的少数几种植物病毒之一。(Mandal et al.,2008,Plant Viruses 2(1),25-34)。
CGMMV近来一直在瓜类种子生产领域有描述，在美国(ASTA education pamphlet,2014, A Seed Production and Commercial Growers Guide)在2014年，在澳大利亚(Australian Government,2016,Draft Pest risk analysis for Cucumber greenmottle mosaic virus(CGMMV))在 2013年在商业西瓜农场、以及在加拿大由黄瓜种植者在温室种植的迷你黄瓜中报道(Ling&Li, 2014,apsjournals.apsnet.org-doi-abs-10.1094-PDIS-09-13-0996-PDN)。
CGMMV是烟草花叶病毒属(Tobamovirus)下的一种正链RNA病毒，形成与感染葫芦科 植物的其它烟草花叶病毒种分离的一个独特进化枝。CGMMV的最近亲缘物种是感染葫芦科 植物的其他烟草花叶病毒，KGMMV，CFMMV和ZGMMV。在完整的基因组序列中，CGMMV 与感染葫芦科植物的其他烟草花叶病毒具有59.1-60.4％的相似性，与其余烟草花叶病毒物种仅具有46.0-49.3％的相似性。(Mandal et al.,2008,Plant Viruses 2(1),25-34)。
CGMMV的宿主范围狭窄，主要限于葫芦科(Cucurbitaceae)和藜科(Chenopodiaceae)。然 而，一些分离株感染茄科(Solanaceae)的一些物种。CGMMV的天然宿主范围包括黄瓜 (Cucumis sativus),西印度香瓜(Cucumis anguria),甜瓜(Cucumismelo),西瓜(Citrullus lanatus) 和葫芦(Lagenaria siceraria)。在南极洲，已在不寻常的宿主中发现了CGMMV，例如苔藓(细 裂瓣苔属(Barbilophozia)和金发藓属(Polytrchum))和南极发草(Deschampsia antarctica)。 CGMMV的实验宿主范围包括以下植物物种：苋色藜(Chenopodium amaranticolor),西瓜 (Citrullus lanatus),黄瓜(Cucumis sativus),甜瓜(Cucumis melo),Cucumis melo var.utilissima, 西葫芦(Cucurbita pepo),南瓜(Cucumis moschata),曼陀罗(Datura stramonium),葫芦(Lagenaria siceraria),棱角丝瓜(Luffa acutangula),本氏烟草(Nicotianabenthamiana),迪勃纳 氏烟草(Nicotiana debneyii)和蛇瓜(Trichosanthes anguina)。苦瓜(Momordica charantia)和烟草(Nicotiana tabacum)是无症状宿主。大多数宿主物种产生系统症状，少数(苋色藜和曼陀罗) 产生局部病变症状。(Mandal et al.,2008,PlantViruses 2(1),25-34)。
由CGMMV引起的典型疾病症状是叶子上的系统性绿色斑驳花叶，但是，症状学根据分 离株/病毒株和受影响的植物物种而变化。在嫁接的西瓜植物中，CGMMV在韩国引起“倒瓤”(blood flesh)病(Lee et al.1990)，在日本引起“Konnyaku”病，在希腊引起类似疾病。(Mandal et al.,2008,Plant Viruses 2(1),25-34)感染了CGMMV的普通西瓜亚种(Citrullus lanatus ssp vulgaris)可以产生外观健康的水果，但是，其内部表现出果肉变质，因此无法食用，并且无法 销售(Hongyun et al.,2008,J.Virological Methods149,326-329)。
受染宿主植物中的系统运动是病毒发病机理的关键过程之一。病毒在植物中的移动通过 两个主要步骤进行，即通过胞间连丝的从细胞到细胞的短距离移动和通过维管组织的长距离 移动。CGMMV的长距离运动是从光合同化物源(photoassimilate source)到库(sink)，这支持 韧皮部转运机制。在系统感染的库叶中，木质部和韧皮部同时检测到了CGMMV。CGMMV 在幼叶的正在分化的管胞中大量积累。(Mandal et al.,2008,PlantViruses 2(1),25-34)
CGMMV的自然传播在很大程度上通过接触被感染的植物材料进行。CGMMV对植物的感染可以通过受染植物残骸污染的土壤和灌溉水传播而发生。患病植物的残骸可能是感染 有限数量植物的主要感染源，随后病毒通过植物间的接触传播。在西瓜中，CGMMV是一种通过种子和嫁接材料(砧木或接穗)传播的重要病毒。CGMMV的种子传播在葫芦和黄瓜中 也有描述。已经研究了CGMMV的昆虫传播，但是无法建立特定的病毒-昆虫载体关系。然 而，在印度，已证明黄瓜叶甲Raphidopalpa faeveicollis传播CGMMV。最近已证明蜜蜂(Apismellifera)在授粉过程中转移CGMMV(Darzi et al.,2017,Plant Pathology,1365-3059,doi: 10.1111/ppa.12702)。种植者用于从患病植物收获果实的切刀可能会在作物的坐果阶段为 CGMMV的田间传播提供其他手段。(Mandal et al.,2008,Plant Viruses 2(1),25-34)。
CGMMV在全世界的葫芦科植物中引起严重的疾病。在西瓜中，已经在温室栽培植物中 描述了叶斑驳和花叶。据报道，植物花梗上的坏死斑与CGMMV感染同时发生。西瓜果实的症状包括外果皮的变质和肉质中果皮的腐烂或发黄，这通常只有在收获后才能确定。(Reingold et al.,2013,New Disease Reports 28)。
CGMMV造成了全球范围内的严重经济损失，尤其是在葫芦科和茄科中。在以色列，在 西瓜田中，CGMMV病在某些地区造成了总产量的损失。(Reingold et al.,2016,Annalsof Applied Biology 168,29-40)。
Park等人(2005,Plant Cell Rep 24,350)公开了转基因的西瓜(Citrulluslanatus)亚种 gongdae(野生西瓜)植物，这些植物通过引入编码CGMMV外壳蛋白的cDNA而对CGMMV 具有抗性。西瓜亚种gongdae不用作商业西瓜的育种材料，但有时可以用作商业西瓜嫁接中 的砧木。提出CGMMV抗性转基因Gongdae西瓜可以用作砧木，通过将商品西瓜的接穗嫁接 到转基因的Gongdae砧木上，用于生产非转基因的商业西瓜。
Lin等(2012,Transgenic Res 21,983-993)公开转基因西瓜植物(杂交栽培品种Feeling)，该 植物已经用靶向三种不同病毒的外壳蛋白(黄瓜花叶病毒(CMV)，黄瓜绿斑驳花叶病毒 (CGMMV)和西瓜花叶病毒(WMV))的单个基因沉默构建体转化。在第一代转基因系(R0)中鉴 定了对所有三种病毒均具有抗性的转化植物。然而，尽管保持了对其他两种病毒的抗性，但 是在通过R0系自花授粉获得的R1系中丧失了对CGMMV的抗性。
在本领域中已经描述了药西瓜(Citrullus colocynthis)植物对CGMMV易感(Horváth,1985, Acta Phytopathologica Academiae Scientiarum Hungaricae 20(3-4),225-251)。
由于所有商业栽培品(cultivar)种均易感，因此难以控制CGMMV。使用CGMMV抗性栽 培品种将是管理病毒的最佳选择。但是，通过经典育种在不同葫芦科植物中产生对CGMMV 的抗性存在局限性，这是因为宿主抗性的来源已知仅出现在瓜类(melon)和野生黄瓜属 (Cucumis spp.)植物中。(Mandal et al.,2008,Plant Viruses 2(1),25-34)
发明概述
本发明要解决的技术问题是，提供CGMMV抗性来源和提供对CGMMV有抗性的商业西瓜属植物。在一方面，CGMMV抗性西瓜属植物是物种普通西瓜亚种(Citrullus lanatusssp vulgaris)的西瓜植物。
本发明的第一方面涉及对CGMMV具有抗性的非基因工程西瓜属植物细胞或非基因工程 西瓜属植物或植物部分。优选地，西瓜属植物细胞或西瓜属植物是对CGMMV具有抗性的非 基因工程西瓜属作物植物细胞或非基因工程作物植物。
赋予CGMMV抗性的西瓜属来源未有过描述。在对各种西瓜属种质资源进行的大量种质 筛选中，出乎意料地检测到了对CGMMV具有抗性的药西瓜(Citrullus colocynthis)种质 (accession)。它产生带有白色果肉或浆果和低白利糖度(约2.0的白利糖度)的圆形小果实(大 约宽4厘米，长4厘米)。从杂合和/或异质的种子样本(从美国国家植物种质资源库(US National Plant Germplasm collection)获得，ars-grin.gov)中选择了抗性植物(在本文所述的测试中显 示无症状，得分为4)，选出抗性并在自花授粉几代的自交后代中获得稳定。含有CGMMV 抗性的经选择并稳定的药西瓜植物的种子的代表性样本，根据布达佩斯条约，由Nunhems B.V. 以保藏号NCIMB 42624保藏。
迄今为止，这是西瓜属中描述的第一个具有CGMMV抗性的材料。药西瓜可以与其他西 瓜属物种，例如西瓜(Citrullus lanatus)杂交。因此，通过相应的CGMMV抗性植物，现在首 次可以将一个或多个赋予CGMMV抗性的染色体片段(包含CGMMV抗性基因座)从抗性“供体”植物转移到其他西瓜属植物(也称为“受体”植物)。因此，通过本文公开的CGMMV抗 性药西瓜植物，第一次使得能够生产对CGMMV具有抗性的西瓜属作物植物，例如栽培的西 瓜(普通西瓜亚种，C.lanatus ssp vulgaris)。这对农场主将是一个巨大的优势，因为现在可以通过种植CGMMV抗性西瓜属作物物种来减少或避免由CGMMV在易感农作物中引起的产 量显著降低。
众所周知，除其他可能性外，CGMMV还可以通过受污染的种子传播。因此，本发明的另一个优点是，对于种子生产者而言，能够避免丢弃从出现CGMMV感染植物的田地中产生的种子。在黄瓜中，一些CGMMV抗性品种仍然携带该病毒并使得病毒可以在植物中大量扩增，例如Rijk Zwaan的Bonbon品种(即，它们是无症状携带者，因此可以将病毒传播给其 他植物)。如在实施例中所见，本发明的抗性看起来可以防止病毒在植物中扩增或至少可以将病毒水平降低到非常低的水平(参见例如表2，显示在用CGMMV机械叶片接种后15dpi，35dpi和60dpi，叶片不包含病毒RNA或包含极低水平的病毒RNA，而阳性对照则含有显著 量的病毒RNA)。在本发明的一个实施方案中，病毒水平是如此之低，以至于它不会引起附 近易感西瓜品种的CGMMV感染和/或不会导致病毒传播至此类植物的果实产生的种子。实 施例中也证实了这一点。
此外，可以减少种子生产者和农民的工作支出，因为对于种植抗CGMMV抗性西瓜属植 物而言，许多预防措施，例如用于田间处理和修剪植物的工具的消毒等，将变得多余。特别 是，由于CGMMV能够在土壤中长期存活，因此提供抗CGMMV抗性西瓜属植物将允许在 相同的区域或田间中再生产进一步世代的西瓜属植物(包括，例如，包含根据本发明的 CGMMV抗性植物的接穗和/或砧木的嫁接植物)，即使在之前在相应区域中已检测到 CGMMV。
如本文所用，“基因工程”是指，采用将生物体外部制备的核酸直接引入宿主或将生物体 外部制备的核酸引入之后将与最终宿主融合、杂交(cross)或杂交(hybridize)的细胞中的技术， 通过改变生物体的遗传组成，使用生物技术来直接修饰生物体的基因组。基因工程涉及重组 核酸(DNA或RNA)技术以及随后的重组核酸掺入，其中所述重组核酸的掺入可以间接地 通过诸如载体系统或直接地通过诸如粒子轰击、显微注射、巨量注射(macro-injection)和微囊 化技术来进行。
如本文所用，“非基因工程”是指，使用不包括将在生物体外部制备的核酸引入生物体中 的技术，来修饰生物体的基因组和/或改变生物体的遗传组成。
“CGMMV”在本文中用作黄瓜绿斑驳花叶病毒的缩写。
如本文所用，“CGMMV抗性”是指，当接种CGMMV时，一个品系(line)或品种的植物或植物部分在叶上不显示可见的CGMMV症状(等级4)(并且优选地，果实内部也没有症状)； 或在一方面，植物在叶上显示轻度症状(非常轻度的花叶和很少的明斑(clearing spots))(3级)(优选，植物的果实不显示任何内部症状并且仍然可以销售)，而易感对照品系或品种(例如，Sugar Baby或其他CGMMV易感品种)在相同条件下进行测试时，在叶上表现出严 重症状(等级1)并在果实内部出现症状。优选，当一个品系中至少93％，94％，95％，96 ％，97％，98％，99％或100％的植物符合上述等级(优选，与适宜对照品系一起，检测品 系的至少10、15、20、25、30或更多株植物)，则该植物品系或品种被认为具有抗性。果实 内部的症状是使该成熟果实不适于人类食用的症状，例如果肉变质和/或果肉水浸状(watersoaking)。评估可视CGMMV症状的合适测试是，例如在实施例中在通用方法项目1-3和以 下描述的机械叶接种方法。
在本文中，将叶上的“可视CGMMV症状”根据以下分类：
等级1：重度症状：叶畸形，起泡和清晰的花叶
等级2：中度症状：轻度叶畸形，但清晰的花叶
等级3：轻度症状：非常轻微的花叶，很少的明斑
等级4：叶上无症状
在一方面，“CGMMV抗性”涵盖，在叶上显示无症状(等级4)并且优选地在果实内部也无症状、可选地在叶上显示轻度症状(等级3)并且优选地果实内部无症状的植物和植物部分，与易感对照品系或品种相比，在15dpi，30dpi，35dpi，60dpi和/或90dpi(或更晚)， 在叶中(以及任选地也在果实中)包含显著较低的平均病毒水平(或病毒滴度)。“显著较 低”在本文中是指，通过例如RT-qPCR可检测的平均病毒水平，与易感对照组织中相比，低 至少100倍，优选低至少1000倍，更优选至少5000倍或至少10000倍，或至少50000倍， 或至少100000倍。一方面，可通过RT-qPCR检测到的CGMMV病毒水平，在抗性植物的叶 以及优选地也在果实中，在15dpi，30dpi，35dpi，60dpi和/或90dpi，为平均浓度低于1.5 x 10-4ng/μl，或低于1.3x 10-4ng/μl；在一方面，平均病毒水平甚至更低，例如，低于5x 10-5 ng/μl,或低于4x 10-5ng/μl,或低于3x 10-5ng/μl,或低于2x 10-5ng/μl。特别是，在一方面， 平均病毒滴度在15dpi时低于5x 10-5ng/μl，和/或在35dpi时低于3x 10-5ng/μl，和/或在60 dpi或更晚时低于2x 10-5ng/μl，或甚至是使用RT-qPCR(或TaqMan分析)不可检测的；而 易感对照在相同条件下和相同时间点显示出重度症状，并含有明显更高的病毒水平(例如高 至少100倍，优选高至少1000倍)。一方面，抗性组织中的平均病毒滴度随时间降低，即， 在35dpi时的滴度低于在15dpi时的滴度，而在60dpi时的滴度低于在35dpi时的滴度。
在一方面，从本发明的CGMMV抗性植物向其他西瓜植物(例如，易感西瓜植物)的病毒 传播，也小于1％，优选小于0.5％，更优选0％。病毒的传播可以例如如实施例中所述进行 测试，通过使用已经接种了CGMMV的CGMMV抗性植物的叶子作为接种物来接种其他植 物并确定被感染的其他植物的百分比。在另一方面，在本发明的CGMMV抗性植物的果实中 产生的种子不含CGMMV病毒。同样，可以如实施例中所述进行测试。
如本文所用，“西瓜属”或“西瓜属植物”是指，葫芦科(Cucurbitaceae)中属于西瓜属 (Citrullus)的植物。
西瓜属包括四或五个种：西瓜(Citrullus lanatus)(包括亚种lanatus,vulgaris和 mucosospermus)，药西瓜(Citrullus colocynthis)和野生物种缺须西瓜(Citrullusecirrhosus)和热 迷西瓜(Citrullus rehmii)(Levi et al.,2001,Genetic Resourcesand Crop Evolution 48,559-566)。 诺丹西瓜(Citrullus naudinianus)，第五个西瓜属物种，与其他西瓜属物种在总体形态上如此不 同，以至于有些技术人员将其放入Acanthosicyos属(A.naudinianus)中。结合本发明，诺丹 西瓜(Citrullus naudinianus)应被理解为是西瓜属物种。普通西瓜亚种(Citrullus lanatus ssp. vulgaris)在本领域中通常被称为栽培西瓜，是栽培最广泛的西瓜作物植物。因此，本文中提及 “栽培西瓜”，是指普通西瓜亚种的作物植物，例如品系或品种。五个西瓜属物种每个都具有 22的二倍体(2n)染色体数。上述5种不同的西瓜属物种可以相互杂交，因此CGMMV抗性 可以在这些物种之间转移，例如通过育种方法转移。(Kun-Peng Li et al.,2016,BMC EvolutionaryBiology 16,85)。
“西瓜属植物细胞”是指，来源自、可获自、获自、源自或可源自西瓜属植物或其任何部 分的植物细胞。该细胞可以适合于再生为整个植物(可再生的植物细胞)，也可以是不适合 再生为整个植物的细胞(不可再生的植物细胞)。同样地，“普通西瓜亚种植物细胞”意指， 来源自、可获自、获自、源自或可源自普通西瓜亚种植物或其任何部分的植物细胞。该细胞 可以适合于再生为整个植物(可再生的植物细胞)，也可以是不适合再生为整个植物的细胞 (不可再生的植物细胞)。
在本发明中，术语“作物植物”具有一般含义，并且应理解为指，旨在以一定规模种植或 培育以获取利润或维持生计并在生长后收获用于食物，衣物，牲畜，饲料，生物燃料，药品 或其他人类用途的任何特定植物或品种。术语“作物植物”在本文中尤其是指，旨在以获利规 模成批种植或栽培并且在生长后收获用于提供食物的任何特定植物。对于在当前定义中使用 的表述“旨在种植的”，应明确，对于旨在按获利规模成批种植或栽培并在生长后收获用于 提供食物的任何特定植物，任何合适用于生产该特定植物的育种材料也包含在本文使用的术 语“作物植物”中。
“西瓜属作物植物”在本文中包括西瓜(Citrullus lanatus)(包括亚种vulgaris,mucosospermus或lanatus)、药西瓜(Citrullus colocynthis)和诺丹西瓜(Citrullusnaudinianus)物 种的植物。
作物植物包括术语栽培的植物。关于西瓜植物，术语“栽培的植物”(或“栽培植物”)是在 本领域中通常使用的，并且在本文中应理解为是指普通西瓜亚种的植物(Kun-Peng Li et al., 2016,BMC Evolutionary Biology 16,85)。
术语“食物”在本文中具有一般含义，并应理解为可被食用、饮用或以其他方式摄入人体 的任何营养物质。
西瓜属作物植物物种西瓜(Citrullus lanatus)、药西瓜(Citrulluscolocynthis)或诺丹西瓜 (Citrullus naudinianus)可以互相杂交，从而使CGMMV抗性可以从这些物种之一转移或渐渗 到另一个物种。本发明提供的药西瓜(Citrulluscolocynthis)植物(例如获自、源自、可源自或 可获自或来源于保藏号NCIMB 42624的保藏种子的植物)的CGMMV抗性，可以因此渐渗 入其它药西瓜植物(例如CGMMV易感植物)、西瓜物种(例如栽培西瓜)、或诺丹西瓜物 种。
因此，本发明的一个优选实施方案涉及根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物， 其中根据本发明的植物细胞或植物选自由物种西瓜、药西瓜或诺丹西瓜组成的组。本发明的 一个更优选的实施方案中，根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物是西瓜(Citrullus lanatus)植物细胞或西瓜(Citrullus lanatus)植物，最优选普通西瓜亚种植物细胞或普通西瓜亚 种植物。
已经以保藏号NCIMB 42624保藏CGMMV抗性药西瓜植物的种子，从该种子、或其后代，特别是其自交后代，可以获得药西瓜植物细胞和一个或多个CGMMV抗性QTL。从这些 保藏的种子，可以生长出对CGMMV具有抗性的药西瓜植物，从中可以获得药西瓜植物细胞。 同样，可从这些种子或其后代获得赋予CGMMV抗性的一个或多个药西瓜QTL(数量性状基 因座)，其中所述后代保留所述QTL中的一个或多个或所有。
本发明人在药西瓜中发现了五个QTL，其赋予CGMMV抗性并且可以单独地或以不同组 合从药西瓜供体(例如NCIMB 42624或其后代，或任选地包含该一个或多个QTL的另一CGMMV抗性药西瓜植物)转移至其他植物，例如转移至栽培西瓜中。这里将详细描述这五 个QTL。可以进行精细作图以缩小这些QTL所在的染色体区域。这使得可以使用较短的渐渗 片段，从而消除来自供体的连锁累赘(与QTL连锁的不期望性状的渗入)。
因此，在一个特定的实施方案中，本发明涉及以保藏号NCIMB 42624保藏的药西瓜种子 或从保藏号NCIMB 42624保藏的种子生长的植物、或此类植物的后代(子代)，尤其是自交 后代，例如包含CGMM抗性等级4(无症状)的后代。获自、源自、可获自或可源自或来源于保藏号NCIMB 42624的保藏种子的药西瓜植物细胞或药西瓜植物、或获自、源自、可获自或可源自或来源于自保藏号NCIMB 42624的保藏种子生长的植物的药西瓜植物细胞，因此是 本发明的一个具体实施方案。
在另一个具体的实施方案中，本发明涉及西瓜属植物，特别是栽培的西瓜植物，其包含 一个或多个CGMMV抗性QTL(如本文所述)，其中所述CGMMV抗性QTL来源于/可源自/ 存在于/获自/源于：保藏号NCIMB42624的药西瓜保藏种子、或自保藏号NCIMB42624的保 藏种子生长的植物、或该植物的后代(子代)。
在又一个具体的实施方案中，本发明涉及西瓜属植物，特别是栽培的西瓜植物，其包含 一个或多个CGMMV抗性QTL(如本文所述)，其中所述CGMMV抗性QTL来源于/可源 自/存在于/获自/得自CGMMV抗性药西瓜植物或种子，其中该药西瓜植物或种子包含与存在 于保藏号NCIMB 42624的保藏种子中或从保藏号NCIMB 42624的保藏种子生长的植物或此 类植物的子代(后代)中的QTL相同的一个或多个QTL。这样的药西瓜植物包含CGMMV 抗性等级4，并且包含与该一个或多个QTL连锁的SNP标记中的一个或多个或所有。因此， 例如，该药西瓜植物可以包含QTL7.1，并且因此还包含与QTL7.1连锁的一个或多个或所有 SNP标记，如下文和例如表1和表6中进一步描述。因此，例如，在一方面，药西瓜植物包 含QTL7.1和/或QTL9.1，优选其包含与QTL7.1连锁的SNP13，SNP14和/或SNP15的抗性 供体核苷酸和/或与QTL9.1连锁的SNP22，SNP23和/或SNP24的抗性供体核苷酸。在另一 方面，包含QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和/或QTL9.1的药西瓜植物，优选包含与 QTL1.1连锁的SNP4，SNP5和/或SNP 6的抗性供体核苷酸、和/或与QTL4.1连锁的SNP7， SNP8和/或SNP9的抗性供体核苷酸、和/或与QTL5.1连锁的SNP10，SNP11和/或SNP12的 抗性供体核苷酸、和/或与QTL7.1连锁的SNP13，SNP14和/或SNP15的抗性供体核苷酸、 和/或与QTL9.1连锁的SNP22，SNP23和/或SNP24的抗性供体核苷酸。
优选地，本发明涉及根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物，其包含渐渗的 CGMMV抗性，优选地，根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物包含渐渗入其基因 组中的CGMMV抗性。
在一个更优选的实施方案中，本发明涉及根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植 物，其中该渐渗的CGMMV抗性获自、得自、可得自或可获自或来源于西瓜属植物或西瓜属 植物细胞，更优选地CGMMV抗性获自、得自、可得自或可获自或来源于药西瓜植物细胞或 药西瓜植物，尤其是代表性种子样本已在保藏号NCIMB 42624下保藏的药西瓜植物、或其 CGMMV抗性后代(例如通过自交获得的后代)。SNP标记分析或对包含QTL(一个或多个)的染色体区域的测序，可用于确定该CGMMV抗性是保藏种子“中存在”的、还是可从保藏的种子获得的。
甚至更优选地，根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物是普通西瓜亚种的植物 细胞或是普通西瓜亚种的植物，其包含渐渗入其基因组中的CGMMV抗性，其中该渐渗的 CGMMV抗性是“原存在于”或是获自、得自、可得自、或可获自或来源于药西瓜植物细胞或 药西瓜植物的CGMMV抗性，其中所述药西瓜植物细胞或药西瓜植物尤其是代表性种子样本 已经在保藏号NCIMB 42624下保藏的药西瓜植物或细胞、或其CGMMV抗性后代(例如，通过自交获得的后代)。
一方面，可以从中获得CGMMV抗性的药西瓜供体是这样的供体种质，其中所述供体种 质如实施例中所述用CGMMV机械接种后不产生症状(等级4)，和/或其中在接种后的不同时间点病毒滴度与易感对照相比显著降低，例如使用RT-qPCR(TaqMan)分析，滴度小于5 x10-5ng/μl，和/或包含QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和/或QTL9.1中的一个或多个或 全部，并因此包含与该相应的QTL连锁的SNP标记的抗性供体核苷酸中的一个或多个。在 一方面，供体是NCIMB 42624或该植物的祖先或后代。
在一个甚至更优选的实施方案中，本发明涉及根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞 或植物，其中渐渗入的CGMMV抗性“原存在于”、获自、或得自、或(通过)获得、得自、可得自或可获自或来源于保藏号NCIMB 42624保藏的种子或该种子的细胞、或其CGMMV 抗性后代(例如通过自交获得的后代)；或获得、得自、可得自或可获自或来源于自所述保藏种子生长的植物或其后代；或获得、得自、可得自或可获自或来源于从所述保藏种子生长的植物或其后代可获得的或获得的植物细胞。因此，一方面，所述植物细胞或植物包含一个或多个赋予CGMMV抗性的来自CGMMV抗性供体植物的渗入片段，例如所述渗入片段可以 来自其代表性种子样本已经以保藏号NCIMB 42624保藏的药西瓜植物、或其CGMMV抗性 后代(例如通过自交获得的后代)。
在一个甚至更优选的实施方案中，根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物是普 通西瓜亚种植物细胞或普通西瓜亚种植物，其包含渐渗入的CGMMV抗性，其中该渐渗入的 CGMMV抗性获自、得自、可得自或可获自或来源于：保藏号NCIMB 42624的保藏种子或 该种子的细胞、或其CGMMV抗性后代(例如通过自交获得的后代)；或获自、得自、可得自或可获自或来源于：自所述保藏种子生长的植物或从保藏种子(例如通过自交获得)的CGMMV抗性后代生长的植物；或获自或可获自或来源于：从所述保藏种子生长的植物或从所述保藏种子(例如通过自交获得)的CGMMV抗性后代生长的植物获得的或可获得的植物细胞。因此，一方面，所述植物细胞或植物是栽培的西瓜植物细胞或植物，其在其基因组中包含来自CGMMV抗性供体植物的一个或多个赋予抗性的渗入片段(其中所述一个或多个片段包含CGMMV抗性基因座，特别是一个或多个QTL)，其中所述供体植物例如是代表性种子 样本已经以保藏号NCIMB 42624保藏的药西瓜植物、或其CGMMV抗性后代(例如通过自 交获得的后代)。
受体植物或植物细胞中一个或多个赋予抗性的渗入片段的存在可以通过本领域技术人员 已知的方法来检测，例如，全基因组测序，分子标记分析，抗性基因座的QTL作图，和/或 其他方法，例如表型分析，等位性(allelism)检查等。同样，在受体植物或植物细胞中一个或 多个赋予抗性的渗入片段的存在，可以通过如下标记来检测，所述标记与本文中在药西瓜供 体中鉴定到的QTL物理连锁。
野生的荒漠植物物种药西瓜是二倍体，具有2n＝22条染色体，对应于栽培西瓜的染色体， 因此从药西瓜染色体的片段向相应的普通西瓜亚种染色体进行渐渗是可行的。在药西瓜种质 NCIMB 42624中发现了五个QTL，它们赋予对CGMMV的抗性，例如当渐渗入CGMMV易 感的栽培西瓜中时。确定了这些QTL在基因组中的位置，并发现了与这些QTL连锁的SNP标记。从该二倍体供体的SNP基因型可以看出，该药西瓜供体对于所有的这些SNP核苷酸 都是纯合的。这五个QTL分别命名为QTL1.1(存在于测序的栽培西瓜基因组的1号染色体上)，QTL4.1(存在于测序的栽培西瓜基因组的4号染色体上)，QTL5.2(存在于测序的栽培西瓜基因 组的5号染色体上)，QTL7.1(存在于测序的栽培西瓜基因组的7号染色体上)，QTL9.1(存在 于测序的栽培西瓜基因组的9号染色体上)。每个QTL所在的区域由下表1中列出的SNP(单 核苷酸多态性)标记界定。当将这些序列用于相对于万维网cucurbitgenomics.org上的“西瓜 (Charleston Gray)基因组”进行BLAST分析时，发现单多态性在西瓜基因组中的核苷酸位置。 表中显示了与这些QTL最紧密连锁的SNP标记。由于通过这些SNP标记界定的区域非常大， 因此显然不需要将界定每个QTL的整个区域都渗入到栽培西瓜中，而是可以仅将包含该QTL 并赋予CGMMV抗性的子区域渗入其它西瓜属植物，特别是栽培西瓜中。
表1
右栏中提供了二倍体CGMMV抗性供体(例如NCIMB42624)的SNP基因型。因此， 每个SNP的抗性供体核苷酸是该栏中提到的核苷酸，例如SNP1的SNP供体核苷酸是指SEQ ID NO：1中核苷酸51位的核苷酸“C”(胞嘧啶)。
QTL7.1和QTL9.1是显性的，因此当该基因座为杂合或纯合形式时赋予抗性。这两个QTL 在赋予CGMMV抗性中最重要，因为不仅CGMMV症状降低到等级3(轻度症状)或4(无 症状)，而且病毒滴度(水平)显著降低到极低的水平(例如，在接种后的一个或多个时间 点，小于5x 10-5ng/μl)或甚至不可检测的水平。其它三个QTL，QTL1.1，QTL4.1和QTL5.2， 是隐性基因座，并且(不构成对本发明范围的限制)看起来在影响植物中的病毒滴度方面起 作用。
在一方面，提供了西瓜属植物，优选地是栽培的西瓜植物，其中所述植物或植物细胞包 含选自QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1中的一个或两个或三个或四个或五个 QTL(来自药西瓜供体的渐渗片段，例如来自NCIMB 42624，或来自具有例如等级4并包含该QTL的其他CGMMV抗性药西瓜供体)。
在另一方面，提供了西瓜属植物，优选地为栽培的西瓜植物，其中所述植物或植物细胞 包含选自QTL1.1，QTL4.1，QTL7.1和QTL9.1中的一个或两个或三个或四个QTL(来自药西瓜供体的渐渗片段，例如来自NCIMB 42624，或来自具有例如等级4且包含该QTL的其 他CGMMV抗性药西瓜供体)。
在再一方面，提供西瓜属植物，优选地为栽培的西瓜植物，其中所述植物或植物细胞包 含选自QTL7.1和/或QTL9.1的至少一个或两个QTL(来自药西瓜供体的渐渗片段，例如来 自NCIMB 42624，或来自具有例如等级4且包含该QTL的其他CGMMV抗性药西瓜供体)。 一方面，任选地，选自QTL1.1、QTL4.1和QTL5.2的一个或多个隐性QTL可以与QTL7.1 和/或QTL9.1组合。
一方面，所述植物或植物细胞是栽培的西瓜，并且包含至少QTL7.1和/或QTL9.1，任选 地两者均为纯合形式。
QTL的存在可以例如通过如下方式确定：确定与QTL连锁的一个或多个或所有SNP标 记的供体SNP核苷酸的存在，或对染色体区域进行测序以检测渗入片段的核苷酸序列，并例 如将其与供体的核苷酸序列进行比较。
如果含有QTL的染色体序列已经渐渗到栽培西瓜的相应染色体上产生重组染色体，则该 西瓜植物、植物部分或植物细胞被称为“包含”来自药西瓜供体的“QTL”或“包含”来自药西瓜供 体的“含QTL的渗入片段”。这可以通过例如测序染色体区域，和/或通过包含与该QTL连锁 的一个或多个或所有供体SNP标记的渗入片段，予以检测。另外，CGMMV抗性应与渐渗 片段一起转移，即，将CGMMV抗性表型赋予西瓜品系，其中缺乏渗入片段的所述西瓜品系 对CGMMV易感。
就渗入的CGMMV抗性的来源而言，CGMMV抗性是否直接从西瓜属，优选地药西瓜 植物细胞或植物渗入本发明的植物细胞或植物的基因组，优选地渗入到普通西瓜亚种植物细胞或渗入到普通西瓜亚种植物，并不是决定性的。决定性的是，渗入的CGMMV抗性获自、 得自、可得自、或可获自、或来源于西瓜属植物，优选地药西瓜植物细胞或植物，例如保藏 的供体或具有抗性等级4(无症状)的其它供体。在渐渗入本发明的植物细胞或植物中之前，CGMMV抗性可以例如首先从西瓜属，优选药西瓜渐渗入另一物种或亚种，例如，西瓜(包括亚种lanatus和mucosospermus)、缺须西瓜、热迷西瓜、诺丹西瓜、或其他非CGMMV抗性 药西瓜植物细胞或植物。在CGMMV抗性渗入根据本发明的植物或作物植物细胞(例如，普 通西瓜亚种植物细胞或植物)之前，CGMMV抗性是否渗入了各种不同的物种或植物中，也 不是决定性的。决定性的是，渗入本发明植物细胞或植物(例如普通西瓜亚种植物细胞或植 物)的CGMMV抗性最初获自、得自、可得自、或可获自西瓜属植物，优选药西瓜植物细胞 或植物。因此，重要的是，渐渗入本发明的作物植物或作物植物细胞(例如普通西瓜亚种的 植物细胞或植物)的染色体片段的来源，而非用于该渐渗过程或任何其他育种过程的步骤和/ 或步骤数量。
本文使用的术语“渐渗/渗入”(introgression)具有本领域中的通常含义，并且应理解为是指， 将一个或多个染色体片段从一个植物(供体)移入或引入到相同或不同物种的另一个植物(受 体植物，有时也称为轮回植物或轮回亲本)的基因库(gene pool)中。因此，“渗入的CGMMV 抗性”或“渗入的片段”是指，(一个或多个)赋予CGMMV抗性的染色体片段，即包含CGMMV 抗性基因座(QTL)的片段，已经从一个CGMMV抗性植物细胞或植物，引入到另一个不具 有CGMMV抗性的植物细胞中或另一个不具有CGMMV抗性的植物中。将CGMMV抗性渗入植物可以通过杂交或传统育种技术(包括回交)来实现，即，渗入的CGMMV抗性可以 是育种方法的结果。CGMMV抗性渗入受体植物是一个人为指导的技术过程。特别地，本文 中，渐渗/渗入是指人工育种过程或方法。本文提供的一个或多个或所有的分子标记，例如SNP标记，可用于该过程。所得植物，即包含来自供体的一个或多个渗入片段的栽培品系或品种， 也是人造的，在自然界中不存在。
包含QTL的来自药西瓜的渗入片段可以很大，例如，甚至一半的染色体，但优选较小， 例如约20Mb(兆碱基)，18Mb，15Mb或以下，例如约10Mb或以下，约9Mb或以下， 约8Mb或以下，约7Mb或以下，约6Mb或以下，约5Mb或以下，约4Mb或以下，约3.5 或3Mb或以下，约2Mb或以下，约1Mb(等于1,000,000个碱基)或以下，或大约0.9Mb (等于900,000个碱基对)或以下，例如0.8Mb，0.7Mb，0.6Mb，0.5Mb或以下。一方面， 渗入片段包含本文其他地方(参见例如表1和6)所示的包含一个或多个所述SNP标记的物 理区域、或保留相应QTL的其子区域。
“CGMMV抗性基因座”或“CGMMV抗性QTL”是指，染色体上赋予CGMMV抗性的基 因和该基因的等位基因所在的区域。因此，当提及渗入的CGMMV抗性时，应理解CGMMV 抗性基因座是渗入的，即存在于渗入片段上。CGMMV抗性基因座在本文中也称为QTL(数 量性状基因座)。
术语“育种”在本文中涵盖，如育种者已知的，杂交，回交，自交，选育，双单倍体生产， 胚胎抢救，原生质体融合，标记辅助选择，突变育种，胚胎挽救等(即，非遗传修饰/转化/ 转基因方法的方法)，通过所述方法，例如，可以获取，鉴定，产生和/或转移重组染色体1、 4、5、7或9。重组染色体是包含来自供体的渗入片段的受体染色体。因此，此处的“重组染色体1或4或5或7或9”是指，该染色体包含来自CGMMV抗性供体的渗入片段，该片段 包含QTL1.1(染色体1)，QTL4.1(染色体4)，QTL5.2(染色体5)，QTL7.1(染色体7) 或QTL9.1(染色体9)。
“标记辅助选择”或“MAS”是，利用分子标记(例如SNP标记)的存在来选择存在特定的基因座或染色体区域的植物的方法，其中该分子标记在遗传上和物理上与该特定基因座或 特定染色体区域连锁。例如，与QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1或QTL9.1遗传和物理 连锁的分子标记(例如表1和表6的SNP标记)可用于检测和/或选择包含所述QTL的西瓜 植物或植物部分。分子标记与基因座连锁越紧密，该标记通过减数分裂重组而与该基因座分 离的可能性就越小。同样，两个标记之间连锁越紧密，两个标记相互分离的可能性就越小(并且它们作为一个单元共分离的可能性就越大)。术语“基因型分型”是指，确定植物或植物细胞或植物部分的基因型的方法，特别是针对一个或多个核苷酸，例如一个或多个SNP标记。SNP标记的基因型在二倍体植物或植物细胞中由两个核苷酸组成，在三倍体中由三个核苷酸 组成，在四倍体植物或细胞中由四个核苷酸组成。
“植物品种”是在同一已知最低等级的植物分类单元中的一组植物，(与植物育种者权利 的认可条件是否得到满足无关)植物品种可以基于某个基因型或基因型组合导致的特征的表 达来定义，并可以通过这些特征中的至少一个的表达而与任何其他组植物区分开，并可以被 视为一个实体(entity)，因为它可以无任何变化地繁殖。因此，如果一组植物均具有特征—— 存在一个或两个基因座或基因(或由这些特定基因座或基因导致的表型特征)，但就其它基 因座或基因而言，它们之间可以有很大不同，则即使该组植物是同一类，术语“植物品种”也 不能用来表示该一组植物。
“F1，F2，F3等”指在两个亲本植物或亲本系之间杂交后的连续相关世代。由杂交两个植物或品系而产生的种子生长的植物称为F1代。F1植物自交得到F2代，等。
“F1杂种”植物(或F1杂种种子)是从两个近交亲本系杂交获得的世代。因此，F1杂种种子是F1杂种植物从其生长的种子。由于杂种优势，F1杂种更具活力，产量更高。近 交系在基因组中在大多数基因座基本上是纯合的。“植物品系”或“育种系”是指植物及其后代。如本文所用，术语“近交系”是指已经反复自交并且近乎纯合的植物品系。因此，“近交系”或“亲本系”是指已经经过数代的近交繁殖(例如，至少5、6、7或更多代)的植物，其中所述 近交导致具有高均一性的植物品系。
在表型水平上，CGMMV抗性已经渗入其中的西瓜属作物植物细胞或西瓜属作物植物， 由于显示出对CGMMV感染的抗性，可以与相应的西瓜属植物细胞或相应的西瓜属植物区别 开，即，包含一个或多个渗入片段的该植物如本文所述对CGMMV具有抗性。在遗传水平上， CGMMV抗性渗入其中的西瓜属作物植物细胞或西瓜属作物植物，因其基因组包含一个或多 个来源于其它植物的赋予CGMMV抗性的染色体片段，故可以与相应的西瓜属植物细胞或相 应的西瓜属植物区分开。与植物细胞或植物相互比较有关的术语“相应”是指，除了已经渗入 CMVMV抗性的植物细胞或植物具有抗CGMMV抗性、和/或在其基因组中包含赋予CGMMV 抗性的一个或多个染色体片段外，相互之间进行比较的植物细胞或植物具有相似或相同的表 型外观或基因型。染色体片段(渗入片段)包含本文所述的抗性基因座或QTL。本文公开的 植物具有例如普通西瓜亚种的基因组，但在其基因组中渗入了一个或多个来自药西瓜的染色 体片段，例如来自NCIMB 42624的片段，其中渗入的该一个或多个染色体片段赋予对 CGMMV的抗性。渗入的片段来自供体，而其余的基因组来自受体。
“染色体片段”或“渗入片段”或“渗入的片段”在本文中是指，由基因组中的连续DNA序列 组成的任何片段，其在基因组中存在或不存在时赋予功能和/或确定植物的表型。关于本发 明，渗入到根据本发明的植物细胞或植物中并因此存在于根据本发明的植物细胞或植物的基 因组中的染色体片段，赋予CGMMV抗性表型(任选地，该表型可以仅在该片段为纯合形式 时表达)。因此，一方面，缺少该(一个或多个)染色体片段的植物，例如在其基因组中缺少 药西瓜片段的栽培西瓜植物，将易受CGMMV感染，而包含一个或多个所述染色体片段的植 物将对CGMMV产生抗性。
染色体片段可以通过特定的分子标记(RFLP，AFLP，RADP，SNP等)，通过染色体的物理区域，通过基因或其特定等位基因的存在或不存在，通过特定的cDNA或基因组DNA 序列、由DNA编码的蛋白质的序列的存在或不存在等，来描述或定义。一方面，本文中， 染色体片段通过与赋予CGMMV抗性的QTL连锁的单核苷酸多态性标记(SNP标记)来描 述或定义，其中在SNP标记位置，药西瓜供体的单核苷酸与受体的单核苷酸具有不同的核苷 酸。因此，包含QTL的染色体片段可以通过渗入片段所在的物理区域和/或通过SNP标记(渗 入片段位于其间)以及包含该SNP标记的序列来定义，和/或通过存在于渗入片段上(并且在 缺少渗入片段的易感受体中不存在)的SNP标记核苷酸(供体SNP核苷酸)来定义。
在本发明的上下文中，“SNP(＝单核苷酸多态性)”应理解为在基因组中特定位置上出 现的单核苷酸的变异。SNP是两个植物之间基因组中给定位置的单核苷酸变异。如果具有 CGMMV抗性基因座的供体植物(例如，药西瓜植物)在其相应序列的特定单位置显示的核 苷酸不同于受体植物(例如，CGMMV易感栽培西瓜)在相同位置上的相应核苷酸，则该位置可以定义供体和受体之间的SNP。如果供体植物在特定位置具有四种可能的核苷酸(A，C，T或G)之一，则当受体植物在相同的相应序列位置具有其余三种可能的核苷酸之一时，出现SNP。因此，在包含来自供体的渗入片段的栽培西瓜植物中，可以容易地确定SNP的单核苷酸是来自供体(供体SNP核苷酸)还是来自栽培西瓜(受体SNP核苷酸或易感SNP核苷 酸)。栽培西瓜的染色体可以是例如出现在cucurbitgenomics.org上的染色体，并且通过使用包含供体SNP的任何序列(即SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：24中的任何一个)，针对“西 瓜(Charleston Gray)基因组”进行BLAST分析，可以显示出该SNP在栽培西瓜基因组中的染色体位置。
因此，在另一个实施方案中，包含渗入的CGMMV抗性的根据本发明的非基因工程西瓜 属植物细胞或植物，包含整合到其基因组中的来自另一植物细胞或植物的染色体片段，其中 所述染色体片段赋予CGMMV抗性。因此，包含渗入的CGMMV抗性的本发明植物细胞和本发明植物的基因组，在特定CGMMV抗性基因座或包含CGMMV抗性基因座的基因组区 域，与相应的非CGMMV抗性植物细胞或相应的非CGMMV抗性植物不同。
CGMMV抗性植物细胞或植物在特定的CGMMV抗性基因座或包含该基因座的区域是否 与相应的非CGMMV抗性植物细胞或植物不同，可以由本领域技术人员使用一种或多种本领 域已知的技术来确定，例如表型分析试验、全基因组测序、分子标记分析、性状作图、染色 体涂染、等位性检查等技术，或多种技术的组合。同样，可以使用与表1和表6中描述的QTL连锁的SNP标记，如下所述。
可以通过本领域技术人员通常已知的各种方法来产生对CGMMV具有抗性的西瓜属植物。 可以例如使用保藏号NCIMB 42624的种子或其抗性子代。这些保藏种子的一个特别优点是从 种子生长的植物对CGMMV具有抗性，并且该植物对于QTL和SNP标记是纯合的。因此， 可以通过使用例如CGMMV抗性西瓜属植物的花粉授精其他西瓜属植物，如其他西瓜属作物 植物，尤其是西瓜(Citrullus lanatus)植物，尤其是普通西瓜亚种(栽培西瓜)植物，将赋予 CGMMV抗性的染色体片段引入或渗入其他西瓜属植物中。至少在具有二倍体倍性的植物中， 7号染色体(QTL7.1)和9号染色体(QTL9.1)上赋予CGMMV抗性的染色体片段是显性的。 因此，在CGMMV抗性西瓜属植物(例如,从保藏号NCIMB 42624保藏的种子生长的植物(或 其抗性子代))与另一西瓜属植物杂交后，在F1代中获得CGMMV抗性。然后可以将植物与易感亲本(受体)回交，以减少供体基因组，同时保留供体基因组的抗CGMMV抗性渗入片 段。其他CGMMV抗性药西瓜种质也可以通过测试这些种质对CGMMV的抗性来鉴定，优 选与从保藏号NCIMB 42624保藏的种子生长的植物(或其抗性子代)和易感对照(例如品种 SugarBaby)比较。例如，可以使用如实施例中所述的机械叶接种和/或SNP标记分析(基因 型分型)和/或RT-qPCR，鉴定这样的药西瓜种质，所述药西瓜种质与自保藏号NCIMB 42624 的保藏种子生长的植物(或其抗性子代)具有相同的抗性水平和/或相同或非常相似的病毒 RNA水平。也可以通过分析表1和表6中一个或多个SNP标记的SNP标记基因型来鉴定 CGMMV抗性药西瓜种质。对于SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和/或SNP18中的 一个或多个或全部，与药西瓜供体NCIMB 42624包含相同的核苷酸(即供体核苷酸)的药西 瓜种质，因此将最有可能在其基因组中包含QTL7.1。同样地，对于SNP19，SNP20，SNP21， SNP22，SNP23和/或SNP24中的一个或多个或全部，与药西瓜供体NCIMB 42624包含相同 的核苷酸的药西瓜种质因此最可能在其基因组中包含QTL9.1。同样的情况也适用于QTL1.1， QTL4.1和QTL5.2以及与这些QTL连锁的各个SNP标记(例如，参见表1和6)。
一方面，根据本发明的西瓜属植物细胞或西瓜属植物包括具有任何程度倍性的西瓜属植 物，包括具有偶数倍性(2n，4n，6n，8n等)的植物和具有非偶数倍性(3n，5n等)的植物。 由于QTL7.1和QTL9.1赋予的抗性是显性的，因此即使渗入片段在偶数多倍体中处于杂合状 态(2n中1个拷贝，4n中2个拷贝，8n中4个拷贝，等等)，植物细胞和植物也具有CGMMV抗性。
多倍体化在植物中很普遍。它负责增加遗传多样性和产生在健壮性，大小，活力和抗病 性上显示增强的物种。多倍体植物的明显优势是杂种优势和基因冗余。
许多如今大面积和种植园栽培的作物都经历过一个或多个基因组复制。示例是棉花，马 铃薯，面包小麦，油料种子，玉米，大豆，向日葵，香蕉，苹果和咖啡(Renny-Byfield7Wendel, 2014,American J.Botany,101(10),1711-1725)。
特别是在蔬菜育种中，多种植物的多倍体是通过使用包括秋水仙碱(colchicine)，秋水仙 胺(colchamine)，黄草消(oryzalin)，秋水米特(colcemid)，氟乐林(trifluralin)或甲基胺草磷 (amiprophosmethyl)的化学物质诱导的。使用化学物质导致的蔬菜基因组复制的例子有，来 自单倍体植物的二倍体抱子甘蓝，四倍体豌豆，四倍体西瓜，四倍体香瓜(muskmelon)，四倍 体洋葱，八倍体野芋，四倍体蛇瓜，三倍体和四倍体凹槽南瓜(fluted pumpkins)，四倍体黄瓜 和四倍体菜豆(french bean)(Kazi,2015,J.GlobalBiosciences 4(3),1774-1779)。
一方面，本发明涉及具有任何倍性的根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物， 其中倍性可以是偶数或非偶数的，优选倍性为2n，3n或4n。
关于非偶数倍性，本发明的一个优选实施方案涉及，三倍体(3n)的根据本发明的非基 因工程西瓜属植物细胞或植物。一方面，所述植物细胞或植物是普通西瓜亚种，并且是三倍 体的，并且在三个同源染色体中的至少一个上，或者在三个染色体中的两个上，或者优选地 在所有三个同源染色体上(即，植物细胞或植物在赋予CGMMV抗性的渗入片段上是纯合的)， 包含渗入片段。这样的三倍体植物、或可以生长这种三倍体植物的种子，可以通过使包含例 如纯合形成的渗入片段的二倍体西瓜杂交包含例如纯合形式的渗入片段(在四个拷贝中，例如 通过纯合二倍体的染色体加倍来产生)的四倍体西瓜，而容易地产生。产生的种子是三倍体种 子，从该种子可以生长三倍体西瓜植物。这样的三倍体种子和三倍体植物对CGMMV具有抗 性，并且是本发明的一个方面。
一方面，三倍体植物是栽培的西瓜植物、植物部分或细胞，其包含QTL7.1和/或QTL9.1， 优选为纯合形式(即三个拷贝)。任选地，栽培的西瓜植物、植物部分或细胞还包含纯合形 式(三个拷贝)的选自QTL1.1，QTL4.1和QTL5.2的QTL。因此，在三倍体植物细胞或植物中，每个QTL的渗入片段以三个拷贝存在(包含三个重组染色体，例如三个重组染色体7和/或9)，并且与该QTL连锁的一个或多个SNP标记以三个拷贝存在并在三个拷贝中包含 供体核苷酸。
一方面，三倍体植物是栽培的西瓜植物，其包含纯合形式(即三个拷贝)的选自QTL1.1， QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1的一个或多个或全部QTL。由此，与每个QTL连锁的 SNP标记之一或多个的供体核苷酸在三倍体植物或植物细胞中优选以三个拷贝存在。
关于偶数倍性，本发明的一个优选实施方案涉及二倍体(2n)或四倍体(4n)的根据本 发明的非基因工程西瓜属植物细胞或植物。一方面，所述植物细胞或植物是普通西瓜亚种， 并且是二倍体的，并且包含杂合或纯合形式的渗入片段；在另一方面，所述植物细胞或植物 是普通西瓜亚种，并且是四倍体，并且包含杂合(两个拷贝)或纯合(四个拷贝)形式的渗 入片段。这样的二倍体和四倍体种子以及二倍体和四倍体植物抗CGMMV，并且是本发明的 一个方面。它们可用作生产三倍体CGMMV抗性种子和植物的亲本。
因此，一方面，二倍体植物是栽培的西瓜植物，其包含纯合形式或杂合形式的QTL7.1 和/或QTL9.1。任选地，栽培的西瓜植物、植物部分或细胞还包含纯合形式(两个拷贝)的 选自QTL1.1，QTL4.1和QTL5.2的QTL。因此，当QTL为纯合形式时，例如，在近交系 中，每个QTL的渗入片段在二倍体植物细胞或植物中以两个拷贝存在(包含两个重组染色体，例如两个重组染色体7和/或9)，并且与所述QTL连锁的一个或多个SNP标记以两个拷贝 存在并且在两个拷贝中包含供体核苷酸。
另一方面，二倍体植物是栽培的西瓜植物，其包含纯合形式或杂合形式的选自QTL1.1， QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1的一个或多个或全部QTL。
在另一方面，四倍体植物是栽培的西瓜植物，其包含纯合形式(四个拷贝的QTL7.1和/ 或QTL9.1)或杂合形式(两个拷贝的QTL7.1和QTL9.1)的QTL7.1和/或QTL9.1。任选地，栽培的西瓜植物、植物部分或细胞还包含杂合或纯合形式(分别为两个拷贝或四个拷贝)的选自QTL1.1，QTL4.1和QTL5.2的QTL。
在另一方面，四倍体植物是栽培的西瓜植物，其包含纯合形式或杂合形式的选自QTL1.1， QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1的一个或多个或所有QTL。
在本发明的上下文中，“偶数倍性”是指，细胞或生物体中存在的同源染色体组的数目， 当除以二得到整数。因此，该细胞或生物是二倍体(2n)，四倍体(4n)，六倍体(6n)，八倍体(8n)等。
在本发明的上下文中，“非偶数倍性”是指，细胞或生物体中存在的同源染色体组的数目 除以二时不会得到整数。因此，该细胞或生物是单倍体(1n)，三倍体(3n)等。
在本发明的上下文中，“二倍体植物细胞或植物”是指，具有两组相应的染色体的植物， 营养植物部分，果实，种子或植物细胞，在本文中称为2n。
在本发明的上下文中，“四倍体植物细胞或植物”是指，具有四组相应的染色体的植物， 营养植物部分，果实，种子或植物细胞，在本文中称为4n。
在本发明的上下文中，“三倍体植物细胞或植物”是指，具有三组相应的染色体的植物， 营养植物部分，果实，种子或植物细胞，在本文中称为3n。
本领域通常理解，植物的有性生殖细胞(花粉和胚珠)包含一组染色体，其是所述植物 剩余细胞的染色体组的一半。植物花粉和胚珠可以再生为整株植物。因此，在植物具有偶 数倍性的情况下，通常可以在花粉或胚珠再生时将倍性减半。从具有偶数倍性(例如2n， 4n，6n，8n等)的本发明植物，可以通过花粉或胚珠再生，产生具有二等分的染色体组(例 如分别为1n，2n，3n，4n等)的植物。
根据本发明的二倍体(2n)植物可以例如从包含CGMMV抗性的花粉或胚珠细胞中再生，其中花粉或胚珠细胞从包含CGMMV抗性的四倍体植物获得。优选地，花粉或胚珠细 胞获自包含纯合状态的CGMMV抗性的四倍体植物。然后可以将衍生的二倍体植物用于进 一步育种和产生具有CGMMV抗性的植物。
在本发明的一方面，所述植物是栽培的西瓜，其是二倍体(2n)，四倍体(4n)或三倍体(3n)，并且包含同源染色体中的至少一个染色体，其中该至少一个染色体含有如上所述的赋予CGMMV抗性的渗入片段。在一方面，至少两个，三个或甚至全部四个同源染色体 包含该渗入片段。
三倍体(3n)植物，尤其是三倍体的栽培西瓜植物，可以通过将二倍体(2n)植物与四 倍体(4n)植物杂交来生产。来自所述杂交的杂种植物种子将是三倍体(3n)。
相互杂交的二倍体(2n)和四倍体(4n)植物中至少一个具有CGMMV抗性。优选地，相互杂交的根据本发明的二倍体(2n)和四倍体(4n)植物均具有CGMMV抗性。一方面， 二倍体和四倍体植物，特别是栽培的西瓜植物，均是渗入片段的纯合子(即，二倍体包含两 个拷贝的渗入片段，四倍体包括四个拷贝的渗入片段)，所得三倍体包括三个拷贝的渗入片 段。
非偶数倍性的植物，例如三倍体(3n)植物，通常是雄性和雌性不育植物，因为在减数 分裂过程中，染色体无法平均分配给子细胞。因此，可以种植具有非偶数倍性的种子，例如 三倍体植物，以生产无籽果实。
一方面，二倍体植物是栽培的西瓜植物，其包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片 段，例如来自NCIMB 42624或其CGMMV抗性后代，所述片段将CGMMV抗性赋予到栽培 的西瓜植物上。由于NCIMB 42624中有五个QTL，因此一方面，二倍体植物是栽培的西瓜 植物，其包含选自QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1的一个或多个或所有QTL。
如上所述，可以通过将来自供体(例如，NCIMB 42624或其CGMMV抗性后代)的CGMMV抗性基因座回交(一次或多次回交)到栽培西瓜的优良品系或品种中，来生产这种 栽培西瓜植物。通过使回交的植物自交一次或多次，渗入片段(一个或多个)将变为纯合的，并且植物将包含与在供体中一样的或可从供体中获得的CGMMV抗性基因座，其中供体例如是NCIMB 42624。
使该二倍体的染色体加倍将产生渗入片段是纯合的四倍体，并且该植物将包含与供体(例 如NCIMB42624)中一样的或可从供体获得的CGMMV抗性基因座。随后纯合二倍体与纯合 四倍体的杂交可以产生三倍体，其包含三个拷贝的、与供体(NCIMB 42624)中一样的或可从 供体获得的、CGMMV抗性基因座。
以此方式，可以制备仅包含五个QTL之一的二倍体西瓜植物，但是也可以制备包含不同 QTL组合的植物。同样，可以制备包含仅一个QTL或不同QTL组合的四倍体和三倍体。
包含显性QTL(QTL7.1和/或QTL9.1)中的至少一个的栽培西瓜植物是本文的一个具体实 施方案。任选地，这些植物在其基因组中可以，优选地以纯合形式，包含隐性QTL(QTL1.1， QTL4.1和/或QTL5.2)中的一个或多个。
本文提供的SNP可用于多种目的。它们可用于定义包含QTL的区域，或检测(例如在供体材料中或在栽培材料中，例如在诊断分析中)包含QTL的渗入片段，或可用于标记辅助育种方法，用于将QTL从供体转移到受体植物或从一个育种系或品种转移到另一个育种系或 品种。
上表1显示与QTL连锁的SNP标记，以及在西瓜基因组中的位置，即在栽培西瓜的相应染色体上的位置。还显示了抗性供体的SNP基因型，其中供体对于所述SNP和所述序列 是纯合的(例如，SNP1的供体SNP或供体序列是SEQ ID NO：1的核苷酸51位的“胞嘧啶”(‘C‘)因此，该二倍体供体的基因型为“CC”(“胞嘧啶/胞嘧啶”)，包含两个拷贝的SEQ ID NO：1 和两个拷贝的SNP1的供体核苷酸)。
由于其他药西瓜供体中可能存在QTL变体，因此供体SNP可以以略有变化的核苷酸序 列存在，例如进行序列的成对比对时，SEQ ID NO：1的一个，两个或三个核苷酸可以与SEQ ID NO：1的核苷酸不同，但仍在等同位置具有该药西瓜供体的SNP核苷酸(对于SNP1，这是胞嘧啶)。
因此，“SNP1”或“SNP1标记”在本文中指SEQ ID NO：1或与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP1，当提及药西瓜供体核苷酸，即SEQID NO：1或与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51的胞嘧啶('C') 时，因为SEQ ID NO：1在核苷酸51位包含供体核苷酸(即，胞嘧啶)，因此该提及可以等同 于提及SEQ ID NO：1本身(而不提及SEQ ID NO：1的51位核苷酸)、或与SEQ ID NO：1至少具有95％序列同一性并且在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。因此，包含来自CGMMV 抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP1的供体核苷酸(即核苷酸51位的 胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：1”或“与SEQ ID NO：1至少95％序列同一性且在核苷酸51 位或在成对比对时在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对时，等同位置可能会因 例如核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、50或52或53。序列同 一性优选地通过成对比对来确定，例如可以使用Emboss程序“Needle”。当包含SNP1供体核 苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO：1(或与SEQ ID NO： 1具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。三倍体植物或细胞将包含三个拷贝， 四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP1供体核苷酸的渗入片段为杂合形 式(一对同源染色体中只有一个染色体具有该渗入)时，二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：1(或与SEQ ID NO：1具有95％的序列同一性的序列)。缺少该渗入片段的另一个染 色体在SEQ ID NO：1(SNP1)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸，即腺嘌呤，鸟嘌呤或胸 腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于 SNP1，这是胸腺嘧啶，因为这是在本文的回交中使用的轮回亲本。
“序列同一性”和“序列相似性”可以通过使用整体或局部比对算法对两个肽或两个核苷酸 序列进行比对来确定。当序列通过例如程序GAP或BESTFIT或Emboss程序“Needle”(使用 默认参数，请参见下文)进行最佳比对时共有至少一定百分比的最小序列同一性(进一步在 下面定义)，则可以将序列称为“基本相同”。这些程序使用Needleman和Wunsch全局比对 算法在两个序列的整个长度上进行比对，从而最大程度地增加匹配数并最大程度地减少空位 数。通常，使用默认参数，空位创建罚分＝10，空位延伸罚分＝0.5(核苷酸和蛋白质比对均 使用)。对于核苷酸，默认评分矩阵为DNAFULL，对于蛋白质，默认评分矩阵为Blosum62 (Henikoff&Henikoff,l 992,PNAS 89,1 09 1 5-1 09 1 9)。序列比对和百分比序列同一性的分数 可以例如使用计算机程序确定，例如EMBOSS，其可从万维网上的ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/获得。备选地，可以通过对数据库如FASTA，BLAST等进行搜索来确定序列相似性或同一性，但是优选检回命中物并成对比对以比较序列同一性。 如果序列同一性百分比至少为95％，98％或99％(由Emboss“needle”使用默认参数确定，即 空位创建罚分＝10，空位延伸罚分＝0.5，对核酸使用评分矩阵DNAFULL，对蛋白质使用 Blosum62)，则两个蛋白质或两个蛋白质结构域或两个核酸序列具有“实质性序列同一性”。 当提及一个核酸序列(例如DNA或基因组DNA)与参考序列具有“实质性序列同一性”或具 有至少80％的序列同一性，例如与参考序列具有至少95％，98％或99％的核酸序列同一性， 在一个实施方案中，所述核苷酸序列将被认为与该给定核苷酸序列基本相同，并且可以使用 严格杂交条件来鉴定。
“严格杂交条件”可以用于鉴定与给定核苷酸序列基本相同的核苷酸序列。严格条件取决 于序列，并且在不同情况下会有所不同。通常，将严格条件选择为比特定序列在规定的离子 强度和pH下的热熔点(Tm)低约5℃。Tm是温度(在规定的离子强度和pH下)，在该温度下50％的靶序列与完全匹配的探针杂交。典型地，选择严格条件，其中在pH 7下盐浓度为约0.02摩尔且温度为至少60℃。降低盐浓度和/或提高温度会增加严格性。RNA-DNA 杂交的严格条件(使用例如100nt的探针的Northern印迹)是，例如，包括在0.2X SSC中在 63℃进行20分钟洗涤至少1次的条件，或等同条件。DNA-DNA杂交的严格条件(使用例 如100nt探针的Southern印迹)是，例如，包括在0.2X SSC中在至少50℃(通常大约55℃) 进行20分钟洗涤至少1次(通常2次)的条件，或等同条件。也参加Sambrook et al.(1989) 和Sambrook and Russell(2001)。
因此，“SNP2”或“SNP2标记”在本文中指SEQ ID NO：2的核苷酸51，或与SEQ ID NO：2具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP2，当提及药西瓜供体核 苷酸，即SEQ ID NO：2或与SEQ ID NO：2具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51的 鸟嘌呤('G')时，因为SEQ ID NO：2在核苷酸51位包含供体核苷酸(即鸟嘌呤)，因此该 提及可以等同于提及SEQ ID NO：2本身(而不提及SEQ ID NO：2第51位的核苷酸)、或与 SEQ ID NO：2至少具有95％序列同一性并且在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。因此，包含 来自CGMMV抗性药西瓜供体的渐渗片段的植物或植物细胞可包含SNP2的供体核苷酸(即， 核苷酸51位的鸟嘌呤)，或“包含SEQ ID NO：2”或“与SEQ ID NO：2具有至少95％的序列 同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对 时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、 50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。 当包含SNP2供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO： 2(或与SEQ IDNO：2具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG"基因型。三倍体植物或 细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP2供体核苷 酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包 含一个拷贝的SEQID NO：2(或与SEQ ID NO：2具有至少95％序列同一性的序列)。缺 少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：2(SNP2)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸， 即腺嘌呤，胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方 面，如表1所示，对于SNP2，这是腺嘌呤，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
因此，“SNP3”或“SNP3标记”在本文中指SEQ ID NO：3或与SEQ ID NO：3具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP3，当提及药西瓜供体核苷酸，即，SEQID NO：3或与SEQ ID NO：3具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶('C')时，因为SEQ ID NO：3在核苷酸51位包含供体核苷酸(即胞嘧啶)，因此该提及可以等同 于提及SEQ ID NO：3本身(而不提及在SEQ ID NO：3的第51位的核苷酸)、或与SEQ ID NO：3具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。因此，包含来自CGMMV 抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP3的供体核苷酸(即核苷酸51位的 胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：3”、或“与SEQ ID NO：3具有至少95％序列同一性且在成对 比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对时，等同位置可 因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、50或52或53。 序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。当包含SNP3供体 核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO：3(或与SEQ ID NO： 3具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。三倍体植物或细胞将包含三个拷贝， 四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP3供体核苷酸的渗入片段为杂合形 式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO： 3(或与SEQ ID NO：3具有至少95％序列同一性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：3(SNP3)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸，即腺嘌呤，鸟嘌呤或胸腺嘧啶， 即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP3，这 是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
因此，“SNP4”或“SNP4标记”在本文中指SEQ ID NO：4或与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP4，当提及药西瓜供体核苷酸，即， 在SEQ ID NO：4或与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胞嘧 啶('C')时，因为SEQ ID NO：4在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胞嘧啶)，因此该提 及可以等同于提及SEQ ID NO：4本身(不提及在SEQ ID NO：4的第51位的核苷酸)、或 与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。因此，包含 来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP4的供体核苷酸(即 核苷酸51位的胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：4”、或“与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同 一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对时， 等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、50或 52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。当包含 SNP4供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO：4(或 与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。三倍体植物或细胞将 包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP4供体核苷酸的渗 入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个 拷贝的SEQ IDNO：4(或与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性的序列)。缺少渗入 片段的另一条染色体在SEQ ID NO：4(SNP4)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸，即腺嘌 呤，鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面，如 表1所示，对于SNP4，这是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
因此，“SNP5”或“SNP5标记”在本文中指SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP5，当提及药西瓜供体核苷酸，即， 在SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌 呤('G')时，因为SEQ ID NO：5在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即鸟嘌呤)，因此该提 及可以等同于提及SEQ ID NO：5本身(不提及在SEQ ID NO：5的第51位的核苷酸)、或 与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。因此，包含 来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP5的供体核苷酸(即 核苷酸51位的鸟嘌呤)或“包含SEQ ID NO：5”、或“与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同 一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对时， 等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、50或 52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。当包含 SNP5供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO：5(或 与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG”基因型。三倍体植物或细胞将 包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP5供体核苷酸的渗 入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个 拷贝的SEQ IDNO：5(或与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性的序列)。缺少渗入 片段的另一条染色体在SEQ ID NO：5(SNP5)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸，即腺嘌 呤，胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面，如 表1所示，对于SNP5，这是鸟嘌呤，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
因此，“SNP6”或“SNP6标记”在本文中指SEQ ID NO：6或与SEQ ID NO：6具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP6，当提及药西瓜供体核苷酸，即， 在SEQ ID NO：6或与SEQ ID NO：6具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胸腺 嘧啶('T')时，因为SEQ ID NO：6在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胸腺嘧啶)，因此 该提及可以等同于提及SEQ ID NO：6本身(不提及在SEQ ID NO：6的第51位的核苷酸)、 或与SEQ IDNO：6具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胸腺嘧啶的序列。因此， 包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP6的供体核苷酸 (即核苷酸51位的胸腺嘧啶)或“包含SEQ ID NO：6”、或“与SEQ ID NO：6具有至少95 ％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成 对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷 酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。 当包含SNP6供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO： 6(或与SEQ ID NO：6具有至少95％序列同一性的序列)，即“TT”基因型。三倍体植物或 细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP6供体核苷 酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包 含一个拷贝的SEQ ID NO：6(或与SEQ ID NO：6具有至少95％序列同一性的序列)。缺 少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：6(SNP6)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸， 即腺嘌呤，胞嘧啶或鸟嘌呤，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面， 如表1所示，对于SNP6，这是胞嘧啶，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
SEQ ID NO：1(包含SNP1)、SEQ ID NO：2(包含SNP2)、SEQ ID NO：3(包含SNP3)、SEQ ID NO：4(包含SNP4)、SEQ ID NO：5(包含SNP5)和SEQ ID NO：6(包含SNP6)， 与供体1号染色体上的CGMMV抗性QTL1.1物理连锁。标记SNP5连锁最为紧密。因此， 来自药西瓜的包含CGMMV抗性的渗入片段包含SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6 中一个或多个或所有这些SNP标记的抗性供体核苷酸(和包含该供体核苷酸的序列或与其具 有至少95％序列同一性并包含该供体核苷酸的序列)，更优选包含选自SNP4，SNP5和SNP6 的一个或多个或所有SNP标记的抗性供体核苷酸，更优选包含SNP4和/或SNP5或SNP5和/ 或SNP6的供体核苷酸，甚至更优选地，它至少包含SNP5的抗性供体核苷酸(并因此包含 SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5至少具有95％序列同一性并且在核苷酸51包含该供体核 苷酸的序列)。包含这种渗入片段，优选呈纯合形式，的栽培西瓜植物、植物细胞和植物部 分是本发明的一个方面。
因此，“SNP7”或“SNP7标记”在本文中指SEQ ID NO：7或与SEQ ID NO：7具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP7，当提及药西瓜供体核苷酸，即， 在SEQ ID NO：7或与SEQ ID NO：7具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胸腺 嘧啶('T')时，因为SEQ ID NO：7在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胸腺嘧啶)，因此 该提及可以等同于提及SEQ ID NO：7本身(不提及在SEQ ID NO：7的第51位的核苷酸)、 或与SEQ IDNO：7具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胸腺嘧啶的序列。因此， 包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP7的供体核苷酸 (即核苷酸51位的胸腺嘧啶)或“包含SEQ ID NO：7”、或“与SEQ ID NO：7具有至少95 ％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成 对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷 酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。 当包含SNP7供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO： 7(或与SEQ ID NO：7具有至少95％序列同一性的序列)，即“TT”基因型。三倍体植物或 细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP7供体核苷 酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包 含一个拷贝的SEQ ID NO：7(或与SEQ ID NO：7具有至少95％序列同一性的序列)。缺 少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：7(SNP7)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸， 即腺嘌呤，胞嘧啶或鸟嘌呤，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面， 如表1所示，对于SNP7，这是腺嘌呤，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
因此，“SNP8”或“SNP8标记”在本文中指SEQ ID NO：8或与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP8，当提及药西瓜供体核苷酸，即， 在SEQ ID NO：8或与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胞嘧 啶('C')时，因为SEQ ID NO：8在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胞嘧啶)，因此该提 及可以等同于提及SEQ ID NO：8本身(不提及在SEQ ID NO：8的第51位的核苷酸)、或 与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。因此，包含 来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP8的供体核苷酸(即 核苷酸51位的胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：8”、或“与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同 一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对时， 等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、50或 52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。当包含 SNP8供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO：8(或 与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。三倍体植物或细胞将 包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP8供体核苷酸的渗 入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个 拷贝的SEQ IDNO：8(或与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同一性的序列)。缺少渗入 片段的另一条染色体在SEQ ID NO：8(SNP8)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸，即腺嘌 呤，鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面，如 表1所示，对于SNP8，这是腺嘌呤，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
因此，“SNP9”或“SNP9标记”在本文中指SEQ ID NO：9或与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP9，当提及药西瓜供体核苷酸，即， 在SEQ ID NO：9或与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌 呤('A')时，因为SEQ ID NO：9在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即腺嘌呤)，因此该提 及可以等同于提及SEQ ID NO：9本身(不提及在SEQ ID NO：9的第51位的核苷酸)、或 与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含腺嘌呤的序列。因此，包含 来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP9的供体核苷酸(即 核苷酸51位的腺嘌呤)或“包含SEQ ID NO：9”、或“与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同 一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。当成对比对时， 等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是核苷酸49、50或 52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序“Needle”。当包含 SNP9供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的SEQ ID NO：9(或 与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同一性的序列)，即“AA”基因型。三倍体植物或细胞将 包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含SNP9供体核苷酸的渗 入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个 拷贝的SEQ IDNO：9(或与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同一性的序列)。缺少渗入 片段的另一条染色体在SEQ ID NO：9(SNP9)的核苷酸51处包含任何其他核苷酸，即胞嘧 啶，鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的轮回亲本。在一方面，如 表1所示，对于SNP9，这是鸟嘌呤，因为这是本文回交中使用的轮回亲本。
SEQ ID NO：7(包含SNP7)、SEQ ID NO：8(包含SNP8)、SEQ ID NO：9(包含SNP9)， 与供体4号染色体上的CGMMV抗性QTL4.1物理连锁。标记SNP8连锁最为紧密。因此， 来自药西瓜的包含CGMMV抗性的渗入片段在一方面包含SNP7，SNP8，和SNP9中一个或 多个或所有这些SNP标记的抗性供体核苷酸(和包含该供体核苷酸的序列或与其具有至少95 ％序列同一性并包含该供体核苷酸的序列)，最优选包含SNP标记SNP7和/或SNP8或SNP8 和/或SNP9的抗性供体核苷酸，甚至最优选地，它至少包含SNP8的抗性供体核苷酸(并因 此包含SEQ IDNO：8或与SEQ ID NO：8至少具有95％序列同一性并且在核苷酸51包含该 供体核苷酸的序列)。包含这种渗入片段，优选呈纯合形式，的栽培西瓜植物、植物细胞和 植物部分是本发明的一个方面。
因此，“SNP10”或“SNP10标记”在本文中指SEQ ID NO：10或与SEQ ID NO：10具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP10，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：10或与SEQ ID NO：10具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的胸腺嘧啶('T')时，因为SEQ ID NO：10在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胸腺嘧啶)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：10本身(不提及在SEQ ID NO：10的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：10具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胸腺嘧啶的序 列。因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP10 的供体核苷酸(即核苷酸51位的胸腺嘧啶)或“包含SEQ ID NO：10”、或“与SEQ ID NO：10具有至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸 的序列”。当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例 如可以是核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss 程序“Needle”。当包含SNP10供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷 贝的SEQ ID NO：10(或与SEQ ID NO：10具有至少95％序列同一性的序列)，即“TT”基 因型。三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当 包含SNP10供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：10(或与SEQ ID NO：10具有至少95％序列 同一性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：10(SNP10)的核苷酸51处 包含任何其他核苷酸，即腺嘌呤，胞嘧啶或鸟嘌呤，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用 的轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP10，这是胞嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
因此，“SNP11”或“SNP11标记”在本文中指SEQ ID NO：11或与SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP11，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：11或与SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的腺嘌呤('A')时，因为SEQ ID NO：11在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即腺嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：11本身(不提及在SEQ ID NO：11的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含腺嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP11的供 体核苷酸(即核苷酸51位的腺嘌呤)或“包含SEQ ID NO：11”、或“与SEQ ID NO：11具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP11供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：11(或与SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一性的序列)，即“AA”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP11供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：11(或与SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：11(SNP11)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即胞嘧啶、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP11，这是鸟嘌呤，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
因此，“SNP12”或“SNP12标记”在本文中指SEQ ID NO：12或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP12，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：12或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的胸腺嘧啶('T')时，因为SEQ ID NO：12在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胸腺嘧啶)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：12本身(不提及在SEQ ID NO：12的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胸腺嘧啶的序 列。因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP12 的供体核苷酸(即核苷酸51位的胸腺嘧啶)或“包含SEQ ID NO：12”、或“与SEQ ID NO： 12具有至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸 的序列”。当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例 如可以是核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss 程序“Needle”。当包含SNP12供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷 贝的SEQ ID NO：12(或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性的序列)，即“TT”基 因型。三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当 包含SNP12供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：12(或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列 同一性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：12(SNP12)的核苷酸51处 包含任何其他核苷酸，即腺嘌呤，胞嘧啶或鸟嘌呤，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用 的轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP12，这是胞嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
SEQ ID NO：10(包含SNP10)、SEQ ID NO：11(包含SNP11)、SEQ ID NO：12(包 含SNP12)，与供体5号染色体上的CGMMV抗性QTL5.2物理连锁。标记SNP11连锁最为 紧密。因此，来自药西瓜的包含CGMMV抗性的渗入片段在一方面包含SNP10，SNP11，和 SNP12中一个或多个或所有这些SNP标记的抗性供体核苷酸(和包含该供体核苷酸的序列或 与其具有至少95％序列同一性并包含该供体核苷酸的序列)，最优选包含SNP标记SNP10 和/或SNP11或SNP11和/或SNP12的供体核苷酸，甚至最优选地，它至少包含SNP11的抗 性供体核苷酸(并因此包含SEQ ID NO：11或与SEQ ID NO：11至少具有95％序列同一性 并且在核苷酸51包含该供体核苷酸的序列)。包含这种渗入片段，优选呈纯合形式，的栽培 西瓜植物、植物细胞和植物部分是本发明的一个方面。
因此，“SNP13”或“SNP13标记”在本文中指SEQ ID NO：13或与SEQ ID NO：13具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP13，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：13或与SEQ ID NO：13具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的腺嘌呤('A')时，因为SEQ ID NO：13在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即腺嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：13本身(不提及在SEQ ID NO：13的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：13具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含腺嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP13的供 体核苷酸(即核苷酸51位的腺嘌呤)或“包含SEQ ID NO：13”、或“与SEQ ID NO：13具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP13供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：13(或与SEQ ID NO：13具有至少95％序列同一性的序列)，即“AA”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP13供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：13(或与SEQ ID NO：13具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：13(SNP13)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即胞嘧啶、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP13，这是鸟嘌呤，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
因此，“SNP14”或“SNP14标记”在本文中指SEQ ID NO：14或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP14，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：14或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的腺嘌呤('A')时，因为SEQ ID NO：14在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即腺嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：14本身(不提及在SEQ ID NO：14的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含腺嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP14的供 体核苷酸(即核苷酸51位的腺嘌呤)或“包含SEQ ID NO：14”、或“与SEQ ID NO：14具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP14供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：14(或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性的序列)，即“AA”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP14供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：14(或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：14(SNP14)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即胞嘧啶、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP14，这是鸟嘌呤，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
因此，“SNP15”或“SNP15标记”在本文中指SEQ ID NO：15或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP15，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：15或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的鸟嘌呤('G')时，因为SEQ ID NO：15在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即鸟嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：15本身(不提及在SEQ ID NO：15的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP15的供 体核苷酸(即核苷酸51位的鸟嘌呤)或“包含SEQ ID NO：15”、或“与SEQ ID NO：15具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP15供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：15(或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP15供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：15(或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：15(SNP15)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP15，这是腺嘌呤，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
因此，“SNP16”或“SNP16标记”在本文中指SEQ ID NO：16或与SEQ ID NO：16具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP16，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：16或与SEQ ID NO：16具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的鸟嘌呤('G')时，因为SEQ ID NO：16在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即鸟嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：16本身(不提及在SEQ ID NO：16的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：16具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP16的供 体核苷酸(即核苷酸51位的鸟嘌呤)或“包含SEQ ID NO：16”、或“与SEQ ID NO：16具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP16供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：16(或与SEQ ID NO：16具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP16供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：16(或与SEQ ID NO：16具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：16(SNP16)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP16，这是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
因此，“SNP17”或“SNP17标记”在本文中指SEQ ID NO：17或与SEQ ID NO：17具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP17，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：17或与SEQ ID NO：17具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的胸腺嘧啶('T')时，因为SEQ ID NO：17在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胸腺嘧啶)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：17本身(不提及在SEQ ID NO：17的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：17具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胸腺嘧啶的序 列。因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP17 的供体核苷酸(即核苷酸51位的胸腺嘧啶)或“包含SEQ ID NO：17”、或“与SEQ ID NO： 17具有至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸 的序列”。当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例 如可以是核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss 程序“Needle”。当包含SNP17供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷 贝的SEQ ID NO：17(或与SEQ ID NO：17具有至少95％序列同一性的序列)，即“TT”基 因型。三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当 包含SNP17供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时，二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：17(或与SEQ ID NO：17具有至少95％序列 同一性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：17(SNP17)的核苷酸51处 包含任何其他核苷酸，即腺嘌呤，胞嘧啶或鸟嘌呤，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用 的轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP17，这是胞嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
因此，“SNP18”或“SNP18标记”在本文中指SEQ ID NO：18或与SEQ ID NO：18具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP18，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：18或与SEQ ID NO：18具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的腺嘌呤('A')时，因为SEQ ID NO：18在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即腺嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：18本身(不提及在SEQ ID NO：18的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：18具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含腺嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP18的供 体核苷酸(即核苷酸51位的腺嘌呤)或“包含SEQ ID NO：18”、或“与SEQ ID NO：18具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP18供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：18(或与SEQ ID NO：18具有至少95％序列同一性的序列)，即“AA”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP18供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：18(或与SEQ ID NO：18具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：18(SNP18)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即胞嘧啶、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP18，这是鸟嘌呤，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
SEQ ID NO：13(包含SNP13)、SEQ ID NO：14(包含SNP14)、SEQ ID NO：15(包 含SNP15)、SEQ ID NO：16(包含SNP16)、SEQ ID NO：17(包含SNP17)和SEQ ID NO： 18(包含SNP18)，与供体7号染色体上的CGMMV抗性QTL7.1物理连锁。标记SNP14连 锁最为紧密。因此，来自药西瓜的包含CGMMV抗性的渗入片段包含SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中一个或多个或所有这些SNP标记的抗性供体核苷酸(和包含该供 体核苷酸的序列或与其具有至少95％序列同一性并包含该供体核苷酸的序列)，更优选包含 选自SNP13，SNP14和SNP15的一个或多个或所有SNP标记的抗性供体核苷酸，更优选包 含SNP13和/或SNP14或SNP14和/或SNP15的供体核苷酸，甚至更优选地，它至少包含SNP14 的抗性供体核苷酸(并因此包含SEQ ID NO：14或与SEQ ID NO：14至少具有95％序列同 一性并且在核苷酸51包含该供体核苷酸的序列)。包含这种渗入片段，呈杂合或纯合形式， 的栽培西瓜植物、植物细胞和植物部分是本发明的一个方面。
因此，“SNP19”或“SNP19标记”在本文中指SEQ ID NO：19或与SEQ ID NO：19具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP19，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：19或与SEQ ID NO：19具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的胞嘧啶('C')时，因为SEQ ID NO：19在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胞嘧啶)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：19本身(不提及在SEQ ID NO：19的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：19具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP19的供 体核苷酸(即核苷酸51位的胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：19”、或“与SEQ ID NO：19具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP19供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：19(或与SEQ ID NO：19具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP19供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：19(或与SEQ ID NO：19具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：19(SNP19)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP19，这是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
因此，“SNP20”或“SNP20标记”在本文中指SEQ ID NO：20或与SEQ ID NO：20具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP20，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：20或与SEQ ID NO：20具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的鸟嘌呤('G')时，因为SEQ ID NO：20在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即鸟嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：20本身(不提及在SEQ ID NO：20的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：20具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP20的供 体核苷酸(即核苷酸51位的鸟嘌呤)或“包含SEQ ID NO：20”、或“与SEQ ID NO：20具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP20供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：20(或与SEQ ID NO：20具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP20供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：20(或与SEQ ID NO：20具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：20(SNP20)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP20，这是胞嘧啶，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
因此，“SNP21”或“SNP21标记”在本文中指SEQ ID NO：21或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP21，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：21或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的鸟嘌呤('G')时，因为SEQ ID NO：21在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即鸟嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：21本身(不提及在SEQ ID NO：21的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP21的供 体核苷酸(即核苷酸51位的鸟嘌呤)或“包含SEQ ID NO：21”、或“与SEQ ID NO：21具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP21供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：21(或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP21供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：21(或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：21(SNP21)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP21，这是腺嘌呤，因为这是本文回交中使用的 轮回亲本。
因此，“SNP22”或“SNP22标记”在本文中指SEQ ID NO：22或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP22，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：22或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的胞嘧啶('C')时，因为SEQ ID NO：22在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胞嘧啶)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：22本身(不提及在SEQ ID NO：22的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP22的供 体核苷酸(即核苷酸51位的胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：22”、或“与SEQ ID NO：22具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP22供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：22(或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP22供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：22(或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：22(SNP22)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP22，这是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
因此，“SNP23”或“SNP23标记”在本文中指SEQ ID NO：23或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP23，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：23或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的胞嘧啶('C')时，因为SEQ ID NO：23在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即胞嘧啶)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：23本身(不提及在SEQ ID NO：23的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP23的供 体核苷酸(即核苷酸51位的胞嘧啶)或“包含SEQ ID NO：23”、或“与SEQ ID NO：23具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP23供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：23(或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性的序列)，即“CC”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP23供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：23(或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：23(SNP23)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、鸟嘌呤或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP23，这是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
因此，“SNP24”或“SNP24标记”在本文中指SEQ ID NO：24或与SEQ ID NO：24具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51。本文中，对于SNP24，当提及药西瓜供体核苷酸，即，在SEQ ID NO：24或与SEQ ID NO：24具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位 的鸟嘌呤('G')时，因为SEQ ID NO：24在核苷酸51位包含该供体核苷酸(即鸟嘌呤)， 因此该提及可以等同于提及SEQ ID NO：24本身(不提及在SEQ ID NO：24的第51位的核 苷酸)、或与SEQ ID NO：24具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位包含鸟嘌呤的序列。 因此，包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段的植物或植物细胞可包含SNP24的供 体核苷酸(即核苷酸51位的鸟嘌呤)或“包含SEQ ID NO：24”、或“与SEQ ID NO：24具有 至少95％序列同一性且在成对比对时在核苷酸51位或在等同位置包含该供体核苷酸的序列”。 当成对比对时，等同位置可因(例如)核苷酸插入或缺失而是稍有不同的位置，例如可以是 核苷酸49、50或52或53。序列同一性优选地通过成对比对来确定，使用例如Emboss程序 “Needle”。当包含SNP24供体核苷酸的渗入片段为纯合形式时，二倍体细胞包含两个拷贝的 SEQ ID NO：24(或与SEQ ID NO：24具有至少95％序列同一性的序列)，即“GG”基因型。 三倍体植物或细胞将包含三个拷贝，四倍体植物或细胞将包含四个拷贝。同样地，当包含 SNP24供体核苷酸的渗入片段为杂合形式(一对同源染色体中只有一个染色体具有渗入)时， 二倍体细胞包含一个拷贝的SEQ ID NO：24(或与SEQ ID NO：24具有至少95％序列同一 性的序列)。缺少渗入片段的另一条染色体在SEQ ID NO：24(SNP24)的核苷酸51处包含 任何其他核苷酸，即腺嘌呤、胞嘧啶或胸腺嘧啶，即易感轮回亲本的序列。这取决于使用的 轮回亲本。在一方面，如表1所示，对于SNP24，这是胸腺嘧啶，因为这是本文回交中使用 的轮回亲本。
SEQ ID NO：19(包含SNP19)、SEQ ID NO：20(包含SNP20)、SEQ ID NO：21(包 含SNP21)、SEQ ID NO：22(包含SNP22)、SEQ ID NO：23(包含SNP23)和SEQ ID NO： 24(包含SNP24)，与供体9号染色体上的CGMMV抗性QTL9.1物理连锁。标记SNP22连 锁最为紧密。因此，来自药西瓜的包含CGMMV抗性的渗入片段包含SNP19，SNP20，SNP21， SNP22，SNP23和SNP24中一个或多个或所有这些SNP标记的抗性供体核苷酸(和包含该供 体核苷酸的序列或与其具有至少95％序列同一性并包含该供体核苷酸的序列)，更优选包含 选自SNP21，SNP22和SNP23的一个或多个或所有SNP标记的抗性供体核苷酸，更优选包 含SNP21和/或SNP22或SNP22和/或SNP23的供体核苷酸，甚至更优选地，它至少包含SNP22 的抗性供体核苷酸(并因此包含SEQ ID NO：22或与SEQ ID NO：22至少具有95％序列同 一性并且在核苷酸51包含该供体核苷酸的序列)。包含这种渗入片段，呈杂合或纯合形式， 的栽培西瓜植物、植物细胞和植物部分是本发明的一个方面。
在一方面，本发明提供一种栽培的西瓜植物，植物部分或植物细胞，其包含来自物种药 西瓜的CGMMV抗性供体植物的染色体7和/或染色体9上的渗入片段，其中染色体7上的渗入片段包含来自供体的QTL7.1和CGMMV抗性供体植物的序列，所述序列介于SNP13和SNP18之间，或SNP13和SNP17之间，或SNP13和SNP16之间，或SNP13和SNP15之间， 或SNP13和SNP14之间，或者SNP14和SNP15之间，或者SNP14和SNP16之间，或者SNP14 和SNP17之间，或者SNP14和SNP18之间；优选地，渗入片段包含在SNP13和SNP15之 间，或者在SNP13和SNP14之间，或者在SNP14和SNP15之间的CGMMV抗性供体的序 列；和/或其中染色体9上的渗入片段包含来自供体的QTL9.1和CGMMV抗性供体植物的序 列，所述序列介于SNP19和SNP24之间，或SNP19和SNP23之间，或SNP19和SNP22之 间，或SNP20和SNP24之间，或SNP20和SNP23之间，或SNP20和SNP22之间，或SNP21 和SNP24之间，或SNP21和SNP23之间，或SNP21和SNP22之间，或SNP22和SNP24之 间，或SNP22和SNP23之间；优选地，渗入片段包含在SNP21和SNP23之间、或者在SNP21 和SNP22之间、或者在SNP22和SNP23之间的CGMMV抗性供体的序列。
当在本文中提及渗入片段包含在两个SNP(单核苷酸多态性)“之间”的供体染色体序列 或供体序列(和QTL)时，一方面，这涵盖该两个SNP本身之一或两者也来自抗性供体，即 具有供体核苷酸，但也涵盖两个SNP均不是来自抗性供体，而是仅两个SNP之间的染色体序列来自供体且包含QTL。因此，在一方面，位于包含QTL的渗入片段“侧翼”的SNP标 记核苷酸，可以是渗入片段的一部分(来自供体)，或可以是受体染色体的一部分(来自受 体)。
因此，例如，当来自供体的渗入片段在“SNP13和SNP18之间”时，SNP13和/或SNP18可以包含供体核苷酸，但是渗入片段也可以更短并且包含SNP13和/或SNP18的易感核苷酸，例如，轮回亲本的核苷酸。例如，仅位于SNP13和SNP18之间的序列和SNP可以来自供体， 因此例如，SNP14，SNP15，SNP16和SNP17可以来自供体，或者仅SNP14，SNP15和SNP16 可以来自供体，或者这些SNP标记中仅一个或两个可以来自供体，例如，SNP14，SNP15和 SNP16中只有一个或两个来自供体。因此，包含QTL的渗入片段可以不包含SNP13至SNP18 该组SNP的所有供体核苷酸。
一方面，渗入片段包含SNP13，SNP14和/或SNP15的供体核苷酸中的至少一个，任选地至少两个或全部三个，即渗入片段包含序列SEQ ID NO：13(或与SEQ ID NO：13具有至 少95％序列同一性并在核苷酸51或等同位置包含腺嘌呤的序列)、SEQ ID NO：14(或与 SEQID NO：14具有至少95％序列同一性并且在核苷酸51或等同位置包含腺嘌呤的序列) 和/或SEQ ID NO：15(或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性并在核苷酸51或等同 位置包含鸟嘌呤的序列)中的至少一个，任选地至少两个或三个。渗入片段显然包含来自供 体的QTL7.1，其对原本易感的西瓜植物赋予CGMMV抗性。
同样地，例如，当来自供体的渗入片段在“SNP19和SNP24之间”时，SNP19和/或SNP24 可以包含供体核苷酸，但是渗入片段也可以更短并且包含SNP19和/或SNP24的易感核苷酸， 例如，轮回亲本的核苷酸。例如，仅位于SNP19和SNP24之间的序列和SNP可以来自供体， 因此例如，SNP20,SNP21,SNP22和SNP23可以来自供体，或者仅SNP21,SNP22和SNP23可以来自供体，或者这些SNP标记中仅一个或两个可以来自供体，例如，SNP21,SNP22和SNP23中只有一个或两个来自供体。因此，包含QTL的渗入片段可以不包含SNP19至SNP24 该组SNP的所有供体核苷酸。在一方面，渗入片段包含SNP21，SNP22和/或SNP23的供体 核苷酸中的至少一个，任选地至少两个或全部三个，即渗入片段包含序列SEQ ID NO：21(或 与SEQID NO：21具有至少95％序列同一性并在核苷酸51或等同位置处包含鸟嘌呤的序列)、 SEQID NO：22(或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性并且在核苷酸51或等同位 置上包含胞嘧啶的序列)和/或SEQ ID NO：23(或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同 一性并在核苷酸51或等同位置包含胞嘧啶的序列)中的至少一个，任选地至少两个或三个。 渗入片段显然包含来自供体的QTL9.1，其对原本易感的西瓜植物赋予CGMMV抗性。
一方面，本发明提供一种栽培的西瓜植物、植物部分或植物细胞，其包含来自物种药西 瓜的CGMMV抗性供体植物的染色体7和/或染色体9上的渗入片段，其中染色体7上的渗入片段包含SNP14的CGMMV抗性供体植物的序列(SEQ ID NO：14中核苷酸51位的腺嘌 呤)、或包含SEQ ID NO：14或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性且在核苷酸51 位包含腺嘌呤的序列，和/或其中染色体9上的渗入片段包含SNP22的CGMMV抗性供体植 物的序列(SEQ ID NO：22中核苷酸51位的胞嘧啶)、或包含SEQ ID NO：22或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性并且在核苷酸51位包含胞嘧啶的序列。
在一方面，本发明提供一种栽培的西瓜植物、植物部分或植物细胞，其包含来自物种药 西瓜的CGMMV抗性供体植物的染色体7和/或染色体9上的渗入片段，其中染色体7上的渗入片段包含来自供体的QTL7.1，并且包含在SEQ ID NO：13或与SEQ ID NO：13具有至 少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌呤，和/或在SEQ ID NO：14或与SEQ ID NO： 14具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌呤，和/或在SEQ ID NO：15或与 SEQID NO：15具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或在SEQ ID NO： 16或与SEQ ID NO：16具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或在 SEQID NO：17或与SEQ ID NO：17具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胸腺 嘧啶，和/或在SEQ ID NO：18或与SEQ ID NO：18具有至少95％序列同一性的序列的核苷 酸51位的腺嘌呤；优选地，染色体7上的渗入片段包含在SEQ ID NO：13或与SEQ ID NO： 13具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌呤，和/或在SEQ ID NO：14或与 SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌呤，和/或在SEQ ID NO： 15或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤；和/或其 中染色体9上的渗入片段包含来自供体的QTL9.1，并且包含在SEQ ID NO：19或与SEQ ID NO：19具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胞嘧啶，和/或在SEQ ID NO：20 或与SEQ IDNO：20具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或在SEQ ID NO：21或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤， 和/或在SEQ IDNO：22或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51 位的胞嘧啶，和/或在SEQ ID NO：23或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性的序列 的核苷酸51位的胞嘧啶，和/或在SEQ ID NO：24或与SEQ ID NO：24具有至少95％序列 同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤；优选地，染色体9上的渗入片段包含在SEQ ID NO： 21或与SEQ ID NO：21具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或在 SEQ ID NO：22或与SEQ IDNO：22具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胞嘧 啶，和/或在SEQ ID NO：23或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸 51位的胞嘧啶。
由于与QTL7.1最紧密连锁的标记是SNP14，因此渗入片段优选包含QTL7.1和选自SNP13，SNP14和SNP15中的至少一个，两个或所有三个供体标记，即SEQ ID NO13或与 SEQID NO：13具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌呤，和/或SEQ ID NO14 或与SEQ ID NO：14具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的腺嘌呤，和/或SEQ IDNO15或与SEQ ID NO：15具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤。
由于与QTL9.1最紧密连锁的标记是SNP22，因此渗入片段优选包含QTL9.1和选自SNP21,SNP22和SNP23中的至少一个，两个或所有三个供体标记，即SEQ ID NO:21或与 SEQID NO：21具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO： 22或与SEQ ID NO：22具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ IDNO：23或与SEQ ID NO：23具有至少95％序列同一性的序列的核苷酸51位的胞嘧啶。
可以使用本文和实施例中描述的CGMMV测试在表型上确定QTL是否存在于渗入片段 上。因此，例如可以将包含任何所述SNP的一个或多个供体核苷酸的植物与易感植物杂交， 并且可以分析后代(例如F1)的CGMMV抗性。QTL7.1和QTL9.1都为显性，因此该表型 已经在F1后代中可见。本发明的一个实施方案是仅包含QTL7.1或QTL9.1的植物和植物细 胞，本发明的一个实施方案是在其基因组中包含两个QTL的植物，即包含两个重组染色体： 一个重组染色体7，其包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段；一个重组染色体9， 其包含来自CGMMV抗性药西瓜供体的渗入片段，且优选来自相同的药西瓜供体(但这不是 必需的，它们也可以来自不同的供体)。
如所述进行测试时，包含QTL7.1和/或QTL9.1的栽培西瓜植物具有CGMMV抗性，并且优选具有3或更优选4(无症状)的CGMMV评分。优选地，植物或衍生自植物的接穗在 叶中以及任选地在果实中包含极低水平的CGMMV病毒，其显著低于以相同方式处理的易感 对照。一方面，在这种植物的果实中产生的种子保持不含CGMMV病毒。
根据本发明的栽培西瓜植物或植物细胞包含纯合或杂合形式的染色体7上的渗入片段和/ 或包含纯合或杂合形式的染色体9上的渗入片段。在近交亲本系中最容易制备该渗入片段(一 个或多个)是纯合形式的F1杂种品种。通过使两个纯合近交系杂交而形成的F1杂种，将包 含(这些)QTL，且也以纯合形式包含。
在一方面，本发明涉及栽培的西瓜植物细胞或西瓜植物(或植物部分)，其包含来自 CGMMV抗性供体植物的染色体1(包含来自供体的QTL1.1)、4(包含QTL4.1)、5(包 含QTL5.2)、7(包含QTL7.1)和/或9(包含QTL9.1)的渗入片段，其中渗入片段赋予CGMMV 抗性，并且渗入片段可通过(包含)以下SNP中一个或多个(或全部)的供体植物SNP基 因型来检测：对于染色体1上的片段，SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和/或SNP6；和/ 或对于染色体4上的片段，SNP7，SNP8和/或SNP9中的一个或多个；和/或对于染色体5上 的片段，SNP10，SNP11和/或SNP12中的一个或多个；和/或对于染色体7上的片段，SNP13， SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和/或SNP18中的一个或多个；和/或对于染色体9上的片段， SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和/或SNP24中的一个或多个。按照在例如实施例 中描述的CGMMV抗性检测试验可以确定，赋予CGMMV抗性的QTL存在于渗入片段上。 包含来自染色体7(包含QTL7.1)和/或染色体9(包含QTL9.1)的渗入片段的栽培西瓜植 物，还可以任选地包含一个或多个选自QTL1.1、QTL4.1和/或QTL5.2的QTL。
因此，一方面，本发明提供一种栽培的西瓜植物，植物部分或植物细胞，其进一步包含 来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体1和/或染色体4和/或染色体5上的渗入 片段，其中染色体1上的渗入片段包含来自供体的QTL1.1和CGMMV抗性供体植物的序列，所述序列介于SNP1和SNP6之间，或SNP1和SNP5之间，或SNP1和SNP4之间，或SNP2 和SNP6之间，或SNP2和SNP5之间，或SNP2和SNP4之间，或SNP3和SNP6之间，或 SNP3和SNP5之间，或SNP3和SNP4之间，或SNP4和SNP6之间，或SNP4和SNP5之间、 或SNP5和SNP6之间；优选地，该渗入片段包含在SNP4和SNP6之间、或者在SNP4和SNP5 之间、或者在SNP5和SNP6之间的CGMMV抗性供体的序列；和/或其中染色体4上的渗入 片段包含来自供体的QTL4.1和CGMMV抗性供体植物的序列，所述序列介于SNP7和SNP9 之间，或SNP8和SNP8之间，或SNP7和SNP8之间；和/或其中染色体5上的渗入片段包含 来自供体的QTL5.2和CGMMV抗性供体植物的序列，所述序列介于SNP10和SNP12之间， 或SNP10和SNP11之间，或SNP11和SNP12之间。
优选地，包含QTL1.1，QTL4.1或QTL5.2的这些渗入片段以纯合形式存在于植物中。它 们也可以单独或组合存在于栽培的西瓜植物中，例如QTL1.1和QTL4.1或QTL1.1和QTL5.2 或QTL4.1和QTL5.2，或所有这三个的组合。如所提及的，任选地，QTL7.1和QTL9.1中的一者或两者也可以与这些隐性QTL中的一个或多个组合在一个植物中。
当提到来自供体的渗入片段在“SNP1和SNP6之间”时，例如，SNP1和/或SNP6可以包含供体核苷酸，但是渗入片段也可以更短并且包含SNP1和/或SNP6的易感核苷酸，例如轮回亲本的核苷酸。例如，仅位于SNP1和SNP6之间的序列和SNP可以来自供体，因此例如，SNP2，SNP3，SNP4和SNP5可以来自供体，或者仅SNP3，SNP4和SNP5可以来自供体， 或者仅这些SNP标记中的一个或两个可以来自供体，例如，SNP3，SNP4和SNP5中只有一 个或两个来自供体。因此，包含QTL的渗入片段可以不包含SNP1至SNP6该组SNP的所 有供体核苷酸。
一方面，包含QTL1.1的渗入片段包含SNP4，SNP5和/或SNP6的供体核苷酸中的至少一个，任选地至少两个或全部三个，即该渗入片段包含至少一个，任选地至少两个或三个如下序列：SEQ ID NO：4(或与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性并在核苷酸51或等 同位置包含胞嘧啶的序列)，SEQ ID NO：5(或与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性 并在核苷酸51或等同位置包含鸟嘌呤的序列)和/或SEQ ID NO：6(或与SEQ ID NO：6具 有至少95％序列同一性并在核苷酸51或等同位置包含胸腺嘧啶的序列)。该渗入片段显然 包含来自供体的QTL1.1，其对原本易感的西瓜植物赋予CGMMV抗性。
同样，例如，当包含来自供体的QTL4.1的渗入片段在“SNP7和SNP9之间”时，SNP7和/或SNP9可以包含供体核苷酸，但是渗入片段也可以更短并且包含SNP7和/或SNP9的(例如轮回亲本的)易感核苷酸。例如，仅位于SNP7和SNP9之间的序列和SNP可以来自供体， 因此例如，SNP8可来自供体。因此，包含QTL4.1的渗入片段可以不包含SNP7至SNP9该 组SNP的所有供体核苷酸。在一方面，渗入片段包含SNP7，SNP8和/或SNP9的供体核苷酸 中的至少一个，任选地至少两个或全部三个，即该渗入片段包含至少一个，任选地至少两个 或三个如下序列：SEQ ID NO：7(或与SEQ ID NO：7具有至少95％序列同一性并在核苷酸 51位或等同位置包含胸腺嘧啶的序列)，SEQ ID NO：8(或与SEQ ID NO：8具有至少95 ％序列同一性并在核苷酸51位或等同位置包含胞嘧啶的序列)和/或SEQ ID NO：9(或与SEQ ID NO：9具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位或等同位置包含腺嘌呤的序列)。 该渗入片段显然包含来自供体的QTL4.1，其对原本易感的西瓜植物赋予CGMMV抗性。
同样，例如，当包含来自供体的QTL5.2的渗入片段在“SNP10和SNP12之间”时，SNP10 和/或SNP12可以包含供体核苷酸，但是渗入片段也可以更短并且包含SNP10和/或SNP12 的(例如轮回亲本的)易感核苷酸。例如，仅位于SNP10和SNP12之间的序列和SNP可以来自供体，因此例如，SNP11可来自供体。因此，包含QTL5.2的渗入片段可以不包含SNP10 至SNP12该组SNP的所有供体核苷酸。在一方面，渗入片段包含SNP10，SNP11和/或SNP12 的供体核苷酸中的至少一个，任选地至少两个或全部三个，即该渗入片段包含至少一个，任 选地至少两个或三个如下序列：SEQ ID NO：10(或与SEQ ID NO：10具有至少95％序列同 一性并在核苷酸51位或等同位置包含胸腺嘧啶的序列)，SEQ ID NO：11(或与SEQ ID NO： 11具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位或等同位置包含腺嘌呤的序列)和/或SEQ ID NO：12(或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位或等同位置包含胸 腺嘧啶的序列)。该渗入片段显然包含来自供体的QTL5.2，其对原本易感的西瓜植物赋予 CGMMV抗性。
一方面，本发明提供了一种栽培的西瓜植物，植物部分或植物细胞，其包含来自物种药 西瓜的CGMMV抗性供体植物的染色体1(包含QTL1.1)和/或染色体4(包含QTL4.1)和/或染色体5(包含QTL5.2)的渗入片段，其中染色体1上的渗入片段包含SNP5的CGMMV 抗性供体植物的序列(SEQ ID NO：5中核苷酸51位的鸟嘌呤)、或包含SEQ ID NO：5或 与SEQ IDNO：5具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位上包含鸟嘌呤的序列；和/或其 中染色体4上的渗入片段包含SNP8的CGMMV抗性供体植物的序列(SEQ ID NO：22中核 苷酸51位的胞嘧啶)、或包含SEQ ID NO：8或与SEQ ID NO：8具有至少95％序列同一 性并在核苷酸51位上包含胞嘧啶的序列；和/或染色体5上的渗入片段包含SNP11的CGMMV 抗性供体植物的序列(SEQ ID NO：11中核苷酸51位的腺嘌呤)、或包含SEQ ID NO：11 或与SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一性并在核苷酸51位上包含腺嘌呤的序列。
在一方面，本发明提供了一种栽培的西瓜植物，植物部分或植物细胞，其包含来自物种 药西瓜的CGMMV抗性供体植物的染色体1和/或染色体4和/或染色体5的渗入片段，其中 染色体1上的渗入片段包含来自供体的QTL1.1，且包含SEQ ID NO：1或与SEQ ID NO：1具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：2或与SEQ IDNO：2具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：3或与 SEQID NO：3具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO： 4或与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/ 或SEQ IDNO：6或与SEQ ID NO：6具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸 腺嘧啶；优选地染色体1上的渗入片段包含SEQ ID NO：4或与SEQ ID NO：4具有至少95 ％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5具 有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：6或与SEQ ID NO： 6具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶；和/或其中染色体4上的渗入 片段包含来自供体的QTL4.1，且包含SEQ ID NO：7或与SEQ ID NO：7具有至少95％序 列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶，和/或SEQ ID NO：8或与SEQ ID NO：8具有 至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：9或与SEQ ID NO： 9具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤；和/或其中染色体5上的渗入片 段包含来自供体的QTL5.1，且包含SEQ ID NO：10或与SEQ ID NO：10具有至少95％序 列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶，和/或SEQ ID NO：11或与SEQ ID NO：11具 有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤，和/或SEQ ID NO：12或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶。
由于与QTL1.1最紧密连锁的标记是SNP5，渗入片段优选包含QTL1.1和选自SNP4，SNP5 和SNP6的至少一个，两个或所有三个供体标记，即SEQ ID NO：4或与SEQ ID NO：4具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：5或与SEQ ID NO：5具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：6或与SEQ IDNO：6具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶。
由于与QTL4.1最紧密连锁的标记是SNP8，渗入片段优选包含QTL4.1和选自SNP7,SNP8 和SNP9的至少一个，两个或所有三个供体标记，即SEQ ID NO：7或与SEQ ID NO：7具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶，和/或SEQ ID NO：8或与SEQ IDNO：8具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：9或与 SEQID NO：9具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤。
由于与QTL5.2最紧密连锁的标记是SNP11，渗入片段优选包含QTL5.2和选自SNP10, SNP11和SNP12的至少一个，两个或所有三个供体标记，即SEQ ID NO：10或与SEQ IDNO： 10具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶，和/或SEQ ID NO：11或与 SEQ ID NO：11具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤，和/或SEQ IDNO： 12或与SEQ ID NO：12具有至少95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶。
如所提及的，在一方面，栽培的西瓜植物或植物细胞包含来自药西瓜种质的(一个或多个) 渗入片段。这可以是任何对CGMMV具有抗性的药西瓜种质，特别是当如所描述用CGMMV 接种时具有CGMMV评分4(无症状)的种质。尽管在一方面渗入片段存在于NCIMB42624 中并且可从NCIMB 42624获得，但是所述的药西瓜供体并不一定需要是已经以保藏号 NCIMB 42624保藏的种质(或其后代)。本领域技术人员可以例如鉴定如下的任何其它药西 瓜种质，其中所述种质具有CGMMV评分4(无症状)、和/或包含与NCIMB 42624就所述 任何QTL而言相同或非常相似的SNP标记谱，这意味着该供体中存在相同的一个或多个QTL(选自QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1)。这样的药西瓜种质不必具有与NCIMB42624完全相同的SNP基因型。例如，对于某些SNP标记，它可以是杂合的，并且需要自交 一次或多次以选择对于一个或多个或所有的QTL而言纯合的后代。同样，该供体的SNP基 因型可有所不同，例如，关于QTL7.1或QTL9.1，它可以仅包含SNP13至SNP18(连锁QTL7.1) 或SNP19至SNP24(连锁QTL9.1)中的五个，四个或三个供体SNP标记。
可以包含CGMMV抗性(即QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和QTL9.1中的一个或 多个)的药西瓜种质的实例是，包含得分为4(无症状)的植物的种质。可以针对本文表1 和表6中提供的SNP标记的基因型，测试这样的种质、或具有得分4的所选个体植物的自交 后代。应当注意，这些种质本身当然不是本发明的一部分，因为它们通常产生具有低白利糖 度(2或3°白利糖度)的白色果肉小果实，并且在农业上没有用；本发明仅涵盖这样的QTL， 所述QTL单独或组合转移(渐渗)到作物植物例如栽培的西瓜中从而将CGMMV抗性赋予 具有良好农艺特性(高白利糖度，优质果实和良好果实产量)的栽培西瓜植物。
在一个方面，(一个或多个)渗入片段衍生自药西瓜供体，所述供体的代表性的种子样本 已经以保藏号NCIMB 42624保藏。
可将本发明中鉴定的五个QTL中的任何一个单独地或以不同的组合从药西瓜供体转移 到栽培的西瓜植物中。期望包含至少一个显性QTL，即，QTL7.1和/或QTL9.1。但是次要的隐性QTL，QTL1.1，QTL4.1和/或QTL5.2也可以用于，例如进一步降低已接种植物中的 病毒滴度或使CGMMV病毒无法通过RT-qPCR检测到和/或使植物和植物部位无感染性和/ 或使该病毒是不可种子传播的和/或赋予免疫力。因此，一方面，提供了一种栽培的西瓜植 物，其包含QTL7.1和/或QTL9.1，并且还包含QTL1.1，QTL4.1和QTL5.2中的一个或多个， 优选以纯合形式(因为它们是隐性的)。
一方面，栽培的西瓜植物是二倍体植物。在另一方面，它们是四倍体植物。在另一方 面，它们是三倍体植物，特别是通过如下方式产生：用二倍体近交亲本系的花粉(优选包含 两个拷贝的渗入片段，例如两个拷贝的QTL7.1和/或QTL9.1)，对四倍体近交亲本系(优选 地包含四个拷贝的渗入片段和渗入片段上的SNP标记，例如四个拷贝的QTL7.1和/或QTL9.1) 授粉，以产生包含三个拷贝的渗入片段，例如三个拷贝的QTL7.1和/或QTL9.1的，F1三倍 体杂种植物。
当SNP标记核苷酸例如供体核苷酸为二倍体，三倍体或四倍体形式，这可以在基因型分 型测定例如KASP测定中检测。因此，例如包含两个拷贝的包含SNP14供体核苷酸的渗入片 段的植物、植物部分或植物细胞(或从中获得的DNA)，将具有基因型“AA”，而包含三个拷贝的植物、植物部分或细胞将具有基因型“AAA”，而包含四个拷贝的植物、植物部分或细胞将具有基因型“AAAA”。使用本文提供的一个或多个SNP标记来检测植物、植物部分或植物细胞是否包含一个或多个本发明的CGMMV抗性QTL的此类SNP基因型分型测定法，也 是本发明的一个方面。
根据本发明的栽培西瓜植物、植物部分或植物细胞优选包含等级3(轻度症状)或等级4 (无症状)的平均CGMMV抗性。
一方面，根据本发明的栽培西瓜植物或植物细胞是近交植物或植物细胞、或F1杂种植物 或植物细胞、或二倍体或四倍体或三倍体植物或植物细胞。本文还包括生长成本文所述的本 发明植物的种子。
同样，本文涵盖包含根据本发明的植物细胞的栽培西瓜果实或果实部分。
此外，包含根据本发明的栽培西瓜植物细胞的栽培西瓜植物繁殖材料也是一个实施方案。
本发明植物的植物部分也可以是插条，接穗，砧木，包含本发明植物的接穗和/或砧木的 嫁接的幼苗或植物，叶，果实，果实的部分，种子，种子的部分，细胞，组织培养物，花， 花粉，胚，根等。
一方面，本发明提供了一种生产三倍体杂种栽培西瓜种子的方法，其包括以下步骤：
a)提供第一CGMMV抗性近交二倍体西瓜植物，其包含两个染色体7，每个染色 体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体7的渗入片段，该渗入片段 包含QTL7.1和SNP14(SEQ ID NO：14)、或者介于SNP13和SNP18之间或者SNP13 和SNP15之间的供体植物的序列；或渗入片段包含QTL7.1和SNP13，SNP14， SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中一个或多个或所有的抗性供体核苷酸；
b)提供第二CGMMV抗性近交四倍体西瓜植物，其包含四个染色体7，每个染色 体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体7的渗入片段，该渗入片段 包含QTL7.1及SNP14(SEQ ID NO：14)、或介于SNP13和SNP18之间或SNP13 和SNP15之间的供体植物的序列；或渗入片段包含QTL7.1和SNP13，SNP14， SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中一个或多个或所有的抗性供体基因型；
c)步骤b)中提供的四倍体西瓜植物用步骤a)中提供的二倍体西瓜植物的花粉 授粉；和
d)从步骤c)产生的果实中收集种子。
同样，本发明提供了一种生产三倍体杂种栽培西瓜种子的方法，其包括以下步骤：
a)提供第一CGMMV抗性近交二倍体西瓜植物，其包含两个染色体9，每个染色 体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体9的渗入片段，该渗入片段 包含QTL9.1和SNP22(SEQ ID NO：22)、或者介于SNP19和SNP24之间或者SNP21 和SNP23之间的供体植物的序列；或渗入片段包含QTL9.1和SNP19,SNP20,SNP21, SNP22,SNP23和SNP24中一个或多个或所有的抗性供体基因型；
b)提供第二CGMMV抗性近交四倍体西瓜植物，其包含四个染色体9，每个染色 体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体9的渗入片段，该渗入片段 包含QTL9.1及SNP22(SEQ ID NO：22)、或介于SNP19和SNP24之间或SNP21 和SNP23之间的供体植物的序列；或渗入片段包含QTL9.1和SNP19,SNP20,SNP21, SNP22,SNP23和SNP24中一个或多个或所有的抗性供体基因型；
c)步骤b)中提供的四倍体西瓜植物用步骤a)中提供的二倍体西瓜植物的花粉 授粉；和
d)从步骤c)产生的果实中收集种子。
以上两种方法也可以用于产生包含三个拷贝的QTL7.1和三个拷贝的QTL9.1的三倍体西 瓜植物(以及可以生长所述植物的种子)。由此，在a)下的植物包含两个拷贝的QTL7.1和 两个拷贝的QTL9.1，在b)下的植物包含四个拷贝的QTL7.1和四个拷贝的QTL9.1。
在步骤d)中收集的种子也是本发明的一个方面，从这些种子生长的植物以及这些植物 的植物部分和细胞也是如此。例如，包含三个拷贝的QTL7.1和/或QTL9.1的三倍体果实。
一方面，本发明提供了标记SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中的一 个或多个和/或标记SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24中的一个或多个在鉴 定CGMMV抗性西瓜植物或植物部分或植物细胞中的用途。
在另一方面，本发明提供了标记SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中 的一个或多个和/或标记SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24中的一个或多个 用于CGMMV抗性渗入CGMMV易感栽培西瓜植物中的用途。
在另一方面，本发明提供了标记SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6中的一个 或多个和/或标记SNP7，SNP8和SNP9中的一个或多个和/或标记SNP10、SNP11和SNP12 中的一个或多个的用途，用于鉴定CGMMV抗性西瓜植物或植物部分或植物细胞。
在另一方面，本发明提供了标记SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6中的一个 或多个和/或标记SNP7，SNP8和SNP9中的一个或多个和/或标记SNP10，SNP11和SNP12 中的一个或多个的用途，用于CGMMV抗性渗入CGMMV易感栽培西瓜植物中。
本文还涵盖，筛选一个或多个西瓜属植物或植物部分或衍生自其的DNA以确定存在染 色体7和/或9上赋予CGMMV抗性的片段的方法，该方法包括以下步骤：
a)筛选基因组DNA中SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18之一或多个 或所有的SNP基因型和/或SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24之一或多个的 SNP基因型；以及可选地
b)选择植物或植物部分，其包含SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18之 一个或多个或所有的抗性供体核苷酸和/或SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24 之一个或多个或所有的抗性供体核苷酸。
本文还涵盖，筛选一个或多个西瓜属植物或植物部分或衍生自其的DNA以确定存在染 色体1和/或4和/或5上赋予CGMMV抗性的片段的方法，该方法包括以下步骤：
a)筛选基因组DNA中SNP1,SNP2,SNP3,SNP4,SNP5,和SNP6之一或多个或所有的SNP基因型和/或SNP7,SNP8,和SNP9之一或多个的SNP基因型和/或SNP10,SNP11和 SNP12之一或多个的SNP基因型；以及可选地
b)选择植物或植物部分，其包含SNP1,SNP2,SNP3,SNP4,SNP5,和SNP6之一个或多个或所有的抗性供体核苷酸和/或SNP7,SNP8,和SNP9之一个或多个的抗性供体核苷酸和/或SNP10,SNP11和SNP12之一个或多个的抗性供体核苷酸。
显然，这些筛选方法可以组合成一个筛选方法，以针对是否存在染色体1、4、5、7和/ 或9上赋予CGMMV抗性的片段，进行筛选。
一方面，西瓜属植物或植物部分或DNA是药西瓜植物或植物部分或DNA，例如种子库 的PI种质，其潜在地包含一个或多个本文所述的QTL。例如，USDA GRIN种子库的PI种质，例如上面提到的，可以通过这种方式进行筛选。任选地，可以测试植物的CGMMV抗 性，例如，如本文其他地方和实施例中所述。这可以在SNP标记筛选之前进行(例如仅以 CGMMV测试中得分为3或4的植物开始)、和/或在标记筛选之后(例如，在步骤b)之后) 进行，以验证所选的植物或植物部分具有CGMMV抗性。
在另一方面，西瓜属植物、植物部分或DNA为普通西瓜亚种，例如品种，近交系，育种系，二倍体，三倍体，四倍体等，其中进行筛选以检查它们是否包含一个或多个渗入片段和/或杂合性或纯合性或包含该渗入片段(一个或多个)的重组染色体的数目。
植物部分可以是包含植物细胞(或从其衍生的DNA)的任何部分，例如，叶或叶的部分， 种子，种皮，胚，花粉，花，胚珠，根，茎，果实，果实的部分，细胞等。针对SNP标记基 因型筛选的该植物部分也可以是种皮，因为种皮是母体DNA。因此，当筛选F1杂种的种皮 并将其与F1杂种本身的基因型进行比较时，可以推断出雄性亲本系的基因型。因此，可以 确定在杂种的亲本系中存在一个或多个本发明的渗入片段。
可以使用多种方法进行标记筛选，例如SNP基因型分型分析(例如KASP试验，TaqMan 试验，高分辨率熔解(HRM)试验，SNP基因型分型阵列(例如Fluidigm，Illumina等)，或者等同地可以进行DNA测序。
例如，可以使用KASP试验(参见\Vww.kpbioscience.co.uk)或其他分析试验来检测SNP 标记。可以针对本文所述的SNP开发KASP试验。为了开发用于SNP的KASP试验，根 据公知常识，设计了两个等位基因特异性正向引物和一个等位基因特异性反向引物(参见例如Allen等人2011,Plant Biotechnology J.9,1 0 86-1 099,特别是p097-098关于KASP测定方 法)。
本发明还提供在发生CGMMV的区域中生长本发明的任何栽培西瓜植物的方法。
此外，提供了一种选择栽培西瓜植物的方法，其中所述栽培西瓜植物包含所述的来自药 西瓜供体的渗入片段(例如，包含QTL7和/或QTL9)，所述方法包括以下步骤：
a)提供自(例如对CGMMV易感的)西瓜植物和CGMMV抗性药西瓜植物(例如NCIMB42624的植物或(例如通过自交获得的)其后代)或CGMMV抗性西瓜植物(例如，包含来 自CGMMV抗性药西瓜植物的一个或多个渗入片段(包含例如QTL7.1和/或QTL9.1)的品 系或品种)间的杂交得到的西瓜植物群体，
b)从该群体中选择包含一个或多个来自所述药西瓜供体的渗入片段的植物，其中所述渗 入片段包含选自如本文所述的QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1和/或QTL9.1的QTL。
植物群体可以是例如F2或F3群体或回交群体、近交群体(例如重组近交系)、或任何 其他包含一个或多个重组染色体(即，染色体包含药西瓜供体的片段)的群体，其中所述重组 染色体尤其是包含QTL1.1的重组染色体1和/或包含QTL4.1的重组染色体4和/或包含QTL5.2的重组染色体5和/或包含QTL7.1的重组染色体7和/或包含QTL9.1的重组染色体9。
可以通过本文所述的任何方法来完成选择，例如与QTL连锁的SNP标记之一或多个的 SNP基因型分型，测序，CGMMV抗性测试等。
所选择的植物包含本发明的至少一个QTL，并且也是本发明的一个实施方案。
通过上述任何方法可获得、获得、可得到或得到、鉴定或选择的非基因工程西瓜属植物 细胞或植物(例如二倍体，三倍体或四倍体或其他多倍体)、以及生长所述任何所述植物的 种子，也是本发明的实施方案。
从根据本发明的植物可获得或获得、可得到或得到的植物部分，例如接穗，枝条，叶， 花，插条，根，果实，果实部分，花粉，胚珠和种子，也是本发明的实施方案。
无籽西瓜植物的生产和栽培已变得普及，并且是本领域技术人员已知的。普通的西瓜植 物是二倍体(2n)。通过将雄性二倍体(2n)西瓜植物与雌性四倍体(4n)西瓜植物杂交， 可以生产产生无籽果实的西瓜。得到的F1种子是三倍体(3n)，可以生长成三倍体(3n)F1 植物。F1植物的坐果诱导需要授粉。由于三倍体(3n)F1植物不会产生可育的花粉，因此必须在同一田地种植所谓的授粉者植物。授粉者植物是二倍体(2n)。通常，在给定方案中必须种植大约1至3比例的授粉者植物与三倍体(3n)植物，以提供足够的花粉用于授粉。 二倍体(2n)授粉者与雌性三倍体(3n)植物的花之间的异花授粉诱导坐果，并导致在三倍 体F1植物上产生无籽三倍体(3n)果实。F1植物的二倍体(2n)和四倍体(4n)亲本各自 产生带籽果实，并且都可以通过自花授粉彼此独立地繁殖。
已经生产专业授粉者(specialised pollinisher)，通常是紧凑型植物(compactplant)(以免与 三倍体竞争)，其产生小的不可食用和/或不可销售的果实，具有可以在收获过程中与三倍体 (3n)果实容易区分的果皮图案。选择使用可食用和/或可销售的双重目的授粉者或不可食用 和/或不可销售的专业授粉者，这取决于种植者是否销售或使用由相应的授粉者生产的带籽果 实。授粉者的选择影响产量。(McGregor&Waters,2014,HortScience 49(6),714-721)。
一些授粉者产生可销售的二倍体果实，而其他授粉者产生不适合消费和/或销售的果实。 产生可销售果实的授粉者被称为“双重目的授粉者”。产生易于与无籽果实区分开来的不可食 用和不可销售果实的授粉者被称为“专业授粉者”。
在本发明的另一个实施方案中，根据本发明的非基因工程西瓜属植物是授粉者植物，或 根据本发明的西瓜属植物用作田间生长的授粉者植物。优选地，根据本发明的授粉者植物是 二倍体(2n)。根据本发明的授粉者植物可以是专业授粉者植物或双重目的授粉者植物。
术语“授粉者植物”在本文中用于指，提供花粉用于另一植物的授精的植物，其中所述另 一植物自身不产生足够活力的花粉。
包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞的非基因工程西瓜属植物是本发明的另一 个实施方案。
一方面，CGMMV抗性植物是杂种，例如通过将两个近交亲本系彼此杂交而产生的单杂 交杂种(F1杂种)。杂种，例如F1杂种，对于CGMMV抗性QTL(一个或多个)可以是纯 合的或杂合的。在另一方面，包含CGMMV抗性QTL(一个或多个)的植物是近交系。
可以从中生长出任何所述植物的种子也是本发明的实施方案。此外，本发明涉及由根据 本发明的非基因工程西瓜属植物可获得、可得到、获得、得到或来源的植物部分。优选地， 根据本发明的植物部分包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。
本文使用的术语“植物部分”指，植物的任何部分或区段，包括果实，果实部位，砧木， 接穗，插条，花粉，花药，胚珠，胚，根，茎，叶，子叶，下胚轴，花，愈伤组织，包含植 物材料的体外细胞或组织培养物，植物体外繁殖材料等。植物部分可以合适再生为整株植物(可再生植物部分)，也可以是不合适再生整株植物的部分(不可再生的植物部分)。这种 不可再生的植物部分可以是整株植物的一部分或可以生长该植物的种子的一部分。CGMMV 抗性QTL(一个或多个)和/或包含所述抗性QTL的渗入片段(一个或多个)存在于该植物部分中并且可以检测，例如通过标记分析(例如使用本文所述的一个或多个SNP标记)，序列分析，染色体涂染等。
根据本发明的优选植物部分是种子或果实。优选地，根据本发明的种子或果实包含根据 本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。
另一个实施方案涉及根据本发明的果实，其是无籽果实。同样地，产生无籽果实的根据 本发明的西瓜属植物是本发明的实施方案。
术语“果实”在其植物学含义上通常理解为是从被子植物花的子房发育而来的带籽结构。
尽管在某种程度上与“果实”的植物学含义相矛盾，但是，本领域中且尤其是在育种中通 常使用的“无籽果实”，在本发明的上下文中应理解为不具有成熟或有活力的种子的果实。成 熟或有活力的种子可以在适合相应植物的条件下在土壤中萌发，然后长成植物。该测试可用 于确定植物是否产生无籽果实。无籽果实将不产生在适合相应植物的条件下可以萌发并长成 植物的种子。
根据本发明的另一个具体实施方案涉及本文所述植物的植物繁殖材料，或涉及包含根据 本发明的非基因工程植物细胞的繁殖材料，或通过根据本发明的生产CGMMV抗性西瓜属植 物的方法可获得的/获得的植物的繁殖材料。本发明的一个实施方案是植物的繁殖材料，其包 含一个或多个本文所述的QTL。本发明还包括得自/可得自如下植物的CGMMV抗性植物的 繁殖材料，其中所述植物通过获自NCIMB 42624保藏种子的植物与另一植物的杂交而来源。 优选地，通过与获自NCIMB 42624保藏种子的植物杂交而获得的/可获得的该繁殖材料，包 含根据本发明的非基因工程植物细胞。一方面，本发明涉及CGMMV抗性植物的繁殖材料， 所述植物包含CGMMV抗性QTL(一个或多个)，其中所述QTL从NCIMB 42624保藏种子或其CGMMV抗性后代中获得/可获得、或原存在于其中。
本文中，术语“繁殖材料”包括适于通过营养(无性)或生殖(配子，有性)途径产生后 代的那些植物成分。适用于营养繁殖的是例如插条，体外组织，细胞，原生质体，胚胎或愈 伤组织培养物或微繁殖方法。其他繁殖材料包括例如果实、种子、幼苗，其对CGMMV具 有抗性等。一方面，繁殖材料采取插条形式(其通过嫁接到另一砧木上繁殖)、或体外组织 培养材料，特别是胚培养物的形式。特别优选的是，体外组织培养材料(特别是体外胚培养物)形式的繁殖材料。应当理解，所述繁殖材料包含所述的CGMMV抗性QTL(一个或多个)。
嫁接在蔬菜工业中越来越多地用于生产幼苗，这些幼苗在移植后由农民培育。实际上， 该技术通过将砧木的特性(例如非生物胁迫抗性、抗病性和活力)与接穗的特性(产生高品质 果实)结合，提高了最终植物的质量。
如Davis等(2008,Critical Reviews in Plant Sciences Vol.27,"CucurbitGrafting",page 50-74)中所解释，嫁接西瓜具有许多优点。除了提供对真菌和病毒的抗性之外，嫁接的使用 还可以提高对不同的非生物胁迫如冷/低温，干旱，盐度，水淹/水的耐受性，并且可以具有有 益的作用，例如对生长，产量，养分吸收，植物活力，果实大小和果实品质等。
就本发明而言，嫁接的主要优点是，可以使用砧木或接穗，这些砧木或接穗可以提供或 增强对土传疾病的抵抗力，特别是当用于疾病管理的遗传或化学方法不可得或不充分时，就 如目前在西瓜中CGMMV感染的情况。因此，在移植前，可以将CGMMV抗性砧木或接穗用于嫁接，例如与CGMMV易感接穗或砧木一起。CGMMV易感西瓜接穗可以例如嫁接到 CGMMV抗性砧木上用于生产西瓜，或者可以将CGMMV抗性接穗嫁接到CGMMV易感砧 木上。已发现，当CGMMV抗性接穗嫁接到感染了CGMMV病毒的易感砧木上时，其仍然 没有CGMMV症状(该接穗的CGMMV得分为4)，即保持具有CGMMV抗性表型。
Park等(2005,Plant Cell Rep 24,350)公开了，通过在转基因植物中引入赋予CGMMV外 壳蛋白表达的重组核酸，从野生栽培品种西瓜亚种gongdae产生抗CGMMV抗性转基因西瓜 植物。Park提出，将该转基因植物用于生产砧木，在其上可以嫁接来自西瓜属作物植物的接 穗以对抗CGMMV引起的产量损失。
在本发明中，令人惊讶地发现，将抗CGMMV抗性西瓜属接穗嫁接到感染了CGMMV 的易感西瓜属砧木上时，确实使得能够生长无CGMMV引起的症状的西瓜属植物。本申请 的一个优点是，可以将包含CGMMV抗性砧木和/或接穗的嫁接西瓜属幼苗，生长成无症状 植物。因此，即使在土壤被CGMMV污染的区域中也可以生长这种植物，而不会损失果实 的质量和产量。因此，使用根据本发明的抗CGMMV抗性接穗，特别是包含本文所述的一 个或多个QTL的栽培西瓜接穗，与砧木(可以是CGMMV易感砧木)相结合，可使接穗保 持无CGMMV症状。
因此，根据本发明的其他优选的植物部分是砧木和/或接穗。优选地，根据本发明的砧 木和/或接穗包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。砧木和/或接穗包含本文所述的 一个或多个(或全部)QTL，其可通过例如与所述QTL连锁的SNP标记检测。
一方面，砧木和/或接穗是CGMMV抗性西瓜属砧木或接穗，尤其是包含一个或多个本 文所述QTL的根据本发明的药西瓜砧木或接穗，例如NCIMB 42624或其后代的砧木或接穗。 Bigdelo等2017(Australian Journal of Crop Science,AJCS,11(06):727-732)描述了将药西瓜砧木 与栽培西瓜的接穗一起使用的优势。
在另一方面，砧木和/或接穗是根据本发明的CGMMV抗性栽培西瓜的砧木，其包含一 个或多个本文所述的QTL，其中所述QTL例如可从保藏号NCIMB 42624的种子或其后代获得，例如通过将该植物或后代与栽培西瓜(回)杂交并选择包含来自CGMMV抗性药西瓜供 体的一个或多个QTL的后代而获得。
在植物嫁接技术领域中使用的“砧木”在本文中是指，在其上进行嫁接的分离的植物部分 或茎。典型地，砧木是底部，包括嫁接植物的根和茎的下部分。在嫁接时或直接在嫁接后， 在任何情况下根都无需存在于砧木上，因为在各种情况下，如果根在之前已被除去，根将从 砧木茎上重新长出。
“接穗”是指植物的分离的活部分(例如枝条或树枝)，其仅向嫁接植物提供地上部分。
关于西瓜嫁接方法，包括单嫁接和双嫁接，也参见US 2013/0298273A1，该文献通过引 用并入本文。
在本发明的一个优选实施方案中，根据本发明的砧木和/或根据本发明的接穗分别是包含 一个或多个QTL的栽培西瓜植物的砧木或接穗，其中所述QTL源自、获自、或可获自CGMMV 抗性药西瓜植物(例如从保藏号NCIMB 42624的种子生长的植物或其后代)，其中所述 CGMMV抗性药西瓜植物用作包含一个或多个所述QTL例如QTL7.1和/或QTL9.1的渗入片 段(一个或多个)的供体。
在另一个方面，根据本发明的砧木和/或根据本发明的接穗分别是可获自、获自、可得自、 得自或来源于NCIMB 42624保藏种子生长的植物或其后代的砧木或接穗。
本发明的另一个实施方案涉及包含至少一个砧木和至少一个接穗的嫁接植物，其中所述 嫁接植物的至少一个砧木是根据本发明的砧木，或者所述嫁接植物的至少一个接穗是根据本 发明的接穗，和/或嫁接植物的至少一个砧木包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞， 或嫁接植物的至少一个接穗包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。
本发明的一个优选实施方案涉及根据本发明的嫁接植物，其中所述嫁接植物的至少一个 接穗是根据本发明的接穗和/或所述嫁接植物的至少一个接穗包含根据本发明的非基因工程 西瓜属植物细胞。因此，一方面，接穗是本发明的抗CGMMV抗性植物的接穗，尤其是包含 一个或多个QTL的栽培西瓜的接穗。砧木可以是CGMMV易感砧木。它也可以是CGMMV 抗性砧木。同样地，它可以是任何通常已知的砧木，例如葫芦属(Lagenaria)或南瓜属(Cucurbita) 砧木或本文所述和本领域已知的其他砧木。
备选地，可以将两个接穗嫁接到单个砧木上，因此在一方面，两个接穗中的至少一个， 任选地两个接穗是本发明的抗CGMMV抗性植物(尤其是栽培的西瓜)的接穗。
在另一个实施方案中，根据本发明的嫁接植物包含至少一个砧木，其是根据本发明的砧 木，和/或嫁接植物的至少一个砧木包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。
在另一个实施方案中，根据本发明的嫁接植物是幼苗或嫁接的幼苗。关于本发明，术语“嫁 接的植物”是指看起来会生长成或正生长成单一植物的植物，但是该植物由不同的植物部分组 成，其中所述植物部分源自具有不同基因型的植物。通常，将这些不同的植物部位称为砧木 和接穗。
“嫁接”是指将具有不同基因型的不同植物部分结合在一起以使这些不同植物部分表现出 会生长成单个植物或生长成单个植物的方法。
本文中的“幼苗”是指年幼植物，特别是从种子的胚发育而来的年幼植物。
本文中的“嫁接的幼苗”是指由具有不同基因型的不同幼苗的部分组成的年幼植物。通常， 将这些不同部分称为砧木和接穗。
在本领域中众所周知，嫁接的植物或幼苗可以由两个以上的不同植物部分组成。嫁接的 植物可以是例如由多个砧木组成。用于生产这种植物的方法在本领域中是众所周知的，与 单砧木嫁接相对，称为“多砧木嫁接”。具有一个(“单砧木嫁接”)、两个(“双砧木嫁接”) 或三个(“三砧木嫁接”)砧木的嫁接西瓜植物或生产该嫁接西瓜植物的方法，在本领域中是 已知的并且已经描述在例如(Qin et al.,2014,Not Bot Agrobo 42(2),495-500)。
因此，本发明的另一个实施方案涉及包含一个，两个或三个砧木的根据本发明的嫁接植 物或根据本发明的嫁接幼苗。更优选地，根据本发明的嫁接植物或根据本发明的嫁接幼苗包 含两个砧木，甚至更优选地一个砧木。
通常将西瓜属接穗嫁接到西瓜属砧木上。在西瓜嫁接的大多数情况下，可以使用来自其 他葫芦科(Cucurbit)植物的砧木，特别可以提到的是葫芦属(Lagenaria)植物、南瓜属(Cucurbita) 植物、和种间南瓜属植物杂种。可以将西瓜植物嫁接到其他葫芦科植物的砧木上，例如以控 制镰刀菌枯萎病(Fusarium wilt)、提高低温耐受性、和提高产量(通过增加水分和植物养分吸收)。 通常用于嫁接西瓜的砧木是Cucurbita moschata(南瓜)，Cucurbita maxima(笋瓜)，Benincasa hispida(冬瓜)，Lagenaria siceraria(瓠瓜)、以及上述物种的杂种，例如Cucurbita maxima ×Cucurbita moschata(Yetisir&Sari,2003,Austarlian J.Experimental Agriculture 43,1269-1274)。
在嫁接的西瓜植物中，可以使用来自Lagenaria siceraria(瓠瓜)，Benincasahispida(冬 瓜)，Cucurbita moschata(南瓜)，Cucurbita pepo(西葫芦)以及Cucurbitamaxima×Cucurbita moschata杂种的砧木，用于例如镰刀菌枯萎病控制，以及可以使用Sicyos angulatus(刺果瓜) 砧木用于例如线虫控制。西瓜嫁接中还可以使用Cucurbitamaxima×Cucurbita moschata杂种、 Cucurbita moschata(南瓜)或Cucurbita pepo(西葫芦)的砧木，以增加对低温的耐受性(Singh& Rao,2014,Agri.Reviews 35(1),24-33)。
现在，除了其他生物胁迫或非生物胁迫之外，使用本发明接穗嫁接至相应砧木还能够控 制西瓜属作物植物中的CGMMV感染。这可以通过将根据本发明的接穗嫁接到相应的砧木 上来实现，该砧木可以根据栽培区域的相应需求来进行选择，例如控制特定的生物胁迫(例 如镰刀菌或线虫感染)和/或非生物胁迫(例如低温)。
因此，本发明的另一个实施方案涉及根据本发明的嫁接植物或根据本发明的嫁接幼苗， 其中至少一个砧木来自西瓜属植物或不同属的植物，优选地来自不同属的植物的砧木选自南 瓜属(Cucurbita)，葫芦属(Lagenaria)，刺果瓜属(Sicyos)或冬瓜属(Benincasa)的植物、或这些 属的植物之间的杂种。在一个更优选的实施方案中，根据本发明的嫁接植物或根据本发明的 嫁接幼苗包含至少一个来自西瓜(Citrullus lanatus)植物，南瓜(Cucurbita moschata)植物，笋瓜 (Cucurbita maxima)植物，西葫芦(Cucurbitapepo)植物，冬瓜(Benincasa hispida)植物，瓠瓜 (Lagenaria siceraria)植物，刺果瓜(Sicyos angulatus)植物、或笋瓜(Cucurbita maxima)×南瓜 (Cucurbita moschata)杂种植物的砧木。
本发明的一个实施方案中，根据本发明的嫁接植物或根据本发明的嫁接幼苗包含根据本 发明的接穗并包含从选自以下的植物获得的砧木：葫芦属(Lagenaria)植物，西瓜(Citrullus lanatus)植物,南瓜(Cucurbita moschata)植物,笋瓜(Cucurbita maxima)植物，或笋瓜 (Cucurbita maxima)×南瓜(Cucurbita moschata)杂种植物,甚至更优选砧木获自选自以下的 植物：西瓜(Citrullus lanatus)、或笋瓜(Cucurbita maxima)×南瓜(Cucurbita moschata)杂种植物。
本发明中，优选的笋瓜(Cucurbita maxima)×南瓜(Cucurbita moschata)杂种是笋瓜 (Cucurbita maxima)×南瓜(Cucurbita moschata)栽培品种Ercole(Nunhems；可购买获得)。其 他优选的砧木是Shintosa,例如Shintosa Camelforce(Nunhems；可购买获得)或葫芦属 (Lagenaria)植物砧木，例如葫芦属杂种砧木Colosso(Nunhems；可购买获得)。
像砧木一样，在本领域中也确立，嫁接的植物可以具有多个接穗。已经描述了包括嫁接 到砧木的两个接穗的双嫁接的或“双接穗嫁接的”西瓜植物，例如，在WO2012062672A1和 US 20130298273中。US 20130298273公开了具有两个嫁接到砧木的接穗的西瓜植物，其中所 述接穗可以来自遗传上相同的植物或遗传上不同的植物。接穗可以是二倍体(2n)或三倍体 (3n)。关于从遗传上不同的植物获得的接穗，嫁接到砧木的一个接穗可以是二倍体(2n)， 嫁接到同一砧木的另一接穗可以是三倍体(3n)。嫁接到同一砧木上的二倍体(2n)和三倍 体(3n)接穗的这种组合可用于生产无籽果实(见上文)，并且在这些情况下的二倍体接穗 可以是专业授粉者或双重目的授粉者。
因此，本发明的另一个实施方案涉及根据本发明的嫁接植物或根据本发明的嫁接幼苗， 其中所述嫁接的植物或幼苗包含至少两个接穗，其中至少一个接穗是根据本发明的接穗和/或 至少一个接穗包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。在一个优选的实施方案中，根 据本发明的嫁接植物或根据本发明的嫁接幼苗包含根据本发明的两个接穗和/或两个接穗的 每一个均包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。在再一个实施方案中，根据本发明 的两个接穗具有相同(同样)的基因型，和/或两个接穗包含具有相同(同样)基因型的根据 本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。在另一个实施方案中，根据本发明的两个接穗具有不 同的基因型和/或两个接穗包含具有彼此不同的基因型的根据本发明的非基因工程西瓜属植 物细胞，优选一个接穗是二倍体(2n)，并且另一接穗是三倍体(3n)。对于其中一个接穗 是二倍体(2n)而另一接穗是三倍体(3n)的根据本发明的嫁接植物或根据本发明的嫁接幼 苗，二倍体(2n)接穗可以是专业授粉者或双重目的授粉者。
在一个特定的实施方案中，根据本发明的嫁接植物包含至少一个根据本发明的砧木和至 少一个根据本发明的接穗。优选地，根据本发明的嫁接植物包含一个根据本发明的砧木和至 少一个根据本发明的接穗，或者根据本发明的嫁接植物包含至少一个根据本发明的砧木和一 个根据本发明的接穗。更优选地，根据本发明的嫁接植物包含一个根据本发明的砧木和一个 根据本发明的接穗。
生产嫁接植物包括西瓜的方法在本领域中是常见的。已经建立了人为(手工)嫁接和机 器(机器人)嫁接方法。西瓜有多种嫁接技术是已知的，包括“舌靠接”(tongueapproach grafting)， “孔插入嫁接”(hole insertion grafting)，“一子叶嫁接”(onecotyledon grafting)和“腹接”(side grafting)。(Hassell et al.,2008,HortScience43(6),1677)。包括西瓜在内的蔬菜的嫁接方法也在 Singh&Rao(2014,Agri.Reviews 35(1),24-33)中进行了综述。
如上所述，通过提供对CGMMV具有抗性的西瓜属植物，现在能够生产对CGMMV具 有抗性的其他西瓜属作物植物。
因此，本发明的另一方面涉及一种生产抗CGMMV抗性西瓜属植物的方法，其包括以下 步骤：
a)使抗CGMMV抗性西瓜属植物(供体)与另一西瓜属植物(受体)例如CGMMV易 感植物杂交，或提供该杂交的后代，和
b)从根据步骤a)的杂交植物获得种子，或选择包含CGMMV抗性的种子/植物。
所述方法可以任选地进一步包括，(例如，与步骤a中的另一西瓜属植物，例如易感栽 培西瓜品系或品种)自交和/或回交从步骤b)的种子生长的植物一次或多次，并选择包含 CGMMV抗性(例如一个或多个QTL)的自交后代和/或回交后代。
可以使用与本文所述的QTL连锁的一个或多个SNP标记在表型和/或基因型上选择抗 CGMMV抗性供体植物。因此，例如，供体可以包含QTL1.1，QTL4.1，QTL5.2，QTL7.1 和QTL9.1中的一个或多个或全部。供体可以是例如(可选地自交一次或多次的)药西瓜供 体、或其中已经渗入了一个或多个所述QTL的普通西瓜亚种供体，其中所述QTL可以在该 方法中转移到另一CGMMV易感植物中。
可以如本文所述选择供体和/或衍生自该供体的包含CGMMV抗性的后代，例如在表型 上，例如使用机械叶接种来确定抗性表型，和/或使用RT-qPCR和/或其他检测CGMMV病毒的测定法(例如ELISA或斑点印迹)来检测CGMMV病毒水平，和/或使用快速检测法用于 检测CGMMV症状(例如，将根浸入病毒溶液中或将种子浸泡在病毒溶液中)等，和/或在基 因型上，使用与本文所述QTL连锁的一个或多个分子标记。因此，例如可以在供体中测试 CGMMV抗性，和/或例如与QTL1.1连锁的SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和/或SNP6 中一个或多个的CGMMV抗性供体基因型；和/或与QTL4.1连锁的SNP7，SNP8和/或SNP9 中一个或多个的CGMMV抗性供体基因型；和/或与QTL5.2连锁的SNP10，SNP11和/或SNP12 中一个或多个的CGMMV抗性供体基因型；和/或与QTL7.1连锁的SNP13，SNP14，SNP15， SNP16，SNP17和/或SNP18中一个或多个的CGMMV抗性供体基因型；和/或与QTL9.1连 锁的SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和/或SNP24中一个或多个的CGMMV抗性 供体基因型，其均在本文其他地方进行了描述。
用于生产西瓜属植物的本发明方法中，步骤a)中的抗CGMMV抗性植物可以是任何西 瓜属植物，只要其对CGMMV具有抗性即可。优选地，步骤a)中提供的西瓜属植物是具有22的二倍体(2n)染色体数和/或可与西瓜属作物植物杂交的西瓜属植物。更优选地，步骤 a)中的抗CGMMV抗性植物是根据本发明的非基因工程植物，更优选地是药西瓜物种的植 物，甚至更优选地是从保藏号NCIMB 42624的保藏种子生长的植物。在另一方面，它是如上 所述的栽培西瓜植物，例如包含一个或多个或全部的自药西瓜供体渗入的CGMMV抗性QTL， 例如获自或可获自NCIMB 42624保藏种子或其CGMMV抗性后代的一个或多个QTL。
因此，上述方法可以任选地包括在DNA中分析与任何一个或多个所述QTL连锁的一个 或多个标记的步骤，以便任选地选择包含一个或多个所述QTL的供体和/或后代。一方面， 供体中存在QTL7.1和/或QTL9.1，并被转移至杂交的后代。如果供体是已经包含渗入片段 (包含QTL)的栽培西瓜优良品系或品种，那么仅选择保留了含有该渗入片段的重组染色体 的后代即可。这可以简单地通过表型测试和/或使用一个或多个SNP标记进行基因型分型来 完成，例如在KASP试验中或在其他基因型分型试验中。显然，也可以使用其他方法，例如测序来确定是否存在包含该供体核苷酸的序列。
杂交是本领域技术人员常见的方法。在根据本发明的用于生产西瓜属植物的方法中，步 骤a)中的另一西瓜属植物优选为西瓜(Citrullus lanatus)、药西瓜(Citrulluscolocynthis)或诺 丹西瓜植物，更优选地，该植物为西瓜(Citrullus lanatus)植物，最优选的是普通西瓜亚种 植物。在一方面，它是对CGMMV易感的栽培西瓜品系或品种。
用于检测植物组织中CGMMV编码蛋白的测定法是可商购获得的，例如，用于CGMMV检测的ELISA试剂盒或CGMMV ImmunoStrip检测都由Agdia,Inc.,52642County Road 1,Elkhart,IN 46514出售。这些测试适用于检测受感染植物中的CGMMV蛋白，因此也可用于在先前已经进行了接种的植物中显示病毒蛋白的不存在。
可以通过多种方法在植物材料中检测CGMMV RNA，例如通过基于PCR的分析，如本文一般方法中所述。Hongyun等人(2008,J Virological Methods 149,326-329)已经描述了一种 针对CGMMV的高灵敏度实时逆转录PCR试验。
用于鉴定抗CGMMV抗性植物的一个优选表型试验是本文在一般方法下描述的基于可视 评估症状进行的试验，但是显然存在其他试验，例如涉及适当的易感对照的田间试验。
在另一个实施方案中，根据本发明的用于生产西瓜属植物的方法包括另一个步骤，该步 骤为使用鉴定的CGMMV抗性西瓜属植物来生产其他的西瓜属植物。从给定植物生产其它 植物在本领域中是成熟的。产生的其他植物的特征在于它们对CGMMV具有抗性。这些其 他植物可以通过营养(无性)繁殖或生殖(配子，有性)繁殖或通过与其他西瓜属植物杂交 来产生。适用于营养繁殖的是例如插条，体外组织，细胞，原生质体，胚或愈伤组织培养物， 微繁殖，根茎或块茎。其他繁殖材料包括，例如，果实，种子，幼苗，其对于赋予CGMMV抗性的染色体片段而言是杂合的或纯合的。
营养(无性)繁殖技术，包括植物的微繁殖，在本领域是熟知的，并且例如对于香蕉， 柑橘，芒果，木瓜，鳄梨，(甜)瓜，已经在Pua and Davey(2007,Springer Science&Business Media,ISBN:3540491619,9783540491613)中描述。Sultana和Rhaman(2012,LAPLambert Academic Publishing,ISBN-13:978-3-8484-3937-9)例如公开了用于西瓜的各种组织培养和微 繁殖方法。
在一个实施方案中，用于生产西瓜属植物的根据本发明的方法是用于生产根据本发明的 非基因工程西瓜属植物的方法。
通过生产西瓜属植物的本发明方法可获得/获得的植物也是本发明的实施方案。
如上所述，本文公开的CGMMV抗性植物也适用于产生CGMMV抗性嫁接植物。
因此，本发明的另一个实施方案涉及用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的第一方法，其包括 以下步骤：
a)提供选自以下植物的砧木：西瓜属(Citrullus)、南瓜属(Curcubita)、葫芦属(Lagenaria)、 刺果瓜属(Sicyos)或冬瓜属(Benincasa)的植物、或通过任何这些属的两个物种杂交而产生的杂 种植物，
b)提供根据本发明的接穗，
c)将根据步骤b)的接穗嫁接到根据步骤a)的砧木上。
上文已经描述了，在本领域中使用来自不同属的砧木嫁接西瓜属植物是常见的。关于生 产嫁接植物或嫁接幼苗的本发明第一方法的步骤a)，砧木因此可以从步骤a)中所示的属获 得。在用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的本发明第一方法的步骤a)中提到的杂种，可以是通 过杂交选自所述属的两个不同物种而获得的任何杂种。因此，可以通过杂交同一属的两个不 同物种或通过杂交来自不同属的两个不同物种来获得该杂种。
优选地，根据步骤a)的砧木选自如下物种：西瓜(Citrullus lanatus),南瓜(Cucurbita moschata),笋瓜(Cucurbita maxima),西葫芦(Cucurbita pepo),冬瓜(Benincasa hispida),瓠瓜 (Lagenaria siceraria),刺果瓜(Sicyos angulatus),或通过杂交两个南瓜属物种产生的杂种植物。
具体砧木的例子有Nunhems砧木品种Macis F1(物种瓠瓜(Lagenariasiceraria))，Nun 3001RT F1(物种瓠瓜(Lagenaria siceraria))，Shintosa CamelforceF1(南瓜属种间杂种)， Ercole F1(南瓜属种间杂种)；或来自先正达(Syngenta)的砧木品种Emphasis(葫芦型砧木) 和Strong Tosa(种间南瓜杂种)；或来自其他与西瓜相容的砧木。
在一个特定的实施方案中，关于用于产生嫁接植物或嫁接幼苗的本发明方法的步骤a)， 砧木是根据本发明的砧木和/或砧木包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。
用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的本发明第一方法的步骤b)的接穗，可以是在本文中已 经描述为根据本发明的接穗实施方案的任何接穗。优选地，根据步骤b)的接穗得自根据本 发明的非基因工程西瓜属植物，更优选地，接穗得自根据本发明的非基因工程西瓜(Citrullus lanatus)植物，最优选地得自根据本发明的非基因工程普通西瓜亚种植物。
本发明的另一个实施方案涉及用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的第二方法，其包括以下步 骤：
a)提供根据本发明的砧木，
b)提供西瓜属植物的接穗，
c)将步骤b)的幼苗嫁接到步骤a)的砧木上。
用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的本发明第二方法的步骤a)的砧木，可以是本文已经描 述为根据本发明的砧木实施方案的任何砧木。优选地，根据步骤a)的砧木得自根据本发明 的非基因工程西瓜属植物，更优选地，砧木得自根据本发明的非基因工程药西瓜(Citrullus colocynthis)或西瓜(Citrullus lanatus)(包括普通西瓜亚种)植物。在一方面，在步骤a)中将NUN 42624或其CGMMV抗性后代用作砧木。
用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的本发明第二方法的步骤b)的接穗，可以是选自西瓜 (Citrullus lanatus)，药西瓜(Citrullus colocynthis)或诺丹西瓜的任何物种的接穗。优选地， 接穗是西瓜(Citrullus lanatus)植物的接穗，甚至更优选地，接穗是普通西瓜亚种的接穗。在 一方面，接穗是根据本发明的CGMMV抗性植物的栽培西瓜接穗，其包含一个或多个所述 QTL。
在一个特定的实施方案中，关于用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的本发明第二方法的步骤 b)，接穗是根据本发明的接穗和/或接穗包含根据本发明的非基因工程西瓜属植物细胞。
本文已经讨论了公知的嫁接方法，并且就根据本发明的用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的 第一和第二方法的步骤c)而言，这些方法因此适用于本文。可选地，根据所用的嫁接方法， 在使砧木和接穗接合(merge)以防止嫁接物变干和支持愈合后，可以用密封物(例如铝)覆盖 砧木和接穗之间的接合区域，和/或可以使用嫁接夹或硅胶套将砧木和接穗保持在一起。
任选地，根据本发明的用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的第一或第二方法包括另外的步骤 d)，其中将在步骤c)中获得的嫁接物放置在愈合室或湿度箱中。优选，嫁接物保留在愈 合室或湿度箱中，直到愈合过程完成。愈合过程完成后，将植物放到温室中使其适应环境， 之后进行移植。
在本发明的一个具体实施方案中，根据本发明的用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的第一或 第二方法的步骤a)的砧木和步骤b)的接穗，可以是已经在本文中分别描述为砧木或接穗的 实施方案的任何砧木或任何接穗。优选地，根据步骤b)的接穗得自根据本发明的非基因工 程西瓜属植物，更优选地，根据步骤a)的砧木是来自非基因工程药西瓜(Citrullus colocynthis) 或西瓜(Citrullus lanatus)植物的砧木，最优选来自本发明的普通西瓜亚种植物。优选地，根 据步骤b)的接穗得自根据本发明的非基因工程西瓜属植物，更优选地，接穗得自根据本发 明的非基因工程西瓜(Citrullus lanatus)植物，最优选地，其得自根据本发明的非基因工程普 通西瓜亚种植物。
在一个实施方案中，用于产生嫁接植物或嫁接幼苗的根据本发明的第一或第二方法，用 于生产根据本发明的嫁接植物或嫁接幼苗。因此，应理解的是，具有至少两个不同的砧木和 /或至少两个不同的接穗的嫁接植物或嫁接幼苗也可以通过根据本发明的用于生产嫁接植物 或嫁接幼苗的第一或第二方法来生产。
通过本发明的用于生产嫁接植物或嫁接幼苗的第一或第二方法获得或可获得的CGMMV 抗性嫁接植物或幼苗也是本发明的实施方案。
通过提供根据本发明的植物，现在允许对抗西瓜属植物的CGMMV感染，对抗、减少或 防止CGMMV诱导的西瓜属果实的产量损失、或从西瓜属植物产生抗CGMMV抗性种子。
因此，本发明的另一个实施方案涉及在西瓜属植物中对抗CGMMV感染的方法，其包括 以下步骤：
播种根据本发明的种子或移植根据本发明的嫁接植物或移植根据本发明的嫁接幼苗，
生长根据步骤a)播种的植物或生长根据步骤a)的嫁接植物或嫁接幼苗。
本文使用“移植”来描述通过手工或机器将幼苗或嫁接的幼苗转移到栽培或生长区域中。
在根据本发明的用于对抗西瓜属植物CGMMV感染的方法的步骤a)中，优选将种子播 种到栽培区域中，该栽培区域可以是适合于栽培西瓜属植物的任何区域，例如田地，盆或托 盘，其中可以将盆或托盘放置在开放空间或温室中，并且可以覆盖或不覆盖生长区域，例如 用铝箔或凝视隧道(gaze tunnels)。
优选地，根据本发明的用于对抗CGMMV的方法的步骤b)生长的西瓜属植物，由于根据步骤a)的种子或嫁接移植物包含的CGMMV抗性，在感染了CGMMV后不表现出由 CGMMV引起的症状(等级4)或表现出轻度症状(等级3)。
在一个特定的实施方案中，根据本发明的用于对抗CGMMV感染的方法是用于对抗、减 少或预防CGMMV诱导的西瓜属植物果实的产量损失的方法，其中该方法包括进一步的步骤 c)，该步骤是从根据步骤b)生长的植物中收获果实。
通过本发明对抗、减少或预防CGMMV诱导的西瓜属植物，特别是栽培西瓜植物的果实 产量损失的方法可获得或获得的CGMMV抗性植物的果实，也是本发明的实施方案。由于存 在一个或多个QTL，可将这些果实与其他果实区分开，这些QTL可通过与QTL连锁的SNP标记检测。换句话说，果实包含至少一个重组染色体，该重组染色体包含来自药西瓜供体的渗入片段，该渗入片段可通过序列以及与QTL连锁的SNP标记来检测。所述果实优选具有 良好的农艺品质，高糖度，良好的果实质地并且没有CGMMV感染的内部症状。优选地，使 用例如RT-qPCT在果实中不能检测到CGMMV病毒。根据倍性，果实包含1、2、3或4个 重组染色体。一方面，果实是三倍体和无籽的，并且包含三个拷贝的重组染色体，因此包含 三个拷贝的渗入片段和三个拷贝的供体SNP核苷酸，例如对于与QTL7.1连锁的SNP14，抗 性植物和植物部位的SNP基因型为‘AAA’(三个拷贝的SEQ ID NO：14)。在QTL7.1纯合 的二倍体西瓜植物中，SNP14的SNP基因型为'AA'；在QTL7.1纯合的四倍体西瓜植物中， SNP14的SNP基因型为'AAAA'。表1和表6的其他SNP标记也是如此。SNP基因型分型可 以使用多种方法完成，例如可以使用KASP测定法或其他方法，例如测序等。
“白利”或“白利糖度”或“°白利”是指使用折射计在几个成熟果实上测得的平均总可溶性 固形物含量。优选地，计算至少三个果实的平均值，每个果实在切开的果实的中心和外皮之 间测量。
一方面，本发明的栽培西瓜植物的果实，其包含一个或多个如上所述的QTL，其白利糖 度为至少9.0，优选至少10.0或11.0或更大。
一方面，包含一个或多个所述QTL的本发明栽培西瓜植物的果实是可销售的果实。与 果实质量相关的“可销售”是指西瓜果实适合出售用于新鲜食用，没有CGMMV感染的外部或 内部症状，具有良好的风味(无异味)，白利度至少为9.0、优选至少10.0或至少11.0，并且还优选均匀的果肉颜色，例如白色(例如品种Cream of Saskatchewan)，黄色(例如品种Yamato Cream 1)，橙色(例如品种Tendersweet)，粉色(例如品种Sadul)，粉红色(例 如品种Crimson Sweet)，红色(例如品种Sugar Sugar)或深红色(例如品种Dixie Lee)。
“均匀的果肉颜色”是指当从中间(中间截面)切开时，整个成熟果实的颜色均匀地分布 在整个果肉中，即无斑状。因此，红色果实在整个果肉中是红色的，并且不包含白色斑点。 具有均匀红色的果实的一个例子是二倍体品种Premium F1(Nunhems)。
本发明的一个优点是，根据本发明的非基因工程西瓜属植物或嫁接植物的果实、或由用 于本文所述的本发明方法之一的植物产生的果实，不显示出CGMMV诱导的症状。因此， 即使在田间生长的根据本发明的植物或接穗被CGMMV感染到低水平，那些植物也将产生没 有CGMMV症状的果实。这些果实将是可销售的，因此可以减少或防止产量损失。
在另一个具体的实施方案中，根据本发明的对抗CGMMV感染的方法是生产CGMMV抗性种子的方法，其中除了对抗、减少或预防CGMMV诱导的果实产量损失的方法外，该方 法还包括步骤d)：从根据步骤c)收获的植物的果实中获得种子。任选地，根据本发明的用 于产生CGMMV抗性种子的方法包括另外的步骤e)，其中将在步骤d)中获得的种子生长 成植物，并测试所述植物对CGMMV的抗性，其中优选地对CGMMV抗性进行表型分析， 例如通过目视评估症状，和/或进行基因型分析，例如通过SNP标记基因型分型。当将根据本 发明的二倍体或四倍体栽培西瓜的花授精，例如用自己的花粉(自花授精)或其他花粉(异 花授精)进行授精后，将获得种子。如果二倍体或四倍体栽培西瓜植物是渗入片段(一个或多 个)纯合的，则S1种子(自花授精后产生)也将是纯合的，而F1种子(异花授精后产生)将 是纯合的或杂合的，具体取决于花粉是来自也包含该渗入片段的植物还是缺少该渗入片段的 植物。
通过产生CGMMV抗性种子的本发明方法获得或可获得的CGMMV抗性种子也是本发明的实施方案。种子包含至少一个如上所述的重组染色体。优选地，由于包含QTL的渗入 片段，从种子生长的植物也具有CGMMV抗性(例如，CGMMV测定中等级4或等级3)。 对于显性QTL，QTL7.1和/或QTL9.1，正是这种情况。隐性QTL需要呈纯合形式来表达 CGMMV抗性表型。
一方面，在本发明的植物上产生的CGMMV抗性种子不含CGMMV病毒，即，在这些 种子中不可检测到CGMMV病毒，例如，通过RT-qPCR检测。因此，在一方面，本发明的 一个或多个QTL导致CGMMV病毒不能传播至该植物上产生的种子。在一方面，包含QTL7.1 和/或QTL9.1的栽培西瓜植物将在其果实中产生无CGMMV的种子。
本发明的植物和植物部分具有多种用途。
选自SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6的一个或多个标记的用途；和/或选 自SNP7，SNP8和SNP9的一个或多个标记的用途；和/或选自SNP10，SNP11和SNP12的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24的 一个或多个标记的用途，用于鉴定CGMMV抗性西瓜属植物或植物部分或植物细胞，优选 CGMMV抗性药西瓜植物或植物部分或植物细胞、或CGMMV抗性普通西瓜亚种植物或植物 部分或植物细胞。
选自SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6的一个或多个标记的用途；和/或选 自SNP7，SNP8和SNP9的一个或多个标记的用途；和/或选自SNP10，SNP11和SNP12的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24的 一个或多个标记的用途，用于在西瓜属植物或植物部分或植物细胞，优选CGMMV抗性药西 瓜植物或植物部分或植物细胞、或CGMMV抗性普通西瓜亚种植物或植物部分或植物细胞中 鉴定或检测赋予CGMMV抗性的QTL或包含赋予CGMMV抗性的QTL的渗入片段。
选自SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6的一个或多个标记的用途；和/或选 自SNP7，SNP8和SNP9的一个或多个标记的用途；和/或选自SNP10，SNP11和SNP12的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24的 一个或多个标记的用途，用于鉴定或检测包含赋予CGMMV抗性的QTL或包含具有赋予 CGMMV抗性的QTL的渗入片段的植物或植物部分或植物细胞，其中所述植物或植物部分或 植物细胞是西瓜属植物或植物部分或植物细胞，优选药西瓜植物或植物部分或植物细胞、或 普通西瓜亚种植物或植物部分或植物细胞。
选自SNP1，SNP2，SNP3，SNP4，SNP5和SNP6的一个或多个标记的用途；和/或选 自SNP7，SNP8和SNP9的一个或多个标记的用途；和/或选自SNP10，SNP11和SNP12的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18的 一个或多个标记的用途；和/或选自SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24的 一个或多个标记的用途，用于将CGMMV抗性(或赋予CGMMV抗性的QTL)渗入CGMMV 易感栽培西瓜植物中。
本发明的药西瓜植物或药西瓜植物细胞用于生产CGMMV抗性西瓜(Citrulluslanatus) 植物，优选用于生产普通西瓜亚种植物的用途，或用于生产西瓜(Citrulluslanatus)植物细胞， 优选普通西瓜亚种植物细胞的用途，是本发明的另一个实施方案。在一个优选实施方案中， 根据本发明的药西瓜植物或药西瓜植物细胞用于生产根据本发明的CGMMV抗性西瓜 (Citrullus lanatus)植物。
本发明的药西瓜植物的花粉用于对西瓜(Citrullus lanatus)植物，优选普通西瓜亚种植物 进行授粉的用途也是本发明的一个实施方案。
根据本发明的西瓜属植物或西瓜属植物细胞在生产嫁接植物，优选根据本发明的嫁接植 物中的用途是本发明的另一个实施方案。
根据本发明的非基因工程西瓜属植物或西瓜属植物细胞用于生产CGMMV抗性种子的用 途是本发明的另一个实施方案。
保藏号NCIMB 42624的种子用于生产CGMMV抗性西瓜属植物，优选根据本发明的非基因工程CGMMV抗性西瓜属植物的用途，也是本发明的一个实施方案。
根据本发明的非基因工程西瓜属植物或西瓜属植物细胞用于生产果实，优选地根据本发 明的果实的用途，是本发明的另一个实施方案。
根据本发明的非基因工程西瓜属植物或西瓜属植物细胞用于生产无籽果实，优选根据本 发明的无籽果实的用途，是本发明的另一个实施方案。
动词“包含”及其变化形式以其非限制性含义使用，表示包括该词之后的项目，但不排除 未特别提及的项目。另外，不定冠词“一”或“一个”所指的要素不排除存在一个以上所述要素 的可能性，除非上下文明确要求存在且仅存在一个所述要素。因此，不定冠词“一”(a)或“一 个”(an)通常意味着“至少一个”，例如，“一个植物细胞”也指几个植物细胞等。类似地，“一个 果实”或“一个植物”也指多个果实和植物。
一方面，根据本发明的植物、植物部分和植物细胞并非仅通过EPC规则28(2)(欧洲专利公约)所定义的主要生物过程来获得。例如，药西瓜QTL例如QTL7.1或QTL9.1的原 因基因，可以通过例如对存在所述QTL的7号染色体或9号染色体区域进行精细作图和/或 测序来加以确定，可以确定栽培西瓜的直系同源基因，并且可以通过例如下述方法使栽培西 瓜直系同源基因发生突变：例如，UV诱变，EMS诱变，CRISPR-Cas基因组修饰等。由此， 可以产生包含修饰的基因(例如QTL7.1或QTL9.1所基于的基因)的CGMMV抗性西瓜植物。 在这个方面，本文对药西瓜渗入片段的提及可以替代为西瓜植物具有CGMMV抗性，因为所 述植物“包含存在于QTL7.1基因座或QTL9.1基因座(或其他任何基因座)的药西瓜基因的 直系同源西瓜基因的(人为诱导的)突变基因”。
在一方面，本文描述的赋予CGMMV抗性的QTL不是从USDA核心种质保藏中心的药西瓜种质PI386015，PI388770，PI525082和PI537300获得/可获得。
种子保藏
CGMMV抗性植物的二倍体药西瓜种子已根据布达佩斯条约由Nunhems B.V.于2016年8 月10日在NCIMB Ltd.(Bucksburn Aberdeen AB21 9YA,Scotland)保藏，保藏号为NCIMB 42624。
在本申请待决期间，该保藏物的获取对于如下个体将是有效的，其中所述个体由专利和 商标局局长确定为应要求有权获取的个体。
申请人要求，根据EPC规则32(1)或具有类似规则和规定的国家或条约的相关立法， 仅将该生物材料的样本以及自该样本衍生的任何材料发放给指定的专家，直到提及专利授予 为止，或者自申请之日起20年(如果该申请被驳回、放弃、撤回或视为撤回)。
根据37C.F.R.第1.808(b)条规定，在专利授权后，通过提供对保藏物的获取，将不可 逆地去除保藏人对公众可获得一个或多个保藏物所施加的所有限制。保藏物将维持30年、 或者自最近一次请求后5年、或者专利的有效期(以较长者为准)，如果在此期间保藏物失 活，则将予以更替。申请人不放弃在基于本申请的专利下或在《植物品种保护法》(7USC2321等)下被授予的任何权利。
附图简述
图1：用于生产接穗的NCIMB 42624植物和用于生产砧木的CGMMV感染的西瓜(Citrullus lanatus)栽培品种Sugar baby植物(图片在25dpi拍摄)(A)；NCIMB 42624 接穗嫁接到受CGMMV感染的西瓜栽培品种Sugar baby砧木上，140dpi后拍摄的照片显示 接穗没有症状(等级4)(B)；CGMMV感染的西瓜栽培品种Sugar baby植物，140dpi后 拍摄的照片显示严重症状(C)；
图2：根据一般方法下描述的症状目视评估，在接种CGMMV后显示出代表等级1的严重症状(叶变形、起泡和清晰花叶)的西瓜属植物的实例。
图3：根据一般方法下描述的症状目视评估，接种CGMMV后显示出代表等级2的中等症状(叶片轻度变形但清晰的花叶)的西瓜属植物的实例。
图4：根据一般方法下描述的症状目视评估，接种CGMMV后显示出代表等级3的轻度症状(非常轻度的花叶和很少的明斑)的西瓜属植物的实例。
图5：显示出严重的CGMMV症状的果实的例子，该果实由接种了CGMMV的对CGMMV 易感的西瓜属植物产生。
图6：显示出无症状的果实的例子，该果实由接种了CGMMV的CGMMV抗性西瓜属 植物产生。
序列描述
SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6是来自药西瓜的与QTL1.1连锁的染色体1的序列，分别包含SNP1至SNP6的供体核苷酸；
SEQ ID NO：7至SEQ ID NO：9是来自药西瓜的与QTL4.1连锁的染色体4的序列，分别包含SNP7至SNP9的供体核苷酸；
SEQ ID NO：10至SEQ ID NO：12是来自药西瓜的与QTL5.2连锁的染色体5的序列，分别包含SNP10至SNP12的供体核苷酸；
SEQ ID NO：13至SEQ ID NO：18是来自药西瓜的与QTL7.1连锁的染色体7的序列，分别包含SNP13至SNP18的供体核苷酸；
SEQ ID NO：19至SEQ ID NO：24是来自药西瓜的与QTL9.1连锁的染色体9的序列，分别包含SNP19至SNP24的供体核苷酸；
SEQ ID NO 25:RT PCR中用于检测植物组织中CGMMV RNA的反向引物。
SEQ ID NO 26:RT PCR中用于检测植物组织中CGMMV RNA的正向引物。
SEQ ID NO 27：用于定量RT PCR的有义引物，用于定量植物组织中的CGMMV RNA。
SEQ ID NO 28：用于定量RT PCR的反义引物，用于定量植物组织中的CGMMV RNA。
SEQ ID NO：29：用于定量RT PCR的探针寡核苷酸，用于定量植物组织中的CGMMVRNA。
实施例
一般方法
实施例：机械叶接种以评估CGMMV抗性
第1项：用于植物感染的CGMMV接种物的制备
由感染了欧洲型病毒株Ve459(CNR，都灵)的CGMMV易感黄瓜植株(例如，品种Sheila，Nunhems B.V.)产生了用于感染西瓜属植株的接种物。从黄瓜植株上摘下显示出明显的CGMMV感染症状的新鲜幼叶(有症状的叶)。每1克有症状的黄瓜叶添加5ml的冷 藏(5℃)0.03M磷酸盐缓冲液，然后每1克黄瓜叶添加0.05克活性炭和0.1克硅藻土。在研 钵中用研杵粉碎叶材料，在研碎过程中和之后保持冰冷。
为了测试西瓜属植物是否对CGMMV具有抗性，建议使用由新鲜繁殖的材料新鲜制成的 接种物。
第2项：CGMMV感染(西瓜属)植物
通过将接种物摩擦到幼苗的第一片真叶上来进行叶接种。因此，当第一片真叶展开时(播 种后约15至20天)，使用按一般方法第1项所述制备的接种物，接种(西瓜属)植物的幼苗。 第一次接种后4到5天，第二次接种幼苗。对照幼苗仅用缓冲液接种(模拟接种)。将接 种后的植物保持在间接光照下，避免直射阳光直到第二次接种。用于保持接种后幼苗的温度 方案是夜间18℃，日间25℃，日照12-14小时。每个基因型(例如，CGMMV抗性基因型，易感对照基因型)优选接种至少10株植物，至少重复两次。此外，还包括多个模拟接种的 植物。
第3项：疾病症状评估
在首次接种后在以下时间点(dpi，接种后天数)分析已接种的植物的症状和/或CGMMV 病毒的存在：
15dpi
30dpi
45dpi
60dpi
如果需要的话，可以在例如140dpi或甚至更晚时间，检测果实的症状和/或CGMMV的 存在。
对照植物
必须在所有测试系列中包括对照。重要的是，包括已知对CGMMV易感的(西瓜属)植物 (例如西瓜商业品种Sugar Baby)作为阳性对照，以检查CGMMV的感染效率。优选地， 至少95％的阳性对照植物在20dpi后应在叶上表现出严重症状(等级1)，并且优选地，这 些植物产生的果实应显示出严重症状。另外，应包括阴性对照植物，以接种了仅磷酸盐缓冲 液的CGMMV易感植物为代表，作为模拟接种。另外，未接种的植物可以包括在测试系列 中。阴性对照在任何时候都不应在叶或果实中显示出CGMMV感染症状，并且在模拟接种 的植物中不应检测到CGMMV蛋白和/或RNA。
叶上CGMMV症状的目视评估
在叶上目视评估的症状根据以下等级分类：
等级1：严重症状：叶片变形，起泡且花叶清晰(图2所示例)
等级2：中度症状：叶片轻度变形但花叶清晰(图3所示例)
等级3：轻度症状：非常轻度的花叶，很少的明斑(图4所示例)
等级4：无症状(图1B所示例)
接种后的植物组织中的病毒检测：ELISA
为了证明植物中是否存在CGMMV，在第二次评估(30dpi)后，将通过目视评估症状分类为等级4的所有植物，进行了ELISA分析。根据ELISA分析获得的结果，基于以下等 级对测试的植物进行分类：
ELISA阴性
如果吸光度<0.5，低阳性
如果吸光度>0.5，ELISA阳性
植物材料中是否存在CGMMV也可以通过RT-PCR评估或通过RT-qPCR检测(参见一般方法第4项)和/或通过组织印迹(Tissue print)或DotBlot(一般方法第5项)进行定量。
第4项：已接种的植物组织中的病毒检测：植物组织中CGMMV的PCR检测
通过逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)检测植物材料中CGMMV的存在，并使用逆转录酶定量聚合酶链反应(RT-qPCR，TaqMan)定量植物材料中的CGMMV。也参见Hongyun 等人,2008,J Virological Methods 149,326-329，通过引用并入。
a)从植物材料中提取RNA
在研钵中用研杵将叶组织(200mg)在液氮中研磨成细粉，并转移到无菌微量离心管中。 根据制造商的说明，用Trizol试剂(Invitrogen)提取总RNA。将得到的RNA沉淀重悬于 30μl DEPC-处理过的水中，并保存在-80℃。RNA浓度通过ND-1000分光光度计(NanoDropTechnologies)测定。
b)逆转录酶PCR(RT-PCR)
根据可从EMBL数据库获得的CGMMV外壳蛋白基因和3'非编码区(NCR)核苷酸序列，设计了用于RT-PCR的寡核苷酸。cDNA的第一链由SuperScript II逆转录酶(Invitrogen)合成，其中使用反向引物：5'-TTG CAT GCT GGG CCC CTA CCC GGG GAA AG-3'(SphI；SEQID NO 25)引发。用于PCR的正向引物的序列是：5'-CCG AAT TCA TGG CTT ACA ATC CGATCA C-3'(EcoRI；SEQ ID NO 26)。热循环方案是：94℃3分钟；94℃30秒、53℃ 45秒、72℃1分钟，35个循环；随后72℃最终孵育7分钟。
将预期的700个碱基对的PCR产物克隆到pGEM-3Zf质粒中，并使用自动ABI3730DNA 测序仪在两个方向上对阳性克隆进行测序，以确认扩增的序列获自CGMMV病毒RNA。
c)RT-qPCR
按照制造商提供的说明书中所述的步骤，使用Primer Express软件(AppliedBiosystems， 版本2.0)设计了用于TaqMan测定的引物和探针。CGMMV特异性引物是5′-GCATAG TGC TTT CCC GTT CAC-3′(有义；SEQ ID NO 27)和5′-TGC AGA ATT ACT GCC CAT AGAAAC-3′(反义；SEQ ID NO 28)。探针为5′-CGG TTT GCT CAT TGG TTT GCG GA-3′(SEQ IDNO 29)，用6-羧基荧光素(FAM)标记，3'末端标记N,N,N′,N′-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)。
所有反应均在最终体积50μl中进行，其中包含：25μl 2×Master Mix(不带UNG)，1.25μl 40×MultiScribe和RNase抑制剂混合物，1μl正向引物(20μM)，2μl反向引物(20μM)，0.5μl 探针(20μM)，1μl总RNA或5μl RNA转录物，并基于模板调节DEPC-水的体积。如下在 
96(Roche LifeScience)上进行热循环：在48℃下30分钟；在95℃下10分钟； 在95℃15秒和60℃1分钟，40个循环。
将微克单链RNA转换为皮摩尔数和RNA分子的数量，如Olmos等人(2005,J VirolMethods 128(1-2),151-155)中所述。制备转录本的十倍系列稀释液，每5μl从5×1012到50个 拷贝，等分并保存在-80℃。通过实时RT-PCR测定法扩增从5×108至5×100的稀释液。进行 三次重复测定，可以观察到低至50个拷贝的RNA转录本的稳定扩增。
第5项：通过杂交检测CGMMV(Tissue Print或DotBlot)
用于组织印迹的膜制备
戴上手套，用消毒剪刀将尼龙膜切成所需尺寸来准备尼龙膜，然后在上面放一块微孔板 网格模板(实际尺寸取决于所用样本的类型)。用干净的无菌手术刀在叶柄上造成一个横切 口，然后轻轻压入其中一个网格中，直到所有汁液被吸收。每个后续印迹，一个新切口。对 于纯化的DNA或RNA样本，1μl样本就足够了。
包括相应相同植物物种的健康阴性对照和已知感染的阳性对照。也应包括纯化的病毒或 其扩增的PCR产物作为阳性对照。等待直到膜完全干燥，然后使用UV光在0.120Jcm-2(交 联)下将核酸固定在膜上。将干燥的膜在室温下保存，并密封在塑料袋中。
用于DotBlot的膜制备
称量样本组织，并以适当的稀释度在适当的提取缓冲液中研磨。用微量移液器取10-20μl 提取物，并小心地移开吸头，确保内部液体不上升并变成气密状态。使用微孔板网格作为引 导，轻轻地(快速)将移液器吸头触膜，将提取物涂到膜上(印迹)。所得的点的体积约为 250nl，可以在每个网格位置中放置4个。每个样本使用2–4个点，具体取决于膜的目的和 杂交探针的质量。
印迹对照、交联和存储如上文针对组织印迹膜所述。
可以印制重复的膜作为备用，以防在处理过程中出现问题。
膜预杂交
使用扁平镊子将如上所述制备的用于组织印迹或DotBlots的膜放入杂交管中。在室温下 添加预杂交溶液(DIG Easy加1％封闭剂)(足以覆盖膜；例如8x 12cm膜用20毫升，8x 6cm 用10毫升)。在杂交箱中于54℃旋转孵育大约2小时。从现在开始，确保膜不变干。
膜杂交
使用冷冻的储备探针溶液制备新鲜的杂交溶液(DIG Easy溶液加1％封闭剂)，以每8x 12cm膜获得80-120ng探针。将杂交溶液在100℃(对于DNA探针)或65℃(对于RNA 探针)预热10分钟。从膜上丢弃预杂交溶液，然后将稀释的探针溶液添加到膜上。在杂交 箱中于54℃旋转孵育过夜。
洗膜
从膜上丢弃杂交溶液，并在杂交箱中旋转下在杂交管中进行以下步骤：
1.在杂交温度下，以2x杂交体积在6x SSC+1％SDS中洗涤40分钟。
2.丢弃液体并重复洗涤。
3.将膜转移到检测盘+溶液1中(避免膜干燥)。
检测
将膜转移到比膜稍大的托盘中。从这里开始，该过程在室温下进行并轻柔搅动。相对于 托盘和膜的尺寸调整溶液的体积(例如，600μl/cm2或50ml用于8x 12cm的膜)。重要的是，在以下步骤中不要使膜变干：
用以下溶液洗涤膜：
1.溶液I，1分钟
2.清洗溶液，5分钟
3.溶液I，1分钟
4.溶液II，30分钟(在量筒中准备2x体积)
5.溶液II(来自上一步)+Anti-DIG(1：20000)，30分钟
6.清洗溶液，15分钟
7.清洗溶液，15分钟
8.溶液I，1分钟
9.溶液III，最少5分钟
在600μl溶液III中稀释碱性磷酸酶化学发光底物(CDP-Star(1:100)。将膜置于两片醋酸 膜之间，并使用微量移液器将底物均匀地分布在膜上(1滴＝4个小扇形)。通过几次升高 和降低顶部乙酸膜进行混合，注意不要引入气泡。暗处孵育5分钟(例如，盖上铝箔)。用 滤纸压去多余的底物，热封醋酸膜边。
制备此处提及的溶液需要以下试剂：
试剂:
封闭剂(Roche)
马来酸.
NaCl
Tris-HCL
Tween 20
Anti-Dig(Roche).
CDP-Star(Roche).
溶液:
溶液I:0.1M马来酸,0.15M NaCl,pH 7.5
溶液II:1％封闭剂在溶液I中.
溶液III:0.1M Tris-HCl pH 9.5,0.1M NaCl
清洗溶液:0.3％Tween 20在溶液I中
数码成像
将膜放在数字成像室中，并在环境照明下拍摄一张照片(Nikon Control Pro2，50mm物 镜，启用远程拍摄的手动控制，ISO 0.3步跨6400，检查长曝光降噪箱，照相机预冷最小30 分钟，<10℃)。
关闭成像室，将快门速度更改为“Bulb”，将光圈更改为1.4。使用DSLR_Bot，长时间曝 光功能，将曝光时间设置为5分钟03秒。确保红外相机线完全插入，输出电平最大，然后按Start(开始)(应可听到“喀哒”声)。相机在打开光圈的情况下拍摄一张图像，关闭光圈一秒以降低噪音——总时间为10分钟06秒，每张照片5分钟03秒。
曝光5分钟的一张照片大致相当于2-4小时曝光的常规图像。如果需要更强的信号，则 可以进行10分钟的数字曝光(相当于过夜的常规图像)。对于外部诊断或低信号，建议使 用常规的过夜曝光。
第6项：西瓜属植物的嫁接
由15日龄CGMMV接种的西瓜(Citrullus lanatus)栽培品种Sugar baby植物或栽培品种 Ercole(Nunhems B.V.)制备砧木。从20日龄的NCIMB 42624植物制备接穗。通过在砧木 的茎和接穗的枝条上进行斜切，将接穗嫁接到砧木上，然后将它们接合在一起，从而使脉管 系统接合起来。在高湿度下愈合后，将嫁接的植物转移到温室中。
实施例-结果
结果1：抗CGMMV抗性西瓜属植物的鉴定
根据本文一般方法下所述的方法，在感染了CGMMV的温室或气候室中生长一组各不同 的西瓜属物种种质。根据一般方法第1项制备用于CGMMV感染的接种物，并按照一般方法第3项所述目视评估接种后的植物的症状。鉴定出没有CGMMV诱导症状的单一一株药西瓜植物(等级4)。该植物进行多次自交，然后将所选的抗CGMMV抗性植物繁殖以获得种 子，在布达佩斯条约下作种子保藏，保藏号NCIMB 42624。
结果2：CGMMV抗性植物的产生及其分析
西瓜(Citrullus lanatus)植物
来自NCIMB 42624的花粉用于授粉普通西瓜亚种的优良品系。从杂交产生的种子中生 长出F1植物，以进一步分析CGMMV抗性。
还通过使F1植物自交来制备F2植物。必须指出的是，从F1植物(NCIMB 42624x普通西瓜亚种的优良品系)获得F2种子和回交，是复杂的。仅有很少的果实发育，并且在这 些果实中大多数种子是空的。
使用一般方法项目1-3中所述的机械叶接种方法和一般方法项目4中所述的RT-qPCR， 对F1植物的CGMMV抗性和CGMMV病毒的存在进行了测试。
结果如下。模拟接种的植物显示无症状。阳性对照Sugar baby植物显示出等级1的CGMMV症状。F1植物具有CGMMV抗性，并且显示无症状(等级4)。
表2:
对于每组植物，15dpi，30dpi和60dpi进行了植物中CGMMV RNA的定量分析：
上面的RT-qPCR结果显示植物材料中CGMMV RNA的量。“模拟”表示接种了缓冲液但没有接种CGMMV的植物。“接种”表示已经如一般方法项目1-3的机械叶接种测试中所述用CGMMV接种了植物。“Sugar”表示易感西瓜栽培品种Sugar baby植物。“F1”表示从NCIMB42624x普通西瓜亚种优良品系杂交获得的植物。“rep”表示不同的植物，其中每个rep由一组6株植物组成。
RT-qPCR是检测植物样本中CGMMV RNA分子的高度灵敏方法(Hongyun et al.,2008,J Virological Methods 149,326-329)。从上面的表2中可以看出，使用高灵敏度的RT-qPCR方 法，可以在几乎所有时间点(15dpi，30dpi和60dpi)在分析的所有植物中检测到CGMMV RNA。从表2显然可以得出，从NCIMB 42624x普通西瓜亚种优良品系之间杂交获得的F1 植物中CGMMV RNA的量，比CGMMV易感西瓜栽培品种Sugar baby中的CGMMV RNA 量低几个数量级。在所有时间点，该量为四个重复实验的平均值低于5.0x 10-5ng/μl，并且 在后面的时间点逐渐降低。易感对照的平均值为至少0.02ng/μl(在35dpi)，但在15dpi 和60dpi时甚至高得多，分别高于1.7ng/μl和高于0.8ng/μl。
从症状的目视评估中，明显地，F1植物对CGMMV具有抗性，因为它们在接种CGMMV后不产生症状(等级4)。西瓜栽培品种Sugar Baby已知对CGMMV易感，接种CGMMV 后确实显示出严重症状(等级1)。因此，上表中所示的F1植物中极低的CGMMV量清楚 地表明，CGMMV抗性与相应植物材料中CGMMV RNA的显著降低有关。当按照一般方法 项目1-3中所述的机械叶接种方法进行测试时，F2植物也没有CGMMV症状(等级4)。F2 植株上产生的果实在外部或内部也没有症状。没有症状的F2植物(等级4)在叶中的病毒 滴度也极低(未显示RT-qPCR数据)，与易感对照相比明显降低。
嫁接的植物
根据本文一般方法中所述的方法，将来自NCIMB 42624的接穗嫁接到CGMMV感染的砧木上，该砧木是由商业普通西瓜亚种植物(栽培品种Sugar Baby)或由笋瓜x南瓜栽培品种Ercole杂种(Nunhems B.V.)制备。
分析植物
分析了温室种植的F1植物(NCIMB 42624x普通西瓜亚种优良品系)、由NCIMB42624 的接穗和普通西瓜亚种栽培品种Sugar Baby的感染砧木组成的嫁接植物(“NCIMB42624– Sugar baby”)、以及由NCIMB 42624的接穗和来自笋瓜x南瓜栽培品种Ercole杂种的感染砧 木组成的嫁接植物(“NCIMB42624–Ercole”)。使用机械叶接种法，非嫁接的植物 (NCIMB42624,F1,Sugar Baby)接种了CGMMV。嫁接的植物如一般方法中所述使用CGMMV 感染的Sugar Baby植物或Ercole植物的砧木制备。
在无一植物中，可以通过目视分析检测到由CGMMV引起的叶片症状。如本文一般方法第3项所述，通过目视评估症状，将所有植物确定为等级4。
此外，所有植物确实产生从外部看起来正常的果实，并且内部没有显示出变质或水泡果 肉的症状。这些植物产生的果实的代表性图片显示在图6中。
几乎所有接种了CGMMV的非嫁接普通西瓜亚种栽培品种Sugar Baby植物都表现出明显 的症状，并已通过目视评估症状(如一般方法第3项所述)被确定为等级1或等级2。这些 植物产生的果实确实显示出严重果肉变质。这些植物产生的果实的代表性图片显示在图5中。
通过一般方法第5项所述的点印迹杂交分析(*)和一般方法第4b)项所述的RT-PCR分 析(**)，进一步分析了西瓜F1植物和嫁接植物(“NCIMB42624–Sugar Baby”和“NCIMB42624–Ercole”)的叶中是否存在CGMMV病毒RNA。下表中给出了获得的结果。
表3:
上表3显示，通过机械叶接种或通过将未感染的接穗嫁接到受感染的砧木上感染CGMMV后，在CGMMV抗性药西瓜植物(NCIMB 42624)、通过杂交NCIMB 42624x普通西 瓜亚种获得的F1植物和嫁接的植物(“NCIMB 42624–Ercole”和“NCIMB 42624-Sugar baby”)的叶中，CGMMV RNA的检测结果。来自CGMMV易感商业栽培品种Sugar Baby的 植物用作阳性对照。+/-表示非常弱的信号，-表示没有信号，+表示强烈的阳性信号；dpi： 感染后的天数。(*)点印迹法，(**)RT-PCR方法。
对于CGMMV易感对照植物，从早期(dpi 14)到晚期(dpi 90)的整个植物发育过程中 都检测到病毒。在NCIMB42624中在早期阶段(dpi 14和30)检测到CGMMV RNA的非常 弱信号，但在后期阶段(从dpi 40开始)这些信号消失。F1植物(NCIMB 42624x优良品系) 获得了类似的结果。除了“NCIMB 42624-Sugar baby”嫁接物在dpi 60检测到弱的信号，对 于嫁接植物，在发育的任何阶段(从dpi 14到dpi 90)在叶子中均未检测到CGMMV RNA。 从下表4中可以看出，对“NCIMB 42624-Sugar baby”嫁接物的进一步分析证实，指示存在少 量CGMMV RNA的弱信号仅是由于在早期(dpi 14)在八株植物中的一株植物中存在病毒。在 后期(dpi 60)，在该同一植物中通过点印迹和PCR不再检测到该信号。
表4:
上表4显示，在嫁接到CGMMV感染的砧木后，在嫁接的植物(“NCIMB 42624-Sugarbaby”)中CGMMV RNA的检测结果。+/-表示弱信号，-表示无信号。
表3和表4的上述非定量而仅定性的结果，与表2中较早的定量结果相符，这是因为抗 性植物早期的极低病毒水平在后期逐渐降低，然后只能使用定量方法检测到，即在40dpi或 以后在60dpi或在此后仅存在极低的病毒滴度。此外，在抗性接穗中，使用这些定性方法无 法检测到CGMMV病毒。
此外，还对从接穗-砧木组合获得的叶进行了RT-qPCT，其中如一般方法第6项中所述用 CGMMV感染砧木。所用的砧木是Sugar Baby。
发现叶样本在140-150dpi的平均Ct值如下。每个重复由6株植物组成。注意，低Ct值表示高病毒滴度，而高Ct值表示低病毒量。
表5
以上清楚地表明，NCIMB 42624植物和NCIMB 42624x普通西瓜亚种优良品系的杂交植 物没有显示出CGMMV感染的任何症状，并且上部叶中的病毒含量非常低，几乎不可检测； 包含嫁接到CGMMV感染的砧木上的NCIMB42624接穗的嫁接植物(“NCIMB42624–SugarBaby”和“NCIMB42624–Ercole”)没有在接穗上表现出CGMMV感染的任何症状。因此， NCIMB42624植物对CGMMV具有抗性，该CGMMV抗性可以转移到其他西瓜属物种，包 括普通西瓜亚种优良品系，并且当将CGMMV抗性接穗嫁接到CGMMV感染的砧木上时， 该抗性可以得以保持。
结果3–在NCIMB 42624中发现的CGMMV抗性的QTL作图和标记开发
通过将NCIMB 42624与CGMMV易感优良西瓜品系杂交，产生了三个作图群。制作了一个BC1群(回交)和两个F2群。如所描述的，将植物用CGMMV机械接种，并使用所 述的目视等级来评估症状，也使用ELISA测试评估病毒滴度。使用在大多数情况下在30dpi 或更晚评估的症状进行作图。
总共作图了7个QTL(2个在染色体1上，1个在染色体4上，2个在染色体5上，1个 在染色体7上，1个在染色体9上)，其中5个QTL(QTL.1.1在染色体1上，QTL4.1在染 色体4上，QTL5.1在染色体5上，QTL7.1在染色体7上，QTL9.1在染色体9上，见下表6) 用于进一步回交，并且对于这5个QTL，下面提供与这些QTL连锁的SNP标记。
两个QTL，QTL7.1和QTL9.1，是显性，导致了植物具有等级3或等级4的症状水平。它们对病毒滴度也有显著影响，在这些QTL回交进入的栽培西瓜中，病毒滴度显著降低。
在下表(表6)中，列出了五个QTL每个的染色体，以及栽培西瓜基因组中SNP的碱基对(bp)位置(参见cucurbitgenomics.org，“Watermelon(Chareleston Gray)genome”)。指出 了抗性亲本(即NCIMB 42624)和易感亲本(优良西瓜品系)的SNP基因型。种子保藏物NCIMB 42625对SNP基因型是纯合的，并且包含纯合形式的所有五个QTL。
表6:
对于每个SNP，序列在本文的序列表中提供，并且该序列具有与SNP相同的编号。序列 包含抗性供体的SNP核苷酸。因此，对于SNP1，包含抗性亲本SNP的序列(位置51处的“C”)提供为SEQ ID NO：1，等等。也见表1。
已产生包含不同QTL组合和单个QTL的BC3和F2系。接种后，评估它们的CGMMV 抗性和病毒滴度。
还将评估病毒滴度以及非常低的病毒滴度是否导致病毒向易感西瓜植物或其他宿主(如 黄瓜)的传播能力。同样，将研究病毒向CGMMV抗性植物产生的种子的传播能力。
另外，将进行精细作图。“精细作图”是指可以缩小QTL位置的方法。例如，可以在性状分离的大群体中分析性状和SNP标记的分离，并且可以选择在两个标记之间的区域中包含 重组事件的植物，以确定QTL介于哪对SNP标记对之间。也可以搜索位于最紧密连锁标记附近或侧翼的其他标记，以缩小QTL所在的区间。
实施例：病毒从NCIMB42624植物(药西瓜种质)向黄瓜和易感西瓜植物的传播
机械接种了CGMMV病毒欧洲型VE459(如上所述)但显示无症状(等级4)的NCIMB42624植物的叶，被用于制备接种物，该接种物用于机械接种黄瓜品种Sheila的215株植物和西瓜品种Sugar Sugar的193株植物。约30dpi后，目视评估植物的CGMMV症状， 并进行PCR测定以检测叶中的病毒。
结果显示在下表7：
结果显示，只有一株黄瓜植物被接种物感染(一株植物表现出症状并且在PCR测试中呈 阳性)，而西瓜植物无一被接种物感染。这意味着在NCIMB 42624下保藏的抗性药西瓜种 质不允许CGMMV传播给西瓜植物，并且仅允许极低水平的黄瓜植物传播(少于1％的植物被感染)。
实施例：在包含来自药西瓜供体(NCIMB 42624)的各种QTL组合的西瓜品系中CGMMV 的种子传播能力
允许包含一个或多个来自药西瓜供体的QTL且在机械CGMMV接种后存活的各F3家族 结果，并如上所述使用定量PCR(RT-qPCR)分析了这些果实中产生的种子的CGMMV病毒。目的是确定QTL是否可以防止种子感染并从而防止病毒的种子传播能力。qPCR在210dpi 进行。低Ct值表示高病毒滴度，高Ct值(高于30)表示低病毒滴度。
结果显示在表8中:
结果表明，含有至少QTL 9.1和/或QTL 7.1的所有品系对于CGMMV病毒向种子的传播 均为阴性。特别是至少QTL9.1的存在看起来可以阻止病毒的种子传播。
实施例：比较药西瓜种质的CGMMV抗性
将各种药西瓜种质的10粒种子萌发，并如上所述对植物进行机械接种，以便比较该 CGMMV抗性与NCIMB 42624保藏种质的抗性。使用等级1(严重症状)，2(中度症状)， 3(轻度症状)和4(无症状)对每株植物进行表型分析。注意，已知PI种质是异质的。
许多PI种质没有萌发，因此无法评估。
可以评估以下PI种质：PI537300，PI542616，PI549161，GRIF14201，PI220778，PI386015， PI432337，PI388770和PI386018。这些种质的三个(PI537300，PI386015，PI388770)是 USDA核心种质资源的一部分，已描述具有潜在的CGMMV耐受性(CucCAP，第二届CucCAP 年度团队会议，2017年3月27日至28日，Chareleston，第26和27页，“评估西瓜PI保存 物对黄瓜绿斑驳花叶病毒CGMMM的抗性以及进行全基因组相关性作图以鉴定与CGMMV抗性相关的SNP"，结合GRIN种质资源中指出的USDA核心种质资源的药西瓜种质，其中 只有4个药西瓜种质是该“核心子集”的一部分；该测试包括了这4个核心子集中的三个，但 不幸的是，PI525082未能包括在该测试中。)
但是，在我们的测试中，所有测试过的种质，包括USDA核心种质资源的三个种质，均 具有平均症状得分小于或等于3(个体植物的平均值)，整个测试中没有一株植物的得分为4 (无症状)，除了本发明的NCIMB 42624(所有植物的得分均为4)。在所有其他药西瓜种质中，PI386015具有最佳的CGMMV耐受性，其中所有植物的评分均为3(轻度症状)。PI537300有6株得分为3(轻度症状)的植物和4株得分为2(中度症状)的植物。PI388770 有6株植物的得分为1(严重症状)，3株植物的得分为2(中等症状)和1株植物的得分为 3(轻度症状)。
该测试证实，在NCIMB42624保藏的选定药西瓜中的CGMMV抗性，与所测试的任何其他药西瓜种质相比，具有最高抗性，后者大多具有耐受性(得分3，轻度症状)。
PCT/RO/134表
Claims (16)
1.一种栽培的西瓜植物或植物细胞，其包含药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体9和/或染色体7上的渗入片段，其中在染色体9上的渗入片段包含介于SNP19，在SEQ IDNO：19的核苷酸51位，和SNP24，在SEQ ID NO：24的核苷酸51位，之间的CGMMV抗性供体植物序列，并且其中染色体7上的渗入片段包含介于SNP13，在SEQ ID NO：13的核苷酸51位，和SNP18，在SEQ ID NO：18的核苷酸51位，之间的CGMMV抗性供体植物序列。
2.根据权利要求1的栽培西瓜植物或植物细胞，其中染色体7上的渗入片段包含SNP14(SEQ ID NO：14的核苷酸51)的CGMMV抗性供体植物序列，并且其中染色体9上的渗入片段包含SNP22(SEQ ID NO：22的核苷酸51)的CGMMV抗性供体植物序列。
3.一种栽培的西瓜植物或植物细胞，其包含来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体7和/或染色体9的渗入片段，其中染色体7上的渗入片段包含SEQ ID NO：13或与SEQID NO：13至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤，和/或SEQ ID NO：14或与SEQ ID NO：14至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤，和/或SEQ IDNO：15或与SEQ ID NO：15至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：16或与SEQ ID NO：16至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：17或与SEQ ID NO：17至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胸腺嘧啶，和/或SEQ ID NO：18或与SEQ ID NO：18至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的腺嘌呤，并且其中染色体9上的渗入片段包含SEQ ID NO：19或与SEQ ID NO：19至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：20或与SEQ ID NO：20至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：21或与SEQID NO：21至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤，和/或SEQ ID NO：22或与SEQ ID NO：22至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ IDNO：23或与SEQ ID NO：23至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的胞嘧啶，和/或SEQ ID NO：24或与SEQ ID NO：24至少具有95％序列同一性的序列在核苷酸51位的鸟嘌呤。
4.根据前述权利要求中任一项的栽培西瓜植物或植物细胞，其中染色体7上的渗入片段为纯合或杂合形式和/或其中染色体9上的渗入片段为纯合或杂合形式。
5.根据前述权利要求中任一项所述的栽培西瓜植物或植物细胞，其中，所述渗入片段来自药西瓜种质，该种质的代表性种子样本已经以保藏号NCIMB 42624保藏。
6.根据前述权利要求中任一项的栽培西瓜植物或植物细胞，其中所述植物包含等级3(轻度症状)或等级4(无症状)的CGMMV抗性。
7.根据前述权利要求中任一项的栽培西瓜植物或植物细胞，其中所述植物或植物细胞是近交植物或植物细胞、或F1杂种植物或植物细胞、或二倍体或四倍体或三倍体植物或植物细胞。
8.种子，其生长成根据权利要求1至7中任一项所述的植物。
9.一种栽培西瓜的果实或果实部分，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的植物细胞。
10.一种栽培西瓜植物的繁殖材料，其包含权利要求1至7中任一项的栽培的西瓜植物细胞。
11.根据权利要求7的二倍体和四倍体品系作为亲本在三倍体杂种种子生产中的用途。
12.一种生产三倍体杂种栽培西瓜种子的方法，包括以下步骤：
a)提供第一CGMMV抗性近交二倍体西瓜植物，其包含两个染色体7，每个染色体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体7的渗入片段，该渗入片段包含QTL7.1和SNP14(SEQ ID NO：14)或者介于SNP13和SNP18之间或者介于SNP13和SNP15之间的供体植物序列；或渗入片段包含QTL7.1和SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中一个或多个或全部的抗性供体基因型；
b)提供第二CGMMV抗性近交四倍体西瓜植物，其包含四个染色体7，每个染色体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体7的渗入片段，该渗入片段包含QTL7.1和SNP14(SEQ ID NO：14)或者介于SNP13和SNP18之间或者介于SNP13和SNP15之间的供体植物序列；或渗入片段包含QTL7.1和SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中一个或多个或全部的抗性供体基因型；
c)步骤b)中提供的四倍体西瓜植物用步骤a)中提供的二倍体西瓜植物的花粉授粉；和
d)从步骤c)中产生的果实中收集种子。
13.一种生产三倍体杂种栽培西瓜种子的方法，包括以下步骤：
a)提供第一CGMMV抗性近交二倍体西瓜植物，其包含两个染色体9，每个染色体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体9的渗入片段，该渗入片段包含QTL9.1和SNP22(SEQ ID NO：22)或者介于SNP19和SNP24之间或者介于SNP21和SNP23之间的供体植物序列；或渗入片段包含QTL9.1和SNP19,SNP20,SNP21,SNP22,SNP23和SNP24中一个或多个或全部的抗性供体基因型；
b)提供第二CGMMV抗性近交四倍体西瓜植物，其包含四个染色体9，每个染色体具有来自药西瓜物种的CGMMV抗性供体植物的染色体9的渗入片段，该渗入片段包含QTL9.1和SNP22(SEQ ID NO：22)或者介于SNP19和SNP24之间或者介于SNP21和SNP23之间的供体植物序列；或渗入片段包含QTL9.1和SNP19,SNP20,SNP21,SNP22,SNP23和SNP24中一个或多个或全部的抗性供体基因型；
c)步骤b)中提供的四倍体西瓜植物用步骤a)中提供的二倍体西瓜植物的花粉授粉；和
d)从步骤c)中产生的果实中收集种子。
14.标记SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中的一个或多个和/或标记SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24中的一个或多个在鉴定CGMMV抗性西瓜植物或植物部分或植物细胞中的用途。
15.标记SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中的一个或多个和/或标记SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24中的一个或多个用于将CGMMV抗性渗入入CGMMV易感栽培西瓜植物中的用途。
16.筛选植物或植物部分或由其衍生的DNA的方法，以确认在染色体7和/或9上是否存在赋予CGMMV抗性的片段，所述方法包括以下步骤：
a)筛选基因组DNA中SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17和SNP18中的一个或多个或全部的SNP基因型和/或SNP19，SNP20，SNP21，SNP22，SNP23和SNP24中一个或多个的SNP基因型；
b)和任选地选择包含SNP13，SNP14，SNP15，SNP16，SNP17，SNP17和SNP18中的一个或多个或全部和/或SNP19，SNP20，SNP21,SNP22，SNP23和SNP24中的一个或多个或全部的抗性供体基因型的植物或植物部分。
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